تأثير الحماية الكلوية لأوريدونين في نموذج فأر لإصابة الكلى الحادة عن طريق قمع البلاعم المصاحب للالتهاب

edmund.chen@wecistanche.com

المقدمة

سمة مهمة للحادةإصابة في الكلى(AKI) هو الانخفاض المفاجئ فيوظائف الكلى. إنها قضية صحية عالمية أثارت قلقًا واسع النطاق في المجتمع. وفقًا للإحصاءات ، يعاني حوالي 13.3 مليون شخص في جميع أنحاء العالم من التهاب المفاصل الروماتويدي كل عام ، 85 في المائة منهم في البلدان النامية ، مما سيقتل 1.7 مليون شخص. من أمراض متعددة. عادة ، قد يكون سببه تعفن الدم والصدمة ونقص التروية وضخه والتسمم. بعد التطور طويل الأمد ، يميل هذا المرض إلى التطور إلى مزمنمرض كلوي,فشل القلب الاحتقاني والمرحلة النهائيةامراض الكلى.3-5) باختصار ، يمكن أن يسبب القصور الكلوي الحاد عبئًا اقتصاديًا ضخمًا ، وسيزيد فعليًا العبء النفسي والجسدي على المرضى.كلوييعتبر نقص التروية-ضخه هو السبب الأكثر شيوعًا لـ AKI ، وعادة ما يحدث أثناء الصدمة أو الاستئصال الجراحي أوزرع الكلى. البلاعم هي واحدة من الخلايا الالتهابية الرئيسية التي تلعب دورًا مهمًا في تطور القصور الكلوي الحاد. يتم التعبير عن Mincle بشكل رئيسي في الخلايا النخاعية والعدلات ، خاصة على البلاعم. يحتوي على مجال محاضر من النوع C محتفظ به بدرجة عالية وهو لاعب رئيسي في المناعة المضادة للفطريات. تم تحديد هوية Mincle في الأصل - تم التحقق منها بواسطة Matsumoto على أنها عديد السكاريد الدهني (LPS) - وهو بروتين مستحث يمكنه تنشيط العامل النووي kappaB (NF-κB) عبر إشارة البطاقة 9- Bcl 10- MALT1 ، مما أدى إلى تشكيل نوعين فرعيين فعالين من النوع T المساعد 1 (Th1) و Th17 اللذان يعززان التعبير عن العوامل الالتهابية لربط الاستجابات المناعية الفطرية والتكيفية. الإشارات ذات الصلة ، ثم الاستجابة للاستجابات ذات الصلة. على سبيل المثال ، يمكن أن يرتبط Mincle بـ -GlcCer وهو مستقلب في كل مكان داخل الخلايا من الخلايا التالفة ، وينشط ويحفز السيتوكينات ، ويثير استجابات الخلايا التائية الخاصة بالمستضد .7) Mincle هو مستقبل يستشعر موت الخلايا غير المتجانس ، ويمكنه التعرف على الترابط الداخلي المنشأ يُطلق SAP130 بواسطة الخلايا الميتة ، ويحفز إنتاج السيتوكينات الالتهابية ، ويدفع تسلل العدلات إلى الأنسجة التالفة .8 ، 9) بشكل ملحوظ ، يؤكد فريق Lan أن Mincle يتم تحريضه بشكل خاص على الضامة M1 ويلعب دورًا رئيسيًا في الحفاظ على النمط الظاهري للالتهاب في الضامة M1 6) لذلك ، قد يكون العلاج المختلط المستهدف هو المفتاح لعلاج مرض القصور الكلوي الحاد.

سيحسن الكستانش وظيفة الكلى / وظيفة التجشؤ

Oridonin هو مركب طبيعي ثنائي الببتيد رباعي الحلقات بهيكل عظمي kauriene مستخرج من لندن ، وله مجموعة واسعة من الوظائف البيولوجية ، بما في ذلك مضادات الميكروبات ، ومضادات الأورام ، ومضادة للالتهابات ، ومضادة للتليف. أبلغت العديد من الأبحاث عن إمكانات مكافحة الورم وآلية هذه الديتيربينويدات الطبيعية في سلسلة من خطوط الخلايا السرطانية. الصين. ومع ذلك ، فإن دور Oridonin فيمرض كلوينادرا ما يتم الإبلاغ عنها. أثبتت عدة أنواع من الأبحاث أن Oridonin يمكن أن يقلل من بروتينية وتلف الكلىفي نماذج فأر الذئبة الحمامية العفوية ، وفي الدراسات المختبرية وجدت أن Oridonin يمكن أن يقلل من إفراز السيتوكينات الالتهابية والاستجابة الالتهابية التي يسببها LPS بعد العلاج باستخدام Oridonin 12،13) في هذه الدراسة ، ركزنا على الكشف عن إمكانات Oridonin في علاج القصور الكلوي الحاد ، وما إذا كانت آليته الأساسية مرتبطة بتثبيط Mincle في الضامة. يمكن أن تقدم هذه الدراسة دليلًا قويًا على فحص علاجات القصور الكلوي الحاد.

الكلمات الدالة:أوريدونين. إصابة الكلى الحادة (AKI) ؛ الضامة. مينكل. اشتعال؛ وظائف الكلى

المواد والأساليب الحيواناتتم الحصول على ستة وثلاثين من ذكور الفئران C57BL / 6 (تتراوح أعمارهم من 8 إلى 1 0 أسبوعًا) من شركة Beijing Vital River Laboratory Animal Technologies Co.، Ltd. (بكين ، الصين) ، وتم وضعها في مكان يتم التحكم فيه بدرجة الحرارة والرطوبة -غرفة خاضعة للرقابة في مركز التجارب على الحيوانات التابع لجامعة ساوث ويست الطبية (21. 0 ± 2.0 درجة و 65 ± 5 بالمائة ، على التوالي). تم تقسيم جميع الفئران عشوائياً إلى ثلاث مجموعات: مجموعة شام ، مجموعة نموذج إصابة نقص التروية - ضخه (IRI) (مجموعة IRI) ، ومجموعة IRI المعالجة Oridonin (مجموعة OR) (15 مجم / كجم). قبل الجراحة ، تم تخدير الفئران بحقنة داخل الصفاق مقدارها 45 ملغم / كغم من بنتوباربيتال الصوديوم. تم إنشاء نموذج الماوس AKI عن طريق التثبيت الثنائيكلويالشرايين لمدة 35 دقيقة. تعرضت الفئران في المجموعة الصورية لتجويف البطن لمدة 35 دقيقة فقط بينما تم إعطاء الفئران في المجموعة OR بشكل مستمر داخل المعدة لمدة 3 أيام بعد الجراحة ، وتم إعطاء المجموعات الأخرى نفس حجم المحلول الملحي كعنصر تحكم. تم التخلص من الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق من الصوديوم البنتوباربيتال المخفف بمحلول ملحي (200 مجم / كجم) في اليوم الثالث. تم إجراء جميع إجراءات التجارب على الحيوانات وفقًا لإرشادات رعاية حيوانات المختبر (رقم التصريح 201812-55).

سيحسن الكستانش الفشل الكلوي / الفشل الكلوي

المواد الكيميائية والكواشفتم الحصول على Oridonin (BP1041 ، نقاء أكبر من أو يساوي 95 بالمائة) من Biopurify phytochemicals Ltd. (تشنغدو ، الصين). تم شراء الأجسام المضادة NF-κB و p-AKT والأجسام المضادة لأكسيد النيتريك المحرض (iNOS) من تقنية تشوير الخلايا (بيفرلي ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء الأجسام المضادة Interleukin (IL) -1 وعامل نخر الورم (TNF) - و Mincle و p-NF-κB و AKT من سانتا كروز للتكنولوجيا الحيوية (سانتا كروز ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الحصول على مجموعة استخراج الحمض النووي الريبي الإجمالي من Tiangen Biochemical Technology (Beijing) Co.، Ltd. (بكين ، الصين). مجموعة النسخ العكسي ، مجموعة PCR في الوقت الفعلي مقدمة من Shanghai Promega Bioproducts Co.، Ltd. (شنغهاي ، الصين). تم توفير LPS (Escherichia coli 055: B5) بواسطة Sigma Chemical (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الحصول على كاشف تعداء الحمض النووي من Zeta Life (Zeta Life ، الولايات المتحدة الأمريكية).

ثقافة الخلية و Transfectionsتم شراء خلايا RAW264.7 من بنك الخلايا التابع للأكاديمية الصينية للعلوم (شنغهاي ، الصين) ، حيث تم استزراعها عند 37 درجة في بيئة بنسبة 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون في وسط Dulbecco المعدل عالي الجلوكوز (DMEM). تم إجراء الهضم عندما نمت الخلايا إلى 80 في المائة من التقاء. استخدمت التجربة بأكملها خلايا طور النمو اللوغاريتمي. تم إجراء الإفراط في التعبير عن Mincle في خلايا RAW264.7 عن طريق ترنسفكأيشن من بلازميد Mincle-overexpression (Genechem ، شنغهاي ، الصين) إلى الخلايا التي تحتوي على كاشف تعداء الحمض النووي Zeta Life Advanced. تمت ملاحظة حالة نمو الخلايا وتشكلها باستخدام مجهر ضوئي.

تحليل أدوات عد الخلايا -8 (CCK -8)تم بذر ثلاثة آلاف خلية في 96- لوحة بئر بها 6 آبار مكررة لكل مجموعة. بعد ذلك ، تم تجويع الخلايا في وسط خالٍ من المصل لمدة 24 ساعة ، تليها المعالجة بوسط يحتوي على دواء لمدة 24 ساعة. ثم ، بعد إزالة الوسيط ، أضف 100 ميكرولتر من كاشف CCK بنسبة 10 بالمائة -8 لكل بئر واحتضانه لمدة 3 ساعات. تم حساب معدل بقاء الخلية وفقًا لقيمة الامتصاصية لكل بئر.

تقييم وظيفة الكلىتم قياس مستوى كرياتينين المصل ونتروجين اليوريا باستخدام العدة المناسبة (Jiancheng ، نانجينغ ، الصين). يتم التعبير عن القيم على أنها مليمول / لتر من المصل.

تلطيخ الهيماتوكسيلين - يوزين (H&E) وتلطيخ حمض شيف الدوري (PAS)تم جمعهاالكلىتم وضع الأنسجة في بارافورمالدهيد بنسبة 4 في المائة لمدة 24 ساعة ، ثم تم وضعها في محاليل إيثانول بتركيزات مختلفة ، ووضعها في كتل زيلين وشمع للتضمين. قبل التلوين ، تم وضع الشرائح في فرن 60 درجة لمدة ساعتين ، ثم إزالة الشمع وترطيبها. تم تلطيخ بعض العينات بأصباغ إيوزين وهيماتوكسيلين ، وأضيفت عينات أخرى كحول حمضي دوري ومحلول شيفدي بشكل منفصل. أخيرًا ، تمت ملاحظته وتصويره بكاميرا مجهرية.

مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)تم قياس مستوى IL -1 و IL -6 و TNF- في طاف ثقافة الخلية باستخدام مجموعات ELISA (IL -1: Neobioscience، EMC001b؛ IL -6: Neobioscience ، EMC004 ؛ TNF-: Neobioscience ، 500850). قم بإجراء اختبار العينة وفقًا للطريقة التي يوفرها مورد الكاشف ، واحسب قيمة التركيز لكل مجموعة وفقًا للمنحنى القياسي.

سيحسن الكستانش من آلام الكلى / الكلى

لطخة ويسترنتم فحص جميع العينات الحيوانية والخلوية في محلول عازل مناعي إشعاعي (RIPA) على الجليد وطردها للحصول على عينة البروتين المقابلة. تم استخدام اختبار Coomassie الأزرق اللامع لتحديد تركيز البروتين لكل عينة ، وتم تشغيل الجل بكمية معينة من عينات البروتين. تم فصل كل مجموعة من البروتينات عن طريق الرحلان الكهربي لهلام دوديسيل كبريتات-بولي أكريلاميد الصوديوم (SDS-PAGE) ، ثم تم نقلها إلى غشاء ثنائي فلوريد متعدد الفينيل (PVDF). بعد احتضان الغشاء بالأجسام المضادة الأولية عند 4 درجات طوال الليل ، تم تحضين الأجسام المضادة الثانوية في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. تم تطوير لون الشريط باستخدام حل تطوير الألوان ، وتم حساب كثافة اللون الرمادي للشريط بواسطة برنامج Image J.

الوقت الحقيقي PCRتم الحصول على إجمالي الحمض النووي الريبي وفقًا لتعليمات التشغيل الخاصة بمجموعة Tiangen ، وتم إذابته في ماء خالٍ من الإنزيم. وفقًا للتعليمات ذات الصلة ، نستخدم مجموعة نسخ عكسي لتوليف (كدنا). تم إجراء شروط تفاعل RT-PCR على النحو التالي: 37 درجة لمدة 15 دقيقة ، و 95 درجة لمدة 5 دقائق ، ثم 40 دورة من

95 درجة لمدة 10 دقائق ، 95 درجة لمدة 15 ثانية ، و 60 درجة لمدة دقيقة واحدة. تم تطبيع مستوى تعبير mRNA النسبي لكل جين بالنسبة إلى glyceraldehyde -3- نازع هيدروجين الفوسفات (GAPDH). يتم عرض تسلسل الاشعال في الجدول 1.تلطيخ المناعيتم تثبيت خلايا RAW264.7 في بارافورمالدهيد بنسبة 4 في المائة ، ثم حجبت بألبومين مصل الأبقار عند درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة ساعة واحدة ، وحضنت مع الأجسام المضادة الأولية المقابلة عند 4 درجات طوال الليل. بعد الغسيل بمحلول ملحي مخزّن بالفوسفات (PBS) لمدة 3 مرات ، تم تحضين الخلايا بأجسام مضادة ثانوية عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. كانت النواة ملطخة بـ 4 ′ -6- ديميدينو - 2- فينيليندول (DAPI). تم التقاط صور التألق المناعي بواسطة مجهر نيكون إكليبس (نيكون ، طوكيو ، اليابان).تحليل احصائييتم تقديم نتائج التحليل الإحصائي على أنها متوسط ​​± الانحراف المعياري (SD) ، وأجريت المقارنات بين المجموعات باستخدام ANOVA أحادي الاتجاه ، p< 0.05="" was="" considered="" significant.="" graphpad="" prism="" 7="" software="" was="" used="" to="" calculate="" data="" for="" statistical="">

النتائج

أوريدونين تثبيط نقص التروية - ضخه - إصابات الكلى والتهابهامن أجل تقييم التأثير الوقائي للأوريدونين على القصور الكلوي الحادالكلىالناجم عن نقص التروية - ضخه ، قمنا بفحص كرياتينين الدم ، نيتروجين اليوريا ، وكلويمؤشر الإصابة الأنبوبية للفئران في كل مجموعة ، وكذلك التعبير عن السيتوكينات الالتهابية في الأنسجة الكلوية وتقييمكلويعلم الأمراض عن طريق تلطيخ H&E و PAS. تظهر النتيجة في الشكل أن مستويات الكرياتينين في الدم (الشكل 1 أ) واليوريا النيتروجين (الشكل 1 ب) من مجموعة نموذج AKI قد انخفضت عند الحقن المستمر لأوريدونين لمدة ثلاثة أيام. في المقابل ، أظهر مؤشر الإصابة الأنبوبية أن Oridonin يقلل بشدة من النخر الأنبوبي فيالكلىمن فئران AKI (الشكل 1 ج). أظهرت نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي أن Oridonin قلل بشكل كبير من مستويات الرنا المرسال لكل من IL -1 و MCP -1 و F4 / 80 فيالكلىمن مجموعة نماذج AKI (الأشكال 1 د-و). علاوة على ذلك ، أظهرت نتائج التلوين المرضي والتألق المناعي أن Oridonin قلل بشكل كبير من النخر الأنبوبي (الشكل 1 جم) ومستوى البروتين من السيتوكينات الالتهابية (الشكل 1 ح) في فئران AKI ، مما أدى إلى تحسين تلف الكلى بشكل فعال ، مما يشير إلى أن Oridonin كان له تأثير كبير مضاد للإصابة والتأثيرات المضادة للالتهابات على نموذج AKI.

مثبط Oridonin مسار إشارات Mincle / AKT / NF-κB في كلية فئران AKIلتوضيح الآلية العلاجية لأوريدونين علىكلويالالتهاب ، قمنا بفحص تنشيط إشارات Mincle / AKT / NF-B بعد تناول Oridonin. أظهرت نتائج اللطخة الغربية أن تدخل Oridonin يمكن أن يقلل بشكل كبير من التعبير عن البروتينات المرتبطة بالالتهاب IL -1 و iNOS في AKIالكلىوتقليل تنشيط بروتينات مسار AKT و NF-B (الأشكال 2 أ-هـ) ، مما يشير إلى أن Oridonin يمكن أن يثبط الالتهاب الناجم عن IRI فيالكلىمن AKI. والجدير بالذكر أن نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي ونتائج اللطخة الغربية أظهرت أن Oridonin قلل بشكل فعال من مستويات الرنا المرسال والبروتين في Mincle فيالكلىمن نموذج AKI (الأشكال 2 و ، ز). من أجل الكشف عن موقع Mincle فيالكلى، أجرينا التألق المناعي في كل مجموعة (الشكل 2 ح) ، وأظهرت النتائج أن Mincle كان موجودًا فيكلويالخلالي والمترجمة مع علامة البلاعم F4 / 80 ، مما يشير إلى أن Mincle تم التعبير عنه بشكل أساسي فيكلويالضامة ، وتنظم بقوة بعد القصور الكلوي الحاد. أظهرت نتائج التألق المناعي FL أيضًا أن البلاعم زادت بشكل ملحوظ بعد القصور الكلوي الحاد ، مما يشير إلى الدور المهم للبلاعم في تطوير القصور الكلوي الحاد. والجدير بالذكر أن Oridonin يثبط بشكل كبير Mincle فيكلويالبلاعم من الفئران AKI. تشير النتائج المذكورة أعلاه إلى أن Oridonin قد يتحسنالكلىالتهاب وإصابة عن طريق تثبيط إشارات Mincle / AKT / NF-B.

استعاد Oridonin بشكل كبير التغييرات المورفولوجية لـ RAW264.7 Macrophage الناتجة عن LPSمن أجل دراسة تأثير Oridonin على الضامة الالتهابية ، استخدمنا LPS لتحفيز خلايا RAW264.7 لبناءنموذج الخلية الالتهابية. يظهر التركيب الكيميائي لأوريدونين في الشكل 3 أ. لذلك ، قمنا باختبار سمية Oridonin بتركيزات مختلفة على خلايا RAW264.7. تظهر نتائج CCK8 أنه عندما يكون التركيز 5 ميكرومتر ، فإن Oridonin ليس له تأثير كبير على مورفولوجيا الخلية (الشكل 3 ب) ، والذي تم استخدامه في التجارب اللاحقة في المختبر. وجدنا بشكل مدهش أن Oridonin حسّن بشكل ملحوظ مورفولوجيا البلاعم المستحثة بـ LPS (الشكل 3 ج) ، بما في ذلك تقليل الفجوات داخل الخلايا وجعل الخلايا أكثر صلابة.

قمع Oridonin إفراز والتعبير عن عوامل الالتهاب في LPS-Stimulated RAW264.7الخلايا من أجل توضيح التأثير المضاد للالتهابات لأوريدونين على خلايا RAW264.7 المحفزة بـ LPS ، استخدمنا في الوقت الحقيقي FL الفلوريسنت PCR ، ELISA ، والتألق المناعي لقياس العوامل الالتهابية التي تفرزها كل مجموعة من الخلايا. أظهرت النتائج أن Oridonin قلل بشكل كبير من مستويات الرنا المرسال لكل من IL -1 و IL -6 و TNF- و iNOS و MCP -1 في الخلايا المحفزة بـ LPS (الأشكال 4 أ-هـ). علاوة على ذلك ، قلل Oridonin بشكل كبير من إفراز IL -1 و IL -6 و TNF- في المادة الطافية في نموذج الخلية الالتهابية (الأشكال 4f-h) بالإضافة إلى مستويات البروتين في السيتوكينات الالتهابية في البلاعم المحفزة بـ LPS (الشكل 4i). تظهر النتائج المذكورة أعلاه أن Oridonin له تأثير واضح مضاد للالتهابات في الضامة.

قام Oridonin بسد مسار Mincle / AKT / NF-κB في البلاعم الالتهابي في المختبرMincle ، كمستقبل للتعرف على الأنماط ، ضروري لتعزيز الالتهاب المرتبط بالبلعم فيالكلىمن AKI. أظهرت نتائج التجربة الحيوانية المذكورة أعلاه أن Oridonin يمكن أن يقلل من تنظيم تعبير Mincle فيالكلىمن AKI. لذلك ، قمنا بالتحقيق فيما إذا كان Oridonin يمكن أن يقلل من مستوى الرنا المرسال ومستوى البروتين في Mincle في نموذج الالتهاب الضامة المحفز LPS. أظهرت نتائج اللطخة الغربية والتألق المناعي و PCR في الوقت الحقيقي أن 5 ميكرومتر من Oridonin لم يقلل بشكل كبير من تعبير mRNA (الشكل 5 ج) فحسب ، بل قلل أيضًا مستوى البروتين في Mincle في البلاعم الالتهابية (الأشكال 5 أ ، ب). ، د). علاوة على ذلك ، قلل Oridonin بشكل كبير من مستوى البروتين لـ iNOS و phosphorylated-AKT و NF-B في خلايا RAW264.7 المعالجة بـ LPS.

أدى الإفراط في التعبير عن Mincle إلى القضاء على التأثير المثبط لأوريدونين على الالتهاب في خلية RAW264.7 المحفزة بـ LPSمن أجل تحديد ما إذا كان Mincle هو الهدف الرئيسي لـ Oridonin لتثبيط الالتهاب في البلاعم ، قمنا بنقل خلايا RAW264.7 مع Mincle overexpression plasmid لتنظيم تعبير Mincle. وفقًا لنتائج PCR في الوقت الفعلي واللطخة الغربية ، فقد تبين أن مستويات الرنا المرسال والبروتين في Mincle في خلايا RAW264.7 قد زادت بعد تعداء العدوى (الأشكال 6 أ ، ب). تم بعد ذلك نقل البلازميد إلى الخلايا الالتهابية المعالجة بـ Oridonin ، وأظهرت النتائج أن تعبير Mincle قد زاد أيضًا في خلايا هذه المجموعة (الشكلان 6 ج ، د). تم نقل المتجهات في الخلايا كعنصر تحكم سلبي. أظهرت نتائج تجارب الاسترداد أن الإفراط في التعبير عن Mincle في Oridonin المعالج الالتهابي البلاعم ينظم تنشيط AKT و NF-B عن طريق زيادة مستوى الفسفرة لهذين البروتينين (الأشكال 6 د-ز) ، مما يشير إلى أن الأوريدونين يثبط التهاب البلاعم. قد من خلال Mincle الخافض للتنظيم وإشارات AKT و NF-B في اتجاه المصب. علاوة على ذلك ، أظهرت نتائج PCR و ELISA في الوقت الحقيقي أن الإفراط في التعبير عن Mincle أعاد التعبير عن السيتوكينات وإفرازها في البلاعم الالتهابي المعالج بأوريدونين (الأشكال 6h-l). أشارت النتائج المذكورة أعلاه إلى أن Oridonin يثبط الالتهاب في البلاعم عن طريق تنظيم إشارات Mincle / AKT / NF-B.

نقاش

AKI هو متلازمة سريرية تسببها مجموعة متنوعة من المسببات والآليات المرضية.كلويإصابة نقص التروية - ضخه هي عملية مرضية فسيولوجية شائعة في العيادات ، وهي أحد الأسباب الرئيسية للحادة.إصابة في الكلى.14،15) الاستجابة الالتهابية هي شبكة معقدة تشارك فيهاكلويالخلايا المتنيّة والخلايا المناعيّة المقيمة ، حيث تلعب البلاعم دورًا مهمًا فيهاإصابة في الكلى.16) بسبب التغيرات في البيئة المكروية المناعية ، سيتم استقطاب الضامة إلى عدة أنماط ظاهرية ، مقسمة بشكل رئيسي إلى أنواع M1 و M2. تعبير iNOS هو علامة على نوع M1. وجدت الدراسات التي أجريت في الجسم الحي وفي المختبر أن تعبير iNOS يزداد في المجموعة النموذجية ، وينخفض ​​التعبير بعد العلاج. محاضرة من النوع C الناجم عن البلاعم (Mincle) هي مستقبلات محاضرة من النوع C يتم التعبير عنها على الضامة المنشطة ومترجمة وراثيًا على الماوس 6F2 والكروموسوم البشري 12P31. أفادت بعض الدراسات أن Mincle يشارك في بدء الاستجابة المناعية الفطرية من خلال التعرف على مستقبلات التعرف على الأنماط الجزيئية المرتبطة بمسببات الأمراض. يمكن أن يؤدي إلى فقدان الخلايا العصبية في منطقة التروية الوعائية ، ويمكن أن يؤدي خروج المغلوب من Mincle بشكل كبير

إبطاء الإصابة الدماغية الناجمة عن انسداد الشريان الدماغي الأوسط. يكشف أحدث بحث أن Mincle يمكن أن يشعر بموتكلويالخلايا الطلائية الأنبوبية التي تتحد مع -جلوكوزيل سيراميد ، مما يسرع الاستجابة الالتهابية ويؤخر القضاء على الالتهاب .18) دراسات علىمرض كلويهي نفس نتائج بحثنا التي أظهرت أن Mincle يتم التعبير عنه بشكل كبير في كل من نماذج نقص التروية - ضخه ونماذج AKI التي يسببها السيسبلاتين ، ويتم التعبير عنها بشكل خاص في البلاعم من النوع M 1-. باختصار ، قد تكون دراسة Mincle المستهدفة علاجًا جديدًا للأمراض ذات الصلة التي تسببها البلاعم الالتهابية. وجدت دراستنا أن تعبير Mincle يزداد في نموذج الفئران AKI

شيدته نقص التروية ضخه. وفقًا لنتائج التوطين المشترك المناعي ، يتم التعبير عن Mincle بشكل أساسي فيالكلىالضامة لمجموعة الفئران النموذجية وتتوافق مع نتائج أبحاث لان. يتم تحفيز Mincle على وجه التحديد على الضامة M1 ، حيث تعزز إشارات Mincle-sky وتحافظ على الأنماط الظاهرية الالتهابية للبلاعم M1 في الحالات الحادةالتهاب كلوي.6) ينتمي Mincle إلى مستقبلات Lectin من النوع C (CLR) التي يمكنها التعرف على الفطريات وأشكال أخرى من الكائنات الحية الدقيقة أو مخاطر التعقيم. إنها تسبب الالتهاب من خلال بروتين الرابط CARD9 ، متبوعًا بتجميع CARD 9- المركب Bcl10 وتنظيم NF-κB النموذجي. هناك علاقة تنظيمية

بين بروتين NF-κB و AKT. 10،19) في دراسة الالتهاب للخلايا الضامة المحفزة بـ LPS ، تم التحقق من زيادة تعبير AKT و NF-κB. بعد ذلك ، قمنا بنقل بلازميد Mincle عالي التعبير إلى الخلية التي عولجت بالتدخل الدوائي ، ووجدت النتائج أن مسار إشارة مسار إشارات AKT و NF-تم تنشيطه مرة أخرى. يمكن استنتاج أن Mincle يمكن أن يؤثر على التعبير البروتيني لهذا المسار. ومع ذلك ، ليس من الواضح كيف ينظم Mincle up هذين المسارين للإشارة ، وليس من الواضح ما إذا كان البروتين ينشط عبر مسار السماء كما جاء في البحث المذكور.

Oridonin هو مركب ديتيربينويد طبيعي مستخلص من Orion ، وله مجموعة واسعة من التأثيرات الدوائية ، بما في ذلك مضادات الأورام ، ومضادات الالتهابات ، والحماية العصبية. في البحث عن وظيفة الحماية العصبية لأوريدونين ، وجد فريق وين أن Oridonin يمكن أن يمنع مقاومة الأنسولين عن طريق تثبيط الالتهام الذاتي لتحسين الخلل الإدراكي. 21) أكثر ما تمت دراسته بدقة هو التأثير المضاد للورم لأوريدونين. قام فريق بحث بتحويل الدواء إلى جزيئات قابلة للاستنشاق لعلاج الفئران النموذجية لسرطان الرئة ذات الخلايا غير الصغيرة ، والتي أظهرت تأثيرًا مثبطًا قويًا لتكوين الأوعية الدموية وتأثيرًا مؤيدًا لموت الخلايا المبرمج ولعبت تأثيرًا كبيرًا مضادًا للسرطان. تأثير. يمكن أن يمنع مسار Notch ، ويحث على استقطاب الضامة للتحول إلى النمط الظاهري المضاد للالتهابات وقمع ظهور التهاب الأعصاب المناعي الذاتي.

يمكن أن يخفف أيضًا من ظهور هشاشة العظام عن طريق تثبيط إفراز العوامل الالتهابية وإنتاج أوكسيديز الاختزال.أمراض الكلى. أفادت الدراسات أن Oridonin يمكنه التعاون مع 5- fluorouracil (5- FU) لممارسة تأثيرات مضادة للأورام وتعزيز 5- السمية الخلوية لـ FU فيكلوي25) وفقًا لنتائج التجربة في الجسم الحي لهذه الدراسة ، يمكن أن يقلل Oridonin بشكل كبير من نيتروجين اليوريا الكرياتينين في الدم في الفئران المصابة بإصابة نقص التروية وإعادة التروية ، ويقلل بشكل كبير من أضرارها المرضية. أظهرت النتائج أيضًا أن Oridonin يمكن أن يثبط النشاط الالتهابي المرتبط بقمع مسار AKT و NF-κB ، والذي يشبه نتائج البحث لتدخل Oridonin في اعتلال الكلية السكري ويمكن أن يقلل في نفس الوقت من تسلل السيتوكينات الالتهابية ونشاط الحصيلة- مثل مستقبلات 4 (TLR4) / مسار إشارات NF-B. 26) اقترحت النتائج المذكورة أعلاه أن Oridonin يمكن أن يثبط Mincle ويثبط نشاط مسار AKT و NF-B. في التجارب المختبرية ، زادت مؤشرات المسار هذه في نموذج التهاب البلاعم المحفز بـ LPS وانخفضت أيضًا بواسطة Oridonin. أظهرت نتائج تجارب الاستعادة أن الإفراط في التعبير عن Mincle في Oridonin المعالج بالالتهابات الملتهبة زاد من نشاط إشارات AKT و NF-κB ، مما أدى إلى زيادة تنظيم التعبير وإفراز السيتوكينات الالتهابية في خلايا Oridonin المعالجة ، مما يشير إلى أن Oridonin يثبط الالتهاب في قد يكون البلاعم من خلال قمع إشارات Mincle و AKT / NF-B

سيحسن القسطرة من التهاب الكلى / التهاب الجلد

هناك العديد من الطرق لبناء نماذج حيوانية AKI ، بما في ذلك نقص التروية الثنائية - ضخه ، IRI أحادي الجانب مع استئصال الكلية المقابل ، سيسبلاتين ، ذيفان الخناق ، LPS ، حمض الأرستولوكيك أو حمض الفوليك. ومع ذلك ، فإن حقن السيسبلاتين لا يمكن أن يحاكي بشكل كامل المرضى السريريين. يميل النموذج الناجم عن حقن سم الخناق إلى إطالة تقدممرض كلوي، والتي يمكن أن تؤدي بشكل رئيسي إلىكلويالتليف والتصلب الكبيبي ، وكذلك تلف أنبوبي خفيف. اعتلال الكلية بحمض الأرستولوشيك هو التهاب الكلية الخلالي الأنبوبي ، وحمض الفوليك هو أيضًا محفز السمية الكلوية لـكلويفيفيبروزيس ، ولكن الإصابة السريرية لهذين النوعين منخفضةإصابة في الكلىهو مصدر قلق عالمي للصحة العامة يرتبط بارتفاع معدلات الإصابة بالأمراض والوفيات والرعاية الصحية. لذلك ، نستخدم نقص التروية - ضخه لبناء حادالكلىنموذج إصابة الفئران. أبلغت العديد من الدراسات عن أوقات مختلفة من لقطكلويشريان. أنشأ فريق بحثي نموذجًا حيوانيًا IRI لربط ثنائيكلويعناقيد من جرذان Sprague-Dawley (SD) لمدة 1 ساعة. 28) قام فريق بحث آخر بفرض الثنائياتكلويالشرايين لمدة 45 دقيقة لإعداد نموذج ضخه في فئران ويستار. بالإضافة إلى ذلك ، تم إجراء دراسة باستخدام الفئران C57BL / 6J لربط السويقات الكلوية الثنائية لمدة 35 دقيقة لبناء نموذج.كلويتم شد الشريان لمدة 20 دقيقة ، وعاد كرياتينين المصل إلى مستوى خط الأساس الطبيعي بعد ثلاثة أيام. لذلك ، اخترنا تثبيت الشرايين الكلوية الثنائية لمدة 35 دقيقة قبل ضخه ، واستقرت التغييرات في كرياتينين المصل بعد الجراحة لمدة ثلاثة أيام. أثناء العملية ، يمكننا أن نلاحظ أن لونالكلىيتغير من اللون الوردي إلى الأحمر الفاتح ، والذي يسببهكلوينقص تروية الشرايين الوعائية. بعد إزالة المقطع بعد 35 دقيقة ، يمكننا ملاحظة أن لون ملفالكلىيعود إلى طبيعته ، تم بناء نموذج IRI-AKI. باختصار ، أظهرت هذه النتيجة أن Oridonin له تأثير كبير مضاد للالتهابات ، ويمكن أن يحمي الكلى في AKI من الإصابة ، والتي قد تنطوي بشكل أساسي على تثبيط Mincle ونشاط إشارات المصب لـ NF-B و AKT. توفر هذه الدراسة آلية محتملة جديدة لعلاج Oridonin لـ AKI ، والتي يمكن أن توفر خيارات للعلاج السريري لـ AKI.