السمية الانتقائية للخلايا للمادة العشبية Acteoside ضد الخلايا السرطانية ورؤاها الميكانيكية
Mar 14, 2022
جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com
كريستينا شيموندي وآخرون
نبذة مختصرة
تتميز المنتجات الطبيعية بالتنوع الهيكلي الشديد وبالتالي فهي توفر مصدرًا فريدًا لتحديد العوامل الجديدة المضادة للأورام. وهنا نذكر أن المادة العشبيةأكتيوسيدتم عزلها بواسطة طرق كيميائية نباتية متقدمة من أوراق Lippia citriodora وأظهرت زيادة السمية الخلوية ضد خلايا الورم النقيلي ؛ عملت بالتآزر مع العديد من العوامل السامة للخلايا والخلايا السرطانية المقاومة للكيماويات.أكتوسيدلم تكن سامة في السياقات الخلوية الفسيولوجية ، في حين أنها زادت من الحمل التأكسدي ، وأثرت على نشاط الوحدات البروتينية ، وقمعت البروتينات المعدنية المصفوفة في خطوط الخلايا السرطانية. إعطاء داخل الصفاق أو عن طريق الفم (عن طريق مياه الشرب) أكتيوسيد في نموذج فأر الميلانوما ينظم استجابات مضادات الأكسدة في الأورام ؛ ومع ذلك ، فإن الولادة داخل الصفاق هي الوحيدة التي أدت إلى كبت نمو الورم واستحثت الاستجابات المناعية المضادة للورم. كشفت تحليلات تحديد / قياس الطيف الكتلي أن التوصيل داخل الصفاق لـأكتيوسيدأدى تناوله عن طريق الفم إلى زيادة تركيز المركب في البلازما وأورام الفئران المعالجة ، مما يشير إلى أن تأثيره المضاد للورم في الجسم الحي يعتمد على طريقة الإعطاء والتركيز الذي تم تحقيقه في الورم. أخيرًا ، أظهرت دراسات النمذجة الجزيئية ومقايسات النشاط الأنزيمي ذلكأكتيوسيديثبط بروتين كيناز ج.وبشكل قاطع ، فإن الأكتوزيد يبشر بالخير باعتباره سقالة كيميائية لتطوير عوامل جديدة مضادة للأورام.
الكلمات الدالة:أكتوسيد، السرطان ، المركب الطبيعي ، الإجهاد التأكسدي ، البروتينات ، التحوير المناعي
1 المقدمة
يتميز التسرطن بإلغاء الضوابط التنظيمية للعديد من مسارات الإشارات الخلوية ويرتبط بزيادة الإجهاد التأكسدي الخلوي والتكاثر والتمثيل الغذائي والتسمم الجيني والسموم للبروتينات [1]. للتكيف والتغلب على هذه الأنماط الظاهرية للضغط ، تنظم الخلايا الخبيثة (بصرف النظر عن الجينات المسرطنة) العديد من المسارات غير السرطانية التي تهدف إما إلى قمع أو (على الأقل) تخفيف الضغط المستمر. من بين العديد من المسارات غير السرطانية التي تم العثور عليها في كثير من الأحيان أثناء تكون الأورام هي الوحدات النمطية لشبكة البروتينات (PN) جنبًا إلى جنب مع الاستجابات الخلوية المضادة للأكسدة [2،3].
المكونات الرئيسية لـ PN هما آليتا التحلل الرئيسيان ، وهما مسار Autophagy- Lysosome (ALP) ومسار Ubiquitin-Proteasome (UPP) ، جنبًا إلى جنب مع شبكة المرافق الجزيئية الخلوية. يشارك ALP بشكل أساسي في تحلل تجمعات البروتين والعضيات التالفة [4] ، بينما يقوم UPP بتحطيم البروتينات العادية قصيرة العمر والبروتينات غير المطوية أو غير القابلة للإصلاح غير القابلة للإصلاح [5-8]. يتكون البروتيازوم 26Seukaryotic من الجسيمات التنظيمية 19S (RP) وجسيم 20 Score (CP) ؛ يتكون الأخير من أربع حلقات سباعية مكدسة (اثنان من نوع محاطين من نوعين) التي تشكل هيكلًا يشبه البرميل. تقع أنشطة ببتيداز البروتوزوم الشبيهة بالكيموتريبسين (CT-L) ، والتي تشبه التربسين (TL) ، وأنشطة الببتيداز البروتوزومي (CL) في الوحدات الفرعية 5 و 2 و 1 على التوالي [6]. قدمت الفعالية السريرية المثبتة لمثبطات البروتوزوم بورتيزوميب (Velcade® ؛ المسمى أيضًا PS -341) و Carfifilzomib ضد الأورام الخبيثة الدموية المختلفة [9] "دليلًا على المفهوم" لاستهداف UPP كاستراتيجية واعدة لـ علاج السرطان. تتضمن الشبكة المعقدة من مسارات الدفاع الخلوية المضادة للأكسدة التي يتم تنظيمها بشكل متكرر أثناء التسرطن [3،10] إنزيمات مضادة للأكسدة ، بالإضافة إلى العديد من عوامل النسخ التي تحشد الاستجابات الجينومية الواقية للخلايا ؛ تتضمن هذه العناصر forkhead box O (Foxo) والعامل النووي المحمر 2- ذي الصلة (Nrf -2). Nrf -2 هو عنصر أساسي في حماية الخلايا من الأكسدة و / أو الأضرار الغريبة الحيوية لأنه يحفز التعبير عن مضادات الأكسدة وجينات المرحلة الثانية [11-13].
لقد اقترحنا وآخرون مؤخرًا أن استهداف تبعيات الورم هذه (أي الوحدات البروتينية و / أو مسارات الاستجابة لمضادات الأكسدة) أو زيادة المستويات الخلوية لـ ROS في سياق النمط الجيني المحول يوفر نافذة علاجية محتملة للقتل الانتقائي للخلايا السرطانية [3 ، 14] ؛ دعمًا ، تم الإبلاغ عن القتل الانتقائي للخلايا السرطانية بواسطة جزيء صغير يعمل على زيادة مستويات ROS الخلوية [2]. من المتوقع أن الأساليب التجميعية بما في ذلك أيضًا تنشيط الاستجابات المناعية المضادة للورم [15] من المرجح أن تزيد من النافذة العلاجية التي توفرها تثبيط PN والاستجابات المضادة للأكسدة و / أو عن طريق رفع مستويات ROS الخلوية.
يتم فحص المنتجات الطبيعية (المستخلصات أو المركبات النقية) (NPs) من مصادر مختلفة (النباتات ، والكائنات البحرية ، والكائنات الدقيقة ، وما إلى ذلك) لقدرتها على العمل كعوامل مضادة للأورام بسبب تنوعها الهيكلي الشديد وتعقيدها الكيميائي ، وكذلك بسبب إنها تعمل على تعديل تعدد مسارات الإشارات الخلوية [16]. يقال أن NPs تنشط الاستجابات المضادة للالتهابات و / أو المضادة للورم و / أو المضادة للنقائل [16،17] وتتجنب أيضًا مقاومة الأدوية المتعددة [18،19]. من بين هذه المركبات الفينولية (بما في ذلك جليكوسيدات الفينيثانويد) قد جذبت اهتمامًا كبيرًا بسبب دورها المبلغ عنه في الوقاية و / أو علاج الأمراض البشرية المختلفة.
Acteoside ، ويسمى أيضًا الاستخدام أو verbascoside [20] ، هو جليكوسيد فينيليثانويد معزول من العديد من ثنائي الفلقة. وبحسب ما ورد ، يمارس Acteoside بعض الأنشطة البيولوجية المثيرة للاهتمام ، بما في ذلك خصائص تنظيم موت الخلايا المبرمج ومضادات الأكسدة ومضادات الالتهاب [21 ، 22]. ومع ذلك ، لم تتم معالجة نشاطه المحتمل المضاد للورم. أبلغنا هنا ، أن هذا الأكتوزيد أظهر زيادة في السمية الخلوية ضد خلايا سرطان الثدييات مع عدم وجود آثار سمية واضحة في السياقات الخلوية الفسيولوجية. علاوة على ذلك ، قام Acteoside بقمع نمو ورم الميلانوما في نموذج Vivo فأر ، عن طريق (من بين أمور أخرى) تنشيط الاستجابات المناعية المضادة للورم.
2. المواد والأساليب
2.1. المواد النباتية واستخراجها
تم شراء أوراق Lippia citriodora (Lamiaceae) المجففة (4.5 كجم) من السوق المحلي في أثينا ، اليونان. تم سحق الأوراق واستخلاصها بالتقليب الميكانيكي لمدة 12 ساعة بالميثانول (2 × 20 لتر). يبخر المستخلص الميثانولي حتى يجف ويغسل بمزيج من CH2Cl2 / MeOH 98/2 (15 لتر). تم فصل البقايا غير القابلة للذوبان وتجفيفها ، مما ينتج مسحوقًا أخضر-أصفر (450 جم).
2.2. تنقية تحليل acteoside و UPLC-HRMS
تم إخضاع جزء (1 0 جم) من البقايا المذكورة أعلاه لكروماتوجرافيا التيار المعاكس باستخدام جهاز كروماتوجرافيا فاصل سريع للطرد المركزي (FCPC) (كروماتون ، فرنسا) ؛ تم استخدام خليط من EtOAc / EtOH / H2O بنسبة 5 / 0.5 / 4.5 كنظام مذيب ثنائي الطور. تم إخضاع الكسور المجمعة لطبقة رقيقة كروماتوغرافيا. ثم لوحظت المخططات اللونية تحت مصباح الأشعة فوق البنفسجية (254 و 365 نانومتر) وتم تصورها عن طريق الرش بميثانول كبريتات الفانيلين متبوعًا بالتسخين لمدة دقيقتين. تم عزل ما مجموعه 2.1 جم من Acteoside (نقاء أكبر من أو يساوي 90 في المائة) من خلال العملية المذكورة أعلاه. تم تحديد الأكتيوسايد عن طريق الرنين المغناطيسي النووي (NMR) وأطياف قياس الطيف الكتلي (MS) ، في حين تم تحديد نقاوته من خلال تحليل UPLC-MS و NMR ؛ لمزيد من التفاصيل ، انظر ملحق. المواد والأساليب.
2.3 خطوط الخلية
تم الحصول على الخلايا الليفية الجنينية للرئة البشرية (خلايا IMR90) جنبًا إلى جنب مع خطوط خلايا الماوس B16.F1 و B16.F10 و YAC -1 و WEHI -164 من مجموعة زراعة الأنسجة الأمريكية (ATCC). تم التبرع بخطوط الخلايا الساركوما العظمية البشرية U2 OS و Sa OS من قبل البروفيسور ف. تبرع من الدكتور إي جونوس (المؤسسة الوطنية للبحوث اليونانية ، اليونان). تنتمي سلالات خلايا سرطان الفأر C5N و A5 إلى نموذج مسرطن لجلد الفأر متعدد المراحل [24،25] وقد تبرع بهما البروفيسور أ. بالمين (مركز السرطان الشامل ، جامعة كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الإبلاغ عن ظروف زراعة خطوط الخلايا المستخدمة في ملحق. المواد والأساليب.
الاستفادة منcistanche acteoside
2.4 نموذج الفأر الميلانوما الذكور
تم الحصول على C57BL / 6 الفئران (25 - 3 0 جرام من الوزن ، 6-8 أسابيع من العمر) من معهد هيلينيك باستور وتم إيواؤها تحت درجة حرارة مضبوطة (22 درجة) وفترة الضوء (12 ساعة ضوء: 12 ساعة مظلمة ) مع حرية الوصول إلى الماء والطعام. تم تلقيح الفئران تحت الجلد بـ 105 خلايا سرطان الجلد B16.F1 (في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني) وتم توزيعها بشكل عشوائي على 3 مجموعات (ن=5 / مجموعة). عندما أصبحت الأورام واضحة (اليوم 11) ، تلقت الفئران أكتيوسيد عبر طريقين ؛ إما داخل الصفاق (IP) (1 مجم / فأر مخفف في 200 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني ؛ في المجموع 6 جرعات تدار كل يوم) أو عن طريق الفم عن طريق مياه الشرب (2.5 مجم / فأر ؛ في المجموع 13 جرعة لمدة 13 يومًا متتاليًا). كانت تدار الفئران التحكم PBS. تم تسجيل نمو الورم كل يومين عن طريق قياس المحاور الرئيسية والثانوية للأورام المتكونة باستخدام الفرجار الرقمي. تم تحويل القياسات إلى حجم الورم باستخدام الصيغة: حجم الورم (سم 3)=المحور الرئيسي × المحور الثانوي 2 × 0.5. في اليوم 28 ، تم التخلص من الحيوانات عن طريق خلع عنق الرحم ، وتم استئصال الطحال بطريقة معقمة. التجربة أعيدت ثلاث مرات بنتائج مماثلة.
تم عزل الخلايا الطحالية من الطحال المتجانس بشكل فردي واختبارها على الفور لسميتها الخلوية مقابل أهداف الخلايا B16.F1 و YAC -1 و WEHI -164. تم تقييم السمية الخلوية بناءً على الكشف عن تعرض CD107 على سطح الخلية ، نتيجة تحلل الخلايا المستجيبة. تمت زراعة الخلايا الطحالية (105 خلية / بئر) بشكل مشترك مع أهداف في 96- ألواح ميكروية أسفل البئر U عند مستجيب لاستهداف نسبة (E: T) بنسبة 100: 1 ، عند 37 درجة في 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون. تمت إضافة الأجسام المضادة أحادية النسيلة المقترنة بـ FITC و CD107b (25 ميكرولتر / مل) و monensin (6 ميكرولتر / مل ؛ جميعها من BD Biosciences) في كل بئر. تم حصاد الخلايا بعد 6 ساعات وتحليلها باستخدام مقياس التدفق الخلوي FACSCanto II. في موازاة ذلك ، تم استئصال الأورام ومعالجتها لإجراء فحوصات المصب كما هو موضح في ملحق. المواد والأساليب.
cistanche acteoside
