التأثيرات الوقائية لجليكوسيدات فينيليثانول من سيستانش توبولوسا

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

شو بينج يو وآخرون

الملخص

خلفية:سيستانشتوبولوساهو دواء عشبي صيني تقليدي يستخدم على نطاق واسع لتنظيم المناعة.فينيليثانويلدجليكوسيدات(CPhGs) من هذا المصنع هي المواد الفعالة في المقام الأول. كان الهدف من هذه الدراسة هو تقييم الآثار الوقائية والعلاجية لمركبات CPhG على التليف الكبدي الناجم عن BSA في الفئران والآليات الجزيئية ذات الصلة التي تشمل الخلايا النجمية الكبدية. تم استخدام Biejiarangan (BJRG) ، وهو دواء عشبي صيني تقليدي آخر ، كعنصر تحكم إيجابي.

طُرق:في التجارب في الجسم الحي ، تم تقسيم 75 جرذ SD بشكل عشوائي إلى 6 مجموعات: عادية (معالجة بالماء المقطر) ، نموذج (BSA المعالج) ، عقار إيجابي (BSA المعالج بالإضافة إلى BJRG 600 مجم / كجم / يوم) ، ومعالجة BSA بالإضافة إلى مجموعات CPhGs (125 و 250 و 500 مجم / كجم / يوم). مؤشرات الكبد والطحال ، مستويات مصل الأسبارتات أمينوترانسفيراز (AST) ، ألانين أمينوترانسفيراز (ALT) ، حمض هيكساديسينويك (HA) ، اللامينين (LN) ، النوع الثالث من البروكولاجين (PCIII) ، النوع IVcollagen (IV-C) ، هيدروكسي برولين (Hyp) ) ، وتحويل عامل النمو 1 (TGF - 1) في كبد الفئران. تم تقييم الدرجات الهيستوباثولوجية لتليف الكبد لكل مجموعة باستخدام تلطيخ H&E و Masson ثلاثي الألوان. تم تحديد تعبير TGF - 1 ، والكولاجين 1 (Col-I) ، والكولاجين III (Col-III) من خلال طريقة تلطيخ كيميائي مناعي. تم تقييم هذه التأثيرات بشكل أكبر في المختبر من خلال تحديد مستويات التعبير عن NF-B p65 و Col-I من خلال التحليلات الكمية في الوقت الحقيقي PCR. تم فحص تعبير البروتين Col-I أيضًا بواسطة النشاف الغربي.

نتائج: أدت جميع مجموعات الجرعات (125 ، 25 0 ، و 5 0 0 ملغم / كغم / يوم) من CPhGs إلى انخفاض كبير في مؤشر الكبد والطحال ، وانخفاض ALT ، و AST ، و HA ، و LN ومستويات مصل PCIII و IV-C ومحتوى TGF - 1 (P <0. 0="" 1="" و="" p=""><0. 01="" و="" p=""><0.01) و="" hyp="" المحتوى.="" كما="" خففت="" cphgs="" بشكل="" ملحوظ="" من="" تورم="" خلايا="" الكبد="" ومنع="" بشكل="" فعال="" نخر="" خلايا="" الكبد="" وتسلل="" الخلايا="" الالتهابية.="" أظهرت="" النتائج="" الكيميائية="" النسيجية="" المناعية="" أن="" cphgs="" قللت="" بشكل="" كبير="" من="" تعبير="" tgf="" -="" 1="" (p=""><0.01 ،="" p=""><0.01 ،="" و="" p=""><0.01) ،="" col-="" i="" ،="" و="" col-iii.="" أظهرت="" التأثيرات="" المختبرية="" لـ="" cphgs="" (100="" و="" 75="" و="" 50="" و="" 25="" ميكروغرام="" مل)="" على="" hsc-t6="" أن="" cphgs="" قللت="" بشكل="" كبير="" من="" تعبير="" الرنا="" المرسال="" عن="" nf-b="" p65="" و="" col-i="" ،="" كما="" قللت="" cphgs="" من="" التعبير="" البروتيني="">

الاستنتاجات:CPhGs لها تأثير كبير مضاد للتليف الكبدي ، ويمكن استخدامها كعوامل واقية من الكبد لعلاج التليف الكبدي.

الكلمات الدالة:التليف الكبديCistanche tubulosa ،فينيليثانويلدجليكوسيد ،Chemokine BSA ، الوقاية والعلاج

فينيليثانويلدجليكوسيدفيسيستانشتوبولوسا

خلفية

التليف الكبدي هو استجابة التئام الجروح لإصابة الكبد الشديدة التي تحدث في التسبب في التهاب الكبد المزمن الناجم عن عوامل مختلفة. هذه العوامل هي العدوى الفيروسية ، وتعاطي الكحول ، والركود الصفراوي ، وأمراض التمثيل الغذائي وأمراض المناعة الذاتية [1-3]. يؤدي التراكم التدريجي للمصفوفة خارج الخلية (ECM) وانخفاض إعادة التشكيل إلى تعطيل البنية الطبيعية للكبد ، مما يؤدي إلى التليف الكبدي [4]. يعد التليف الكبدي أمرًا بالغ الأهمية في أمراض الكبد المزمنة وغالبًا ما يتطور إلى تليف الكبد غير القابل للشفاء والسرطان. في الوقت الحاضر ، هناك طرق أو أدوية فعالة لعلاج التليف الكبدي. لذلك ، من الضروري إيجاد دواء مضاد للتليف الكبدي من شأنه أن يخفف من تطور إصابة الكبد إلى التليف والسرطان.

سيستانشتوبولوساW (من عائلة Orobanchaceae) هو نبات طفيلي يزرع على نطاق واسع في المنطقة الجنوبية من شينجيانغ في الصين [5]. يستخدمه الناس عادة لتنشيط الكلى وتغذية الدم وإرخاء الأمعاء وتأخير الشيخوخة. تم إدراجه رسميًا في دستور الأدوية الصيني [6].سيستانشتوبولوسايحتوي على مجموعة متنوعة من المكونات النشطة. وتشمل هذهفينيليثانويلدجليكوسيدات(CPhGs) و iridoids و polysaccharides. Asone للعديد من المكونات النشطة فيسيستانشتوبولوسا، أظهر CPhGshave تأثيرات مقنعة مضادة للأكسدة ، ومضادة للتعب ، وعصبية ، ومضادة للالتهابات في كل من الدراسات في الجسم الحي وفي المختبر [7]. في السنوات الأخيرة ، تم الإبلاغ عن أن CPhGs لها تأثيرات كبدية. الآليات المحتملة الكامنة وراء هذه التأثيرات هي التخلص من الجذور الحرة ، وحماية الأغشية الكبدية ، والتنظيم المناعي ، وتثبيط موت الخلايا المبرمج ، وتثبيط التعبير عن HBsAg و HBeAg ، وتثبيط تكرار الحمض النووي لـ HBV وغيرها [8-11]. ومع ذلك ، فإن القليل من الدراسات في الأدبيات تتناول تأثير التليف الكبدي المضاد للـ GPhCs. لذلك ، هدفت هذه الدراسة إلى معرفة تأثير التليف الكبدي لمضادات الجينوم الفوسفاتية باستخدام نموذج من الألبومين المصل البقري (BSA) الناجم عن التليف الكبدي في الجرذان. تم فحص الآليات الجزيئية ذات الصلة في خلايا HSC-T6.

طُرق

المواد الكيميائية والكواشف

تم شراء مجموعة Hydroxyproline (التحلل المائي القلوي) (الكمية: 20140616) من معهد Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (الصين). تم شراء مجموعات Rat TGF {1}} sandwichELISA (الكمية: 238240615) من شركة Lianke Biotech Co.، Ltd. (الصين). تم توفير الأجسام المضادة لـ Rabbit Anti-CollagenI (الكمية: 140619) ، والأجسام المضادة لـ Rabbit Anti-Collagen III (الكمية: 980788 W) ، والأجسام المضادة لـ Rabbit Anti-TGF - 1 (الكمية: 140619) بواسطة شركة Beijing BiosynthesisBiotechnology Co.، LTD ( الصين). مُرفق بمصل الأغنام العادي (سائل العمل) (اللوت: WP141214) ، PV -6000 (الكمية: WK141225) ، ومجموعة DAB (القطعة: K136621D) تم شراؤها من Zhongshan Golden Bridge BiotechCo.، Ltd. (الصين). تم إجراء الكشف عن الأجسام المضادة الأولية باستخدام 2. محلول الجسم المضاد (Alk-Phos.Conjugated ، Anti-rabbit) و 2. محلول الجسم المضاد (Alk-Phos. Conjugated ، Anti-mouse) (دفعة: 272387) تم شراؤه من Invitrogen Company (الولايات المتحدة الأمريكية) .

تم شراء ألبومين مصل الأبقار (BSA) (Lot: SLBG8239V) من Sigma (الولايات المتحدة الأمريكية). قبل الاستخدام ، تم تحضير BSA عند 18 جم / لتر في محلول ملحي عادي ، وإزالة البكتيريا عن طريق الترشيح ، وتخزين مساحة سطح الجسم عند 4 درجات. تم خلط المادة المساعدة غير المكتملة لـ Freund التي تحتوي على 1 غرام من الدهون من شعر الأغنام (الدفعة: AF0220LA14 ، Shanghai Ye Bio-Technology Co. المحدودة (الصين) ، معقمة في الأوتوكلاف بالبخار ، وتخزينها عند 4 درجات. تم الحصول على العقار المسبب BJRG كأقراص Biejiarangan من Inner Mongolia Furui Medical Science Co.، Ltd. (الصين). تم تحضير مخزون الأدوية BJRG بإذابة أقراص BJRG في ماء مقطر بتركيز 600 مجم / كجم.

فينيليثانويلد جليكوسيدفيسيستانشله آثار وقائية

المواد النباتية

سيستانش توبولوسا(عائلة Orobanchaceae) من منطقة Minfeng في Xinjiang في الصين. تمت المصادقة على المواد من قبل الباحث Jun Zhao ، المختبر الرئيسي لطب الأويغور ، معهد المواد الطبية في شينجيانغ. تم إيداع عينات القسائم في معهد المواد الطبية في شينجيانغ.

إعداد CPhGs

جذور مجففة ومقطعةسيستانشتوبولوسا(6. 0 كجم) تم استخلاصها على التوالي تحت التدفق ثلاث مرات مع 70 بالمائة من الإيثانول ، وتمت إزالة المذيب لإنتاج مستخلص الإيثانول. تمت تنقية مستخلصات الإيثانول باستخدام راتنج AB -8 للحصول علىفينيليثانويدجليكوسيدات(CPhGs). تم إذابة محاليل مخزون CPhGs المستخدمة لمجموعات الجرعات المختلفة في الدراسات على الحيوانات (5 0 0 مجم / كجم ، و 250 مجم / كجم ، و 125 مجم / كجم ، على التوالي) في 0.5 بالمائة (5 جم / لتر) كربوكسي ميثيل السليلوز ( ملح الصوديوم).

الكمي من CPhGs

تم تحديد محتويات مكونين (echinacoside andacteoside) في CPhGs بواسطة HPLC باستخدام طريقة تم الإبلاغ عنها مسبقًا (Zhang et al. 2 0 04) [12]. تم إجراء HPLC باستخدام Shimadzu LC -10 AHPLC المجهز بكاشف الأشعة فوق البنفسجية. كان عمود HPLC عبارة عن عمود Phenomenex Gemini ODS (250 × 4.6 مم ، 5 ميكرومتر). تتكون المرحلة المتنقلة المتساوية من ميثانول أسيتونيتريل -1 بالمائة من حمض الأسيتيك (15:10:75 ، حجم / حجم / حجم). كان التنقية لمدة 40 دقيقة ومعدل التدفق عند 0.6 مل / دقيقة. تم الحفاظ على درجة حرارة العمود ثابتة عند 30 درجة. كان الكشف عن الأشعة فوق البنفسجية عند 334 نانومتر.

الحيوانات وخط الخلايا HSC-T6

[درجة SPF] تم شراء ذكور فئران Sprague – Dawley (SD) البالغة (180-220 جم) من مركز شينجيانغ الطبي للحيوان ، رقم الترخيص: SCXK (جديد) 2011-0004. تم تغذية الفئران بالطعام الخالي من مسببات الأمراض (SPF). تمت الموافقة على جميع الإجراءات المتعلقة بالتجارب على الحيوانات من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان التابعة للمستشفى الأول التابع لجامعة شينجيانغ الطبية. تم إيواء الفئران في أقفاص في ظل ظروف بيئية خاضعة للرقابة (25 درجة و 12 ساعة في دورة الضوء / الظلام) وكان لها حرية الوصول إلى طعام الفئران القياسي ومياه الصنبور. تم تأقلم الفئران قبل العلاج.

تم الحصول على خط الخلايا النجمية الكبدية للجرذان الخالد ، HSC-T6 ، من Wuhan Procell Gene BiotechnologyCo.، LTD. (ووهان ، الصين). تمت زراعة خلايا HSC-T6 في Dulbecco's Modified Eagle's Medium (High Glucose) (DMEM ، بكين ، الصين) مع 10 بالمائة من مصل الأبقار الجنيني (Gibco ، أمريكا الجنوبية) ، 100 وحدة دولية / مل بنسلين ، و 100 ميكروغرام / مل ستربتومايسين (بكين ، الصين) ) في حاضنة مرطبة بدرجة 37 مع 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون.

إصابة الكبد التي يسببها BSA والعلاجات

تم تقسيم خمسة وسبعين فأرًا من جرذان SD بشكل عشوائي إلى ست مجموعات: عادي (معالج بالماء المقطر) ، نموذج (BSA معالج) ، عقار إيجابي (BSA المعالج بالإضافة إلى BJRG 6 0 0 مجم / كجم / يوم) ، ومجموعات BSA المعالجة بالإضافة إلى CPhGs (125 ، 250 ، 5 00 مجم / كجم / يوم). كان لدى المجموعات المعالجة بـ BSA بالإضافة إلى CPhGs (125 ، 250 ، 5 00 ملغم / كغم / يوم) 13 جرذًا في كل مجموعة ، وكانت المجموعة الأخرى تحتوي على 12 جرذًا في كل مجموعة. ينقسم نموذج إصابة الكبد الناجم عن مساحة سطح الجسم إلى توعية أولية يتبعها هجوم مناعي) [13]. باستثناء المجموعة العادية ، تم إعطاء المجموعات الأخرى عدة حقن تحت الجلد مع 0.5 مل (9 مجم / مل) من BSAFreund المساعد غير المكتمل في اليوم الأول واليوم 15 واليوم 22 واليوم 29 واليوم 36 للتوعية الأولية. بعد سبعة أيام من الحقن الخامس ، تم الحصول على الدم من خلال ضفيرة الوريد الجرثومي واختبار الأجسام المضادة لألبومين الدم. تم الكشف عن الأجسام المضادة BSA في مصل الفئران بطريقة نشر أجار مزدوج. تم إجراء حقن الهجوم عن طريق إعطاء 0.4 مل من مساحة سطح الجسم في نورمالالين من خلال الوريد الذيلية في الفئران إيجابية الجسم المضاد BSA مرتين في الأسبوع لمدة عشر مرات. كانت التركيزات وأوقات الحقن 5. 00 ، 5.50 ، 6. 00 ، 6.50 ، 7. 00 ، 7.50 ، 8.50 ، 9.00 ، 9.50 و 10.00 جم / لتر في اليوم 46 ، اليوم 50 ، اليوم 53 ، اليوم 57 ، اليوم 60 ، اليوم 64 ، اليوم 67 ، اليوم 71 ، اليوم 74 واليوم 78 ، على التوالي. في المجموعة العادية ، تم استخدام المحلول الملحي العادي للحقن المناعية الأولية (التحسس) والثانوي (الهجوم) بدلاً من مساحة سطح الجسم ، وكانت الشروط الأخرى مماثلة لتلك الموجودة في المجموعة النموذجية.

المجموعة العادية كانت تؤخذ عن طريق الفم من الماء المقطر بجرعة 1 0 مل / كغ / يوم. تم إعطاء المجموعة النموذجية عن طريق الفم 10 مل / كجم / يوم 0.5 في المائة من محلول CMC-Na. تم إعطاء مجموعة الأدوية الإيجابية عن طريق الفم 600 مجم / كجم / يوم BJRG. تم إعطاء مجموعات CPhGs المعالجة بالإضافة إلى CPhGs (125،250 ، و 500 mg / kg / day) عن طريق الفم 125 و 250 و 500 mg / kg / day CPhGs ، على التوالي ، واستمرت الجرعات اليومية لمدة أسبوعين بعد الحقن الأخير.

بعد فترة التجربة ، صُممت الفئران لمدة 12 ساعة قبل 10 في المائة من هيدرات الكلورال ثم تم التخلص منها على الفور. تم جمع عينات المصل من كل فأر واستخدمت على الفور. تم حصاد الكبد لغرضين: (1) الحفظ في النيتروجين السائل لمجموعات Hyp و (2) التثبيت في 10٪ فورمالدهايد للفحوصات النسيجية و المناعية. استغرقت الدراسات على الحيوانات 93 يومًا.

فينيليثانويلد جليكوسيدفيسيستانشله آثار وقائية

مؤشرات الكبد والطحال

تم تشريح الكبد والطحال بواسطة شق البطن وغسلها بمحلول ملحي طبيعي 4 درجات. بعد امتصاص الماء الزائد بورق الترشيح ، تم وزن الكبد والطحال لحساب المؤشرات المقابلة: الوزن النسبي للعضو=كتلة العضو (جم) / كتلة الجسم الفردية (جم) × 100 بالمائة [14].

تحليل علامات تليف الكبد

تم تقييم التأثير الوقائي لمركبات CPhG ضد إصابة الكبد التي يسببها BSA عن طريق قياس ALT و AST (محلل الكيمياء الحيوية الأوتوماتيكي Mind ray ، A086A0182). تم تحديد تطور تليف الكبد وتأثيرات العلاج بفحص HA و LN و PC III و IV-C (محلل التلألؤ الكيميائي ، TaiGeKeXin ، MP2808).

Hyp content and TGF - 1 analysis

تم تحديد مستوى Hyp في أنسجة الكبد بطريقة قياس الطيف الضوئي وفقًا لتعليمات المجموعة ، وتم التعبير عن مستوى Hyp في صورة Hyp (ug) / بروتين (mg). Hyp (ug / mg)=(قياس OD - OD فارغ) / (OD فارغ قياسي) × 5 (ميكروغرام / مل) × 10 / وزن رطب للنسيج (مل / مجم). تم الكشف عن التركيز الكبدي لـ TGF - 1 باستخدام أطقم ELISA وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. تم تأكيد التأثير المثبط لـ CPhGs على التليف من خلال مستويات التعبير عن TGF - 1.

فحص الأنسجة

تم استئصال أنسجة الكبد في نفس الجزء من الفص الأيسر وتثبيتها في محلول فورمالديهايد بنسبة 10 بالمائة. كانت الأنسجة ملطخة بتلوين H&E التقليدي وتلطيخ Masson'strichrome لمراقبة التغيرات النسيجية المرضية تحت المجهر الضوئي. تم تحليل تعبير الكولاجين من النوع الأول ، ونوع الكولاجين الثالث ، و TGF - 1 في أنسجة الكبد عن طريق التلوين الكيميائي المناعي [15].

تم إجراء الكيمياء الهيستولوجية المناعية شبه الكمية وفقًا للطرق المبلغ عنها [16 ، 17]. تم استخدام التصنيفات التالية لـ TGF - 1 الخلايا الإيجابية: "-" يشير إلى عدم وجود أي تعبير تقريبًا ، 20=l؛ تشير "زائد" إلى الخلايا الإيجابية التي تم جمعها بشكل فردي في منطقة الآفة ، 21=2 ؛ تشير "زائد زائد" إلى الخلايا الإيجابية في مجموعات صغيرة مجمعة حول منطقة الآفة ، 22=4 ؛ تشير "plus plus plus" إلى خلايا موجبة متفرقة ، مثل 23=8. النتائج تمثل تكامل هرمي. تم تحويل نوع الكولاجين من النوع I و الكولاجين من النوع الثالث إلى درجة الكروموجين و النطاق إلى CRI للتحليل الإحصائي (درجة الكروموجينيك × النطاق الكروموجينيك). تنقسم الدرجة اللونية إلى ضعيف "زائد" ، متوسط ​​"زائد" ، وسترونج "زائد زائد". ينقسم النطاق اللوني إلى "زائد" ، نطاقه اللوني 3/4. تم إجراء عملية تقييم العمى بواسطة شخصين حيث "زائد" هو 1 ؛ "plus plus" تساوي 2 ، و "plus plus plus" تساوي 3 ، و "plus plus plus plus" تساوي 4. تم اختيار ثلاثة حقول مجهرية للرصد (التكبير × 200) عشوائيًا لكل قسم ، مع متوسط ​​مستوى العينات المستخدمة باعتبارها المستوى شبه الكمي.

تجارب الخلايا

تم طلاء خلايا HSC-T6 في لوحة بئر 96-. في البداية ، تمت زراعة الخلايا باستخدام DMEM الذي يحتوي على 1 0 بالمائة من FBS لمدة 48 ساعة. ثم تم استبدال الوسيط بـ DMEM بدون FBS لتجويع الخلايا لمدة 12 ساعة. تم استنبات الخلايا باستخدام DMEM الذي يحتوي على 5.0 نانوغرام / مل - 1 (بدون FBS) لمدة 24 ساعة. أخيرًا ، تركيزات مختلفة من CPhGs (100ug / ml ، 50ug / ml ، و 25ug / ml) ، Acteoside (6 ميكروغرام / مل ، 3 ميكروغرام / مل ، و 1.5 ميكروغرام / مل) ، andechinacoside (500 ميكروغرام / مل ، 250 ميكروغرام / مل ، و 125 ميكروغرام / مل) في اللوحة في آبار رباعية وحضنت لمدة 48 ساعة.

تحليل PCR في الوقت الحقيقي

تم تحديد مستوى تعبير mRNA لـ NF-B و p65 و collagenI بواسطة PCR في الوقت الفعلي. لتحديد تعبيرات الحمض النووي الريبي في خلايا HSC-T6 ، تم زرع الخلايا (4 × 1 0 5 خلايا) في ستة أطباق مع 3 مل DMEM مع 10 بالمائة FBS وحضنت طوال الليل عند 37 درجة و 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون ، وبعد ذلك تم تغيير وسائط ثقافة الخلية إلى DMEM خالية من المصل. بعد ذلك ، CPhGs (100 ميكروغرام / مل ، 50 ميكروغرام / مل ، 25 ميكروغرام / مل) ، أكتيوسيد (6 ميكروغرام / مل ، 3 ميكروغرام / مل ، و 1.5 ميكروغرام / مل) ، وإكينكوسايد (500 ميكروغرام / مل ، 250 ميكروغرام) / مل ، و 125 ميكروغرام / مل) إلى الآبار. بعد 48 ساعة من الحضانة باستخدام مركبات CPhG أو التركيبات الأحادية ، تم استخلاص إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام كاشف TRIzol (Invitrogen ، الولايات المتحدة الأمريكية) وتم تحريضه بقوة باستخدام الكلوروفورم لمدة 15 ثانية. بعد الجلوس في درجة حرارة الغرفة لمدة 3 دقائق ، تم طرد المحللة عند 12 ، 000 × جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات. تم ترسيب الحمض النووي الريبي في الطور المائي باستخدام الأيزوبروبانول ، وتم نقل الطور المائي العلوي إلى أنبوب جديد للطرد المركزي. تم ترسيب الحمض النووي الريبي بإضافة 0.75 بالمائة من الإيثانول ، وبعد ذلك يُطرد أنبوب الطرد المركزي الدقيق وطرده عند 12 ، 000 × جم عند 4 درجات لمدة لا تزيد عن 5 دقائق. تمت إزالة المادة الطافية وتجفيف الحمض النووي الريبي في درجة حرارة الغرفة لمدة 5-10 دقائق. مجموعات محددة من المكوِّنات (Sangon ، شنغهاي ، الصين) التي تم استخدامها لتضخيم الجرذان -actin [GenBank: NM _031144. 3] ، و Collagen I [GenBank: NM _ 053304. 1] ، و NF- κB p65 [GenBank: NM _199267. 2] تم تصميم الجينات باستخدام Batch Primer 3. كانت البادئات الأمامية (FW) والعكسية (RV) كما يلي: Collagen I (FW: GGA GAGAGC ATG ACC GAT GG، RV: GGG ACT TCT TGAGGT TGC CA) ، NF-κB p65 (FW: CAT ACG CTG ACCCTA GCC TG ، RV: TTT CTT CAA TCC GGT GGCGA) ، -اكتين (FW: TAA GGC CAA CCG TGA AAA GATG ، RV: AGA GGC ATA CAG GGA CAA CAC A). تم تطبيع النتائج إلى mRNA لجين التدبير المنزلي - أكتين كعنصر تحكم داخلي وتم تقديمها كمستويات mRNA النسبية

تم إجراء ردود الفعل مع 8 ميكرولتر IQ SYBR GreenSupermix ، 1 ميكرولتر 10 ميكرولتر زوج من التمهيدي ، 8.5 ميكرولتر من الماء المقطر ، و 2.5 ميكرولتر (كدنا). تم إجراء كل تفاعل بوليميريز متسلسل في ظل الظروف التالية: 95 درجة لمدة 3 دقائق ، ثم 40 دورة من 10 ثوانٍ عند 95 درجة ، و 30 ثانية عند 55 درجة ، و 10 ثوانٍ عند 55 درجة - 95 درجة للتمديد ، متبوعًا بقياس التألق الفردي. تم وصف النتائج النهائية بالقيم النسبية (2- قيراط). تم إجراء الحساب والتحليل بواسطة نظام الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل iQ5 Real-Time PCR.

تحليل لطخة غربية

تم تحديد مستويات تعبير البروتين Collagen I (Abcam، Cambridge، UK، Art No: ab3471 0) بواسطة Westernblotting [with -actin (Lot: 60008-1- lg؛ Proteintech، China) كعنصر تحكم منزلي. تم تحضير مستخلصات الخلايا الكاملة باستخدام مقايسة الرادي المناعي الراديوي (RIPA) (Thermo Scientific ، الولايات المتحدة الأمريكية) مع 1٪ كوكتيل مثبط Haltprotease (Thermo Scientific ، الولايات المتحدة الأمريكية) و 1٪ كوكتيلات مثبطات Halt phosphatase (Thermo Scientific ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم قياس تركيز البروتين وتحديد كميته بواسطة طريقة برادفورد [18]. تم فصل البروتين (10-50 ميكروغرام) على هلام SDS-PAGE بنسبة 10٪ ونقله إلى أغشية PVDF (Millipore ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم حظر الأغشية لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة مع 5٪ من BSA والأجسام المضادة الأولية (Anti-Colla gen I تم تحضين الجسم المضاد ، 1: 200 التخفيف أو الماوس mAb من -actin ، 1: 5000 التخفيف) عند 4 درجات طوال الليل. المقابلة Alk-Phos. تم تحضين الأجسام المضادة الثانوية المترافقة عند درجة حرارة الغرفة. أخيرًا ، تم غسل الأغشية ثلاث مرات باستخدام 1 × Tris – HClsaline بنسبة 0.1 بالمائة Tween 20 ، وتم مسح الإشارات وتصورها بواسطة نظام التصوير GEL DOC XR (Bio-Rad). تم إجراء تحليل Densitometric على البروتينات ذات الأهمية وتطبيعها إلى -actin بواسطة برنامج GEL DOCImage Studio (Bio-Rad). -الاكتين كان يستخدم فى الضبط الداخلى.

تحليل احصائي

تم تطبيق اختبار Shapiro-Wilk الطبيعي واختبار Levene للتباين للتجانس للتحقق من الحالة الطبيعية وتجانس التباين. تم استخدام تحليل التباين (ANOVA) متبوعًا باختبار Tukey اللاحق لتحديد الاختلافات الإحصائية غير المتجانسة ، والبيانات الموزعة بشكل طبيعي. تم استخدام اختبار Kruskal-Wallis غير المعياري لتحليل البيانات غير الموزعة بشكل طبيعي أو المتجانسة. تم التعبير عن النتائج على أنها تعني ± SD. تم تعيين الأهمية عند P <0. 0="" 5.="" تم="" تحليل="" جميع="" البيانات="" بواسطة="" برنامج="" spss="" 16.0="" (جامعة="" شينجيانغ="">

نتائج

التحديد الكمي لـ CPhGsسيستانشتوبولوسايحتوي على اثنينفينيليثانويلدجليكوسيداتتم تحديد محتوياتها في CPhGs بواسطة تحليل HPLC (الشكل 1) لتكون 42.71 ± 0 .42 بالمائة و 14.27 ± 0 .18 بالمائة ، على التوالي.

مؤشرات الكبد والطحال

كما تم توضيح الجدول 1 ، تم رفع مؤشرات الكبد والطحال لمجموعة النموذج بشكل ملحوظ [P <0. 0="" 1="" ،="" p=""><0.05]. تم="" تقليل="" مؤشرات="" الكبد="" والطحال="" للدواء="" الموجب="" bjrg="" و="" cphgs="" عند="" مجموعات="" جرعات="" مختلفة="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنة="" بمجموعة="" النموذج="" [pliver="0." 004،="" pliver="0." 003،="" pliver="0." 004،="" المتلاعب="0." 005="" ؛="" pspleen="0." 017،="" pspleen="0." 027،="" pspleen="0." 024،="" pspleen="0." 070="" على="" التوالي].="" كانت="" مستشفيات="" الكبد="" والطحال="" أقل="" من="" تلك="" الموجودة="" في="" المجموعة="">

تأثيرات CPhGs على أنشطة ALT و AST ومؤشرات تليف الكبد

في هذه الدراسة ، زادت مستويات المصل من الانزيم الكبدي AST و ALT بشكل ملحوظ في المجموعة النموذجية ، مما يعكس تلف خلايا الكبد في فئران تليف الكبد المستحثة بـ BSA. ومع ذلك ، أظهرت التجارب أن العلاج باستخدام BJRG (6 0 0 مجم / كجم) و CPhGs (125 ، 25 0 ، و 5 0 0 مجم / كجم) انخفض بشكل كبير AST [PAST <0.001، past=""><0.001، past=""><0.001، past=""><0.001، re="" spectively]="" و="" alt="" [palt="0." 117،="" palt="0." 139،="" palt="0." 189="" ،="" palt="0." 255="" ،="" على="" التوالي]="" في="" التليف="" الكبدي.="" (الجدول="">

زادت مستويات HA و LN و PC و IV-C في الفئران النموذجية بشكل ملحوظ [PHA <0. 0="" 0="" 1="" ،="" pln=""><0. {{39}="" }="" 0="" 1="" ،="" ppciii="0." 0="" 02="" ،="" piv-c=""><0.001 ،="" على="" التوالي].="" مقارنة="" بمجموعة="" الطراز="" ،="" مستويات="" ha="" [pha="0." 009،="" pha="0." 007،="" pha="0." 009،="" pha="0." 023،="" على="" التوالي]،="" ln="" [pln="0." 011،="" pln="0." 004،="" p="" ln="0." 026،="" p="" ln="0." 069="" ،="" على="" التوالي]="" ،="" pc="" iii="" [p="" pciii="" {{26="" }}.="" 006="" ،="" p="" pciii="0." 067="" ،="" p="" pciii="0." 136="" ،="" p="" pciii="0." 296="" ،="" على="" التوالي]="" ،="" و="" iv-c="" [p="" iv-c=""><0.001 ،="" p="" iv-c=""><0.001 ،="" p="" iv-c=""><0.001 ،="" p="" iv-c=""><0.001 ،="" على="" التوالي]="" في="" الفئران="" انخفض="" بشكل="" ملحوظ="" بواسطة="" bjrg="" (600="" مجم="" كجم)="" و="" cphgs="" في="" مجموعات="" جرعة="" مختلفة="" (125="" ،="" 250="" ،="" و="" 500="" مجم="" كجم="" )="" (الجدول="">

محتوى مرتفع و TGF - 1

تم اكتشاف محتوى الكولاجين أيضًا عن طريق قياس المستويات العالية في أنسجة الكبد. كما هو مبين في الجدول 4 ، كان متوسط ​​مستوى Hyp في المجموعة النموذجية أعلى بكثير من المجموعة العادية ، لكنه انخفض بشكل ملحوظ في مجموعة BJRG ومجموعات جرعة CPhGs المختلفة.

زاد التركيز الكبدي لـ TGF {0} لمجموعة النموذج في الفئران بشكل ملحوظ [P <0. 0="" 0="" 1].="" مقارنة="" بمجموعة="" النموذج="" ،="" انخفضت="" مستويات="" tgf="" -="" 1="" للعقار="" الإيجابي="" ومجموعات="" جرعات="" cphg="" المختلفة="" بشكل="" ملحوظ="" [p="" tgf="" -="" 1=""><0. 001،="" p="" tgf="" -="" 1=""><0.001، p="" tgf="" {{10="" }}=""><0.001، ptgf="" -="" 1=""><0.001 على="" التوالي].="" تم="" تلخيص="" النتائج="" في="" الجدول="">

فحص الأنسجة

تظهر ملاحظات أقسام أنسجة الكبد الطبيعية الملطخة بـ H & E و Masson ثلاثي الألوان شحمات كبدية وجيوب كبدية مميزة. تم اضطراب بنية أنسجة الكبد في الفئران النموذجية ، وتم استبدال أنسجة الكبد والجيوب الكبدية بكمية كبيرة من النسيج الضام. ومع ذلك ، تم اكتشاف بنية خلوية طبيعية وأنسجة ضامة أقل في مجموعة العلاج مقارنة بتلك الموجودة في مجموعة النموذج.

تلطيخ H&E

في المجموعة الطبيعية ، لوحظت سلامة الهيكلية الهيكلية للفصيص الكبدي بدون مناطق بوابات غير طبيعية وشبهات جيبية كبدية. تم ترتيب الحبال الكبدية بشكل منظم ، مع نواة دائرية وواضحة. يتم تحديد موقع النوى في وسط الخلية ، مع وفرة من السيتوبلازم. تحتوي منطقة المدخل فقط على كمية صغيرة من الأنسجة الليفية (الشكل 2 أ).

في المجموعة النموذجية ، أصيب الهيكل المفصص بأضرار بالغة. أظهرت خلايا الكبد تنكسًا مائيًا خفيفًا ، معظمها تنكس منتفخ و / أو تنكس دهني. كما لوحظ تكوين تسلل الخلايا الالتهابية ، وتضخم الأنسجة الليفية الواسع ، وتكوين عدد كبير من الحاجز الليفي ، والفصيصات المنقسمة ، وتكاثر كبير لخلايا الكبد ، وأكدت هذه الملاحظات نجاح إنشاء نموذج حيواني للإصابة المناعية للفئران. التليف الكبدي (الشكل 2 ب).

بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، كان هناك انخفاض في تسلل الخلايا الالتهابية في CPhG المختلفة ، كما لوحظ وجود نخر وتنكس دهني أقل لخلايا الكبد بالإضافة إلى التخفيف من التليف. خفف CPhG بشكل كبير من أمراض التليف الكبدي الناجم عن BSA في الفئران ، وخفف من تورم الخلايا الحية ، ومنع بشكل فعال نخر خلايا الكبد وتسلل الخلايا الالتهابية ، مما يشير إلى أن CPhG له تأثير وقائي على التليف الكبدي الناجم عن BSA. (الشكل 2 ج-و).

تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان

في المجموعة الطبيعية ، كانت أنسجة الكبد طبيعية. أظهرت منطقة البوابة الكبدية عددًا صغيرًا من ألياف البلوكولاجين ، وكان نسيج الكبد منظمًا بشكل طبيعي (الشكل 3 أ). بالمقارنة مع أنسجة الكبد للمجموعة الطبيعية ، تكاثر النسيج الليفي بواسطة النشرة المركزية وامتد إلى حمة الكبد. تمد ألياف الكولاجين وربطت وتغلف الفصيص بأكمله وتحيط بالوريد المركزي. هذه التأثيرات ، جنبًا إلى جنب مع تليف الخلايا الكبدية ، والضرر الهيكلي الفصيصي ، والتليف المحيط بالبوابة ، وتكوين الكيسات الكاذبة (الشكل 3 ب) قدمت دليلاً على أن النموذج قد تم إنشاؤه.

بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، تم تمديد ألياف الكولاجين في مجموعة مراقبة الأدوية الإيجابية بشكل معتدل للخارج من منطقة البوابة الطرفية (الشكل 3 ج). بالتزامن مع المجموعة النموذجية ، تم تقليل ألياف الكولاجين في مجموعات جرعة مختلفة من CPhG بشكل كبير ، وتم منع تكاثر الألياف ، وتقلص انتشار الأنسجة الليفية داخل حمة الكبد بشكل كبير. تشير هذه النتائج إلى أن مركبات CPhGs محمية من التليف الكبدي الناجم عن BSA (الشكل 3 D-f).

تلطيخ المناعي

الأهم من ذلك ، أن التعبير عن الكولاجين من النوع الأول والكولاجين من النوع الثالث يلعبان أدوارًا أساسية في تطور التليف الكبدي ، ويمكن أن يعمل تكوينهما وترسبهما في أنسجة الكبد كمحدد مهم للفعالية المضادة للتليف الكبدي. تم تلخيص النتائج في الجدول 5.

نوع الكولاجين الأول

أعربت المجموعة الطبيعية عن نوع الكولاجين الأول بشكل رئيسي في الأوعية الدموية ومنطقة المدخل. مجموعة النموذج التي تم التعبير عنها بشكل كبير من الكولاجين من النوع الأول هي تليف الأوعية الدموية في مناطق المدخل. في مساحة Disse ، لوحظ تلطيخ الكولاجين من النوع الأول كخط أو كتوزيع غير مكتمل. الكولاجين المغلف الليفي لتشكيل الكاذبة. في هذه التجارب ، تم تكوين عدد أقل من الحواجز الليفية لـ BJRJ (600 مجم / كجم) ومجموعات جرعة مختلفة من CPhGs (125 و 250 و 500 مجم / كجم) [PCol I=0. 002 ، PCol I {{6 }}. 001، PCol I=0. 023، و PCol I=0. 044، re spectively]. كشفت النتائج الدلالية أن التعبير عن نوع الكولاجين الأول كان أقل بشكل ملحوظ مقارنة بمجموعة النماذج (الشكل 4).

نوع الكولاجين الثالث

تم التعبير عن نوع الكولاجين الثالث بشكل ضعيف في المجموعة الطبيعية ، وعرضت المناطق المحيطية المحيطة بالبوابة والأوردة الكبدية كمية صغيرة من اللون الأصفر الناعم بدلاً من الألياف المستمرة (الشكل 5 أ). في المجموعة النموذجية ، أظهرت ألياف الكولاجين حبالًا عريضة وسميكة ، مما يشير إلى تعبير قوي ، يقع بشكل أساسي في مناطق الأنسجة المدخل والألياف (الشكل 5 ب).

كانت ألياف الكولاجين من BJRJ (600 مجم / كجم) ومجموعات الجرعات المختلفة من CPhGs (125 و 250 و 500 مجم / كجم) خيطية وموزعة حول الوريد المركزي والمناطق الداخلية. بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، تم تقليل ألياف الكولاجين بشكل كبير ، وكان التلطيخ شاحبًا ورقيقًا ، وكان التلوين الكيميائي المناعي ضعيفًا (الشكل 5 ج-و). توضح هذه النتائج شبه الكمية أن الخلايا المعبر عنها إيجابيًا في مجموعات الجرعات الإيجابية والمختلفة [PCol III=0. 015 ، PCol III=0. 001 ، PColIII=0. 010 ، و PCol III=0. 037 ، على التوالي] كانت مختلفة عن تلك الموجودة في مجموعة النماذج.

TGF - 1

كان هناك القليل من التعبير عن TGIF - 1 في مجموعات العيش العادية للجرذان. اقتصر التعبير على عدد صغير من الخلايا الخلالية (الشكل 6 أ). في المجموعة النموذجية ، تم توزيع تعبير TGF - 1 على نطاق واسع في منطقة المدخل ، والمساحات الليفية ، والخلايا النجمية الكبدية ، والخلايا الالتهابية ، والجدار الجيبي ، والسيتوبلازم. أظهرت منطقة مدخل معينة تعبيرًا إيجابيًا قويًا مع تلطيخ أصفر مائل إلى البني (الشكل 6 ب)

كان هناك قدر ضئيل من التعبير في منطقة المدخل والحاجز الليفي لـ BJRJ (6 0 0 مجم / كجم) ومجموعات جرعة مختلفة من CPhGs (125 و 250 و 500 مجم / كجم). تم تقليل مدى التلوين الإيجابي في هذه المجموعات بشكل ملحوظ مقارنة مع المجموعة النموذجية. انخفض تلطيخ الخلايا الخلالية في الحاجز الليفي وسيتوبلازم الخلايا الالتهابية (الشكل 6 ج-و). أظهرت النتائج شبه الكمية أن BJRJ ومجموعات جرعة مختلفة من CPhGs [P TGF - 1=0. 001، P TGF - 1 <0.001، p="" tgf="" -="" 1="0." 009،="" ptgf="" -="" 1="0." 004="" ،="" على="" التوالي]="" كانت="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" مقارنة="" بمجموعة="">

كما ذكرنا سابقًا في المقالة ، TGF - 1 هو سيتوكين مهم في الفيزيولوجيا المرضية لتليف الكبد ، حيث يحفز إنتاج المصفوفة خارج الخلية [19]. أظهرنا أن مستوى TGF - 1 زاد في مجموعة النموذج بطريقة تتفق مع شدة تليف الكبد. كانت مستويات تعبير TGF - 1 في الكبد متوافقة مع مستويات serumTGF - 1. يشير هذا إلى أن CPhGs يمكن أن تقلل بشكل كبير من تليف الكبد بسبب تعبير TGF - 1 من خلال المشاركة في تخليق وتدهور ECM.

يمكن للتعبير عن الكولاجين من النوع الأول ونوع الكولاجين الثالث و TGF - 1 اكتشاف العملية المرضية للتليف الكبدي. انخفضت مستويات التعبير في مجموعات العلاج بشكل كبير وأوضحت أن CPhGs يمكن أن تحسن نشاط الكولاجيناز ، والحفاظ على التوازن الديناميكي لتخليق ECM وتدهور الكبد ، وبالتالي تأخير ومنع تكوين تليف الكبد.

NF-κB p65 وتعبير الكولاجين الأول بعد التدخل الدوائي في خلايا HSC-T6

من أجل توصيف إشارات التليف الكبدي ، تم تحديد جينين تنظيميين رئيسيين في الكبد من خلال اختبار RT-PCR. أظهرت البيانات أن خلايا tHSC-T6 من المجموعة الضابطة لديها مستويات أقل من NF κB ونوع الكولاجين I mRNA. على العكس من ذلك ، تسبب TGF - 1 في إحداث خلايا HSC-T6 لتنظيم NF-B (P <0. 0="" 1)="" و="" col-i="" (p=""><0.01) mrna="" ،="" بمستويات="" أعلى="" من="" هؤلاء="" في="" المجموعة="" الضابطة.="" في="" وجود="" تركيزات="" مختلفة="" من="" cphgs="" ،="" نتائج="" nf-κb="" p65="" [p="" nf-κb="0." 001="" لـ="" 100="" ميكروغرام="" مل="" ،="" p="" nf-b="0." 002="" لـ="" 75="" ميكروغرام="" مل="" ،="" p="" nf-κb="0." 007="" مقابل="" 50="" ميكروغرام="" مل="" ،="" و="" p="" nf-b="0." 012="" لـ="" 25="" ميكروغرام="" مل="" ،="" على="" التوالي]="" و="" col-i="" [p="" col-i="" {{32="" }}.="" 006،="" p="" col-i="0." 009،="" p="" col-i="0." 014،="" p="" col-i="0." 019="" ،="" على="" التوالي]="" أظهر="" تعبيرات="" مختصرة="" لهذه="" الرنا="" المرسال="" (="" الشكل="">

تحليل اللطخة الغربية لمستوى الكولاجين الأول بعد التدخل الدوائي في خلايا HSC-T6

يوضح الشكل 8 مستويات التعبير عن بروتين الكولاجين I في خلايا HSC-T6 من المجموعات التجريبية المختلفة ، وانخفض مستوى تعبير بروتين الكولاجين I بشكل كبير في مجموعات الجرعات المختلفة من CPhGs (100 ميكروغرام / مل ، 75 ميكروغرام / مل ، 50 ميكروغرام / مل ، و 25 ميكروغرام / مل) مقارنة بمجموعة TGF - 1.

مناقشة

CPhGs هو جليكوسيد فينيلثانويد معزول ومنقى من جذمور Cistanche ، والذي يستخدم كدواء عشبي صيني تقليدي. في السنوات الأخيرة ، ثبت أن CPhGshad يمتلك قدرة قوية على الوقاية من إصابات الكبد [20]. لذلك ، كنا نهدف إلى التحقق مما إذا كانت CPhGs لها تأثيرات مثبطة على تليف الكبد عن طريق التليف الكبدي الناجم عن BSA في الفئران. يستخدم BJRG بشكل شائع كدواء علاجي للتليف الكبدي في الصين. وهي مصنوعة من قذائف السلاحف. Radix PaeoniaRubra و Cordyceps Sinensis و Radix isatidis وما إلى ذلك لها تأثيرات تجديد Qi والدم ، وتخفيف التعب ، وتليين العقد. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت الدراسات السابقة أن لها وظيفة واضحة تتمثل في منع تليف الكبد المبكر ، وتثبيط تكاثر الخلايا التي تخزن الدهون ، وتقليل تخليق الكولاجين [21]. لذلك ، تم استخدام BJRG كعقار إيجابي في هذه الدراسة.

التغيرات المرضية للتليف الكبدي في الجرذان الناتجة عن حقن مساحة سطح الجسم مشابهة لتلك التي تحدث في تليف الكبد البشري [22]. تخفف مركبات CPhG اعتمادًا على الجرعة من درجة تليف الكبد وتثبط تحول HSC إلى خلايا تشبه الأرومة الليفية العضلية ، وتقليل المستويات المرتفعة لمصل ALT و AST و HA و LN و CIV و TGF - 1 ومؤشر الكبد والتعبير المكبوت بشكل ملحوظ عن الكولاجين أنا ، كولاجين 3 ، و TGF - 1 في أنسجة الكبد.

ترتبط مراحل التليف الكبدي بمستويات المصل من HA و LN و IV-C ، والتي قد تلعب دورًا في الكشف عن درجة التليف الكبدي [23] كواسمات. تم الإبلاغ عن أن HA هو المورد الرئيسي للمصفوفة خارج الخلية. سيتم تصنيع IV-C كعنصر أساسي من الغشاء القاعدي بكثرة وترسب بشكل كبير في المراحل السابقة من تليف الكبد. مستويات المصل من LN و IV-C هي مؤشرات معدل دوران الغشاء القاعدي وتظهر درجة التليف في منطقة المدخل والشعيرات الدموية الجينية [24]. يعتبر PC III علامة في تشخيص التليف الكبدي والتليف المبكر ، لكن حساسيته وخصوصياته ليست عالية ، وهناك فرق معنوي بين مختلف مراحل التليف في العديد من المراجع [24 ، 25]. حصلت هذه الدراسة على نتيجة مماثلة.

بالإضافة إلى ذلك ، تظهر ملاحظات قسم H&E و Masson المصبوغة بألوان ثلاثية أنسجة الكبد الطبيعية مع الفصيصات الكبدية والجيوب الكبدية. كان هيكل النسيج الحي في المجموعة النموذجية مضطربًا ، وتم استبدال أنسجة الكبد والجيوب الكبدية بكمية كبيرة من النسيج الضام. ومع ذلك ، لوحظ تحسن كبير في مجموعات العلاج مقارنة مع المجموعة النموذجية.

الأهم من ذلك ، يلعب التعبير من النوع الأول والكولاجين من النوع الثالث أدوارًا أساسية في تطور التليف الكبدي ، والذي يمكن أن يمنعه ويعالج التليف الكبدي. لذلك ، فإن إنتاج الكولاجين من النوع الأول والكولاجين من النوع الثالث وترسبه في أنسجة الكبد يمكن أن يكون بمثابة محدد مهم لفعالية التليف الكبدي. TGF - 1 هو أيضًا سيتوكين بروبيبروجيني مهم في إصابة الكبد وهو نشط بيولوجيًا مع إجراءات دوائية متعددة [26]. مطلوب توازن بين هذه الإجراءات للحفاظ على توازن الأنسجة. يشارك التعبير الشاذ عن TGF 1 في التسبب في أمراض الكبد [27 ، 28]. ومن المعروف أن TGF - 1 هو سيتوكين مهم يشارك في المراحل المبكرة من تليف الكبد. عوامل الأكسدة المؤكسدة TGF - 1 ، مما أدى إلى تحفيز إنتاج ECM وترسبه [29]. لذلك ، تتمثل إحدى الاستراتيجيات الفعالة لإنتاج دواء مضاد للتليف الكبدي في تحديد العوامل المضادة لـ TGF - 1. أظهر التحليل الكيميائي المناعي أن تعبيرات الكولاجين من النوع الأول ، ونوع الكولاجين الثالث ، و TGF - 1 يمكن أن تكتشف العملية المرضية للتليف الكبدي. تم تقليل تعبيرات الكولاجين من النوع الأول ، والكولاجين من النوع الثالث ، و TGF - 1 في مجموعات العلاج ، والتي كانت أقل بشكل ملحوظ في مجموعة العلاج بجرعات عالية من CPhGs على وجه الخصوص ، واقترح أن CPhGs هي نوع كولاجين فعال من النوع الأول ، ونوع الكولاجين الثالث و TGF - 1. من المفترض أن CPhGscan يحسن نشاط كولاجيناز ، ويحافظ على التوازن الديناميكي لتخليق ECM وتدهوره ، وبالتالي يؤدي إلى إبطاء ومنع تكوين تليف الكبد.

لا يمكن أن تحسن CPhGs فقط من التليف الكبدي الناجم عن BSA في الفئران ولكن قد تترافق أيضًا مع تثبيط تنشيط HSC في المختبر. يُفترض أن تنشيط HSC يمثل الخطوة الحاسمة في تكوين الألياف. في هذه الدراسة ، أوضحت النتائج أن إعطاء CPhGs من 25 إلى 100 ميكروغرام / مل يخفف بشكل ملحوظ من انخفاض NF-κB p65 ، وتعبير الكولاجين I mRNA ، وتعبير بروتين الكولاجين I في HSC.

يلعب NF-B دورًا مهمًا في تعديل الاستجابة المناعية للعدوى أو المنبهات [30]. يمكن أن يؤدي تراكم NF-B في خلايا الكبد إلى تجنيد السيتوكينات / الوسطاء الالتهابيين ، وبالتالي تحفيز نمو التليف [31 ، 32]. علاوة على ذلك ، يعتبر الكولاجين أيضًا مؤشرًا حساسًا يعكس مستوى التليف ويمثل حوالي 50 بالمائة من إجمالي البروتين في الكبد الليفي [33]. نتيجة لذلك ، افترضنا أن الآلية الجزيئية ضد التليف الكبدي مرتبطة بتثبيط CPhGs بوساطة تعبير NF-B ، حيث تساهم الفائدة في الأدوار التآزرية لتخفيف السمية المناعية والتوتر الالتهابي في الأنسجة الحية المصابة بآفة BSA ، مما يؤدي إلى مزيد من تصحيح وظائف خلل التمثيل الغذائي لتحسين الأداء.

الاستنتاجات

في الختام ، تشير دراساتنا إلى أن CPhGs تخفف بشكل كبير من مدى التليف الكبدي الناجم عن BSA في الفئران. قد تكون آليتها جزئيًا على الأقل بسبب التأثير المثبط لـ CPhGs على تكوين ECM وتحفيز تدهور ECM ، و / أو عن طريق التثبيط المباشر لتخليق الكولاجين typeI ، نوع الكولاجين III ، والتعبير عن TGF {{0 }}. لذلك ، توقعنا أنه يمكن استخدام CPhGs في منتجات الرعاية الصحية أو في الأدوية السريرية للوقاية من تليف الكبد البشري. الدراسات المستقبلية مطلوبة لتحديد فعالية CPhGs كدواء فعال مضاد للتليف الكبدي.

الاختصارات

CPhGs: anol glycosides من cistanche ؛

مساحة سطح الجسم: ألبومين المصل البقري.

HSC-T6: الخلايا النجمية الكبدية ؛

ارتفاع: هيدروكسي برولين.

BJRG: أقراص CompoundBiejiarangan ؛

TGF - 1: تحويل عامل النمو 1 ؛

البديل: Alanineaminotransferase ؛

AST: Aspartate aminotransferase ؛

HA: حمض الهيالورونيك.

LN: لامينين ؛ PC III: النوع الثالث procollagen ؛

IV-C: النوع الرابع من الكولاجين ؛

NF-B: عامل نووي kappa-light-chain مُحسِّن للخلايا B المنشطة ؛

RT-PCR: تفاعل سلسلة إنزيم النسخ العكسي والبوليميراز ؛

SDS-PAGE: الرحلان الكهربائي جل دوديسيل كبريتات الصوديوم بولي أكريلاميد.

تضارب المصالح

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم المصالح المتنافسة

مساهمات المؤلفين

صممت TL و JZ و SPY و LM و MT و SLZ التجارب وصممتها ، وحللت PY و TL و JZ البيانات. كتب SPY و JZ المخطوطة. راجع TL و LM و JZ المخطوطة. كل الكتاب قراءة وافقت على المخطوط النهائي.

إعتراف

تم دعم هذا البحث من قبل مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية في الصين (81260624). يود المؤلفون التعبير عن خالص الشكر للبروفيسور تاو ليو على التحسينات التي اقترحها لكتابة هذه الورقة.

تفاصيل المؤلف

1Department of Toxicology، School of Public Health، Xinjiang Medical University، No. 393 Xinyi Road، Urumqi 830011Xinjiang Uyghur AutonomousRegion، China. 2 مختبر رئيسي لطب الأويغور ، معهد المواد الطبية في شينجيانغ ، أورومتشي 830004 ، الصين. 3 لا. 140 طريق شينهوا الجنوبي ، منطقة تيانشان ، أورومتشي 830000 منطقة شينجيانغ أويغور المتمتعة بالحكم الذاتي ، الصين.

انقر هنا للتحققسيستانشتوبولوسامنتجات

مراجع
1. كوهين نفتالي م ، فريدمان م. الوضع الحالي للعلاجات الجديدة المضادة للالتهاب في المرضى الذين يعانون من أمراض الكبد المزمنة. هناك أدف جاسترونتيرول. 2011 ؛ 4 (6): 391-417.
2. Puche JE، Saiman Y، Friedman SL. الخلايا النجمية الكبدية وتليف الكبد. كومبر فيسيول. 2013 ؛ 3 (4): 1473-92.
3. Hernandez-Gea V، Friedman SL. التسبب في تليف الكبد. Annu القس باتول. 2011 ؛ 6: 425-56.
4. Sohrabpour أ. أ ، محمد نجاد م ، مالك زاده ر. مراجعة المقال: قابلية عكس تليف الكبد. هناك فارماكول غذاء. 2012 ؛ 36 (9): 824–32.
5. Raven PH ، Zhang LB ، Ventenat O. أكاديمية العلوم الصينية. الطبعة 23. الصين: لجنة تحرير مجلة Flora of China ؛ 2013. ص. 1-16.
6. لجنة دستور الأدوية الصينية التابعة لوزارة الصحة بجمهورية الصين الشعبية. دستور الأدوية الصيني ، الجزء 1. الصين: دار نشر الصناعة الكيميائية ؛ 2010. ص. 126.
7. Yan GH ، Tian JH ، Long BW ، Li N. تقدم البحث فيفينيليثانويدجليكوسيداتمنسيستانشتوبولوسا. سنترال ساوث فارم. 2012 ؛ 10: 692-5.
8. Li J، Huang D، He L. Effect of Rou Cong Rong (Herba Cistanches Deserticolae) على السمية الإنجابية في الفئران التي يسببها غليكوزيد Leigongteng (Radix et Rhizoma Tripterygii). J Tradit Chin Med. 2014 ؛ 34 (3): 324–32.
9. Xing Y و Liao J و Tang Y و Zhang P و Tan C و Ni H وآخرون. ACE ، ومثبطات تراكم الصفائح الدموية من Tamarix hohenackeri Bunge (النبات المضيف لـهيرباسيستانش) تنمو في شينجيانغ. فارماكوجن ماج. 2014 ؛ 10 (38): 111-7.
10. Jia Y و Guan Q و Jiang Y و Salh B و Guo Y و Tu P وآخرون. تحسين التهاب القولون الناجم عن كبريتات ديكستران بالصوديوم في الفئران عن طريق مستخلص إشنكوسايد المخصب منسيستانشتوبولوسا. Phytother Res. 2014 ؛ 28 (1): 110-9.
11. Wong HS، Ko KM. يحفز Herba Cistanches دورة الأكسدة والاختزال الجلوتاثيون الخلوية بواسطة أنواع الأكسجين التفاعلية المتولدة من تنفس الميتوكوندريا في خلايا القلب H9c2. فارم بيول. 2013 ؛ 51 (1): 64-73.
12. Zhang SJ، Liu L، Yu JY. ARP: طريقة RP-HPLC للتحديد المتزامن لإشنكوسايد وأكتيوسيد في هيربي سيستانش. تشين فارم J 2004 ؛ 39 (10): 740-741.
13. Zhu QG ، Fang BW ، Zhu QN ، Wu HS ، Fu QL. دراسة نموذج حيواني تليف الكبد المناعي الناجم عن الزلال المصل البقري. تشين جي باتول. 1993 ؛ 22: 121-2.
14. Qin DM، Wen ZP، Nie YR، Yao GM. تأثير مستخلصات Cichorium glandulosum على التليف الكبدي المستحث CCl 4-. الهلال الأحمر الإيراني ميد J.2013 ؛ 15 ، e10908.
15. Niu HM ، Zeng DQ ، Long CL ، Peng YH ، Wang YH ، Luo JF ، et al. Clerodane diterpenoids و flavonoids prenylated من Dodonaea viscosa. J Asian Nat Prod Res. 2010 ؛ 12 (1): 7-14.
16. Li WW، Song XW، Wang HW، Shen BS، Wang QC. الارتباط بين NF-B والمراحل المرضية لتليف الكبد في مرضى التهاب الكبد المزمن B. Chin J Immunol. 2013 ؛ 29 (3): 251-4.
17. تشانغ غل ، شي إكس إف ، ران سي كيو ، شو إم ، تشو ZJ. آثار الصابونين الكلي لباناكس نوتوجينسنغ ضد تليف الكبد في الجرذان. Acta Academiae Medicinae Militaris المستوى الثالث. 2007 ؛ 29: 2212-4.
18. Rossi O ، Maggiore L ، Necci F ، Koberling O ، MacLennan CA ، et al. مقارنة المقايسات اللونية مع التحليل الكمي للأحماض الأمينية لتقدير البروتين الكمي للوحدات المعممة لمولدات المضادات الغشائية (GMMA). مول Biotechnol. 2015 ؛ 57 (1): 84-93.
19. دانغ SS ، لي YP. التقدم في فهم دور تحويل عامل النمو - 1 في التسبب في تليف الكبد. شيجي هوارين شياوهوا زازهي. 2010 ؛ 18: 1631-6.
20. Zhao J ، Liu T ، Ma L ، Yan M ، Zhao Y ، Gu Z ، وآخرون. التأثير الوقائي للأكتيوسيد على إصابة الكبد المناعية التي يسببها Bacillus Calmette-Guerin بالإضافة إلى عديد السكاريد الدهني. بلانتا ميد. 2009 ؛ 75 (14): 1463-149.
21. يانغ FR ، فانغ بي دبليو ، لو شبيبة. آثار حبوب فوفانغ بيجيا روانجان على التليف الكبدي في الجسم الحي وفي المختبر. العالم ي جاسترونتيرول. 2013 ؛ 19 (32): 5326–33.

22. Liu P، Fang BW، Liu C. دور تحويل عامل النمو 1 ومستقبله في تكوين ليفي الكبد الناجم عن المناعة في الفئران وتأثير عديد السكاريد كورديسيبس عليها. تشين ي هيباتول. 1998 ؛ 6: 232-3.

23. Xu GG ، Luo CY ، Wu SM ، Wang CL. العلاقة بين التدريج الكبديالتليف ومستويات الكيمياء الحيوية في الدم. HBPD INT. 2002 ؛ 1: 246-8.أنت وآخرون. مجلة دارو للعلوم الصيدلية (2015) 23:52 صفحة 12 من 13

24. Liu J، Wang JY، Lu Y. علامات تليف المصل في تشخيص تليف الكبد. ذقنJ متدرب ميد. 2006 ؛ 145: 475-7.

25. Li CZ، Wan MB، Zeng MD، Mao YM، Fan ZP، Cao AP، et al. دراسة أولية للجمع بين العوامل غير الباضعة في تشخيص تليف الكبد. تشين ي هيباتول. 2001 ؛ 9: 261-3.

26. Chen YL، Li ZY. العلاقة بين TGF - 1 و PDGF-BB و CTGF والتهاب الكبد المزمن B المصحوب بالتليف. تشين جي ديفيك كومبل كاس. 2010 ؛ 9: 19-20.

27. Sferra R ، Vetuschi A ، Catitti V ، Ammanniti S ، Pompili S ، Melideo D ، et al. تعمل مستخلصات Boswellia serrata و Salvia miltiorrhiza على تقليل التليف الكبدي الناجم عن DMN في الفئران عن طريق تقليل تنظيم TGF-beta1. علوم فارماكول ميد القس يور. 2012 ؛ 16 (11): 1484-98.
28. Liu L و Li XM و Chen L و Feng Q و Xu LL و Hu YY وآخرون. تأثير Gypenosides على مسار TGF - 1 / Smad في تليف الكبد الناجم عن رابع كلوريد الكربون في الفئران. المتدرب J Integr Med. 2013 ؛ 1: 1-6.
29. Zhang BJ ، Xu D ، Guo Y ، Ping J ، Chen LB ، Wang H. الحماية بواسطة آلية مضادة للأكسدة من البربارين ضد تليف كبد الفئران الناجم عن عوامل كبدية متعددة. كلين أكسب فارماكول فيسيول. 2008 ؛ 35 (3): 303-9.
30. Tornatore L ، Thotakura AK ، Bennett J ، Moretti M ، Franzoso G. مسار إشارات العامل النووي كابا ب: دمج التمثيل الغذائي مع الالتهاب. اتجاهات خلية بيول. 2012 ؛ 22 (11): 557-66.
31. Luedde T، Schwabe RF. NF-B في إصابة ربط الكبد ، والتليف ، وسرطان الخلايا الكبدية. نات القس Gastroenterol Hepatol. 2011 ؛ 8 (2): 108-18.
32. Petrasek J، Csak T، Szabo G. مستقبلات شبيهة بأمراض الكبد. أدف كلين تشيم. 2013 ؛ 59: 155 - 201.
33. Wang Y ، Cheng M ، Zhang B ، Nie F ، Jiang H. المكملات الغذائية لعصير التوت تعزز التعبير الكبدي عن الميتالوثيونين وتضعف تليف الكبد في الفئران. بلوس واحد. 2013 ؛ 8 ، e58659.