حمض البروبيونيك الذي تنتجه التخمير Cutibacterium Acnes يخفف من تخليق الميلانين

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

Hsin ‑ Jou Kao1 و Yan ‑ HanWang2 و Sunita Keshari3 و John JacksonYang3 و Shinta Simbolon1 و Chun ‑ Chuan Chen1 و Chun ‑ Ming Huang1 *

يؤدي التشعيع فوق البنفسجي إلى تراكم الميلانين ، والذي يمكن تقليله باستخدام منتجات التبييض الكيميائية. ومع ذلك ، فقد دفعت مخاوف السلامة المرتبطة بهذه المنتجات إلى البحث عن بدائل طبيعية وغير ضارة. هدفت هذه الدراسة إلى التعرف على التركيبة الحمضية الطبيعية لتقليل تصبغ الجلد. كان حمض البروبيونيك المستقلب (CH3CH2COOH ، PA) هو الأحماض الدهنية الأكثر وفرة في الترشيح من تخمير Pluronic F68 (PF68) لحب الشباب Cutibacterium acnes (C. مستقبلات الأحماض الدهنية الحرة 2 (FFAR2). علاوة على ذلك ، لم يغير العلاج بـ 4 ملي مولار من تكاثر الخلايا الصباغية ، مما يشير إلى أنه حل فعال لفرط التصبغ ، ولا يسبب أي ضرر خلوي. لوحظ أيضًا انخفاض نشاط الخلايا الصباغية الإيجابية لـ DOPA ونشاط التيروزيناز في أنسجة جلد أذن الفئران المحقونة بمزيج من C. مصدر الكربون. بالإضافة إلى ذلك ، لم تؤثر PA على نمو البكتيريا الأم ، C. acnes ، وبالتالي فهي مستقلب تخمير قوي لا يخل بتوازن ميكروبيوم الجلد.

يعمل الجلد كحلقة وصل بين جسم الإنسان والبيئة الخارجية ويوفر دفاعًا ضد مسببات الأمراض والأضرار الجسدية والأشعة فوق البنفسجية 1. إذا تعرض جلد الإنسان للإفراط في التعرض للأشعة فوق البنفسجية (UVR) التي تؤثر على وظيفة وبقاء العديد من أنواع الخلايا ، مما يؤدي إلى التهاب الجلد ، والذي يمكن أن يؤدي إلى الإصابة بالسرطان. يعمل تلف الحمض النووي الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية على تنشيط إشارات الإصلاح الخلوية لإنتاج الميلانين في الخلايا الصباغية ، مما يؤدي إلى تصبغ الجلد. يتم استعمار سطح جلد الإنسان السليم من خلال بيئة متنوعة من الكائنات الحية الدقيقة ، وكثير منها غير ضار مثل المتعايشات أو مسببات الأمراض الانتهازية. البروبيوتيك هي أمثلة شائعة للعلاج البكتيري مع إمكانية الحماية من أشعة الشمس عن طريق إبطاء علامات شيخوخة الجلد وتخفيف آثار التهاب الجلد الناتج عن الأشعة فوق البنفسجية. على سبيل المثال ، تمنع بكتيريا حمض اللاكتيك بروبيوتيك بشكل خاص الالتهابات التي تسببها الأشعة فوق البنفسجية ، والتفاعلات التحسسية ، وتثبيط المناعة في الجلد. علاوة على ذلك ، فإن قدرة Cutibacterium acnes (C. acnes) ، وهي بكتيريا سائدة في ميكروبيوم الجلد ، على إنتاج البورفيرين استجابةً للأشعة فوق البنفسجية تجعلها علامة بيولوجية رئيسية نظرًا لدورها في حماية ومنع اختلال التوازن. ذات فائدة عملية 13. كشفت الدراسات أن ترشيح الخميرة (GFF) يقلل من الميلانين في خلايا الورم الميلانيني البشري ، وبالتالي يقلل من تصبغ الجلد. الأحماض الدهنية الحرة (FFA) لها تأثيرات تنظيمية ملحوظة على تكوين الميلانين ونشاط التيروزيناز المكبوت في خلايا سرطان الجلد B16F10 المستزرعة. تمنع معظم خيارات العلاج لفرط التصبغ تحويل التيروزين إلى الميلانين ، الذي يعمل كمثبط للتيروزيناز ، وهو إنزيم تنظيمي رئيسي مطلوب للتخليق الحيوي للميلانين. في الآونة الأخيرة ، أثار الاستخدام المكثف لعوامل تبييض البشرة ، مثل مركبات الفينول والزئبق ، في تركيبات مستحضرات التجميل مخاوف خطيرة تتعلق بالسلامة 17. علاوة على ذلك ، فإن FFAR2 (المعروف أيضًا باسم GPR43) موجود في مجموعة متنوعة من الأنسجة مثل نخاع العظام والطحال والجلد الطبيعي وهو هدف دوائي واعد للسمنة والتهاب القولون وبعض الاستجابات الالتهابية. FFAR2 هو مستقبل للأحماض الدهنية قصيرة السلسلة (SCFAs) بسلسلة أطوال أقل من ستة ذرات كربون مثل الأسيتات ، الزبدات ، والبروبيونات ، أقوى ناهض لـ FFAR220،21. في السابق ، أظهرنا أن ضربة قاضية في الجسم الحي لـ FFAR2 في جلد الفأر منعت توسط حمض الزبد لتهيج الأشعة فوق البنفسجية.

C. acnes is abundant on the human skin surface accounting for>60٪ من البكتيريا 2. علاوة على ذلك ، فإن حمض البروبيونيك (PA) ، وهو مستقلب التخمير من C. يمكن أن تمنع بكتيريا بروبيوتيك المتعايشة مع الجلد نمو USA300 من خلال تخمير بولي (إيثيلين جلايكول) دايم ميثاكريلات كبادئ تخمير انتقائي. PF68 ، بوليمر قائم على PEG هو حامل جل ثابت للعوامل المضادة للميكروبات ، مما يزيد من قابلية الذوبان السطحي للدواء ، وعادة ما يستخدم في علاج الجروح المصابة دون أي آثار جانبية ملحوظة. في هذه الدراسة ، قررنا أن PF68 كمركب مشتق من البوليمر هو عامل آمن وفعال ومن المحتمل أن يؤدي استخدام المستقلبات من تخمر PF68 بواسطة حب الشباب المتعايش للجلد إلى تثبيط فرط تصبغ الجلد الناتج عن الأشعة فوق البنفسجية أو تكون الميلانين.

فوائد cistanche tubolosa: يمنع تكون الميلانين في الجلد.

طُرق

بيان الأخلاق.

تم إجراء هذه الدراسة بشكل صارم مع بروتوكول لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسية (IACUC) المعتمد في الجامعة الوطنية المركزية (NCU) ، تايوان (NCU -106-016) وبما يتوافق مع إرشادات الوصول (https: // arriveguidelines .org /). تم التضحية بفئران معهد أبحاث السرطان (إناث تتراوح أعمارهن بين 8-9 أسابيع ؛ المركز الوطني لحيوانات المختبر ، تايبيه ، تايوان) باستخدام ثاني أكسيد الكربون في صندوق مغلق. تم تنفيذ جميع الطرق وفقًا للإرشادات واللوائح ذات الصلة

ثقافة البكتيرية.

تمت تربية C. acnes (ATCC 6919) على Reinforced Clostridium Medium (RCM ، أكسفورد ، هامبشاير ، إنجلترا) تحت ظروف لاهوائية باستخدام Gas-Pak (BD ، Sparks ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية). تمت زراعة البكتيريا عند درجة 37 حتى مرحلة النمو اللوغاريتمي. تم حصاد الكريات البكتيرية بالطرد المركزي عند 5 ، 000 × جم لمدة 10 دقائق ، وغسلها في محلول ملحي بالفوسفات (PBS) ، ثم علقت في PBS أو RCM لمزيد من التجارب.

تخمر البكتيريا.

تم حضانة C. عند 37 درجة. تم تضمين PF68 وحده في TSB كعنصر تحكم. خدم تي 0.002 في المئة (وزن / حجم) أحمر الفينول (سيغما) في TSB كمؤشر تخمير. يشير تغير اللون من الأحمر البرتقالي إلى الأصفر إلى حدوث التخمر البكتيري والذي تم الكشف عنه بالكثافة الضوئية عند 560 نانومتر (OD560).

كروماتوغرافيا الغاز ‑ تحليل مطياف الكتلة (GC-MS).

تم تحضين C. acnes (105 CFU / mL) في TSB (10 مل) في وجود 2 بالمائة PF68. بعد 1- يوم تم الطرد المركزي للوسائط المخمرة عند 5000 جم لمدة 10 دقائق وتم استخدام المادة الطافية للكشف عن SCFAs باستخدام البروتوكول المنشور مسبقًا. تم قياس مستويات Te لحمض الخليك (AA) ، PA ، وحمض الزبد (BA) ، وحمض الزبد الأيزو (I-BA) في وسط التخمير بواسطة منحنى معايرة مصنوع من ستة مستويات غير صفرية باستخدام معيار اختبار FFA ( Restek Corporation ، Bellefonte ، PA ، USA) المخففة إلى 500- و 1 و 000- و 2 و 000- و 5 000- و 10 000- يطوى.

زراعة خلايا سرطان الجلد B16F10.

تم تقديم خط خلايا سرطان الجلد B16F10 من قبل الدكتور ريتشارد جالو ، جامعة كاليفورنيا سان دييغو ، الولايات المتحدة الأمريكية ، والدكتور تشينج تشينج يي ، جامعة تشانغ جونج للعلوم والتكنولوجيا ، تايوان. تمت زراعة الخلايا في Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM ، Life Technologies ، Carlsbad ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) مع 10 بالمائة من مصل بقري جنيني (FBS ، تقنيات الحياة) و 1 بالمائة بنسلين-ستربتومايسين (تقنيات الحياة) عند 37 درجة و 5 بالمائة ثاني أكسيد الكربون. نمت الخلايا حتى التقاء 70-80 في المائة ثم تمت زراعتها فرعية بحمض التربسين-إيثيلين أمينيترا أسيتيك (EDTA ، تقنيات الحياة).

النسخ العكسي ‑ تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي (RT ‑ qPCR).

تم استخدام RT-qPCR لدراسة التعبير الجيني للتيروزيناز في خلايا سرطان الجلد B16F10 المعالجة بـ 4 ملي مولار PA لمدة 48 ساعة. تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي الخلوي باستخدام Quick-RNA MiniPrep Kit (Zymo Research ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، متبوعًا بنسخ عكسي إلى (كدنا) باستخدام مجموعة توليف iScript (cDNA) (Bio-Rad ، Hercules ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) وتضخيمها بواسطة RT-qPCR في نظام ABI 7300 (Applied Biosystems، Waltham، MA، USA). تم استخدام عتبة الدورة المقارنة (ΔΔCT) لتحديد القياس الكمي للتعبير الجيني. تم استخدام المستوى الجيني لـ glyceraldehyde 3- phosphate dehydrogenase (GAPDH) لتطبيع جين التيروزين كيناز. التمهيدي لـ tyrosinase و GAPDH هو 5′-TGACAAAGCCAAAACCCCCA -3 ′ (إلى الأمام) ؛ 5′-TTGTTCAAAAATACTTCCAGTGTGT -3 ′ (عكسي) و 5′-TGTGTCCGTCGRGGATCTGA -3 ′ (للأمام) ؛ 5′-GATGCCTGCTTCACCACCTT3 ′ (عكسي).

نشاط التيروزيناز الخلوي بعد ضربة قاضية للجين FFAR2.

تم زرع خلايا سرطان الجلد B16F1 0 بكثافة 5 × 104 خلية / بئر في 24- أطباق جيدة. علاوة على ذلك ، عولجت الخلايا بمضاد انتقائي لـ FFAR2 GLPG0974 (0.1 ميكرومتر ، GLPG) و PA (4 ملي مولار) وحضنت عند 37 درجة في 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة. تم تجريب الخلايا وإزالتها باستخدام عازلة RIPA (Thermo Fisher Scientific ، NJ ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تجميد الخلايا المتحللة عند -80 درجة وتم إذابتها مرتين متبوعة بالطرد المركزي عند 12 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق. تم خلط المادة الطافية مع 1 ميكروغرام / مل من Levodopa (L-DOPA ، Sigma) بنسبة 2: 1 في صفيحة بئر 96- ، تم تحضينها عند درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة ساعة واحدة وكان OD عند 475 نانومتر. كشف 27.

ما هو cistanche المستخدمة: يقلل من نشاط التيروزيناز

وضع العلامات BrdU.

نمت خلايا سرطان الجلد B16F1 0 على شرائح حجرة البئر 8- (Thermo Fisher Scientific) في DMEM بنسبة 1 0 بالمائة من FBS والبنسلين والستربتومايسين حتى تحقق التقاء 70 بالمائة. تمت إضافة Bromodeoxyuridine (10 ميكرومتر ، BrdU ، ACROS ، نيو جيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية) إلى وسائط الثقافة جنبًا إلى جنب مع 4 ملي مولار PA. تمت إضافة BrdU مع PBS في وسائل الإعلام الثقافية كعنصر تحكم. بعد 24 ساعة ، تم إصلاح الخلايا بنسبة 4 في المائة من perfluoro Roxy (PFA ، Sigma) ثم تم نفاذها مع 0.2 بالمائة Triton X -100 (Sigma) لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، عولجت الخلايا بـ 2 N HCl عند 37 درجة لمدة 25 دقيقة ، وتم تحييدها باستخدام HCl مع محلول عازلة 0.1 M بورات (درجة الحموضة 8.5) لمدة 10 دقائق ، وتم حظرها باستخدام عازل مانع قبل الحضانة ضد الأجسام المضادة BrdU (Abcam ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) بين عشية وضحاها والحمار ضد الماعز Alexa Fluor 568 IgG (H plus L) (تقنيات الحياة) كأجسام مضادة ثانية لمدة ساعة واحدة عند 4 درجات. تمت مواجهة النوى بـ 4 ، 6- ديميدينو 2- فينيليندول (DAPI ، سيجما). تم الحصول على الصور باستخدام برنامج cellSens المتصل بمجهر Olympus BX63.

تم إنشاء نماذج الفئران عن طريق التعرض للأشعة فوق البنفسجية.

كانت نماذج الفئران مفيدة في تعزيز فهم الأدوار العديدة لـ UVR28. تزيد الأشعة فوق البنفسجية من الخلايا الصبغية الإيجابية لـ DOPA في الجلد ، وتحديداً في موقع التعرض. تم وصف بروتوكول معالجة حقن C. acnes في آذان الفئران في دراستنا السابقة 3 (لا يتحدث هذا المرجع عن حقن C. acnes). تم حقن آذان Te لفئران ICR داخل الأدمة باستخدام C. {10}} C، Spectronics Corp.، Westbury، NY، الولايات المتحدة الأمريكية) لمدة دقيقتين يوميًا لمدة 3 أيام. أُدرجت آذان الفأر المحقونة ببرنامج تلفزيوني أو PF68 متبوعًا بالتعرض للأشعة فوق البنفسجية كعنصر تحكم. في مجموعة أخرى من الفئران التجريبية ، تم تطبيق آذان بـ 4 ملي مولار من PA متبوعة بالتعرض للأشعة فوق البنفسجية ، مع PBS كعنصر تحكم.

siRNA - إسكات الجينات بوساطة FFAR2.

من أجل إسكات جين FFAR2 ، استخدمنا siRNA المعدل كيميائيًا الذي يستهدف مستقبلات FFAR2 (FFAR2 siRNA) ، والتحكم السلبي في siRNA (NC siRNA) ، والتحكم بدون الحقن (C) ، والتي تم الحصول عليها من شركة GenePharma Co. (شنغهاي، الصين). تسلسل قليل النوكليوتيد الخاص بهم هو siFFAR2: حبلا الإحساس ، 5′-CCGGUGCAGUACAAGUAUTT -3 ′؛ حبلا ضد الشعور ، 5′-AUAACUUGUACUGCACCGGTT -3 ′. التحكم: حبلا الإحساس ، 5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT -3 ′ ؛ حبلا ضد الشعور ، 5′-ACGUGACACGUUCGGAGAATT -3 ′. تم تسليم هذه siRNAs المعدلة كيميائيًا كل يوم لمدة 3 أيام عن طريق الحقن داخل الأدمة في آذان الفئران باستخدام إبرة مجهرية (2 مجم / كجم من وزن الفئران). من اليوم الثاني ، ضعيه مع 2 بالمائة من PA والأشعة فوق البنفسجية لمدة 3 أيام. المعالجة المسبقة لـ Te لحقن siRNA في الماوس كما هو موضح في المرجع. عشرة ، تم استئصال آذان الفئران وتلطيخها في اليوم الرابع.

النشاف الغربي.

تم حقن آذان الفئران باستخدام FFAR2 المعدل كيميائيًا والتحكم في siRNAs متبوعًا بالتطبيق مع 2 في المائة من التعرض PA و UVB لمدة 3 أيام. في اليوم الثالث ، تم قطع آذان الفئران وتجانسها ثم فصلها باستخدام محلول RIPA (Thermo Fisher Scientific). تم تعريض محلول الخلية (30 ميكروغرام) إلى هلام SDS-PAGE بنسبة 10 بالمائة ، والذي تم نقله بعد ذلك إلى غشاء بولي (فلوريد فينيلدين) (PVDF) (Sigma) وتم حظره بنسبة 5 بالمائة (وزن / حجم) من الحليب الخالي من الدسم قبل الحضانة طوال الليل باستخدام الأجسام المضادة الأولية لـ FFAR2 Rabbit PolyAb (Proteintech ، Rosemont ، IL ، الولايات المتحدة الأمريكية) بدرجة 4 أو -كتين (1: 1 ، 000 ؛ Cusabio Technology ، هيوستن ، تكساس ، الولايات المتحدة الأمريكية). تبع ذلك العلاج بالأجسام المضادة الثانوية المضادة للأرانب المقترنة ببيروكسيديز الفجل (1: 5000) (Thermo Fisher Scientific) لمدة ساعة واحدة. تم اكتشاف نطاقات البروتين باستخدام كاشف الكشف الكيميائي (Thermo Fisher Scientific) ونظام التصوير Omega Lum C (Gel Co. ، سان فرانسيسكو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم إجراء نطاقات البروتين باستخدام برنامج ImageJ.

عد الخلايا الصباغية.

تمت إزالة الغضاريف من الماوس يدويًا وتم نقع أنسجة الجلد في محلول ثيوسيانات الأمونيوم (سيغما) عند 37 درجة لمدة 2 0 دقيقة. تم تقشير طبقات البشرة والقاعدية من باقي أنسجة الجلد ، وتم تلطيخ الخلايا الصباغية عن طريق الغمر في 0. في أنسجة الجلد مجهريًا وفقًا لبروتوكول منشور مسبقًا.

تحاليل احصائية.

تم إجراء تحليل البيانات عن طريق اختبار t غير المقترن باستخدام برنامج Prism تمت الإشارة إلى مستويات Te ذات الدلالة الإحصائية على النحو التالي: * P<0.05,><0.01,><0.001, and="" ns="non-significant." the="" mean±standard="" deviation="" (sd)="" for="" at="" least="" three="" independent="" experiments="" except="" for="" two="" independent="" western="" blotting="" analyses="" for="" fig.="" 4c="" was="" displayed.="" animal="" experiments="" were="" performed="" with="" at="" least="" three="" animals="" per="" treatment="">

cistanche tubolosa

نتائج

C. acnes يحث على تخمير PF68.

أظهرت الدراسات السابقة تخمير البروبيوتيك الجلدي لتحريض إنتاج SCFA في وجود مركبات كمصدر للكربون. للتحقق مما إذا كان C. acnes يمكن أن يخمر PF68 ، تم تحضين C. في وسائط TSB المحتضنة بالبكتيريا وحدها ، تغير لون الفينول الأحمر من الأحمر إلى البرتقالي بسبب التكاثر البكتيري ، بينما في وسائط TSB التي تحتوي على البكتيريا و PF68 ، تغير لون الفينول الأحمر إلى أصفر باهت مع انخفاض في درجة الحموضة مما يشير إلى استخدام PF68 كـ مصدر الكربون للتخمير (الشكل 1 أ). علاوة على ذلك ، أظهر OD560 لأحمر الفينول انخفاضًا كبيرًا في قيمة الأس الهيدروجيني في وسط TSB المحتوي على البكتيريا و PF68 (الشكل 1 ب) مقارنةً بالبكتيريا أو PF68 وحده. تم تحديد Te SCFAs الموجودة في خميرة C. ).

الشكل 1. التخمير البكتيري مع البوليمر رافقه انخفاض في درجة الحموضة داخل الخلايا.

التأثير المختبري لـ PA على إنتاج الميلانين عبر PA-FFAR2.

Fatty acids modulate the degradation of tyrosinase, a crucial enzyme involved in melanin biosynthesis in melanocytes and melanoma cells31. Therefore, to detect the in vitro effect of PA on melanin synthesis, B16F10 melanoma cells were treated with 4 mM PA for 48 h, with the decreased expression of the tyrosinase in PA treated melanoma cells compared to the control (Fig. 2A). The immunostaining of PA-treated melanoma cells after BrdU labeling showed that PA did not alter the proliferation of melanoma cells (Fig. 2B). Furthermore, the effect of PA and AA, two highly expressed SCFAs in the fermentation filtrate (Fig. 1D)32, on melanin production was assessed in melanoma cells, with PA causing a>انخفاض مضاعف في إنتاج الميلانين مقارنة بـ AA (الشكل 2C). تنظم SCFAs ، مثل PA و AA ، وظائفها من خلال التفاعل مع FFAR2 و FFAR3 ، مع كون PA من بين أقوى SCFA لكل من هذه المستقبلات. بالنظر إلى تنظيم PA من خلال تفاعله مع FFAR2 ، فإن حظر إرسال إشارات هذا المستقبل باستخدام مثبط انتقائي يمكن أن يكون نهجًا مفيدًا لتقييم دور PA في تنظيم تكوين الميلانين. لم يتغير نشاط التيروزيناز الخلوي عن طريق منع FFAR2 باستخدام GLPG المضاد الانتقائي لـ FFAR2 قبل العلاج بـ PA وانخفض بدون GLPG على عكس المجموعة الضابطة (الشكل 2D). أظهرت هذه النتائج الدور الفعال لـ PA-FFAR2 في توهين محتوى الميلانين عن طريق تثبيط نشاط التيروزيناز كيناز في خلايا الورم الميلانيني مع تكاثر الخلايا دون تغيير.

الشكل 2. آثار تي للتعبير الجيني التيروزينيز وتكاثر الخلايا في خلايا الورم الميلانيني بعد علاج PA.

مزيج من C. acnes و PF68 يثبط عمل الخلايا الصباغية المستحثة بالأشعة فوق البنفسجية في آذان الفأر.

ثبت أن التطبيق الموضعي لمستخلصات التخمير أو الأحماض الدهنية يقلل من فرط تصبغ الجلد الناتج عن الأشعة فوق البنفسجية من خلال تنظيم تدهور التيروزيناز. أظهرت الدراسات السابقة أن تكون الميلانين بعد التعرض للأشعة فوق البنفسجية يرجع إلى تنشيط الخلايا الصباغية العاملة في البشرة أو الأدمة. بعد أن أثبتنا أن PA باعتباره SCFA رئيسيًا من C. تعرضت آذان Te لفئران ICR للأشعة فوق البنفسجية مرة كل يومين لمدة 3 أيام متزامنة مع حقن C. acnes و PF68. تم تضمين الحقن باستخدام PBS أو C. acnes أو PF68 وحده كعناصر تحكم. تم تقشير طبقات البشرة والقاعدية من أنسجة الجلد في أذن الفأر وكانت الخلايا الصباغية ملطخة بـ L-DOPA. كانت هناك زيادة معنوية في عدد الخلايا الصباغية بعد التعرض للأشعة فوق البنفسجية ، مع عدم وجود تغيير بعد الحقن باستخدام C. acnes أو PF68 وحده. ومع ذلك ، تم الكشف عن انخفاض كبير في عدد الخلايا الصباغية إيجابية DOPA في مجموعات التعرض للأشعة فوق البنفسجية UVB بعد العلاج بمزيج من C. acnes و PF68 (الشكل 3 أ).

الشكل 3. تحريض الخلايا الصباغية بواسطة UVB وتثبيطها بعلاجات مختلفة.

تحسين الخلايا الصباغية العاملة المستحثة بالأشعة فوق البنفسجية في أذن الفأر بواسطة PA ، وهو مستقلب تخمر حب الشباب C.

تم تقييم تأثير التطبيق المباشر للسلطة الفلسطينية على تكوين الميلانين المستحث بالأشعة فوق البنفسجية. تم تخفيض فرط التصبغ الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية وتعبير التيروزيناز في جلد أذن الفأر في المجموعة الضابطة بشكل ملحوظ بعد التطبيق الموضعي للسلطة الفلسطينية لمدة 3 أيام (الشكل 3 ب). Tus ، PA ، مستقلب من تخمير PF68 لحب الشباب يثبط إنتاج الخلايا الصباغية العاملة مع تخليق الميلانين بواسطة UVB المستحث. انخفض تعبير Tyrosinase بشكل ملحوظ في الخلايا المعالجة بـ PA مقارنةً بمجموعة التحكم (الشكل 3C).

يمنع PA الخلايا الصبغية العاملة المستحثة بالأشعة فوق البنفسجية عبر FFAR2 في الجسم الحي.

لتحديد ما إذا كان الانخفاض في تكوين الميلانين الخارجي قد حدث عن طريق تفاعل PA مع مستقبله المشابه ، تم تدمير FFAR2 في الخلايا الصباغية الجلدية لأذن الفأر ، متبوعًا بالتعرض للأشعة فوق البنفسجية B وعلاج PA. تسبب الأشعة فوق البنفسجية في زيادة انتشار الخلايا الصباغية وانخفض نشاط التيروزيناز بشكل كبير في بشرة أذن الفأر المحقونة بـ NC siRNA بعد تطبيق PA (الشكل 4 أ ، ب). ومع ذلك ، يظل عدد الخلايا الصباغية ونشاط التيروزيناز دون تغيير حتى بعد تطبيق PA في بشرة أذن الفأر المشععة بالأشعة فوق البنفسجية B التي تعرضت للإشعاع باستخدام FFAR2. أكدنا ضربة قاضية للجين FFAR2 عن طريق قياس مستوى التعبير البروتيني لـ FFAR2 عن طريق تحليل اللطخة الغربية (الشكل 4 ج). يتداخل Tus ، PA مع تكون الميلانين عن طريق قمع نشاط التيروزيناز ، حيث يلعب PA-FFAR2 دورًا محتملاً في إنتاج الميلانين.

استخراج سيستانش tubolosa

مناقشة

يتم تصنيع الميلانين ، وهو عامل حاسم في دفاع الجلد ضد الأشعة فوق البنفسجية ، في الخلايا الصباغية للخلايا الصباغية ، وينتقل إلى الخلايا الكيراتينية المجاورة عبر الأطراف المتغصنة ، وينتشر في نهاية المطاف في جميع أنحاء البشرة الجلدية. تستخدم مستقلبات تخمر البكتيريا بشكل متزايد في علاج الجلد بسبب تأثيرها المفيد على التهاب الجلد الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية والاضطرابات المعدية. في هذه الدراسة ، أوضحنا أن PA ، المستقلب الرئيسي من تخمير PF68 لـ C. acnes ، قلل من مستويات الخلايا الصباغية العاملة المستحثة بالأشعة فوق البنفسجية عن طريق تثبيط نشاط التيروزيناز في المختبر وفي الجسم الحي عبر FFAR2.

أظهرت الدراسات السابقة تثبيط تكوين الميلانين من خلال تثبيط التيروزيناز عن طريق نواتج التخمير من بكتيريا بروبيوتيك LA و Lactobacillus. أيضًا ، تم تحلل البوليمر عالي الوزن الجزيئي القائم على PEG (حوالي 20 ، 000) تمامًا من خلال التخمير بواسطة البكتيريا سالبة الجرام التي تنتج الأسيتات والبروبيونات. في هذه الدراسة ، كان PA (حوالي 4 ملي مولار) أكثر SCFA وفرة في الترشيح الناتج عن تخمير PF68 لحب الشباب وخفض محتوى الميلانين في الخلايا الصباغية بشكل أكثر فعالية من AA. علاوة على ذلك ، أدى العلاج بـ 4 ملي مولار من PA إلى تثبيط نشاط التيروزيناز الخلوي في الخلايا الصباغية بشكل كبير مما يثبت أن تثبيط تكوين الميلانين بواسطة PA حدث عن طريق تقليل التعبير الجيني للتيروزيناز. الناس لديهم نفس عدد الخلايا الصباغية وهذا ليس السبب الذي يؤثر على تصبغ الجلد ولكن تنشيط الخلايا الصباغية العاملة عن طريق الأشعة فوق البنفسجية. هنا ، لم يغير العلاج بـ 4 ملي مولار من تكاثر الخلايا الصباغية ، مما يشير إلى أنه خيار علاجي فعال ، ولا يسبب أي ضرر خلوي. لوحظ أيضًا انخفاض عدد الخلايا الصباغية ونشاط التيروزيناز في أنسجة جلد أذن الفئران المحقونة بمزيج من C. مصدر. بالإضافة إلى ذلك ، أثبتت دراستنا صحة PA كعامل ممتاز مضاد للميكروبات ، مع عدم وجود تغيير في نمو البكتيريا الأصل C. acnes ، مما يدل على أن PA كمستقلب قوي لا يخل بتوازن ميكروبيوم الجلد.

يتم بدء إنتاج الميلانين وتنظيمه من خلال العديد من أنظمة الإشارات ، حيث يحفز التيروزيناز تحويل التيروزين إلى DOPA ، وإلى الدوباكينون ، مما يؤدي إلى تكوين أصباغ الخلايا الصباغية. في معظم الحالات ، تعمل كواشف تفتيح البشرة على مستويات مختلفة من إنتاج الميلانين عبر FFAR2 للتأثير على نشاط التيروزيناز أو استهداف التيروزيناز مباشرة لمنع تكون الميلانين في الجلد. تمارس SCFAs مثل PA و AA آثارها من خلال الارتباط بمستقبلاتها المعرفية الانتقائية مثل FFAR2 أو FFAR3 ، مع كون PA من بين أقوى SCFA لكل من المستقبلات. GLPG ، مضاد انتقائي لـ FFAR2 ، وإسكات الجينات بوساطة siRNA لـ FFAR2 لدعم حجب FFAR. في الدراسة الحالية ، لم يتغير عدد الخلايا الصباغية المتزايدة والتعبير الجيني للتيروزيناز في أنسجة جلد آذان الفئران استجابةً لإشعاع UVB حتى بعد تطبيق PA لضربة قاضية FFAR2 في الفئران (الشكل 4 أ). علاوة على ذلك ، انخفض التعبير الجيني للتيروزيناز بعد علاج PA في المختبر ، ومع ذلك ، فقد أدى منع جين FFAR2 باستخدام GLPG ، وهو مضاد انتقائي لـ FFAR2 ، إلى تحسين تأثير PA لتخفيف التعبير الجيني للتيروزيناز. بعد حجب FFAR2 ، ينتج عن فقدان FFAR2 تعزيز التعبير عن نشاط التيروزيناز بعد علاج PA. على الرغم من أن كل من PA و AA ، مستقلبات التخمير من C. acnes ، لها تقارب مماثل لربط FFAR2 ، فإن الفعالية الأقل نسبيًا لـ AA في تخفيف نشاط التيروزيناز في الخلايا الصباغية تؤكد صحة الإمكانات العلاجية للسلطة الفلسطينية باعتبارها مادة تالية للحيوية ضد تكون الميلانين.

اجتذبت التأثيرات الضارة بالصور التي تسببها الأشعة فوق البنفسجية على الجلد اهتمامًا واسعًا. تُستخدم منتجات الحماية من أشعة الشمس ومضادات فرط التصبغ على نطاق واسع ولكن لا تزال سلامتها وتغلغل الجلد وفعاليتها العلاجية موضع تساؤل. على الرغم من أن أفوبنزون ​​هو مكون شائع في واقيات الشمس بسبب فعاليته العالية ضد الأشعة فوق البنفسجية ، إلا أنه غير مستقر في الصورة وبالتالي غير آمن ، وقد تم اكتشافه في الدم بعد التطبيقات المزمنة. يعد تطوير تبييض البشرة الفعال من خلال منع تعبير التيروزيناز عن طريق مستقلبات التخمير من بكتيريا البروبيوتيك أو البوليمرات كمصدر للكربون طريقة فعالة وطبيعية لقمع تكون الميلانين. نظرًا لأن استخدام البروبيوتيك الحي لمستحضرات التجميل منظم بشكل صارم ، فقد أصبح تعزيز آثارها المفيدة من خلال نواتج التخمير من بكتيريا البروبيوتيك الحية تطبيقًا ممكنًا. إلى جانب ذلك ، يمكن أن يعزز PF68 باعتباره مادة حيوية من إنتاج SCFAs من تخمر حب الشباب ، وقد تم استخدامه لتعزيز الاستقرار البيولوجي ومساعدة العوامل العلاجية المختلفة مثل 6- الكرات المجهرية المحملة بالميركابتوبورين في تفاعلها مع جسم الإنسان. علاوة على ذلك ، يمكن دمج PF68 في أغشية الخلايا ونقلها إلى الخلايا وقد تم استخدامه كحامل جل ثابت للعوامل المضادة للميكروبات ، مما يزيد من قابلية الذوبان السطحية للدواء في علاج الجلد. ومن ثم ، فقد تم اعتبار PF68 خيارًا آمنًا وفعالًا لتطوير المستحضرات الصيدلانية ومستحضرات التجميل. بالإضافة إلى وظيفة PF68 كبادئ تخمير لزيادة نشاط التخمير لـ C.

بشكل عام ، توضح هذه النتائج أن تفاعل PA-FFAR2 قد يكون آلية مركزية في تأثير البروبيوتيك أو postbiotics على فرط التصبغ الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية. لم يؤثر علاج PA على تكاثر الخلايا الصباغية. بالمقارنة مع العلاجات الكيميائية ، فإن مستقلبات البروبيوتيك أكثر اعتدالًا وطبيعية. على الرغم من أن الآلية الدقيقة التي بواسطتها تمنع مستقلبات PF68 تخمر حب الشباب من تولد الميلانين ، فإن الدليل من الدراسة الحالية يشير إلى تورط مسار التيروزيناز SCFAs-FFAR 2-. هذه النتائج مفيدة للعلاج السريري المستقبلي لاضطرابات التصبغ ولتطوير مستحضرات التجميل التي تزيد من نطاق تطبيقات منتجات التبييض. أخيرًا ، يوفر تنوع البروبيوتيك علاجات مخصصة لفرط التصبغ وتطوير منتجات مخصصة ذات أداء أعلى.

فوائد استخراج cistanche: تبييض البشرة