إعادة توصيل الجلوكوز والتمثيل الغذائي للدهون الناجم عن مستقبلات البروتين G 17 الإسكات يمكن من انتقال أسلاف Oligodendrocyte إلى الخلايا النخاعية Ⅱ

3. النتائج

3.1. GPR17 أدى إسكات في تمييز OPCs إلى تغيير كبير في التعبير عن الجينات المشاركة في التمثيل الغذائي للدهون والجلوكوز

لتسليط الضوء على العمليات البيولوجية التي تأثرت بشكل كبير بتعبير GPR17 أثناء تمايز OL ، تدخلنا في تعبيرها عن طريق تعديل الجرذان OPCs باستخدام SMART-pool siRNAs الخاص بـ الفئران GPR17. بعد التحقق من صحة ضربة قاضية GPR17 الناجحة بواسطة qRT-PCR (الشكل S1) ، أجرينا تحليلًا ميكروأري لـ 30،584 نسخة من الفئران في GPR 17- التي تم إسكاتها مقابل التحكم في OPCs وقمنا بتحليل الجينات المعبر عنها تفاضليًا (DEGs) بواسطة أدوات المعلومات الحيوية المختلفة. أولاً ، تمت دراسة 640 DEGs بواسطة Meta-Core ، لإجراء تحليل إثراء للمسار وتحديد العمليات التي يُتوقع أن تتأثر بشكل كبير. اقترح هذا التحليل تغيير إشارة mTOR ، والتي ثبت بالفعل أنها مرتبطة بوظيفة GPR17 [37] ، وعمليات أخرى معروفة بأنها ذات صلة بنضج OPC ، مثل "إعادة تشكيل الهيكل الخلوي" و"تنظيم التمثيل الغذائي للدهون" (الجدول 1).

زائد

انقر هنا لمعرفة حالة نمو العظام

الجدول 1. تم استخدام برنامج MetaCore لإجراء تحليل إثراء المسار على DEGs بعد إسكات GPR17. يوضح الجدول أهم المسارات الناتجة عن التحليل وعدد الجينات المرتبطة والجينات الشائعة المضمنة في مجموعة البيانات

بعد ذلك ، تم استخدام أداة تحليل مسار الإبداع (IPA) لإجراء تطابق تحليل ، والذي يحدد تلقائيًا مجموعات بيانات IPA المنسقة ذات أوجه التشابه والاختلاف الكبيرة مقارنة بمجموعة بيانات الاستعلام. يقوي هذا التحليل الارتباط المتوقع بين تعبير GPR17 والتمثيل الغذائي للدهون ، مما يدل على أن تغيرات التعبير عن 38 جينًا في مجموعة البيانات الخاصة بنا (الجدول S1) مرتبطة بتخليق الأحماض الدهنية المتغيرة (الشكل 1). من بين هؤلاء ، إسكات GPR17 الناجم عن تنظيم LXR (مستقبلات الكبد X alpha ، NR1H3 في الشكل 2 والجدول S1 ، مستقبل نووي يستجيب للأوكسيستيرول) و SREBP1 (بروتين ربط عنصر تنظيم ستيرول 1 ، SREBF1 في الشكل 1 والجدول S1) ، اثنان اللاعبين الرئيسيين في تصنيع الأحماض الدهنية والكوليسترول. في مجموعة البيانات الخاصة بنا ، لاحظنا أيضًا أن العديد من الجينات المتغيرة ، بما في ذلك PDH (نازعة هيدروجين البيروفات) ، و Ldha (اللاكتات ديهيدروجينيز ألفا) ، و Pdk1 (بيروفات ديهيدروجينيز كيناز 1) ، مرتبطة باستقلاب الجلوكوز ودورة كريبس ، مما يشير إلى احتمال تورط مستقبلات GPR17 في تنظيم عمليات التمثيل الغذائي هذه. وفقًا لهذا ، كشف تحليل الإثراء المستند إلى علم الجينات (مجموعة ToppGene) على DEGs عن تغيير في "عملية التمثيل الغذائي لحمض أحادي الكربوكسيل" (GO: {{2 0}} 0 32787، p- القيمة: 0.02) ، بخلاف العمليات الأخرى المتعلقة بتطور الجهاز العصبي المركزي واستقلاب الخلايا ، مثل "تنظيم تطور الجهاز العصبي" (GO: 0051960 ، قيمة p: 0.033) و "عمليات التمثيل الغذائي للدهون السفينغوليبيدية" (GO: 0006665 ، قيمة p : 0.043) (الشكل 2 ؛ القائمة الكاملة في الجدول S2).

على الصعيد العالمي ، تشير هذه التغييرات إلى أن إسكات GPR17 قد يكون بمثابة محفز لمعالجة الخلايا لتكوين النخاع ، من خلال ضبط العديد من الجينات المشاركة في تنظيم النسخ من الدهون وتوازن الجلوكوز ، وكذلك في استخدام الكوليسترول والدهون لإنتاج المايلين.

الشكل 1. تم استخدام أداة تحليل مسار الإبداع (IPA ، Qiagen) لتحليل مجموعة البيانات واستكشاف الأمراض والعمليات البيولوجية التي يُتوقع أن تتزايد أو تتناقص بناءً على نمط الجينات المعبر عنها تفاضليًا في مجموعة البيانات. من هذا التحليل ، قمنا باستقراء المخطط في الشكل الذي يتضمن الجينات المتعلقة بتوليف الدهون المعبر عنها تفاضليًا في مجموعة البيانات الخاصة بنا (القيمة p=9. 67 × 10−4). تم الإبلاغ عن الأسماء الكاملة لهذه الجينات ، جنبًا إلى جنب مع تغيير الطية النسبية (نسبة السجل 2) في الجدول S1. في الجينات المنتظمة باللون الأحمر ؛ في الجينات الخضراء المنتظمة

الشكل 2. تم استخدام مجموعة Toppgene لتحليل التخصيب القائم على GO على DEGs. تُظهر الصورة بعض العمليات البيولوجية المهمة المتعلقة بالجهاز العصبي المركزي واستقلاب الخلية التي قد تتغير بسبب إسكات GPR17. تشير الأشرطة الزرقاء إلى إجمالي الجينات المرتبطة بكل مصطلح ؛ تشير الأشرطة الحمراء إلى الجينات المشتركة مع مجموعة البيانات الخاصة بنا لكل مصطلح. تم الإبلاغ عن القائمة الكاملة للعمليات البيولوجية الناتجة عن هذا التحليل والقيم p النسبية في الجدول S2.

3.2 التحليل الأيضي أثناء تمايز OPC في المختبر

لتقييم العلاقة بين تعبير GPR17 وتفعيل مسارات التمثيل الغذائي المحددة ، أجرينا تحليلًا أيضيًا لـ OPCs المستزرعة أثناء نضجها الفسيولوجي. تم الاحتفاظ بـ OPCs في وسط تمايز ثم تم فصلها في أربع نقاط زمنية مختلفة (بعد 0 ، و 1 ، و 3 ، و 5 أيام في التمايز ، DID) ، والتي تتوافق مع مراحل مختلفة من نضج OL. في موازاة ذلك ، لتقييم أنه في جميع التجارب حدث النضج مع التوقيت المتوقع ، تمت زراعة OPCs وتلطيخها من أجل GPR17 و MBP. أظهرت النتائج أن عدد الخلايا التي تعبر عن GPR 17- بلغ أقصى حد له عند 3 DID ثم عاد نحو المستويات القاعدية عند 5 DID ، في حين أن عدد الخلايا الإيجابية لـ MBP يزداد تدريجيًا أثناء النضج (الشكل 3 أ) ، بشكل ثابت مع النتائج السابقة [37]. تم إجراء التقييم الأيضي لـ OPC عن طريق قياس الطيف الكتلي الترادفي اللوني السائل (LC-MS / MS) كما هو موصوف سابقًا [38] ، مع التركيز على المستقلبات النشطة المشاركة في تحلل السكر ، ومسار فوسفات البنتوز ، ودورة كريبس ، وأكسدة الأحماض الدهنية ، والعوامل المساعدة لها NADH و NAD plus و NADPH و NADP plus و ATP و ADP و AMP والأحماض الأمينية وبعض مشتقاتها. تم الإبلاغ عن الملامح الأيضية للنقاط الأربع التي تم تحليلها في الشكل 3 ب. في اليوم 0 ، كانت مستويات العديد من المستقلبات التي تنتمي إلى دورة كريبس و / أو المرتبطة بها (على سبيل المثال ، السكسينات ، والمالات ، وألفا كيتوجلوتارات ، والجلوتامات ، والأسبارتات ، والألانين ، والبرولين) أعلى ، كما هو متوقع من الخلايا القادمة من حالة شديدة الانتشار (الشكل 3 ج). في المراحل المتوسطة (من إضطراب الشخصية الإنفصامية 1 إلى 3) ، أظهرت OPCs زيادة ملحوظة في تنظيم الجزيئات المشاركة في تخليق الأحماض الدهنية والكوليسترول. وفقًا لذلك ، لاحظنا زيادة مستويات أسيتيل CoA (الشكل 3 ج) ، والذي يمثل مقدمة للكوليسترول والأحماض الدهنية و malonyl-CoA ، وهو وسيط محدد لتخليق الأحماض الدهنية. في إضطراب الشخصية الإنفصامية 5 ، لاحظنا زيادة مستويات عدة أسيل كارنيتيني وأحماض أمينية بالتوازي مع زيادة ملحوظة في الجلوكوز داخل الخلايا الحر (الشكل 3 ج). لاحظنا أيضًا انخفاض مستويات AMP و ADP من اليوم 0 إلى DID 5 وزيادة مؤقتة في ATP بين DID 1 و DID 3. تشير هذه البيانات إلى أنه ، من اليوم 0 إلى DID 3 ، المقابل لـ النافذة الزمنية التي يصل خلالها GPR17 إلى أقصى تعبير له ، تستخدم OPCs بشكل أساسي الجلوكوز والأحماض الأمينية للحفاظ على التخليق الحيوي للكوليسترول والأحماض الدهنية. في اضطراب الشخصية الانفصامية 5 ، كما يتضح من زيادة مستويات الأسيل كارنيتيني ، من المحتمل أن تعتمد OPCs على استخدام الأحماض الدهنية. تشير هذه البيانات معًا إلى أنه أثناء التمايز الفسيولوجي ، تعيد OPCs بشكل تدريجي توصيل عملية التمثيل الغذائي النشط لتصبح OLs النخاعية الناضجة.

3.3 التحليل الأيضي بعد GPR17 إسكات أثناء نضوج OPC في المختبر

للكشف عن مساهمة مستقبلات GPR17 في قيادة التغيرات الأيضية للطاقة التي تحدث أثناء تمايز الخلايا ، أجرينا عمليات التمثيل الغذائي على OPCs المبطنة لـ GPR 17- ، مقارنةً بالتحكم في OPCs التي تتلقى RNA مخلوطًا. درسنا أولاً تأثير إسكات GPR17 على نضوج OPC عن طريق تلطيخ التألق المناعي لـ GPR17 و MBP. كما هو متوقع ، بعد إسكات المُستقبلات ، وجدنا انخفاضًا في تلطيخ GPR17 ، يمكن رؤيته بوضوح عند 3 اضطراب الشخصية الانفصامية. لاحظنا أيضًا زيادة ملحوظة في عدد OLs الناضجة الإيجابية لـ MBP في كل من اضطراب الشخصية الانفصامية 3 (غير معروض) و 5 اضطراب الشخصية الانفصامية (الشكل S2). بالتوازي ، تم إجراء تحليل qPCR التفصيلي في خمس نقاط زمنية (0 ، 1 ، 2 ، 3 و 5 أيام في التمايز ، DID) ، كشف ، في OPCs المسيطر ، عن زيادة قوية في تعبير GPR17 بعد 1 DID ، التي تصل إلى مستويات مهمة تبدأ بعد 2 إضطراب الشخصية الإنفصامية ، زيادة تدريجية في تعبير MBP تصل إلى 5 إضطراب الشخصية الانفصامية وانخفاض ملحوظ في العلامة المبكرة NG2 (شكل 4 أ). على العكس من ذلك ، بعد إسكات GPR17 (الشكل 4 ب) ، وصل GPR17 mRNA إلى مستويات أقل في DID1 ثم ظل منخفضًا بشكل ثابت ، وزاد تعبير MBP وانخفض NG2 بشكل أكبر. يوضح الشكل 4 ج مقارنة مباشرة بين تعبير NG2 و MBP في GPR 17- الذي تم إسكاته مقابل التحكم في OPCs في كل نقطة زمنية. مجتمعة ، تشير هذه النتائج إلى أنه في ظل هذه الظروف التجريبية ، أدى إسكات GPR17 في OPCs إلى تسريع عملية التمايز. بعد ذلك ، تم إجراء عمليات التمثيل الغذائي لـ OPC بواسطة LC-MS / MS في النقاط الزمنية الخمس المحددة. سمحت لنا مقارنة البيانات الأيضية التي تم الحصول عليها من GPR 17- التي تم إخمادها والتحكم في OPCs في كل نقطة زمنية بتحديد المستقلبات التي تتأثر بشكل كبير بإسكات GPR17

الشكل 3. (أ) يوضح الرسم البياني التغييرات في النسبة المئوية لخلايا GPR17 plus و MBP plus أثناء التمايز. ن=3 لكل مجموعة ؛ ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار Tukey. * p <0. 0 5، ** p <0. 0 1) (ب) توضح خريطة التمثيل الغذائي وفرة المستقلب في كل عينة فردية متوقفة عند 0 ، 1 ، 3 أو 5 DID. يتم تمثيل وفرة المستقلبات التي تم تحليلها بمقياس لوني يتراوح من الأزرق الداكن (وفرة منخفضة جدًا) إلى البني الداكن (وفرة عالية جدًا). ن=4 - 5 لكل مجموعة. (ج) المستقلبات ذات الوفرة تختلف اختلافًا كبيرًا بين الظروف (0 ، 1 ، 3 و 5 أيام في التمايز ، اضطراب الشخصية الانفصامية ؛ ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار فيشر LSD).

في اضطراب الشخصية الانفصامية 1 (شكل 5 أ) ، لم نجد تغييرات مهمة. في إضطراب الشخصية الإنفصامية 2 (الشكل 5 ب) ، وجدنا زيادة ملحوظة في بعض نواتج الأيض لدورة كريبس (مالات ، سيترات فومارات) ، زيادة متواضعة في الكارنيتين الحر (CO) ، أسيتيل كارنيتين (C2) ، بروبيونيل كارنيتين (C3: 0) ​​، بوتيريل كارنيتين (C4: 0) ، فاليريل كارنيتين (C5: 0) ، هيكساديكانويل كارنيتين (C16: 0 وانخفاض ملحوظ في الجلوكوز ، اللاكتات ، الكرياتين ، الأورنيثين.لوحظ أيضًا اختزال الزيت والكرياتين وزيادة بروبيونيل كارنيتين (C3) في DID3 (الشكل 5 ج). في DID 5 (الشكل 5 د) ، ما زلنا نجد زيادة في الكارنيتين الحر ( CO)، acetylcarnitine (C2)، propionyl-carnitine (C3: 0)، butyryl-carnitine (C4: {{3 0}})، valeryl-carnitine (C5: 0 ) tetradecanoyl-carnitine (C14: 0) ، hexadecanoyl-carnitine (C16: 0) ، octadecanoyl-carnitineC18: 0) ، octadecenoyl-carnitine (C18: 1) ، على نحو مشابه لما لوحظ في الأصل في المزيد تمايز الخلايا (انظر الشكل 3) ، وزيادة في ثنائي هيدروكسي أسيتون -3- فوسفات / غليسرالديهيد 3- فوسفات (DHAP / GAP) ، فومارات وسيترات ، وانخفاض في أسيتيل CoA ، Met-SOcreatine ، تورين و كارنوزين.

الشكل 4. تأثير إسكات GPR17 على نضج OPC. تم تقييم مستويات التعبير عن GPR17 (أخضر) ، NG2blue) و MBP (أحمر) بواسطة PCR في الوقت الحقيقي أثناء التمايز في ظروف التحكم (الخلايا المنقولة باستخدام RNA التدافع وبعد إسكات GPR17 (b) ، وتطبيعها مقابل التعبير في T {{ 6}} (معين إلى 0). n=6 لكل نقطة زمنية. ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبارات المقارنات المتعددة من Tukey (أ): ** p <{{1 0} }. 0 0 1 ضد DID 0-2-3-5، @ p <0. 0 5 مقابل DID 3-5؛ ## p < 0. 0 1 مقابل اليوم 0 ؛ SSS p <{{3 0}}. 0 0 1 مقابل DID { {21}} ؛ (ب): *** p <0. 0 0 1 مقابل DID 0-2-3-5 ،@p <0 . 0 01 مقابل اليوم 0 ، # p <0.05 ، ### p <0.001 مقابل اليوم 0.S p <0.05 ، SS p <0.01 ، SSS p <0.001 V. DID 5. (C) تعبير NG2 و MBP في GPR 17- جعل OPCsvs صامتًا. 0.05، * p <0.01؛ *** p <0.001 مقابل DID النسبي في OPCs المتحكم.

الشكل 5. التغيرات الأيضية التي يسببها GPR17 إسكات في OPCs. (أ - د) تم تطبيع وفرة كل مستقلب بعد إسكات GPR17 إلى تلك الموجودة في عينة التحكم النسبية. تم استخدام تغييرات الطي الناتجة لإنشاء مخطط بركان لكل نقطة زمنية (1 ، 2 ، 3 ، 5 أيام في التمايز). تمثل النقاط الموجودة فوق الخط الأفقي المنقط المستقلبات التي أظهرت تغيرًا مهمًا إحصائيًا (تصحيح فيشر LSD بواسطة FDR ؛ ص. adj <0. 1). باللون الأخضر ، المستقلبات ذات التعبير المنخفض ، باللون الأحمر ، تلك ذات التعبير الأعلى ، بعد إسكات GPR17. ن=7 - 9 لكل مجموعة. DID: أيام في التفاضل.

3.4. GPR17 يعدل إطلاق اللاكتات أثناء نضوج OPC

بناءً على نتائج التمثيل الغذائي الموصوفة أعلاه ، وجد أن إسكات GPR17 يقلل من مستويات اللاكتات داخل الخلايا. لتقييم ما إذا كان هذا الانخفاض يعكس انخفاضًا عامًا في استقلاب اللاكتات أو زيادة إطلاق هذا المستقلب ، قمنا بقياس مستوياته في ليسات الخلية وفي الوسائط المقابلة في نقاط زمنية مختلفة. كما هو مبين في الشكل 6 ، في ظروف التحكم ، وصل اللاكتات داخل الخلايا إلى أعلى وفرة في إضطراب الشخصية الإنفصامية 2 (الشكل 6 أ) (عندما يكون تعبير مستقبل GPR17 هو الحد الأقصى أيضًا) ، ثم تقل عندما تصبح الخلايا ناضجة. بدلاً من ذلك ، بعد إسكات GPR17 ، تم إلغاء ظهور اللاكتات داخل الخلايا ، وانخفضت مستوياته بشكل أكبر نحو التمايز. في الواقع ، مقارنة بين مستويات اللاكتات في GPR 17- أسكت OPCs مقابل التحكم في OPCs في كل نقطة زمنية أبرزت انخفاضًا في مستوياتها عند DID 2 و 3 (الشكل 6 ب). اتبعت اللاكتات خارج الخلية حركيات مختلفة ، مما أظهر انخفاضًا ملحوظًا مقارنة باضطراب الشخصية الانفصامية 1 عند اضطراب الشخصية الانفصامية 2-3-5 في ظروف التحكم ، بينما في GPR 17- التي تم إسكات OPCs بقيت أعلى بثبات ثم انخفضت بشكل ملحوظ في DID 5 (الشكل 6 ج) ). ومع ذلك ، عند مقارنة مستويات اللاكتات في نقاط زمنية مختلفة بين الشرطين التجريبيين ، فإن إسكات GPR17 أعاق التخفيض الفسيولوجي ،زيادة وجود اللاكتاتفي الوسط عند DID 2 و 3 (الشكل 6 د) ،مما يشير إلى زيادة الإصدار.

الشكل 6. إسكات GPR17 في OPCs يغير استقلاب اللاكتات. (أ) وفرة اللاكتات أثناء نضوج OPC في ظروف التحكم (الخط الأخضر) وبعد إسكات GPR17 (الخط البرتقالي). ن=7 - 9 لكل مجموعة. ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار Tukey للمقارنات المتعددة. * p <0. 0 5، ** p <0. 0 1 مقابل DID2 CTL ؛ §§ p <0. 0 1، §§§ p <{{3 0}}. 0 0 1 مقابل DID1 siGPR17 (b ) تم تطبيع مستويات اللاكتات بعد إسكات GPR17 مقابل عينات التحكم (مضبوطة على 1) في كل نقطة زمنية (ن=7 - 9). ** ف <0.01 ؛ عينة واحدة اختبار t. تم جمع الوسائط المكيفة من GPR 17- التي تم إخمادها والتحكم في OPCs من نفس الثقافة المستخدمة في التحليل الأيضي. تم تقييم مستويات اللاكتات في وسائل الإعلام بواسطة LC-MS / MS. (ج) وفرة اللاكتات في الفضاء خارج الخلية أثناء نضوج OPC في ظروف التحكم (الخط الأخضر) وبعد إسكات GPR17 (الخط البرتقالي). ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار Tukey للمقارنات المتعددة. ** ف <0.01 ، *** ف <0.001 مقابل DID1 CTL ؛ § p <0.05 مقابل DID5 siGPR17. (د) تم تطبيع مستويات اللاكتات خارج الخلية بعد إسكات GPR17 مقابل عينات التحكم (المحددة على 1) في كل نقطة زمنية. * ف <0.05 ؛ ** ف <0.01 ؛ عينة واحدة اختبار t. تم تقييم تأثير تثبيط MCT1 في التحكم (e ، g) و GPR {45}} الذي تم إسكاته (f ، h) OPCs من خلال تحليل التعبير عن MBP ، في العينات المعالجة بالمثبط مقابل الضوابط النسبية (السيارة المعالجة) ، في 3 و 5 أيام من التفاضل. ن=6 لكل مجموعة.

إحدى الآليات التي يتم من خلالهايمكن أن تطلق OPCs اللاكتاتمن خلال ناقل أحادي الكربوكسيل MCT1. علاوة على ذلك ، أفادت الدراسات الحديثة أن OPCs نفسها يمكن أن تكتسب اللاكتات خارج الخلية من خلال مستقبلات MCT التي تعزز دورانها الخلوي وتمايزها [39]. وبالتالي ، تساءلنا عما إذا كان يمكن التوسط في زيادة إطلاق اللاكتات الناجم عن إسكات GPR17 بواسطة MCT1 وما إذا كان هذا قد يكون مسؤولاً جزئيًا عن التأثير الملحوظ على نضج OPC في نفس الظروف (الشكل 4). لتحقيق هذا الهدف ، قمنا بمعالجة OPCs باستخدام AR-C155858 ، وهو مثبط انتقائي لـ MCT1 ، أثناء التمايز الطبيعي وبعد إسكات GPR17. كما هو متوقع ، تم منع إطلاق اللاكتات بنجاح في كلتا الحالتين (الشكل S3). تم تقييم تأثير تثبيط MCT1 على نضج OPC في الظروف التجريبية المختلفة من خلال تحليل مستويات التعبير عن MBP. تم العثور على انخفاض متواضع في التعبير الجيني لـ MBP ، وهو قريب من الدلالة الإحصائية (ص=0. 07) ، فقط في العينات المنقولة باستخدام siRNA المحدد لـ GPR17 (الشكل 6e-h) ؛ ومع ذلك ، لم يظهر أي اختلاف كبير في العينات المنقولة بواسطة التحكم RNA (siNEG). تشير هذه النتائج إلى أن الزيادة في اللاكتات خارج الخلية بوساطة تقليل التنظيم GPR17 تعزز نضج OPCs ؛ ومع ذلك ، فإن المدى الصغير لتقليل MBP يشير إلى أن هذا المستقلب ليس هو العامل الوحيد المتضمن في العملية.

3.5 التحليل الدهني بعد GPR17 إسكات أثناء نضوج OPC

سلطت نتائج التحليل الترانسكريبتومي بعد إسكات GPR17 الضوء أيضًا على وجود صلة محتملة بين وظيفتها والمسارات الاصطناعية للدهون والكوليسترول ، والتي تعد المكونات الرئيسية للميالين. لمزيد من التحقيق في دور GPR17 في استقلاب الدهون ، طبقنا LC-MS / MS على التحليل الدهني لـ GPR 17- OPCs الصامتة بعد 2 و 3 و 5 أيام في التمايز ، مقارنة باليوم 0. تم الإبلاغ عن قائمة الدهون التي تم تحليلها وتغييرات الطية النسبية والقيم p في الجدول S4. كانت أكثر فئات الدهون وفرة في المجموعات التجريبية هي الأحماض الدهنية وعائلة دياسيل فوسفاتيديل كولين (PCaa). أثناء تمايز OPCs الضابطة ، لم نجد أي تغييرات مهمة في وفرة أي فئة دهنية. بدلاً من ذلك ، أظهرت GPR 17- OPCs التي تم إسكاتها اتجاهًا نحو وفرة متغيرة من الأحماض الدهنية الحرة ، سيراميد ، أسيل ألكيل فوسفاتيديل كولين (PCae) ، وفوسفاتيديلينوسيتول (PI) مقارنةً بالتحكم في OPCs ، خاصةً في DID 3 و 5 ، ولكن فقط diacyl-phosphatidylethanolamine (PEaa) و sphingomyelin (SM) أظهر تغييراً ذا دلالة إحصائية (الشكل 7).

الشكل 7. التغييرات في وفرة الفئات الدهنية الناجمة عن GPR17 إسكات أثناء تمايز OPC. تم الإبلاغ عن وفرة كل فئة من فئات الدهون في ظروف التحكم في نقاط زمنية مختلفة (أ) تم تحليل حركية كل فئة دهنية بعد إسكات GPR17: (ب) الأحماض الدهنية ، (C) سيراميد (د) LysoPC (ليسوفوسفاتيديل-كولين) ، (هـ) ليسوب (ليسوفوسفاتيديليثانولامين) ، (و) PCaa (دياسيل فوسفاتيديل كولين) ، (ز) PCae (أسيل ألكيل فوسفاتيديل كولين) ، (ح) PEaa (ثنائي أسيل فوسفاتيديل إيثانولامين) ، (ط) PEae (acyl-alkyl-phosphatidyl-ethanolamines)، (i) PI (phosphatidylinositols)، (k) PS (phosphatidyl-serines)، (D SM (sphingomyelins). n=5 لكل مجموعة. الحركية: ثنائية الاتجاه ANOVA متبوعًا باختبار Tukey للمقارنة المتعددة. siGPR17: ANOVA ثنائي الاتجاه متبوعًا باختبار Sidak للمقارنة المتعددة. * p.adi <0. 0 5 ، ** p.adi <0.01.

أتاحت لنا مقارنة البيانات الدهنية التي تم الحصول عليها من GPR 17- التي تم إخمادها وضوابطها في كل نقطة زمنية تحديد الدهون التي تأثرت بشكل كبير بإسكات GPR17. بعد 2 إضطراب الشخصية الإنفصامية ، لم يتم العثور على تغييرات مهمة (البيانات غير معروضة). بعد 3 DID ، كان diacylphosphatidylcholine (PCaa) C40: 4 أقل وفرة وكان diacyl-phosphatidylethanolaminePEaa) C34: 3 أكثر وفرة في GPR 17- OPCs (الشكل 8 أ). بعد 5 أيام من التمايز ، أدى إسكات GPR17 إلى العديد من التغييرات في وفرة الدهون: تقليل العديد من أجهزة diacyl-PCs و diacyl-PE وزيادة مصاحبة في العديد من plasmalogens (acyl alkyl-PC) جنبًا إلى جنب مع sphingomyelin (SM) C18: 1 و SM (أوه) C16: 1 (الشكل 8 ب). تشير هذه البيانات إلى أن تقليل تنظيم GPR17 يغير المظهر الدهني للمكون الرئيسي للميلين مثل PC و PE.

الشكل 8.التغيرات الدهنية التي يسببها إسكات GPR17 في OPCs. (أ ، ب) تم تطبيع وفرة كل دهون بعد إسكات GPR17 إلى تلك الموجودة في عينة التحكم النسبية. تم استخدام تغييرات الطيات الناتجة لإنشاء مخطط بركان لكل نقطة زمنية (3 ، 5 أيام في التمايز). تمثل النقاط الموجودة فوق الخط الأفقي المنقط المستقلبات التي أظهرت تغيرًا مهمًا إحصائيًا (تصحيح Fisher LSD بواسطة FDR ؛ p.adj <0. 1). باللون الأخضر ، الدهون ذات التعبير المنخفض ، باللون الأحمر ، تلك التي لها تعبير أعلى ، بعد إسكات GPR17. ن=5 لكل مجموعة.

يطلب المزيد:

البريد الإلكتروني: wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp / Tel: plus 86 15292862950

محل:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop