الأهمية التنبؤية لتعبير البروتين 8 المرتبط بنقي الكلى في المرضى الذين يعانون من السمنة - أو أمراض الكلى المرتبطة بالسكري من النوع 2

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

تاكاشيغي كوابارا¹، كيوشي موري 1 ،^2*ماساتو كاساهارا^1,3، هيديكي يوكوي¹، هيروتاكا إماماكي¹أكيرا إيشي¹كينيتشي كوجا¹أكيرا سوجاوارا⁴شينجي ياسونو³، كينجي أوشيما³، تاكاشي موريكاوا⁵يوشيو كونيشي⁵ماساهيتو إيمانيشي⁵أكيرا نيشياما⁶، كازوا ناكاو^1,2ماساشي موكوياما¹

¹قسم الطب والعلوم السريرية ، كلية الطب بجامعة كيوتو ، كيوتو ، اليابان ،

²مركز الابتكار الطبي ، كلية الطب بجامعة كيوتو ، كيوتو ، اليابان ،

³قسم أبحاث EBM ، معهد النهوض بالعلوم السريرية والتحويلية ، مستشفى جامعة كيوتو ، كيوتو ، اليابان ،

⁴قسم أمراض الكلى ، مستشفى أوساكا للصليب الأحمر ، أوساكا ، اليابان ،

5 قسم أمراض الكلى وارتفاع ضغط الدم ، مستشفى مدينة أوساكا العام ، أوساكا ، اليابان ،

6 قسم الصيدلة ، كلية الطب بجامعة كاغاوا ، كاغاوا ، اليابان

الملخص

الخلفية والهدف: لقد أبلغنا أن المستقبل الشبيه بالرقم 4 (TLR4) وأحد روابطه الداخلية ، البروتين المرتبط بالنخاع العظمي 8 (MRP8 أو S100A8) ، يلعبان دورًا مهمًا في تطور اعتلال الكلية السكري في الفئران. كان الهدف من هذه الدراسة هو تقييم أهميةالكلىتعبير MRP8 في المرضى الذين يعانون منبدانة- أو النوع 2 المرتبط بمرض السكريأمراض الكلى. الطرق: في مرضى السكري أو السمنة أو مجموعة التحكم ، تم تحديد مستويات MRP8 mRNA ومستويات التعبير البروتيني في عينات خزعة الكلى عن طريق RT-PCR في الوقت الفعلي والكيمياء المناعية (n=28 و 65 ، على التوالي) ، وارتباطاتهم بخط الأساس والمعلمات النذير تم تحليلها. تم فحص تأثيرات MRP8 على التعبيرات الجينية المؤيدة للالتهابات باستخدام الضامة. نتائج:الكلىارتفعت مستويات التعبير الجيني والبروتيني لـ MRP8 في مجموعات السمنة أو مرضى السكري مقارنة بمجموعة التحكم. من بين جميع المواد ، من خلال تحليل الانحدار الخطي أحادي المتغير ، كان عدد الخلايا الكبيبي 8- الإيجابي والمنطقة الإيجابية لـ tubulointerstitial MRP 8- عند خط الأساس ، على التوالي ، مرتبطين ليس فقط بالعديد من عوامل الخطر المعروفة لاعتلال الكلية السكري (مثل مثل ضغط الدم الانقباضي والبيلة البروتينية والكرياتينين في الدم) ولكن أيضًا مع مدى التصلب الكبيبي والتليف النبيبي الخلالي. تم فحص العوامل المستقلة التي تتنبأ بمستويات البروتين في البول بعد عام من خلال التحليل متعدد المتغيرات ، وشملت MRP الكبيبي 8- عدد الخلايا الإيجابي (ب=0. 59 ، P ، 0. 001) ، بروتينية (ب=0. 37، P=0. 002) وضغط الدم الانقباضي (ب=0. 21، P=0. 04) في الأساس ، بعد التعديل لمخاطر معروفة عوامل. لوحظ تعبير بروتين MRP8 في الضامة الإيجابية للأضلاع والأنابيب الضامرة للقرص المضغوط 68-. في الضامة المستزرعة في الفئران ، أدت أيضًا تعبيرات السيتوكين المسببة للالتهاب الناتجة عن بروتين MRP8 إلى تحريض تلقائي لـ MRP8 بطريقة تعتمد على TLR 4-.

الاستنتاجات: يبدو أن التعبير الكبيبي MRP8 مرتبط بتطور البيلة البروتينية في مرضى السكري الذين يعانون من السمنة المفرطة أو مرضى السكري من النوع الثاني ، ربما عن طريق إحداث تغييرات التهابية في البلاعم من خلال إشارات TLR4.

آثار cistanche: علاج أمراض الكلى

مقدمة

يلعب الالتهاب المزمن دورًا مهمًا في التسبب في مرض السكري أوبدانةومضاعفاته القلبية الوعائية [1]. تورط في تورط مستقبلات المناعة الفطرية والروابط الداخلية في عملية الالتهاب المزمن. تم التعرف على البروتين 8 المرتبط بالنخاع العظمي (MRP8 ، المعروف أيضًا باسم S100A8 أو calgranulin A) في الأصل على أنه بروتين رابط للكالسيوم السيتوبلازمي في العدلات والخلايا الأحادية [2] وأصبح معروفًا على نطاق واسع باعتباره يجند داخلي المنشأ قويًا للمستقبلات الشبيهة بالحصيلة 4 (TLR4) ) في أمراض مختلفة بما في ذلك الصدمة الإنتانية واضطرابات الأوعية الدموية والمناعة الذاتية [3،4،5]. لقد اقترحنا مؤخرًا أن إشارات MRP8 / TLR4 تلعب دورًا مهمًا في تطور اعتلال الكلية السكري الناتج عن فرط شحميات الدم [6]. تعد البلاعم الكبيبية وخلايا مجرى الهواء المجمعة من المصادر الرئيسية لـ MRP8 في نماذج الفئران المصابة باعتلال الكلية السكري [6] والتليف الكلوي [7] ، على التوالي. مستويات البلازما لـ MRP8 ، والتي عادة ما تشكل مركبًا غير متجانس مع شريك ملزم MRP14 في مجرى الدم ، تزداد في الأشخاص الذين يعانون من السمنة المفرطة [8،9]. ومع ذلك ، لا توجد تقارير تحقق في التعبير الكلوي لـ MRP8 في المرضى الذين يعانون من السمنة أويكتب2 مرض السكريوارتباطه بالتشخيص الكلوي.

كان الهدف من هذه الدراسة هو تحديد مستويات التعبير عن mRNA والبروتين في MRP8 فيالكلىمن المرضى اليابانيين المصابين باعتلال الكلية السكري (DN) ،بدانة- اعتلال الكبيبات المرتبط (ORG) ، المتلازمة الكلوية ذات التغيير الأدنى (MCNS) أو الشذوذ الكبيبي الطفيف (MGA) ، والتي تم تشخيصها جميعًا عن طريق خزعة الكلى ، وتقييم ما إذا كان التعبير الكلوي MRP8 يمكن أن يتنبأ بالنتائج الكلوية.

يمكن أن يحسن القسطرة وظائف الكلى

المواد والأساليب

بيان الأخلاق

أجريت الدراسة البشرية وفقًا للمبادئ الواردة في إعلان هلسنكي وتمت الموافقة عليها من قبل اللجان الأخلاقية للبحوث البشرية في كلية الطب بجامعة كيوتو ومستشفى مدينة أوساكا العام ، على التوالي. جميع المشاركين أعطى موافقة خطية مستنيرة. تمت الموافقة على بروتوكول دراسة الحيوانات من قبل لجنة أبحاث الحيوان بكلية الطب بجامعة كيوتو (رقم التصريح: Med Kyo 13318). تم إجراء جميع العمليات الجراحية للحيوانات تحت تخدير بنتوباربيتال الصوديوم ، وبُذلت كل الجهود لتقليل المعاناة.

المواد الدراسية

مرضى البروتينبدانةأو داء السكري من النوع 2 الذين خضعوا لخزعة الكلى تم تسجيلهم في هذه الدراسة. تم استبعاد المرضى الذين يعانون من الأمراض المعدية والسرطان وأمراض الكبد وأمراض الكولاجين. تم تعريف البيلة البروتينية على أنها بروتين بول أكبر من 0 .5 جم / جم كرياتينين أو ألبومين بول أكبر من 300 مجم / جم كرياتينين في قياسين متتاليين على الأقل.بدانةتم تعريفه على أنه مؤشر كتلة الجسم (BMI) أكبر من 25. 0 (كجم / م²). تم تشخيص مرض السكري من النوع 2 وفقًا لمعايير منظمة الصحة العالمية. استخدمت القياسات البيوكيميائية على القبول لخزعة الكلى كخصائص أساسية لتحليل المقطع العرضي. تم حساب معدل الترشيح الكبيبي المقدر (eGFR) باستخدام معادلة تنبؤ مبسطة اقترحتها الجمعية اليابانية لأمراض الكلى: eGFR (مل / دقيقة / 1.73 م).²)=1946 [العمر (بالسنوات)] 20. 287 6 [كرياتينين المصل (mg perdl)] 21. 094 60. 739 (للإناث) ، وهو تعديل محلي تم التحقق من صحته لـ MDRD [ 10]. تم قياس تركيزات الكرياتينين في المصل باستخدام طريقة إنزيمية.

بالنسبة للكيمياء المناعية ، تم تحليل 65 مريضًا يابانيًا خضعوا لخزعة الكلى في قسم الطب والعلوم السريرية ، مستشفى جامعة كيوتو بين عامي 2000 و 2011. يتم سرد التشخيصات المثبتة بالخزعة لجميع المرضى خلال هذه الفترة في الجدول S1 في الملف S1. شملت الموضوعات التي تم فحصها في هذا العمل DN (n=19) و ORG (n=10) والأشخاص غير البدينين وغير المصابين بمرض السكري والذين تم تشخيصهم على أنهم MGA (n=19) أو MCNS (ن=17). تم استبعاد بعض الحالات في هذه الفئات لأن العينات المتبقية احتوت على أقل من 10 كبيبات. يتكون تعريف DN من (1) أكثر من 5 سنوات بعد ظهور مرض السكري ، (2) وجود بيلة زلالية دقيقة أو كبيرة ، (3) تغيرات نسيجية مرضية متوافقة مع DN مثل سماكة الغشاء القاعدي الكبيبي ، تمدد المسراق ، عقيدية التصلب (عقيدات كيميلستيل ويلسون) و / أو التهاب الشرايين الشرياني ، و (4) استبعاد الأسباب الأخرى لاضطرابات الكلى [11]. تم تعريف ORG شكليًا على أنه تصلب الكبيبات القطاعي البؤري و / أو تضخم الكبيبات في الأشخاص الذين يعانون من كليهمابدانةوالبروتينية ، التي تم وصف تعريفاتها أعلاه [12 ، 13].

لتحليل تعبير mRNA ، تم استبعاد العينات منخفضة الجودة ، حيث كانت مستويات الحمض النووي الريبي 18S (الرنا الريباسي) أقل من حد حساسية الكشف بواسطة RT-PCR في الوقت الحقيقي. تألفت الموضوعات المسجَّلة من 22 مريضًا مصابًا بداء السكري من النوع 2 خضعوا لخزعة كلوية في مستشفى مدينة أوساكا العام بين عامي 2000 و 2010 ، و 6 أشخاص غير مصابين بمرض السكري ، والذين تم إثبات الخزعة لهم.

يلخص الجدولان 1 و 2 الخصائص السريرية الأساسية للمرضى الذين تم فحصهم عن طريق تحليل الكيمياء المناعية أو تحليل التعبير الجيني ، على التوالي. بالنسبة للفحص المجهري الضوئي ، تمت معالجة عينات الأنسجة وفقًا للإجراءات القياسية. كانت المقاطع ملطخة بهيماتوكسيلين يوزين ، حمض شيف دوري ، ميثينامين فضي دوري أو ماسون ترايكروم (الشكل S1). تم تقييم نسب عدد الكبيبات المصابة بالتصلب العالمي بين الكبيبات الكلية والمناطق النسبية للتليف النبيبي الخلالي بشكل مستقل من قبل اثنين من علماء الأمراض غير مدركين للتشخيص والبيانات السريرية.

آثار cistanche: علاج أمراض الكلى

تعريف نتائج الكلى

تم فحص المؤشرين التاليين من مؤشرات الإنذار من خلال تحليلات الانحدار الخطي والانحدار اللوجستي ، على التوالي: (1) مدى البيلة البروتينية المقاسة في سنة واحدة بعد الخزعة ، و (2) الحدث الكلوي المحدد على أنه الزيادة السنوية في الكرياتينين في الدم بنسبة 0.50 بالمائة من خط الأساس أو بدء غسيل الكلى المزمن.

المناعية

تم إجراء الكيمياء المناعية لـ MRP8 و CD68 باستخدامالكلىمقاطع (بسمك 4 مم) مثبتة بنسبة 4 في المائة من بارافورمالدهيد. بعد استرجاع المستضد عن طريق محلول السترات ، تم تحضين أقسام الكلى بمصل الماعز بنسبة 10 في المائة ، متبوعًا بـ MRP8 ضد الإنسان للفأر (1: 100 ؛ الطب الحيوي BMA ، أوغست ، سويسرا) [14] أو الأجسام المضادة CD68 للفئران المضادة للإنسان (1:50 ؛ DAKO ، Ely ، المملكة المتحدة) ، على التوالي. تم تصوير الأجسام المضادة الأولية باستخدام الجسم المضاد الثانوي المقترن ببيروكسيداز الفجل و 3 ، 3- ديامينوبنزيدين رباعي هيدروكلوريد (داكو الولايات المتحدة الأمريكية ، كاربينتريا ، كاليفورنيا). تم counterstained نوى مع الهيماتوكسيلين. تم حساب MRP 8- من الخلايا الإيجابية في أكثر من 10 كبيبات ، وتم قياس المنطقة الإيجابية لـ MRP 8- في tubulointerstitium كميًا للحصول على متوسط ​​لكل موضوع باستخدام MetaMorph 7.5software (Molecular Devices، Downingtown، PA، USA ). تم تقييم كولوكيشن للخلايا الإيجابية للقرص المضغوط 68- و MRP 8- باستخدام الأقسام التسلسلية. لم تكن هناك إشارة MRP8 ولا CD68 في عناصر التحكم السلبية ملطخة بدون الجسم المضاد الأول (الشكل S2). احتضان الجسم المضاد لـ MRP8 مع زيادة 20 مولار من بروتين MRP8 البشري المؤتلف (Life Technologies ، Carlsbad ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها ، تم تقليل التلوين بشكل ملحوظ ، إن لم يكن بالكامل ، مما يدعم خصوصية الجسم المضاد (الشكل S3) .

Cistanche لعلاج الكلى

تقييم تعبير mRNA

مجمدةالكلىتم فصل المقاطع إلى أنسجة الكبيبات ونونجلوميرولوس عن طريق التقاط الليزر للتشريح الدقيق (LM200 ؛ أوليمبوس ، طوكيو ، اليابان) كما تم وصفه سابقًا [15]. تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة RNeasy mini (Qiagen ، طوكيو ، اليابان). تم تحديد مستويات التعبير عن الرنا المرسال بواسطة TaqMan في الوقت الحقيقي PCR (Applied Biosystems ، Foster City ، CA ، USA) [16،17]. تم تطبيع مستويات التعبير لجميع الجينات بمستويات 18S rRNA (التحكم الداخلي). انظر الجدول S2 في الملف S1 لتسلسل التمهيدي والتحقيق. تم اكتشاف حقيقيات النوى 18S rRNA باستخدام كواشف TaqMan المطورة مسبقًا (النظم البيولوجية التطبيقية).

الجدول 1. الخصائص السريرية الأساسية للمرضى في خزعة الكلى الذين تم تحليلهم لتعبير بروتين MRP8 بواسطة الكيمياء الهيستولوجية المناعية.

MGA: الشذوذ الكبيبي البسيط ، MCNS: المتلازمة الكلوية للتغيير الأدنى ، ORG:بدانة- اعتلال الكبيبات المرتبط ، DN: اعتلال الكلية السكري ، مؤشر كتلة الجسم: مؤشر كتلة الجسم ، BUN: نيتروجين اليوريا في الدم ، CRP: بروتين سي التفاعلي. البيانات تعني 6 SD. * تمت مقارنة الفروق الإجمالية بين مجموعات MGA و MCNS و ORG و DN بواسطة ANOVAdoi: 10.1371 / journal.pone.0088942.t001

علاج MRP8 من الضامة

تم إنشاء الضامة المشتقة من نخاع العظم من الفئران من النوع البري أو الفئران بالضربة القاضية TLR4 (KO) [18] على الخلفية الوراثية C57BL / 6J (Oriental BioService ، كيوتو ، اليابان) كما هو موضح سابقًا [6]. باختصار ، بعد تحلل خلايا الدم الحمراء ، تم تعليق خلايا نخاع العظام في وسط يحتوي على 20 في المائة من مصل العجل الجنيني و 50 نانوغرام / مل عامل تحفيز مستعمرات الإنسان الضامة المؤتلف (Peprotech ، Rocky Hill ، NJ ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وتم تربيتها في 37 درجة مئوية في جو من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 بالمائة. في اليوم السابع ، حضنت البلاعم بالفأر المؤتلف MRP8 (أبنوفا ، تايبيه ، تايوان) أو مركبة لمدة 4 ساعات. تمت إضافة Polymyxin B (25 مجم / مل ، NacalaiTesque ، كيوتو ، اليابان) إلى كل بئر لتقليل تلوث السموم الداخلية كما هو موضح سابقًا [3،19]. تم اكتشاف ذيفان نوندوتوكسين عند أي تركيز من MRP8 الذي تم اختباره لاحقًا في الحضانة مع 25 مجم / مل من polymyxin B بواسطة ToxinSensor Chromogenic LAL Endotoxin Assay Kit (GenScript ، Piscataway ، NJ ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي من الخلايا باستخدام RNeasy MiniKit ، وتم تحديد مستويات تعبير mRNA لإنترلوكين -1 بيتا (IL -1 ب) وعامل نخر الورم ألفا (TNFa) و MRP8 بواسطة TaqMan في الوقت الفعلي RT-PCR. تم تطبيع مستويات التعبير لجميع الجينات من خلال مستويات GAPDH للقوارض (التحكم الداخلي ، كواشف TaqMan المطورة مسبقًا). تم سرد تسلسل التمهيدي والمسبار لـ PCR في الوقت الفعلي في الجدول S2 في الملف S1.

تحليل احصائي

يتم التعبير عن البيانات على أنها وسيلة 6 SD ، أو تعني 695 بالمائة من فاصل الثقة (CI) عند الاقتضاء. للمقارنة بين أربع مجموعات ، تم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه أو ثنائي الاتجاه مع تحليل Bonferroni اللاحق ، وتمت مقارنة المتغيرات الفئوية باستخدام اختبار x2. تم تطبيق اختبار t غير المقترن للطالب للمقارنة بين مجموعتين حسب الاقتضاء. تم تقدير معاملات ارتباط سبيرمان لتحديد الارتباط بين متغيرين. لفحص تأثيرات المتغيرات المشتركة الأساسية التي تحدد مدى تعبير MRP8 الكبيبي أو الأنبوبي الخلالي أو مستويات البروتين البولي بعد عام واحد من الخزعة ، تم إجراء تحليلات الانحدار الخطي أحادية المتغير ومتعددة المتغيرات. تم استخدام تحليل الانحدار اللوجستي لتحليل المتغيرات التوضيحية التي تتنبأ بحدوث الأحداث الكلوية. تم تحليل جميع البيانات باستخدام برنامج StatView 5. 0 (SAS InstituteInc.، Cary، NC، USA). قيم P ، 0. 05 اعتبرت ذات دلالة إحصائية.

آثار cistanche: علاج أمراض الكلى

نتائج

قارنا مستويات التعبير البروتين MRP8 فيالكلىبين مجموعات DN و ORG وغير البدناء وغير السكري (MGA و CNS). كشف التحليل الكيميائي المناعي أن كلاً من عدد الخلايا الكبيبي 8- الإيجابي (الشكل 1 أ) والمنطقة الإيجابية لـ MRP {4}} (الشكل 1 ب) في DN كانت أكبر بكثير من تلك الموجودة في المجموعات الأخرى بما في ذلك MGA و MCNS و و ORG (ص<0.01). org="" subjects="" also="" showed="" a="" tendency="" of="" elevated="" mrp8expression="" compared="" to="" mga="" and="" mcns="" (fig.="" 1a,="" 1b).="" furthermore,="" glomerular="" mrp8="" mrna="" expression="" levels="" in="" dn="" subjects="" were="" significantly="" higher="" compared="" to="" non-dm="" control="" subjects="" (p,0.01,="" fig.="" 1c).="" in="" non-glomerulus="" tissues,="" mrp8mrna="" expression="" levels="" were="" much="" lower="" than="" those="" in="" glomeruli,="" both="" in="" non-dm="" and="" dm="" groups.="" abundant="" mrp8="" protein="" expression="" in="" the="" tubulointerstitium="" of="" dn="" cases="" was="" not="" clearly="" reflected="" into="" increased="" mrna="" expression,="" which="" may="" be="" partly="" caused="" by="" deposition="" of="" blood-derived="" proteins="" in="" the="" tubulointerstitium="" as="" discussed="" in="" the="" next="" section.="" as="" shown="" in="" representative="" photos="" (fig.="" 1d–g,="" see="" fig.="" s4="" in="" detail),="" renal="" biopsy="" samples="" from="" mga="" and="" mcns="" subjects="" showed="" few="" mrp8-positive="" cells="" in="" glomeruli="" (fig.="" 1d,="" 1e="" and="" fig.="" s4).="" in="" org="" subjects,="" somemrp8-positive="" cells="" appeared="" in="" glomeruli="" and="" tubulointerstitium(fig.="" 1f="" and="" fig.="" s4).="" in="" dn="" subjects,="" a="" marked="" increase="" of="" mrp8-expressing="" cells="" in="" glomeruli="" and="" significant="" expansion="" of="" mrp8-positive="" areas="" in="" the="" tubulointerstitium="" were="" observed="" in="" a="" focal="" manner="" (fig.="" 1g="" and="" fig.="" s4).="" of="" note,="" mrp8-positive="" cells="" were="" absent="" in="" nodular="" sclerosing="" lesions="" of="" diabetic="" glomeruli="" (fig.="" s4:dn="" case="" 2,="" 3)="" as="" described="" previously="" for="" sclerotic="" lesions="" in="" anca-associated="" glomerulonephritis="" [20].="" paired="" immunohistochemistry="" for="" cd68="" and="" mrp8="" in="" serial="" sections="" suggested="" thatmrp8="" signals="" were,="" at="" least="" in="" part,="" observed="" in="" macrophages="" expressing="" cd68="" (fig.="" 2),="" as="" we="" reported="" in="" a="" mouse="" model="" of="" diabetic="" nephropathy="" [6].="" besides,="" focally="" injured="" atrophic="" tubular="" epithelial="" cells="" also="" strongly="" expressed="" mrp8,="" which="" were="" surrounded="" by="" mrp8(+)-,="" cd68(+)-positive="" macrophages="" (fig.="" 2,="" fig="" s4:="" dn="" case="" 3-5).="" in="" the="" cases="" with="" nephrotic="" range="" proteinuria,="" mrp8="" staining="" was="" also="" observed="" along="" brush="" borders="" of="" proximal="" tubules="" both="" in="" mcns="" and="" dn="" cases="" (fig.="" s4).="" since="" the="" sample="" number="" of="" mrna="" expression="" was="" too="" small="" for="" multivariate="" analysis,="" the="" following="" analyses="" were="" performed="" using="" data="" from="" patients="" studied="" by="">

الجدول 2. الخصائص السريرية الأساسية للمرضى في خزعة الكلى الذين تم تحليلهم لتعبير MRP8 مرنا بواسطة RT-PCR في الوقت الحقيقي.

الارتباطات بينالكلىتم تحليل إشارات MRP8 والمعلمات السريرية الأساسية في وقت الخزعة الكلوية بشكل مقطعي (الجدول 3). من خلال التحليل أحادي المتغير ، ارتبط تعبير البروتين الكبيبي و / أو الأنبوبي الخلالي MRP8 بشكل كبير بالعمر ، وضغوط الدم الانقباضي والانبساطي ، والبروتين البولي ، ومستويات الكرياتينين في الدم ، وكوليسترول BUN و HDL ، و eGFR ، ومدى تصلب الكبيبات العالمي والتليف البيني النبيبي. تم فحص هذه المعلمات من خلال التحليل متعدد المتغيرات بعد استبعاد ضغط الدم الانبساطي و eGFR و BUN بسبب العلاقة الخطية المتداخلة. ارتبطت النسبة المئوية للتليف الأنبوبي الخلالي بشكل مستقل بإشارات MRP8 الكبيبية (ب=0. 62 ، معدل P=0. 0 2) وإشارات tubulointerstitialMRP8 (ب=0. 85 ، تعديل P ، 0.001) ، على التوالي. بالإضافة إلى ذلك ، كانت إشارات MRP8 البينية الأنبوبية مرتبطة بشكل مستقل أيضًا بالبيلة البروتينية الأساسية (ب=0 .20 ، معدل P=0. 01). أشارت تحليلات الرسم المتناثرة بين إشارات MRP8 في الكبيبات أو الأنابيب البينية الأنبوبية والمعلمات السريرية إلى أن مجموعة MCNS نمط توزيع متميز من المجموعات الأخرى ، خاصة فيما يتعلق بمستويات البروتين البولي ومستويات كوليسترول البروتين الدهني منخفض الكثافة (الشكل S5A-D ، S6A-D). أدى استبعاد مجموعة MCNS إلى تحسين الارتباط بين إشارات MRP8 والبروتين البولي أو مستويات كوليسترول LDL في الدم (الشكل S5E-F ، S6E-F). لذلك ، أجرينا تحليلًا فرعيًا باستثناء مرضى MCNS ووجدنا أن البروتين البولي كان عاملاً مستقلاً مرتبطًا بإشارات MRP8 الكبيبية عن طريق التحليل متعدد المتغيرات (الجدول 4 ؛ ب=0. 36 ، P المعدل=0. 03 ).

بعد ذلك ، أجرينا الانحدار الخطي أو تحليلات الانحدار اللوجستي لتحديد العوامل التفسيرية التي تتنبأ بالنتائج الكلوية والتي كانت مدى البيلة البروتينية بعد عام والحدث الكلوي في غضون عام. نظرًا لوجود ارتباط جيد بين إشارات MRP8 الكبيبية والنبوبية الخلوية (الشكل S7 ؛ R=0. 67 ، P ، 0. 0 01) ، تم تسجيل هذه المعلمات بدلاً من ذلك في مزيد من التحليلات . قمنا بتقييم العلاقة بين المعلمات الأساسية والبروتين البولي في 1 سنة بعد خزعة الكلى عن طريق تحليل الانحدار المتعدد. كما هو موضح في الجدول 5 ، كانت إشارة MRP8 الكبيبية (ب=0. 59 ، معدل P ، 0.001) عاملاً تنبئيًا لمدى البيلة البروتينية بعد عام ، بالإضافة إلى ضغط الدم الانقباضي الأساسي (ب {{13} } .21 ، معدل P=0. 04) والبيلة البروتينية الأساسية (ب=0. 37 ، معدل P=0. 002) كانت. كانت هذه المعلمات مستقلة عن عوامل الخطر المعروفة الأخرى لاعتلال الكلية السكري بما في ذلك الخلل الكلوي (كرياتينين المصل) ومدى التصلب العالمي والتليف النبيبي الخلالي [11 ، 21-24]. من ناحية أخرى ، لم تكن إشارة tubulointerstitial MRP8 (ب=0. 34 ، P المعدل=0. 09) عاملاً تنبئيًا مستقلاً لمستويات البروتين البولي بعد عام. حدثت الأحداث الكلوية في 7 مرضى (6 في DN و 1 في حالات ORG) في غضون عام بعد خزعة الكلى. من خلال التحليل أحادي المتغير ، ليس فقط مدى التصلب الكبيبي والتليف النُبيبي الخلالي ، وإشارات MRP8 الكبيبية والنبيبية الخلالي ، ولكن أيضًا ضغط الدم ، والخلل الكلوي ، ومستويات البروتين البولي عند خط الأساس كانت عوامل تنبؤية مهمة لحدوث الأحداث الكلوية. ومع ذلك ، من خلال التحليل متعدد المتغيرات ، تم إلغاء المتغيرات المشتركة من قبل بعضها البعض (الجدول S3 في الملف S1) ، ويرجع ذلك على الأرجح إلى الارتباطات العالية بين هذه المعلمات.

أخيرًا ، قمنا بفحص فاعلية MRP8 باعتباره رابطًا داخليًا لـ TLR4 باستخدام الضامة المستنبتة. في الضامة المشتقة من نخاع العظم المأخوذة من فئران من النوع البري ، فإن تنظيم MRP8 الناجم عن بروتين MRP8 لجينات السيتوكين المسببة للالتهابات مثل IL -1 b وTNFa وأثار أيضًا الحث التلقائي لـ MRP8 ، بطريقة تعتمد على الجرعة بين 1 {{ 15}} - 1000 نانوغرام / مل. تم قمع تأثيرات MRP8 هذه تقريبًا بمقدار الثلثين في الضامة التي تم الحصول عليها من الفئران TLR4 KO (P ، 0.01) (الشكل 3).

الشكل 1. التحليلات المناعية و mRNA لـ MRP8 فيالكلىعينات الخزعة. تحديد كمية MRP الكبيبي {{0} عدد الخلايا الموجب (A) و tubulointerstitial MRP 8- المنطقة الإيجابية (B). تعبير mRNA عن MRP8 في الكسور الكبيبية وغير الكبيبية (C). القضبان المفتوحة: الضوابط غير البدناء وغير السكري وهي MGA أو MCNS ، والقضبان المغلقة: ORG أو DN (A – C). صور تمثيلية لمجموعات MGA و MCNS و ORG و DN (D-G). MGA: الشذوذ الكبيبي البسيط ، MCNS: الحد الأدنى من التغيير المتلازمة الكلوية ، ORG: اعتلال الكبيبات المرتبط بالسمنة ، DN: اعتلال الكلية السكري. * P ، 0.01.doi: 10.1371 / journal.pone.0088942.g001

مناقشة

أظهرت الدراسة الحالية أن MRP8 يتم التعبير عنها بكثرة في الكبيبات و tubulointerstitium للمرضى الذين يعانون من DNas مقارنة بـ ORG والتحكم غير البدناء وغير السكري (MGA و MCNS). علاوة على ذلك ، في موضوعات ORG ، تميل مستويات تعبير MRP8 إلى أن تكون أعلى من موضوعات MGA أو MCNS. في التحقيق المقطعي الأساسي بما في ذلك جميع الموضوعات ، من خلال تحليل الانحدار الخطي أحادي المتغير ، كان عدد الخلايا الإيجابي الكبيبي 8- والمنطقة الإيجابية لـ tubulointerstitial MRP 8- ، على التوالي ، مرتبطين ليس فقط بالعديد من عوامل الخطر المعروفة لـ اعتلال الكلية السكري (مثل ضغط الدم الانقباضي والبيلة البروتينية والكرياتينين في الدم) ولكن أيضًا مع مدى تصلب الكبيبات والتليف الأنبوبي الخلالي. من خلال التحليل متعدد المتغيرات ، كانت المنطقة الإيجابية tubulointerstitial MRP 8- مرتبطة بشكل كبير بالبيلة البروتينية والتليف الأنبوبي الخلالي. ارتبط عدد الخلايا الإيجابي الكبيبي 8- ارتباطًا وثيقًا بالتليف النُبيبي الخلالي في التحليل الأولي ، ومع البيلة البروتينية في تحليل فرعي باستثناء مجموعة MCNS. أشارت الكيمياء الهيستولوجية المناعية إلى أنه تم التعبير عن MRP8 ، جزئيًا على الأقل ، بواسطة الخلايا الضامة المعبرة عن CD68 (زائد) والأنابيب الضامرة. هذه النتائج تثير احتمال أنالكلىقد تكون إشارات MRP8 في الكبيبات أو tubulointerstitium بمثابة علامات جديدة لاعتلال الكلية السكري.

الشكل 2. توطين تعبير البروتين CD68 و MRP8 في المقاطع التسلسلية لحالات اعتلال الكلية السكري. التعبير عن تعبير CD68 (A ، B) و MRP8 (C ، D) في العينات الكلوية المقترنة (A و C ، أو B و D). تشير الأسهم إلى تحديد موقع إشارات CD68 و MRP8. doi: 10.1371 / journal.pone.0088942.g002

في الدراسة الإنذارية ، كشف التحليل متعدد المتغيرات أن مستويات البروتين في البول بعد عام من الخزعة الكلوية كانت مرتبطة بشكل مستقل بعدد الخلايا الكبيبي 8- الإيجابي والبروتين البولي وضغط الدم الانقباضي عند خط الأساس. من الجدير بالذكر أن التعبير الكبيبي MRP8 أظهر الارتباط الأقوى مع البروتين البولي بعد عام (ب=0. 87) ، أقوى من البروتين البولي الأساسي (ب=0. 78) ، عن طريق التحليل أحادي المتغير. يرجع ذلك جزئيًا إلى أن التعبير الكبيبي MRP8 لا يرتفع إلى حد كبير في الأشكال "الحميدة" من البيلة البروتينية مثل تلك التي لوحظت في مرضى MCNS ، الذين تكون مستويات البيلة البروتينية عالية للغاية عند التشخيص عن طريق خزعة الكلى ولكن عادةً ما يتم حلها في غضون عام بعد بدء العلاج المثبط للمناعة. تشير هذه النتائج إلى أن التعبير الكبيبي MRP8 قد يمتلك طبيعة تنبؤية فريدة كعلامة للمرض ، والتي لا يمكن استبدالها بالبيلة البروتينية الأساسية أو التحليل المرضي الروتيني الذي يقيم التصلب الكبيبي العالمي والتليف الخلالي الأنبوبي. علاوة على ذلك ، نتوقع أن تعبير MRP8 الكبيبي ليس علامة بسيطة أو متفرجًا ولكنه لاعب نشط في إصابة الكبيبة كما هو موضح أدناه.

كان معامل التحديد (R2) المحسوب بمعلمات تفسيرية مسجلة في تحليل الانحدار المتعدد هو 0. 52 * و 0. 74 # ، على التوالي. ذ ، سنوات ضغط الدم ، ضغط الدم gCr ، g الكرياتينين ؛ تي كولسترول ، الكوليسترول الكلي. HDL-Chol ، كوليسترول HDL ؛ كوليسترول البروتين الدهني منخفض الكثافة وكوليسترول البروتين الدهني منخفض الكثافة ؛ GS ، تصلب الكبيبات. TI ، tubulointerstitial.doi: 10.1371 / journal.pone.0088942.t003

الجدول 4. تحليل فرعي للعلاقة بين المعلمات السريرية الأساسية وإشارات MRP8 ، بعد استبعاد مجموعة MCNS.

الجدول 5. تحليل الانحدار المتعدد لتحديد العوامل التي تتنبأ بمستويات البروتين البولي بعد سنة واحدة من خزعة الكلى

الشكل 3. آثار MRP8 على الضامة المشتقة من نخاع العظام. تم تحفيز الضامة المشتقة من نخاع العظم (BMDM) باستخدام الماوس المؤتلف MRP8 لمدة 4 ساعات. تشير أشرطة الخطأ إلى 95 بالمائة من CI وأجريت التحليلات الإحصائية بقيم محولة بسجلاري. كشفت ANOVA ثنائية الاتجاه عن تأثيرات مهمة للأنماط الجينية وتركيزات MRP8 وتفاعلاتها للتعبير عن جميع الجينات الثلاثة (P ، 0. 0 0 1 لجميع المقارنات). ن=4. WT ، من النوع البري ؛ KO بالضربة القاضية IL -1 ب ، إنترلوكين 1 بيتا ؛ TNFa ، عامل نخر الورم ألفا. * P ، 0.01 بين التركيزات المختلفة ، # P ، 0.01 بين الأنماط الجينية. doi: 10.1371 / journal.pone.0088942.g003

في محاولة أخرى لدراسة طولية ، فشل تحليل الانحدار اللوجستي في اكتشاف أي تنبؤات مستقلة لحدوث حدث كلوي في غضون عام. نتوقع أن هذا يرجع جزئيًا إلى أن التعبير الأنبوبي الخلالي MRP8 والتليف الخلالي الأنبوبي كانا متنبئين قويين للحدث الكلوي في التحليل أحادي المتغير ولكن تم إلغاء دلالاتهما من قبل بعضهما البعض في التحليل متعدد المتغيرات. أظهرت هاتان المعلمتان ارتباطًا قويًا (R=0. 68، P، 0. 001) (الشكل S8) ، مما يشير إلى أن هاتين المعلمتين قد تكون مكافئة للتنبؤ بأحداث كلوية. في الواقع ، أظهر التعبير الخلالي MRP8 نمطًا مشابهًا تمامًا للتليف الخلالي الذي تم تقييمه بواسطة تلوين Masson trichrome. تعتمد كمية MRP8 الخلالي إلى حد كبير على الإشارات الإيجابية في الأنابيب الضامرة بدلاً من تلك الموجودة في الضامة ، والتي تختلف ميزتها عن تلك الموجودة في MRP8 الكبيبي في توزيع نقطي. علاوة على ذلك ، قد يكون حجم العينة الصغير وفترة المراقبة القصيرة والقليل من الأشخاص الذين أصيبوا بأحداث كلوية قد قللوا من قوة الكشف. نظرًا لأن تعبير MRP8 في الخلايا الظهارية الأنبوبية يلعب دورًا مسببًا في تطور الالتهاب الأنبوبي الخلالي في نموذج الفأر للتليف الكلوي [7] ، ستكون هناك حاجة إلى مزيد من التحليل لتوضيح دور MRP8 الأنبوبي الخلالي في DN.

وفقًا لدراستنا السابقة [6] ، تم تنظيم MRP8 mRNA في الغالب في الجزء الكبيبي لموضوعات DN البشرية مقارنةً بالمواضيع الضابطة مع MGA. من ناحية أخرى ، لوحظ تعبير بروتين MRP8 ليس فقط في الكبيبة ولكن أيضًا في tubulointerstitium. في هذا الصدد ، تجدر الإشارة إلى أن هناك نمطين متميزين من تلطيخ MRP8 في tubulointerstitium من DN. كان أحدها تلطيخًا شديدًا وبؤريًا في الأنابيب الضامرة بشدة. كان الآخر عبارة عن تلطيخ خفيف موزع على طول حدود الفرشاة للأنابيب القريبة ، والتي تم العثور عليها أيضًا في ORG و MCNS. من المحتمل أن تمثل الإشارات الأخيرة بروتين MRP8 المشتق من الدم ويعاد امتصاصه بواسطة الأنابيب القريبة ، والتي لا ينبغي أن تكون مصحوبة بزيادة تعبير MRP8 mRNA. فيما يتعلق بالبروتينات الأخرى غير MRP8 ، أبلغنا نحن وآخرون مؤخرًا عن ظواهر مماثلة للكشف عن البروتين المناعي في الأنابيب القريبة الناتجة عن إعادة الامتصاص ولكن ليس عن طريق التخليق الكلوي [25 ، 26]. من ناحية أخرى ، نظرًا لأن القليل من تلطيخ MRP8 بقي في اختبار امتصاص الجسم المضاد ، خاصة في الآفات النضحية الكبيبية والآفات التليفية شديدة الندوب حول الأنابيب الضامرة ، لا يمكن إبطال وجود إشارات غير محددة تمامًا (الشكل S3).

أظهرت إشارات MRP8 الكبيبية بشكل أساسي أنماطًا متقطعة في موضوعات DN (الشكل 1 ، الشكل S4). نظرًا لأن كلا من CD68 و MRP8 تم اكتشافهما بواسطة الأجسام المضادة وحيدة النسيلة للفأر ، تم تقييم توطين هذه الجزيئات من خلال أقسام متسلسلة ، وليس عن طريق المناعة المزدوجة. كانت أنماط تلطيخ MRP8 متوافقة مع تلك الموجودة في اضطرابات الكلى الالتهابية الأخرى بما في ذلك التهاب الكُلى IgAnephritis [27] والتهاب كبيبات الكلى التكاثر الغشائي [14] والتهاب كبيبات الكلى المرتبط بـ ANCA [20] ، حيث تم اقتراح البلاعم كمصدر رئيسي لـ MRP8 ، كما ذكرنا في نموذج القوارض [6]. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن اعتبار العدلات مصدرًا آخر لـ MRP8 التي تؤثر على مضاعفات الأوعية الدموية [28]. حاليًا ، نحن نحقق في الآلية الجزيئية التي تجعل MRP8 منظمًا في الغالب في خلايا النسب النخاعية التي تتسلل إلى الكبيبات. كشفت دراسة في المختبر أن MRP8 تسبب في التعبير الخلوي الالتهابي وأيضًا التعبير القوي عن MRP8 نفسه في الضامة بطريقة تعتمد على TLR 4-. بالإضافة إلى ذلك ، كانت الخلايا الإيجابية لـ MRP 8- غائبة في آفات التصلب العقدي ، مما يشير إلى أن MRP8 الكبيبي قد يعكس التلف الكبيبي المستمر [20]. الأهم من ذلك ، ذكرت دراسة بشرية واسعة النطاق أن التعبير الجيني MRP8 في الخلايا أحادية النواة في الدم لمرضى السكري من النوع 1 يرتفع بشكل ملحوظ في الأشخاص الذين يعانون من مضاعفات مرض السكري بما في ذلك اعتلال الكلية [29].

نظرًا لأن تثبيط نظام الرينين - أنجيوتنسين (RAS) هو محدد مهم لنتائج الكلى ، فقد درسنا تأثيرات RASblockade علىالكلىتعبير MRP8. لم نجد فرقًا كبيرًا في تعبير MRP8 mRNA في الكلى بين مرضى DN الذين عولجوا مع أو بدون حصار RAS (الشكل S9) ، ربما لأن الحالات التي عولجت بحصار RAS تميل إلى ارتفاع ضغط الدم وبيلة ​​بروتينية أكثر شدة من الحالات التي لا تحتوي على حصار RAS

في البشر والفئران الذين يعانون من السمنة المفرطة ، قد تعكس زيادة MRP8 / 14 في البلازما درجة منبدانةوتنشأ من الخلايا الشحمية وكذلك الكريات البيض [8،9]. كان لحالات ORG الخاصة بنا تلطيخ خفيف لـ MRP8 في الأنابيب القريبة ، مما يشير إلى زيادة مستويات البلازما لـ MRP8. في المقابل ، لم يكن هناك ارتباط كبير بين تعبير MRP8 tubulointerstitial ومؤشر كتلة الجسم (الشكل S6G). لذلك ، فإن تعبير MRP8 المحلي في ملفالكلىقد يعمل بشكل أفضل كعلامة للإصابة الكلوية بدلاً منبدانة[8,9].

علاج لعلاج ضعف الكلى

دراستنا لديها العديد من القيود. كان عدد عينة كل مجموعة تمت دراستها صغيرًا. تم تسجيل الموضوعات غير المتطابقة في mRNA والتحليلات الكيميائية المناعية. نظرًا لأننا قمنا فقط بتحليل المرضى الذين خضعوا لخزعة الكلى ، فإن تركيبة المرضى الذين تم فحصهم هنا قد لا تعكس تلك الموجودة في مرضى السكري من النوع 2 بشكل عام أو بشكل عام مزمنالكلىموضوعات المرض. على الرغم من عدم الاحتفاظ بالعمر كعامل مستقل مرتبط بإشارات MRP8 في بياناتنا (الجدول 3) ، فمن المعروف أن الشيخوخة مرتبطة بالتهاب مزمن [30]. لا يمكن إهمال آثار العمر تمامًا. على الرغم من فقدان معظم إشارات MRP8 في اختبار امتصاص الجسم المضاد ، إلا أنه كانت هناك بعض الإشارات الإيجابية المتبقية ، والتي قد تكون ناجمة عن الارتباط غير المحدد للجسم المضاد الأول. كما نوقش أعلاه ، يساعدنا التحقيق في تعبير MRP8 الكلوي عن طريق خزعة الكلى على فهم الفيزيولوجيا المرضية والتشخيص لأمراض الكلى المزمنة ، وخاصة المرتبطة بها.بدانةومرض السكري ، ولكن له عيب في الاستخدام الروتيني والمتكرر في العيادات الخارجية

باختصار ، تشير الدراسة الحالية إلى أن التعبير عن MRP8 فيالكلىيعكس الحالة المرضية الحالية ويتنبأ أيضًا بالنتائج الكلوية لدى المرضى المصابينبدانةأوداء السكري من النوع 2. قد يكون هناك ما يبرر إجراء مزيد من التحقيقات التي تدرس مستويات MRP8 البولية بين مرضى السمنة أو مرضى السكري على نطاق واسع

دعم المعلومات

الشكل S1 صور تمثيلية تظهر أقسام خزعة الكلى لمريض DN ملطخة بـ (أ) حمض شيف الدوري ، (ب) فضي ميثينامين حمض دوري أو (ج) ماسون ثلاثي الكروم. كانت نسبة عدد الكبيبات المصابة بالتصلب العالمي (الأسهم) بين نسبة الكبيبات الكلية والمنطقة النسبية للتليف النبيبي الخلالي 33 في المائة و 65 في المائة على التوالي في هذا المريض. (شجار)

الشكل S2 الكيمياء المناعية لبروتينات MRP8 و CD68 في مرضى DN. تُظهر الصور الموجودة في العمود الأيمن تجارب تحكم سلبية بدون الجسم المضاد الأول. (TIF)

الشكل S3 اختبار امتصاص الجسم المضاد لتلطيخ MRP8. PBS: محلول ملحي مخزّن بالفوسفات ، rhMRP8: مؤتلف بشري MRP8. (TIF)

الشكل S4 صور تمثيلية لتعبير MRP8 في مجموعات MGA و MCNS و ORG و DN. (TIF)

الشكل S5 الارتباط بين عدد الخلايا الإيجابي الكبيبي 8- والمعلمات السريرية. تم استخدام القيم المحولة في السجل لإشارات MRP8. تم تحليل الارتباطات باستخدام كل المجموعات الأربع (A-D ، G) أو 3 مجموعات باستثناء مجموعة MCNS (E ، F). الدوائر المفتوحة: الشذوذ الكبيبي البسيط (MGA) ، الدوائر المغلقة: الحد الأدنى من التغيير المتلازمة الكلوية (MCNS) ، المثلثات المفتوحة:بدانة- اعتلال الكبيبات المرتبط (ORG) ، مثلثات مغلقة: اعتلال الكلية السكري (DN). (TIF)

الشكل S6 الارتباط بين المنطقة الإيجابية لـ tubulointerstitial MRP 8- والمعلمات السريرية. تم استخدام القيم المحولة في السجل لإشارات MRP8. تم تحليل هذه الارتباطات باستخدام كل المجموعات الأربع (A-D ، G) أو 3 مجموعات باستثناء مجموعة MCNS (E ، F). (TIF)

الشكل S7 الارتباط بين التعبير الكبيبي والنبيبي الخلالي MRP8. تم استخدام القيم المحولة لوغاريتمياً لإشارات MRP8. (TIF)

الشكل S8 الارتباط بين المنطقة الإيجابية tubulointerstitial MRP 8- والتليف الأنبوبي الخلالي. تم استخدام قيم تحويل السجل لإشارات MRP8. (TIF)

الشكل S9 تعبير مرنا الكلوي عن MRP8 في مرضى DN مع أو بدون حصار رينين أنجيوتنسين. NS: ليس مهمًا. n=15 (نعم) ، 6 (لا). من بين 22 حالة DN ، لم تكن المعلومات حول الأدوية متوفرة لمريض واحد. (TIF)

جداول دعم ملف S1.

الجدول S1 ، التشخيصات المرضية لجميع الحالات التي خضعت لخزعة الكلى في قسم الطب والعلوم السريرية ، مستشفى جامعة كيوتو بين عامي 2000 و 2011. الجدول S2 ، التمهيدي وتسلسل المسبار لـ TaqMan في الوقت الحقيقي RT-PCR. الجدول S3 ، تحليل الانحدار اللوجستي لحدوث حدث كلوي في غضون عام. (DOC) شكر وتقدير نعرب عن امتناننا لـ S. Tanaka للحصول على المشورة الإحصائية ، و Y. Ogawa ، و N Igarashi ، و C. Kimura للمساعدة الفنية ، و A. Yamamoto و SOgino للمساعدة السكرتارية. مساهمات المؤلف صممت التجارب وصممتها: TK KM MK HY MI AN KNMM. تم إجراء التجارب: TK HI AI KK TM YK MI AN. حللت البيانات: TK KM MK HY AS SY KU KN MM. الكواشف المساهمة / المواد / أدوات التحليل: TK KM. كتب الورقة: TK KMMM.

آثار cistanche: علاج أمراض الكلى

مراجع

1. Donath MY، Shoelson SE (2011) داء السكري من النوع 2 كمرض التهابي. Nat Rev Immunol 11: 98-107.

2. Odink K و Cerletti N و Bruggen J و Clerc RG و Tarcsay L et al. (1987) البروتينات الرابطة ثنائية الكالسيوم في تسلل الضامة من التهاب المفاصل الروماتويدي. طبيعة 330: 80-82.

3. Vogl T ، Tenbrock K ، Ludwig S ، Leukert N ، Ehrhardt C ، et al. (2007) MRp8 و Mrp14 منشطون داخليون للمستقبلات الشبيهة بـ Toll 4 ، مما يعزز الصدمة القاتلة التي يسببها الذيفان الداخلي. نات ميد 13: 1042-1049.

4. كروس ك ، جاو ح ، وانغ واي ، موروكا تي ، ساكوما م ، وآخرون. (2009) البروتين المرتبط بالنخاع العظمي {2}} / 14 مهم للاستجابة البيولوجية لإصابة الأوعية الدموية. الدورة الدموية 120: 427-436.

5. الخاسر K ، Vogl T ، Voskort M ، Lueken A ، Kupas V ، وآخرون. (2010) يعتبر المستقبِل الشبيه بالرسائل 4 ligands Mrp8 و Mrp14 أمرًا بالغ الأهمية في تطوير خلايا CD8 بالإضافة إلى الخلايا التائية ذاتية التفعيل. نات ميد 16: 713-717.

6. Kuwabara T و Mori K و Mukoyama M و Kasahara M و Yokoi H وآخرون. (2012) تفاقم اعتلال الكلية السكري عن طريق فرط شحميات الدم يتم توسطه بواسطة مستقبلات شبيهة بـ Toll 4 في الفئران. السكري 55: 2256-2266.

7. Fujiu K ، Manabe I ، Nagai R (2011) تنظم الخلايا الظهارية للقناة الكلوية الالتهاب في التلف الأنبوبي الخلالي في الفئران. ياء كلين إنفست 121: 3425-3441.

8. Sekimoto R و Kishida K و Nakatsuji H و Nakagawa T و Funahashi T et al. (2012) مستويات عالية من مركب S100A8 / A9 (كالبروتكتين) في الذكور اليابانيين الذين يعانون من السمنة في البطن والتعبير غير المنظم عن S100A8 و S100A9 في الأنسجة الدهنية للفئران البدينة. Biochem Biophys Res Commun 419: 782-789.

9. Mortensen OH ، Nielsen AR ، Erikstrup C ، Plomgaard P ، Fischer CP ، et al. (2009) Calprotectin - علامة جديدة لـبدانة. بلوس واحد 4: e7419.

10. Matsuo S و Imai E و Horio M و Yasuda Y و Tomita K وآخرون. (2009) معادلات منقحة لتقدير GFR من كرياتينين المصل في اليابان. أنا JالكلىDis53: 982-992.

11. جروس جيه إل ، دي أزيفيدو إم جي ، سيلفييرو إس بي ، كاناني إل إتش ، كاراموري إم إل ، وآخرون. (2005) اعتلال الكلية السكري: التشخيص والوقاية والعلاج. رعاية مرضى السكري 28: 164 - 176.

12. Kambham N، Markowitz GS، Valeri AM، Lin J، D'Agati VD (2001)بدانة- اعتلال الكبيبات المرتبط: وباء ناشئ.الكلىكثافة العمليات 59: 1498 - 1509.

13. Praga M ، Morales E (2006)بدانة، بروتينية ، وتطور الفشل الكلوي. Curr Opin Nephrol Hypertens 15: 481-486.

14. Kawasaki Y ، Hosoya M ، Takahashi A ، Isome M ، Tanji M ، et al. (2005) تعبيرات البروتين 8 المرتبطة بنخاع العظم على البلاعم هي علامة تنبؤية مفيدة للضعف الكلوي عند الأطفال الذين يعانون من MPGN من النوع 1. Am Jالكلىديس 45: 510-518.

15. نيشياما أ ، كونيشي واي ، أوهاشي إن ، موريكاوا تي ، أوروشيهارا إم ، وآخرون. (2011) مولد أنجيوتنسين البولي يعكس نشاط نظام الرينين-أنجيوتنسين داخل الكلى في المرضى الذين يعانون من اعتلال الكلية بالجلوبيولين المناعي (IgA). زرع الكلى 26: 170 - 177.

16. Ogawa Y و Mukoyama M و Yokoi H و Kasahara M و Mori K et al. (2012) يحمي مستقبل الببتيد الطبيعي guanylyl cyclase-A الخلايا الببتيدية من إصابة الكبيبات التي يسببها الألدوستيرون. J Am Soc Nephrol 23: 1198-1209.

17. Yokoi H و Mukoyama M و Mori K و Kasahara M و Suganami T et al. (2008) يؤدي الإفراط في التعبير عن عامل نمو النسيج الضام في خلايا الأقدام إلى تفاقم اعتلال الكلية السكري في الفئران.الكلىكثافة العمليات 73: 446-455.

18. Hoshino K و Takeuchi O و Kawai T و Sanjo H و Ogawa T et al. (1999) أحدث التطورات: الفئران التي تعاني من نقص في مستقبلات Toll-like 4 (TLR4) لا تستجيب لعديد السكاريد الدهني: دليل على TLR4 كمنتج جين Lps. J مناعي 162: 3749–3752.

19. Suganami T ، Tanimoto-Koyama K ، Nishida J ، Itoh M ، Yuan X ، et al. (2007) دور مسار مستقبلات Toll-like 4 / NF-kappaB في التغيرات الالتهابية التي يسببها الأحماض الدهنية المشبعة في التفاعل بين الخلايا الشحمية والضامة. تصلب الشرايين Thromb Vasc Biol 27: 84-91.

20. Pepper RJ، Hamour S، Chavele KM، Todd SK، Rasmussen N، et al. (2013) تعبير الكريات البيض والمصل S100A8 / S100A9 يعكس نشاط المرض في التهاب الأوعية الدموية والتهاب كبيبات الكلى المرتبط بـ ANCA.الكلىكثافة العمليات 83: 1150-1158.

21. رافيد إم ، بروش دي ، رافيد سافران دي ، ليفي زد ، راشماني آر (1998) عوامل الخطر الرئيسية لاعتلال الكلية في داء السكري من النوع 2 هي مستويات الكوليسترول في البلازما ، وضغط الدم ، وارتفاع السكر في الدم. القوس المتدرب ميد 158: 998-1004.

22. Adler AI، Stratton IM، Neil HA، Yudkin JS، Matthews DR، et al. (2000) رابطة ضغط الدم الانقباضي مع مضاعفات الأوعية الدموية الكبيرة والأوعية الدموية الدقيقة لمرض السكري من النوع 2 (UKPDS 36): دراسة رصدية مستقبلية. MJ 321: 412-419.

23. Ruggenenti P، Remuzzi G (1998) اعتلال الكلية من النوع -2 من داء السكري. J أسوك نفرول 9: 2157-2169.

24. Taft JL، Nolan CJ، Yeung SP، Hewitson TD، Martin FI (1994) الارتباطات السريرية والنسيجية للتدهور في وظائف الكلى لدى مرضى السكري المصابين بالبروتينية. مرض السكري 43: 1046-1051.

25. ماتسوساكا T ، Niimura F ، Shimizu A ، Pastan I ، Saito A ، وآخرون. (2012) Liverangiotensinogen هو المصدر الرئيسي لأنجيوتنسين الكلوي II. J Am Soc Nephrol23: 1181-1189.

26. Kuwabara T ، Mori K ، Mukoyama M ، Kasahara M ، Yokoi H ، et al. (2009) تعكس مستويات الليبوكالين المرتبطة بالجيلاتيناز البولي ، الضرر الذي لحق بالكبيبات ، والأنابيب القريبة ، والنيفرونات البعيدة.الكلىكثافة العمليات 75: 285 - 294.

27. Kawasaki Y، Suyama K، Go H، Imamura T، Ushijima Y، et al. (2009) تراكم الضامة التي تعبر عن البروتين 8 المرتبط بالنخاع العظمي المرتبط بتطور التغيرات المتصلبة لدى الأطفال المصابين باعتلال الكلية بالجلوبيولين المناعي A.Tohoku J Exp Med 218: 49-55.

28. Nagareddy PR ، Murphy AJ ، Stirzaker RA ، Hu Y ، Yu S ، et al. (2013) ارتفاع السكر في الدم يعزز تكوين النخاع ويضعف حل تصلب الشرايين. خلية Metab 17: 695-708.

29. جين واي ، شارما أ ، كاري سي ، هوبكنز دي ، وانج إكس ، وآخرون. (2013) يتم تنظيم التعبير عن الجينات الالتهابية في الدم المحيطي لمرضى السكري من النوع 1. رعاية مرضى السكري.

30. Longo VD، Finch CE (2003) الطب التطوري: من أنظمة النموذج القزم إلى المعمرين الأصحاء؟ Science 299: 1342-1346.

الاقتباس: Kuwabara T و Mori K و Kasahara M و Yokoi H و Imamaki H وآخرون. (2014) الدلالة التنبؤية لـالكلىالتعبير ذو الصلة بالبروتين 8 النخاعي في المرضى الذين يعانون منبدانة- أو أمراض الكلى المرتبطة بالسكري من النوع 2. بلوس واحد 9 (2): e88942. دوى: 10.1371 / journal.pone.0088942

المحرر: أوتبال سين ، جامعة لويزفيل ، الولايات المتحدة الأمريكية

تم استلامه في 11 سبتمبر 2013 ؛ تم القبول في 14 كانون الثاني (يناير) 2014 ؛ تم النشر في 18 فبراير 2014

حقوق النشر: 2014 Kuwabara et al. هذا مقال مفتوح الوصول يتم توزيعه بموجب شروط ترخيص Creative Commons Attribution License ، والذي يسمح بالاستخدام غير المقيد والتوزيع والاستنساخ بأي وسيلة ، بشرط ذكر المؤلف الأصلي والمصدر.

التمويل: تم دعم هذا العمل جزئيًا من خلال منحة المساعدة لأبحاث أمراض الكلى والتصلب الكلوي السكري من وزارة الصحة والعمل والرفاهية في اليابان (إلى KM) ، والمنح البحثية من وزارة التعليم والثقافة والرياضة والعلوم اليابانية ، والتكنولوجيا (إلى TK و KM و MM) ، من مؤسسة اليابان للأنزيمات التطبيقية (إلى TK) ومن مؤسسة أبحاث التدخين (إلى MM). لم يكن للممولين أي دور في تصميم الدراسة أو جمع البيانات أو التحليل أو قرار النشر أو إعداد المخطوطة.

تضارب المصالح: أعلن المؤلفون أنه لا توجد مصالح متنافسة.

* البريد الإلكتروني: keyem@kuhp.kyoto - u.ac.jp