محتوى المركبات الفينولية والتنوع الجيني على مستوى السكان عبر نطاق التوزيع الطبيعي لعنب البري (Arctostaphylos Uva-ursi ، Ericaceae) في شبه الجزيرة الأيبيرية

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

الملخص:Bearberry (Arctostaphylos uva-ursi) هو نبات طبي يُستخدم تقليديًا لعلاج التهابات المسالك البولية بسبب احتوائه على نسبة عالية منأربوتين(hydroquinone -D-glucoside) ، والذي يستخدم الآن بشكل أساسي كعامل طبيعي لتبييض البشرة في مستحضرات التجميل. كما تم اقتراح Bearberry على أنه طبيعيمضادات الأكسدةمادة مضافة بسبب المحتوى العالي للمركبات الفينولية في الأوراق. لقد درسنا التباين في المركبات الفينولية في 42 عشيرة برية من عنب الدب ، بهدف توضيح ما إذا كانت العوامل البيولوجية و / أو المناخية و / أو الجغرافية الجوهرية تؤثر على المحتويات الفينولية عبر توزيعها الطبيعي في شبه الجزيرة الأيبيرية. جمعت أوراق عنب الدب خلال فصل الخريف على مدى ثلاث سنوات (2014-2016) في مجموعات سكانية عبر تدرج خط العرض والارتفاع. أظهرت المستخلصات الميثانية مجموعة واسعة من التباين في محتوى الفينولات الكلي ، وملامح الفينول المختلفة فيما يتعلقأربوتين(تفاوتت مستويات هذا المكون الرئيسي من 87 إلى 232 مجم / جرام وزن ثقيل) ، ولكن أيضًا محتويات الكاتشين والميريستين ، والتي تأثرت بالعوامل الجغرافية والمناخية. تم أيضًا الكشف عن مستويات معتدلة من التباين في حجم الجينوم - تم تقييمها بواسطة قياس التدفق الخلوي - وفي منطقتين من DNA البلاستيد بين السكان. كان التمايز الوراثي والخلوي للسكان ضعيفًا ولكنه مرتبط بشكل كبير بالتنوع الكيميائي النباتي. الأنماط الجينية عنب الدب النخبة ذات المستوى الأعلىمضادات الأكسدةتم تحديد السعة لاحقًا.

الكلمات الدالة: أربوتين؛ التباين الجيني والكيميائي النباتي ؛ حجم الجينوم أنماط الفرد الطبيعيةمضادات الأكسدة

cistanche هي مضادات الأكسدة الطبيعية

1 المقدمة

يختلف تركيب المستقلبات المتخصصة في النبات بمرور الوقت (على سبيل المثال ، الجين ، الفينولوجيا ، والدفاعات المحفزة) ، والفضاء ، لأنه يلعب دورًا مهمًا في تكيف النبات مع الظروف البيئية ، في حين أن الاختلاف الجيني يفسر أيضًا التنوع الكيميائي [1]. من بين هذه المركبات ، يحتوي الفينول على مجموعة متنوعة من الهياكل الأحادية والبوليمرية التي تفي بمجموعة واسعة من الأدوار الفسيولوجية [2]. يتأثر التخليق الحيوي للمستقلبات المتخصصة بشكل كبير بالعوامل البيئية مثل درجة الحرارة أو هطول الأمطار أو الإشعاع الشمسي ، والتي غالبًا ما تخضع بدورها لتدرجات خط العرض أو الطول أو الارتفاع. على وجه الخصوص ، تراكم المركبات الفينولية هو استجابة عامة لمستويات معززة من الأشعة فوق البنفسجية - باء (280-315 نانومتر). تم الإبلاغ عن تباين مركب معين في النباتات التي تنمو في منطقة البحر الأبيض المتوسط ​​خلال فصل الصيف وعلى ارتفاعات عالية ، حيث تحدث نسبة أعلى من الأشعة فوق البنفسجية - باء وأظهرت أحماض سيناميك وفلافونويدات أعلى معدلات امتصاص للأشعة فوق البنفسجية [3].

أربوتين(hydroquinone -D-glucoside) هو مركب الفينول البسيط ذو الحدوث المحدود في أوراق بعض الأنواع التي تنتمي إلى أجناس مثل Arbutus أو Arctostaphylos أو Pyrus أو Vaccinium ، المصدر الطبيعي الرئيسي لأربوتين ، عنب الدب (Arctostaphylos uva-ursi (Arctostaphylos uva-ursi (Arctostaphylos uva-ursi ل.) Spreng.) لعدة قرون لعلاج التهابات المسالك البولية وأمراض الكلى الأخرى [4] ، ويتم تحضير التركيبات العشبية في الوقت الحاضر [5]. على مدى السنوات الماضية ، كان نطاق تطبيقاتأربوتينتوسع ، في الغالب كعامل طبيعي لتبييض البشرة في صناعة مستحضرات التجميل [6] وفي العلاجات السريرية إلى جانبمضادات الأكسدة، مضاد حيوي ، مضاد للالتهابات ، وخصائص مضادة للأورام [7]. وبالتالي ، هناك اهتمام متزايد بالعثور على مصادر طبيعية إضافيةأربوتين، وكذلك عمليات التكنولوجيا الحيوية التي يمكن أن تحل محل التخليق الكيميائي [8،9]. في هذا السياق ، وصل إنتاج أربوتين في المختبر باستخدام مزارع خلايا الداتورة inoxia إلى النطاق التجريبي [10].

بالإضافة إلىأربوتين، تساهم المركبات الفينولية الأخرى في الخواص النشطة لـ A. uva-ursi ، مثل الفلافونويد والعفص [11،12] ، والتي يعد منها الكاتشين والكوريلاجين أكثر العناصر صلة ، على التوالي [13]. في صناعة المواد الغذائية ، يتم استبدال المركبات الطبيعية بفينولات النباتمضادات الأكسدةمواد حافظة [14]. تم استخدام A. uva-ursi كمادة مضافة ، خاصة في منتجات اللحوم [15-19] ولكن أيضًا في العبوات النشطة [20]. أخيرًا ، تم اقتراح إمكانات A. uva-ursi كمصدر دائم لصناعة الجلود مؤخرًا [21].

اقترحت دراسة "أوراق عنب الدب" الصادرة عن وكالة الأدوية الأوروبية [5] ما لا يقل عن 7 في المائة منأربوتينالمحتوى في الأوراق المجففة كشرط للاستعدادات العشبية. وصفت الدراسات التي أجريت على مدى العقود الماضية محتويات أربوتين في أوراق عنب الدب التي تتراوح من 0 في المائة إلى 18 في المائة ، موضحة بالإجراءات التحليلية ، والتنوع الطبيعي ، وظروف النمو ، وتاريخ الحصاد [4]. عادة ما يتم تحديد محتوى أربوتين من خلال تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء [4،12،22-24] ، والدراسات السابقة اكتشفت أعلىأربوتينتم جمع محتويات نباتات التوت التي تم جمعها في الخريف عن تلك التي تم جمعها في الربيع [4]. تم وصف أنماط كيميائية متنوعة مرتبطة بالتوزيع الجغرافي والتمايز داخل الأنواع الفرعية في سلالات A. uva-ursi. التباين الكيميائي النباتي الأكثر لفتًا للنظر هو غياب أربوتين في A. uva-ursi subsp. نصتاتا باكر ودينفورد ، ولكن تمت الإشارة أيضًا إلى الاختلافات في محتويات ميثيل أربوتين أو حمض إيلاجيك أو ميريستين. يوجد الكيرسيتين أيضًا في أوراق عنب الدب ، حيث تُعد كل من الجلايكونات بالإضافة إلى 3- O-glycosides هي مركبات الفلافونويد الأكثر شيوعًا [4]. ومع ذلك ، تم إجراء معظم هذه الدراسات منذ عدة عقود ، وفي الوقت الحاضر يعتبر التباين غير المحدد في عنب الدب مستمرًا. الأنواع الفرعية الأربعة عشر الموصوفة ، بما في ذلك واحدة من إسبانيا (A. uva-ursi subsp. crassifolius (Braun-Blanq.) Rivas Mart. ex Torre و Alcaraz و MB Crespo) ، هي حاليًا أسماء غير مقبولة ومرادفة لـ A. uva-ursi [ 25]. لذلك ، هناك حاجة إلى تحقيقات جديدة لتحسين معرفتنا بالمركبات الموجودة بالفعل في المواد الخام التي يتم حصادها من مواقع مختلفة للأغراض الصناعية حيث تم وصف المظهر الكيميائي لأوراق A. uva-ursi لتشمل مجموعة متنوعة من الفينولات والعفص والفلافونويد في دراسات أحدث أجريت للتحقيق في الاختلافات على المستوى بين الأنواع [23،26،27].

يعزز التنوع الجيني (بما في ذلك الوراثة الخلوية) على مستوى السكان التكيف مع الظروف البيئية المختلفة [28]. تمت مراجعة تأثيرات تعدد الصبغيات على إنتاج المستقلبات المتخصصة في النباتات الطبية والعطرية مؤخرًا [29]. في هذا السياق ، يعتبر حجم الجينوم معلمة مستخدمة إلى حد كبير في تقييمات تنوع النبات ، حيث يتم غالبًا اكتشاف التباين داخل المحدد ([30] ، والمراجع فيه) ، ويرتبط بالعديد من السمات البيولوجية الأخرى ، ويلعب دورًا ذا صلة في العمليات التطورية [31-35] ]. ومع ذلك ، فإن الدراسات التي تتناول الارتباط بين كمية الحمض النووي (أي حجم الجينوم) والتنوع الكيميائي النباتي نادرة جدًا [36 ، 37]. تم تقييم العلاقة بين التنوع الكيميائي النباتي والتنوع الجيني باستخدام علامات نووي ولكن بشكل خاص plastidDNA [38] ، لا سيما في الأنواع النباتية الطبية [39] والمزروعة [40].

يتم توزيع Bearberry على نطاق واسع في جميع أنحاء المنطقة المحيطة بالدائرة ، ولكن معظم التجمعات البرية التي تم جمعها في أوروبا تقع في البلدان الشرقية والنمسا وسويسرا وإيطاليا وإسبانيا. ينمو Arctostaphylos uva-ursi في الجزء الأوسط الشرقي من إسبانيا ، في الجبال ، في ارتفاعات تتراوح من 550 إلى 2350 م فوق مستوى سطح البحر (asl). وهو أكثر شيوعًا في الشمال نظرًا لأن السكان الموجودين في خطوط العرض المنخفضة أقل تواترًا وعادة ما يكون لديهم عدد أقل من الأفراد. أشارت الدراسات الحالية المتعلقة بتنوع محتوى أربوتين في إسبانيا إلى قيم تتراوح بين 8 في المائة في سكان الشمال الشرقي [41] و 19 في المائة في المواد النباتية الإسبانية التي تم تقييمها في دراسة أجريت في ألمانيا [42]. تهدف دراستنا إلى توضيح العوامل ، بما في ذلك حجم الجينوم والتنوع الجيني ، وشرح التباين الكيميائي النباتي عبر التوزيع الطبيعي لعنب الدب في إسبانيا. يمكن أن تسهم نتائجنا في اختيار المواد النباتية للصناعات الدوائية والتجميلية والغذائية.

غذاء مبيض للبشرة: سيزاتنش

2. النتائج والمناقشة

2.1. تحليل التنوع الكيميائي

تم أخذ عينات من أوراق Bearberry من إجمالي 249 نباتًا تنمو في 42 موقعًا إسبانيًا ، وعبر فترة ثلاث سنوات ، 2 0 14-2016 (الشكل 1 ، الجدول S1) ، أظهرت نسبًا مختلفة للوزن الجاف (وزن أقل) ، تتراوح من 46.7 (LO) إلى 55.1 بالمائة (CP) ، بمتوسط ​​50.1 ± 2.7 بالمائة (البيانات غير معروضة). تم استخدام المستخلصات الميثانولية المحضرة من العينات التي تم جمعها في عامي 2014 و 2015 للحصول على إجمالي الفينولات وتقديرات المحتوى. لاحظنا مجموعة واسعة من الاختلافات المستمرة لكل من المعلمات مع وجود اختلافات كبيرة (P <0.001) بين="" النباتات.="" أظهرت="" مستخلصات="" أوراق="" 80="" نباتًا="" تم="" أخذ="" عينات="" منها="" في="" خريف="" 2014="" (الشكل="" 2="" أ)="" محتويات="" فينولية="" إجمالية="" تتراوح="" من="" 103.3="" ±="" 4.8="" مجم="" gae="" غرام="" وزن="" وزن="" (عينة="" li="" -4)="" إلى="" 206.4="" ±="" 6.5="" مجم="" gae="" غرام="" وزن="" وزن="" (sr)="" -2)="" ،="">أربوتينتذبذبت المحتويات من 92. 0 ± 3. 0 mg / g dr wt (AN -6) إلى 194.2 ± 5.6 mg / g dr wt (SE -8). أظهر تحليل المستخلصات المحضرة من الأوراق التي تم جمعها في 2 0 15 من 94 نباتًا (الشكل 2 ب) أيضًا تباينًا كيميائيًا نباتيًا واسعًا ، من 110.5 ± 3.6 مجم GAE / g dr wt (PI -4) إلى 200.9 ± 9.8 mg GAE / g dr wt (LO -4) في إجمالي محتويات الفينول ، بينما تراوحت محتويات أربوتين بين 87.1 ± 0.4 mg / g dr wt (ET -2) و 211.5 ± 5.9 mg / g dr wt (LI -2). علاوة على ذلك ، بغض النظر عن سنة التجميع ، توجد فروق ذات دلالة إحصائية في إجمالي الفينولات وأربوتينتم الكشف عن المحتويات بين نباتات عنب الدب التي تنمو في نفس الموقع لمعظم المجموعات السكانية (لم تظهر البيانات). ارتبطت مستويات أربوتين بشكل كبير بمحتويات الفينولات الكلية في مستخلصات أوراق عنب الدب منذ أن قدرنا معاملات بيرسون المهمة لـ {{0}} .332 (ص=0. 003) لعام 2014 ، و 0.289 لبيانات 2015 (ص {{8}. 005). لم تختلف محتويات Arbutin من 48 نباتًا تم أخذ عينات منها في كلا العامين بشكل كبير (ص=0 380).

على الرغم من التباين الموجود داخل السكان ، وبغض النظر عن سنة الحصاد ، أظهر تحليل التباين أن محتويات أربوتين من مستخلصات أوراق عنب الدب تعتمد أيضًا على (p <{0}}. 0="" 0="" 1)="" موقع="" السكان="" (الشكل="" 3="" أ="" ،="" ب)="" ،="" كما="" حدث="" لمحتوى="" الفينولات="" الكلي="" لأوراق="" عنب="" الدب="" التي="" تم="" تحليلها="" في="" 2="" 0="" 15="" (ع=""><0. 0="" 01="" ،="" الشكل="" 3="" ب).="" في="" المقابل="" ،="" لم="" يتم="" ملاحظة="" فروق="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" في="" إجمالي="" محتويات="" الفينولات="" (ص="0." 080)="" بين="" المجموعات="" العشر="" التي="" تم="" أخذ="" عينات="" منها="" في="" عام="" 2014="" ،="" والتي="" كانت="" تقع="" في="" منطقة="" صغيرة="" نسبيًا="" ،="" ولكنها="" موزعة="" على="" نطاق="" واسع="" من="" الارتفاعات="" ،="" بدءًا="" من="" 424="" (درجة="" البكالوريوس)="" السكان)="" إلى="" 1410="" م="" فوق="" سطح="" البحر="" (سكان="" السلطة="" الفلسطينية).="" كان="" هذا="" الاختلاف="" في="" الارتفاع="" مرتبطًا="" بالاختلافات="" في="" الظروف="" المناخية="" (الجدول="" s1)="" ،="" نظرًا="" لأن="" المواقع="" على="" ارتفاعات="" أعلى="" تميزت="" بمتوسط="" ​​درجات="" حرارة="" منخفضة="" (معامل="" ارتباط="" بيرسون="" ،="" r="−0.666" ،="" p=""><0.001) وتساقط="" سنوي="" أعلى="" (="" r="0." 485،="" p=""><0.001) ،="" مما="" أدى="" إلى="" انخفاض="" مستويات="" الإشعاع="" العالمي="" (ص="0.390" ،="" ف=""><0.001). علاوة="" على="" ذلك="" ،="" من="" مجموعة="" البيانات="" هذه="" قدرنا="" ارتباطًا="" إيجابيًا="" منخفضًا="" ولكن="" مهمًا="" بين="" هطول="" الأمطار="" السنوي="" ومحتوى="" الفينولات="" الكلي="" لنباتات="" التوت="" (معامل="" سبيرمان="" rho="0." 256،="" p="0." 022)="" ،="" بينما="" من="" مجموعة="" بيانات="" 2015="" عندما="" أخذنا="" عينات="" من="" السكان="" في="" منطقة="" أكبر="" ،="" اكتشفنا="" ارتباطًا="" إيجابيًا="" مهمًا="" بين="" هطول="" الأمطار="" السنوي="" ومحتوى="" أربوتين="" (rho="0." 246،="" p="0." 017).="" يشير="" هذا="" الارتباط="" المعنوي="" إلى="" أن="" نباتات="" التوت="" التي="" تنمو="" في="" المواقع="" الشمالية="" وعلى="" ارتفاعات="" أعلى="" نسبيًا="" أظهرت="" ارتفاعًا="" في="" كثير="" من="">أربوتينالمحتويات (rho=0. 217 ، p=0. 035 و rho=0. 269، p=0. 009 ، على التوالي). كما ذكرنا سابقًا ، ارتبطت محتويات أربوتين الأعلى ارتباطًا وثيقًا بمحتويات الفينولات الكلية الأعلى لأوراق عنب الدب ، والتي كانت مماثلة (في المتوسط ​​154.4 ± 19.6 مجم GAE / غرام وزن طن) لتلك الموجودة في المستخلصات المائية من الأنواع النباتية الأخرى المستخدمة مثلمضادات الأكسدةالمضافات في صناعة الأغذية [43] ، مثل الروزماري (185. 0 مجم GAE / غرام وزن dr) ، الشاي (149.3 مجم GAE / g dr wt) ، أو الجوافة (154.4 مجم GAE / g dr wt). تتوافق هذه النتائج مع المراجع السابقة وتم تأكيدها في دراسة أجراها Wrona et al. [20] باستخدام بعض عينات أوراق عنب الدب الإسبانية التي تم جمعها في عام 2015 ، والتي تعد أعلىمضادات الأكسدةالقدرة كانت مرتبطة بأعلىأربوتينمحتويات. يمكن أيضًا تحديد الأنماط الجينية عنب الدب النخبة لهذا الغرض ، مثل الأفراد 1 و 4 و 7 و 8 من مجموعة LO ، والتي تراكمت في المتوسط ​​183.3 ± 16.4 مجم GAE / g dr wt في عامين من الدراسة.

من أجل زيادة توضيح العوامل المناخية والجغرافية التي تؤثر على أنماط التباين الفينولي ، أجرينا مجموعة عينات أكثر شمولاً في الخريف 2 0 16:14 0 نباتات عنب الدب تنمو في 29 موقعًا ، وقمنا بتحديد كمية خمسة مركبات فينولية (الشكل S1 أ) التي تم تحديدها عن طريق الشطف بالمعايير في تدرج الأسيتونيتريل / الماء (الشكل S1 ب). أظهر التحليل نطاقات واسعة من التباين المستمر لمحتويات أربوتين وحمض الكافيين والكاتشين والميريستين وكيرسيتين جلوكوزيد ، مع وجود اختلافات كبيرة بين النباتات التي لوحظت بشكل عام أيضًا داخل السكان (البيانات غير معروضة). بالنسبة للمكونات الفينولية الرئيسية ، وجدنا أن محتويات أربوتين تتراوح من 91.1 ± 5. 0 (LB {{1 0}}) إلى 232.4 ± 2.8 مجم / جرام وزن dr (PT {{15}) }}) ، بينما تراوحت محتويات الكاتشين من 4.1 ± 0. 1 (AF {{2 0}}) إلى 45.5 ± 1.4 مجم / جرام وزن dr (LB -5). فيما يتعلق بمركبتي الفلافونويد الأخريين المحددين ، لم يتم اكتشاف الميريستين في بعض النباتات من عدة مجموعات سكانية ، بينما وصل إلى 21.2 ± 1.2 ملجم / جم وزن وزن في PO {{3 0}} ، وتفاوت الكيرسيتين جلوكوزيد من 3.8 ± 0.1 (CO) -3) إلى 22.8 ± 0.8 مجم / غرام بالوزن (BT -3). تم تحديد المحتوى المنخفض لحمض الكافيين في مستخلصات أوراق عنب الدب ، والتي تراوحت من 1.8 ± 0.0 (IZ -1) إلى 7.1 ± 0.3 مجم نبات / غرام وزن dr (SI -4).

على الرغم من التباين الملحوظ بين الأفراد ، فقد تم أيضًا تقدير فروق ذات دلالة إحصائية بين السكان لهذه المركبات الخمسة (اختبارات Kruskal-Wallis ، p <{0}}. 0="" 01="" ،="" و="" p="0." 009="" محتوى="" حمض="" الكافيين).="" تم="" تحديد="" محتويات="" أعلى="" من="" أربوتين="" ،="" في="" المتوسط="" ​​،="" في="" النباتات="" من="" مجموعات="" ab="" و="" gu="" و="" ln="" و="" lo="" الطبيعية="" (الشكل="" 4="" أ)="" ،="" والتي="" اختلفت="" بشكل="" كبير="" (بعد="" تصحيح="" bonferronicorrection)="" عن="" المحتويات="" المنخفضة="" الموجودة="" في="" النباتات="" من="" مجموعة="" lb="" (186.7="" ±="" 22.3="" ،="" 193.9="" ±="" 12.1،169.5="" ±="" 10.0="" ،="" و="" 169.2="" ±="" 5.2="" مجم="" غرام="" بالوزن="" الأمامي="" إلى="" 111.8="" ±="" 16.0="" مجم="" جرام="" وزن="" dr="" ،="" على="" التوالي).="">أربوتينمحتويات النباتات التي تم أخذ عينات منها أيضًا في 2 0 15 لم تختلف اختلافًا كبيرًا بين السنوات (ص=0. 821). أظهر السكان LB بدوره ارتفاع متوسط ​​مستوى الكاتشين (الشكل 4 ب) ، والذي يختلف اختلافًا كبيرًا عن المحتوى المتوسط ​​المنخفض لهذا الفلافونويد المكتشف في التجمعات AF و LC (32.8 ± 9.8 أمام إلى 5.7 ± 1.9 و 5.3 ± {{2 {{62}) }}}. 5 ملغ / غرام وزن dr ، على التوالي). يظهر متوسط ​​محتويات جلوكوز الميريستين وكيرسيتين في الشكل 4 ج ، مع وجود اختلافات كبيرة بين المجموعات السكانية AB و CG و LB و PO ، مع ارتفاع محتويات myricetin (15.1 ± 4. 0 ، 14.6 ± 5.7 ، 1 0 .7 ± 2.8 ، و 17.2 ± 3.9 ملغم / غرام بالوزن ، على التوالي) ، مقارنة بالمستويات المنخفضة التي تراكمت في النباتات المتوسطة من تجمعات ثاني أكسيد الكربون و OD (1.2 ± 1.5 و 2.4 ± 3.6 ملغم / غرام بالوزن ، على التوالي) ، ويعني أيضًا أن محتويات غلوكوزيد كيرسيتين المحددة في التجمعات السكانية AA و BT و CP و IZ و LB (15.2 ± 3.7 و 15.9 ± 4.6 و 11.8 ± 2.3 و 15.7 ± 3.4 و 13.1 ± 4.6 ملجم / جم بالوزن ، على التوالي) تختلف اختلافًا كبيرًا من ثاني أكسيد الكربون في المجموعة السكانية (4. 0 ± 0.1 مجم / جرام وزن ثقيل). في المقابل ، يتأرجح متوسط ​​محتويات حمض الكافيين من 2.1 ± 0.2 مجم / جم وزن وزن في المجموعات AB و CE و PT و SA إلى 3.5 ± 1.2 مجم / جم وزن وزن في AF أو 3.4 ± 2.2 مجم / جرام وزن وزن في السكان SI ؛ لذلك ، لم تُلاحظ اختلافات كبيرة بسبب الاختلاف داخل السكان (متوسط ​​المحتوى 2.7 ± 0.8 مجم / غرام بالوزن). تكمل هذه النتائج التباين في المستقلبات الفينولية التي لاحظها Wrona et al. [20] ، لثمانية من مواقع عنب الدب التي تم أخذ عينات منها في عام 2015 والتي تم تحليلها باستخدام UPLC®-ESI-Q-TOF مع تقنية MSE.

على عكس النتائج التي تم الحصول عليها في التحليل الذي تم إجراؤه على عينات عنب الدب من 2014 و 2015 ،أربوتينأظهرت المحتويات المحددة في 2 {{1 0} 16 عينة ارتباطًا إيجابيًا منخفضًا ولكن مهمًا مع الإشعاع (rho =0. 256 ، p =0. 002) ، ومتوسط ​​درجات الحرارة القصوى (rho { {5}}. 183، p =0. 030) ، وبالتالي كانت مرتبطة عكسيًا بقيم هطول الأمطار السنوية (rho=−0.265، p=0. 002). كانت هذه الاختلافات مرتبطة أيضًا بالتباين في الارتفاع (rho=−0.192 ، p=0. 023) ، ولكن تم تفسير هذا الارتباط السلبي من خلال القيمة المنخفضة المذكورةأربوتينمحتويات نباتات من مجموعة LB التي تقع على مسافة 172 0 مترًا. لوحظ نمط تباين مشابه لمحتويات الميريستين حيث أن المستويات الأعلى من هذا المركب كانت مرتبطة بشكل كبير بنباتات عنب الدب التي تنمو في مواقع تحت مستويات إشعاعية أعلى (rho=0. 226، p=0. {{1 {{= 0) 12}}}} 0 7). لوحظ النمط المعاكس لنمط أربوتين في مادة الكاتشين ، حيث تم تقدير الارتباط الموجب بين هذا الفلافونويد وهطول الأمطار السنوي (rho=0. 398، p <0. 0="" {{23}="" }}="" 1)="" ،="" وتم="" اكتشاف="" الارتباطات="" السلبية="" وفقًا="" للإشعاع="" ومع="" درجة="" الحرارة="" القصوى="" (rho="-" 0.="" 307،="" p=""><0.001 and="" rho="−0.470،" p=""><0.001، على="" التوالى).="" أوضح="" هذا="" الاختلاف="" في="" العوامل="" المناخية="" أن="" كلا="" من="" الارتفاع="" وخط="" العرض="" قد="" أثروا="" على="" محتويات="" الكاتشين="" لأغصان="" الدب="" (rho="0." 410="" و="" 0.490="" ،="" على="" التوالي="" ،="" p=""><0.001). تم="" إجراء="" تحليل="" للمكونات="" الرئيسية="" باستخدام="" البيانات="" الكيميائية="" النباتية="" والمناخية="" والجغرافية="" المقابلة="" للمواقع="" الـ="" 29="" التي="" تم="" أخذ="" عينات="" منها="" في="" عام="" 2016="" ،="" حيث="" أوضح="" المكونان="" الأولان="" 60="" في="" المائة="" من="" التباين="" الملحوظ="" ،="" ودعم="" هذه="" النتائج="" (الشكل="" 5).="" لم="" نكتشف="" أي="" ارتباط="" مهم="" بين="" محتويات="" حمض="" الكافيك="" أو="" الكيرسيتين="" الجلوكوز="" لنباتات="" عنب="" الدب="" وأيًا="" من="" العوامل="" المناخية="" أو="" الجغرافية="" ،="" على="" الرغم="" من="" أننا="" قدرنا="" ارتباطات="" طفيفة="" ولكنها="" مهمة="" بين="" محتويات="" الميريسيتين="" وجلوكوزيد="" الكيرسيتين="" (rho="0." 184،="" p="" {{31}="" }="" .030)="" وبين="" محتويات="" الميريستين="" وحمض="" الكافيين="" (rho="−0.176،" p="0." 037)="" من="" نبات="" عنب="">

الأنماط المناخية المتناقضة الملحوظة للتباين فيأربوتينمحتوى نبات عنب الدب يشير إلى أنه على الرغم من احتمال زيادة التخليق الحيوي لهذا المستقلب في ظل ظروف أعلى من الإشعاع ودرجة الحرارة ، فمن المحتمل أن تكون ندرة المياه عاملاً مقيدًا لـ A. uva-ursi في منطقة البحر الأبيض المتوسط ​​والمناطق الجنوبية. ديل فالي وآخرون. [44] أفاد عن نمط خطي لتراكم مركبات الفلافونويد في السيلينا ليتوريا (Caryophyllaceae) في إسبانيا ، حيث تم تحديد محتوى أعلى من مركبات الفلافونويد في السكان الجنوبيين ، حيث يرتبط خط العرض سلبًا بالإشعاع فوق البنفسجي - ب ودرجة الحرارة ، وإيجابيًا مع الترسيب. يُظهر الإشعاع العالمي تدرجًا خطيًا واضحًا مع حدوث أعلى في جنوب وشرق شبه الجزيرة الأيبيرية ، وهناك أيضًا تأثير جغرافي كبير نظرًا لأن ثبات السحب يعدل حدوث هذا الإشعاع على ارتفاعات أعلى. خريطة إسبانيا للأشعة فوق البنفسجية [45] الإشارة إلى الارتباط العالي (r> 0. 9) بين الأشعة فوق البنفسجية - باء وبيانات الإشعاع العالمي. وفقًا لهذا المرجع ، أظهرت أعداد عنب الدب متوسط ​​أعلىأربوتينتقع محتويات دراستنا في الغالب في مناطق تقع تحت مستويات الأشعة فوق البنفسجية - ب من 2403 إلى 2451 جول / م 2.

أظهرت نتائجنا الخاصة باختلاف الكاتشين في عنب الدب نمطًا جغرافيًا (الشكل 5) وتوافق مع الدراسات التي أجريت في الأنواع النباتية الأخرى من بلدان شمال أوروبا. تم الإبلاغ عن محتويات أعلى من المستقلبات المتخصصة ، مثل الفلافونويد والأنثوسيانين ، في النباتات التي تنمو على خطوط عرض أعلى ، ربما بسبب فترات النهار الأطول ودرجات الحرارة المنخفضة في الليل [46]. ونتيجة لذلك ، زاد المحتوى الفينولي القابل للذوبان في إبر العرعر العرعر مع ارتفاع خط العرض والارتفاع في السكان الفنلنديين [47] ، كما تم العثور على محتوى الفينول أعلى بنسبة 10-19 في المائة عند خط عرض أعلى في ثمار ثلاث ريبس. تم تحليل الأصناف في موقعين فنلنديين [48]. ربط هؤلاء المؤلفون انخفاض محتوى الفينول بمستويات أعلى من الإشعاع ودرجة الحرارة. أظهر محتوى الفلافونويد في ثمار نوعين من الفاكينيوم (أيضًا من عائلة Ericaceae) تدرجًا جغرافيًا ، مع كميات أعلى من الفلافونويد في خطوط العرض الشمالية [49،50].

فيما يتعلق بالاختلاف في الارتفاع ، تم تحديد مستويات أعلى من مركبات الفلافونويد في مجموعات أنواع أخرى من Ericaceae ، Calluna vulgaris ، تنمو على ارتفاعات أعلى [51]. أثرت التدرجات الطولية أيضًا على عملية التمثيل الغذائي المتخصصة للمجموعات الإسبانية من زهرة العطاس [52] وكويركوس روبور [53] ، وأشار العمل الأخير إلى ارتباط إيجابي كبير بين تركيز الفينول الورقي الكلي والارتفاع ، كونه التدرج يعتمد فقط على مركبات الفلافونويد ، مما يشير إلى أن هذه قادت المركبات العلاقة لمجموع الفينولات. تتفق هذه النتائج مع تقديراتنا لنمط محتوى الكاتيكين. أخيرًا ، ارتبط تدرج هطول الأمطار بفروق ذات دلالة إحصائية في تكوين البوليفينول في شجيرة طبية أفريقية (Myrothamnus flabellifolia) حيث كانت الاختلافات الأيضية متطابقة مع التركيب الجيني للسكان [54].

يمكن أن يكون الكستانش مضادًا للشيخوخة

2.2. حجم الجينوم وتحليل بيانات التسلسل

تراوحت قيم حجم الجينوم 2C لنباتات التوت من 2.50 إلى 3.15 بيكوغرام (الجدول 1). تم العثور على اختلافات طفيفة في كمية الحمض النووي بين السكان (Kruskal – Wallis χ 2=87. 639، df=36، p=3. 39 × 10−6). كشف اختبار Dunn مع تصحيح Bonferroni عن فروق ذات دلالة إحصائية بين: مجموعات AL و SI (Z=−3.972 ، ص=0. 024) ، LE و SI (Z=−4.196 ، p {{ 21}}. 009) و SE و SI (Z=−4.236 ، ص=0. 008). سكان Pontils (PO) هو نوع المنطقة من A. uva-ursi var.crassifolius ، والتي تم دمجها لاحقًا باسم A. uva-ursi subsp. crassifolius ، والتي لا يتم اعتبارها حاليًا من الناحية التصنيفية (انظر المقدمة) ، لها قيمة وسيطة (2.88 جزء من الغرام) ، ضمن نطاق القيم التي تم الحصول عليها في مجموعات أخرى من الأنواع. هذه هي أول دراسة سكانية شاملة عن كمية الحمض النووي النووي في النوع والجنس بأكمله ، حيث أن المعلومات المتوفرة حتى الآن تأتي من مجموعة واحدة من سكان البلقان من نفس التصنيف [55]. يتم وضع قيمة 2C التي تم الإبلاغ عنها هناك ، وهي 2.49 بيكوغرام ، عند الحد الأدنى من نطاق التباين لمجموعة البيانات التي تم فحصها هنا. لم يتم العثور على ارتباط بين قيم حجم الجينوم وارتفاع السكان. أظهرت كمية الحمض النووي للأفراد ارتباطًا ضعيفًا إيجابيًا معأربوتينالمحتوى عند مقارنة بيانات 158 من نباتات الدب (rho=0. 187 ، p=0. 018) ، بينما لم يتم العثور على ارتباط مهم آخر بين حجم الجينوم والمتغيرات الأخرى. تتوافق هذه النتيجة مع الزيادات المبلغ عنها في إنتاج المستقلبات المتخصصة التي يتم ملاحظتها بشكل عام في النباتات الطبية والعطرية بعد تعدد الصبغيات [29].

تمت محاذاة التسلسلات التي تم إنتاجها حديثًا للفواصل الجينية rpl {0} trnL و psbE-petN في نسختين (تحتويان على التوالي على 566 و 874 نقطة أساس) والتي كانت متسلسلة في مصفوفة واحدة من 144 0 نقطة أساس. تم الكشف عن مستويات التباين في هذه المناطق البلاستيدية (ستة بدائل للنيوكليوتيدات وأربعة إنديلز). تم العثور على عشرة أنماط فردانية مختلفة مع إجمالي تنوع النمط الفرداني (Hd) من 0 .468 (الجدول 1). تحتوي معظم المجموعات السكانية (21) على نمط فرداني واحد فقط ، بينما أظهر خمسة منهم بعض التنوع بين الأفراد. أظهر النمط الفرداني الأكثر وفرة أعلى تردد (71.4 في المائة) ، يليه النمط الفرداني 2 (15.2 في المائة) ، في حين أظهر الباقي ترددات أقل بكثير (0.04 - 0.01 في المائة). يظهر التوزيع الجغرافي للأنماط الفردانية في الشكل 6. تم العثور على النمط الفرداني 1 في 32 مجموعة - تم تثبيتها في 18 منها - موزعة على جميع المناطق المأخوذة منها العينات باستثناء المناطق الواقعة في أقصى الجنوب. تم العثور على النمط الفرداني 2 في عشرة مجتمعات وكان النمط الفرداني الحصري في مجموعتي السكان في أقصى الجنوب (HU و LV) وكذلك في العلاقات العامة. كان النمط الفرداني 4 خاصًا من ثلاثة مجموعات سكانية من جبال البرانس ، بينما ظهر النمط الفرداني 8 في مجموعتين من السكان من شرق شبه الجزيرة الأيبيرية. فيما يتعلق بالعلاقات التطورية الموضحة في شبكة البخل (الشكل 6) ، ترتبط معظم الأنماط الفردانية بخطوة أو خطوتين من خطوات الطفرة. يحتل النمط الفرداني 1 موقعًا مركزيًا ، حيث يتم توصيل سبعة أنماط فردية به.

أظهر اختبار Mantel بين مصفوفات المسافة الزوجية الوراثية والكيميائية لـ pDNA ارتباط ضعيف ولكن مهم (ص=0. 301 ؛ ص=0. 048) بين التمايز الجيني وتركيز المكونات الكيميائية الخمسة المقاسة لـ مجموعة بيانات 2016. لم يكشف اختبار Mantel عن أي ارتباط ذي دلالة إحصائية بين المسافة الجينية والجغرافية بين المجموعات السكانية الـ 25 التي تم أخذ عينات منها في عام 2016 (ص=0. 103 ، ص=0 .207) أو بين المسافات الزوجية الكيميائية والجغرافية بين هذه المجموعات. 25 مجتمعًا (ص=0. 191 ، ص=0. 050). وبالتالي ، فإن التباين الكيميائي النباتي الذي تم الإبلاغ عنه هنا لمجموعات عنب الدب البرية في جميع أنحاء إسبانيا يكمله مستويات معتدلة من تباين النمط الفرداني لـ pDNA ، كونه التمايز الجيني بين الشمال والجنوب الموجود في مجموعات عنب الدب التي يمكن مقارنتها بالأنماط الجغرافية الموجودة في النباتات الأخرى (على سبيل المثال ، [56-58]. كل هذا التجانس متوقع في النباتات ذات القدرة التكاثرية المنخفضة [59] ، مثل A. uva-ursi ، التي تظهر معدلات إنبات ضعيفة ومعدلات وفيات عالية للشتلات الصغيرة. مسافات الزوجية المقدرة من ملامح خمسة فينولية الشكل 6. التوزيع الجغرافي للأنماط الفردانية بدنا على السكان الأيبيرية من Arctostaphylos uva-ursi. تتوافق أكواد السكان مع تلك الموجودة في الجدول S1 ، وتمثل المخططات الدائرية النسبة المئوية للأفراد الذين يعرضون كل نمط فرداني في كل مجموعة. المستطيل ، شبكة البخل الإحصائي التي توضح العلاقات التطورية للـ te تم تمثيل الأنماط الفردانية البلاستيدية n الموجودة في تجمعات A. uva-ursi. يشير كل شريط على طول الخطوط التي تربط الأنماط الفردانية إلى خطوة طفرية واحدة في مناطق الحمض النووي الريبي المتسلسل في هذه الدراسة. أظهر اختبار الرف بين مصفوفات المسافة الزوجية الوراثية والكيميائية لـ pDNA ارتباطًا ضعيفًا ولكن ارتباطًا مهمًا (ص=0. 301 ؛ ص {28) }}. 048) بين التمايز الجيني وتركيز المكونات الكيميائية الخمسة المقاسة لمجموعة بيانات 2016. لم يكشف اختبار Mantel عن أي ارتباط مهم بين المسافة الجينية والجغرافية بين 25 عينة مأخوذة في عام 2016 (ص=0. ص=0. 191 ، ص=0. 050). وبالتالي ، فإن التباين الكيميائي النباتي الذي تم الإبلاغ عنه هنا لمجموعات عنب الدب البرية في جميع أنحاء إسبانيا يكمله مستويات معتدلة من التباين الفرداني لـ pDNA ، كونه التمايز الجيني بين الشمال والجنوب الموجود في مجموعات عنب الدب مقارنة الأنماط الجغرافية النسجية الموجودة في النباتات الأخرى (على سبيل المثال ، [56-58]. كل هذا التجانس من المتوقع أن تزرع ذات قدرة إنجابية منخفضة [59] ، مثل A. uva-ursi ، والتي تظهر معدلات إنبات ضعيفة ومعدلات وفيات عالية للشتلات الصغيرة. من خمسة مركبات فينولية. هذا النمط من الاختلاف الجيني والكيميائي النباتي (الذي ، كما ذكرنا ، لم يكن مرتبطًا بالمسافات الجغرافية) ، بالإضافة إلى الارتباط الضعيف ولكن المهم بين محتوى الجينوم ومحتوى أربوتين ، قد يشير إلى أن التباين الجيني الطبيعي يؤثر على محصول المركبات الفينولية في A. uva-ursi ومع ذلك ، جزيئي متغير للغاية م تعتبر أجهزة النقل في عينة أكثر شمولاً من السكان ضرورية لتأكيد هذه الأنماط الجغرافية والترابط بين التباين الجيني والكيميائي الحيوي.

يحتوي القسطرة على تأثيرات مضادة للأكسدة

3. المواد والطرق

3.1. المواد النباتية

بالنسبة للتحليل الكيميائي النباتي ، تم أخذ عينات ما مجموعه 249 من نباتات التوت التي تنمو في 42 مجموعة في خريف 2014 و 2015 و 2016 ، والتي تمثل التوزيع الطبيعي لأنواع النباتات هذه في شبه الجزيرة الأيبيرية (الشكل 1 والجدول S1). أولاً ، في خريف 2014 ، قمنا بجمع الفصول النهائية من 80 مصنعًا في عشرة مجموعات إسبانية (AG ، AN ، BA ، LI ، LO ، PE ، PÁ ، SR ، SC ، و SE) تقع في منطقة صغيرة نسبيًا (80 × 50 كم تقريبًا) في شمال إسبانيا ولكن في نطاق واسع من الارتفاعات (424-1410 م فوق سطح البحر). ثانيًا ، في خريف 2015 ، جمعنا 48 نباتًا من ستة من هذه المجموعات (AG ، LI ، LO ، PA ، SE ، و SR) و 46 نبتة عنبية من ستة مجموعات تقع في خطوط العرض المنخفضة (AL ، CH ، ET ، HU ، LV و PI). لكل مجموعة ، أخذنا عينات من ثمانية نباتات تفصل بينها مسافة 5 أمتار على الأقل ، باستثناء HU ، حيث وجدنا ستة أفراد فقط. ثالثًا ، في خريف 2016 ، تم أخذ عينات من إجمالي 140 نباتًا في 29 موقعًا مختلفًا (1-6 أفراد من كل منها) بما في ذلك 26 موقعًا إسبانيًا جديدًا (IZ ، CE ، BT ، MO ، AA ، GU ، SI ، AF ، SA ، PT ، AB و CG و OD و PS و LB و CO و LE و MA و CP و PO و MZ و AV و LC و AY و LN و ZU). يمتد أخذ العينات لدينا على ارتفاع يتراوح من 534 إلى 1750 مترًا. إجمالاً ، تمثل المجموعات السكانية الـ 42 مجموعة واسعة من الظروف المناخية (الجدول S1): أظهر متوسط ​​درجة الحرارة القصوى 2- تباينًا طويًا (13-26 درجة مئوية) وتذبذب هطول الأمطار السنوي من 399 (ZU) إلى 1589 مم (PT). تراوح الإشعاع العالمي من 4.2 إلى 5.1 كيلو واط ساعة / متر مربع. تم جمع ستة إلى عشرة براعم نهائية (بطول 15-20 سم) لكل نبتة للحصول على 6-15 جم من الأوراق السليمة ، والتي تم استئصالها وتجفيفها بعد ذلك عند 60 درجة مئوية بوزن ثابت (3-4 أيام). بعد تحديد الوزن الجاف ، تم تجانس الأوراق يدويًا في ملاط ​​وتخزينها عند 4 درجات مئوية حتى يتم تحليلها. تم استخدام هذه المادة النباتية لإجمالي الفينولات وقرارات HPLC.

تم الحصول على مواد الأوراق لتقييم التدفق الخلوي من الأوراق الطازجة لـ 178 فردًا ينتمون إلى إجمالي 37 مجموعة (الجدول 1). تم الحصول على عينات من 33 من السكان المذكورين أعلاه ، ومن أربعة مجموعات جديدة (BE ، JO ، و PR في إسبانيا ، و EN في أندورا) حيث تم جمع الأوراق في ربيع 2017 ، وبالتالي لم يتم تضمينها في التحليل الكيميائي النباتي (الشكل 1 و الجدول S1). تم قياس عدد فردي من واحد إلى ستة أفراد لكل مجموعة. تم تجفيف المواد الورقية لاستخراج الحمض النووي في هلام السيليكا وتخزينها في درجة حرارة الغرفة. تم إجراء تحليلات تنوع الحمض النووي في ما مجموعه 105 نباتات من 35 موقعًا (الجدول 1).

يتم إيداع قسائم النباتات الخاصة بـ 46 عشيرة عنب الدب التي تمت دراستها في المعشبة قبل الميلاد ، في معهد بوتانيك دي برشلونة ، في المعشبة BCN ، في مركز الوثائق ، جامعة برشلونة أو في المعشبة JACA ، من معهد بيرينايكو دي إيكولوجيا ( CSIC).

3.2 تحضير مستخلصات الأوراق وتقدير إجمالي الفينولات

تم تحضير ثلاث مكررات من مستخلصات أوراق عنب الدب باستخدام 5 0 مجم من العينة المجففة و 1 0 مل من 8 0 بالمائة من الميثانول. تم تحضين الأنابيب لمدة 3 0 دقيقة في حمام بالموجات فوق الصوتية ، ثم تمت ترشيح الأنابيب (0.45 مم) وتخزينها عند 4 درجات مئوية حتى التحليل. تم تحديد إجمالي محتوى الفينول في المستخلصات المحضرة من العينات التي تم جمعها في عامي 2014 و 2015. اتبعنا طريقة Folin-Ciocalteumethod [60،61] مع تعديلات طفيفة: إلى 0.1 مل من المستخلص ، و 0.4 مل من الميثانول (80 بالمائة) ، و 0.5 مل من فولين- تمت إضافة كاشف Ciocalteu و 8 مل من الماء عالى النقاء. بعد 5 دقائق في حمام بالموجات فوق الصوتية ، تمت إضافة 1 مل من Na2CO 3 20 بالمائة (وزن / حجم). تركت العينات في الظلام لمدة 30 دقيقة قبل قياس الامتصاصية عند 760 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي المرئي للأشعة فوق البنفسجية (CARY 50 BIO ، Varian ، AgilentTechnologies). تم التعبير عن النتائج بمكافئات حمض الغاليك (GAE) ؛ أي ملغ حمض الجاليك / غرام بالوزن باستخدام منحنى معياري لحمض الغال (40-340 ميكروغرام / غرام).

3.3 أربوتين وتقدير المستقلبات الفينولية الأخرى

تم قياس كمية محتويات الفينول لمستخلصات أوراق عنب الدب الميثانولي بواسطة RP-HPLC باستخدام نظام HPLC-UV / Vis (LaChrom Merck Hitachi L -7400) مع Kinetex 5 µm-EVO C18 (25 0 مم × 4.6 مم ) العمود والامتصاصية عند 280 نانومتر. تم تخفيف المستخلصات من العينات التي تم جمعها في عامي 2014 و 2015 بنسبة 1:10 (ت / ت) وحقنت بمرحلة متحركة من الميثانول والأسيتونتريل. يتكون برنامج التدرج من 0-5 دقائق ، 25 في المائة من الميثانول ؛ 5-6 دقائق ، 100٪ ؛ 6-10 دقائق ، 100٪ ، 10-20 دقيقة ، مرة أخرى 25٪ من الميثانول. كان معدل التدفق 1 مل / دقيقة وكان حجم الحقن 20 ميكرولتر. في هذه الظروف ، يكون وقت الاحتفاظ بـأربوتينكان 2.6 دقيقة ، مما مكننا من تحديد تركيز هذا المركب باستخدام منحنى معايرة تم إنشاؤه باستخدام 6 تخفيفات من معيار ، من 4 0 إلى 340 ميكروغرام / جم ، مع معامل ارتباط r=0. 9997. تم تحليل المستخلصات من العينات التي تم جمعها في عام 2016 باستخدام مرحلة متحركة من الميثانول والماء باستخدام برنامج التدرج التالي: 0-5 دقائق ، 10 في المائة من الميثانول ؛ 5-6 دقائق ، 20 في المائة ؛ 6-10 دقائق ، 20 في المائة ؛ 10-11 دقيقة ، 30 في المائة ؛ 11-15 دقيقة ، 30 في المائة ؛ 15-16 دقيقة ، 40 في المائة ؛ 16-20 دقيقة ، 40 في المائة ؛ 20-21 دقيقة ، 50 في المائة ؛ 21-25 دقيقة ، 50 بالمائة ؛ 25-26 دقيقة ، 60 في المائة ؛ 26-30 دقيقة 60 في المائة ؛ 30-31 دقيقة 10 في المائة ؛ و 31 - 36 دقيقة ، ومرة ​​أخرى 10 في المائة من الميثانول. في هذه الظروف ، قررناأربوتين و4 مركبات فينولية أخرى: حمض الكافيين ، والكاتشين ، والميريسيتين ، والكيرسيتين -3- O-glucopyranoside باستخدام منحنيات المعايرة المقابلة التي تم إنشاؤها باستخدام 5 تخفيفات من المعايير (25-5 0 0 ميكروغرام / مل) ، والتي أظهرت معاملات الارتباط لـ {{1 {14}}}. 9992 للكاتشين (مدة الاحتفاظ 12. 0 دقيقة) ، 0.9924 للكافيين (وقت الاحتفاظ 13.4 دقيقة) ، 0.9981 للكيرسيتين {{16} } O- جلوكوزيد (مدة الاحتفاظ 23.4 دقيقة) ، و 0.9997 للميريستين (مدة الاحتفاظ 25.1 دقيقة).

كان الميثانول والأسيتونتريل في درجة HPLC وتم شراؤهما من Panreac (برشلونة ، إسبانيا) المعايير (نقاء أكبر من أو يساوي 98 في المائة) منأربوتين، وحمض الكافيين ، وحمض الغاليك ، وكذلك كاشف فولين سيوكالتيو تم شراؤها من سيجما ألدريتش (برشلونة ، إسبانيا). تم شراء معايير كاتشين وكيرسيتين -3- O-glucopyranosidestandards من Extrasynthese (Genay Cedex ، فرنسا) ، بينما تم شراء myricetin من Alfa Aesar (كارلسروه ، ألمانيا).

تم تحليل نتائج التحديدات الكيميائية باستخدام برنامج SPSS v. 25 و R 3.5.2. بعد اختبار البيانات الخاصة بالحالة الطبيعية والمثلية ، أجرينا تحليل التباين في مجموعات مختلفة من البيانات واختبارات فصل الوسائل (Tukey و Tamhane) أو الاختبارات غير المعلمية مثل Kruskal – Wallis ، و Dunn اختبار المقارنة المتعددة مع تصحيح Bonferroni. لقد قدرنا أيضًا معاملات الارتباط (بيرسون أو سبيرمان اعتمادًا على ما إذا كانت البيانات تتبع التوزيع الطبيعي) بين المتغيرات ، بما في ذلك حجم الجينوم.

يحتوي القسطرة على تأثيرات مضادة للأكسدة

3.4. تقديرات حجم الجينوم وتسلسل الحمض النووي

تم تقدير حجم جينوم نباتات عنب الدب عن طريق قياس التدفق الخلوي في مراكز Científicsi Tecnològics ، جامعة برشلونة (CCiTUB) باتباع الإجراءات الموضحة في Pellicer et al. [62]. Petunia hybrida فيلم. تم استخدام "PxPc6" (2C=2. 85 pg) كمعيار داخلي. تم توفير بذور المعيار بواسطة Plateforme de cytométrie d'Imagerie-Gif ، CNRS-I2BC (Gif-sur-Yvette ، فرنسا). تم حساب محتويات الحمض النووي النووي (2C) بضرب محتوى الحمض النووي المعروف للمعيار في الحاصل بين مواضع الذروة (الوضع) للأنواع المستهدفة والمعيار في الرسم البياني لشدة التألق ، بافتراض وجود علاقة خطية بين إشارات الفلورسنت من النوى المحددة للعينة غير المعروفة ، والمعيار الداخلي المعروف وكمية الحمض النووي [63].

تم استخدام ما يقرب من 2 0 ملغ من أنسجة الأوراق المجففة بالسيليكا لاستخراج الحمض النووي باستخدام بروتوكول CTAB [64] مع تعديلات طفيفة. تم فحص جودة الحمض النووي الكلي باستخدام مقياس الطيف الضوئي NanoDrop 1000 (ThermoScientific ، ويلمنجتون ، DE ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تضخيم وتسلسل المناطق البلاستيد بين الجينات rpl 32- trnLand psbE-petN ، بالإضافة إلى منطقة ITS للريبوزوم النووي ، لثلاثة أفراد لكل مجموعة. لم تقدم تسلسلات ITS أي تباين داخل 105 فردًا تم تحليلهم ، باستثناء بعض المواقف التي تظهر تعدد أشكال النوكليوتيدات داخل الذرات. لذلك ، تم استبعاد منطقة DNA الريبوسوم النووي هذه من التحليل الإضافي. تم أيضًا اختبار مناطق DNA البلاستيد الأخرى (على سبيل المثال ، ndhF ؛ ndhF-rpl32 ؛ psbA-trnH ؛ psbD-trnT ؛ rps16 ؛ و trnL-trnF) ولكنها تم تجاهلها بسبب انخفاض التباين أو مشاكل التسلسل. تم تنفيذ إجراء التضخيم كما هو موصوف في Vitales et al. [65]. تم إجراء التسلسل المباشر لقطاعات الحمض النووي المتضخمة باستخدام Big Dye Terminator Cycle Sequence v 3.1 (PE Biosystems ، Foster City ، California ، USA) في Unitatde Genòmica ، CCiTUB ، على محلل DNA ABI PRISM 3700 (PE Biosystems). تم تجميع تسلسلات rpl 32- trnL وpsbE-petN مع إصدار BioEdit 7.1.3.0 [66] ، بمحاذاة ClustalW MultiAlignment v1.4 [67] وتعديلها يدويًا. يتم توفير أرقام انضمام GenBank في الجدول S2.

3.5 حجم الجينوم والتحليل الجيني

تم إجراء اختبار Kruskal-Wallis غير البارامترية للتحقق من وجود فروق ذات دلالة إحصائية في قيم 2C بين السكان. تم إجراء اختبارات مقارنة دن المتعددة أيضًا لتحديد المجموعات السكانية التي أظهرت فروقًا ذات دلالة إحصائية فيما بينها. تم تطبيق تصحيح Bonferroni لتقليل الخطأ من النوع الأول (إيجابي كاذب).

تم تقدير معلمات التنوع الوراثي (المواقع متعددة الأشكال ، مواقع معلومات البخل ، عدد الأنماط النموذجية ، والتنوع الكلي للنمط الفرداني) باستخدام DnaSP v6 [68]. تم تحديد الأنماط الفردانية البلاستيدية في مجموعة بيانات مجمعة تضمنت كلاً من منطقتي rpl 32- trnL و psbE-petN. تم ترميز Indels باستخدام FastGap v.1.2 [69] وتم التعامل معه على أنه أحداث ذات طفرة مفردة. تم الاستدلال على العلاقات التطورية بين الأنماط الفردانية بناءً على شبكة البخل التي تم إنشاؤها باستخدام TTCS [70] كما هو مطبق في PopArt [71]. تم حساب الحد الأقصى لعدد الاختلافات الناتجة عن الاستبدالات الفردية بين الأنماط الفردانية بحد ثقة 95 بالمائة.

لتحليل العلاقة بين البيانات الجينية والكيميائية ، تم إجراء اختبار Mantel. أولاً ، قدرنا المسافة المظهرية بين 25 مجموعة باستخدام بيانات من نباتات عنب الدب التي تم جمعها في عام 2016 ، والتي تم قياسها لخمسة مكونات فينولية (أي.أربوتين، والكاتشين ، وحمض الكافيين ، والكيرسيتين ، والميريسيتين). استخدمنا R Commander لتوحيد هذه البيانات [72] ، وبالتالي لحساب المسافة الكيميائية المشتقة من المصفوفة المعيارية مع وظيفة "Dist" onR استنادًا إلى المسافات الإقليدية. ثانيًا ، تم حساب مصفوفة المسافة الزوجية الوراثية لسكان Nei بين 25 مجموعة باستخدام DnaSP v6. أخيرًا ، حسبنا المسافات الجغرافية الزوجية بين هذه المجموعات السكانية باستخدام الحزمة "geodist" في R. تم حساب الارتباطات الزوجية بين مصفوفات المقاومة باستخدام اختبار Mantel مع 10 ، 000 تباديل مع الوظيفة المتوفرة في حزمة R "نباتي" [ 73].

4 - نتائج

أظهرت جميع نباتات التوت التي تم تحليلهاأربوتينمحتويات أعلى من 7 في المائة ؛ لذلك ، هذه المادة النباتية مناسبة للمستحضرات العشبية. كشف تحليلنا عن محتوى أربوتين أعلى من تلك (حتى 9 بالمائة) المشار إليها بواسطة Parejo et al. [40] ، الذين حللوا أربع مجموعات تقع في شمال شرق جبال البرانس على ارتفاع 1580-2030 مترًا واكتشفوا اختلافات منخفضة في محتوى أربوتين بين السكان. علاوة على ذلك ، تقع معظم القيم المحددة هنا في نطاق المواد النباتية المختارة للزراعة في بولندا [74] وبما يتفق معأربوتينمحتوى عينات أوراق عنب الدب الإسبانية التي أبلغ عنها Sonnenschein و Tegtmeier [42] عند اختيار النباتات للزراعة في ألمانيا. يمكن تكاثر الأنماط الجينية للنخبة من A. uva-ursi نباتيًا ، لكن معظم الحيوانات المستنسخة التي تم الحصول عليها فشلت أثناء التأسيس الميداني ، مما حد من استغلال هذه الموارد. وصفنا أيضًا الاختلاف الحالي في محتوى ثلاثة مركبات فلافونويد (كاتشين ، ميريسيتين ، وكيرسيتينغلوكوزيد) ، وكذلك حمض الكافيك ، بين مجموعات عنب الدب الأسبانية ، وكيف أن العوامل المناخية (الإشعاع العالمي وهطول الأمطار بشكل أساسي) ، والتي ترتبط بخطوط العرض والارتفاعات. التدرجات ، تؤثر على هذا الاختلاف. في الوقت نفسه ، على الرغم من انخفاض مستويات النمط الفرداني وتغير حجم الجينوم المحدد في Iberian A. بشكل عام ، تسلط هذه النتائج الضوء على أن تأثير كل من العوامل الوراثية واللاأحيائية يجب أن يؤخذ في الاعتبار لشرح التباين الكيميائي النباتي غير المحدد الموجود في النباتات من التجمعات البرية.

آثار CISTANCHE

مراجع

1. مور ، ب. أندرو ، RL ؛ كولهايم ، سي. فولي ، دبليو جيه شرح التنوع غير النوعي في المستقلبات الثانوية النباتية في سياق بيئي. فيتول جديد. 2014 ، 201 ، 733-750. [CrossRef] [PubMed]

2. Cheynier، V .؛ كونت ، جي ؛ ديفيز ، كم ؛ Lattanzio ، V. الفينولات النباتية: التطورات الحديثة في التركيب الحيوي ، وعلم الوراثة ، والفيزيولوجيا البيئية. نبات فيزيول. بيوتشيم. 2013 ، 72 ، 1-20. [CrossRef]

3 - برنال ، م. لورنز ، إل. Julkunen-Tiitto ، R. ؛ بادوسا ، ياء ؛ Verdaguer ، D. التغيرات الطولية والموسمية للمركبات الفينولية في أوراق Buxus sempervirens والبشرة. نبات فيزيول. بيوتشيم. 2013، 70، 471–482. [CrossRef] [PubMed]

4. أبتون ، ر. (محرر) أوفا أورسي ليف. Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. معيار التحليل وضبط الجودة والمداواة ؛ دستور الأدوية الأمريكي العشبي: سكوتس فالي ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية ، 2008 ؛ 30 ص.

5. الوكالة الأوروبية للأدوية. تقرير التقييم عن Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. فوليوم. EMA / HMPC / 750266/2016 ؛ الوكالة الأوروبية للأدوية: أمستردام ، هولندا ، 2018.6. كانلاافاتاناكول ، م. لوريث ، ن. النباتات والمنتجات الطبيعية لعلاج فرط تصبغ الجلد - مراجعة. بلانتا ميد. 2018 ، 84 ، 988-1006. [CrossRef]

7. Migas، P .؛ Krauze-Baranowska، M. أهمية أربوتين ومشتقاته في العلاج ومستحضرات التجميل. Phytochem. بادئة رسالة. 2015 ، 13 ، 35-40. [CrossRef]

8. سيو ، د. جونغ ، ج. لي ، جي. جيون ، إي جيه ؛ كيم ، دبليو. Park، CS الإنتاج التكنولوجي الحيوي لأربوتين (- و- أربوتين) وعوامل تفتيح البشرة ومشتقاتها. تطبيق ميكروبيول. التكنولوجيا الحيوية. 2012، 95، 1417-1425. [CrossRef]

9. Zhu، X .؛ تيان ، واي. تشانغ ، دبليو. تشانغ ، تي. غوانغ ، سي. Mu ، W. التقدم الأخير في الإنتاج البيولوجي لـ -arbutin. تطبيق ميكروبيول. التكنولوجيا الحيوية. 2018 ، 102 ، 8145-8152. [CrossRef] [PubMed]

10. Davey، M. التمثيل الغذائي الثانوي في مزارع الخلايا النباتية. في موسوعة علوم النبات التطبيقية ، الطبعة الثانية ؛ Thomas ، B. ، Murphy ، DJ ، Murray ، BG ، Eds .؛ إلسفير: لندن ، المملكة المتحدة ، 2017 ؛ المجلد 2 ، ص 462-467. [CrossRef]

11. كوركين ، فيرجينيا ؛ ريازانوفا ، TK ؛ دايفا ، إد ؛ Kadentsev ، VI مكونات أوراق Arctostaphylos uva-ursi. نات. كومب. 2018 ، 54 ، 278-280. [CrossRef]

12. باندا ، أ. بتروتشي ، ر. ماروسو ، ج. مولتاري ، جي ؛ Romana-Gallo ، F. HPLC-PDAESI-TOF / MS التمثيل الأيضي لـ Arctostaphylos pungens و Arctostaphylos uva-ursi: دراسة مقارنة للمركبات الفينولية من مستخلص استقلاب الأوراق. كيمياء النبات 2015 ، 115 ، 79-88. [CrossRef]

13. Olennikov، DN؛ Chekhirova، GV 60- Galloylpicein والمركبات الفينولية الأخرى من Arctostaphylos uva-ursi.Chem. نات. كومب. 2013 ، 49 ، 1-7. [CrossRef]

14. Brewer، MS مضادات الأكسدة الطبيعية: المصادر والمركبات وآليات العمل والتطبيقات المحتملة. القس علوم الغذاء. الغذاء ساف. 2011 ، 10 ، 221-247. [CrossRef]

15. Amarowicz، R .؛ بيج ، RB ؛ رحيمي مقدم ، ص. عارية ، ب. ؛ Weil، JA القدرة على إزالة الجذور الحرة والنشاط المضاد للأكسدة لأنواع نباتية مختارة من البراري الكندية. الغذاء تشيم. 2004 ، 84 ، 551-562. [كروسريف]

16. نجار ، ر. أوجرادي ، مينيسوتا ؛ أوكالاجان ، واي سي ؛ أوبراين ، نيو مكسيكو ؛ Kerry ، JP تقييم القدرة المضادة للأكسدة في مستخلصات بذور العنب والتوت في لحم الخنزير النيء والمطبوخ. علوم اللحوم. 2007 ، 76 ، 604-610. [CrossRef] [PubMed]

17. Mekini´c، IG؛ سكروزا ، د. ليوبينكوف ، أنا ؛ Katalini´c، V.؛ Šimat ، V. مضادات الأكسدة ، ومضادات الميكروبات المحتملة لمستقلبات الفينول من أعشاب وتوابل البحر الأبيض المتوسط ​​المستخدمة تقليديًا. الأطعمة 2019 ، 8 ، 579. [CrossRef]

18 - محمد أزمان ، NA ؛ جاليجو ، إم جي ؛ سيغوفيا ، ف. عبد الله ، س. الشعراني ، SM ؛ Almajano، MP دراسة خصائص مستخلص أوراق عنب الدب كمضاد طبيعي للأكسدة في الأطعمة النموذجية. مضادات الأكسدة 2016 ، 5 ، 11. [CrossRef] [PubMed]

19. Pegg، RB؛ أماروفيتش ، ر. Naczk، M. النشاط المضاد للأكسدة لمركبات البوليفينول من مستخلص أوراق عنب الدب (Arctostaphylos uva-ursi L. Sprengel) في أنظمة اللحوم. في مركبات الفينول في الأطعمة ومنتجات الصحة الطبيعية ؛ شهيدي ، ف. ، هو ، سي تي ، محرران ؛ الجمعية الكيميائية الأمريكية: واشنطن العاصمة ، الولايات المتحدة الأمريكية ، 2005 ؛ ص 67 - 82.

20. Wrona، M.؛ بلاسكو ، إس. بيسريل ، ر. نيرين ، سي. المبيعات ، إي. Asensio ، E. علامات مضادات الأكسدة ومضادات الميكروبات بواسطة UPLC® – ESI-Q-TOF-MSE لتعبئة نشطة جديدة متعددة الطبقات تعتمد على Arctostaphylos uva-ursi. تالانتا 2019 ، 196 ، 498-509. [CrossRef]

21- ماير م. أولبرمان ، أل. رينر ، م. Weidner، E. غربلة الأعشاب الطبية الأوروبية على محتواها من مادة التانين - عوامل جديدة محتملة لدباغة صناعة الجلود. إنديانا كروب. همز. 2017 ، 99 ، 19-26. [CrossRef]

22- بوروس ، ب. جاكابوفا ، إس. Madarász، T .؛ مولنار ، ر. جالامبوس ، ب. كيلار ، ف. فيلينجر ، أ. Farkas، A. تم التحقق من صحة طريقة HPLC لحساب الكميات المتزامنة للبيرجينين والأربوتين وحمض الغاليك في أوراق أنواع مختلفة من بيرجينيا. كروماتوغرافيا 2014 ، 77 ، 1129-1135. [CrossRef]

23. مياو لينج ، سي. Chur-Min ، C. التحديد المتزامن لـ HPLC لعامل التبييض المحب للماء في منتج مستحضرات التجميل. J. فارم. بيوميد. شرجي. 2003 ، 33 ، 617-626. [CrossRef]

24. باريجو ، أنا ؛ Viladomat ، F. ؛ باستيدا ، ياء ؛ Codina ، C. خطوة استخراج واحدة في التحليل الكمي لأوراق عنب الدب أربوتينين (Arctostaphylos uva-ursi) بواسطة كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء. فيتوشيم. الشرج 2001 ، 12 ، 336-339. [CrossRef]

25. السلطة. نباتات العالم على الإنترنت. متاح على الإنترنت: http://www.plantsoftheworldonline.org/ (تم الوصول إليه في 29 أبريل 2020).

26. سليم أ. هاريس ، سي إس ؛ عاصم م. كويريه ، أ. مارتينو ، إل. حداد ، ب. Arnason ، طريقة JTRP-HPLC-DAD-APCI / MSD لتوصيف Ericaceae الطبية المستخدمة من قبل Eeyou IstcheeCree First Nations. فيتوشيم. شرجي. 2010 ، 21 ، 328-339. [CrossRef] [PubMed]

27. Stefanescu، BE؛ سزابو ، ك. موكان ، أ. Crisan، G. مركبات الفينول من أوراق خمسة أنواع Ericaceae وما يرتبط بها من التوافر البيولوجي والفوائد الصحية. جزيئات 2019 ، 24 ، 2046. [CrossRef] [PubMed]

28. Onda، Y .؛ Mochida، K. استكشاف التنوع الجيني في النباتات باستخدام تقنيات التسلسل عالية الإنتاجية. جينوم. 2016 ، 17 ، 358-367. [CrossRef] [PubMed]

29. Iannicelli، J.؛ جوارينيلو ، ياء ؛ توسيب ، في. Regalado ، JJ ؛ Di Ciaccioa، L.؛ فان بارين ، سم ؛ Pitta Álvarez، SI؛ Escandón، AS "تأثير متعدد الصيغ الصبغية" في تربية الأنواع العطرية والطبية. علوم. هورتيك. 2020،260، 108854. [CrossRef]

30. Leitch، IJ؛ Leitch ، تنوع حجم الجينوم وتطوره في نباتات الأرض. تنوع الجينوم داخل النبات المجلد 2 ، البنية الفيزيائية والسلوك وتطور جينومات النبات ؛ Leitch، IJ، Greilhuber، J.، Doležel، J.، Wendel، JF، Eds .؛ سبرينغر: فيينا ، النمسا ، 2013 ؛ ص 307 - 322. [CrossRef]

31. Bennett، MD؛ ليتش ، آي جيه الحمض النووي كميات في كاسيات البذور - التقدم ، والمشاكل ، والآفاق. آن. بوت. 2005 ، 95 ، 45-90. [CrossRef]

32. غريغوري ، TR (محرر) ، تطور الجينوم. إلسفير: سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية ، 2005.

33. Hoang، PN؛ شوبرت ، ف. مايستر ، أ. فوكس ، ياء ؛ Shubert، I. التباين في حجم الجينوم وحجم الخلية والنواة وعدد الكروموسوم ومواقع rDNA بين الأعشاب البط. علوم. مندوب. 2019 ، 9 ، 3234. [CrossRef]

34. نايت ، كاليفورنيا ؛ موليناري ، ن. Petrov ، DA فرضية قيود الجينوم الكبيرة: التطور ، والبيئة ، والنمط الظاهري. آن. بوت. 2005 ، 95 ، 177-190. [CrossRef]

35. Pellicer، J.؛ هيدالجو ، أو. دودسورث ، إس. تنوع حجم Leitch ، IJ Genome وتأثيره على تطور النباتات البرية. الجينات 2018 ، 9 ، 88. [CrossRef]

36. كاريف ، أنا ؛ Rušˇci´c، M.؛ Skoˇcibuši´c، M .؛ مارافيتش ، أ. Siljak-Yakovlev، S.؛ بوليتيكو ، أو. تشيم. بيوديرز. 2017، 14، e1600213. [CrossRef]

37. Cole، IB؛ تساو ، ياء ؛ آلان ، را. ساكسينا ، PK ؛ Murch ، SJ مقارنات بين Scutellaria baicalensis و Scutellarialateriflora و Scutellaria racemosa: حجم الجينوم وإمكانات مضادات الأكسدة والكيمياء النباتية. بلانتا ميد. 2008،74 ، 474-481. [CrossRef]

38. Carvalho، YGS؛ فيتورينو ، إل سي ؛ دي سوزا ، UJB ؛ بيسا ، لوس أنجلوس الاتجاهات الحديثة في البحث عن التنوع الجيني للنباتات: الآثار المترتبة على الحفظ. التنوع 2019 ، 11 ، 62. [CrossRef]

39. Wei، S. يانغ ، دبليو. وانغ ، العاشر ؛ Hou ، Y. تنوع وراثي عالٍ في نبات طبي مهدد بالانقراض ، Saussureainvolucrata (Saussurea ، Asteraceae) ، في جبال تيانشان الغربية ، الصين. كونسيرف. جينيه. 2017 ، 18،1435-1447. [CrossRef]

40. Chang، YJ؛ تساو ، يف. تشانغ ، جم ؛ تيان ، إل إم ؛ دونغ ، XG ؛ تشانغ ، واي. تشي ، د. Zhang ، XS دراسة عن تنوع الحمض النووي الريبي للكمثرى المزروعة والبرية (Pyrus L.) في شمال الصين. شجرة الجينات. الجينوم 2017 ، 13 ، 44. [CrossRef]

41. باريجو ، أنا ؛ Viladomat ، F. ؛ باستيدا ، ياء ؛ Codina، C. تباين محتوى أربوتين في مجموعات برية مختلفة من Arctostaphylos uva-ursi في كاتالونيا ، إسبانيا. جيه هيربس سبايس ميد. النباتات 2002 ، 9 ، 329-333. [CrossRef]

42. Sonnenschein، M.؛ Tegtmeier، M. تجارب على تدجين عنب الدب (Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng.). جيه ميد. نباتات التوابل 2012 ، 17 ، 124-128.

43. Chen، HY؛ لين ، واي سي ؛ Hsieh، CL تقييم النشاط المضاد للأكسدة للمستخلص المائي لبعض الأعشاب الغذائية المختارة. الغذاء تشيم. 2008 ، 104 ، 1418-1424. [CrossRef]

44. Del Valle، JC؛ بويد ، مل ؛ Casimiro-Soriguer، I.؛ ويتال ، جي بي ؛ Narbona، E. حول تراكم الفلافونويد في أجزاء النبات المختلفة: أنماط التباين بين الأفراد والسكان في معسكر الشاطئ (Silene littorea). أمامي. علوم النبات. 2015 ، 6 ، 939. [CrossRef]

45- Martínez-Cadenas، C. ؛ لوبيز ، إس. ريباس ، جي ؛ فلوريس ، سي ؛ غارسيا ، أو. إشبيلية أ. سميث زوبياغا ، إيبارولا فيلابا ، إم. بينو يانس ، مم ؛ Gardeazabal، J.؛ وآخرون. اختيار تنقية متزامن على أليل MC1R السلفي والاختيار الإيجابي على أليل خطر الإصابة بسرطان الجلد v60l في جنوب أوروبا. بيول. Evol. 2013 ، 30 ، 2654-2665. [CrossRef]

46. ​​Jakaaola، L .؛ Hohtola ، A. تأثير خط العرض على التخليق الحيوي للفلافونويد في النباتات. بيئة الخلية النباتية. 2010، 331239-1247. [CrossRef] 47. مارتز ، ف. Peltola ، R. ؛ فونتانا ، إس. دوفال ، ري ؛ Julkunen-Tiitto ، R. ؛ Stark، S. تأثير خطوط العرض والارتفاع على التركيبة الفينولية التيربينويدية والقابلة للذوبان لإبر العرعر (Juniperus communis) وتقييم نشاطها المضاد للبكتيريا في المنطقة الشمالية. J. أجريك. الغذاء تشيم. 2009 ، 57 ، 9575-9584. [CrossRef]

48. يانغ ب. زينج ، ياء ؛ لاكسونين ، أو. تاهفونين ، ر. Kallio، H. آثار خطوط العرض والظروف الجوية على المركبات الفينولية في أصناف الكشمش (Ribes spp.). J. أجريك. الغذاء تشيم. 2013، 61، 3517–3532. [CrossRef] [PubMed]

49. Lätti، AK؛ جاكولا ، إل. Riihinen ، KR ؛ Kainulainen ، PS تباين أنثوسيانين وفلافونول في توت بوغبيل (فاكينيوم أوليجينوسوم L.) في فنلندا. J. أجريك. الغذاء تشيم. 2010 ، 58 ، 427-433. [CrossRef] [PubMed]

50. Lätti، AK؛ Riihinen ، KR ؛ Kainulainen ، PS تحليل تباين الأنثوسيانين في مجموعات التوت البري (Vaccinium myrtillus L.) في فنلندا. J. أجريك. الغذاء تشيم. 2008 ، 56 ، 190–196. [CrossRef]

51. Monschein، M.؛ إغليسياس ، ياء ؛ كونرت ، أو. بوكار ، F. الكيمياء النباتية للخلنج (Calluna vulgaris (L.) هال) وتغييرها الطولي. فيتوشيم. القس 2010 ، 9 ، 205-215. [CrossRef]

52. Perry، NB؛ بورغس ، EJ ؛ Rodríguez Guitián، MA؛ روميرو فرانكو ، ر. لوبيز موسكيرا ، إي. سمولفيلد ، بي إم ؛ جويس ، إن آي ؛ Littlejohn ، RP Sesquiterpene lactones in Arnica montana: Helenalin و dihydrohelenalinchemotypes في إسبانيا. بلانتا ميد. 2009 ، 75 ، 660-666. [CrossRef] [PubMed]

53. عبد الله - روبرتس ، ل. أسمان ، إس. بيرني مير ، واي. تيران ، جي سي ؛ كوفيلو ، ف. جلاوزر ، جي ؛ Moreira، X. العوامل الحيوية andabotic المرتبطة بالاختلاف الطولي في سمات النبات والحيوانات العاشبة في أنواع البلوط السائدة. جيه بوت. 2016 ، 103 ، 2070-2078. [CrossRef] [PubMed]

54. بنتلي ج. مور ، جي بي ؛ Farrant ، JM Metabolomics كمكمل لعلم الوراثة لتقييم الحدود داخل النوعية في الشجيرة الطبية المقاومة للجفاف Myrothamnus flabellifolia (Myrothamnaceae). كيمياء الخلية 2019 ، 159 ، 127-136. [CrossRef] [PubMed]

55. Siljak-Yakovlev، S. Pustahija ، F. ؛ أوليوك ، إم ؛ بوغونيك ، ف. موراتوفيتش ، إي. Baši´c، N.؛ كاتريس ، أو. براون ، C نحو قاعدة بيانات لحجم الجينوم وعدد الكروموسومات لنباتات البلقان: قيم C في 343 تصنيفًا مع قيم رواية لـ 252. Adv. علوم. بادئة رسالة. 2010 ، 3 ، 190-213. [CrossRef]

56. Garrido، JL؛ الكانتارا ، جم ؛ ري ، PJ ؛ ميدرانو ، م. Guitián، J.؛ Castellanos ، MC ؛ باستيدا ، جم ؛ Jaime ، R. ؛ Herrera ، CM التركيب الجيني الجغرافي للكولومبين الأيبيرية (الجنرال Aquilegia). نظام النبات. Evol. 2017303 ، 1145-1160. [كروسريف

57. Listl، D.؛ Poschlod ، P. ؛ Reisch، C. Phylogeography of a hard rock survivage in European European grasslands. PLoS ONE 2017، 12، e0179961. [CrossRef]

58. Olalde، M.؛ هيران ، أ. إسبينيل ، إس. Goicoechea ، P. جغرافية نسالة البلوط الأبيض في شبه الجزيرة الايبيرية. ماناج. 2002 ، 156 ، 89-102. [CrossRef]

59. باريت ، SCH تأثيرات الاستنساخ على التكاثر الجنسي للنبات. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 2015، 112،8859–8866. [CrossRef] [PubMed]

60. Skowyra، M.؛ Falguera، V.؛ جاليجو ، ج. بيرو ، إس. Almajano، MP تأثير مستخلصات Perilla frutescens على الثبات التأكسدي للمستحلبات الغذائية النموذجية. مضادات الأكسدة 2014 ، 3 ، 38-54. [CrossRef] [PubMed]

61. باسكوال أ. كويرانتس بينيه ، ر. فرناندو ، أل. أليكسوبولو ، إي. Segura-Carretero، A. التركيب الفينولي والنشاط المضاد للأكسدة لأوراق التيل. إنديانا كروب. همز. 2015 ، 78 ، 116-123. [CrossRef]

62. بيليسر ، ج. غارناتجي ، تي. موليرو ، ياء ؛ Pustahija ، F. ؛ Siljak-Yakovlev، S.؛ Vallès، J. أصل وتطور أنواع Artemisia في أمريكا الجنوبية (Asteraceae) ؛ أدلة من علم الوراثة الجزيئي والحمض النووي الريبوزومي وبيانات حجم الجينوم. أوست. جيه بوت. 2010 ، 58 ، 605-616. [CrossRef]

63. Doležel، J. تحليل التدفق الخلوي لمحتوى الحمض النووي النووي في النباتات العليا. فيتوشيم. شرجي. 1991، 2143-154. [CrossRef]

64. Doyle، JJ؛ دويل ، جيه إل إجراء سريع لعزل الحمض النووي للكميات الصغيرة من أنسجة الأوراق الطازجة. فيتوشيم. الثور بوت. شركة أكون. 1987 ، 19 ، 11-15.

65. Vitales، D.؛ فيلينر ، GN ؛ فاليس ، ياء ؛ غارناتجي ، تي. فرات ، م. ألفاريز ، 1. تحديد جديد لجنس البحر الأبيض المتوسط ​​Anacyclus (Anthemideae ، Asteraceae) استنادًا إلى علامات الحمض النووي البلاستيد والنووي Phytotaxa 2018، 349، 1–17. [CrossRef]

66. Hall، TA BioEdit: محرر وتحليل لمحاذاة التسلسل البيولوجي سهل الاستخدام لنظام التشغيل Windows95 / 98 / NT. سيمب الأحماض النووية. سر. 1999 ، 41 ، 95-98.

67. Thompson، JD؛ هيغينز ، دي جي ؛ Gibson، TJ CLUSTAL W: تحسين حساسية المحاذاة التدريجية لسلسلة متعددة من خلال ترجيح التسلسل ، وعقوبات الفجوة الخاصة بالموضع ، واختيار مصفوفة الوزن. الأحماض النووية الدقة. 1994 ، 22 ، 4673-4680. [CrossRef]

68. Rozas، J.؛ فيرير ماتا ، أ. سانشيز ديلباريو ، جي سي ؛ Guirao-Rico، S. ليبرادو ، ص. Ramos-Onsins ، SE ؛ Sánchez-Gracia ، A. DnaSP 6: تحليل تعدد الأشكال في تسلسل الحمض النووي لمجموعات البيانات الكبيرة. مول. بيول. Evol.2017 ، 34 ، 3299-3302. [CrossRef] [PubMed]

69. Borchsenius، F. FastGap، Version 1.2؛ Department of Biosciences، Aarhus University: Aarhus، Denmark، 2009 ؛ متاح على الإنترنت: http://www.aubot.dk/FastGap_home.htm (تم الوصول إليه في 1 يوليو 2019).

70. Clement، M.؛ بوسادا ، DCKA ؛ كراندال ، KA TCS: برنامج كمبيوتر لتقدير الأنساب الجينية. ايكول. 2000 ، 9 ، 1657–1659. [CrossRef] [PubMed]

71. Leigh، JW؛ Bryant، D. Popart: برنامج كامل الميزات لبناء شبكة من النمط الفرداني. طرق Ecol. Evol.2015 ، 6 ، 1110-1116. [CrossRef]

72. Fox، J. الشروع في العمل مع قائد R: واجهة مستخدم رسومية إحصائية أساسية لـ RJ Stat. البرمجيات 2005 ، 14 ، 1–42. [CrossRef]

73. Oksanen، J.؛ بلانشيت ، إف جي ؛ كيندت ، ر. Legendre ، P. ؛ O'Hara، RB؛ سيمبسون ، GL ؛ Solymos ، P. ؛ Stevens ، M. ؛ Wagner ، H. Vegan: Community Ecology Package. إصدار حزمة R 1. 17-4. 2010. متاح على الإنترنت: http: //CRAN.R-project.org/package=نباتي (تم الدخول إليه في 19 سبتمبر 2010) .74. Malinowska ، H. مختارات عنب الدب (Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng.) من التجمعات الطبيعية في بولندا. اكتا سوسيتيه. بوت. بول. 1995 ، 64 ، 91-96. [CrossRef]