دراسة عن الوظيفة المناعية للغدد الصم العصبية لعقار Cistanche Deserticola ومنتجاته لتبخير نبيذ الأرز في نموذج الفئران المستحث بالجلوكوكورتيكويد-Ⅱ

3.2.4. الكيمياء المناعية

يتم التحكم في موت الخلايا المبرمج العصبي بواسطة العديد من جينات موت الخلايا المبرمج ومضادات موت الخلايا المبرمج، وبشكل رئيسي الجين المعزز لموت الخلايا المبرمج Bax والجينات المضادة لموت الخلايا المبرمج في عائلة الجينات Bcl-2. يتم تحديد Bcl-2 في العضيات التفاعلية المنتجة للأكسجين مثل الميتوكوندريا والشبكة الإندوبلازمية والأغشية النووية. Bcl-2 له تأثير ضئيل على الجذور الحرة للأكسجين ولكن يمكنه فعل ذلكمنع الضرر التأكسدي في الخلايا. ينقل باكس من السيتوبلازم إلى غشاء الميتوكوندريا، ويغير بنية غشاء الميتوكوندريا، ويعزز إطلاق السيتوكروم ج وتحريض موت الخلايا المبرمج.

سيستانش توبولوسا الطبيعي لتحسين الوظيفة الجنسية PHGS75% ECH 30% ACT 12%

كان هناك تعبير في سيتوبلازم الغدة الكظرية لبروتين Bax وBcl-2. أظهر التلوين جميع الجزيئات الصفراء. بالمقارنة مع مجموعة BC، زاد متوسط ​​الكثافة البصرية لبروتين Bax في مجموعة MC بشكل ملحوظ (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

يوضح الشكل 5 (ب) أنه مقارنةً بمجموعة BC، انخفض متوسط ​​الكثافة البصرية لبروتين Bcl-2 في مجموعة MC بشكل ملحوظ (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

يتمركز بروتين الكاسبيز-3 بشكل رئيسي في السيتوبلازم في شكله الأصلي في الأنسجة الطبيعية وله تعبير منخفض. الإشارات الإيجابية تكون صفراء باهتة أو صفراء بنية. بالمقارنة مع مجموعة BC، زاد تعبير caspase -3 في مجموعة MC بشكل ملحوظ (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

في الأنسجة الطبيعية، تم تقليل التعبير عن جين فاس، وكانت الإشارة الإيجابية للتهجين في الموقع صفراء بنية. كما هو مبين في الشكل 5 (د)، مقارنة بمجموعة BC، زاد متوسط ​​الكثافة البصرية لبروتين Fas في مجموعة MC (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

يقع بروتين FasL بشكل رئيسي في غشاء الخلية أو السيتوبلازم، وتكون إشاراته الإيجابية بنية اللون. بالمقارنة مع مجموعة BC، زاد متوسط ​​الكثافة البصرية لجين FasL في مجموعة MC بشكل ملحوظ (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

أظهرت النتائج أن CD وWCD يمكنهما ذلكتحفيز موت الخلايا المبرمج في الخلايا الالتهابيةوتقليل تلف الغدة الكظرية عن طريق تعزيز التعبير عن بروتين FasL والارتباط ببروتين Fas، وتنشيط بروتين caspase-3 وتحفيز سلسلة Caspase. كان تأثير مجموعة WCD-HD هو الأفضل.

3.3. تحديد وظيفة المناعة

3.3.1. مؤشر الجهاز المناعي

بالمقارنة مع مجموعة BC، انخفض معامل الغدة الصعترية ومؤشر الطحال لمجموعة MC بشكل ملحوظ (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better. 

سيستانش توبولوسا الطبيعي لتحسين الوظيفة الجنسية PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. الكشف عن مجموعات فرعية من الخلايا اللمفاوية التائية في الدم المحيطي

كانت النسبة المئوية لخلايا CD4+ في الربع العلوي الأيسر وخلايا CD8+ في الربع السفلي الأيمن في BC وكل مجموعة دوائية أعلى من تلك الموجودة في مجموعة MC. بالمقارنة مع تلك الخاصة بمجموعة BC، انخفضت نسبة CD4+ThCD8+ بشكل ملحوظ في مجموعة MC (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. تحديد مستوى IL-10، IL-6، IL-2، TNF-Α، وIFN-C في المصل

يوضح الشكل 8 أنه بالمقارنة مع مجموعة BC، فإن مستوى IL-6 وTNF- وIFN-c زاد بشكل ملحوظ (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. نتائج تجربة مراقبة مجهر أنسجة الليموس

ويبين الشكل 9 أنه في المجموعة قبل الميلاد، كان هناك عدد كبير من الخلايا الليمفاوية. تم ترتيب الخلايا الليمفاوية والخلايا الشبكية بشكل فضفاض في المركز مع خلايا ثيموسية مستديرة أو بيضاوية متناثرة. لم يكن هناك نخر، ولا تسلل للخلايا الالتهابية، ولا تغييرات غير طبيعية.

أظهرت مجموعة MC كمية كبيرة من الأنسجة النخرية اللمفاوية، مع ترتيب مضطرب للخلايا الليمفاوية والخلايا الشبكية في المركز. اختفت الخلايا الصعترية المستديرة أو البيضاوية، وكان تنكس الخلايا أو نخرها واضحًا، وكان هناك تسلل للخلايا الالتهابية مع تغيرات مرضية غير طبيعية.

في مجموعات الأقراص المضغوطة، عادت الخصائص المورفولوجية للخلايا الليمفاوية إلى وضعها الطبيعي، وكان ترتيب الخلايا الليمفاوية المركزية والخلايا الشبكية طبيعيًا تقريبًا. تعافت الخلايا الصعترية المستديرة أو البيضاوية، ولكن بقي عدد صغير من الخلايا الليمفاوية التنكسية أو النخرية والخلايا الالتهابية المتسللة.

في مجموعات WCD ومجموعة PC، تم إصلاح الخصائص المورفولوجية للخلايا الليمفاوية بشكل أفضل. كانت الخلايا الليمفاوية والخلايا الشبكية في المركز مصطفة بشكل جيد، وكانت الخلايا الصعترية المستديرة أو البيضاوية طبيعية تقريبًا، ولكن بقي عدد صغير من الخلايا الليمفاوية المتسللة والتنكسية.

3.4. التعبير الجيني لبروتين CaM

تم اعتبار قيمة RQ (CaM mRNA -actin mRNA) لفحص التعبير عن CaM mRNA. كان RQ لمجموعة BC 1. زاد التعبير عن CaM mRNA في منطقة ما تحت المهاد في مجموعة MC بشكل ملحوظ (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. مناقشة

يسجل دستور الأدوية الصيني [2] أنه يمكن استخدام الأقراص المضغوطة و WCD في العيادة كأنواع رئيسية من قطع الاستخلاص. بعد أن يتم طهيه على البخار مع نبيذ الأرزتأثيرات مضادة للشيخوخة وتنعيم الكلى يانغتم تعزيزها. من خلال UPLC-QqQ-MS، اكتشفنا التغيرات الكمية في قاعدة المواد الكيميائية أثناء عملية تبخير نبيذ الأرز. كانت جليكوسيدات الإيريدويد غير مستقرة وانخفض محتوى هذه الجليكوسيدات، حتى أنها أصبحت غير قابلة للاكتشاف. تغير أيضًا محتوى جليكوسيدات الفينيل إيثانول، مما قد يؤدي إلى تغييرات في الديناميكيات الدوائية والتأثير السريري.

سيستانش توبولوسا الطبيعي لتحسين الوظيفة الجنسية PHGS75% ECH 30% ACT 12%

تم تكرار نموذج نقص يانغ الكلى الكلاسيكي عن طريق الحقن تحت الجلد للكورتيكوستيرون [19]. جرعة زائدة من الكورتيكوستيرون يمكن أن تمنع إفراز CRH في منطقة ما تحت المهاد. وفي الوقت نفسه، تم أيضًا تثبيط سر ACTH. انخفض مستوى هرمون قشرة الغدة الكظرية، وبالتالي انخفضت وظيفة محور HPA. يعد القصور الوظيفي لمحور HPA سمة شائعة لنقص اليانغ الكلوي [20]. ثم تظهر على الفئران ظاهرة "النضوب" وتتوافق الأعراض مع أعراض نقص اليانغ الكلوي في العيادة.

في مجموعة MC، انخفض مستوى CRH وACTH وT وCORT في مصل الفئران بشكل ملحوظ (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

يعد تعديل نسبة أفراد عائلة Bcl-2 إحدى الآليات الأساسية التي يتوسط FasThFasL من خلالها مسار مستقبلات الوفاة، وتنظم عائلة Bcl-2 مسار الميتوكوندريا [21]. ينتمي عامل تثبيط موت الخلايا المبرمج Bcl-2 والعوامل المسببة لموت الخلايا المبرمج، مثل Bax، إلى عائلة Bcl-2 [22]. يمكن تحديد موت الخلايا المبرمج من خلال النسبة النسبية للعوامل المثبطة لموت الخلايا المبرمج والعوامل المسببة لموت الخلايا المبرمج [23]. الميتوكوندريا لها وظيفة نقاط التفتيش المركزية للعديد من أشكال موت الخلايا المبرمج [24]. أظهرت الدراسة الحالية أن الأقراص المضغوطة-MD ​​وأقراص WCD يمكن أن تستنتج تعبير Bax وتزيد Bcl-2 إلىتحسين نقص الكلى يانغ. Fas هو مستقبل الموت الرئيسي الذي يحفز موت الخلايا المبرمج عن طريق الارتباط مع Fas ligand (FasL) [25]. زاد التعبير عن Fas وFasL في مجموعة MC، بينما زاد هذا التعبير بشكل ملحوظ في مجموعة WCD-MD (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

يعد نقص الوظيفة المناعية أحد المظاهر المهمة لنقص اليانغ الكلوي [28]. في هذه الدراسة وجدنا أن مؤشر الطحال والغدة الصعترية لمجموعة WCD-MD قد تعافى بشكل ملحوظ (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

يعد محور HPA أهم نظام تنظيمي لأنه ينظم إفراز الجلوكورتيكويد ونظام الغدد الصماء للحفاظ على الوظيفة الإفرازية لقشرة الغدة الكظرية [32]. ارتبط الإفراط في التعبير عن CaM mRNA في أنسجة ما تحت المهاد بنقص يانغ الكلى. يمكن لـ CD وWCD سد قنوات الكالسيوم، وتثبيط تعبير CaM mRNA في منطقة ما تحت المهاد، وتقليل تدفق الكالسيوم، وبالتالي تقليل نشاط Ca2+·CaM المعقد.

تشكيل نقص يانغ الكلى هو عملية تطور المرض المزمن. لم تعد الكلى مفهومًا تشريحيًا بحتًا، بل أصبحت مصطلحًا عامًا يشير إلى مناعة الغدد الصم العصبية والجهاز البولي التناسلي. تعد شبكة الغدد الصم العصبية المناعية (NEI) نظامًا تنظيميًا متكاملًا مهمًا [33]. يمكن لـ CD وWCD تنظيم وظيفة محور HPAT وتحسين تعافي نقص اليانغ الكلوي. توفر هذه النتيجة الأساس التجريبي للوقاية والعلاج السريري لنقص اليانغ الكلوي.

سيستانش توبولوسا الطبيعي لتحسين الوظيفة الجنسية PHGS75% ECH 30% ACT 12%