خلاصة

الخلفية: الكلية عضو شديد التعقيد وله وظائف متعددة ضرورية للصحة. يحدث مرض الكلى عندما تتضرر الكلى ولا تعمل بشكل صحيح. يعد التحليل أحادي الخلية تقنية قوية توفر نظرة ثاقبة غير مسبوقة لأنواع خلايا الكلى الطبيعية وغير الطبيعية وستغير فهمنا لآليات أمراض الكلى الشائعة.

الملخص: إن فهمنا للإمراضية لأمراض الكلى محدود بسبب التوصيف الجزيئي غير المكتمل لأنواع الخلايا المسؤولة عن وظائف الكلى. كشف تطبيق تقنية الخلية الواحدة في أبحاث الكلى عن عدم التجانس الخلوي ، وملامح التعبير الجيني ، والديناميات الجزيئية في تطور مرض الكلى وتطوره. قدم التحليل أحادي الخلية للأنسجة العضوية الكلوية وأنسجة الطعم الخيفي رؤى جديدة في تكوين الأعضاء الكلوية ، وآليات المرض ، والنتائج العلاجية. بشكل عام ، سيحسن فهم عدم تجانس الخلايا الكلوية والديناميات الجزيئية لأمراض الكلى دقة التشخيص ويساعد في تحديد استراتيجيات علاجية جديدة في أمراض الكلى.

الرسالة الرئيسية: في مقالة المراجعة هذه ، نلخص الأبحاث الحديثة أحادية الخلية حول أمراض الكلى ونناقش تأثير تقنية الخلية الواحدة على أبحاث الكلى الأساسية والسريرية.

الكلمات الدالة

تكنولوجيا الخلية الواحدة مرض كلوي؛ خلية مناعية عضوي الكلى. خيفي.فوائد Cistanche.

مقدمة

الكلى عضوان على شكل حبة الفول مسؤولان عن تصفية الفضلات والماء الزائد والشوائب الأخرى في الدم وإنتاج البول. تنظم الكلى أيضًا مستويات الأس الهيدروجيني والملح والبوتاسيوم وضغط الدم. السيطرة على إنتاج خلايا الدم الحمراء. وتنشيط شكل من أشكال فيتامين د الذي يساعد الجسم على امتصاص الكالسيوم. حتى الآن ، يعاني ما يقدر بنحو 850 مليون شخص في جميع أنحاء العالم من أمراض الكلى ، بما في ذلك مرض الكلى المزمن (CKD) ، وإصابة الكلى الحادة ، والفشل الكلوي ، والعديد من الحالات الأخرى. تحدث أمراض الكلى عندما تتضرر الكلى وتعجز عن أداء وظائفها. يمكن أن يحدث الضرر بسبب مرض السكري وارتفاع ضغط الدم ومجموعة متنوعة من الحالات المزمنة الأخرى (طويلة الأجل). يمكن أن تؤدي أمراض الكلى إلى مشاكل صحية أخرى ، بما في ذلك هشاشة العظام وتلف الأعصاب وسوء التغذية وأمراض القلب. تظل استراتيجيات العلاج الحالية للمرضى عمليات زرع الكلى أو غسيل الكلى ، وهي مكلفة.

تتفاعل مجموعة متنوعة من الخلايا في الكلى ، بما في ذلك الخلايا الظهارية ، والخلايا الثيلاكويدية ، والبطانية ، والخلايا العصبية ، بالإضافة إلى شبكات الخلايا المناعية ، للحفاظ على وظائف الكلى الطبيعية. إن الفهم الأعمق للتغاير بين الكلى السليمة والعمليات الكامنة وراء مرض الكلى سيصقل التعريف الظاهري للجزيئي والمرضي للكلية ويدعم تطوير تصنيفات مرضية جديدة. من المحتمل أن تكون تقنية الخلية الواحدة مفيدة في تحديد الأنواع الفرعية الخلوية والحالات وتغيرات التردد أثناء ظهور مرض الكلى وتطوره. في السنوات الأخيرة ، مع التطور السريع لتقنية تسلسل الحمض النووي الريبي أحادية الخلية عالية الإنتاجية (scRNA-seq) ، تم إنشاء أطلس خلوي شامل للكلية الطبيعية لأبحاث الطب الكلوي الدقيق. تم تطوير مشروع طب الكلى الدقيق (KPMP) عالميًا للحصول على خزعات الكلى البشرية ، وإنشاء أطالس أنسجة الكلى ، وتحديد المجموعات السكانية الفرعية للمرض ، وفي النهاية تحديد الخلايا والمسارات والأهداف الرئيسية للعلاجات الجديدة. بناءً على مجموعة البيانات النسخية أحادية الخلية المرتبطة بالكلى ، حلل الباحثون أيضًا ملامح التعبير الجيني لـ ACE2 و TMPRSS2 و SLC6A19 في الأنواع الفرعية من الخلايا الكلوية ، وهو أمر بالغ الأهمية لفهم التسبب في الإصابة بفيروس كورونا المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة 2. في هذه المراجعة ، سنركز على (1) تطوير وتطبيق تكنولوجيا الخلية الواحدة ، (2) استخدام scRNA-seq لدراسة تطور وتطور أمراض الكلى ، (3) رسم الخرائط الجزيئية للخلايا المناعية في أمراض الكلى ، ( 4) تطبيق scRNA-seq على الأعضاء الشبيهة بالكلى ، و (5) استخدام scRNA-seq لدراسة التطعيمات الكلوية في العمق (الشكل 1).

انقر هنا للحصول علىآثار Cistanche على الكلى

تطوير وتطبيق تكنولوجيا النسخ أحادية الخلية

الخلية المفردة هي الوحدة الأساسية للحياة. أحدثت تقنيات التحليل أحادية الخلية ثورة في قدرتنا على تحديد تكوين الخلية وتتبع الديناميات الجزيئية والكشف عن الآليات المرضية. تم إجراء تحليل التعبير الجيني لخلية واحدة عالميًا مبكرًا باستخدام تقنيات ميكروأري و qPCR. تيتجين وآخرون. استخدمت المصفوفات الدقيقة أحادية الخلية لمراقبة ملامح التعبير الجزيئي للخلايا العصبية الفردية والخلايا السلفية ولتحديد مسارات الإشارات في مراحل النمو المختلفة. بالإضافة إلى ذلك ، حدد تحليل التعبير أحادي الخلية العديد من الأنواع الفرعية للخلايا النامية التي تحتوي على جينات البنكرياس الجديدة ، مما يوفر رؤى جديدة لتطور البنكرياس. طورت هذه الفئة تقنيات qPCR أحادية الخلية وطبقتها في دراسة الجينات التنظيمية الرئيسية في تطور الكيسة الأريمية للفأر وتمايز النسب المكونة للدم.

مع ظهور تقنيات التسلسل من الجيل التالي ، أظهرت scRNA-seq مزايا واضحة في التمييز بين الأشكال الإسوية المختلفة والتعبير الأليلي والنصوص الجديدة في الخلايا المفردة بتكلفة أقل. في عام 2009 ، Tang et al. أبلغت عن أول تسلسل كامل للنسخة أحادية الخلية من الرنا المرسال ، مما يدل على تعقيد المتغيرات النسخية في بويضات الفأر أو البويضات. تم تطوير smart-seq عام 2012 لاكتشاف النصوص كاملة الطول في الخلايا المفردة ، ومن خلال تطبيقها على الخلايا النادرة ، حدد الباحثون المؤشرات الحيوية المرشحة للخلايا السرطانية المنتشرة في الورم الميلانيني. بعد مرور عام ، تم تقديم Smart-seq2 مع النسخ العكسي المحسن وتغطية القراءة والتحيز والدقة. أدت التطورات الأخيرة في Smart-seq3 إلى تحسين حساسيته بشكل كبير في اكتشاف الآلاف من النسخ أحادية الخلية بدقة أليلية وشكل إسوي. على عكس طرق التضخيم المستندة إلى PCR ، يلتقط CEL-seq النسخ النصية الفعالة أحادية الخلية عن طريق التضخيم الخطي متعدد الإرسال. كشفت دراسة باستخدام CEL-seq لدراسة التطور الجنيني للورم الغددية المشفرة المبكر عن نتائجها القابلة للتكرار والحساسة بدقة أحادية الخلية. أول منصة مؤتمتة لـ scRNA-seq هي Fluidigm C1 ، والتي تستخدم نظام ميكروفلويديك لالتقاط خلايا مفردة في 96 أو 384 غرفة ، تليها تحلل الخلية ، والنسخ العكسي ، وتضخيم PCR.

منذ عام 2015 ، دخلت الأبحاث أحادية الخلية حقبة الإنتاجية العالية والتكلفة المنخفضة والأتمتة مع استمرار توافر Drop-seq و inDrop و 10 × Genomics و Seq-well و Microwell-seq و SPLiTseq. يفصل Drop-seq و inDrop الخلايا الفردية إلى قطرات بحجم نانولتر ويخلطها مع رمز شريطي فريد لتسمية كل خلية. من ناحية أخرى ، يتيح Cyto-seq و Seq-well و Microwell-seq تسلسل mRNA أحادي الخلية عالي الإنتاجية عن طريق التقاط خلية وحبة باركود في ميكروويل. قامت مجموعتنا ببناء أول أطلس لخلايا الفأر ومناظر طبيعية للخلايا البشرية على مستوى الخلية المفردة باستخدام Microwell-seq. في الآونة الأخيرة ، يُطلق على أساليب الإنتاجية العالية والأبسط اسم SPLiT-seq و sci-RNA-seq لـ scRNA-seq. تستخدم هذه الطرق الخلية أو النواة نفسها كغرفة تفاعل للخلايا المسمى الرمز الشريطي خلال عدة جولات من تقسيم البركة. ثم تخضع جميع الخلايا لتضخيم وتسلسل cDNA PCR. كاو وآخرون. استخدم sci-RNA-seq3 لتحليل الترانسكريبتومات لما يقرب من 2 مليون خلية عضوية في الفئران و 4 ملايين خلية جنينية بشرية ، مما يوفر رؤية عالمية لعمليات نمو الثدييات. كما ازدهرت تقنيات الخلية المفردة الأخرى التي تغطي التحليلات الجينومية والبروتينية واللاجينومية ؛ ومع ذلك ، فهي خارج نطاق هذه الورقة.

حدوث وتطور مرض الكلى

يمكن أن تتأثر الكلى بالعديد من الأمراض الشائعة والخطيرة ، بما في ذلك إصابة الكلى الحادة والتهاب كبيبات الكلى والالتهابات الصاعدة (التهاب الحويضة والكلية) والسرطان. بشكل عام ، فإن فهمنا للإمراضية لأمراض الكلى محدود بسبب التوصيف الجزيئي غير المكتمل لأنواع الخلايا المسؤولة عن الوظائف الخاصة بالأعضاء. لسد هذه الفجوة المعرفية ، قامت مجموعتنا و Park et al. شيد أطلس نسخي لكلية الفأر السليمة باستخدام تسلسل سكرنا. تشمل الأنواع الفرعية الرئيسية للخلايا الظهارية للوحدة الكلوية الخلايا الجذعية ، والخلايا الظهارية الأنبوبية القريبة ، وحلقة هنلي ، والأنابيب البعيدة ، وخلايا مجاري الهواء المجمعة. حددت الدراسة نوعًا جديدًا من الخلايا المهاجرة لجمع مجموعات الخلايا الأقنية ، مما يؤكد النتائج السابقة للتحول البيني بين الخلايا المقحمة والخلايا الرئيسية في دراسات تسلسل الحمض النووي الريبي. بالإضافة إلى ذلك ، رانسيك وآخرون. حللوا كلى الذكور والإناث البالغين وأنتجوا أطلسًا تشريحيًا لعناصر كلى الفأر على مستوى الخلية الواحدة. قامت مجموعتنا أيضًا بإجراء تحليل Microwell-seq لأنسجة الكلى الجنينية والبالغين. بالإضافة إلى الخلايا الظهارية ، والخلايا البطانية ، والخلايا اللحمية ، والخلايا المناعية داخل الأنسجة ، حددنا أنواع الخلايا الجسدية من النوع s غير الموصوفة سابقًا في كلية الجنين ونوع الخلايا المهاجرة الجديد في الكلية البالغة. كشف التنميط الجزيئي أحادي الخلية للجهاز الوعائي الكلوي عن ملامح تعبيرية متخصصة لنيفرونات المبنى وكشف عن التسبب في مرض الكلى. علاوة على ذلك ، تم تحديد جميع أنواع الخلايا الكبيبية من الفئران السليمة ونماذج الأمراض المختلفة عن طريق تحليل مجموعات النسخ أحادية الخلية ، وتم الكشف عن جينات جديدة مرتبطة بالأمراض ومسارات تنظيمية في نماذج الأمراض ، مثل مسار فرس النهر الذي تم تنشيطه في خلايا القدم بعد المناعة الكلوية. إصابة.

التليف الكلوي هو السمة المميزة لمرض الكلى المزمن ويؤثر على أكثر من 10 في المائة من سكان العالم. في نموذج تعايش غير متجانس للتليف الكلوي ، كرامان وآخرون. استخدمت scRNA-seq لتأكيد أن الخلايا الأحادية ساهمت بنسبة صغيرة من الخلايا الليفية العضلية ، لكن معظم الخلايا الليفية العضلية مشتقة من خلايا اللحمة المتوسطة. في وقت لاحق ، Kuppe وآخرون. [37] حلل نسخة ما يقرب من 135 ، 000 خلية من الأنابيب القريبة وغير الدائرية ، وتأكد أيضًا من أن الأشكال الإسوية المختلفة للخلايا الجذعية الوسيطة هي المساهم الرئيسي في التليف الكلوي البشري. علاوة على ذلك ، في تحليل مقارن للوحيدات الكلوية السليمة والتليفية ، تم تحديد جين خاص بالأرومة الليفية العضلية ، متماثل الخلايا الكيراتينية العارية 2 (NKD2) ، كهدف علاجي محتمل للتليف الكلوي البشري. بناءً على 402 خزعة من الكلى ، تم التنبؤ بالفيبرينوجين البولي كمؤشر حيوي غير جراحي في المرضى الذين يعانون من مرض الكلى المزمن.

نظام معياري

يتميز اعتلال الكلية السكري (DN) بالضرر المتزامن للكبيبات والنسيج الخلالي الأنبوبي. ومع ذلك ، لا يُعرف سوى القليل نسبيًا عن كيفية تغير الحالة الخلوية والتردد مع ظهور المرض وتطور التعبير الجيني. لتوضيح التغييرات في التعبير الجيني للخلايا الكبيبية في الفأر DN ، Fu et al. أجرى تحليل scRNA-seq وحدد العديد من العلامات المحتملة الجديدة للخلايا الكبيبية ، بما في ذلك Magi2 و Robo2 و Ramp3 و Fabp4. في اعتلال الكلية السكري (DKDs) ، يتم تغيير تنظيم تولد الأوعية والمسارات المهاجرة في الخلايا البطانية ، بينما يتم إثراء الترجمة والمسارات التنظيمية المستقرة للبروتين في خلايا الثايلاكويد. بشكل عام ، ستساعد التغييرات في الديناميات الجزيئية للخلايا البطانية والخلايا الثيلاكويدية في تحديد العوامل الفيزيولوجية المرضية المهمة التي تساهم في تقدم DN. تشونغ وآخرون. يصور نسخة أحادية الخلية من الكبيبات في نموذج فأر لمرض السكري. تم تغيير التعبير الجيني في الثايلاكويد والخلايا البادوسية لفئران ob / ob مقارنةً بالضوابط. تم إحداث مسارات تكاثرية في خلايا الثايلاكويد وتم إحداث مسارات مرتبطة بموت الخلايا في خلايا بودوسيت ، بما يتوافق مع التغيرات في نسب عدد الخلايا. حدد التحليل الشامل لمجموعات بيانات DKD scRNA-seq المنشورة 17 جينًا محوريًا ، مما يثري فهمنا للآليات الجزيئية الكامنة وراء التسبب في الإصابة بـ DKDs. بالإضافة إلى ذلك ، أسفر تسلسل الحمض النووي الريبي للنواة المفردة غير المتحيزة (snRNA-seq) لعينات الكلى السكري البشرية المحفوظة بالتبريد عن 23980 نسخة من ثلاث عينات تحكم وثلاث عينات DN مبكرة. أظهرت النتائج تغييرات خاصة بنوع الخلية في التعبير الجيني مما يشير إلى زيادة إفراز البوتاسيوم في DN البشري. أظهرت دراسة سابقة قارنت scRNA-seq و snRNA-seq في كلى الفأر البالغة أن هذا الأخير يتمتع بقدرة التقاط أكثر كفاءة. على سبيل المثال ، تم التقاط الخلايا الكبيبية وخلايا الثايلاكويد والخلايا البطانية بواسطة snRNA-seq بدلاً من scRNA-seq. يقلل تطبيق snRNA-seq من التأثيرات الزائفة للهضم الأنزيمي ويمكن إجراؤه على العينات المجمدة ، والذي من المتوقع أن يؤدي إلى تطبيق أوسع لتسريع دراسة الآليات المرضية في أمراض الكلى المختلفة.

يمكن للنسخة الخلوية الدقيقة أن تكشف عن أصل خلايا الورم الكلوي ومسارات النسخ التي تدعم التحول الخبيث. يونغ وآخرون. حددت أنواع الخلايا الكلوية البشرية الطبيعية والسرطانية من كتالوج يتكون من 72501 نسخة وحيدة الخلية. من خلال تحديد الارتباطات الخلوية الطبيعية المحددة لخلايا سرطان الكلى (RCCs) ، قدمت دراسة دليلًا على الفرضية القائلة بأن الخلايا السرطانية في ويلمز هي خلايا جنينية شاذة وأن الخلايا الجذعية السرطانية قد تنشأ من نوع فرعي غير معروف من الخلايا الأنبوبية القريبة. وبالتالي ، يوفر scRNA-seq إستراتيجية تجريبية قابلة للتطوير لتوصيف خلايا سرطان الكلى البشرية بدقة جزيئية خلوية كمية دقيقة.

الأطلس الجزيئي للخلايا المناعية في أمراض الكلى

تعد الخلايا المناعية مكونًا أساسيًا للأنسجة البشرية وتلعب دورًا مهمًا في التمثيل الغذائي الفسيولوجي والمرضي. في الواقع ، فإن قدرة الجهاز المناعي على التعرف على الإشارات المسببة للأمراض أو الخطر أو الخلايا الخبيثة أمر بالغ الأهمية. إن تطبيق تقنية الخلية الواحدة لدراسة الخلايا المناعية الكلوية لديه القدرة على تسهيل فهم أفضل لدور الجهاز المناعي في التسبب في أمراض الكلى السليمة والمرض ، وكذلك لتحديد استراتيجيات علاجية جديدة. بدأت هذه الجهود في رسم خريطة المشهد المناعي المعقد داخل الكلى وكشف العلاقة بين الخلايا المناعية المقيمة في الأنسجة وجيرانها النشطين بشكل متبادل.

في عام 2018 ، قدم تطبيق scRNA-seq في أنسجة الكلى للفأر منظرًا شاملاً للخلايا المناعية بما في ذلك الضامة المقيمة ، والعدلات ، والخلايا الليمفاوية B و T ، والخلايا القاتلة الطبيعية. بعد عام واحد ، تم إنشاء دراسة أحادية الخلية غير مسبوقة للتنظيم الزماني المكاني للخلايا المناعية للكلى البشرية. تم تحديد شبكات الخلايا المناعية النخاعية المقيمة في الأنسجة والليمفاوية في كليتي الجنين والبالغين ، وحددت الدراسات برامج النسخ المكتسبة بعد الولادة والتي تعزز الدفاع عن العدوى. بالإضافة إلى ذلك ، كان من المتوقع أن يؤدي الحديث المتبادل بين الخلايا الظهارية للكلى الناضجة والخلايا المناعية إلى تجنيد الخلايا الضامة والعدلات المضادة للبكتيريا في المناطق الأكثر حساسية في الكلى. بشكل عام ، يساهم المشهد المناعي الشامل للكلية في دراسة الآليات المسببة للأمراض وتحديد الأهداف العلاجية في أمراض الكلى المناعية والمعدية.

التهاب الكلية الذئبي (LN) هو أحد أمراض المناعة الذاتية المميتة ، حيث تكون العلاجات الحالية غير فعالة وغالبًا ما تكون سامة. لا تزال العمليات الجزيئية والخلوية التي تؤدي إلى تلف كلوي وعدم تجانس LN غير واضحة. تم استخدام scRNA-seq بواسطة Arazi et al. لتحديد 21 مجموعة سكانية فرعية خاصة بالأمراض من الخلايا النخاعية والتائية والقاتلة الطبيعية والخلايا البائية في مرضى LN. وبالمثل ، Der et al. تطبيق scRNA-seq على أنسجة خزعة الكلى والجلد من مرضى LN. تم الإبلاغ عن أن درجات استجابة الانترفيرون من النوع الأول للخلايا الظهارية الأنبوبية أعلى في مرضى LN عنها في الضوابط الصحية. بالإضافة إلى ذلك ، ارتبطت السمات الالتهابية والتليفية للخلايا الأنبوبية بعدم فعالية العلاج. في DKD ، أظهر تحليل scRNA-seq عددًا أكبر بكثير من الخلايا المناعية في الكبيبات السكري مقارنة بالضوابط. تشير هذه الدراسات إلى أن ملامح التعبير الجيني للخلايا المناعية في البول والجلد والكلى مترابطة بشكل كبير ، مما يشير إلى أن خزعات البول والجلد قد تكون مصدرًا محتملاً للعلامات التشخيصية والإنذارية لأمراض الكلى.

أظهرت الدراسات الحديثة دور الخلايا المناعية في نماذج أمراض الكلى بدقة خلية واحدة. تُستخدم نماذج انسداد الحالب الأحادي الجانب على نطاق واسع في التليف الخلالي الكلوي ، حيث تتسلل البلاعم والخلايا الالتهابية إلى النسيج الخلالي الكلوي ، مما يؤدي إلى تغييرات ملحوظة في ديناميكا الدم الكلوية والتمثيل الغذائي. تم استخدام scRNA-seq في نماذج انسداد الحالب أحادية الجانب القابلة للانعكاس لتشريح منظر الخلية النخاعية أثناء تقدم التليف والانحدار. كونواي وآخرون. كشف عدم التجانس في الخلايا النخاعية ، مع التغيرات الديناميكية في النسب النسبية للمجموعات السكانية الفرعية ، يتم تجنيد الخلايا الوحيدة في وقت مبكر من الإصابة ، وتتراكم Ccr2 بالإضافة إلى الضامة في وقت متأخر من الإصابة ، وتلعب مجموعة جديدة من Mmp12 بالإضافة إلى البلاعم دورًا في عملية الإصلاح. في أمراض الكلى وزرعها ، ترتبط إصابة نقص التروية ضخه (IRI) بالتهاب وتجنيد الكريات البيض. تم استخدام نماذج تجريبية من IRI لتقييم الدور الوظيفي لمجموعتين من الخلايا الشبيهة بالليمفاوية الفطرية في الكلى ، وتشير البيانات إلى أن هذه الخلايا لها وظائف زائدة في الإصابة الكلوية. من خلال تطبيق scRNA-seq على نموذج IRI لزرع الكلى ، Kremann et al. وجد أن CXCR5 بالإضافة إلى تسلل الكريات البيض اللاحق أدى إلى ارتفاع مستويات CXCL13 الجهازية. تم تطبيق knRNA-seq أيضًا على نموذج ماوس IRI بواسطة Kirita et al. لوصف الاستجابات الخلوية المفصلة بعد الإصابة ولتحديد حالة خلية النبيبات القريبة المؤيدة للالتهابات والمؤيدة للليف. يرتبط حمض اليوريك ، وهو منتج الأكسدة النهائي لاستقلاب البيورين ، ارتباطًا وثيقًا بالتهاب الكلى في العديد من نماذج الأمراض. على سبيل المثال ، يستشعر NLRP3 (NOD- و LRR- والمجال الهيكلي المحتوي على البيرين 3) إشارات زيادة حمض البوليك ، ويتم تنشيط الحويصلات الالتهابية في اعتلال الكلية بفرط حمض يوريك الدم. ومع ذلك ، فإن الآليات المناعية المحددة الكامنة وراء إصابة الكلى التي يسببها فرط حمض يوريك الدم غير معروفة. من المتوقع أن يتحقق في المستقبل القريب بناء منظر طبيعي للجسم الالتهابي على مستوى الخلية المفردة في نموذج إصابة الكلى التي يسببها فرط حمض يوريك الدم.

يوجد التسلل المناعي داخل أورام الكلى ويتأثر بالبيئة الدقيقة للورم. أظهرت دراسة سابقة أن مجموعات البلاعم المتسللة إلى الورم تعبر عن عامل نمو بطانة الأوعية الدموية A وتشارك في مسار إشارات VEGF المعقد في أنسجة RCC. توضح الدراسة الحالية أن scRNA-seq يمكن أن يعالج تكوين الأورام ويحدد الآليات الفيزيولوجية المرضية المفترضة وشبكات الإشارات الخلوية التي قد تكون بمثابة أهداف للعلاج الدوائي. بشكل عام ، تسلط الدراسة الضوء على التطورات في scRNAseq التي توفر نظرة ثاقبة لجهاز المناعة والشبكات الخلوية التي تعمل في الكلى السليمة والمريضة.

العشبية سيستانش

تطبيق scRNA-seq على أعضاء الكلى

بالإضافة إلى دراسة أنسجة الكلى المريضة ، أصبحت العضيات الكلوية أداة رئيسية لدراسة آليات تكوين الأعضاء والمرض ، ولديها القدرة على تسريع تطوير العلاجات كمصدر للأنسجة البديلة. في موازاة ذلك ، أدت التطورات في تسلسل scRNA-seq إلى تحليل أكثر تفصيلاً لمختلف المجموعات السكانية الخلوية الفرعية وتغيرات التعبير الجيني في الأعضاء الشبيهة بالكلى.

بشكل عام ، من الضروري فهم التطور الجنيني للكلى بشكل أفضل على مستوى الخلية الواحدة لتوجيه نضوج الأعضاء الشبيهة بالكلى. حددت دراسات النسخ أحادية الخلية للكلية الجنينية البشرية 22 نوعًا من الخلايا وجينات العلامات المقابلة.

توضح المقارنة بين مراحل النمو المختلفة استمرارية الديناميات الجزيئية لخلايا القدم. تم إجراء تحليل آخر لخلية واحدة على كلية جنينية بشرية وأعضاء شبيهة بالكلى مشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية. كشف التحليل المقارن لمسارات التطور أحادية الخلية في الكلى عن ملفات تعريف جينية مماثلة في الجسم الحي وفي المختبر ، باستثناء خلايا القدم في المرحلة المتأخرة ، مما يشير إلى عملية نضج غير مكتملة للأعضاء الشبيهة بخلايا البودوسيت. تشير تجارب الزرع كذلك إلى أنه يمكن تحسين تجويف الثايلاكويد والأوعية الدموية باستخدام نماذج شبه عضوية. أظهرت دراسة حديثة باستخدام خلايا اللحمة الكلوية الخلفية والخلايا الشبيهة بالبرعم الحالب لتوليد عضيات كلوية أن تسلسل scRNA-seq يحسن نضوج الأنابيب القريبة ويقلل من تجمعات الخلايا غير المستهدفة. تم إجراء تحليل scRNA-seq للعضويات الكلوية البشرية المستمدة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات (PSC) بواسطة Subramanian et al. ووو وآخرون. مقارنة بمجموعات البيانات أحادية الخلية الخاصة بالجنين والبالغين ، أظهرت الأعضاء المختلفة الشبيهة بالكلى أنواعًا من الخلايا قابلة للتكاثر إلى حد كبير ، ولكن بنسب مختلفة من الخلايا بسبب وجود خلايا غير مستهدفة. بالإضافة إلى ذلك ، كشف تحليل شبكة عامل النسخ عن مسارات تمايز عضوي كلوي ، مما يسلط الضوء على قوة تقنية الخلية الواحدة في توصيف وتوجيه تمايز العضويات.

في الختام ، تعد الأعضاء الشبيهة بالكلى مصدرًا مفيدًا لنماذج أمراض التعدين ، والآليات التنظيمية المحتملة ، وفحص الأدوية عالي الإنتاجية ، والعلاجات التجديدية في نهاية المطاف. تسلط هذه الدراسات الضوء على الاستخدام المحتمل لـ scRNA-seq في أنظمة النماذج الكلوية لتوضيح العمليات الفسيولوجية والمرضية في الجسم الحي وتقديم إرشادات للبحوث المستقبلية في تشخيص أمراض الكلى وعلاجها.

نظرة ثاقبة في Allografts الكلى بواسطة scRNA-seq

يعتبر زرع الكلى الخيفي أحد أكثر العلاجات السريرية فعالية لمرض الكلى في نهاية المرحلة. توفر تقنية الخلية الواحدة الفرصة لتمييز أنواع الخلايا الكلوية وحالتها بدقة ودقة باستخدام عينات الخزعة البشرية بعد الزرع الخيفي. حلل التقرير الأول المنشور لعينات خزعة زرع الكلى 8746 نسخة وحيدة الخلية وحدد الاستجابات الالتهابية المتميزة. شكلت الوحيدات مجموعة CD16 plus غير الكلاسيكية ومجموعة CD الكلاسيكية 16- ؛ قدمت الخلايا البطانية حالة الراحة وحالتين للرفض بوساطة الأجسام المضادة. تساهم هذه النتائج في فهمنا الأفضل للرفض المناعي في زراعة الكلى. في دراسة مقارنة للوحيدات الكلوية من مصادر المتلقي والمتبرع ، أظهرت عينات الخزعة الكلوية تعبيرًا جينيًا نسبيًا مختلفًا بشكل ملحوظ. لوحظت الخلايا الضامة المنشطة للالتهاب والخلايا التائية المعبر عنها بالسموم الخلوية في المستلمين. وبالمثل ، Liu et al. تحليل الخلايا الناتجة عن رفض زرع الكلى المزمن ومطابقة كليتين بالغين سليمين على مستوى الخلية الواحدة. كشف التحليل العنقودي غير الخاضع للإشراف أن زيادة عدد الخلايا المناعية والأرومات الليفية العضلية في مجموعة رفض زرع الكلى المزمن قد تساهم في الرفض الكلوي والتليف. والجدير بالذكر أن دراسة حديثة صورت أول أطلس أحادي الخلية لبول بالغ وحددت SOX9 بالإضافة إلى مجموعات الخلايا الجذعية / السلفية الكلوية في البول. تكاثرت الخلايا السلفية بنجاح وتمايزت في الجسم الحي ، واكتسبت بعض خصائص الخلايا الأنبوبية وتوفر موردًا مفيدًا محتملًا لعلاج زرع الكلى في المستقبل. بشكل عام ، توفر تقنية scRNA-seq رؤى جديدة وثاقبة في رفض زرع الكلى البشري ، مما يؤدي في النهاية إلى تحسين دقة التشخيص وتسريع اعتماد تفسير الخزعة الجزيئية.

مكملات Cistanche

خاتمة

في العقد الماضي ، أصبح scRNA-seq أداة لا غنى عنها لتحليل التعبير الجيني التفاضلي على مستوى النسخ لدراسة علم الأحياء الفسيولوجي وتحديد التشوهات التنظيمية الجزيئية في المرض. على عكس الأنماط الظاهرية المنفصلة التقليدية ، يمكن أن يوفر التوصيف الجزيئي على مستوى الخلية المفردة معيارًا منهجيًا لتوصيف الأنماط الظاهرية لأمراض الكلى. يوفر تطبيق تقنية الخلية الواحدة في أنسجة الكلى السليمة أو عينات خزعة الكلى السريرية أطلسًا جزيئيًا شاملاً للكلية ويوسع فهمنا لأمراض الكلى. سيكون أطلس الخلية الفردية الكلوية جزءًا لا يتجزأ من العمل الدولي لأطلس الخلايا البشرية ، والذي يهدف إلى إنتاج خريطة مرجعية شاملة ومنهجية لجسم الإنسان. في الدراسات المستقبلية ، من المتوقع أن توسع تحليلات النسخ الفائقة للغاية والنسخة المكانية أحادية الخلية من فهمنا للكلية. سيؤدي دمج بيانات omics المتعددة إلى تحسين التشخيص الشخصي وعلاج أمراض الكلى.

مراجع

1. Kriz W ، Bankir L. تسمية قياسية لهياكل الكلى. لجنة الكلى التابعة للاتحاد الدولي للعلوم الفسيولوجية (IUPS). الكلى Int. يناير 1988 33 (1): 1-7.

2. كورتس سي ، بانزر يو ، أندرس إتش جي ، ريس إيه جيه. الجهاز المناعي وأمراض الكلى: المفاهيم الأساسية والآثار السريرية. نات ريف إمونول. 2013 أكتوبر ؛ 13 (10): 738–53.

3. Luyckx VA و Al-Aly Z و Bello AK و Bellorin Font E و Carlini RG و Fabian J وآخرون. أهداف التنمية المستدامة ذات صلة بصحة الكلى: تحديث للتقدم. نات ريف نفرول. 2021 يناير ؛ 17 (1): 15–32.

4. كلارك إيه آر ، جريكا أ. قوة واحد: تطورات في جينوم الخلية الواحدة في الكلى. نات ريف نفرول. 2020 فبراير ؛ 16 (2): 73-4.

5. Han X ، Wang R ، Zhou Y ، Fei L ، Sun H ، Lai S ، et al. رسم خرائط أطلس خلية الفأر بواسطة microwell-seq. خلية. 2018 فبراير ؛ 172 (5): 1091-107.e17.

6. Park J ، Shrestha R ، Qiu C ، Kondo A ، Huang S ، Werth M ، et al. تكشف النسخ أحادية الخلية لكلية الفأر عن الأهداف الخلوية المحتملة لأمراض الكلى. علوم. 2018 مايو ؛ 360 (6390): 758-63.

7. Hochane M، van den Berg PR، Fan X، Bérenger-Currias N، Adegeest E، Bialecka M، et al. تكشف النسخ أحادية الخلية عن ديناميكيات التعبير الجيني لتطور الكلى الجنينية البشرية. بلوس بيول. 2019 فبراير ؛ 17 (2): e3000152.

8. Han X و Zhou Z و Fei L و Sun H و Wang R و Chen Y وآخرون. بناء منظر طبيعي للخلية البشرية على مستوى الخلية الواحدة. طبيعة. 2020 مايو ؛ 581 (7808): 303-9.

9. Liao J و Yu Z و Chen Y و Bao M و Zou C و Zhang H وآخرون. تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية للكلية البشرية. بيانات العلوم. 2020 يناير ؛ 7 (1): 4.

10. الطب الدقيق في أمراض الكلى. نات ريف نفرول. 2020 نوفمبر ؛ 16 (11): 615.

11. Chen QL، Li JQ، Xiang ZD، Lang Y، Guo GJ، Liu ZH. توطين الجينات المرتبطة بمستقبلات الخلايا لـ SARS-CoV -2 في الكلى من خلال تحليل الترنسكربيتوم أحادي الخلية. ديس الكلى. 2020 يوليو ؛ 6 (4): 258–70.

12. Tietjen I ، Rihel JM ، Cao Y ، Koentges G ، Zakhary L ، Dulac C. تحليل نسخ الخلية المفردة للأسلاف العصبية. عصبون. 2003 أبريل ؛ 38 (2): 161-75.

13. Chiang MK ، Melton DA. تحليل نسخة الخلية الواحدة لتنمية البنكرياس. خلية التطوير. 2003 مارس ؛ 4 (3): 383-93.

14. Guo G و Huss M و Tong GQ و Wang C و Li Sun L و Clarke ND وآخرون. كشف قرارات مصير الخلية عن طريق تحليل التعبير الجيني أحادي الخلية من الزيجوت إلى الكيسة الأريمية. خلية التطوير. 2010 18 أبريل (4): 675-85.

15. Guo G و Luc S و Marco E و Lin TW و Peng C و Kerenyi MA وآخرون. رسم خرائط التسلسل الهرمي الخلوي عن طريق تحليل الخلية الواحدة لذخيرة سطح الخلية. الخلية الجذعية للخلايا. 2013 أكتوبر ؛ 13 (4): 492-505.

16. Wang Z ، Gerstein M ، Snyder M. RNA-Seq: أداة ثورية للنسخ. نات ريف جينيت. 2009 يناير ؛ 10 (1): 57-63.

17. Tang F ، Barbacioru C ، Wang Y ، Nordman E ، Lee C ، Xu N ، et al. mRNA-Seq تحليل كامل النسخ لخلية واحدة. طرق نات. مايو 2009 ؛ 6 (5): 377-82.

18. Ramsköld D ، Luo S ، Wang YC ، Li R ، Deng Q ، Faridani OR ، et al. كامل طول mRNA-seq من مستويات خلية واحدة من الحمض النووي الريبي وخلايا الورم المنتشرة الفردية. Nat Biotechnol. 2012 أغسطس ؛ 30 (8): 777-82.

19. Picelli S ، Björklund ÅK ، Faridani OR ، Sagasser S ، Winberg G ، Sandberg R. Smart-seq2 للتنميط الحساس للنسخة كاملة الطول في الخلايا المفردة. طرق نات. 2013 نوفمبر ؛ 10 (11): 1096–8.

20. هاجمان جنسن إم ، زيجنهاين سي ، تشين بي ، رامسكولد دي ، هندريكس جي جي ، لارسون إيه جي إم ، وآخرون. عد الحمض النووي الريبي أحادي الخلية عند دقة الأليل والشكل الإسوي باستخدام Smart-seq3. Nat Biotechnol. 2020 يونيو ؛ 38 (6): 708-14.

21. Hashimshony T، Wagner F، Sher N، Yanai I. CEL-seq: أحادي الخلية RNA-seq بواسطة تضخيم خطي متعدد الإرسال. مندوب الخلية .2012 سبتمبر؛ 2 (3): 666-73.

22. Yanai I، Hashimshony T. CEL-seq 2- تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية عن طريق التضخيم الخطي متعدد الإرسال. طرق Mol Biol. 2019 ؛ 1979: 45-56.

23. Streets AM ، Zhang X ، Cao C ، Pang Y ، Wu X ، Xiong L ، et al. تسلسل كامل للنسخة أحادية الخلية ميكروفلويديك. Proc Natl Acad Sci US A. مايو ؛ 111 (19): 7048–53.

24. كلاين إيه إم ، مازوتيس إل ، أكارتونا الأول ، تالابراجادا إن ، فيريز إيه ، لي في ، وآخرون. يتم تطبيق الترميز الشريطي للقطرات لنسخ النسخ أحادية الخلية على الخلايا الجذعية الجنينية. خلية. مايو 2015 ؛ 161 (5): 1187 - 201.

25. Macosko EZ و Basu A و Satija R و Nemesh J و Shekhar K و Goldman M et al. تنميط تعبير الجينوم المتوازي للغاية للخلايا الفردية باستخدام قطرات نانولتر. خلية. 2015 مايو ؛ 161 (5): 1202-14.

26. Fan HC، Fu GK، Fodor SP. التنميط التعبير. وضع العلامات التوافقية للخلايا المفردة للقياس الخلوي للتعبير الجيني. علوم. 2015 فبراير ؛ 347 (6222): 1258367.

27. Gierahn TM و Wadsworth MH و Hughes TK و Bryson BD و Butler A و Satija R وآخرون. Seq-well: تسلسل RNA محمول ومنخفض التكلفة لخلايا مفردة بسرعة إنتاجية عالية. طرق نات. 2017 أبريل ؛ 14 (4): 395–8.

28. Cao J، Packer JS، Ramani V، Cusanovich DA، Huynh C، Daza R، et al. التنميط النسخي أحادي الخلية الشامل للكائن متعدد الخلايا. علوم. 2017 أغسطس ؛ 357 (6352): 661-7.

29. Rosenberg AB ، Roco CM ، Muscat RA ، Kuchina A ، Sample P ، Yao Z ، et al. التنميط أحادي الخلية لدماغ الفأر النامي والحبل الشوكي مع تشفير البركة المنقسمة. علوم. 2018 أبريل ؛ 360 (6385): 176-82.

30. Cao J، Spielmann M، Qiu X، Huang X، Ibrahim DM، Hill AJ، et al. المشهد النسخي أحادي الخلية لتكوين الأعضاء في الثدييات. طبيعة. 2019 فبراير ؛ 566 (7745): 496-502.

31. Cao J ، O'Day DR ، Pliner HA ، Kingsley PD ، Deng M ، Daza RM ، et al. أطلس الخلية البشرية للتعبير الجيني للجنين. علوم. 2020 ؛ 370 (6518): 370.

32. Chen L، Lee JW، Chou CL، Nair AV، Battistone MA، Păunescu TG، et al. نسخ أنواع خلايا مجاري الهواء الكلوية الرئيسية في الفئران التي تم تحديدها بواسطة تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية. Proc Natl Acad Sci US A. 2017 نوفمبر ؛ 114 (46): E9989–98.

33. Ransick A و Lindström NO و Liu J و Zhu Q و Guo JJ و Alvarado GF وآخرون. يكشف التنميط أحادي الخلية عن الجنس والنسب والتنوع الإقليمي في كلية الفأر. خلية التطوير. 2019 نوفمبر ؛ 51 (3): 399 - 413.e7.

34. Barry DM ، McMillan EA ، Kunar B ، Lis R ، Zhang T ، Lu T ، et al. المحددات الجزيئية لتخصص الأوعية الدموية في الكلية. نات كومون. 2019 ديسمبر ؛ 10 (1): 5705.

35. Chung JJ ، Goldstein L ، Chen YJ ، Lee J ، Webster JD ، Roose-Girma M ، et al. يحدد التنميط النسبي أحادي الخلية للكبيبات الكلوية أنواع الخلايا الرئيسية وردود الفعل على الإصابة. J آم سوك نيفرول. 2020 أكتوبر ؛ 31 (10): 2341–54.

36. Kramann R و Machado F و Wu H و Kusaba T و Hoeft K و Schneider RK وآخرون. يكشف Parabiosis وتسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية عن مساهمة محدودة للخلايا الوحيدة في الخلايا الليفية العضلية في تليف الكلى. انسايت JCI. 2018 مايو ؛ 3 (9): e99561.

37. Kuppe C ، Ibrahim MM ، Kranz J ، Zhang X ، Ziegler S ، Perales-Patón J ، et al. أصول فك ترميز الأرومة الليفية العضلية في تليف الكلى البشري. طبيعة. 2021 يناير ؛ 589 (7841): 281-6.

38. Wang H ، Zheng C ، Lu Y ، Jiang Q ، Yin R ، Zhu P ، et al. الفيبرينوجين البولي كمؤشر لتطور CKD. كلين J آم سوك نيفرول. 2017 ديسمبر ؛ 12 (12): 1922-9.

39. Fu J ، Akat KM ، Sun Z ، Zhang W ، Schlondorff D ، Liu Z ، et al. يُظهر تحديد سمات الحمض النووي الريبي أحادي الخلية للخلايا الكبيبية تغيرات ديناميكية في مرض الكلى السكري التجريبي. J آم سوك نيفرول. 2019 أبريل ؛ 30 (4): 533-45.

40. Zhang Y ، Li W ، Zhou Y. تحديد الجينات المحورية في مرض الكلى السكري عن طريق تحليل ميكروأري متعدد. آن ترجمة ميد. 2020 أغسطس ؛ 8 (16): 997.

41. Wilson PC و Wu H و Kirita Y و Uchimura K و Ledru N و Rennke HG وآخرون. المشهد النسبي أحادي الخلية لاعتلال الكلية السكري البشري المبكر. Proc Natl Acad Sci US A. 2019 سبتمبر ؛ 116 (39): 19619-25.

42. Wu H، Kirita Y، Donnelly EL، Humphreys BD. مزايا النواة المفردة على تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية للكلية البالغة: أنواع الخلايا النادرة وحالات الخلايا الجديدة التي تم الكشف عنها في التليف. J آم سوك نيفرول. 2019 يناير ؛ 30 (1): 23–32.

43. Young MD ، Mitchell TJ ، Vieira Braga FA ، Tran MGB ، Stewart BJ ، Ferdinand JR ، et al. تكشف النسخ أحادية الخلية من الكلى البشرية عن الهوية الخلوية لأورام الكلى. علوم. 2018 أغسطس ؛ 361 (6402): 594-9.

44. ستيوارت بي جيه ، فرديناند جونيور ، يونج إم دي ، ميتشل تي جيه ، لودون كو ، رايدنج آم ، وآخرون. التقسيم المناعي الزماني المكاني للكلى البشرية. علوم. 2019 سبتمبر ؛ 365 (6460): 1461-6.

45. Arazi A و Rao DA و Berthier CC و Davidson A و Liu Y و Hoover PJ وآخرون. منظر الخلايا المناعية في الكلى لمرضى التهاب الكلية الذئبي. نات إمونول. 2019 يوليو ؛ 20 (7): 902-14.

46. ​​Der E، Ranabothu S، Suryawanshi H، Akat KM، Clancy R، Morozov P، et al. تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية لتشريح عدم التجانس الجزيئي في التهاب الكلية الذئبي. انسايت JCI. 2017 مايو ؛ 2 (9): e93009.

47. Der E، Suryawanshi H، Morozov P، Kustagi M، Goilav B، Ranabothu S، et al. تكشف الخلايا الأنبوبية ونسخة الخلية الكيراتينية أحادية الخلية المطبقة على التهاب الكلية الذئبي عن النوع الأول IFN والمسارات ذات الصلة بالتليف. نات إمونول. 2019 يوليو ؛ 20 (7): 915–27.

48. Conway BR، O'Sullivan ED، Cairns C، O'Sullivan J، Simpson DJ، Salzano A، et al. يكشف الأطلس أحادي الخلية للكلى عدم التجانس النخاعي في تطور وانحدار مرض الكلى. J آم سوك نيفرول. 2020 ديسمبر ؛ 31 (12): 2833–54.

49. Cameron GJM ، Cautivo KM ، Loering S ، Jiang SH ، Deshpande AV ، Foster PS ، et al. الخلايا اللمفاوية الفطرية من المجموعة 2 زائدة عن الحاجة في إصابة نقص التروية الكلوية التجريبية. الجبهة المناعية. 2019 ؛ 10: 826.

50. Kreimann K، Jang MS، Rong S، Greite R، von Vietinghoff S، Schmitt R، et al. تؤدي إصابة نقص التروية وضخه إلى إطلاق CXCL13 وتجنيد الخلايا البائية بعد زرع الكلى الخيفي. الجبهة المناعية. 2020 ؛ 11: 1204.

51. Kirita Y، Wu H، Uchimura K، Wilson PC، Humphreys BD. يكشف التنميط الخلوي لإصابة الكلى الحادة في الماوس عن استجابات خلوية محفوظة للإصابة. Proc Natl Acad Sci US A. 2020 يوليو ؛ 117 (27): 15874–83.

52. Wen L، Yang H، Ma L، Fu P. مول الخلية الحيوية. 2021 مارس ؛ 476 (3): 1377 - 86.

53. Nishinakamura R. عضيات الكلى البشرية: التقدم والتحديات المتبقية. نات ريف نفرول. 2019 أكتوبر ؛ 15 (10): 613-24.

54. Tran T ، Lindström NO ، Ransick A ، De Sena Brandine G ، Guo Q ، Kim AD ، وآخرون. تُعلم المسارات التنموية في الجسم الحي للخلايا البشرية البشرية التمايز في المختبر للخلايا الجذعية المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات. خلية التطوير. 2019 يوليو ؛ 50 (1): 102 –6.

55. Uchimura K، Wu H، Yoshimura Y، Humphreys BD. عضيات الكلى المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات مع تحسين نضج مجاري التجميع ونمذجة الإصابة. مندوب الخلية .2020 Dec؛ 33 (11): 108514.

56. سوبرامانيان A ، Sidhom EH ، Emani M ، Vernon K ، Sahakian N ، Zhou Y ، وآخرون. يُظهر التعداد أحادي الخلية لعضويات الكلى البشرية إمكانية التكاثر وتقلص الخلايا غير المستهدفة بعد الزرع. نات كومون. 2019 نوفمبر ؛ 10 (1): 5462.

57. Wu H، Uchimura K، Donnelly EL، Kirita Y، Morris SA، Humphreys BD. التحليل المقارن وصقل التمايز العضوي الكلوي البشري منزوع النواة من PSC مع النسخ أحادية الخلية. الخلية الجذعية للخلايا. 2018 كانون الأول (ديسمبر) ؛ 23 (6): 869 - e8.

58. تشيرنيكي إس إم ، كروز إن إم ، هاردر جي إل ، مينون آر ، أنيس جي ، أوتو إي إيه ، وآخرون. يعزز الفحص عالي الإنتاجية التمايز العضوي للكلى عن الخلايا الجذعية متعددة القدرات البشرية ويتيح التنميط الظاهري متعدد الأبعاد آليًا. الخلية الجذعية للخلايا. 2018 يونيو ؛ 22 (6): 929 –4.

59. Dvela-Levitt M و Kost-Alimova M و Emani M و Kohnert E و Thompson R و Sidhom EH وآخرون. يستهدف الجزيء الصغير TMED9 ويعزز التحلل الليزوزومي لعكس اعتلال البروتين. خلية. 2019 يوليو ؛ 178 (3): 521 –23.

60. Wu H ، Malone AF ، Donnelly EL ، Kirita Y ، Uchimura K ، Ramakrishnan SM ، et al. تحدد النسخ أحادية الخلية لعينة خزعة الطعم الخيفي للكلى البشرية الاستجابة الالتهابية المتنوعة. J آم سوك نيفرول. 2018 أغسطس ؛ 29 (8): 2069–80.

61. مالون إيه إف ، وو إتش ، فرونيك سي ، فولتون آر ، جاوت جي بي ، همفريز بي دي. يتم التعبير عن تباين النوكليوتيدات المفردة وتسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية لتحديد خيمر الخلية المناعية في عملية زرع الكلى الرافضة. J آم سوك نيفرول. 2020 سبتمبر ؛ 31 (9): 1977 - 86.

62. Liu Y و Hu J و Liu D و Zhou S و Liao J و Liao G وآخرون. يكشف التحليل أحادي الخلية عن المشهد المناعي في الكلى للمرضى الذين يعانون من رفض الزرع المزمن. ثيرانوستيكس. 2020 ؛ 10 (19): 8851-62.

63. Wang Y و Zhao Y و Zhao Z و Li D و Nie H و Sun Y وآخرون. حدد تحليل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية الخلايا السلفية الكلوية من البول البشري. خلية بروتينية. 2021 أبريل ؛ 12 (4): 305-12.

64. Stark R ، Grzelak M ، Hadfield J. RNA التسلسل: سنوات المراهقة. نات ريف جينيت. 2019 نوفمبر ؛ 20 (11): 631-56. 65 Regev A و Teichmann SA و Lander ES و Amit I و Benoist C و Birney E et al. أطلس الخلية البشرية. إليفي. 2017 ؛ 12: 6.

مينجمينج جيانغ^a,b؛ هايد تشين^{b, c}؛ Guoji Guo^{a, b, c, d, e}

أ: مختبر Liangzhu ، المركز الطبي لجامعة Zhejiang ، Hangzhou ، الصين ؛

ب: مركز الخلايا الجذعية والطب التجديدي ، كلية الطب بجامعة تشجيانغ ، هانغتشو ، الصين ؛

ج: مختبر مقاطعة تشجيانغ الرئيسي لهندسة الأنسجة والطب التجديدي ، د. لي داك سوم و يب ييو تشين ، مركز الخلايا الجذعية والطب التجديدي ، هانغتشو ، الصين ؛

د: مركز زرع نخاع العظام ، أول مستشفى تابع ، كلية الطب بجامعة تشجيانغ ، هانغتشو ، الصين ؛

هـ: معهد أمراض الدم ، جامعة تشجيانغ ، هانغتشو ، الصين