تحديد الأهداف وتحليل الآلية لتنشيط البلاعم للسكريات منخفضة الوزن الجزيئي من Cistanche Deserticola استنادًا إلى كروماتوجرافيا التقارب الجزيئي

[خلاصة]تهدف هذه الدراسة إلى التحقيق في الأهداف والآلية المستهدفة لتنشيط البلاعم للسكريات منخفضة الوزن الجزيئي من Cistanche deserticola (LMSC). النشاط البلعمي وعدم إطلاق RAW264. تم الكشف عن 7 خلايا ، وأظهرت النتائج أن LMSC يمارس تأثير تنشيط المناعة عن طريق زيادة نشاط البلعمة بشكل ملحوظ وعدم إطلاق NO. تم تحضير حبات سيفروز المنشطة بالإيبوكسي المترافق مع LMSC ككاشف تقارب لالتقاط البروتينات المستهدفة. تم تحديد أربعة وعشرين بروتينًا مثل Eef2 عن طريق تحليل LC-MS / MS. أظهر تحليل مسار تخصيب LMSC تنشيط RAW264. 7 خلايا عن طريق تنظيم البلعمة المعتمدة على مستقبلات Fcgamma ، مسار إشارات TNF-alpha NF-B ، تحلل السكر / استحداث السكر ودورة حمض الستريك ومسار نقل الإلكترون التنفسي．

[الكلمات الدالة]Cistanche الصحراء السكريات منخفضة الوزن الجزيئي. تفعيل الضامة كروماتوغرافيا التقارب الجزيئي. تحديد الهدف تحليل الآلية

الجينسنغ الصحراوي

Cistanches Herba هو دواء صيني تقليدي شهير لتقوية الكلى واليانغ ، والاستفادة من الجوهر والدم ، وتغذية الأمعاء وحركات الأمعاء. ومن المعروف باسم "الجينسنغ الصحراوي". تُظهر أبحاث الكيمياء التحليلية الحديثة أن Cistanche deserticola يحتوي على مجموعة متنوعة من مكونات الكربوهيدرات ، بما في ذلك مركبات السكريات الأحادية بشكل أساسي بما في ذلك الفركتوز ومركبات السكاريد مثل السكروز والسكريات المتعددة مثل ACDP -2 ، وهي مواد فعالة لـ Cistanche deserticola لتلعب أدوارًا في تنظيم المناعة ، والتغوط ، وما إلى ذلك [2-5]. تم الإبلاغ عن عديد السكاريد Cistanche deserticola على نطاق واسع كفئة من المكونات النشطة ذات التأثيرات المناعية ، بينما نادرًا ما تمت دراسة السكريات منخفضة الوزن الجزيئي (LMSCs) مثل السكريات قليلة السكاريد والسكريات الأحادية. وجدت دراسة أجرتها مجموعتنا البحثية حول تنشيط البلاعم للمكونات النشطة الرئيسية في Cistanche deserticola أن السكر الجزيئي المنخفض هو نوع من المكونات النشطة مع تنشيط البلاعم ، لكن هدف تنشيط المناعة وآلية عمله لا يزالان غير واضحين.

آثار cistanche- تحسين المناعة

انقر هنا لعرض منتجات Cistanche Enhance Immunity

【اطلب المزيد】 البريد الإلكتروني: cindy.xue@wecistanche.com / تطبيق Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

كروماتوغرافيا التقارب الجزيئي هي طريقة كروماتوغرافية تحقق فصل وتنقية الجزيئات المستهدفة من خلال ربطها على وجه التحديد بمرحلة ثابتة [6]. تتميز هذه الطريقة بألفة وخصوصية عالية وهي مناسبة بشكل خاص للأنظمة العضوية المعقدة ذات تركيزات المنتج المستهدفة المنخفضة للغاية [7]. في السنوات الأخيرة ، تطورت تدريجياً إلى أداة قوية لتحديد أهداف الأدوية الطبيعية. في هذه الدراسة ، تم استخدام تقنية التقاط البروتين المستهدف للجزيء الصغير بناءً على كروماتوجرافيا التقارب الجزيئي لتحديد البروتينات المستهدفة LMSC مع تنشيط البلاعم. من خلال تحليل المعلومات الحيوية ، يتم الحصول على معلومات المسار التنظيمي للإشارة للمجموعة المستهدفة لاستكشاف النشاط التنظيمي المناعي والآليات ذات الصلة لـ LMSC.

1 مادة

1.1 الخلايا

خط الضامة للفأر RAW 264 7 تم شراؤه من مركز الخلية التابع للأكاديمية الصينية للعلوم الطبية.

1.2 الأدوية والكواشف

تم شراء مصل بقري الجنين (FBS) من PAN Biotech في ألمانيا ؛ المضادات الحيوية ، وسط السكر المرتفع DMEM ، و 6 × محلول أخذ عينات البروتين تم شراؤه من Zhongke Maichen Technology Co.، Ltd. كان السكر ذو الوزن الجزيئي المنخفض من Cistanche deserticola مصنوعًا ذاتيًا بواسطة مجموعتنا البحثية وتم تحديده بواسطة HPLC لاحتواء المانيتول بشكل أساسي ( 16 53 بالمائة) ، السكروز (8 34 بالمائة) ، الفركتوز (25 38 بالمائة) ، الجلوكوز (7 75 بالمائة) ومكونات أحادية أخرى. عديد السكاريد الدهني من Escherichia coli O55: B5 ، LPS ، 3 - (4 ، 5- ثنائي ميثيل ثيازول -2) - 2 ، 5- بروميد ثنائي فينيل تيترازوليوم (MTT) و {{ تم شراء محلول أحمر بنسبة 14}} بالمائة من شركة Sigma Aldrich في الولايات المتحدة. تم شراء مجموعة كاشف أكسيد النيتريك (NO) من معهد أبحاث التكنولوجيا الحيوية Nanjing Jiancheng. تم شراء هلام Sepharose المنشط بالإيبوكسي (6B) من GE health care في السويد. تم شراء مجموعة تلطيخ الفضة السريع من معهد Biyuntian Biotechnology Research Institute. تم شراء كل من حمض الفورميك والأسيتونتريل لقياس الطيف الكتلي من Thermo Fisher Scientific في الولايات المتحدة. جميع الكواشف الأخرى نقية تحليلية محلية.

مسحوق Cistanche

1.3 الأدوات

حاضنة خلايا ثاني أكسيد الكربون (سانيو ، اليابان) ؛ مجهر CIX100 (شركة أوليمبوس ، اليابان) ؛ جهاز طرد مركزي 5424R (إيبندورف ، ألمانيا) ؛ جهاز تنقية المياه الأوتوماتيكي (ميليبور ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ Sunrise Basic ELISA (TECAN ، سويسرا) ؛ مذبذب درجة الحرارة الثابتة لسطح المكتب THZ-C (Suzhou Peiying Experimental Equipment Co.، Ltd.) ؛ أجهزة الكروماتوغرافيا السائلة EAS Y-nLC - II (Thermo Fisher Scientific ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ مقياس الطيف الكتلي الترادفي LTQ-Orbitrap المصيدة الأيونية (Thermo Fisher Scientific ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ عمود كروماتوغرافيا سائل شعري (ميكروم بيوريسورس ، الولايات المتحدة الأمريكية).

2 طرق

2.1 ثقافة الخلية وإدارتها

RAW264. تمت زراعة 7 خلايا في وسط DMEM عالي الجلوكوز يحتوي على 1 0 بالمائة من مصل بقري جنيني و 1 بالمائة جسم مضاد مزدوج ، وتم وضعها في حاضنة بدرجة حرارة ثابتة تبلغ 37 درجة رطوبة مشبعة تحتوي على 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون. قم بالتمرير مرة واحدة كل 2-3 أيام وقم بإجراء التجارب عندما تدخل الخلايا مرحلة النمو اللوغاريتمي. قسّم الخلايا إلى مجموعة فارغة ، أو مجموعة عديدات السكاريد الدهنية ، أو مجموعة سكر ذات وزن جزيئي منخفض من Cistanche deserticola. عولجت خلايا مجموعة LPS بمحلول LPS 1 ملجم · لتر -1 كعنصر تحكم إيجابي. تمت إضافة خلايا مجموعة LMSC مع محاليل LMSC بتركيزات كتلة مختلفة (0 25 ، 0. 5،1،2 جم · لتر - 1 ؛ تصفية بغشاء مرشح قبل الإعطاء) ؛ أضف حجمًا متساويًا من وسط الثقافة الخالية من المصل إلى خلايا المجموعة الفارغة.

2.2 تحديد نشاط البلاعم باستخدام الطريقة الحمراء المحايدة

RAW264. تم بذر 7 خلايا على 96- صفيحة جيدة وزرعها طوال الليل قبل استبدالها بوسط خالٍ من المصل أو وسط خالٍ من المصل يحتوي على LPS أو تركيزات مختلفة من LMSC. بعد 48 ساعة من الزراعة ، تم استبدال الخلايا بمحلول أحمر محايد بنسبة 0 075 بالمائة واستمر تحضينها عند 37 درجة لمدة 4 ساعات. قم بامتصاص وتجاهل المادة الطافية ، واغسل مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني ، واستخدم محلول تحلل الخلية (حمض الخليك الجليدي إيثانول 1: 1) لخلايا ليز عند 4 درجات. بعد التحلل الكامل ، قم بقياس امتصاص كل بئر (A540 نانومتر).

2.3 الكشف عن أي تحرير في طاف الخلية

RAW264. تم بذر 7 خلايا على 48- صفيحة جيدة وزرعها طوال الليل قبل استبدالها بوسط خالٍ من المصل أو وسط خالٍ من المصل يحتوي على LPS أو تركيزات مختلفة من LMSC. بعد 24 ساعة من الثقافة التحريضية ، اجمع المادة الطافية وقياس محتوى NO في المادة الطافية لكل خلية جيدة وفقًا لتعليمات مجموعة الكاشف.

2.4 مقايسة MTT لاستمرار البلاعم

RAW264. تم تلقيح 7 خلايا على 96- لوحة بئر ، وبعد الزراعة بين عشية وضحاها ، تم استبدالها بوسط خالٍ من المصل أو وسط خالٍ من المصل يحتوي على LPS أو تركيزات مختلفة من LMSC واستمر زرعها لمدة 24 ساعة. استبدل كل خلية جيدة بـ 0 احتضان 5 جم · لتر -1 محلول MTT عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات ، ثم قم بإذابة منتج تفاعل MTT مع ثنائي ميثيل سلفوكسيد ، وقياس امتصاص كل بئر بطول موجي من 570 نانومتر باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم.

تحضير 2.5 Cistanche deserticola منخفض تقارب السكر الجزيئي المتوسط

الطريقة المرجعية [8] ، وزن راتنجات الاغاروز المنشط بالإيبوكسي 0 5 جم ، قم بإذابه في الماء منزوع الأيونات لمدة 4 0 دقائق ، بالطرد المركزي وتجاهل المادة الطافية ، وكرر العملية ثلاث مرات لعمل الجل بالكامل منتفخ (حجمه حوالي 1 مل) ، في وضع الاستعداد. خذ 0 امزج 5 مل من هلام الاغاروز المتضخم المنشط بالإيبوكسي مع 1 مل من محلول LMSC (1 جم · مل - 1) أو حجم مكافئ من المذيب ، واحتضنه في هزاز بدرجة حرارة ثابتة عند 37 درجة بين عشية وضحاها. اغسل وسط agarose الفارغ أو LMSC المقترن عدة مرات بالماء منزوع الأيونات حتى يصبح الطاف عديم اللون ، ثم أضف 1 مل من محلول الإيثانولامين (1 مول · لتر -1) وأغلقه على طاولة اهتزاز بدرجة حرارة ثابتة عند 37 درجة من أجل 2 أيام. بعد اكتمال التفاعل ، نظف كل مرة 5 مرات بالماء المقطر المزدوج ، ومخزن NaCl Hac ، ومخزن NaCl Tris HCl ، وأخيراً استخدم 0 Wash مرتين مع 01 بالمائة NP40 شطف للنسخ الاحتياطي.

2.6 إثراء وتحديد الفئات المستهدفة

إلى RAW264 مستخلص البروتين الكلي من 7 خلايا (0 أضف 5 0 إلى 5 جم · لتر -1 على التوالي ميكرولتر وسط فارغ أو وسط تقارب LMSC ، كمجموعة تحكم فارغة ومجموعة ربط LMSC ؛ قم بإعداد مجموعة تنافسية تضيف في وقت واحد محلول LMSC ووسط تقارب LMSC. بعد خلط كل مجموعة ، احتضن في 4 درجات طوال الليل لربط LMSC بالبروتين المستهدف تمامًا. بعد التفاعل ، استخدم 0 اغسل وسط التقارب 6 مرات باستخدام 01 النسبة المئوية NP40 شطف لإزالة البروتينات الحرة المتبقية من وسط التقارب. أضف وسط تقارب مغسول إلى حجم متساوٍ من 2 × محلول تحميل عينة ، تم تغيير طبيعته عند 98 درجة لمدة 8 دقائق لفصل البروتين الرابط.امتص المادة الطافية ، وقم بإجراء هلام SDS-PAGE الرحلان الكهربي ، ثم إجراء تحليل تلطيخ الفضة وفقًا لتعليمات المجموعة.

2.7 طريقة LC-MS / MS لتحديد مجموعات البروتين المستهدفة

تم استخدام الطريقة المرجعية [8] لتحديد بروتينات ربط محددة باستخدام نانو ثنائي الأبعاد HPLC-LTQ-Orbitrap / MS مطياف كتلة أيون خطي ترادفي (nano HPLC-LTQ-Orbitrap / MS). الطريقة المحددة هي كما يلي: أولاً ، يتم استخدام التربسين لتحليل نطاقات البروتين المعبر عنها تفاضليًا داخل الهلام للحصول على خليط من شرائح الببتيد المستهدفة. تعرض خليط الببتيد لـ 0 اثنين وعشرين ميكرومتر بعد الترشيح بغشاء دقيق المسام ، استخلص 10 بالمائة من محلول عينة L أضف إلى عمود كروماتوجرافيا السائل الشعري. الظروف الكروماتوغرافية: الطور المتحرك 0 1 بالمائة من محلول حمض الفورميك المائي (أ) - أسيتونيتريل (ب) ، شروط شطف التدرج موضحة في الجدول 1. حالة الطيف الكتلي: جهد الرش الكهربائي 1 8 كيلو فولت ، أيون موجب وضع جمع البيانات ، مجموعة المسح الكامل إلى m / z 350-2 000 ؛ قم بإجراء مسح MS / MS على أقوى 15 قمة ، مع تعيين طاقة تصادم ثانوية عند 35 فولت. أخيرًا ، استخدم برنامج البحث SEQUEST للبحث عن بيانات مقطع الببتيد التي تم الحصول عليها ومطابقتها.

الجدول 1 ملف تعريف التدرج لتحليل nano-HPLC

ملاحظة: معدلات التدفق كلها 300 nL · min -1.

2.8 مسار المجموعة المستهدفة والتحليل الوظيفي

استيراد البروتين المستهدف المحدد إلى Cytoscape 3 في برنامج 5.1 ، تم استخدام المكون الإضافي ClueGO لتحليل KEGG و REACTOME Pathways و Wiki Pathways ، وتم تعيين الأنواع على أنها فئران مع P<0 05 as the significance threshold, and the rest use default parameters.

2.9 التحليل الإحصائي

يتم التعبير عن جميع البيانات التجريبية في مجال x ± s. باستخدام GraphPad Prism -6 02 تم استخدام البرنامج الإحصائي لتحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) ، مع P<0 01 having a very significant difference.

3. النتائج والمناقشة

3.1 يؤثر انخفاض السكر الجزيئي من Cistanche deserticola على RAW264 تأثير 7- نشاط الخلايا البلعمية

في دراسة أخرى أجرتها مجموعتنا البحثية حول المكونات النشطة لتنشيط البلاعم في Cistanche deserticola ، قد يكون LMSC نوعًا من المكونات مع تنشيط البلاعم.

دراسة تجريبية على Cistanche deserticola

استخدمت هذه التجربة لأول مرة طريقة الأحمر المحايد لتحديد RAW264. تم تحفيز نظام الاستزراع في المختبر لسبع خلايا من الضامة البريتونية بتركيزات مختلفة من LMSC للتحقيق في تأثير LMSC على RAW264 تأثير النشاط البلعمي المكون من 7 خلايا. بالمقارنة مع مجموعة التحكم الفارغة ، قام عقار التحكم الإيجابي LPS بتحفيز الخلايا لمدة 48 ساعة بشكل كبير من نشاط البلعمة الخلوي (P<0 01); LMSC at 0 Each administration group of 25-2 g · L-1 significantly increased RAW264 The phagocytic activity of 7 cells (P<0 01), and exhibit dose-dependent characteristics. The above results suggest that LMSC may have activated RAW264 The role of 7 cells is shown in Figure 1.

مقارنة بمجموعة التحكم الفارغة ، 1) ص<0 01 (same as Figure 2).

الشكل 1 آثار السكريات منخفضة الوزن الجزيئي من Cistanche deserticola على نشاط البلعمة لـ RAW264. 7 خلايا

3.2 يؤثر انخفاض السكر الجزيئي من Cistanche deserticola على RAW264 تأثير إطلاق NO في 7 خلايا

NO هو سيتوكين مهم له تأثيرات تنظيمية مناعية في الجسم [9] ، يُقال على نطاق واسع أنه يشارك في تنظيم استجابة تنشيط الخلايا 264 7- RAW. لمزيد من التحقيق في تأثير LMSC على RAW264 ، تم تحديد تأثير التنشيط لـ 7 خلايا ، وتم قياس محتوى NO في طاف الخلية بعد تحفيز LMSC. كان إطلاق NO في مجموعة LPS مع العقار الإيجابي لتنشيط البلاعم أعلى بكثير من تلك الموجودة في مجموعة التحكم الفارغة (P<0. 05) 01), similar to it, 0 RAW264 in the LMSC administration group with 3 doses of 5, 1, 2 g · L-1 The NO release of 7 cells was significantly higher than that of the blank control group (P<0. 05) 01), and it is dose-dependent, as shown in Figure 2. The above results indicate that LMSC can promote RAW264 The effect of 7 cells releasing NO confirms its macrophage activation effect.

التين. 2 آثار السكريات منخفضة الوزن الجزيئي من Cistanche deserticola على NO إطلاق من RAW264. 7 خلايا

3.3 يؤثر انخفاض السكر الجزيئي من Cistanche deserticola في RAW264 تأثير 7- بقاء الخلية

تعتبر السمية الخلوية عاملاً مهمًا يحد من تطوير أدوية جديدة ويؤثر على فعاليتها. لاستكشاف ما إذا كانت جرعة LMSC المستخدمة في هذه التجربة لها سمية خلوية محتملة ، تم استخدام طريقة MTT للكشف عن RAW264 بعد إدارة LMSC 7 خلية حيوية. LMSC في 0 25-2 g · L -1 تدخل RAW264 بعد 24 ساعة من 7 خلايا ، لم يكن هناك تأثير كبير على صلاحية الخلية ، وتشير النتائج أعلاه إلى أن 0 25-2 g · L {{8 }} LMSC مقابل RAW 264 7 ليس له سمية خلوية ، كما هو موضح في الشكل 3.

الشكل 3 آثار السكريات منخفضة الوزن الجزيئي من Cistanche deserticola على RAW264. 7 خلية حيوية

3. 4 إثراء وتحديد المجموعات المستهدفة لتنشيط البلاعم للسكر منخفض الوزن الجزيئي في Cistanche deserticola

هلام الاغاروز المنشط بالإيبوكسيد هو حامل طور صلب يستخدم على نطاق واسع لربط السكريات والبروتينات والجزيئات الأخرى التي تحتوي على مجموعات هيدروكسيل أو أمينية. يتكون LMSC بشكل أساسي من الفركتوز الغني بالهيدروكسيل والمانيتول ومكونات أخرى. في هذه الدراسة ، يمكن أن يتفاعل الهيدروكسيل الموجود مع المجموعات النشطة من الإيبوكسي لربط السكر الجزيئي المنخفض من Cistanche deserticola بسطح الكرات المجهرية لهلام agarose المنشط بالإيبوكسي لبناء وسط تقارب LMSC ، كما هو موضح في الشكل 4 أ. باستخدام تقنية كروماتوغرافيا التقارب الجزيئي ، تم خلط وسيط تقارب LMSC مع RAW264 احتضان مستخلص البروتين الكلي المكون من 7 خلايا لالتقاط مجموعة البروتين المستهدفة مباشرة. تم إجراء تلطيخ الفضة على المجموعة المستهدفة ، كما هو موضح في الشكل 4 ب. كانت نطاقات البروتين الخاصة بمجموعة الارتباط المتوسطة ذات التقارب LMSC أعلى بكثير من تلك الخاصة بالمجموعة المتوسطة الفارغة LMSC غير المنفصلة ، في حين أن المجموعة التنافسية LMSC قللت بشكل كبير من عدد الأهداف الملتقطة وسط التقارب بسبب الارتباط التنافسي LMSC المجاني المفرط مع البروتين المستهدف. بعد ذلك ، تم استخدام طريقة HPLC MS / MS لتحديد كل نطاق بروتين ، وتم الحصول على ما مجموعه 24 بروتينًا مستهدفًا مثل Eef2 ، مما يشير إلى أن انخفاض السكر الجزيئي من Cistanche deserticola قد يتسبب في تنشيط البلاعم من خلال العمل المشترك لهذه البروتينات المستهدفة.

3. 5 تحليل آلية العمل المتعلقة بتنشيط المجموعة المستهدفة من الضامة الجزيئية منخفضة السكر في Cistanche deserticola

للتحقيق في البروتين المستهدف منخفض السكر الجزيئي لـ Cistanche deserticola الذي يسبب RAW264 ، تم تحليل آلية تنشيط البلاعم في هذه الدراسة باستخدام قواعد بيانات مسار إشارات KEGG و REACTOME و Wiki للتحقيق في المسارات البيولوجية المشاركة في مجموعة البروتين المستهدفة LMSC. تظهر نتائج تحليل إثراء مسار الإشارة في الشكل 5 والجدول 2. تشارك البروتينات المستهدفة لتنشيط البلاعم LMSC بشكل أساسي في 10 مسارات إشارة مرتبطة بتنشيط البلاعم ، والتي يمكن تلخيصها في الفئات الأربع التالية: البلعمة المعتمدة على مستقبلات Fc ، TNF- NF - مسار تأشير κ B ، تحلل السكر / استحداث السكر ، دورة حمض الستريك (TCA) ، ونقل الإلكترون التنفسي.

4. مناقشة

تشير الأبحاث الحديثة إلى أن الطب الصيني التقليدي والأدوية الطبيعية لهما مجموعة واسعة من الأنشطة البيولوجية ، ولكن نظرًا لتركيبها الكيميائي المعقد ، لا تزال هناك تحديات في توضيح آلية عمل أنظمة المكونات المعقدة للطب الصيني التقليدي والأدوية الطبيعية. استنادًا إلى تقنية التقاط البروتين المستهدف للجزيء الصغير من كروماتوغرافيا التقارب الجزيئي ، تم دمج هذه الدراسة مع شيوع التركيب الكيميائي بأن المكونات الرئيسية للسكر الجزيئي لـ Cistanche deserticola (LMSC) تحتوي جميعها على مجموعات هيدروكسيل ، وشُيدت LMSC مرتبطًا بالإيبوكسي المنشط بالكريات الهلامية المجهرية. كوسيط تقارب ، لتحديد مجموعات البروتين المستهدفة LMSC مع تنشيط البلاعم وتحليل مسارات نقل الإشارة المتعلقة بالمجموعة المستهدفة ، علاوة على ذلك ، تم الكشف عن آلية تنشيط البلاعم LMSC.

آثار cistanche- تحسين المناعة

البلاعم هي نوع من خلايا الاستجابة المناعية الهامة في الجسم التي يمكن أن تبلعم مستضدات حبيبية. يتجلى تنشيط الضامة الناتجة عن المحفزات الخارجية بشكل أساسي من خلال تعزيز وظيفة البلعمة وإطلاق NO وعوامل أخرى ناجمة عن سلسلة من مسارات الإشارات. التحسين المعتمد على الجرعة LMSC RAW264 يشير النشاط البلعمي لـ 7 خلايا والزيادة الكبيرة في إطلاق NO إلى أن LMSC له تأثير تنشيط البلاعم. تحليل الإثراء لمسارات الإشارة لأهداف تنشيط البلاعم LMSC التي تم التقاطها بواسطة كروماتوجرافيا التقارب الجزيئي باستخدام المعلومات الحيوية يعني أن LMSC ينظم Fc عن طريق البلعمة المعتمدة على المستقبلات ، TNF- NF- مسار الإشارات B ، تحلل السكر / تكوين الجلوكوز ، دورة حمض الستريك (TCA) ، و يلعب نقل الإلكترون التنفسي أدوار تنشيط البلاعم.

أ. التوصيف المجهري لوسط التقارب (شريط =25 ميكرومتر) ؛ ب. الرحلان الكهربائي للهلام المصبوغ بالفضة للأهداف المخصبة.

الشكل 4 تحديد الأهداف للسكريات منخفضة الوزن الجزيئي من Cistanche deserticola

الشكل 5 تحليل مسار التخصيب لأهداف السكريات منخفضة الوزن الجزيئي من Cistanche deserticola

مستقبلات Fc هي مستقبلات سطح الخلية وأحد مستقبلات التعرف على نمط البلاعم [11]. توجد على سطح الخلية ويمكنها التعرف على الجسيمات الخارجية على وجه التحديد ، مما يجعلها مرتبطة بسطح الخلية. يمكن أن يؤدي نقل إشارة البلعمة بوساطة مستقبلات Fc إلى بلمرة الأكتين في اتجاه مجرى النهر وتشكيل البلعمة [11]. يُحسِّن LMSC نشاط البلعمة للخلايا 264 7 بشكل ملحوظ ، والذي قد يكون مرتبطًا بربط العديد من Fcs مثل البروتينات المرتبطة بإشارات مستقبلات Hsp90 التي تنظم عملية البلعمة المعتمدة على مستقبلات Fc. NF- يعتبر مسار الإشارات B مسار تشوير رئيسي لتنشيط البلاعم [12]. NF- B هو عامل تنظيمي مهم للنسخ في النواة ، NF- تنشيط مسار الإشارات B يمكن أن يتسبب في تنشيط NF في السيتوبلازم- B ونقله إلى النواة ، وبالتالي يتوسط التعبير الجيني عن السيتوكينات المختلفة ، ولا وسطاء. يمكن أن يتسبب تحفيز LMSC في إطلاق خلايا RAW 264 7 كمية كبيرة من NO ، والتي قد تكون مرتبطة بـ TNF من خلال الارتباط بعوامل مختلفة مثل Eef 2- مسار إشارات NF- B والبروتينات الأخرى ذات الصلة التي تنشط NF - κ يتم تنفيذ مسار الإشارات B وعمليات بدء وتمديد الترجمة حقيقية النواة المرتبطة به. بالإضافة إلى ذلك ، تتضمن الأهداف المتعلقة بـ LMSC أيضًا مسارين لاستقلاب الكربوهيدرات: تحلل السكر / استحداث السكر ، ودورة حمض الستريك (TCA) ، ونقل الإلكترون في الجهاز التنفسي. من المتوقع أن يحتوي LMSC على العديد من السكريات الجزيئية المنخفضة مثل الفركتوز والمانيتول ، والتي يمكن أن تؤثر على خلايا RAW 264 7 التي توفر الطاقة ، وترتبط بالبروتينات مثل Aldoa المرتبطة باستقلاب الجلوكوز ، وبالتالي تنظم المسارات المتعلقة باستقلاب الجلوكوز.

باختصار ، حددت هذه الدراسة 24 بروتينًا مستهدفًا وظيفيًا مختلفًا لتنشيط البلاعم LMSC باستخدام تقنية التعرف على البروتين المستهدف ذات الصلة بالكروماتوغرافيا الجزيئية ؛ يشير تحليل التخصيب لمسارات الإشارات المرتبطة بالبروتين المستهدف إلى أن LMSC يعمل على البلعمة المعتمدة على مستقبلات Fc ، و TNF-NF- يؤدي مسار الإشارات B وعملية استقلاب الجلوكوز في النهاية إلى ممارسة RAW 264 7. تفعيل البلاعم. تقدم هذه الدراسة الدعم النظري للكشف عن المكونات النشطة والآليات ذات الصلة لتنظيم المناعة في Cistanche deserticola ، كما تقدم أفكارًا للتعرف على الهدف والبحث الآلي للمكونات النشطة المعقدة في الأدوية الطبيعية.

الجدول 2 تحليل مسار تخصيب أهداف LMSC

[مرجع]

［1］ دستور الأدوية الصيني الجزء 1 [S]. 2010: 126

［2］ Xu Wenhao و Qiu Shengxiang و Zhao Jihong وآخرون دراسة حول المكونات الكيميائية لـ Cistanche deserticola ［J］. طب الأعشاب الصيني ، 1994 ، 25 (10): 509

［3］ Wu XM و Gao XM و Tsim KW وآخرون. أرابينوجالاكتان معزول من سيقان Cistanche deserticola يدفع تكاثر الخلايا الليمفاوية المستزرعة ［J］． Int J Biol Macromol، 2005،37 (5): 278．

［4 ، وانغ شيانغيان ، تشي يون ، كاي رونلان ، وآخرون تنشيط البلاعم للسكريات من Cistanche deserticola ［J］. نشرة الأدوية الصينية ، 2009 ، 25 (6): 787

［5］ جاو يونجيا ، جيانغ يونغ ، داي فانغ ، وآخرون دراسة حول المواد الديناميكية الدوائية لمركب Cistanche deserticola في الأمعاء المغذية وتخفيف البراز ［J］. الطب الصيني الحديث ، 2015 ، 17 (4): 307

［6］ Liu Wangcai ، Zhu Jiawen تقدم البحث في تقنية كروماتوغرافيا التقارب [J]. شنغهاي للصناعات الكيماوية ، 2007 ، 32 (4): 27

［7 ، كروماتوغرافيا هونغ مينغان تقارب. عالم الكيمياء ، 1981 ، 9: 281

［8 ، Liao LX ، Song XM ، Wang LC ، وآخرون. يوفر التثبيط الانتقائي للغاية لـ IMPDH2 أساس العلاج المضاد للالتهاب العصبي ［J］． Proc Natl Acad Sci USA، 2017114 (29): E5986．

［9］ وانغ جينغ ، تشانغ تشوندان ، يانغ ليمين ، وآخرون تأثير التنشيط للسكريات خارج الخلية من Pleurotus ferulae على البلاعم الفأرية [J]. تكنولوجيا صناعة الأغذية ، 2016 ، 37 (10): 356

［10］ Zhang Pengyu، Ruan Yingxin، Wang Yinan، et al Activin A يعزز النشاط البلعمي للضامة البريتونية الفأرية ［J］. مجلة أكاديمية العلوم الطبية العسكرية ، 2009 ، 33 (4): 330

［11］ Xie Zhijian و Xiong Xiaodong و Zuo Yun Fc آلية نقل إشارة البلعمة R بوساطة البلعمة ［J］. طب المناعة الأجنبية ، 2002 ، 25 (1): 5

［12］ Yuan Xiaolin و Zhang Chunlei و Li Dianjun Research يتقدم في تنشيط الضامة وآليات الإشارة الخاصة بهم ［J］. المجلة الدولية لعلم المناعة ، 2007 ، 30 (5): 333