الفحص الكيميائي للنباتات والنشاط الاستروجين لمجموع الجليكوسيدات من Cistanche Deserticola

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

الملخص

على مدى عقود ، كانت هناك جهود متواصلة لتحسين نوعية حياة الإنسان. تعتبر متلازمة ما بعد انقطاع الطمث مصدر قلق خطير لرفاهية صحة المرأة. العلاج الهرموني حاليًا هو الدعامة الأساسية لعلاج هذه الحالة. ومع ذلك ، يمكن أن يؤدي هذا العلاج إلى تعاطي هرمون الاستروجين ، مما يؤدي إلى ردود فعل سلبية وآثار جانبية. نتيجة لذلك ، لم ينجح العلاج الهرموني في تخفيف متلازمة ما بعد انقطاع الطمث.Cistanche Deserticolaهو عشب منشط كلاسيكي في الطب الصيني التقليدي. يعرض نشاط استروجين كبير. المركبات النشطة الرئيسية لهذه العشبة هي جليكوسيدات. في تجربة سابقة ، تم تحديد ثلاثة عوامل مهمة تساهم في إجمالي إنتاج الجليكوسيد ، وحاصل الأكتيوسايد ، والنشاط الاستروجين ، وهي تركيز eluent ، ودرجة الحموضة ، والحجم eluent. في هذه التجربة ، تم تحديد عملية التنقية المثلى باستخدام منهجية السطح المركب للتصميم والاستجابة للحصول على الجليكوسيدات من هذه العشبة. تم العثور على تركيز eluent (الإيثانول) بنسبة 85 في المائة وحجم 25 BV عند درجة حموضة 11 لتكون الأمثل. تم تحديد واحد وعشرين مركبًا نشطًا من خلال تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء / اختبار قياس الطيف الكتلي الرباعي لوقت الرحلة. توفر هذه الدراسة رؤى قيمة لمزيد من البحث المتعمق لتقييم الأنشطة الاستروجينية لمجموع جليكوسيداتCistanche Deserticola.

الكلمات الرئيسية: تصميم مركب مركزي ؛ مجموع الجليكوسيدات Cistanche deserticola ؛ LC / Q-TOF-MS ؛ تكنولوجيا تنقية اختبار نمو الرحم.

مقدمة

Cistanche Deserticolaهو عشب منشط كلاسيكي صالح للأكل. تم ذكره لأول مرة في الأعشاب الكلاسيكية لشين نونغ وتم تجنيده في الدرجة الأولى. إنها عشبة دافئة وحلوة. له العديد من الخصائص الطبية ، مثل تغذية الكبد والكلى ، وتقوية العضلات والعظام ، وتحسين تنظيم المناعة إلى جانب الأنشطة المضادة للشيخوخة والأورام [1-4]. تم عزل بعض المركبات الطبيعية والتعرف عليها من مستخلصات هذه العشبة ، وأهمها جليكوسيدات فينيلثانويد ، لجنانويد ، إيريديويد ، سكريات ، قلويدات [5-8].

تحتوي الأدوية التي يتم الحصول عليها من النباتات الطبية على العديد من المركبات النشطة المسؤولة في المقام الأول عن إجراءاتها العلاجية. يمكن أن تختلف فعالية نفس الدواء الذي تم الحصول عليه من مصادر نباتية مختلفة بسبب الاختلافات في نوع وكمية المركبات النشطة الموجودة فيه. وبالتالي ، من المهم تحديد وقياس جميع المركبات النشطة الموجودة في الأدوية التي تم الحصول عليها من النباتات الطبية. الأمر نفسه ينطبق على C. منهجية سطح الاستجابة هي طريقة تجريبية للتحقق من التفاعل بين العوامل المختلفة في وقت واحد [9-10]. يمكن استخدامه لتحسين معايير الاستخراج للمستحضرات الصيدلانية النباتية والتقدير الكمي للمركبات النشطة في الأدوية. يعد التصميم المركب المركزي (CCD) أحد التصاميم التجريبية المفيدة في منهجية سطح الاستجابة. بالمقارنة مع التصميمات المتعامدة والموحدة ، فإن CCD لديها دقة أعلى وإمكانية توقع أفضل [11].

يمكن لمتلازمة ما بعد انقطاع الطمث أن تقلل إلى حد كبير من نوعية الحياة لدى النساء. عادة ، يستخدم هرمون الاستروجين لعلاج هذه الحالة. ومع ذلك ، فإن الاستخدام طويل الأمد للإستروجين قد يؤدي إلى سوء الاستخدام ، مما يتسبب في العديد من ردود الفعل السلبية والآثار الجانبية. لذلك ، من الضروري اختيار علاج بديل ، ويفضل دواء عشبي يحتوي على هرمون الاستروجين كعنصر نشط لعلاج متلازمة ما بعد انقطاع الطمث [12-13].

في تجربة أولية ، تم تحديد تراكيب المركبات الطبيعية المختلفة التي تم الحصول عليها من C. الصحراء باستخدام مطياف الكتلة (MS) [14]. تم التأكيد على أن الجليكوسيدات هي المركبات النشطة الرئيسية التي لها نشاط استروجين كبير [14-15]. لتطوير مكون نشط استروجين آمن وفعال في دواء جديد ، يلزم إجراء تحقيق متعمق في TGCD بعد تنقيته. في هذه الدراسة ، تم استخدام CCD لأول مرة لتحسين تنقية إجمالي جليكوسيدات C. بعد ذلك ، تم استخدام اختبار نمو الرحم لتقييم الأنشطة الاستروجينية لنفس الجليكوسيد. تم استخدام كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء / مطياف كتلة وقت الرحلة الرباعي (HPLC / Q-TOF-MS) للتحليل النوعي لمركبات TGCD بعد التنقية. تم تطبيق هذه العملية لإثبات صراحة وجود العديد من المركبات النشطة ذات النشاط الاستروجين في TGCD. يمكن أن يوفر هذا في وقت واحد الأساس لاستخدامه السريري في متلازمة ما بعد انقطاع الطمث لتحل محل هرمون الاستروجين.

طريقة تجريبية

الادوات

نظام Agilent 1290 HPLC (Agilent Technologies ، Palo Alto ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وسلسلة Agilent 6530 ذات وقت الطيران الرباعي LC / MS (Q-TOF) (Agilent Technologies ، Palo Alto ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، و Chemical HPLC { {5}} تم استخدام محطات العمل D كأدوات كروماتوغرافية لمعالجة البيانات. تم استخدام المياه عالية النقاء Milli-Q للدراسة بأكملها. AR1140 ميزان تحليلي إلكتروني (Ohaus International Ltd.) ؛ قارئ صفيحة ميكروسكوبية 680 (شركة Bio-Rad) ؛ واستخدمت أجهزة الطرد المركزي عالية السرعة 64R (Beckman Coulter Allegra) لتحضير العينات.

الأدوية والمواد الكيميائية

تم شراء C. تم شراء diethylstilbestrol القياسي (نقي بنسبة 99٪ ، دفعة رقم 60518) من Dr. Ehrenstorfer (ألمانيا). تم الحصول على معايير أخرى أكتيوسيد (111530-200505) وإشنكوسايد (111670-200503) من المعهد الوطني للتحكم في المنتجات الصيدلانية والبيولوجية ، بكين ، الصين. كان نقاء كل معيار> 98 بالمائة. تم شراء Acetonitrile (ACN) والميثانول وحمض الفورميك (درجة MS) من Thermo Scientific Pierce (Rockford ، IL ، USA). تم الحصول على المياه عالية النقاء من Hangzhou Wahaha Group Co.، Ltd. (Hangzhou ، الصين). كانت جميع الكواشف المتاحة تجارياً من الدرجة التحليلية.

تحضير الجليكوسيدات الكلية لمحلول تنقية C.

بعد الغمر في 75 بالمائة من الإيثانول لمدة 12 ساعة ، تم استخلاص المسحوق الخام من C. تم ترشيحه بعد ذلك من خلال مرشح مزدوج السطح واستخلاصه لاحقًا باستخدام 800 مل من 75 بالمائة من الإيثانول مرتين لمدة 150 دقيقة إضافية. بعد ذلك ، تم دمج المرشحات وتركيزها في فراغ عند 45 درجة. تم الحصول على المستخلص عن طريق إزالة المذيب. تمت إضافة كمية معينة من الماء المقطر إلى المستخلص للحصول على تركيز 0.5 جم / مل ، والذي تم استخدامه لفحص عملية التنقية.

من أجل الامتزاز باستخدام راتنج AB {0}} الضخم المسام ، تم تعديل الرقم الهيدروجيني لمحلول عينة الاختبار إلى 11. أولاً ، تم استخدام 2 BV ماء مقطر لغسل الشوائب. بعد ذلك ، تمت التصفية التصفية وجمع الإيثانول بتركيز 25 BV 85٪. أخيرًا ، تم دمج eluent المنقى الذي تم جمعه. تمت إضافة كمية معينة من الماء المقطر إلى المستخلص للحصول على تركيز 1.5 جم / مل ، والذي تم استخدامه للإعطاء داخل المعدة. للتحكم الإيجابي ، تم تحضير محلول diethylstilbestrol (20 ميكروغرام / مل) باستخدام مسحوق diethylstilbestrol.

وفقًا لنسبة التنقية ({{0}. 6) ، تم نقل كمية معينة من المستخلص (ما يعادل 1 جرام من C. يذوب في 50 بالمائة (حجم / حجم) محلول ميثانول في حمام بالموجات فوق الصوتية لمدة 5 دقائق ، ويخفف إلى 10 مل. تم الحصول على المحلول الطبي بعد ترشيح المادة الطافية من خلال غشاء مرشح 0.45 ميكرومتر. تم خلط Acteoside و echinacoside (1 مجم لكل منهما) وتم إذابتهما تمامًا في 10 مل من محلول ميثانول بنسبة 50 في المائة (حجم / حجم). أخيرًا ، تم ترشيح المحلول القياسي من خلال مرشح 0.45 ميكرومتر ميليبور قبل التحليل.

شروط LC-MS

تم إجراء الفصل الكروماتوجرافي في نظام HPLC (Agilent 129 {{1 0}}) ، مزودًا بنظام توصيل مذيب رباعي ، ومزيل للغازات الفراغية ، وكاشف صفيف ثنائي ضوئي. تم إجراء تحليل MS / MS في جهاز Agilent -1290 HPLC / 653 0 نظام Q-TOF-MS ، مزود بمصدر تأين بالرش الكهربائي في كل من أوضاع الأيونات الموجبة والسالبة. تم استخدام عمود درع تناسق المياه RP C18 (4.6 × 250 مم ، 5 ميكرون) (شركة ووترز ، ميلفورد ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) للفصل. تشتمل المرحلة المتنقلة على 0.2 بالمائة من محلول حمض الفورميك المائي (حجم / حجم) (أ) و ACN (ب) ، وتم ضخها بمعدل تدفق يبلغ 0.5 مل / دقيقة. كان حجم الحقن لكل عينة 10 ميكرولتر. كان برنامج الشطف المتدرج كالتالي: 5-23 بالمائة ب لمدة 0-35 دقيقة ، 23-25 ​​بالمائة ب لمدة 35-65 دقيقة ، و 25-5 بالمائة ب لمدة 65-70 دقيقة. تم الحفاظ على درجة حرارة العمود عند 30 درجة. تم رصد اللوني وتسجيله عند 330 نانومتر. تم ضبط ضغط غاز الانحلال عند 30 رطل لكل بوصة مربعة ، وكان الجهد الشعري 3.5 كيلو فولت. كان معدل تدفق الغاز الجاف 8 لتر / دقيقة عند درجة حرارة 30 درجة. تم ضبط درجة حرارة غاز الغمد عند 400 درجة بمعدل تدفق 12 لتر / دقيقة. تم ضبط طاقة الاصطدام عند 10-20 فولتًا للمسح منخفض الطاقة و30-50 فولتًا لعمليات المسح عالية الطاقة. تم تسجيل بيانات أطياف الكتلة ضمن نطاق مسح يتراوح بين 50-1000 دا في أوضاع مسح الأيونات الموجبة والسالبة. في هذه الدراسة ، تم إجراء مقارنة سريعة وفعالة بين TGCD والمعايير تحت نفس حالة LC-MS.

اختبار نمو الرحم

تم تنفيذ ذلك بما يتفق بدقة مع توصيات دليل رعاية واستخدام حيوانات المختبر من المعاهد الوطنية للصحة. تمت مراجعة جميع الإجراءات التجريبية والموافقة عليها من قبل اللجنة الأخلاقية للحيوان بجامعة هاربين للتجارة ، الصين.

تم شراء أنثى فئران كونمينغ غير الناضجة (حوالي 21 يومًا من الولادة ، مفطومة) تزن 12 ± 2 جم ، من مركز حيوان مختبر قاعدة الصناعة البيولوجية الوطني في تشانغتشون (تشانغتشون ، الصين). تم إيواء الفئران في غرفة منظمة بدرجة الحرارة (22 ± 2 درجة) مع الطعام والماء بالشهرة الإعلانية. بدأت التجارب على الحيوانات بعد خمسة أيام من التأقلم. صمت الفئران طوال الليل بالماء وبالشبع قبل تناول محلول الاختبار داخل المعدة.

تم تقسيم الفئران بشكل عشوائي إلى 22 مجموعة ، كل مجموعة تضم 10 حيوانات. تم إعطاؤهم عقاقير تجريبية من نفس الحجم مرتين في اليوم (صباحًا ومساءً) لمدة أربعة أيام على النحو التالي:

المجموعة 1: الجليكوسيدات الكلية داخل المعدة لمحلول تنقية C.

المجموعة الثانية: الماء المقطر داخل المعدة (مجموعة التحكم السلبية) ، و

المجموعة الثالثة: ثنائي إثيلستيلبيسترول داخل المعدة (20 ميكروغرام / مل) (مجموعة تحكم إيجابية).

في اليوم الخامس ، تم التضحية بجميع الفئران. تمت إزالة الرحم ووزنه على الفور وتم حساب معاملات الرحم.

تحليل احصائي

تم استخدام اختبار t ثنائي الذيل لعينة مزدوجة لتحديد فروق ذات دلالة إحصائية في المعلمات المختلفة في المجموعات التجريبية المختلفة. تم إجراء التحليل باستخدام البرنامج الإحصائي SPSS (SPSS for Windows v21. 0 ، SPSS Inc. ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم اعتبار الفروق ذات دلالة إحصائية عند مستوى ثقة 95 بالمائة (p <0.>

النتائج والمناقشة

الخطية والارتباط بين الأكتيوسايد وعوائد الجليكوسيدات الكلية

كانت معادلة الانحدار الخطي لعائد الأكتوزيد هي y {{0} x - 14.75 (حيث x هو تركيز الأكتيوسايد ، و y هي منطقة الذروة المقابلة) مع معامل الارتباط r=1 في نطاق تركيز 0. 12 - {{1 0}. 72 مجم / مل. يشير هذا إلى منحنى معايرة خطي. كانت معادلة الانحدار الخطي لإجمالي ناتج الجليكوسيدات هي y=26. 0 74x زائد 0.0866 (حيث x هو تركيز إجمالي الجليكوسيدات ، و y هي منطقة الذروة المقابلة) مع معامل الارتباط r { {12}} .9982 في نطاق تركيز 0.013-0.065 مجم / مل. يشير هذا أيضًا إلى منحنى معايرة خطي.

التحقيق المنهجي

تم التحقق من دقة العينات واستنساخها واستقرارها واستعادتها في التحقيق المنهجي. في تجربة الدقة ، كان الانحراف المعياري النسبي (RSD) لأكتيوسيد وإجمالي جليكوسيدات 1.43 في المائة و 0. 0 5 في المائة على التوالي. في تجربة التكاثر ، كان RSD لأكتيوسيد وإجمالي جليكوسيدات 0. 1 0 بالمائة و 1.44 بالمائة على التوالي. في تجربة الثبات على مدار 24 ساعة ، كان RSD لأكتيوسيد وإجمالي جليكوسيدات 0.14 في المائة و 0.90 في المائة على التوالي. في تجربة الاسترداد ، كان استرداد الأكتيوسايد 100.50 في المائة مع RSD 2.08 في المائة ، في حين أن استرداد إجمالي الجليكوسيدات كان 99.12 في المائة مع تحديد RSD 1.65 في المائة. كانت جميع قيم RSD أقل من 3 بالمائة. أظهرت هذه النتائج دقة جيدة وقابلية استنساخ. بالإضافة إلى ذلك ، كانت العينة مستقرة لمدة 24 ساعة. نتائج الاسترداد هي أيضا ضمن النطاق المسموح به (95-105 في المئة). لذلك ، يمكن استخدام هذه الطريقة لتحديد عائد الأكتيوسايد وإجمالي إنتاج الجليكوسيدات بعد التنقية.

تحقيق عامل واحد من TGCD

يمكن أن تتأثر تنقية TGCD باستخدام الراتنج الكبير بعدة عوامل ، مثل نوع الراتنج ، وعوامل الامتزاز الثابتة (وقت الامتزاز ، وتركيز التسرب ، ودرجة الحموضة لمحلول العينة) ، وظروف الشطف (سرعة التدفق ، والحجم ، والتركيز). باستخدام قدرة الامتزاز ومعدلات الامتصاص وشطف TGCD كمؤشرات ، تم تحديد الحالة التجريبية بناءً على نتائج التجارب أحادية العامل. باستخدام راتنجات الامتزاز الكبيرة المسامية من نوع AB -8 ، تم تحديد الظروف المثلى التالية: 0. محلول عينة 5 مجم / مل ، درجة الحموضة 1 0 ، زمن الامتزاز الثابت 8 ساعات ، 2 BV ماء مقطر لشوائب الغسيل ، 20 BV 80٪ إيثانول على شكل شطف ، وسرعة تدفق 0.5 BV / دقيقة. النتائج المحددة موضحة في الأشكال 1-7.

CCD لتحسين تقنية تنقية TGCD

بناءً على نتائج التحقيق أحادي العامل ، تم اختيار ثلاثة عوامل تؤثر بشكل كبير على طريقة التنقية كمؤشرات ، وهي الرقم الهيدروجيني لمحلول العينة (x1) ، وتركيز eluent (x2) ، والحجم eluent (x3). وفقًا لمبدأ CCD ، يحتوي كل عامل على خمسة مستويات. تم تحديد المستويات القصوى والدنيا لهذه العوامل المختلفة وفقًا لنتائج التجربة الأولية. يتم عرض مستويات العامل في الجدول 1 وتظهر النتائج التجريبية في الجدول 2.

تم تحديد إجمالي إنتاجية الجليكوسيدات والأكتيوسايد لتحسين طريقة التنقية لـ TGCD. أولاً ، تم تعيين إجمالي غلات الجليكوسيدات وأكتيوسيد على المعايير الرقمية للاستحسان (د) بين {{0}} - 1. بعد ذلك ، تم حساب الاستحسان الكلي (OD) [OD=(d1، d2، d3، ....، dn) 1 / n ، حيث n هو رقم الفهرس]. SPSS21. تم استخدام برنامج {{1 {16}}}} برنامج وخبير تصميم للانحدار الخطي المتعدد والملاءمة ذات الحدين للمتغيرات المستقلة و OD ، مع p <0. 0="" 5="" تم="" اعتباره="" معيار="" ذو="" دلالة="" إحصائية="" للمعادلة.="" تم="" اختيار="" المعادلة="" ذات="" القيمة="" r="" الأكبر="" (معامل="" الارتباط="" المتعدد)="" كأفضل="" نموذج="" ملائم.="" يتم="" تمثيل="" المعادلة="" الخطية="" متعددة="" المتغيرات="" بالصيغة="" y="-" 1.="" 0="" 2="" -="" 0.="" 131x1="" زائد="" 0.="" 0="" 34x2="" زائد="" 0.012x3="" (r="" {{="" 25}}.="" 55="" ،="" ص="0." 004).="" المعادلة="" ذات="" الحدين="" هي="" y="-" 21.92173="" -="" 0.74079x1="" زائد="" 0.62914x2="" زائد="" 0.041161x3="" زائد="" 0.014972x1x2="" زائد="" 2.06050="" *="" 10-4="" x1x3="" زائد="" 1.05698="" ×="" 10-3="" x2x="" 3="" -="" 0.="" 029589x="" {="" {56}}.="" 78730="" ×="" 10-3="" ×="" 22="" -="" 2.="" 89446="" ×="" 10-3="" ×="" 32="" (ص="0." 91="" ،="" ص="0." 012).="" يمكن="" أن="" نرى="" من="" المعادلات="" أعلاه="" أن="" معامل="" الارتباط="" لمعادلة="" الانحدار="" الخطي="" متعدد="" المتغيرات="" أقل.="" العلاقة="" بين="" المتغيرات="" المستقلة="" والتابعة="" منخفضة="" للغاية="" ،="" وكان="" من="" غير="" المفضل="" استخدامها="" في="" النموذج="">

لكن معامل الارتباط للمعادلة ذات الحدين كان مرتفعًا ونتج عنه توافق جيد. ومن ثم ، تم اختيار نموذج ذي الحدين. بناءً على تحليل شامل لشكل السطح وخريطة الكنتور جنبًا إلى جنب مع البيانات التجريبية (قيمة OD بالقرب من {0}}. 6) ، تم الحصول على النطاق الأمثل لطريقة التنقية. من الشكل 8 ، يمكن ملاحظة أن الحد الأقصى لقيمة OD تم إنشاؤه عندما كان الرقم الهيدروجيني لمحلول العينة (A) في حدود 9-10 ، وكان تركيز eluent (B) في حدود 79-85 بالمائة . يوضح الشكل 9 أنه تم الحصول على أقصى قيمة OD عندما كانت قيمة الأس الهيدروجيني لمحلول العينة (A) في حدود 9-10 ، وكان حجم eluent (C) في نطاق 20-25 BV. يوضح الشكل 10 أنه تم الحصول على أقصى قيمة OD عندما كان تركيز eluent (B) في حدود 80-85 بالمائة ، وكان حجم eluent (C) في نطاق 20-25 BV. من تحليل شامل لهذه البيانات ، تم تحديد الرقم الهيدروجيني لمحلول العينة ، وتركيز eluent ، وحجم eluent لتكون في نطاق 9-10 ، 80-85 في المئة ، و 20-25 BV على التوالي. استنادًا إلى المعادلة ذات الحدين متعددة المتغيرات لنتائج المشتقات المتغيرة والمخطط الأمثل ، تم العثور على أفضل طريقة لتنقية TGCD بتركيز eluent (الإيثانول) بنسبة 85 بالمائة وحجم 25 BV عند درجة حموضة 11. وكانت قيمة OD المقابلة 0.8332 ، وكان الناتج الإجمالي للجليكوسيدات 73.0339 بالمائة. يحدد الانطباع المرئي من الأشكال 8-10 أفضل طريقة لتكون الطريقة التي تم فيها أخذ التفاعلات بين العاملين في الاعتبار ، على الرغم من أن أفضل طريقة مستخلصة من الصيغة تتعرف على الطريقة التي تم فيها تضمين التفاعلات بين العوامل الثلاثة. اختلفت النتيجتان وتم اعتبار طريقة التنقية المثلى بتركيز eluent (الإيثانول) بنسبة 85 بالمائة وحجم 25 BV عند درجة حموضة 11.

قياس نمو الرحم

يظهر معامل الرحم لكل مجموعة في الجدول 3. بالمقارنة مع المجموعة الضابطة السلبية ، كانت نتائج المجموعات الأخرى مختلفة بشكل كبير. وجد أن TGCD تم الحصول عليها من 20 طريقة تنقية مختلفة تمارس جميع الإجراءات الاستروجينية.

تجربة تأكيدية

أظهرت النتائج الشاملة لـ CCD واختبار نمو الرحم أن طريقة التنقية المثلى كانت مع تركيز eluent (الإيثانول) بنسبة 85 بالمائة وحجم 25 BV عند درجة حموضة 11.

عملية التحقق ، كان متوسط ​​إنتاج إجمالي الجليكوسيدات 70.9150 في المائة. كان متوسط ​​الانحراف بين القيم المتوقعة والفعلية 2.1180٪. لذلك ، يمكن اقتراح أن القدرة على التنبؤ والمصداقية التجريبية لهذا النموذج جيدة.

تحديد TGCD بعد التنقية

بناءً على وقت الاحتفاظ وبيانات MS ، تم التكهن بـ 21 مكونًا طبيعيًا ، بما في ذلك campneoside 1 ، 2′-acetylacteoside ، cistanoside A ، cistanoside B ، syringalide A 3 '- - L-rhamnopyranoside ، tubuloside A ، tubuloside B ، salidroside ، cistanoside G ، وحمض teniposide ، و decaffeoylacteoside ، و 8- epiloganic acid ، و echinacoside ، و cistanoside F ، و cistantubuloside B1 ، و isoacteoside ، و acteoside ، و cis-acteoside ، و kankanoside E ، و osmanthuside B ، و cistanoside. يتم عرض معلومات MS والصيغة والمركبات المضاربة في الجدول 4.

يعتبر Q-TOF-MS مناسبًا بشكل خاص للتحديد الهيكلي للمكونات الجزيئية المعقدة للأدوية والغذاء لأنه يمكن أن يوفر التراكيب الأولية الممكنة من خلال الكتلة الجزيئية الدقيقة والخصائص الهيكلية لأيونات الشظايا. لإنشاء توصيف هيكلي منهجي ، تم أيضًا استخدام Q-TOF-MS وبيانات MS والبحث عن قاعدة البيانات والأدبيات المرجعية المنشورة لتحديد الهوية. تم استنتاج الصيغة الجزيئية لكل مكون مستهدف من الأيون الأصل ، وتم مطابقتها مع المركبات المعروفة. يمكن تحديد هذه الصيغة بشكل أكبر من أيونات الأجزاء ذات الصلة. على سبيل المثال ، أظهرت الذروة 5 أيونًا سائدًا منزوع البروتونات عند m / z 654 (C30H38O16) ، والذي كان مطابقًا للتركيب الأولي للكامنوسيد 1. تم تكوين فقدان الكافويل من أيون شظي عند m / z 493 ، وفقد تم تشكيل جزء rha من أيون شظية عند m / z 347.

استنتاج

باستخدام تقنية LC-Q-TOF-MS ، تم تطوير طريقة تحليل نوعي بسيطة وقوية لـ TGCD والتحقق من صحتها بشكل كامل. كانت بيانات التحقق الخاصة بفحص وتحديد المركبات الطبيعية من TGCD مرضية. تم تكهن واحد وعشرون مركبًا حيويًا من TGCD على النحو التالي: salidroside ، cistanoside G ، geniposidic acid ، decaffeoylacteoside ، campneoside 1 ، 8- epiloganic acid ، 2'-acetylacteoside ، cistanoside A ، cistanoside B ، syringalide A3 ′ {{9 }} L-rhamnopyranoside و echinacoside و cistanoside F و cistantubuloside B1 و isoacteoside و acteoside و tubuloside A و cis-acteoside و kankanoside E و osmanthuside B و cistanoside C و tubuloside B. مراقبة الجودة والتطبيق السريري الإضافي بسبب نشاطهم الاستروجين. يمكن أن يوفر هذا خيارًا علاجيًا جديدًا ومحسّنًا لعلاج متلازمة ما بعد انقطاع الطمث ، وبالتالي تجنب الآثار الجانبية وردود الفعل السلبية للعلاج بالإستروجين.

الاختصارات

TGCDCistanche Deserticolaإجمالي الجليكوسيدات LC / Q-TOF-MS اللوني السائل / قياس الطيف الكتلي الرباعي لوقت الرحلة

منهجية سطح استجابة RSM

تصميم مركب مركزي CCD

مطياف الكتلة MS HPLC / Q-TOF-MS كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء / مطياف كتلة رباعي لوقت الرحلة

ACN أسيتونتريل

حجم السرير BV

استصواب التطوير التنظيمي العام

مطياف الكتلة اللوني السائل LC-MS

Q-TOF-MS قياس الطيف الكتلي الرباعي لوقت الرحلة

الأدوية الصينية التقليدية للطب الصيني التقليدي

الانحراف المعياري النسبي RSD

شكر وتقدير

تم دعم هذا المشروع من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 81073015) ، مؤسسة الطبيعة العلمية بمقاطعة هيلونغجيانغ (ZD2017014) ، وخطة تدريب المواهب المبتكرة الشباب للكلية في مقاطعة هيلونغجيانغ (UNPYSCT - 2017209). يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح فيما يتعلق بنشر هذه الورقة.

تضارب المصالح

يذكر الكتاب لا تضارب في المصالح.

مراجع

[1] Nan ZD، Zeng KW، Shi SP، Zhao MB، Jiang Y.، Tu PF، Phenylethanoid glycosides مع الأنشطة المضادة للالتهابات من سيقان Cistanche deserticola المستزرعة في صحراء تاريم ، Fitoterapia ، 2013 ، 89 ، {{4} }.

[2] Guo Y. ، Cao L. ، Zhao Q. ، Zhang L. ، Chen J. ، Liu B. ، Zhao B. ، 2016 ، 293 ، 678-685.

[3] Nan ZD ، Zhao MB ، Zeng KW ، Tian SH ، Wang WN ، Jiang Y. ، Tu PF ، إيريدويد مضاد للالتهابات من سيقان Cistanche Deserticola المستزرعة في صحراء تاريم ، المجلة الصينية للأدوية الطبيعية ، 2016 ، 14 ، 61-65.

[4] Peng F. ، Chen J. ، Wang X. ، Xu C. ، Liu T. ، Xu R. ، التغيرات في مستويات Phenylethanoid Glycosides ، نشاط مضادات الأكسدة ، وخصائص الجودة الأخرى في شرائح Cistanche deserticola بواسطة المعالجة بالبخار ، المواد الكيميائية والنشرة الصيدلانية (طوكيو) ، 2016 ، 64 ، 1024-1030.

[5] Wang T.، Zhang X.، Xie W.، Cistanche deserticola YC Ma، "Desert Ginseng": a review، The American Journal of Chinese Medicine، 2012، 40، 1123-1141.

[6] Song Y. ، Song Q. ، Li J. ، Zhang N. ، Zhao Y. ، Liu X. ، Jiang Y. ، Tu P. ، وهي استراتيجية متكاملة للتمييز الكمي بين البابونجCistanche Deserticolaو C. tubulosa باستخدام التحليل اللوني السائل عالي الأداء - الهجين الثلاثي الرباعي الأيوني الخطي الطيفي الكتلي ، Journal of Chromatography A ، 2016 ، 1429 ، 238-247.

[7] Li Y. ، Peng Y. ، Wang M. ، Zhou G. ، Zhang Y. ، Li X. ، الفحص السريع وتحديد الاختلافات بين المستقلباتCistanche Deserticolaand C. tubulosa water extract in rats by UPLC-Q-TOF-MS الجمع بين تحليل التعرف على الأنماط ، Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis ، 2016 ، 131 ، 364-372.

[8] Li WL و Sun XM و Song H. و Ding JX و Bai J. و Chen Q. و HPLC / Q-TOF-MS-Based التعرف على المكونات الممتصة ومستقلباتها في مصل الفئران والبول بعد تناوله عن طريق الفم Deserticola Extract، Journal of Food Science، 2015، 80، H 2079-2087.

[9] الماسي أ ، دارجاهي أ ، محمدي م ، بيجلاري هـ ، أميريان ف ، راعي م ، إزالة البنسلين جي عن طريق الجمع بين التحلل الصوتي وعملية التحفيز الضوئي (تحفيز ضوئي صوتي) من محلول مائي: تحسين العملية باستخدام RSM (منهجية الاستجابة السطحية) ، طبيب الإلكترون ، 2016 ، 8 ،

[10] 2878-2887. هوو دبليو ، تشانغ دبليو ، تشن جي ، لو يي ، تحسين ظروف الاستخراج لأقصى نشاط الفينول ، الفلافونويد ومضادات الأكسدة من أوراق بيانات ميلاليوكا باستخدام منهجية سطح الاستجابة ، بلوس وان ، 2016 ، 11 ،

[11] e0162139. Pooralhossini J.، Ghaedi M.، Zanjanchi MA، Asfaram A.، اختيار الاستخراج بمساعدة الموجات فوق الصوتية إلى جانب القياس الطيفي لتحديد سريع لحمض الغاليك في عينات المياه: التصميم المركب المركزي لتحسين متغيرات العملية ، Ultrasonics Sonochemistry ، 2017 ، 34 ، 692- 699.

[12] Han L.، Boakye-Yiadom M.، Liu E.، Zhang Y.، Li W.، Song X.، Fu F.، Gao X.Cistanches Deserticola YC Maبواسطة UHPLC / ESI-QTOF-MS / MS ، تحليل الكيمياء النباتية ، 2012 ، 23 ، 668-676.

[13] Lu D. ، Zhang J. ، Yang Z. ، Liu H. ، Li S. ، Wu B. ، Ma Z. ، التحليل الكمي لـ Cistanches Herba باستخدام كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء مقترنة باكتشاف صفيف الصمام الثنائي وعالية تحليل مطياف الكتلة مع طرق القياس الكيميائي. Journal of Separation Science، 2013، 36، 1945-1952.

[14] Li WL ، Chen Q. ، Yang B. ، Gao S. ، Zhang JJ ، فحص المستخلصات الفعالة من الاستروجين النباتي وجرعة منCistanche Deserticola، Chinese Herbal Medicines، 2013، 5، 292-296.

[15] Li YP و Huang FR و Dong J. و Xiao C. و Xian RY و Ma ZG و Zhao J. ، التعرف السريع على Cistanche عبر تقنية التصوير الطيفي الفلوري جنبًا إلى جنب مع تحليل المكونات الرئيسية و Fisher Distinction ، Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi، 2015، 35، 689-694.