دراسة عن جليكوسيدات فينيليثانول في سيستانش توبولوسا

خلاصة: الهدف: لتأكيد جليكوسيدات الفينيثانويد في الأعشاب الطبية من Cistanche deserticola (شينجيانغ) وإنشاء طريقة كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) لتقدير جليكوسيدات فينيل إيثانويد في وقت واحد. الطريقة: تم استخدام عمود كروماتوجرافي ThermoSyncronis C18 (25 0 مم) × ４． ６ ｍｍ، ５ μ ｍ）؛ الأسيتونتريل كمرحلة متحركة أ ، 0. 1 في المائة من محلول حمض الفوسفوريك كمرحلة متنقلة ب ، شطف التدرج (0-10 دقيقة ، 1 0 في المائة أ {{1 0}} بالمائة أ ؛ 10-20 دقيقة ، 15 بالمائة أ -18 بالمائة أ ؛ 20-45 دقيقة ، 18 بالمائة أ -27 بالمائة أ) ؛ معدل التدفق 1.0 مل / دقيقة ؛ درجة حرارة العمود 30 درجة ؛ الطول الموجي للكشف 330 نانومتر ؛ حجم الحقن 10 ميكرولتر. النتيجة: يحتوي Cistanche deserticola على ستة جليكوسيدات فينيل إيثانول ، بما في ذلك إشنسايد ، وأنثوسيانين أ ، وبيلوسيد ، وإيزوبيلوسيد ، و 2 '- أسيتيل بيلوسيد ، وأنثوسيانين ب ، دون أي جليكوسيدات فينيل إيثانول أخرى ؛ أظهرت طريقة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء لفصل ستة جليكوسيدات فينيل إيثانول نتائج جيدة ، تتراوح من 80.438 إلى 1287. 000 مجم / لتر ، 7.552 إلى 120.834 مجم / لتر ، 28.144 إلى 450.305 مجم / لتر ، 18. 865 إلى 301.840 مجم / لتر ، ومن 1.100 إلى 17.593 مجم / لتر ، على التوالي. العلاقة الخطية جيدة في نطاق 0.382 ~ 6.113 مجم / لتر (R2 أكبر من أو يساوي 0.9998) ؛ دقة RSD واستقرارها وتكرارها أقل من 3.2٪ ؛ يتراوح متوسط ​​معدل الاسترداد بين 97.19 بالمائة و 102.51 بالمائة ، والطريقة دقيقة وموثوقة. الخلاصة: يحتوي Cistanche deserticola (شينجيانغ) على ستة فينيل إيثانول أمين جليكوسيدات ، بما في ذلك إشنكوسايد ، أنثوسيانين أ ، بجانب حمام السباحة ، أيزوبيلوسيد ، 2 '- أسيتيل بيلوسيد ، وأنثوسيانين ب. طريقة كروماتوجرافيا السائل عالية الأداء بسيطة وسريعة ودقيقة وقابلة للتكرار ، و يمكن تحديد محتوى ستة جليكوسيدات فينيل إيثانول أمين في وقت واحد في Cistanche deserticola ، وهذا يمكن أن يوفر أساسًا علميًا للبحث والتحكم في جودة Cistanche deserticola.

الكلمات الدالة: القسط الأنبوبي. جليكوسيدات فينيل إيثانول ؛ ＨＰＬＣ

هذا المنتج عبارة عن جذع سمين جاف بأوراق متقشرة من Cistanchetu hulosa (Schenk) Wish ، وهو نبات من عائلة Orobaceae. له تأثيرات تنغيم يانغ الكلى ، وجوهر التغذية والدم ، وترطيب الأمعاء للتخفيف من الإمساك. يتم استخدامه لعلاج نقص الكلى واليانغ ونقص الجوهر والدم والعجز والعقم وضعف الخصر والركبتين وضعف العضلات والعظام وجفاف الأمعاء والإمساك. أظهرت الأبحاث الحديثة أن المكونات الكيميائية الرئيسية للأعشاب الطبية في جنس Cistanche تشمل جليكوسيدات فينيل إيثانول أمين ، إيريديويد ، قشور ، عديد السكاريد ، قلويدات ، زيوت متطايرة ، ومكونات أخرى [2]. من بينها ، جليكوسيدات الفينيثانويد هي المكونات النشطة الرئيسية لـ Cistanche deserticola لمكافحتها للشيخوخة ، ومكافحة التعب ، وتقوية الكلى واليانغ ، والخرف المضاد للشيخوخة ، والتأثيرات الدوائية الأخرى. يحتوي Cistanche deserticola بشكل أساسي على إشنسا ، غانغليوسيد أ ، بجانب المسبح ، أيزوبيلوسيد ، كريسوتيل ، 2 '- أسيتيل جليكوزيد ، 2' - أسيتيل بولسايد ، سيستانش غليكوزيد أ ، سيستانش جليكوسيد ج فينيل إيثانول جليكوسيدات مثل {{8} ب. استخدمت هذه الدراسة HPLC للتعرف على جليكوسيدات فينيل إيثانول أمين في Cistanche deserticola (شينجيانغ) وأنشأت طريقة تحديد متزامنة ، والتي يمكن استخدامها للتمييز بين أصالة وجودة Cistanche deserticola ، مما يوفر أساسًا علميًا لبحوث الجودة والتحكم في Cistanche deserticola.

المكونات الكيميائية الرئيسية لـ Cistanche deserticola

1 الأدوات ، عقاقير الاختبار ، والعينات

الكروماتوغراف: سلسلة Ultramate3000 اللوني السائل عالي الأداء (مضخة التدرج الرباعي LPG 3400SDN ، جهاز أخذ العينات الأوتوماتيكي WPS -3000 SL ، صندوق درجة حرارة العمود TCC 3000RS ، كاشف VWD 3100) ؛ العمود الكروماتوغرافي: عمود ThermoSyncronisC18 (4.6 مم × ２５０ ｍｍ ، ５ μ ｍ） ؛ الميزان الإلكتروني: 1/100000 نموذج ميزان إلكتروني هو Sedoris SQP ؛ نموذج الميزان الإلكتروني 1/10000 هو Sedoris SQP ؛ مياه نقية / نظام متكامل للمياه فائقة النقاء: PURELABClassicUV ، نظام مياه نقي للغاية.

Echinoside ، المكون الكيميائي الرئيسي لـ Cistanche deserticola

Echinoside: Lemaitian Pharmaceutical ، رقم الدُفعة: DST 191008-038 ، المحتوى 99.9 بالمائة ؛ Guanhua glycoside A: ChemFace ، رقم الدفعة: CFN90669 ، المحتوى 98 بالمائة ؛ جليكوسيد زهرة Maorui: تنبيه ، رقم الدُفعة PS011530 ، المحتوى: 94.6 بالمائة ؛ Isopiloside: ChemFace ، رقم الدُفعة CFN97049 ، المحتوى 98 بالمائة ؛ 2 '- Acetylpiloside: ChemFace ، رقم الدُفعة: CFN92452 ، المحتوى: 98 بالمائة. Guanhua glycoside B: Greep ، رقم الدُفعة: 20120903 ، المحتوى 98.57 بالمائة ؛ الأسيتونتريل: فيشر نقي كروماتوجرافيًا ؛ حمض الفوسفوريك: فيشر ، نقي كروماتوغرافيا ؛ الميثانول: الطب الصيني التحليلي النقي.

تم شراء عشبة Guanhua Cistanche الطبية من شركة Xinjiang Heji Traditional Chinese Medicine Slice Co.، Ltd. ، التي يعود أصلها إلى شينجيانغ. تم تحديدها على أنها Guanhua Cistanche من قبل كل من Xinjiang Heji Traditional Chinese Medicine Slice Co.، Ltd. و Jinpai Zhengtang Pharmaceutical Co.، Ltd.

2 الطرق والنتائج

2.1 الظروف الكروماتوغرافية

استخدام هلام السيليكا المرتبط أوكتاديسيل سيلان كمواد مالئة (ThermoSyncronisC18) ؛ باستخدام الأسيتونيتريل (أ) -0. 1 في المائة من محلول حمض الفوسفوريك (ب) ، شطف التدرج (0-10 دقيقة ، 15 في المائة أ → 18 في المائة أ ؛ 10-20 دقيقة ، 18 في المائة أ → 2 0 بالمائة أ ؛ 20-45 دقيقة ، 20 بالمائة أ → 27 بالمائة أ) ؛ معدل التدفق 1.0 مل / دقيقة ؛ درجة حرارة العمود 30 درجة ؛ الطول الموجي للكشف 330 نانومتر ؛ حجم الحقن 10 ميكرولتر. يظهر الشكل اللوني لمحلول الاختبار في ظل هذه الحالة الكروماتوغرافية في الشكل 1.

الشكل 1 الشكل 1 تحليل كروماتوغرافي لمحلول اختبار Cistanche deserticola

2.2 تحضير الحل

2.2.1 تحضير محلول الاختبار

خذ عينة من 0 تقريبًا. 1 جم (منخل من خلال المنخل الثالث) ، قم بوزنه بدقة ، أضف 20 مل من 50 بالمائة من الميثانول ، قم بوزن الكتلة ، ثم انقع لمدة 30 دقيقة ، صوتنة (500 واط ، 53 كيلو هرتز) لمدة 40 دقيقة ، اتركها تبرد ، وقم بوزن الكتلة مرة أخرى ، واستخدم 50 في المائة من الميثانول لتعويض الكتلة المفقودة ، ورج جيدًا ، واحصل على العينة.

2.2.2 إعداد الحل المرجعي

وزن عينات التحكم بدقة من Echinacetin و Anthocyanin A و Piloside و Isopiloside و 2 '- acetylpiloside و Anthocyanin B وأضف 50 بالمائة من الميثانول للحصول على تركيزات 1287. 000 مجم / لتر ، 120.834 مجم / لتر ، 450.305 مجم / لتر ، 301.840 ملجم / لتر ، و 17.593 ملجم / لتر ، على التوالي يتم الحصول على محلول مرجعي مختلط 6.113 ملجم / لتر. يظهر الرسم اللوني للحل المرجعي في الشكل 2

الشكل 2  6 مخطط كروماتوجرافي للحلول المرجعية لـ 26 جليكوسيدات فينيليثانويد

2.3 تحديد جليكوسيدات الفينيثانويد في Cistanche deserticola (شينجيانغ)

قم بإعداد محلول مرجعي لجليكوسيدات فينيل إيثانول أمين مثل إشنكوسايد ، أنثوسيانين أ ، أنثوسيانين أ ، أنثوسيانين ، أنثوسيانين ، 2 '- أسيتيل أنثوسيانين ، 2' - أسيتيل أنثوسيانين أ ، أنثوسيانين سي ، وعينات أنثوسيانين ب ، وتم شراؤها من هيجي ، شينجيانغ (أصل شينجيانغ) منذ عام 2017 ، قم بإعداد حل الاختبار وفقًا لطريقة التحضير "2.2.1" ، وتحليل الحل القياسي وحل الاختبار في ظل الظروف الكروماتوجرافية "2.1". أظهرت النتائج أن توزيع القمم الكروماتوجرافية في الدفعات الثلاث لعينات Cistanche deserticola كان متسقًا. من خلال الجمع بين وقت الاستبقاء ومنحنى الامتصاص الكامل الطول الموجي لكل مركب من مركبات فينيل إيثانول أمين جليكوسيد ، تم تحديد القمم الكروماتوجرافية للعينات. أظهرت النتائج أن جميع الدُفعات الثلاث لعينات Cistanche deserticola تحتوي على ستة جليكوسيدات فينيل إيثانول أمين: إشيناكوسيد ، أنثوسيانين أ ، أنثوسيانين ، أنثوسيانين ، 2 '- أسيتيل أنثوسيانين ، وأنثوسيانين ب ، لا توجد قمم كروماتوجرافية أخرى من فينيل إيثانويد جليكوسيد. يظهر تحديد القمم الكروماتوغرافية في الشكل 3.

المكونات الكيميائية الرئيسية لـ Cistanche deserticola

انقر هنا لعرض منتجات Cistanche

【اطلب المزيد】 البريد الإلكتروني: cindy.xue@wecistanche.com / تطبيق Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4 مراجعة المنهجية

2.4.1 فحص العلاقة الخطية

قم بتخفيف المحلول المرجعي المختلط (1 #) ضمن "2.2.2" بمقدار 2 مرات ، و 4 مرات ، و 8 مرات ، و 16 مرة للحصول على الحل المرجعي 2 # -5 #. خذ كل مستوى من الحل المرجعي وقم بتحليله وفقًا للشروط الكروماتوغرافية ضمن "2.1". استخدم تركيز كل مستوى من الحل المرجعي كمحور س ومنطقة الذروة لكل مستوى كمحور ص للانحدار الخطي. النتائج موضحة في الجدول 1 ، مما يشير إلى وجود علاقة خطية جيدة بين المكونات ضمن النطاق الخطي المقابل.

جدول 1  6 العلاقات الخطية لجليكوسيدات فينيليثانويد

الشكل 3 تحديد القمم الكروماتوجرافية لجليكوسيدات فينيل إيثانول في Cistanche deserticola

2.4.2 اختبار الدقة

وفقًا لطريقة تحضير محلول الاختبار في "2.2.1" ، قم بإعداد جزء واحد من محلول الاختبار وقم بتحليله باستمرار ست مرات تحت الظروف الكروماتوجرافية في "2.1". تم الحصول على محتويات إشنكوسايد ، أنثوسيانين أ ، أنثوسيانين ، أنثوسيانين ، 2 '- أسيتيل أنثوسيانين ، وأنثوسيانين ب في كل تحليل ، مع قيم تحديد وضع اللاجئ تبلغ 0. 3 بالمائة ، 0. 3 بالمائة ، و 0. 2 في المائة ، على التوالي ، 0. 1 في المائة ، 1. 0 في المائة ، 3.1 في المائة ، مما يشير إلى دقة جيدة للجهاز.

2.4.3 اختبار الاستقرار

وفقًا لطريقة التحضير لحل الاختبار "2.2.1" ، قم بإعداد جزء واحد من محلول الاختبار ، وحلل 6 مرات في ظل الظروف الكروماتوجرافية "2.1" في 0 ، 2 ، 4.5 ، 1 {{16 }} و 13.5 و 2 0 ساعة ، على التوالي ، للحصول على محتوى إشنكوسايد ، أنثوسيانين أ ، أنثوسيانين ، هو أنثوسيانين ، 2 '- أسيتيل أنثوسيانين ، وأنثوسيانين ب في كل تحليل ، قيم RSD للمحتوى هي {{2 0}. 6 بالمائة و 0.4 بالمائة و 0.5 بالمائة و 0.4 بالمائة و 1.3 بالمائة و 3.1 بالمائة على التوالي ، مما يشير إلى أن حل الاختبار يتمتع بثبات جيد خلال 20 ساعة.

2.4.4 اختبار التكرار

وفقًا لطريقة تحضير محلول الاختبار "2.2.1" ، قم بإعداد 6 عينات من محلول الاختبار وتحليلها وفقًا للشروط الكروماتوجرافية "2.1" للحصول على محتويات كل تحليل لإشنكوسايد ، الأنثوسيانين أ ، الأنثوسيانين أ ، الأنثوسيانين ، 2 '- أسيتيل أنثوسيانين ب ، وأنثوسيانين ب ، بقيم RSD تبلغ 0. 6 بالمائة ، {{1 0}}. 6 بالمائة ، 0.6 بالمائة ، 1.5 بالمائة ، على التوالي 1.5 بالمائة تشير إلى قابلية جيدة للتكرار من هذه الطريقة.

2.4.5 اختبار استعادة الملصقات

خذ ما يقرب من {0}. 05 جم من المحتوى المعروف من المسحوق الطبي ، وقم بوزنه بدقة وتوازي 9 أجزاء. أضف محاليل مرجعية تعادل 50 في المائة ، و 100 في المائة ، و 150 في المائة من محتوى المكونات الستة المراد اختبارها في المادة الطبية ، وقم بإعداد 3 أجزاء بالتوازي. قم بإعداد حل الاختبار وفقًا للطريقة "2.2.1" ، وحللها في ظل الظروف الكروماتوجرافية "2.1" ، واحسب معدل الاسترداد لكل مكون ، وتظهر النتائج في الجدول 2 ، مما يشير إلى أن دقة هذه الطريقة جيدة . 2.5 تحديد محتوى العينة: تزن حوالي 0.1 جرام من دفعات مختلفة من المسحوق الطبي (منخل من خلال المنخل رقم 3) ، تزن بدقة ، وتحضر محلول الاختبار وفقًا للطريقة الموضحة في "2.2.1" ، قم بالقياس وفقًا للظروف الكروماتوجرافية الموضحة في "2.1" ، سجل منطقة الذروة ، وحساب محتوى ستة جليكوسيدات فينيلثانويد باستخدام معادلة الانحدار. النتائج موضحة في الجدول 3.

3 مناقشة

3.1 تقدير جليكوسيدات الفينيثانويد

تحتوي جميع الدفعات الثلاث من Cistanche deserticola (شينجيانغ) التي تم اختبارها على ستة جليكوسيدات فينيل إيثانويد ، وهي إشنكوسايد ، أنثوسيانين أ ، بجانب المسبح ، أيزوبيلوسيد ، 2 '- أسيتيل بيلوسيد ، وأنثوسيانين ب ، ولا يحتوي أي منها على مكونات إيثانول فينيل أخرى. يشير هذا إلى أن أنواع جليكوسيدات الفينيثانول في Cistanche deserticola (شينجيانغ) متسقة نسبيًا ، بما في ذلك إشنسايد وبيلوسيد. محتوى الجليكوسيدات في زهرة Isomeria أعلى من 1 في المائة.

الفينيثانول جليكوسيد هو العنصر النشط الرئيسي في Cistanche deserticola

3.2 تحسين ظروف الاستخراج

أجرت هذه التجربة دراسة أحادية العامل على مذيب الاستخلاص (10 في المائة ~ 90 في المائة ميثانول) ، وفي النهاية حددت 50 في المائة من الميثانول باعتباره المذيب الأمثل ؛ تم إجراء تحقيق أحادي العامل في وقت الاستخراج بالموجات فوق الصوتية (20-60 دقيقة) ، ووجد أن 2 '- acetyl poolside وصلت إلى ذروتها خلال النطاق الزمني للاستخراج بالموجات فوق الصوتية البالغ 30-40 دقيقة. ومع ذلك ، انخفض المحتوى بعد 60 دقيقة من الموجات فوق الصوتية ، وقد يتلف هذا المكون بسبب وقت الموجات فوق الصوتية الطويل. مع الأخذ في الاعتبار تأثيرات استخراج المكونات الأخرى ، فإن الموجات فوق الصوتية لمدة 40 دقيقة هي وقت الاستخراج الأمثل.

3.3 تعظيم الاستفادة من الظروف الكروماتوجرافية

تم إجراء مسح كامل الطول الموجي (190-400 نانومتر) باستخدام كاشف مصفوفة الصمام الثنائي ، مما يشير إلى أن منحنيات الامتصاص ذات الطول الموجي الكامل لجليكوسيدات الفينيثانويد الستة كانت متسقة ، مع ذروة الامتصاص عند 195 نانومتر و 330 نانومتر. تأثرت الأطوال الموجية المنخفضة بشدة بتداخل الامتصاص من الطور المتحرك وخلفية الشوائب ، لذلك كان طول موجة الامتصاص الأمثل 330 نانومتر. تم التحقيق في تأثيرات الفصل لأعمدة كروماتوغرافية مختلفة ، ووجد أن أعمدة DiamonsilC18 و AgilentZORBAXSB-AqC18 و ThermoSyncronis C18 كانت قادرة على فصل هذه الجليكوسيدات الفينيليثانويدية الستة من عينة اختبار Cistanche deserticola ، ومن بينها عمود كروماتوغرافي ThermoSyncronis C18 كان له أفضل تأثير فصل.

الجدول 2 نتائج اختبار الاسترداد المسننة

الجدول 3 محتوى 6 جليكوسيدات فينيل إيثانول في Cistanche deserticola (نسبة مئوية)

4. الخلاصة

حددت هذه التجربة جليكوسيدات فينيل إيثانول أمين في Cistanche deserticola (شينجيانغ) وأنشأت طريقة تحديد متزامنة لمحتوى ستة جليكوسيدات فينيل إيثانول أمين في Cistanche deserticola ، بما في ذلك إشنسايد ، أنثوسيانين أ ، أنثوسيانين ، إيزوانثوسيانين ، 2 '- أسيتيل أنثوسيانين. الطريقة بسيطة وسريعة ودقيقة ولها دور مزدوج في التحليل النوعي والكمي ، وهذا يوفر طرقًا تحليلية وأساسًا علميًا للتحكم الفعال في جودة Cistanche deserticola.

مسحوق استخراج سيستانش

مرجع:

[1] اللجنة الوطنية لدستور الأدوية. دستور الأدوية في جمهورية الصين الشعبية [م]. بكين: مطبعة الصين للعلوم الطبية والتكنولوجيا ، 2020: 140-141

[2] وانج جيا ، يانج ون ، وانج دونج ، وآخرون. دراسة مقارنة لأربعة أنواع من Cistanche deserticola بناءً على أطياف خصائص HPLC [J]. مجلة التحليل الصيدلاني ، 2021 ، 41 (3): 384-393

[3] دينغ يانشيا ، وانغ شياو تشين ، تشانغ ينغ. تحديد محتوى ستة جليكوسيدات فينيل إيثانول أمين رئيسية في الأعشاب الطبية من جنس Cistanche بناءً على تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء [J]. شي زين Guoyi Guoyao ، 2020 ، 31 (4): 813-816

شيونغ هوي وليو يوكي وتشو وينجيا وآخرون. الطيف المميز لـ HPLC لـ Cistanche deserticola وتحديد خمسة فينيل إيثانول أمين جليكوسيدات ［J］. مجلة التحليل الصيدلاني ، 2019 ، 39 (2): 233-239

[5] Ma Zhiguo ، Tan Yongxin. التغييرات في ستة جليكوسيدات فينيليثانويد في Cistanche deserticola في أوقات مختلفة من التبخير [J]. الأدوية والمستحضرات البسيطة الصينية التقليدية المسجلة ببراءة اختراع ، 2011 ، 33 (11): 1951-1954

［6］ Ma Xueqin و Dong Yanhong و Guo Qi وآخرون. تحديد ستة من فينيل إيثانول أمين جليكوسيدات في Cistanche deserticola Herbs عن طريق اختبار واحد وطريقة تقييم متعددة ［J］. شي زين Guoyi Guoyao ، 2018 ، 29 (10): 2309-2312

[7] Liang Jiansong و Xue Cuili و Wu Menghua وآخرون. تحديد ستة جليكوسيدات الفينيثانول في Cistanche deserticola و Cistanche deserticola بواسطة UPLC والتقييم الكيميائي [J]. مجلة التحليل الصيدلاني ، 2021 ، 41 (2): 226-235