دراسة عن التأثيرات الاستروجينية لمادة Echinacoside و Acteoside من Herba Cistanche
Mar 08, 2022
جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin ، LI Wei ، SONG Xin-bo * ، YU He-Shui ، MIAO Lin ، ZHANG Li-Juan ، TAO Rui
جامعة تيانجين للطب الصيني التقليدي ، تيانجين 300193 ، الصين
الملخص: في هذه الدراسة ، الآثار الاستروجينيةإشنكوسايدوأكتيوسيدتم التحقيق في Herba Cistanche. تم استخدام قانون البلازميد لمراسل لوسيف للكشف عن تأثيرات هرمون الاستروجينإشنكوسايدوأكتيوسيد. تم استخدام تجارب ربط مستقبلات هرمون الاستروجين للكشف عن تأثيرها التنافسي مع هرمون الاستروجين. أظهرت النتائج أنإشنكوسايدوأكتيوسيديمكن أن يزيد من نشاط ERE. متيإشنكوسايدأوأكتيوسيديضاف إلى أعمال الإستروجين ، يمكن تحفيز نشاط الجين المراسل الذي يحركه ERE كمحفز للإستروجين. ومن ثم ، تم استنتاج أنإشنكوسايدوأكتيوسيدكان له نشاط فيتويستروغنز من خلال تحفيز نشاط الجين المراسل لزيادة ERE.إشيناكوسايدوأكتيوسيدكانت SERMs محتملة.
الكلمات الرئيسية: إشنكوسايد. أكتيوسيد. فيتويستروغنز.
هيربا سيستانش هو نبات من جنس Cistanche (Oroban- chaceae) من جنس Cistanche (Cistanche). وهو جذع سمين جاف بأوراق متقشرة. له وظائف تغذية الكلى يانغ ، الجوهر المغذي والدم ، وترطيب الأمعاء. يتم استخدامه لنقص اليانغ الكلوي ، ونقص الجوهر والدم ، والعجز الجنسي والعقم ، وألم الخصر والركبتين ، وضعف العضلات والعظام ، وجفاف الأمعاء ، والإمساك ¨. 2J. في الوقت الحاضر ، المكونات الكيميائية الرئيسية المعزولة والمحددة من Cistanche هي فينيل جليكوسيدات ، إيريديويد ، قشور ، فلافونويد ، عديد السكاريد ، سكريات قليلة ، جالاكتيتول ، مكونات متطايرة ، قلويدات ، إلخ. وهي أيضًا مؤشرات الكشف الرئيسية لمراقبة جودة Cistanche ، ويمثلهاإشنكوسايد وفيرباسكوسايد. أظهرت الدراسات الدوائية الحديثة أن Cistanche له وظائف تنظيم المناعة ، ومضادات الأكسدة ، ومكافحة الشيخوخة ، ومكافحة التعب ، والحماية العصبية ، وحماية الكبد. تظهر بعض الدراسات الدوائية أيضًا أن Cistanche يمكن أن يعزز تجديد العظام- L "J ، ويمنع تكوين هشاشة العظام و فيتويستروغنز في النساء بعد سن اليأس"]. في هذه التجربة ، اخترنا إشنكوسايد وفيرباسكوسايد ، وهما مؤشرات مراقبة الجودة الرئيسية في سيستانش ، واختبرنا الاستروجين.آثار إشنكوسايدو verbascoside بواسطة طريقة مراسل luciferase البلازميد وتجربة الارتباط التنافسي مستقبلات هرمون الاستروجين. استكشف آلية إستروجين إشنكوسايد وفيرباسكوزيد
1 المواد والأساليب
1.1 خلايا هيلا المادية (خلايا سرطان عنق الرحم البشرية) ، تم شراؤها من معهد شنغهاي لبيولوجيا الخلية ؛إشنكوسايدتم فصله وتنقيته من Cistanche deserticola بواسطة مختبرنا وتم اختباره بواسطة HPLC-ELSD. الإشنكوسايدتم استخدام مادة مرجعية (المعهد الوطني الصيني لمراقبة المنتجات الصيدلانية والبيولوجية ، رقم الدُفعة: 111670) كعنصر تحكم ، وكان النقاء المقاس 95.1 بالمائة. الأكتيوسيدتم فصله وتنقيته من صحراء Cistanche بواسطة مختبرنا وتم الحصول عليها بواسطة HPLC. اختبار ELSD ، باستخدام مادة مرجعية فيرباسكوم جليكوسيد (معهد الصين للتحكم في المنتجات الصيدلانية والبيولوجية ، رقم الدُفعة: 111530) كعنصر تحكم ، كان النقاء المقاس 96.4 بالمائة ؛ البلازميدات ERa ، ER [3 ، ERE-luc ، Renila (مستخرج من مختبرنا) ؛ استراديول (E) ، شركة سيجما ؛ مصل الأبقار الجنينية (FBS) ، شركة PAA ؛ مصل بقري جنيني معالج بالكربون المنشط (CS-FBS) ، شركة PAA ؛ Phenol Red-Free DMEM، Sigma Company؛ ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)) ، شركة أمريسكو ؛ متوسط LB ، شركة Shanghai Shenggong Biotechnology ؛ PassiveLysis5X Buffer ، شركة Promega ؛ Lipofectamine2000 ، شركة Promega ؛ مجموعة استخراج البلازميد ، شركة TIANGEN ؛ طقم الكشف عن الجينات لمراسل Luciferase هو منتج من شركة Promega.
1.2 زرعت خلايا Hela المزروعة في وسط مزرعة DMEM تحتوي على 10 بالمائة من مصل بقري جنيني. تم استبدال جيل واحد على الأقل قبل التجربة بوسط استزراع DMEM يحتوي على 1 في المائة من مصل بقري جنيني مُعالج بالفحم المنشط.
1.3 ترنسفكأيشن وتحديد نشاط لوسيفيراز تم زرع خلايا هيلا في 24- صفيحة بئر بكثافة 70٪ إلى 80٪. بعد أن تلتصق الخلايا بالجدار وتصل كثافة الخلية إلى 90 بالمائة ، اتبع التعليمات الواردة في ليبو. تعليمات كاشف تعداء Feetamine2000 تنتقل عبر ERa و ER [3 بلازميدات تعبيرية و ERE وبلازميدات مراسل Renila ، وتغيير الوسيط بعد 8 ساعات وإضافة أدوية الاختبار بتركيزات مختلفة. بعد الحضانة بين عشية وضحاها ، استخدم قارئ لوحة متعدد الوظائف لاكتشاف استجابة هرمون الاستروجين. عنصر نشاط لوسيفيراز ERE ، حساب التأثير النسبي للأدوية على نشاط لوسيفيراز.
1.4 معالجة البيانات والتحليل الإحصائي
باستخدام SPSS18. 0 البرامج الإحصائية ، يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ± الانحراف المعياري (x ± S). تم استخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) واختبار دونيت للمقارنة المتعددة لتحليل البيانات بين المجموعات. ص<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
أكتوسيد
2 النتائج التجريبية
2.1 تأثير فيرباسكوسايد على نشاط عنصر استجابة الإستروجين ERE luciferase تظهر النتائج أنه بالمقارنة مع المجموعة الضابطة عند التوسط بواسطة ERa و ER [3 ، E (10nmol) يمكن أن ينظم بشكل كبير عنصر استجابة الإستروجين ERE luciferase. تنظيم نشاط عنصر استجابة الإستروجين ERE luciferase عند 10 و 100 و 1 و 10 و 50 txmol. عندما يصل التركيز إلى 50 I ~ mol ، فإن التنظيم الأعلى لنشاط ERE luciferase يعادل ذلك الخاص بالإستراديول. إنها تعتمد على الجرعة ، لكن انتقائية مستقبلات هرمون الاستروجين ERa و EP ~ ليست واضحة (الشكل 2).
2 آثار تراكيز مختلفة منأكتيوسيدعلى نشاط لوسيفيراز من ERE
ملاحظة: مقارنة بمجموعة التحكم ، ص
2.2 تأثيرإشنكوسايدعلى عنصر استجابة هرمون الاستروجين نشاط ERE luciferase تظهر النتائج أنه عند المقارنة مع المجموعة الضابطة عند التوسط بواسطة ERa و ER [3 ، E (10 نانومول) يمكن أن ينظم بشكل كبير عنصر استجابة هرمون الاستروجين ERE مضان Echinacoside يمكن أن ينظم استجابة هرمون الاستروجين عنصر ERE نشاط لوسيفيراز عند 10 و 100 و 1 و 10 و 50 Ixmol. عندما يصل التركيز إلى 50 Ixmol ، يكون التنظيم الأعلى لنشاط ERE luciferase أقل قليلاً من نشاط الإستروجين. يعتمد الديول أيضًا على العداد ولكن لديه اختلاف طفيف في الانتقائية لمستقبلات هرمون الاستروجين ERa و E (الشكل 3).
2.3 تأثير الارتباط التنافسي لجليكوسيدات Verbascum و estradiol على مستقبلات هرمون الاستروجين. أظهرت النتائج أن Verbascum glycosides يمكن أن ترتبط بشكل تنافسي بمستقبلات هرمون الاستروجين مع استراديول وتعاكس نشاط الاستراديول على عنصر استجابة الاستروجين ERE luciferase. تأثير التنظيم الأعلى. بالمقارنة مع مجموعة E (10nmo1) ، يمكن أن يقلل verbascosides نشاط لوسيفيراز من استراديول على عنصر استجابة هرمون الاستروجين ERE بدرجات متفاوتة عند 1 و 10 و 50 بكسل ، يُظهر مول و verbascosides اعتمادًا على الجرعة. ، عندما يصل التركيز إلى 50 Ixmol ، يكون التأثير المضاد للإستراديول هو الأكثر وضوحًا (الشكل 4).
2.4 التأثير التنافسي الملزم لـإشنكوسايدواستراديول على مستقبلات هرمون الاستروجين. تظهر النتائج أنإشنكوسايديمكن أيضًا أن يرتبط بشكل تنافسي بمستقبلات هرمون الاستروجين مع استراديول ويقاوم استجابة استراديول للإستروجين. زيادة تنظيم نشاط لوسيفيراز ERE. بالمقارنة مع مجموعة E (10 نانومول) ، يمكن لفيرباسكوسايد تنظيم نشاط لوسيفيراز للإستراديول على عنصر استجابة الإستروجين ERE بدرجات متفاوتة عند 1 و 10 و 50 مول ، وإشنكوسايديعرض جرعة كسولة. الجنس ، عندما يصل التركيز إلى 50lxmol ، يكون التأثير المضاد للإستراديول أكثر وضوحًا (الشكل 5)
3 مناقشة
أظهرت هذه التجربة لأول مرة أن البيانات الواضحة أظهرت ذلكإشنكوسايدو verbascoside ، المكونات النشطة الرئيسية في Cistanche ، يمكن أن ترتبط بمستقبلات هرمون الاستروجين ERa و EP ~ ، وتنظم نشاط luciferase من ERE وممارسة تأثيرات هرمون الاستروجين ، مما يدل على نشاط SERMs. يُظهر تحليل البيانات التجريبية أعلاه أنه في نظام ERa ، فإن تنظيم فيرباسكوسايد على عنصر استجابة هرمون الاستروجين نشاط ERE luciferase عند 5 0 lxmol يكافئ 0. 977 مرة من E2 (1 0 nmol) ، وهو ما يعادل ذلك الموجود في نظام ERI3. 0.970 مرة وبالمثل ، في نظام ERa ، فإن تأثير تنظيم إشنكوسايد على عنصر استجابة هرمون الاستروجين نشاط ERE luciferase عند 50 lxmol يعادل تأثير E (10nmol) ، وهو ما يعادل 0 في نظام ERI3. 937 مرة ، يكون تنظيم فيرباسكوسايد على نشاط عنصر استجابة هرمون الاستروجين ERE وسيفيراز أعلى قليلاً من نظيره فيإشنكوسايد، والانتقائية لمستقبلات الاستروجين ERa و ER [3 ليست واضحة ، في حين أن إشنسا جليكوسيدات لها اختلافات انتقائية ضعيفة لمستقبلات هرمون الاستروجين ERa و ERI3. قد تكون هذه الاختلافات مرتبطة بالمجموعات المختلفة المتصلة بموضع R4 من فيرباسكوسايد وإشنكوسايد. يعمل الإستروجين بشكل رئيسي من خلال مستقبلات الإستروجين. هناك نوعان فرعيان رئيسيان من مستقبلات هرمون الاستروجين ، ERa و ER [3 ، يتحد هرمون الاستروجين والمواد التي تعمل بالإستروجين مع مستقبلات الاستروجين لتشكيل ثنائي ، ثم يتحد الجسم مع عنصر استجابة هرمون الاستروجين ERE ، ثم يمارس تأثير هرمون الاستروجين [2l ،. الاستروجين النباتي والاستروجين لهما هياكل ووظائف متشابهة. أظهرت الدراسات أن الاستروجين النباتي يمكن أن ينظم عملية التمثيل الغذائي للعظام ويلعب دورًا مهمًا للغاية في الحفاظ على توازن ارتشاف العظام وتكوين العظام. إنه فعال لهشاشة العظام في المرضى الذين يعانون من ضعف الشيخوخة. له تأثير معين للوقاية والعلاج السريري¨. لذلك ، يُعتقد أن تأثير Cistanche في تعزيز تجديد العظام وتثبيط ترقق العظام لدى النساء بعد سن اليأس يكون من خلال فيتويستروغنز. تُظهر هذه التجربة أيضًا أن إشنكوسايد وفيرباسكوسايد يمكن أن يرتبط بشكل تنافسي بمستقبلات هرمون الاستروجين مع استراديول ويقاوم التنظيم الأعلى للإستراديول في نشاط ERE luciferase. آلية هذا الإجراء معروفة بريسفيراترول. تأثير الإستروجين النباتي مشابه لـ J. ويوضح كذلك أن إشيناكوسيد وفيرباسكوزيد يمارسان تأثيرات استروجين عن طريق الارتباط بمستقبلات هرمون الاستروجين ERa و ER3. تشير الدراسات المذكورة أعلاه حول نشاط الاستروجين النباتي لـ Cistanche وآلية تأثير هرمون الاستروجين إلى أن Cistanche قد يؤخر تكوين هشاشة العظام بعد سن اليأس لدى النساء عن طريق تحسين مستوى هرمون الاستروجين في الجسم ، أو علاج العلاج الناجم عن انخفاض مستوى هرمون الاستروجين في الجسم. يطرح ترقق العظام الاحتمال ويوفر الأساس النظري لتوسيع نطاق الاستخدام الطبي السريري لـ Cistanche.
المرجعي
1 لجنة دستور الأدوية الصيني （(国家 药典 委员）). دستور الأدوية في جمهورية الصين الشعبية. بكين: مطبعة الصناعة الكيميائية ، 2010. المجلد 1: 126.
2 Li SZ （李时珍）. خلاصة وافية للمواد الطبية. بكين: دار النشر الطبية الشعبية （人民 卫生 出版社） ، 1977.727.
3 Zeng LQ （曾 群 力）، Zheng YF （郑 一 凡）، Lv ZL （吕志良）. النشاط المناعي وآلية عمل عديد السكاريد السيستان. J Zhejiang Univ، Med Ed （浙江 大学 学报، 医学 版）، 2002،31: 284-287.
