كيف تمنع المادة العشبية Acteoside الخلايا السرطانية؟

الاتصال: أودري هو واتساب / حصان: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

تجريدي

تتميز المنتجات الطبيعية بالتنوع الهيكلي الشديد ، وبالتالي فهي توفر مصدرا فريدا لتحديد العوامل الجديدة المضادة للورم. هنا ، نبلغ أن المادة العشبيةأكتيوسيدتم عزلها بطرق كيميائية نباتية متقدمة من أوراق Lippia citriodora أظهرت سمية خلوية معززة ضد الخلايا السرطانية النقيلية ؛ عملت في التآزر مع مختلف العوامل السامة للخلايا والخلايا السرطانية المقاومة للكيميائيات الحساسة.أكتيوسيدمن هيربا سيستانتشسلم تكن سامة في السياقات الخلوية الفسيولوجية ، في حين أنها زادت من الحمل التأكسدي ، وأثرت على نشاط الوحدات البروتينية ، وقمعت مصفوفة ميتالوبروتيناز في خطوط الخلايا السرطانية. إعطاء داخل الصفاق أو عن طريق الفم (عن طريق مياه الشرب)سيستانشأكتيوسيد في نموذج الفأر سرطان الجلد رفع تنظيم الاستجابات المضادة للأكسدة في الأورام. ومع ذلك ، فإن الولادة داخل الصفاق فقط هي التي قمعت نمو الورم وحفزت الاستجابات المناعية المضادة للورم. كشفت تحليلات تحديد / قياس الطيف الكتلي الكمي أن التسليم داخل الصفاقأكتيوسيدأدى إلى أعلى بكثير ، مقابل تناوله عن طريق الفم ، تركيز المركب في البلازما وأورام الفئران المعالجة ، مما يشير إلى أنه في الجسم الحي تأثير مضاد للورم يعتمد على مسار الإدارة والتركيز المحقق في الورم. وأخيرا ، أظهرت دراسات النمذجة الجزيئية واختبارات النشاط الأنزيمي أن الأكتيوسيد يمنع بروتين كيناز C. بشكل قاطع ، يحمل أكتيوسيد وعدا كسقالة كيميائية لتطوير عوامل جديدة مضادة للورم.

الكلمات الرئيسيه:أكتيوسيدسرطان, مركب طبيعي, إجهاد تأكسدي, بروتيوستاسيس, تعديل مناعي,

Cistanche مضاد للورم ، انقر هنا للحصول على العينة

1. مقدمة

يتميز التسرطن بتحرير العديد من مسارات إشارات الخلايا ويرتبط بزيادة الإجهاد التأكسدي الخلوي والتكراري والأيضي والسمي الجيني والسمي البروتيني [1]. للتكيف مع هذه الأنماط الظاهرية للإجهاد والتغلب عليها ، تقوم الخلايا الخبيثة بتنظيم (بصرف النظر عن الجينات الورمية) العديد من المسارات غير الورمية التي تهدف إما إلى قمع أو (على الأقل) تخفيف الإجهاد المستمر. من بين المسارات المختلفة غير الورمية التي تم العثور عليها بشكل متكرر أثناء تكوين الورم هي وحدات شبكة البروتوستاسيس (PN) جنبا إلى جنب مع الاستجابات المضادة للأكسدة الخلوية [2,3].

المكونات الرئيسية ل PN هي آليتا التحلل الرئيسيتان ، وهما مسار الالتهام الذاتي - الليزوسوم (ALP) ومسار Ubiquitin-Proteasome (UPP) ، إلى جانب شبكة المرافقين الجزيئيين الخلويين. يشارك ALP بشكل رئيسي في تدهور مجاميع البروتين والعضيات التالفة [4] ، في حين أن UPP يحلل البروتينات الطبيعية قصيرة العمر والبروتينات غير القابلة للإصلاح غير المطوية أو غير المطوية [5-8]. يتكون البروتيازوم حقيقيات النواة 26Searyotic من الجسيمات التنظيمية 19S (RP) وجسيم 20 Score (CP) ؛ يتكون هذا الأخير من أربع حلقات سباكية مكدسة (اثنتان من النوع α تحيط باثنين من النوع β) التي تشكل بنية تشبه البرميل. تقع أنشطة الببتيداز الشبيهة بالكيموتريبسين (CT-L) والشبيهة بالتريبسين (T-L) والشبيهة بالكاسباز (C-L) في الوحدات الفرعية البروتيازومية β5 و β2 و β1 ، على التوالي [6]. قدمت الفعالية السريرية المثبتة لمثبطات البروتيازوم Bortezomib (Velcade® ؛ وتسمى أيضا PS-341) و Carfifilzomib ضد الأورام الخبيثة الدموية المختلفة [9] "دليلا على المفهوم" لاستهداف UPP كاستراتيجية واعدة لعلاج السرطان. تتضمن الشبكة المعقدة من مسارات الدفاع الخلوية المضادة للأكسدة التي يتم تنظيمها بشكل متكرر أثناء التسرطن [3,10] إنزيمات مضادة للأكسدة ، بالإضافة إلى العديد من عوامل النسخ التي تحشد الاستجابات الجينومية الواقية من الخلايا. وتشمل هذه مربع رأس الشوكة O (Foxo) والعامل النووي الإريثرويد 2 العامل المرتبط (Nrf-2). Nrf-2 هو محور حماية الخلايا ضد الضرر التأكسدي و / أو xenobiotic لأنه يحفز التعبير عن مضادات الأكسدة وجينات المرحلة الثانية [11-13].

لقد اقترحنا نحن وآخرون مؤخرا أن استهداف هذه التبعيات للورم (أي الوحدات البروتينية و / أو مسارات الاستجابة المضادة للأكسدة) أو زيادة المستويات الخلوية ل ROS في سياق النمط الوراثي المتحول يوفر نافذة علاجية محتملة للقتل الانتقائي للخلايا السرطانية [3,14] ؛ في الدعم ، تم الإبلاغ عن القتل الانتقائي للخلايا السرطانية بواسطة جزيء صغير يرفع مستويات ROS الخلوية المنظمة [2]. من المتوقع أن تؤدي النهج التوافقية بما في ذلك أيضا تنشيط الاستجابات المناعية المضادة للورم التفاعلية [15] إلى أقصى حد من النافذة العلاجية المقدمة عن طريق تثبيط PN والاستجابات المضادة للأكسدة و / أو عن طريق رفع مستويات ROS الخلوية.

يتم فحص المنتجات الطبيعية (المستخلصات أو المركبات النقية) (NPs) من مصادر مختلفة (النباتات والكائنات البحرية والكائنات الحية الدقيقة ، إلخ) لقدرتها على العمل كعوامل مضادة للأورام بسبب تنوعها الهيكلي الشديد وتعقيدها الكيميائي ، وكذلك لأنها تعمل على تعديل متعدد الاستوائيات لعدة مسارات إشارات خلوية [16]. يقال إن NPs تنشط الاستجابات المضادة للالتهابات و / أو المضادة للأورام و / أو المضادة للنقيلي [16,17] وتتهرب أيضا من مقاومة الأدوية المتعددة [18,19]. من بين هذه المركبات ، جذبت المركبات الفينولية (بما في ذلك جليكوسيدات الفينيل إيثانويد) اهتماما كبيرا بسبب دورها المبلغ عنه في الوقاية و / أو العلاج من الأمراض البشرية المختلفة.

أكتيوسيد ، وتسمى أيضا kusagin أو verbascoside [20] ، هو جليكوسيد فينيل يثانويد معزول عن العديد من ثنائيات الفلدونات. يقال إن الأكتيوسيد يمارس بعض الأنشطة البيولوجية المثيرة للاهتمام ، بما في ذلك خصائص تنظيم مضادات الأكسدة والمضادة للالتهابات وموت الخلايا المبرمج [21,22]. ومع ذلك ، لم يتم التعامل مع نشاطها المحتمل المضاد للورم. نذكر هنا ، أن acteoside أظهر زيادة السمية الخلوية ضد خلايا سرطان الثدييات مع عدم وجود آثار سامة واضحة في السياقات الخلوية الفسيولوجية. علاوة على ذلك ، قمع acteoside نمو ورم سرطان الجلد في نموذج فأر في الجسم الحي ، عن طريق (من بين أمور أخرى) تنشيط الاستجابات المناعية المضادة للورم.

مستخلص سيستانش مضاد للورم

2. المواد والأساليب

2.1. المواد النباتية واستخراجها

تم شراء أوراق Lippia citriodora المجففة (Lamiaceae) (4.5 كجم) من السوق المحلية في أثينا ، اليونان. تم سحق الأوراق واستخراجها عن طريق التحريك الميكانيكي لمدة 12 ساعة باستخدام الميثانول (2 × 20 لتر). تبخر مستخلص الميثانول حتى الجفاف وغسله بمزيج من CH2Cl2 / MeOH 98/2 (15 لتر). تم فصل البقايا غير القابلة للذوبان وتجفيفها ، مما أدى إلى إنتاج مسحوق أخضر أصفر (450 جم).

2.2. تنقية تحليل الأكتيوسيد و UPLC-HRMS

وتعرض جزء (10 غرامات) من المخلفات المذكورة أعلاه لكروماتوغرافيا معاكسة للتيار باستخدام جهاز كروماتوغرافيا تقسيم الطرد المركزي السريع (FCPC) (كروماتون، فرنسا)؛ تم استخدام خليط من EtOAc / EtOH / H2O بنسبة 5 / 0.5 / 4.5 كنظام مذيب ثنائي الطور. تعرضت الكسور المجمعة لكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة. ثم لوحظت الكروماتوغرام تحت مصباح الأشعة فوق البنفسجية (254 و 365 نانومتر) وتصورها عن طريق الرش بكبريتات فانيلين الميثانول تليها التسخين لمدة دقيقتين. تم عزل ما مجموعه 2.1 غرام من الأكتيوسيد (النقاء ≥ 90 ٪) من خلال العملية المذكورة أعلاه. وقد تم تحديد الأكتيوسيد بواسطة أطياف الرنين المغناطيسي النووي (NMR) ومطياف الكتلة (MS)، في حين تم تحديد نقائه من خلال تحليل UPLC-MS وNMR؛ لمزيد من التفاصيل انظر المواد والأساليب الملحقة.

2.3. خطوط الخلايا

الخلايا الليفية الجنينية الرئوية البشرية (خلايا IMR90) جنبا إلى جنب مع B16. F1 ، B16. تم الحصول على خطوط خلايا الماوس F10 و YAC-1 و WEHI-164 من مجموعة زراعة الأنسجة الأمريكية (ATCC). تم التبرع بخطوط خلايا الساركوما العظمية البشرية U2 OS و Sa OS من قبل البروفيسور V. Gorgoulis (كلية الطب ، الجامعة الوطنية وجامعة Kapodistrian في أثينا ، اليونان) ، في حين أن خلايا الساركوما العظمية KH OS وخطوط خلايا الساركوما العظمية المقاومة للكيمياء [23] كانت تبرعا من الدكتور E. Gonos (المؤسسة الوطنية للبحوث اليونانية ، اليونان). تنتمي خطوط الخلايا السرطانية للفئران C5N و A5 إلى نموذج سرطان جلد الفأر متعدد المراحل [24,25] وتم التبرع بها من قبل البروفيسور أ. بالمان (مركز السرطان الشامل ، جامعة كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). يتم الإبلاغ عن ظروف زراعة خطوط الخلايا المستخدمة في Suppl. المواد والأساليب.

فائدة من استخراج سيستانش: المضادة للسرطان

2.4. نموذج ماوس سرطان الجلد

تم الحصول على ذكور الفئران C57BL/6 (25-30 جم من الوزن ، 6-8 أسابيع من العمر) من معهد باستور اليوناني ووضعها تحت درجة حرارة خاضعة للرقابة (22 درجة مئوية) وفترة ضوئية (12 ساعة ضوء: 12 ساعة مظلمة) مع حرية الوصول إلى الماء والطعام. تم تلقيح الفئران تحت الجلد ب 105 B16. خلايا الورم الميلانيني F1 (في 100 ميكرولتر PBS) وتم تعيينها عشوائيا إلى 3 مجموعات (n = 5 / مجموعة). عندما أصبحت الأورام واضحة (اليوم 11) تلقت الفئران acteoside عبر طريقين. إما داخل الصفاق (IP) (1 ملغ / فأر مخفف في 200 ميكرولتر PBS ؛ في المجموع 6 جرعات تدار كل يوم) أو عن طريق الفم عن طريق مياه الشرب (OR) (2.5 ملغ / فأر ؛ في المجموع 13 جرعة لمدة 13 يوما متتاليا). تم إعطاء الفئران السيطرة PBS. تم تسجيل نمو الورم كل 2 أيام عن طريق قياس المحاور الرئيسية والثانوية للأورام المشكلة باستخدام الفرجار الرقمي. تم تحويل القياسات إلى حجم الورم باستخدام الصيغة: حجم الورم (cm3) = المحور الرئيسي × المحور الثانوي2 × 0.5. في اليوم 28 ، تم قتل الحيوانات الرحيم عن طريق خلع عنق الرحم ، وتم إزالة الطحال عن طريق التعقيم. تكررت التجربة ثلاث مرات مع نتائج مماثلة.

تم عزل الخلايا الطحالية من الطحال المتجانس بشكل فردي وتم اختبارها على الفور لسميتها الخلوية مقابل B16. أهداف خلايا F1 و YAC-1 و WEHI-164. تم تقييم السمية الخلوية بناء على الكشف عن التعرض ل CD107 على سطح الخلية ، نتيجة لإزالة حبيبات الخلايا المستجيبة. تم استزراع الخلايا الطحالية (105 خلية / بئر) بشكل مشترك مع أهداف في صفائح صغيرة من قاع U ذات 96 بئرا بنسبة مستجيب إلى مستهدف (E: T) تبلغ 100: 1 ، عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO2. تمت إضافة الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المترافقة مع FITC CD107a والمضادة ل CD107 b (25 ميكرولتر / مل) و monensin (6 ميكرولتر / مل ؛ وكلها من BD Biosciences) في كل بئر. تم حصاد الخلايا بعد 6 ساعات وتحليلها باستخدام مقياس التدفق الخلوي FACSCanto II. في موازاة ذلك ، تم استئصال الأورام ومعالجتها للفحوصات النهائية كما هو موضح في Suppl. المواد والأساليب.

آثار استخراج cistanche: المضادة للأورام والسرطان