التثبيت المتزامن للهيكل الخلوي للأكتين في خلايا متعددة خاصة بالنفرون يحمي الكلى من الإصابات المتنوعة Ⅱ

الاستقرار الدوائي للأكتين القشري عن طريق الدينامينات يخفف من التهاب المفاصل الروماتويدي.

يعد فقدان حدود فرشاة الأنابيب الكلوية بسبب تفكيك قشرة الأكتوميوسين من السمات السائدة لـ AKI2,29. أحد الأدوية المضادة للسرطان المستخدمة على نطاق واسع والتي تؤدي في كثير من الأحيان إلى التهاب المفاصل الروماتويدي هو سيسبلاتين30. من النتائج المحورية لإصابة السيسبلاتين في خلايا الكلى زيادة في مستوى أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS)31. علاوة على ذلك، تؤدي زيادة مستويات ROS إلى انخفاض في ديناميكيات الأكتين32مما يسبب تعطيل غشاء الميتوكوندريا. ثم بعد ذالكيؤدي إلى تفاقم ROSإنتاج33,34. وهكذا، قمنا بدراسة ما إذا كان التحفيز الدوائي للدينامينات'قدرة الارتباط المتقاطع هي sufفايقادرة على مقاومة الإصابة الناجمة عن سيسبلاتين.

كما رأينا قبل 35 عامًا ، قلل سيسبلاتين من ارتفاع خلية MDCK وعدد الميكروفيلي وطولها وقطبية الخلية المتأثرة دون التأثير على الالتقام الخلوي (الجدول 1 ، الشكل التكميلي 7 أ-د). اقترح تحليل TEM أن هذه الأنماط الظاهرية يمكن أن تعزى إلى فقدان F-actin الناجم عن سيسبلاتين (الشكل 4 أ). أدت إضافة Bis-T - 23 قبل السيسبلاتين إلى إلغاء آثاره عن طريق تثبيت قشرة الأكتوميوسين ضد الإصابة الناجمة عن السيسبلاتين (الشكل 4 أ-ج). ولوحظت أنماط ظاهرية مماثلة في الخنازيرالنبيبات الكلوية القريبة(LLC-PK1) الخلايا (الشكل التكميلي 8). توفر هذه البيانات معًا دليلًا على أن Bis-T-23 يحافظ على قشرة الأكتوميوسين من التفكيك الناجم عن السيسبلاتين.

في نهج تكميلي ذي صلة من الناحية الفسيولوجية 36 ، تصدى Bis T -23 لقدرة سيسبلاتين على تقليل المقاومة الكهربائية عبر الظهارة (TER) كما تم قياسها عبر الطبقة الأحادية الظهارية الحية باستخدام نظام استزراع transwell (الشكل 4 د). نظرًا لأن TER يقيس سلامة الوصلات الضيقة في زراعة الخلايا، فإن هذه البيانات تثبت أيضًا التأثير المفيد لـ Bis-T-23 على سلامة الخلايا الظهارية عند الإصابة.

انقر هنا للحصول على CISTANCHE لـ CKD

نظرًا لأن ديناميكيات الأكتين المتغيرة يمكن أن تزيد من تعزيز إنتاج ROS، فقد درسنا بعد ذلك ما إذا كان تثبيت شبكة الأكتين بواسطة Bis-T -23 يمكن أن يقاوم الإجهاد التأكسدي في الخلايا المصابة بالسيسبلاتين. لقد اخترنا تقييم حالة جزيئات الكربونيل الحيوية الخلوية، وهي علامة حيوية مستقرة للضرر التأكسدي الناتج عن مستويات عالية من ROS، باستخدام مستشعر الفلورسنت الذي تم تطويره مؤخرًا TFCH37 (الشكل 4 هـ). في الواقع ، فإن إضافة Bis-T -23 قبل السيسبلاتين قلل جزئيًا من الزيادة الناجمة عن السيسبلاتين في الكربونيل (الشكل 4f). وقد لوحظت اتجاهات مماثلة فيما يتعلق بالكربونيل بعد العلاج باستخدام Bis-T -23 ومزيل بلمرة الأكتين LatA (الشكل التكميلي 9 أ). توفر هذه البيانات معًا دليلًا على أن تثبيت شبكات الأكتين يمكن أن يبطل حلقة التغذية المرتدة بين الإجهاد التأكسدي وحالة الأكتين في الخلايا المصابة.

فأر حي سابقنموذج الكلىتم استخدامه بعد ذلك لتصور الحفاظ على قشرة الأكتوميوسين المستندة إلى BisT عند حدود الفرشاة. تسبب سيسبلاتين في خسارة كبيرة في تلطيخ F-actin عند حدود الفرشاة للأنابيب القريبة (الشكل 4 ز). ولوحظ مؤخرًا فقدان مماثل لـ F-actin عند حدود الفرشاة عند بداية الإصابة الشديدة بنقص التروية وضخه باستخدام التصوير داخل الفيروس . المعالجة المسبقة باستخدام Bis-T-23 فقدان F-actin الناجم عن السيسبلاتين عند حدود الفرشاة للأنابيب الكلوية (الشكل 4g)، مما يوضح تأثير Bis-T-23 بشكل أكبر على الأكتوميوسين القشرة في الغشاء القمي للخلايا الظهارية الكلوية. كما هو موضح في زراعة الخلايا، لم يؤثر Bis-T-23 على الالتقام الخلوي في شرائح الأنسجة (الشكل التكميلي 9 ب)، مما يدل أيضًا على أن Bis-T-23 لا يؤثر على دور الدينامينات في الالتقام الخلوي في الكلى الأنابيب القريبة.

أخيرًا، قمنا بفحص التأثير الوقائي للرينو لـ Bis-T-23 في نموذج فأر لـ AKI39 الناجم عن السيسبلاتين. تم حقن الفئران BL6 إما بـ Bis-T -23 أو DMSO مرة واحدة يوميًا بدءًا من 24 ساعة قبل حقن السيسبلاتين. كما رأينا من قبل، زادت مستويات الكرياتينين في الدم (SCr) ونيتروجين بول الدم (BUN) بشكل ملحوظ بعد 3 أيام من حقن السيسبلاتين (الشكل 4 س). أظهر DMSO حماية خفيفة من الرينو كما رأينا من قبل، وذلك بسبب قدرته على الكسح المؤكسد . تفوقت الإدارة اليومية لـ Bis-T -23 على DMSO فيما يتعلق بحماية الرينو (الشكل 4 ح). نظرًا لأنه تم التضحية بجميع الحيوانات في اليوم الخامس بسبب السمية الجهازية للسيسبلاتين (الشكل التكميلي 9 ج) ، لم نتمكن من فحص الفوائد طويلة المدى لـ Bis-T-23 علىوظيفة الكلى. تثبت هذه الدراسات معًا بشكل مقنع أن الحفاظ على سلامة الخلايا الكلوية عن طريق تثبيت قشرة الأكتوميوسين في الغشاء القمي يتصدى للتسمم الكلوي الناجم عن السيسبلاتين.

استقرار شبكات الأكتين يتصدى لـ AKI الناجم عن الإيوهكسول.

في حين أن الآلية الدقيقة لـ AKI الناجم عن صبغ التباين لم يتم فك شفرتها بالكامل، إلا أنها تظل السبب الرئيسي لـ AKI43 المكتسب في المستشفى. من الناحية الفسيولوجية، تزيد صبغة التباين من الحمل الأسموزي، وتقلل من تدفق الدم الكلوي، وتحفز انقباض الشرايين الكلوية. على المستوى الخلوي، يعد ROS لاعبًا مهمًا على النقيض من AKI45 الناجم عن الصبغة. نظرًا لدور ROS في تنظيم الهيكل الخلوي للأكتين وفرضيتنا القائلة بأن تثبيت قشرة الأكتوميوسين يمكن أن يقاوم الضرر التأكسدي، قمنا بفحص تأثيرات Bis-T-23 على صبغة التباين AKI46 الناجمة عن الإيوهكسول.

تم فحص التأثيرات الخلوية للإيوهكسول في الإنسانالكلى الأنبوبية القريبة(HK-2) الخلايا. كما رأينا بالنسبة للسيسبلاتين، فقد تسبب الإيوهكسول في فقدان F-actin، والذي كان مصحوبًا بزيادة كبيرة في مستوى الجزيئات الكربونية، وهي نتيجة لا رجعة فيها لمستويات ROS المرتفعة (الشكل 5 أ، ب). تمت مواجهة كلا النمطين الظاهريين جزئيًا عن طريق المعالجة المسبقة باستخدام Bis-T-23، مما يزيد من التآزر بين حالة الهيكل الخلوي للأكتين ومستوى الإجهاد التأكسدي في هذه الخلايا. مكملاً للمقايسات المستندة إلى الخلايا، تحافظ الإدارة اليومية لـ Bis T-23 على وظيفة الكلى بناءً على مستويات Scr وBUN في الفئران BL6 التي تواجه تحديًا بصبغة التباين (الشكل 5 ج). ولوحظ أيضًا استجابة مرغوبة جدًا لتحسين معدل البقاء على قيد الحياة في الحيوانات التي تلقت Bis-T -23 جنبًا إلى جنب مع صبغة التباين (الشكل 5 د).

لقد أظهرنا مؤخرًا أن مستويات المصل المرتفعة لمستقبلات منشط البلازمينوجين من نوع يوروكيناز القابلة للذوبان (suPAR) تعمل على توعية الكلى بـ AKI47 الناجم عن الإيوهكسول. قمنا بعد ذلك بالتحقق مما إذا كانت حماية الخلايا الأنبوبية بوساطة الدينامينات يمكن أن توفر أيضًا حماية رينو في الفئران BL6 التي تعبر عن مستويات عالية من suPAR من الأنسجة الدهنية (suPAR-Tg) . كما هو متوقع ، أظهرت الفئران suPAR-Tg انخفاضًا في وظائف الكلى لمدة 24-48 ساعة بعد حقن الإيوهكسول (الشكل 5 هـ). وعلى النقيض من ذلك، ظهرت الأعراض على الحيوانات التي تلقت جرعة يومية من Bis-T-23.وظائف الكلى أفضل بكثيرعلى الرغم من تحدي صبغة التباين (الشكل 5 هـ). والجدير بالذكر أنه لوحظ انخفاض كبير في معدل الوفيات في مجموعة الفئران التي تلقت Bis-T -23 (الشكل 5f). كما هو متوقع ، كان مدى الضرر التأكسدي (كربنة الجزيء الحيوي) في خلايا HK -2 التي تمت معالجتها بشكل متزامن مع Bis-T -23 أقل بكثير من الخلايا التي تلقت فقط مزيجًا من suPAR و Iohexol (الشكل التكميلي S1). 9 د).

الشكل 4. يحمي ناهض الدينامينات الأنابيب الكلوية من الإصابة الناجمة عن السيسبلاتين عن طريق تثبيت قشرة الأكتوميوسين في الغشاء القمي. صورة PR-EM للصفيحية في خلايا MDCK المعالجة بـ DMSO (0.1%) أو Bis-T-23 (5 ميكرومتر، 0.1% DMSO) لمدة ساعة واحدة مسبقًا لإضافة سيسبلاتين (35 ميكرومتر) لمدة 23 ساعة. كانت قشرة الأكتوميوسين ملونة باللون الأصفر. ب صور تكبير أعلى للمناطق المعبأة في ( أ ). مستويات السمك المميزة مرمزة بالألوان. تُظهر اللوحات العلوية والسفلية شبكات مكونة من خيوط أقصر وخيوط أطول، على التوالي. ج رسم بياني يصور كثافة خيوط الأكتين عند الحافة الأمامية (المربع الأصفر في (أ)؛ تم حساب 18-2 0 منطقة). d رسم بياني شريطي يصور المقاومة الكهربائية النسبية عبر الظهارة (٪) في خلايا MDCK الحية المعالجة كما هو مذكور في ( أ ) باستثناء تركيزات سيسبلاتين (5 0 ميكرومتر) و Bis-T -23 (30 ميكرومتر) (12 قراءات لكل عينة). يتم رسم البيانات على أنها متوسط ​​± SEM (*** P <0.001، **** P <0.0001، اختبار t ثنائي الذيل غير المقترن). ns، ليست كبيرة. ه تمثيل تخطيطي للكشف عن الكربونيل الناجم عن الإجهاد باستخدام اختبار TFCH. و صور توضح مستويات كربونات الجزيء الحيوي التي تحددها TFCH. عولجت الخلايا كما هو موضح في (أ) باستثناء تركيز سيسبلاتين (5 ميكرومتر). شريط النطاق، 20 ميكرون. رسم بياني يوضح المستويات النسبية لمضان TFCH المرتبط بجزيئات الكربونيل الحيوية لكل خلية (نقاط البيانات (ن)=83–116؛ تمثل كل نقطة متوسط ​​​​كثافة 4-9 خلايا). ز الفئرانشرائح الكلىملطخة بالأجسام المضادة للأكتين.شرائح الكلىتم تحضينها في المخزن المؤقت، DMSO (0.1%)، أو Bis-T-23 (30 ميكرومتر) لمدة ساعة واحدة قبل إضافة سيسبلاتين (200 ميكرومتر) أو المخزن المؤقت لمدة 8 ساعات. تم توسيع المناطق المربعة البيضاء. أشرطة النطاق، 40 ميكرون. رسم بياني يوضح كثافة F-actin عند حدود الفرشاة لكل أنبوب (100-236). بالنسبة لـ c وf وg، يتم رسم البيانات على أنها متوسط ​​± SD (يتم الإبلاغ عن قيم P في الشكل، ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار المقارنة المتعدد في Tukey). ح مؤامرات نقطية مبعثرة تظهر AKI الناجم عن سيسبلاتين يحددها مستوى نيتروجين اليوريا في الدم (BUN) أو الكرياتينين في الدم (SCr). تم حقن الحيوانات إما باستخدام DMSO (1%) أو Bis-T-23 (20 مجم/كجم) (n=12، لكل شرط لـ SCr؛ n=17، لكل شرط لـ BUN) مرة واحدة يوميًا بدءًا من 24 ساعة قبل حقن سيسبلاتين (15 مجم/كجم). تم إجراء القياسات في الأوقات المحددة. يتم رسم البيانات على أنها متوسط ​​± SEM (يتم الإبلاغ عن قيم P في الشكل، اختبار t ثنائي الذيل غير المقترن). ns، ليست كبيرة.

على النقيض من الإصابة الخلوية بوساطة ROS الناجمة عن سيسبلاتين وإيوهكسول، يعزز suPAR إصابة الخلايا الأنبوبية جزئيًا عن طريق زيادة معدل استهلاك الأكسجين (OCR) . لربط التأثير الفسيولوجي لـ Bis-T-23 في الفئران المعدلة وراثيا suPAR بتأثيره على استقلاب الخلية، قمنا بفحص ما إذا كان تثبيت شبكة الأكتين عبر الدينامينات يقلل من التعرف الضوئي على الحروف الذي يحركه suPAR. تم قياس التعرف الضوئي على الحروف (OCR) في الوقت الفعلي في خلايا HK -2 في ظل الظروف القاعدية واستجابة للحقن المتتابع لمثبطات الميتوكوندريا باستخدام محلل التدفق خارج الخلية Seahorse XFe24 (الشكل 5 ز). أدت إضافة الجسم المضاد لـ suPAR أو Bis-T-23 إلى تحسين الزيادات التي يحركها suPAR في التنفس القاعدي للميتوكوندريا وإنتاج ATP والحد الأقصى لمعدل التنفس والقدرة التنفسية الاحتياطية (الشكل 5f). توضح هذه البيانات التأثيرات الإيجابية لـ Bis-T-23 على استقلاب الخلية عند الإصابة. تؤكد هذه الدراسات معًا جدوى الحماية ضد أنواع متعددة من التهاب المفاصل الروماتويدي وبالتالي تحسين معدل البقاء على قيد الحياة في نماذج القوارض عبر الدينامينات كبديل.

الاستقرار المتزامن للأكتين فيخلايا الكلى متميزةيخفف من إصابة النيفرون. لقد أظهرنا سابقًا أن التنشيط الدوائي لبلمرة الأكتين التي يحركها الدينامينات أعاد بنية ووظيفة الخلايا الرجلية في نماذج الفئران المتنوعة من CKD12. في هذه الدراسة، أظهرنا قدرة الدينامينات على الحفاظ على سلامة الخلايا الأنبوبية عند الإصابة الحادة عن طريق ربط الهيكل الخلوي للأكتين. قادتنا هذه الأفكار معًا إلى تصور إمكانية التصدي في الوقت نفسه لكل من الإصابة الكبيبية والأنبوبية، من خلال استهداف الدينامينات من الناحية الدوائية.

لاختبار هذه الفرضية، قمنا بفحص ما إذا كان Bis-T-23 يمكنه تأخير فقدانوظيفة الكلىفي نموذج الفأر لمتلازمة ألبورت (AS). AS هو شكل موروث منالفشل الكلوي التدريجيبسبب الطفرات في جينات COL4A3 أو COL4A4 أو COL4A5 التي تشفر معًا الكولاجين من النوع الرابع، وهو مكون رئيسي في الغشاء القاعدي الكبيبي (GBM) . على الرغم من أن العيب الأساسي في AS هو محو عملية القدم والبيلة البروتينية.

لاختبار هذه الفرضية، قمنا بفحص ما إذا كان Bis-T-23 يمكنه تأخير فقدانوظيفة الكلىفي نموذج الفأر لمتلازمة ألبورت (AS). AS هو شكل موروث منالفشل الكلوي التدريجيبسبب الطفرات في جينات COL4A3 أو COL4A4 أو COL4A5 التي تشفر معًا الكولاجين من النوع الرابع، وهو مكون رئيسي في الغشاء القاعدي الكبيبي (GBM) . على الرغم من أن العيب الأساسي في AS هو محو عملية القدم والبيلة البروتينية.

المناقشة: منذ تحديد التفاعلات المباشرة بين الدينامينات والأكتين، هناك مجموعة متزايدة من الأدلة تثبت أن GTPase هو أحد المنظمات الرئيسية للهيكل الخلوي للأكتين في الخلية. على النقيض من ABPs الكنسي، فإن الآليات التي يؤثر من خلالها الدينامين على الأكتين هي متعددة الاستخدامات ومحددة بنوع الخلية. ويرجع ذلك إلى الجمع بين حالات احتكار القلة المتعددة للداينامين وقدرته على ربط F-actin بواسطة موقعين ربط مختلفين. تؤدي تفاعلات F-actin مع حلقات الدينامينات والحلزونات عبر PRD الخاص بـ C-terminal إلى حزم أكتين وحزم مفرطة، والتي تورطت في تكوين أرجل خيطية ونتوءات غشائية أثناء اندماج الخلايا العضلية. لقد تورطت التفاعلات بين المجال الأوسط للدينامينات وF-actin في تنظيم شبكات الأكتين في الأرجل الصفائحية، وتنظيم الهيكل الخلوي بعد المشبكي، وتطوير الوصلات العصبية العضلية، وصلابة حزمة الأكتين في الإندوسومات أثناء اندماج الأرومة العضلية، وتشكيل عمليات قدم البودوسيت. في حين أن تكوين عمليات القدم يكون مدفوعًا ببلمرة الأكتين المحفزة بالدينامينات، تشير هذه الدراسة إلى أن الآلية الجزيئية التي يؤثر بها الدينامين على هذه العمليات الأخرى التي يحركها الأكتين قد تكون جزئيًا بسبب قدرته على ربط F-actin في شبكات متفرعة. . توسع دراستنا الحالية دور تكوين الشبكة المعتمدة على الدينامينات لتشمل تكوين قشرة الأكتوميوسين في الغشاء القمي للخلايا الظهارية المستقطبة وإنشاء تصلب الخلية.

المناقشة: منذ تحديد التفاعلات المباشرة بين الدينامينات والأكتين، هناك مجموعة متزايدة من الأدلة تثبت أن GTPase هو أحد المنظمات الرئيسية للهيكل الخلوي للأكتين في الخلية. على النقيض من ABPs الكنسي، فإن الآليات التي يؤثر من خلالها الدينامين على الأكتين هي متعددة الاستخدامات ومحددة بنوع الخلية. ويرجع ذلك إلى الجمع بين حالات احتكار القلة المتعددة للداينامين وقدرته على ربط F-actin بواسطة موقعين ربط مختلفين. تؤدي تفاعلات F-actin مع حلقات الدينامينات والحلزونات عبر PRD الخاص بـ C-terminal إلى حزم أكتين وحزم مفرطة، والتي تورطت في تكوين أرجل خيطية ونتوءات غشائية أثناء اندماج الخلايا العضلية. لقد تورطت التفاعلات بين المجال الأوسط للدينامينات وF-actin في تنظيم شبكات الأكتين في الأرجل الصفائحية، وتنظيم الهيكل الخلوي بعد المشبكي، وتطوير الوصلات العصبية العضلية، وصلابة حزمة الأكتين في الإندوسومات أثناء اندماج الأرومة العضلية، وتشكيل عمليات قدم البودوسيت. في حين أن تكوين عمليات القدم يكون مدفوعًا ببلمرة الأكتين المحفزة بالدينامينات، تشير هذه الدراسة إلى أن الآلية الجزيئية التي يؤثر بها الدينامين على هذه العمليات الأخرى التي يحركها الأكتين قد تكون جزئيًا بسبب قدرته على ربط F-actin في شبكات متفرعة. . توسع دراستنا الحالية دور تكوين الشبكة المعتمدة على الدينامينات لتشمل تكوين قشرة الأكتوميوسين في الغشاء القمي للخلايا الظهارية المستقطبة وإنشاء تصلب الخلية.

ومن الثابت ذلككد و آكي، على الرغم من اختلافها ميكانيكيًا، إلا أنها مترابطة بشكل وثيق، حيث يتم التعرف على القصور الكلوي الحاد كعامل خطر لتطور مرض الكلى المزمن وتقدمه 66. حتى الآن، لا يزال القصور الكلوي الحاد غير قابل للعلاج 67. وهذا مهم بشكل خاص في ضوء جائحة مرض فيروس كورونا 2019 (COVID-19) الحالي، حيث يصاب المرضى في المستشفى المصابون بـCOVID-19 وارتفاع مستوى بلازما suPAR بالتهاب المفاصل الروماتويدي بمعدلات مثيرة للقلق. تم ربط مستويات suPAR المرتفعة بكل من AKI47 وCKD69، مما يعزز الارتباط الجزيئي بين هذين الاثنين.أمراض الكلى المميزة. لذلك، أصبح من الضروري بشكل متزايد تطوير علاجات يمكنها الحماية من مجموعة من الإهانات الكلوية على أنواع خلايا متعددة. نورد هنا التأثير الوقائي لمضادات الدينامينات في النموذج الوراثي لـ AS، والذي يُظهر إصابة كل من الخلايا الرجلية والخلايا الأنبوبية. تضع دراستنا نهجًا شاملاً لتطوير علاجات جديدة تتفاعل مع شبكة الأكتين في أنواع متعددة من الخلايا داخل النيفرون وتعالج عددًا لا يحصى من الخلايا.أمراض الكلىبغض النظر عن مكان الإصابة.

طرق ثقافة الخلية. تمت زراعة خلايا MDCK (كلية الكلاب Madin-Darby) (ATCC CCL -34) وخلايا قناة التجميع النخاعية الداخلية للماوس (mIMCD -3) (ATCC CRL -2123) في DMEM / F12 (ThermoFisher علمي) يحتوي على 10% من مصل الأبقار الجنيني (FBS) و1X مضاد حيوي مضاد للفطريات (البنسلين والستربتومايسين والأمفوتيريسين ب؛ جيبكو). تمت زراعة خلايا LLC-PK1 (Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1) (ATCC CL - 101) في DMEM باستخدام 4.5 جم / لتر من الجلوكوز وL- الجلوتامين، وبيروفات الصوديوم (كورنينج)، و10٪ FBS، و1X مضاد حيوي. -مضاد للفطريات. تمت زراعة خلايا MDCK وLLC-PK1 لمدة 24 ساعة تقريبًا و72 ساعة تقريبًا، على التوالي، قبل بدء التجارب. هونج كونج -2 (الكلى البشرية 2) تم استزراع الخلايا الأنبوبية القريبة (ATCC CRL-2190) في وسط DMEM/Ham's F12 (كورنينج) الذي يحتوي على 10% FBS و100 U/ml بنسلين و100 ميكروغرام/مل ستربتومايسين عند استخدامها في تجارب الطاقة الحيوية. لتحليل حالة الهيكل الخلوي للأكتين والكربونيل الخلوي، تمت زراعة خلايا HK -2 في DMEM F -12 (ATCC) التي تحتوي على 10٪ FBS، و1X مضاد حيوي مضاد للفطريات، و1X ITS (الأنسولين، والترانسفيرين، و سيلينيت الصوديوم) مكمل الوسائط السائلة (سيجما الدريخ). لإنشاء خط الخلية المدمر للداينامين 2 (Dyn2) (mIMCD Dyn2KD)، تم إصابة الخلايا بالفيروسات البطيئة التي تحمل shRNA الذي يشفر جين DNM2 (5′CGGCCTAGTGGACATGACAATGAACTCGAGTTCATTGTCATGTC CACTAGGTTTTTG3 ′) أو shRNA المخفوق (Sigma-Aldrich) في الوسائط الكاملة التي تحتوي على البوليبرين (8 ميكروجرام/مل). بعد 24 ساعة، تم استبدال الوسائط كل يوم بوسائل تحتوي على بوروميسين لاختيار المواد المستقرة. تم تقييم مدى ضربة Dyn2 بواسطة لطخة غربية. نمت جميع خطوط الخلايا على ساترة زجاجية مغلفة بالكولاجين.

الشكل 6. يستهدف التنشيط الدوائي للدينامين في نفس الوقت الهيكل الخلوي للأكتين في خليتين متميزتين من النيفرون. تم حقن الفئران Col4a3 -/− باستخدام DMSO (1٪) أو Bis-T -23 (2 0 ملغم / كغم) مرة واحدة يوميًا عندما يبلغ عمر 42 يومًا (اليوم 0). تم استخدام عدد متساوٍ من الفئران المعالجة بـ DMSO أو Bis-T-23 (n=10 لـ ACR؛ n=8 لـ BUN). يُظهر المخطط النقطي المبعثر مستوى البيلة البروتينية (نسبة الألبومين إلى الكرياتينين، ACR) وإصابة الكلىيتحدد حسب مستوى BUN. أشرطة الخطأ، تعني ± SD (يتم الإبلاغ عن قيم P في الشكل، اختبار t ثنائي الذيل غير المقترن). ب تم إجراء اختبار Log-Rank (Mantel-cox) لتحليل منحنيات البقاء على قيد الحياة لمجموعتي العلاج. ج التشريح المرضي التمثيلي للكلى الذي يحدده تلطيخ حمض شيف (PAS) و H&E الدوري على العينات التي تم الحصول عليها من الفئران Col4a3 - / - الموصوفة في (أ). كان عمر الحيوانات 62 يومًا (اليوم 20 من علاج Bis-T-23 أو علاج DMSO). اتسم اعتلال الكبيبات في Col4a3 -/− الحيوانات المعالجة بـ DMSO بتوسع مسراق الكبيبة الذي لوحظ في تلطيخ PAS (السهم الأسود)، وزيادة الخلوية، وزيادة في مساحة بومان. وشملت التغيرات التنكسية في الأنابيب تشكيل القوالب (*) ووجود التصلب الأنبوبي. أدى علاج Bis-T-23 على مدى 20 يومًا إلى الحفاظ جزئيًا على مورفولوجية الكبيبات (تناقص توسع مسراق الكبيبة) والأنابيب (غياب القوالب). د مخططات النيفرون (الصورة تُنسب إلى المعهد الوطني للسكري والجهاز الهضمي وأمراض الكلى، المعاهد الوطنية للصحة) والآلية المشاركة في حماية رينو التي تنظمها الدينامينات. في الخلايا الظهارية المستقطبة للأنابيب الكلوية، يقوم الدينامين بتأسيس قطبية الخلية عن طريق ربط خيوط الأكتين في الشبكات (هذه الدراسة). إن قدرة الدينامين على ربط الخيوط في حزم متورطة في تكوين الزغيبات الدقيقة. تزيد الإصابة الحادة من إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية، وتغير عملية التمثيل الغذائي للخلايا، وتسبب اضطرابًا في ديناميكيات الأكتين، مما يعزز إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية مما يؤدي إلى تلف مؤكسد خلوي أكثر وضوحًا (كربونيل الجزيء الحيوي). إن زيادة قدرة الدينامينات على الارتباط المتقاطع في قشرة الأكتوميوسين تحافظ على سلامة الخلايا الأنبوبية، مما يحميها جزئيًا من الإهانة التأكسدية. بالإضافة إلى ذلك، الدينامين ضروري لبنية ووظيفة الخلايا الرجلية. التنشيط الدوائي للدينامينات يعيد عمليات القدم عن طريق تحفيز بلمرة الأكتين. توضح دراستنا أن التنشيط الدوائي لأوليجوميريز الدينامينات يُظهر تأثيرًا مفيدًا مزدوجًا على النيفرون من خلال استهداف آليتين جزيئيتين متميزتين: الحفاظ على سلامة الخلايا الرجلية (بلمرة الأكتين) والخلايا الأنبوبية الكلوية (الربط المتقاطع لخيوط الأكتين).

مراجع

1. Basile, DP, Anderson, MD & Sutton, TA الفيزيولوجيا المرضية لإصابة الكلى الحادة.كومبر. فيزيول. 2, 1303–1353 (2012).

2. Bonventre، JV & Yang، L. الفيزيولوجيا المرضية الخلوية لإصابة الكلى الحادة الإقفارية.جيه كلين. يستثمر. 121, 4210–4221 (2011).

3. كامبانال، جي بي، صن، تي واي ومونتيل، تطوير الدي جي وديناميكيات قطبية الخلية في لمحة.J. علوم الخلية. 130, 1201–1207 (2017).

4. Salbreux، G.، Charras، G. & Paluch، E. ميكانيكا قشرة الأكتين والتشكل الخلوي.اتجاهات الخلية بيول. 22, 536–545 (2012). 

5. Vicente-Manzanares, M., Ma, X., Adelstein, RS & Horwitz, AR Nonmuscle myosin II يحتل مركز الصدارة في التصاق الخلايا والهجرة.نات. القس مول. خلية بيول. 10, 778–790 (2009). 

6. تشوغ، P. وآخرون. تنظم بنية قشرة الأكتين التوتر السطحي للخلية.نات. خلية بيول. 19, 689–697 (2017). 7. Nguyen، LT & Hirst، LS تعدد الأشكال لشبكات F-actin شديدة الارتباط: فحص مقاييس الطول المتعددة.فيز. القس E ستات. نونلين فيزياء المادة الناعمة 83, 031910 (2011).

الخدمة الداعمة لشركة Wecistanche - أكبر مصدر للسيستانش في الصين:

البريد الإلكتروني:wallence.suen@wecistanche.com

واتساب/هاتف:+86 15292862950

محل:

https٪3a٪2f٪2fwww.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop