جليكوسيدات فينيلثانويد من Cistanche Deserticola: آلية التأثير الوقائي للأعصاب

مايكوان لي وآخرون

الملخص:العامل النووي 2- المرتبط بالعامل 2 (Nrf2) هو عامل نسخ رئيسي ضد الإجهاد التأكسدي والاضطرابات التنكسية العصبية.جليكوسيدات فينيلثانويد(فغس ، ساليدروسيد ،أكتيوسيدو isoacteoside وإشنكوسايد) عرض مضادات الأكسدة واعصابالأنشطة الحيوية. تم إجراء هذه الدراسة للتحقيق فياعصابتأثير والآلية الجزيئيةفغس. فغسأدت المعالجة المسبقة إلى كبت السمية الخلوية H2O 2- بشكل كبير في خلايا PC12 عن طريق تحفيز الانتقال النووي لـ Nrf2 وعكس التعبير البروتيني المنظم عن الهيم أوكسيجيناز 1 (HO -1) ، NAD (P) H quinone oxidoreductase 1 (NQO1 ) ، والوحدة الفرعية المحفزة للغلوتامات-السيستين (GCLC) ، والوحدة الفرعية لمعدِّل الغلوتامات-السيستين (GCLM). Nrf2 siRNA أو HO -1 مثبط الزنك البروتوبورفيرين (ZnPP) يقلل مناعصابتأثير. أظهرت PhGs تفاعلًا محتملًا مع موقع ربط Nrf2 في بروتين رابطة ECH الشبيه بـ Kelch 1 (Keap1). قد تدعم هذه النتيجة الفرضية القائلة بأن PhGs منشطون لـ Nrf2. لقد أظهرنا الارتباط المحتمل بين PhGs ومسار Nrf2 / ARE المنشط من Keapl ، وأن PhGs التي تحتوي على المزيد من الجليكوسيدات لها تأثيرات معززة.

الكلمات الدالة:Keap1 ؛ Nrf2 ؛اعصاب؛ خلايا PC12فغس(NQO1) ، من بين أمور أخرى [5-7]. تمثل هذه العملية خطوة رئيسية في حماية الخلايا من الإجهاد التأكسدي وهي تبرز كهدف علاجي واعد للحماية العصبية [8]. ذكرت Gaia أن Nrf2 يخفف LRRK 2- والتنكس العصبي الذي يسببه a-synuclein عن طريق تعزيز توازن البروتين العصبي بطريقة مستقلة عن الخلايا وتعتمد على الوقت [9].

جليكوسيدات فينيلثانويد (فغس) من خلال شقوق حمض سيناميك وهيدروكسيل فينيل إيثيل المرتبطة بـ ap-glucopyranose من خلال روابط الإستر والجليكوسيد ، على التوالي. هذه الجزيئات هي أعضاء في مجموعة من المنتجات الطبيعية القابلة للذوبان في الماء الموزعة على نطاق واسع في المملكة النباتية [10]. أظهرت الدراسات التي أجريت في المختبر وفي الجسم الحي أن هذه المركبات تحتوي على مضادات الأكسدة [11] ،اعصاب[12] ، مضاد للجراثيم ،

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

يحتوي Cistanche على خصائص حماية الأعصاب ، انقر هنا لمعرفة المزيد

1 المقدمة

يؤدي الإجهاد التأكسدي ، وهو خلل في التوازن المضاد للأكسدة ، إلى تحفيز بيروكسيد الدهون ، وإصابة البروتين والحمض النووي ، وشيخوخة الخلايا ، وموت الخلايا. من المحتمل أن تساهم هذه العملية في العديد من الاضطرابات العصبية التنكسية ، مثل مرض الزهايمر (AD) ، ومرض باركنسون (PD) ، ونقص التروية / ضخه [1]. من المعروف أن بيروكسيد الهيدروجين (H2O2) ، وهو أحد أنواع الأكسجين التفاعلية الرئيسية (ROS) ، يسبب أكسدة الدهون وتلف الحمض النووي [2]. علاوة على ذلك ، يعتبر H2O2 مصدرًا داخليًا للجذور الحرة للهيدروكسيل الذي يساهم في مستوى الخلفية من الإجهاد التأكسدي الخلوي [3،4]. لذلك ، قد يكون للاستراتيجيات العلاجية للوقاية من موت الخلايا المبرمج الناتج عن الإجهاد التأكسدي إمكانية علاج الأمراض التنكسية العصبية.

العامل النووي 2- المرتبط بالعامل 2 (Nrf2) ، هو عامل نسخ مرتبط بشدة بالإجهاد التأكسدي. يؤدي تنشيط Nrf2 إلى نسخ العديد من جينات مضادات الأكسدة وإزالة السموم ، بما في ذلك الهيم أوكسيجيناز -1 (HO -1) ، NAD (P) H quinone oxidoreductase 1

المضادة للالتهابات [13] ، والنشاطات الحيوية المعدلة للمناعة [14]. Osmanthusfragrans هو عنصر شائع في العديد من الأطعمة الآسيوية وقد تم استهلاكه منذ فترة طويلة. لقد أظهرنا سابقًا أن مستخلصات زهرة O.fragrans عززت التعلم المكاني والذاكرة ، وتثبط الضرر التأكسدي ، وأظهرت أنشطة اعصاب في الشيخوخة التي يسببها الجالاكتوز في نموذج فأر ICR [15]. Salidroside و acteoside و isoacteoside هي استجابة PhGs الرئيسية للأنشطة المضادة للأكسدة لمستخلصات أزهار O.fragrans [16].

حصلت الدراسات التي أجريت على التأثير الوقائي للأعصاب للـ PhGs على نتائج مرغوبة. قلل الساليدروسيد بشكل كبير من موت الخلايا المبرمج للخلايا PC12 التي تم الكشف عنها في MPP plus [17،18]. خفف Acteoside أيضًا من موت الخلايا المبرمج الناتج عن MPP بالإضافة إلى الإجهاد التأكسدي في خلايا PC12 [19] و A p 25-35- تسبب في إصابة خلية SH-SY5Y [20].إشيناكوسايدتم التحقيق في موت الخلايا المبرمج الناتج عن عامل نخر الورم (TNFa) في خلايا SH-SY5Y [21] ، والتسمم الدوبامين الناجم عن MPTP في الفئران [22] ، والزراعات الأولية المصابة بالجلوتامات في الخلايا القشرية للفئران [23] ، و {{ 9}} الضرر الناجم عن OHDA في خلايا PC12 [24]. أشارت النتائج إلى أن PhGs أظهرت تأثيرًا واقيًا للخلايا وهي عوامل محتملة لعلاج الأمراض التنكسية العصبية. أظهرت الدراسات أن الخصائص المضادة للأكسدة للـ PhGs تكمن وراء العديد من الأنشطة الحيوية الأخرى لهذه المركبات [25]. ومع ذلك ، فقد بحثت دراسات قليلة في الآلية الجزيئية لـ PhGs ضد السمية المؤكسدة.

في دراستنا ، اخترنا أربعة PhGs نموذجية على النحو التالي: salidroside (السكاريد أحادي فينيلثانويد) ، أكتيوسيد (سكريات ثنائي إيثانويد) ، أيزوكتيوسيد (سكريات ثنائي إيثانويد) ، وإشنكوسايد(السكريات ثلاثية الفينيثانويد). استخدمنا نموذجًا لموت الخلايا العصبية باستخدام خلايا PC12 المتمايزة [26] للتحقيق في التأثير الوقائي والآلية الجزيئية لـ PhGs على نموذج خلية PC12 المستحث H2O 2-. لقد أظهرنا أن PhGs نشطت مسار Nrf2 / ARE من خلال الارتباط بالبروتين 1 المرتبط بـ Kelch-like ECH 1 (Keap1). أدت هذه العملية إلى تنظيم إنزيمات مضادات الأكسدة وزيادة مقاومة خلايا PC12 للإجهاد التأكسدي.

2. النتائج

2.1. PhGs قمع H2O 2- السمية الخلوية المستحثة في خلايا PC12

تم اختبار التأثيرات السامة للخلايا لـ H2O2 و PhGs (0. 1،1،5 و 1 0 卩 جم / مل) على خلايا PC12. أظهرت النتائج أن H2O2 تسبب في فقدان صلاحية خلية PC12 في السلوك المعتمد على التركيز والمعتمد على الوقت (الشكل 1A). أدى تعرض خلايا PC12 إلى 2 0 0 H2O2 لمدة ساعتين إلى بقاء الخلية بنسبة 57.4 بالمائة. لم يكن للمعالجة المسبقة للخلايا باستخدام PhGs عند 0.1 و 1 و 5 و 10 - / مل أي تأثير على قابلية بقاء الخلية (الشكل 1 ب) وخلايا PC12 المحمية بشكل ملحوظ من H2O 2- من التلف الناجم عن طريق تحسين قابلية بقاء الخلية 9. 549-22. 141 بالمائة ، 12. 092-25. 289 بالمائة ، 1. 470-9. 289 بالمائة ، 3. 411-11. 441 بالمائة ، على التوالي (الشكل 1 ج) . ومع ذلك ، salidroside (0.1 ^ g / mL) ، isoacteoside (0.1 ، 1 ، 5 ، و 10 ^ جم / مل) ،إشنكوسايد(0 .1 ، 1 ، 5 ^ جم / مل) لم تظهر المعالجة المسبقة فرقًا كبيرًا في إصابة الخلايا التي يسببها HzOz. حسنت المعالجة المسبقة للخلايا باستخدام PhGs أيضًا الخاصية المورفولوجية التي يسببها H2O2 (الشكل 1 د).

الشكل 1. قمعت PhGs 2- المستحث بالسمية الخلوية في خلايا PC12. تم الكشف عن صلاحية الخلية بواسطة فحص MTT. التأثير السام للخلايا لـ H2O2 (A) و PhGs (B) بتركيزات مختلفة على خلايا PC12. (C) PhGs تضعف H2O 2- الناجم عن انخفاض في صلاحية الخلية. تم تحضين خلايا PC12 باستخدام PhGs ({{1 0}. 1 ، و 1 0 wg / mL) لمدة 24 ساعة ، ثم تم تحضينها بـ 2 0 0 pM H2O2 لآخر 2 ساعة بعد إزالة PhGs. (د) الملاحظة المورفولوجية. تمت ملاحظة الخلايا بعد العلاج بواسطة مجهر تباين الطور (x100) ، CK: المجموعة العادية ، H2O2: H2O2 المجموعة المعالجة ، HL: المجموعة المعالجة بجرعة منخفضة من salidroside ، HH: مجموعة المعالجة بجرعة عالية من salidroside ، ML: مجموعة معالجة جرعة منخفضة من Acteoside ، MH: المجموعة المعالجة بجرعات عالية من أكتيوسيد ، IL: المجموعة المعالجة بجرعة منخفضة من أيزوكتيوسيد ، IH: المجموعة المعالجة بجرعة عالية من أيزوكتيوسيد ، SL: مجموعة معالجة بجرعة منخفضة من إشنكوسايد ، SH: مجموعة معالجة بجرعة عالية من إكيناكوسيد. ** ف <0.01 مقابل="" المجموعة="" غير="" المعالجة="" ؛="" #="" p=""><0.05 ،="" مقابل="" المجموعة="" المعالجة="" h2o2="" ؛="" ##="" p=""><0.01 ،="" مقابل="" المجموعة="" المعالجة="">

2.2. PhGs قمع H2O 2- التراكم المستحث داخل الخلايا لـ ROS ، وبيروكسيد الدهون (MDA) ، وزيادة أنشطة ديسموتاز الأكسيد الفائق (SOD) في خلايا PC12

أدى تعرض خلايا PC12 إلى 2 0 0 pM H2O2 لمدة ساعتين إلى زيادة مستويات ROS ومحتوى MDA وانخفاض نشاط SOD (الشكل 2). خففت المعالجة المسبقة لـ PhGs مستوى ROS ، والساليدروزيد ، والأكتيوسايد ، والجرعة العالية من أيزوكتيوسيد ومعالجة إشنكوسايد الموهنة بشكل كبير على مستوى ROS (p <0.01). لم="" تظهر="" المعالجة="" المسبقة="" بالساليدروزيد="" أي="" تأثير="" على="" محتوى="" mda="" ،="">أكتيوسيدأدت المعالجة المسبقة إلى إضعاف محتوى MDA بشكل ملحوظ (p <0. 05).="" أدت="" المعالجة="" المسبقة="" بإيزوكتيوسيد="" وإشنكوسايد="" إلى="" تخفيف="" محتوى="" mda="" بشكل="" كبير="" إلى="" مستوى="">

الشكل 2. منعت PhGs تراكم ROS و MDA وزادت أنشطة SOD في خلايا PC12. تم تحضين خلايا PC12 باستخدام PhGs (0. 1 ، و 10 4 جم / مل) لمدة 24 ساعة ، ثم تم تحضينها بـ 2 0 0|^ M H2O2 لآخر 2 ساعة بعد إزالة PhGs. (أ) منعت PhGs تراكم ROS و MDA. (ب) منعت PhGs تراكم MDA. (C) PhGs زاد من أنشطة SOD. CK: المجموعة العادية ، النموذج: المجموعة المعالجة H2O2 ، Salidroside: المجموعة المعالجة بالساليدروسايد ، Acteoside: المجموعة المعالجة بالأكتيوسيد ، Isoacteoside: المجموعة المعالجة بإيزواكتوزيد ، Echinacoside: المجموعة المعالجة بإيكيناكوسيد. ** p <0. 01="" مقابل="" المجموعة="" غير="" المعالجة="" ؛="" #="" p=""><0.05 ،="" مقابل="" المجموعة="" المعالجة="" h2o2="" ،="" ##="" p=""><0.01 ،="" مقابل="" المجموعة="" المعالجة="">

2.3.PhGs العكسي H2O 2- المستحث في موت الخلايا المبرمج في خلايا PC12

أدى علاج H2O2 (2 0 0|1M) لمدة ساعتين إلى زيادة كبيرة في موت الخلايا المبرمج في خلايا PC12 ، مع إجمالي معدل موت الخلايا المبرمج يصل إلى 16.02 بالمائة (الشكل 3). ومع ذلك ، أدت المعالجة المسبقة بـ PhGs (0.1 و 10 ميكروغرام / مل) لمدة 24 ساعة إلى خفض معدل موت الخلايا المبرمج بطريقة تعتمد على التركيز (p <0.01). ساليدروسيد="">أكتيوسيدو isoacteoside وإشنكوسايدانخفاض ملحوظ في النسبة المئوية لموت الخلايا المبرمج بنسبة 4. 750-6. 627 بالمائة ، 4. 413-5. 800 بالمائة ، 6. 593-10. 047 بالمائة ، و 1. 530-7. 510 في المئة على التوالي.

الشكل 3. PhGs عكس H2O 2- موت الخلايا المبرمج في خلايا PC12. تم تحضين خلايا PC12 باستخدام PhGs (0. 1 ، و 10 ميكروغرام / مل) لمدة 24 ساعة ، ثم تم تحضينها بـ 200 pM H O لمدة ساعتين أخرى بعد إزالة PhGs. بعد ذلك ، تم قياس موت الخلايا المبرمج بواسطة قياس التدفق الخلوي باستخدام مسبار الفلورسنت PI / FITC.

CK: المجموعة العادية ، النموذج: المجموعة المعالجة H2O2 ، Salidroside: المجموعة المعالجة بالساليدروسايد ، Acteoside: المجموعة المعالجة بالأكتيوسيد ، Isoacteoside: المجموعة المعالجة isoacteoside ،إشيناكوسايد: إشنكوسايدالمجموعة المعالجة. ** p <{0}. 01="" مقابل="" المجموعة="" غير="" المعالجة="" ؛="" ##="" p=""><0.01 ،="" مقابل="" المجموعة="" المعالجة="">

2.4 PhGs Alleviated H2O 2- عدم تنظيم المستحث في مسارات Nrf 2- ARE في خلايا PC12

يعد مسار Nrf {0} ARE ، أحد أهم مسارات مضادات الأكسدة في معظم أنواع الخلايا ، وهو مهم في تنظيم نمو الخلايا وموت الخلايا. لذلك ، درسنا ما إذا كان مسار Nrf 2- متورطًا في موت الخلايا المبرمج المستحث بواسطة H2O 2- عن طريق التألق المناعي وتحليل اللطخة الغربية باستخدام أجسام مضادة محددة. أظهر اختبار التألق المناعي أن PhGs (0.1 و 10 بيكوغرام / مل) تسببت في الانتقال النووي لـ Nrf2 (الشكل 4). بعد علاج PhGs ، isoacteoside ، وإشنكوسايدأدى إلى الانتعاش الجزئي للتشكل الطبيعي للخلية. أظهرت نتائج النشاف الغربي وتحليلات الكثافة الرمادية أن PhGs ({0}. 1 و 1 0 بيكوغرام / مل) ليس لها تأثير كبير على التعبير عن Nrf2 في السيتوبلازم (الشكل 5 أ ، ب) (p> {{2 0}}. 05) لكن تعبير Nrf2 منظم في النواة (الشكل 5C ، D) (p <0.01). بعد="" ذلك="" ،="" درسنا="" دور="" nrf2="" في="" موت="" الخلايا="" المبرمج="" المستحث="" h2o="" 2-="" عن="" طريق="" استيراد="" nrf2="" sirna.="" تم="" تنظيم="" تعبير="" البروتين="" و="" mrna="" لـ="" nrf2="" بشكل="" كبير="" في="" جميع="" المجموعات="" المعالجة="" بـ="" nrf2="" sirna="" (الشكل="" 5e-h).="" منعت="" phgs="" (0.1="" و="" 10="" بيكوغرام="" مل)="" h2o="" 2-="" السمية="" الخلوية="" في="" مجموعات="" بدون="" معالجة="" nrf2="" sirna="" (p=""><0.01) ،="" ولكن="" تم="" عكس="" هذه="" الحماية="" بواسطة="" nrf2="" sirna.="" بعد="" علاج="" nrf2="" sirna="" ،="" انخفضت="" قابلية="" الخلية="" للحياة="" بشكل="" ملحوظ="" حتى="" مع="" علاج="" phgs="" (الشكل="">

الشكل 5. التأثير الوقائي لـ PhGs على Nrf2 في خلايا PC12 المعالجة بـ H2O 2-. (أ) تم الكشف عن التعبير عن بروتين Nrf2 في السيتوبلازم عن طريق التجلط المناعي باستخدام جسم مضاد معين. تم استخدام p-Actin كعنصر تحكم في التحميل. (ب) التحليل الكمي لقياس الكثافة لبروتين Nrf2 في السيتوبلازم. (ج) تم الكشف عن التعبير عن بروتين Nrf2 في النواة عن طريق التجلط المناعي باستخدام جسم مضاد معين. تم استخدام Histones H3 كعنصر تحكم في التحميل. (د) التحليل الكمي لقياس الكثافة لبروتين Nrf2 في النواة. (E ، F) تم تحضين خلايا PC12 مسبقًا بدون (E) أو مع (F) Nrf2 siRNA لمدة 24 ساعة ، ثم تم تحضينها مع أو بدون PhGs (0. 1 و 1 0 昭 / مل) لمدة 24 ساعة ، وحضنت مع H O لمدة ساعتين أخرى بعد إزالة PhGs. تم الكشف عن التعبير الكلي للبروتين Nrf2 عن طريق التكتل المناعي باستخدام جسم مضاد محدد ، واستخدم p-actin كعنصر تحكم في التحميل. (G) التحليل الكمي لقياس الكثافة لبروتين Nrf2 الكلي. (H) التحليل الكمي لـ Nrf2 mRNA. (I) تم تحضين خلايا PC12 مسبقًا مع سيرنا أو بدونه لمدة 24 ساعة ، ثم حضنت مع أو بدون PhGs (0.1 و 10 - / مل) لمدة 24 ساعة ، وحضنت مع H O لمدة ساعتين أخرى بعد إزالة PhGs. بعد العلاج ، تم تحديد خلايا البقاء عن طريق مقايسة MTT. CK: المجموعة العادية ، النموذج: المجموعة المعالجة H2O2 ، التحكم Si: المجموعة المعالجة بالتحكم SiRNA ، SiRNA Negative: بدون المجموعة المعالجة SiRNA ، SiRNA إيجابي: المجموعة المعالجة بـ SiRNA ، Salidroside: المجموعة المعالجة بالساليدروسايد ، Acteoside: المجموعة المعالجة بالأكتيوزيد ، Isoacteoside: isoacteoside المعالج مجموعة،إشيناكوسايد: المجموعة المعالجة إشنكوسايد. ** p <{0}}. 0="" 1="" مقابل="" مجموعة="" غير="" معالجة="" ؛="" #="" p=""><0. 0="" 5="" ،="" مقابل="" المجموعة="" المعالجة="" h2o2="" (بدون="" معالجة="" nrf2="" sirna)="" ،="" ##="" p=""><0.01 ،="" مقابل="" المجموعة="" المعالجة="" h2o2="" (بدون="" معالجة="" nrf2="" sirna)="" ؛="" &="" p=""><0.05 مقابل="" المجموعة="" المعالجة="" بـ="" h2o2="" (مع="" معالجة="" nrf2="" sirna)="" ،="" و="" p=""><0.01 ،="" مقابل="" المجموعة="" المعالجة="" بـ="" h2o2="" (مع="" معالجة="" nrf2="">

2.4 PhGs Reversed H2O 2- تقليل التنظيم المستحث لتعبير البروتين عن HO -1 و NQO1 و GCLC و GCLM

HO {{0} و NQO1 و glutamate-cysteine ​​ligase (GCL) هي إنزيمات خلوية مهمة مضادة للأكسدة ، و HO -1 ، NQO1 ، والوحدات الفرعية التحفيزية أو المعدلة لـ GCL (GCLC أو GCLM) هي Nrf 2- جينات المصب المنظمة [27]. تمت ملاحظة تعبير البروتين عن HO -1 و NQO1 و GCLC و GCLM بعد العلاج. تم العثور على اختلاف واضح بين تعبير البروتين عن HO -1 و NQO1 مع أو بدون H2O2 (الشكل 6A-C) (p <0. 0="" 1).="" عكس="" phgs="" (0.="" 1="" و="" 1="" 0="" p="" ^="" g="" ml)="" h2o="" 2-="" الناجم="" عن="" تقليل="" التعبير="" البروتيني="" لـ="" ho="" -1="" (باستثناء="" salidroside="" في="" {{32}="" }="" .1="" بيكوغرام="" مل)="" ،="" nqo1="" (باستثناء="" أكتيوسيد="" عند="" 0.="" 1="" بيكوغرام="" مل)="" (ف=""><0.01). h2o2="" يقلل="" أيضًا="" من="" تنظيم="" gclc="" و="" gclm="" البروتين="" التعبير="" (p=""><0.05) (الشكل="" 6a="" ،="" d="" ،="" e).="" عكس="" phgs="" (0.1="" و="" 10="" بيكوغرام="" مل)="" h2o="" 2-="" الناجم="" عن="" تقليل="" تنظيم="" التعبير="" البروتيني="" لـ="" gclc="">إشنكوسايدعند {0}. 1 بيكوغرام / مل) (p <0. 0="" 1)="" و="" gclm="" (باستثناء="" salidroside="" عند="" 0.="" 1="" بيكوغرام="" مل)="" (="" ف=""><0. 0="" 1).="" بعد="" ذلك="" ،="" تم="" استخدام="" المثبطات="" الكيميائية="" لـ="" h="" o="" -1="" لإجراء="" مزيد="" من="" التقييم="" لأدوار="" إنزيمات="" مضادات="" الأكسدة="" في="" تنظيم="" حماية="" phgs="" ضد="" h2o="" 2-="" السمية="" الخلوية="" المستحثة.="" حالت="" نسبة="" phgs="" (0.1="" و="" 10="" بيكوغرام="" مل)="" دون="" سمية="" الخلايا="" التي="" يسببها="" h2o="" 2-="" ،="" ولكن="" تم="" عكس="" هذا="" التأثير="" الوقائي="" بواسطة="" مثبط="" ho="" -1="" znpp="" (p=""><0.01) عند="" 20="" مساءً="" (الشكل="" 6f="" ،="" p=""><0.01)>

2.5 التعبير Keap1 وتحليل الالتحام الجزيئي

في ظل الظروف الفسيولوجية ، يعمل Keap1 كبروتين مثبط لـ Nrf2 من خلال الارتباط بمجال Neh2 من Nrf2 واستهداف Nrf2 بـ Cul 3- القائم على E3 ubiquitin ligase من أجل الانتشار والتحلل اللاحق بواسطة البروتيازوم 26S [28]. تم تقييم قدرة الارتباط بـ Keap1 من PhGs عن طريق تحليل الالتحام الجزيئي لاستكشاف الآلية تحت تأثير مضادات الأكسدة.

3. مناقشة

لقد بحثنا في الحماية العصبية لـ PhGs على H2O2 المستحث بالسمية الخلوية في خلايا PC12. أوضحت النتائج أن المعالجة المسبقة لـ PhGs قمعت بشكل كبير من السمية الخلوية التي يسببها HzOz ، وخففت مستوى ROS داخل الخلايا ، وحسنت مستوى إنزيمات مضادات الأكسدة داخل الخلايا ، وعكس H2O 2- في نهاية المطاف السمية الخلوية في خلايا PC12. علاوة على ذلك ، زادت PhGs من تنشيط النسخ لـ Nrf2 ، وعكس التنظيم الناجم عن HzOz لتعبير البروتين عن HO -1 و NQO1 و GCLC و GCLM. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت PhGs تفاعلًا محتملًا مع موقع ربط Nrf2 في بروتين Keap1.

في H2O 2- إصابة خلايا PC12 المستحثة ، أدت أكسدة الدهون ، والتي تشير إلى التحلل التأكسدي للدهون ، إلى زيادة نفاذية الأغشية ، مما يؤدي إلى تلف الخلايا [29]. يستخدم تشكيل MDA على نطاق واسع كمؤشر لبيروكسيد الدهون [30]. عزز H2O2 إنتاج ROS واستنفاد إنزيمات الدفاع المضادة للأكسدة ، مثل SOD و catalase و GPx. تؤدي هذه العملية إلى الإجهاد التأكسدي [31] ، والذي يلعب دورًا رئيسيًا في التسبب في غالبية اضطرابات التنكس العصبي وتطورها. تمشيا مع الدراسات السابقة ، لاحظنا زيادة مستوى ROS ، وانخفاض إنزيمات مضادات الأكسدة داخل الخلايا ، وتحسين موت الخلايا المبرمج لخلايا PC12 بعد علاج H2O2. خففت المعالجة المسبقة لـ PhGs بشكل كبير من الزيادة التي يسببها HzOz في ROS داخل الخلايا ، وتحسين إنزيمات مضادات الأكسدة داخل الخلايا ، وفي النهاية عكس السمية الخلوية التي يسببها HzOz في خلايا PC12.

كوانغ وآخرون. [32] ذكرت ذلكإشنكوسايدأظهر تأثيرًا مهمًا وقائيًا للأعصاب على H2O 2- السمية الخلوية المستحثة في خلايا PC12 من خلال مسار موت الخلايا المبرمج للميتوكوندريا. في هذه الدراسة ، وجدنا أن إشنكوسايد ، ساليدروسايد ، أكتيوسيد ، وإيزوكتيوزيد أظهروا تأثيرات اعصاب من خلال تعزيز نشاط مضادات الأكسدة لخلايا PC12 لأنها زادت من تنشيط النسخ لـ Nrf2 وعززت التعبير البروتيني المصب لـ HO -1 ، NQO1 ، GCLC و GCLM. أظهرت العديد من الدراسات بوضوح أن تنشيط الجينات المستهدفة Nrf2 ، ولا سيما HO -1 ، في الخلايا النجمية والخلايا العصبية يحمي بشدة من الالتهاب والأضرار التأكسدية وموت الخلايا. تم الإبلاغ عن أن نظام HO -1 نشط جدًا في الجهاز العصبي المركزي ، ويبدو أن تعديله يلعب دورًا مهمًا في التسبب في الاضطرابات التنكسية العصبية [33]. أوضحت الدراسات الحديثة أيضًا دور Nrf2 في تطور وخطر الإصابة بمرض PD [9] و Keap1 كهدف فعال لإعادة تنشيط Nrf2 في AD [34]. تدعم النتائج أدلة جديدة على Nrf2 كهدف علاجي في الأمراض التنكسية العصبية.

أظهر تحليل الالتحام الجزيئي أن PhGs يمكن أن ترتبط بـ Keap1 ، بقدرات الربط التالية:إشنكوسايد>إيزوكتيوسيد> أكتيوسيد> ساليدروزيد. تمشيا مع هذه النتائج ، أدت المعالجة المسبقة لـ PhGs إلى الانتقال النووي Nrf2 ، مع تعبير Nrf2 التالي في النواة:إشنكوسايد>isoacteoside * acteoside> salidroside. افترضنا أن عدد الجليكوسيدات قد أثر على وضع الربط المحتمل لـ PhGs و Keap1 ، كما تسبب وضع الربط في إطلاق Nrf2 من Keap1. أدت هذه العملية إلى تنشيط Nrf2 والجينات النهائية ، وفي النهاية تحمي خلايا PC12 من الإجهاد التأكسدي الناجم عن H2 O 2 -.

4. المواد والطرق

4.1 المركبات الكيميائية والكواشف

Salidroside (رقم CAS 10338-51-9) ، acteoside (رقم CAS 61276-17-3) ، isoacteoside (رقم CAS 61303-13-7) ، وإشنكوسايد(رقم CAS {0}}) تم شراؤه من شركة YYuanye Biotechnology Company (شنغهاي ، الصين). تم إذابة PhGs في PBS لإنتاج محلول مخزون 10 مجم / مل ، والذي تم تخزينه عند درجة -20. تم شراء H2O2 من Aladdin® (شنغهاي ، الصين). تم شراء RPMI -1640 من مصل الأبقار المتوسط ​​والجنين من Hyclone (Logan ، UT ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وتم شراء 0.5 بالمائة من التربسين EDTA والبنسلين والستربتومايسين من Keyi (Hangzhou ، الصين). تم شراء MDA ، ومجموعات تشخيص SOD ، و MTT ، و DCFH-DA من معهد Beyotime للتكنولوجيا الحيوية (نانجينغ ، جيانغسو ، الصين). تم شراء مجموعة التلوين المزدوجة Annexin V-FITC / PI من Solarbio Life Sciences (بكين ، الصين). تم شراء الأجسام المضادة لـ Nrf2 ، و Histone H3 ، و Keap1 ، و HO -1 ، و NQO1 ، و GCLC ، و GCLM ، و p-actin ، و IgG المضاد للفئران (HRP) ، ومضاد الأرانب-HRP-IgG من Abcam (لندن، المملكة المتحدة). تم شراء مثبطات HO -1 و ZnPP من شركة Sigma Chemical Co. (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء RNAiso Plus و PrimeScript ™ RT كاشف مع ممحاة gDNA و SYBR® Premix Ex Taq ™ II من Takara (شيجا ، اليابان). تم شراء Lipofectamine® RNAiMAX Transfection Reagent من Thermo Fisher Scientific (Waltham ، المملكة المتحدة). كانت تسلسلات Nrf2 siRNA على النحو التالي: إلى الأمام ، CCGAAUUACAGUGUCUUAA ؛ وعكس UUAAGACACUGUAAUUCGG. وفي الوقت نفسه ، كانت تسلسلات التحكم في siRNA كما يلي: إلى الأمام ، UUCUCCGAACGUGUCACGU ؛ وعكس ACGUGACACGUUCGGAGAA.

4.2 زراعة الخلايا

تم الحصول على خط ورم القواتم الكظرية (خلايا PC12) من معهد الكيمياء الحيوية وبيولوجيا الخلية ، SIBS ، (CAS ، شنغهاي ، الصين). تم الحفاظ على الخلايا في RPMI -1640 (Hyclone) التي تحتوي على 1 0 في المائة من مصل بقري جنيني (Hyclone) ، و 100 U / mL بنسلين ، و 0.1 مجم / مل ستربتومايسين عند 37 درجة مع 5 بالمائة CO2. تم تغيير المتوسط ​​كل يوم.

4.3 حيوية الخلية

تم زرع خلايا PC12 في 96- أطباق جيدة عند 2 × 104 خلية / بئر. بعد التعلق ، تم تحضين الخلايا مسبقًا مع أو بدون مثبط لمدة 20 دقيقة ، واحتضانها مع أو بدون PhGs لمدة 24 ساعة ، ثم تحضينها بـ H O لمدة ساعتين أخرى بعد إزالة PhGs. بعد الحضانة ، عولجت الخلايا بـ 5 ملغ / مل من MTT لمدة 4 ساعات عند 37 درجة ، وتمت إزالة الوسائط بعناية. تم إذابة بلورات فورمازان التي تكونت من الخلايا الباقية في 150 ر لتر من DMSO لتوليد اللون الأزرق [35] ، وتم قياس الامتصاصية عند 570 نانومتر على قارئ لوحة. استخدمت الضوابط نفس تركيز الوسيط مع DMSO وحده. تم تطبيع صلاحية الخلية كنسبة مئوية من السيطرة.

تم اختيار تركيزات PhGs (0. 1،1،5 و 10 Rg / mL) اعتمادًا على تحليل السمية الخلوية لـ PhGs والتأثير الواقي للخلايا من إشيناكوسيد [32]. وفقًا للتقرير ، لم يكن هناك تأثير السمية الخلوية أقل من 10 Rg / mL ، وتم الإبلاغ عن إشنكوسايد لإظهار تأثير cytoprotective في نموذج الخلية المصابة HzOz.

4.4 فحص موت الخلايا المبرمج

تم اكتشاف موت الخلايا المبرمج باستخدام مجموعة التلوين المزدوجة Annexin V-FITC / PI (Solarbio). تم زرع خلايا PC12 في 6- أطباق جيدة بمعدل 2 × 1 0 5 خلايا / بئر. بعد التعلق ، عولجت الخلايا بـ PhGs (0.1 و 10 Rg / mL) لمدة 24 ساعة واحتضانها بـ H O لمدة ساعتين أخرى بعد إزالة PhGs. بعد الحضانة ، تم غسل الخلايا في PBS بارد ، وطردها مرتين عند 1500 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ، وإعادة تعليقها في 500 ر لتر من محلول الربط. الملحق الخامس المسمى FITC (5 ر لتر) ويوديد البروبيديوم.

4.5 قياس ROS داخل الخلايا وإنتاج MDA و SOD

تم تحديد مستوى ROS داخل الخلايا باستخدام مسبار مضيء حساس لـ ROS ، أي 2 ، 7- ثنائي أسيتات الفلورسنت ثنائي كلورو دايهيدرو (DCFH-DA). تم زرع خلايا PC12 في 6- أطباق جيدة بمعدل 2 × 1 0 5 خلايا / بئر. بعد التعلق ، عولجت الخلايا بـ PhGs (0.1 و 10 ميكروغرام / مل) لمدة 24 ساعة وحضنت مع H O لمدة ساعتين أخرى بعد إزالة PhGs. بعد الحضانة ، تم غسل الخلايا باستخدام PBS ثلاث مرات ثم حضنت بعد ذلك بـ 10 ميكرومتر DCFH-DA. بعد الحضانة عند 37 درجة لمدة 20 دقيقة ، تم غسل الخلايا باستخدام PBS وجمعها بالطرد المركزي اللطيف. تم قياس أنواع الأكسجين التفاعلية داخل الخلايا باستخدام مقياس التدفق الخلوي Gallios ™ (بيكمان كولتر ، بريا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية).

تم قياس MDA و SOD بواسطة مجموعات الفحص (Beyotime Biotechnology ، نانجينغ ، جيانغسو ، الصين). تمتثل جميع الإجراءات تمامًا لتعليمات الشركات المصنعة. تم تطبيع محتويات MDA و SOD مع محتوى البروتين الكلي المقابل.

4.6 Nrf2 التألق المناعي للإزاحة النووية

تم زرع خلايا PC12 في 6- شرائح زجاجية جيدة بكثافة 2 × 1 0 5 لكل بئر. بعد التعلق ، تمت معالجة الخلايا بـ PhGs (0. 1 و 10 ميكروغرام / مل) لمدة 24 ساعة واحتضانها بـ H2O2 لمدة ساعتين أخريين بعد إزالة الـ PhGs. بعد الحضانة ، تم غسل الخلايا في PBS بارد وتثبيتها في 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 15 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة ، تليها نفاذية غشاء باستخدام 0.5٪ Triton X -100 في PBS لمدة 5 دقائق. تم تحضين الخلايا بمضاد Nrf2 Rabbit IgG (Abcam) بنسبة 5 بالمائة FBS طوال الليل عند 4 درجات. بعد ذلك ، تم تطبيق الأجسام المضادة الثانوية المضادة للأرانب المقترنة بـ FITC على الخلايا لمدة 20 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. كانت النوى ملطخة بـ 4z ، 6- ديميدينو -2- فينيليندول (DAPI) في خطوة التحضير النهائية. تم شطف الشرائح لفترة وجيزة باستخدام PBS ، وتجفيفها بالهواء ، وتركيبها في مادة مضادة للتألق في وسط يتلاشى. تم تصور الشرائح تحت مجهر ليزر متحد البؤر (LMS780 ، زايس ، ألمانيا).

4.7 استخراج البروتين

تم زرع خلايا PC12 في 1 0 أطباق 0 مم عند 1 × 107 خلية / طبق. بعد التعلق ، عولجت الخلايا بـ PhGs (0.1 و 10 ميكروغرام / مل) لمدة 24 ساعة ثم حضنت مع H O لمدة ساعتين أخرى مع إزالة PhGs. بعد الحضانة ، تم غسل الخلايا مرتين باستخدام PBS بارد وكشطها من الأطباق باستخدام 1000 ميكرولتر من PBS. تم طرد متجانسات الخلية عند 1500 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق. بعد العلاج ، تم استخراج البروتينات الخلوية باستخدام محلول تحلل خلايا Beyotime RIPA مع 1 ملي مولار PMSF وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. بالإضافة إلى ذلك ، تم عزل البروتينات السيتوبلازمية والنووية كما هو موصوف في مجموعة استخراج بيوتايم النووية والسيتوبلازمية. تم الكشف عن تركيز البروتين في العينات بواسطة مجموعة فحص بروتين Beyotime BCA ، وتم تخزين جميع العينات عند درجة -80 لتحليل اللطخة الغربية.

4.8 تحليل لطخة غربية

تم إجراء تحليل لطخة غربية باستخدام الطرق القياسية. باختصار ، تم فصل عينات البروتين (20 أو 30 ميكروغرام) بواسطة SDS-PAGE ونقلها إلى أغشية PVDF. تم حظر الأغشية في حليب 5 في المائة من TBST وحضنت طوال الليل عند 4 درجات في الجسم المضاد الأولي. تتضمن الأجسام المضادة المستخدمة Nrf2 (Abcam) و Keap1 (Abcam) و HO -1 (Abcam) و NQO -1 (Abcam) و GCLC (Abcam) و GCLM (Abcam) و Histone H3 (Abcam) و ف أكتين (أبكام). تم استخدام IgG المترافق مع الفأر (Abcam) أو IgG المضاد للأرانب (Abcam) كجسم مضاد ثانوي. تم تصور نطاقات البروتين باستخدام سلسلة ChemiScope (Clinx Science Instruments ، شنغهاي ، الصين). تم قياس القيمة الرمادية لنطاقات البروتين باستخدام ImageJ (المعاهد الوطنية للصحة ، Bethesda ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية).

4.9 الوقت الحقيقي الكمي PCR

تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام RNAiso Plus (Takara ، Shiga ، اليابان) ، باتباع إرشادات الشركة المصنعة. تم نسخ إجمالي عينات الحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة الكاشف PrimeScript ™ RT باستخدام ممحاة gDNA (تاكارا ، شيجا ، اليابان) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تم إجراء PCR في الوقت الفعلي الكمي باستخدام SYBR® Premix Ex Taq ™ II (Takara ، Shiga ، اليابان) في Applied Biosystems ViiA ™ 7 Real-Time PCR System. تم تطبيع التعبير النسبي للجينات المستهدفة إلى p-Actin وتحليله بواسطة طريقة AACt 2-. كانت تسلسلات التمهيدي لـ Nrf2 كما يلي: الأمام ، ACAGTGCTCCTATGCGTGAA والعكس ، TCTGGGCGGCGACTTTAT. كانت تسلسلات التمهيدي لـ p-Actin كما يلي: إلى الأمام ، GCTGTCCCTGTATGCCTCT ؛ والعكس ، TTGATGTCACGCACGATTT.

4.10. تعداء سيرنا

تمت زراعة خلايا PC12 في 6- شرائح زجاجية جيدة بكثافة 2 × 105 لكل بئر (لتحليل اللطخة الغربية) أو في 96- شرائح زجاجية بئر بكثافة 2 × 104 لكل بئر (للخلية تحليل الجدوى). تم نقل عنصر التحكم siRNA و Nrf2 siRNA إلى الخلايا باستخدام Lipofectamine RNAiMAX (Thermo Fisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. بعد 24 ساعة من الحضانة ، عولجت الخلايا مع أو بدون PhGs و H O في الأوقات المحددة ثم استخدمت في تحليل اللطخة الغربية ، qRT-PCR ، أو تحليل قابلية الخلية للخلية كما هو موضح أعلاه.

4.11. تحليل الالتحام الجزيئي

Molecular docking analysis was performed to investigate the possible binding mode of PhGs to Keap1. The 3D structure of ligands was obtained from NCBI. The crystallized structure of Keap1 (PDB Code: 4L7B) was prepared using correcting structure issues (such as break bond and miss loop) using SYBYL-X 2.0. In this software simulation, crash represents the inadequate penetration between the protein and the ligand. Polar represents the hydrogen bonding and electrostatic interactions between the protein and the ligand. G-score [36] represents the hydrogen bonding, complex (ligand-protein), and internal (ligand-ligand) energies between the protein and the ligand. PMF-score [37] represents the Helmholtz free energy between the protein and the ligand. D-score [38] represents the charge and van der Waals interactions between the protein and the ligand. Chem-score [39] represents the hydrogen bonding, metal-ligand interaction, lipophilic contact, and rotational entropy, along with an intercept term between the protein and the ligand. C score represents the consensus score between the protein and the ligand, comprehensively reflecting the G, PMF, D, and Chem-scores. Tota-score reflects the binding capacity of the ligand to the protein. The best modes were generated and evaluated using the Total-score (>6) and C-score (>4).

4.12. تحليل احصائي

تم تحليل البيانات باستخدام ANOVA أحادي الاتجاه مع تحليلات LSD باستخدام SPSS. تم تأكيد جميع النتائج من ثلاث تجارب مستقلة. تم التعبير عن البيانات كوسيلة 土 SD. تم أخذ فروق ذات دلالة إحصائية في الاعتبار في p <0.>

شكر وتقدير: تم دعم هذه الدراسة من قبل البرنامج الوطني الرئيسي للبحث والتطوير في الصين (رقم 2017YFD0400200) ، ومؤسسة العلوم الطبيعية بمقاطعة تشجيانغ في الصين (رقم R15C200002) ، والمشروع الخاص لتقييم مخاطر سلامة جودة المنتجات الزراعية (رقم No. GJFP2018015) ، وزارة الزراعة والشؤون الريفية في الصين.

الكاتب الاشتراكات:صمم بايي لو ومايكوان لي الدراسة. قام Maiquan Li بالعمل المخبري وتحليل البيانات وكتب الورقة. قام كل من ماي تشيوان لي ، وتاو شو ، وفي زو ، ومنجمينج وانج ، وهوا شين سونج ، وشينغ شياو ، وبايى لو بمراجعة المخطوطة.

1 المختبر الهندسي الوطني لتكنولوجيا ومعدات الأغذية الذكية ،

المختبر الرئيسي لمعاملة المنتجات الزراعية بعد الحصاد التابع لوزارة الزراعة والشؤون الريفية ، المختبر الرئيسي للتقييم الغذائي للمنتجات الزراعية في وزارة الزراعة والشؤون الريفية ، مختبر Zhejiang الرئيسي لمعالجة الأغذية الزراعية ، معهد فولي لعلوم الأغذية ، كلية النظم الحيوية الهندسة وعلوم الغذاء ، جامعة تشجيانغ ، هانغتشو 310058 ، الصين ؛

2 كلية الطب السريري الأول ، جامعة قوانغتشو للطب الصيني ،

مراجع

1. الشمس، AY؛ تشين ، واي إم الإجهاد التأكسدي واضطرابات التنكس العصبي. J. بيوميد. علوم. 1998 ، 5 ، 401-414.

2. ماهيشواري ، أ. Misro، MM؛ أجروال ، أ. شارما ، RK ؛ Nandan ، D. المسارات المشتركة في موت الخلايا المبرمج للخلايا الجرثومية في الخصية الناجم عن H2O2 في المختبر. 2009276 FEBS ، 870-881.

3. Halliwell ، B. أنواع الأكسجين التفاعلية والجهاز العصبي المركزي. J. نيوروتشيم. 1992 ، 59 ، 1609-1623.

4. ريتشاردسون ، شبيبة ؛ سوباراو ، KV ؛ Ang، LC حول الدور المحتمل لأكسدة الجذور الحرة التي يسببها الحديد في التنكس العصبي في مرض الزهايمر. آن. نيويورك أكاد. علوم. 1992 ، 648 ، 326-327.

5. Zhang، DD دراسات ميكانيكية لمسار إشارات Nrf 2- Keap1. ميتاب المخدرات. القس 2006 ، 38 ، 769-789.

6. إيتوه ، ك. تونغ ، كي ؛ ياماموتو ، إم. آلية جزيئية تنشط مسار Nrf 2- Keap1 في تنظيم الاستجابة التكيفية للمركبات الكهربائية. راديك مجاني. بيول. ميد. 2004 ، 36 ، 1208-1213.

7. كونغ ، آن ؛ أوور ، إي. يو ، ر. هيبار ، ف. تشين ، سي ؛ هو ، ر. Mandlekar، S. تحريض الإنزيمات الغريبة عن طريق خريطة مسار الكيناز والعنصر المضاد للأكسدة أو الاستجابة الكهربائية (ARE / EpRE). ميتاب المخدرات. القس 2001 ، 33 ، 255-271.

8. Buendia، I .؛ ميشالسكا ، ص. نافارو ، إي. غاميرو ، أنا. إيجيا ، ياء ؛ ليون ، آر. نيرف 2- مسار ARE: هدف ناشئ ضد الإجهاد التأكسدي والتهاب الأعصاب في الأمراض التنكسية العصبية. فارماكول. هناك. 2016 ، 157 ، 84-104. [CrossRef] [PubMed]

9. Skibinski، G.؛ هوانج ، ف. أندو ، مارك ألماني ؛ داب ، أ. لي ، أ. Ravisankar ، أ. مودان ، إس. فينوكين ، مم ؛ رث ، بكالوريوس ؛ يخفف Finkbeiner، S. Nrf2 LRRK 2- والتنكس العصبي الناجم عن السينوكلين عن طريق تعديل الانصمام البروتيني. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 2016 ، 114 ، 1165-1170.

10. خيمينيز ، سي. Riguera ، R. جليكوسيدات فينيلثانويد في النباتات: التركيب والنشاط البيولوجي. نات. همز. 1994 ، 11 ، 591-606.

11. جورجييف ، م. أليبييفا ، ك. أورهان ، أنا. أبراشيف ، ر. دينيف ، ص. Angelova ، M. الأنشطة المثبطة للأكسدة والكولينستراز من Verbascum xanthophoeniceum Griseb. وجليكوسيدات الفينيثانويد. الغذاء تشيم. 2011 ، 128 ، 100-105.

12. Li، N .؛ وانغ ، ياء ؛ ما ، ياء ؛ جو ، زي ؛ جيانغ ، سي. يو ، إل. الآثار الوقائية العصبية للعلاج بالسيستانش هيربا على المرضى الذين يعانون من مرض الزهايمر المعتدل. مكمل قائم على الأدلة. بديل. ميد. 2015 ، 2015103985.

13. Liu، YL؛ هو ، WJ ؛ مو ، إل. شي ، مف ؛ تشو ، ص. بان ، إس. لي ، XR ؛ شو ، QM ؛ Yang ، SL الأنشطة المضادة للميكروبات والالتهابات وعلم السموم من جليكوسيدات الفينيثانويد من Monochasma savatieri Franch. السابق مكسيم. ياء إثنوفارماكول. 2013149 ، 431-437.

14. دونغ ، س. ياو ، ياء ؛ فانغ ، ج. Ding، K. التوصيف الهيكلي والنشاط المناعي لاثنين من السكريات القابلة للاستخراج بالماء البارد من Cistanche deserticola YC Ma. الكربوهيدرات. الدقة. 2007 ، 342 ، 1343-1349.

15. شيونغ ، إل. ماو ، س. لو ، ب. ؛ يانغ ، ياء ؛ تشو ، ف. هو ، واي. جيانغ ، واي. شين ، سي ؛ Zhao ، Y. Osmanthusfragrans Flower Extract و Acteoside للحماية من الشيخوخة التي يسببها الغالاكتوز في نموذج ماوس ICR. جيه ميد. طعام 2016 ، 19 ، 54-61.

16. جيانغ ، واي. ماو ، س. هوانغ ، دبليو. لو ، ب. ؛ كاي ، زي. تشو ، ف. لي ، م. لو ، تي. Zhao ، Y. ملامح جليكوسيد الفينيثانويد وأنشطة مضادات الأكسدة من Osmanthusfragrans Lour. الزهور حسب UPLC / PDA / MS ونموذج الهضم المحاكي. J. أجريك. الغذاء تشيم. 2016 ، 64 ، 2459-2466.

17. Li، X .؛ أيها العاشر ؛ لي ، العاشر ؛ الشمس ، العاشر ؛ ليانغ ، س. تاو ، إل. كانغ ، إكس. Chen، J. Salidroside يحمي من MPP plus-induced apoptosis في خلايا PC12 عن طريق تثبيط مسار NO. Res الدماغ. 2011،1382 ، 9-18.

18. Zhang، L.؛ دينغ ، دبليو. الشمس ، ح. تشو ، س. هوانغ ، ياء ؛ لي ، العاشر ؛ شيه ، واي. Chen، J. Salidroside يحمي خلايا PC12 من موت الخلايا المبرمج MPP plus عن طريق تنشيط مسار PI3K / Akt. الغذاء تشيم. توكسيكول. 2012 ، 50 ، 2591-2597.

19. شنغ ، جي كيو ؛ تشانغ ، جيه آر ؛ بو ، إكس بي ؛ ما ، ياء ؛ Li، CL التأثير الوقائي لفيرباسكوسايد على السمية العصبية التي يسببها أيون الميثيل 1- -4- فينيل بيريدينيوم في خلايا PC12. يورو. فارماكول. 2002 ، 451 ، 119-124.

20. Wang، H .؛ شو ، واي. يان ، ياء ؛ تشاو ، العاشر ؛ الشمس ، العاشر ؛ تشانغ ، واي. قوه ، ياء ؛ Zhu، C. Acteoside يحمي خلايا الورم الأرومي العصبي SH-SY5Y البشرية ضد إصابة الخلايا التي يسببها بيتا أميلويد. Res الدماغ. 2009 ، 1283 ، 139-147.