خلاصة:الهدف الرئيسي من هذه الدراسة هو تقدير ، من خلال التحليل التفاضلي ، الأنشطة البيولوجية المختلفة لمحتوى الفينول الكلي في المستخلصات الكحولية لثلاثة أصناف من نخيل التمر حساسة أو مقاومة لمرض Fusarium oxysporum. س البدينيس. هنا ، تم إثبات منتجات stilbene ذات القدرات المضادة للأكسدة والنشطة بيولوجيًا في الصنف المقاوم Taabdount (TAAR). علاوة على ذلك ، يحتوي الجزء الميثانولي من صنف نخيل التمر المقاوم لـ TAAR على منتج مهم ، تم تحديده بواسطة LCMS / MS و 1 H ، 13C NMR ، ينتمي إلى عائلة هيدروكسي ستيلبين ، التي تظهر قدراتها المضادة للأكسدة ، وتثبط نشاط الفطر التيروزينيز ، وتنشط ويمارس تأثيرًا وقائيًا على الضرر الناجم عن هيبوكلوريت في البروتيازوم 20S من الخلايا الليفية الجلدية البشرية المسنة. إجمالاً ، تشير النتائج الحالية إلى أنه يجب دراسة الهيدروكسيتولوين الموجود في Phoenix dactylifera L. المقاوم لفهم الطريقة التي يمكن أن يمارس بها stilbene القدرة على مقاومة الشيخوخة.

يمكن أن يزيد الجليكوزيد من cistanche أيضًا من نشاط SOD في أنسجة القلب والكبد ، ويقلل بشكل كبير من محتوى lipofuscin و MDA في كل نسيج ، ويزيل بشكل فعال العديد من جذور الأكسجين التفاعلية (OH- ، H₂O₂ ، إلخ) والحماية من تلف الحمض النووي الناتج عن ذلك. بواسطة OH- الجذور. جليكوسيدات Cistanche phenylethanoid لديها قدرة قوية على إزالة الجذور الحرة ، وقدرة تخفيض أعلى من فيتامين C ، وتحسن نشاط SOD في تعليق الحيوانات المنوية ، وتقليل محتوى MDA ، ولها تأثير وقائي معين على وظيفة غشاء الحيوانات المنوية. يمكن أن يعزز عديد السكاريد القارص نشاط SOD و GSH-Px في كريات الدم الحمراء وأنسجة الرئة للفئران المسنة تجريبياً الناتجة عن D-galactose ، وكذلك تقليل محتوى MDA والكولاجين في الرئة والبلازما ، وزيادة محتوى الإيلاستين ، تأثير الكسح الجيد على DPPH ، وإطالة وقت نقص الأكسجة في الفئران الشائخة ، وتحسين نشاط SOD في مصل الدم ، وتأخير التنكس الفسيولوجي للرئة في الفئران الشائخة تجريبياً مع التنكس المورفولوجي الخلوي ، أظهرت التجارب أن Cistanche لديه قدرة جيدة على مضادات الأكسدة وله القدرة على أن يكون دواءً لمنع وعلاج أمراض شيخوخة الجلد. في الوقت نفسه ، يتمتع إشنكوسايد في Cistanche بقدرة كبيرة على البحث عن الجذور الحرة لـ DPPH ولديه القدرة على البحث عن أنواع الأكسجين التفاعلية ومنع تدهور الكولاجين الناجم عن الجذور الحرة ، وله أيضًا تأثير إصلاح جيد على تلف أنيون الثايمين الجذور الحرة.

انقر على مزايا rou cong rong

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】

الكلمات الدالة:Phoenix dactylifera L. ؛ أوكسيسبوروم الفيوزاريوم. sp Albidinis (FoA) ؛ أنشطة مضادات الأكسدة. نشاط مضاد للتيروزيناز. تفعيل البروتياز تحليل LC-MS / MS ؛ مشتقات ستيلبين

1 المقدمة

نخيل التمر (Phoenix dactylifera L.) هو نبات وحيد معمر من عائلة Arecaceae. هذه الشجرة ذات أهمية قصوى في حياة السكان الصحراويين في جنوب وجنوب شرق المغرب ، اقتصاديًا واجتماعيًا. مرض البيوض الذي يسببه فطر التربة Fusarium oxysporum f. sp Albidinis (FoA) [1] ، قلل بشكل كبير من محصول النخيل المغربي في السنوات الأخيرة [2]. تشير التقديرات إلى أن FoA اختفى من ثلثي التراث الفينيقي المغربي لكنه استمر في تدمير ما بين 4.5 في المائة إلى 12 في المائة من أصناف النخيل التجارية عالية الجودة [2]. وقد تم بذل العديد من الجهود لمكافحة هذا المرض وشرح بعض آليات الدفاع عن النخيل [3]. أبرزت الدراسات الأولى حول الآليات الدفاعية المحتملة لنخيل التمر دور المركبات الفينولية والقدرة المضادة للأكسدة في تحمل الرغوة [4،5]. كان التحليل الكيميائي الحيوي لأصناف مركبات الفينول الجذرية المقاومة والحساسة أول دراسة كيميائية حيوية أوضحت فائدة آليات الدفاع لنخيل التمر. في الواقع ، تشير الأدبيات إلى أن أصناف الجذور المقاومة تكون أكثر ثراءً في 5- حمض كافويل شيكيميك وأيزومرات موضعه من أصناف الجذور الحساسة [5]. أظهرت هذه المركبات بفعالية نشاطًا مضادًا للفطريات في المختبر ضد FoA [6].

إن القدرة الكبيرة لمضادات الأكسدة الطبيعية على البحث عن الجذور الحرة هي ما دفع شعبيتها المتزايدة في الدراسات الغذائية والطبية [٧-١٠].

على سبيل المثال ، تعتبر أنواع الأكسجين التفاعلية من العوامل التي تؤدي إلى تفاقم الإصابة الخلوية وعمليات الشيخوخة [11] وبالتالي فهي مرتبطة بالعديد من الأمراض. نتيجة لذلك ، قد تساعد الجزيئات المضادة للأكسدة صحة الإنسان عن طريق منع الأمراض التنكسية وإبطاء عواقب الشيخوخة [12]. في هذه الدراسة ، نحن مهتمون بقدرة مضادات الأكسدة على تعزيز تنشيط بروتين 20S-proteasome والحماية من الأضرار التأكسدية الناتجة عنه. يساهم البروتوزوم بالفعل في الحفاظ على التوازن الخلوي من خلال تمكين عملية إزالة البروتينات التالفة للخلية والتدمير المتحكم فيه للبروتينات قصيرة العمر [13]. لذلك ، قد يكون تنشيط البروتوزوم بمضادات الأكسدة استراتيجية جديدة لمكافحة الشيخوخة [14]. علاوة على ذلك ، يهدف هذا العمل إلى استكشاف إمكانات المحتوى الفينولي للجذور المقاومة لـ FoA كمركبات بيولوجية نشطة.

2. المواد والأساليب

2.1. عينة نباتية

أجريت الدراسة لكل عينة باستخدام مادة من 0 صنف بالغ من نخيل التمر (Phoenix dactylifera L.) نمت إما من طرود ملوثة أو غير ملوثة تقع في بالماريا فجيج ، جنوب شرق المغرب. تمتد الجذور الرئيسية (بما في ذلك جذورها التي تتنفس الهواء) بقطر يتراوح من 0.5 إلى 2 سم من الأصناف المعرضة للإصابة ، مثل charas Bouffegous المصابة (BI) أو غير المصابة (BNI). بالإضافة إلى ذلك ، تم جمع صنف Taabdount (TAAR) المقاوم لـ FoA ، واستخدمت أوراق نباتين طبيين محليًا كعلاج للنمو ضد FoA. علاوة على ذلك ، تم أيضًا جمع إكليل الجبل (R ، Rosmarinus officinalis) والرمان (G ، Punica granatum L.) [15] في نفس العبوة غير الملوثة حيث تم تحليلها واستخدامها كعنصر تحكم. تم أخذ العينات خلال فترتين من العام ، في سبتمبر وأواخر يناير (بين 2013 و 2015) ، وتم تخزينها بإحكام في درجة حرارة الغرفة. بما أن العينات تم الحصول عليها من بالمر ، فهي مصدقة حسب الأصول (تحديد وتصنيف) من قبل وزير الفلاحة المغربي [16].

2.2. تحضير المستخلصات

بعد غسل شامل بالماء ، تجفف الجذور أو الأوراق في الظل ، ثم تُطحن في الخلاط. لكل عينة (BI ، BNI ، TAAR ، R ، و G) ، تمت إضافة 10 مل من الميثانول إلى 1 جم من المادة الجافة ثم تُترك مع التقليب لمدة 4 ساعات عند درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، تم ترشيحها وتبخيرها عند 37 درجة مئوية بواسطة بخار دوار. تم وضع المستخلص الجاف في محلول ميثانول بتركيز نهائي قدره 10 مجم / مل أو 50 مجم / مل (استخدم لاحقًا لفحص الأنشطة البيولوجية في المختبر). تم إجراء ثلاث عمليات استخلاص مستقلة لكل عينة لفحوصات النشاط البيولوجي.

2.3 الأنشطة البيولوجية

2.3.1. محتوى الفينول وأنشطة مضادات الأكسدة

الإجراء الذي حدده Nacoulma وآخرون. تم تطبيقه لتقييم إجمالي الفينولات ومحتوى الفلافونويد الكلي لكل مستخلص [17] ، مع تعديل نهائي للأحجام عند 2 0 0 ميكرولتر لاستخدامها في قارئ الصفيحة الدقيقة. تم تحديد الامتصاصية عند 76 0 نانومتر و 51 0 نانومتر ، على التوالي ، مقابل فراغ ميثانول. منحنيات المعايرة القياسية لحمض الغال (0-300 مجم / لتر) (y=0. 0083x زائد 0.9106 ، r 2=0. 978) وكيرسيتين (0-100 مجم / لتر) (ص {{14) }}. 0008x زائد 0.0597 ، r 2=0. 994) ، على التوالي.

باستخدام 1 ، 1- diphenyl -2- picrylhydrazyl free root، antioxid cassing activity (DPPH). باستخدام التكيف النهائي للأحجام عند 300 ميكرولتر و 275 ميكرولتر ، على التوالي ، لاستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة ، تم تقييم قدرة المستخلصات على تقليل الحديد (III) ، كما وصفها Nacoulma et al. [17]. بالمقارنة مع ميثانول فارغ ، تم قياس الامتصاصية عند 517 نانومتر و 700 نانومتر ، على التوالي. ثم ، باستخدام المعادلة التالية ، تم تقدير نشاط إزالة الجذور الحرة لكل محلول كنسبة مئوية من التثبيط:

تم الحصول على منحنى معايرة قياسي باستخدام حمض الأسكوربيك ({0} - 100 مجم / لتر) كمعيار مضاد للأكسدة (ص=0. 0014x زائد 0.0875 ، ص 2=0. 998).

2.3.2. مقايسة مثبطة نمو الهليوم الرغوي

مع تعديل بسيط ، الطريقة التي وصفها Neri et al. [18] تم استخدامه لتحديد الدرجة التي تمنع بها المواد الكيميائية النقية نمو فطريات FoA. 7- ثقافة عمرها يوم واحد من FoA تحتوي على خمسة ملليمترات من الأقراص الفطرية الموضوعة على أطباق بتري مع وسط PDA مكمل بالمواد الكيميائية النقية المذكورة أعلاه عند 50 و 75 و 100 ميكروغرام / مل. تم تحضين الأطباق لمدة 5 أيام عند 28 درجة مئوية. تم استخدام متوسط ​​قطر المستعمرة المقاسة بزاوية قائمة لتقييم تثبيط نمو فطريات FoA. يتكون كل علاج من ثلاثة اختبارات باستخدام ثلاث سلالات مختلفة من FoA: FoA 41818 ، و FoA 41814 (BCCM ، بلجيكا) ، و FoA Local (Palemeraie في مدينة فجيج ، المغرب) ، بالإضافة إلى عنصر تحكم سلبي باستخدام وسيط لم تتم إضافته.

2.3.3. حيوية الخلية ونشاط بروتيازوم 20S

تم استخدام الأرومات الليفية الجلدية الطبيعية من {0} رجل يبلغ من العمر (NHDF) (بروموسيل ، هايدلبرغ ، ألمانيا) حيث تم وضع الخلايا بكثافة 1 0 0 ، {{3 }} خلايا / مل في RPMI 10 بالمائة مكمل بـ 10 بالمائة (وزن / حجم) FBS ، 1 بالمائة (وزن / حجم) L- جلوتامين ، 100 وحدة / مل بنسلين ، و 100 ميكروغرام / مل ستربتومايسين. تم الاحتفاظ بها في أطباق ميكروويل بيضاء أو شفافة 96- لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية في حاضنة ذات بيئة رطبة بنسبة 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون. لمقايسة نشاط البروتياز ، وكذلك لتقييم التأثيرات الوقائية على الضرر الناجم عن هيبوكلوريت ، عولجت الخلايا بعد ذلك بمواد اختبار (مركب نقي من 5 إلى 50 ميكروغرام / مل ، تحكم إيجابي عند 0.5 و / أو 1 ميكرومتر ، والمستخلصات النباتية الميثانولية من 15 إلى 50 ميكروغرام / مل) لمدة 24 ساعة بحد أقصى 0.3 في المائة من DMSO في التركيز النهائي ، في وقت واحد ، دون تغييرات ، فيما يتعلق بالتحكم السلبي. إن التحقيق في التأثيرات الوقائية لمستخلص TAAR أو المركبات النقية على نشاط البروتياز يعني أن الخلايا الليفية تعرضت لاحقًا لـ 50 ميكرومتر من OCl لمدة 35 دقيقة (تم اختيارها على أنها مثالية ، بدون سمية الخلية ، مثبط الأكسدة لحالة البروتيازوم 20S) [19]. تم الانتهاء من المراحل التجريبية التالية من خلال منهجية المورد (المقايسة القائمة على الخلية Proteasome-Glo Chymotrypsin-Like Cell ، شركة Promega Corporation ، الولايات المتحدة الأمريكية): أولاً ، تجربة بقاء الخلية المتزامنة باستخدام فحوصات قياس الألوان البنفسجي أو MTT التي تم إجراؤها في ظل ظروف مماثلة تمامًا تم استخدامه لتطبيع اختبار التلألؤ الحيوي للخلايا هذا. يتم عرض الانحرافات المعيارية ومتوسط ​​التألق في عينات ثلاثية من اختبارين منفصلين (ن=6). تم إجراء جميع القياسات والتجارب المستقلة (ن=2) مرتين.

2.3.4. التأثير المثبط على فطر التيروزيناز الخالي من الخلايا

للتحقق من التأثير على نشاط الإنزيم ، تم تحضين مواد الاختبار (مضادات الأكسدة النقية أو المستخلصات النباتية الميثانولية) مسبقًا مع الإنزيمات في محلول الفوسفات عند درجة حرارة الغرفة. باختصار ، تمت إضافة 3 0 {17}} مل من محلول L-DOPA سعة 5 ملي مولار عند محلول فوسفات مؤقت 5 0 ملي مولار (درجة الحموضة 6.5) مع أو بدون مواد اختبار بتركيزات مختلفة إلى 96- صفيحة ميكروية جيدة مع 100 مل من محلول مائي لتيروزيناز الفطر (20 وحدة). لمدة 40 دقيقة ، تم تحضين خليط الفحص عند 25 درجة مئوية. بعد الحضانة ، تم قياس مستوى إنتاج خليط التفاعل طيفيًا عند 492 نانومتر [20]. تم رسم منحنى معايرة قياسي باستخدام حمض الغال (0-1000 ميكروغرام / مل) (ص=−0.087 × زائد 0.45 ؛ ص 2=0. 97). تم إجراء كل تجربة قياس مستقلة (ن=2) مرتين.

2.4 التحليلات والعزل وإجراءات توضيح الهيكل

تم استخلاص الجذر الأرضي (20 جم) مع 200 مل من الميثانول ، وتقليبها لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة الغرفة ، وترشيحها ، وطردها عند 10 ، 000 × جم لمدة 15 دقيقة ، ثم تبخر عند 35 درجة مئوية باستخدام دوار. جهاز التبخر الفراغي. تم تخفيف المستخلص الخام باستخدام 20 مل من الماء المقطر ، وأعيد استخلاصه بمقدار 2 × 20 مل من أسيتات الإيثيل ، ثم تم تركيزه باستخدام نظام التبخير الفراغي الدوار عند 35 درجة مئوية. تمت تنقية المنتج الرئيسي بواسطة HPLC التحضيري باستخدام عمود Waters C18 (SymmetryPrep 150 × 19 مم ، حجم جسيم 7 ميكرومتر) مع نفس ظروف التدرج LC المستخدمة أعلاه ومعدل تدفق 5 مل / دقيقة. كانت الذروة عند RT بين 38.8 و 40.8 دقيقة ، تم جمعها بين 39.2 و 40.2 دقيقة ؛ تم تجميد المجموعة الكلية بالحجم لإعطاء 27 مجم من المركب. ثم حددت MS و NMR 1H و 13C ذلك.

تم إجراء التحليلات بنظام سلسلة LC 12 0 0 بدقة عالية باستخدام كاشف صفيف الصمام الثنائي (DAD) المستخدم لمراقبة أطياف الأشعة فوق البنفسجية عند 320 نانومتر (Agilent Technologies ، سانتا كلارا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم إجراء الفصل المركب على عمود Beckman C18 (ULTRASPHERE 250 مم × 4.6 مم ، حجم جسيم 5 ميكرومتر) باستخدام تدرج 47 دقيقة من أسيتات الأمونيوم 10 ملي / 0.2 بالمائة حمض الفورميك في الماء (ت / ت) ، الرقم الهيدروجيني 2.9 ({{ 13}} مذيب أ) ، و 30/70 مزيج أسيتونيتريل / ميثانول (= مذيب ب). كان معدل التدفق 0.8 مل / دقيقة ، وتم رفع المذيب B من 5 إلى 35 بالمائة في 45 دقيقة وأعيد معايرته لمدة دقيقتين. في سلسلة مع DAD ، تم استخدام سلسلة ESI-QTOF 6520 (Agilent Technologies ، سانتا كلارا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) لتحليلات MS عالية الدقة وتحليلات MS (MS / MS) عالية الدقة. تم الحصول على الأطياف في أوضاع اكتساب سلبية وعالية الدقة (4 جيجاهرتز).

تم تسجيل أطياف H NMR و 13 C NMR على مطياف Bruker Avance 300 يعمل عند 300 ميجاهرتز. تمت معالجة الانحرافات الحثية المجانية باستخدام مجموعة MestreNova 5.3.2 NMR من MestreLab Research SL.

2.5 تحليل احصائي

تم إجراء جميع التجارب المستقلة في ثلاث نسخ. تم تقديم جميع البيانات على أنها القيم المتوسطة ± SD. باستخدام الإصدار 6 من برنامج GraphPad Prism ، تم تحليل النتائج باستخدام اختبار Kruskal-Wallis اللامعلمي جنبًا إلى جنب مع اختبار Dunn للمقارنة المتعددة. تعتبر القيم p 0. 05 وأقل مهمة.

3. النتائج والمناقشة

3.1. إجمالي محتويات الفينول والفلافونويد لمستخلصات الميثانول

نظرًا لخصائص الأكسدة والاختزال ، فقد وجد أن للمركبات الفينولية النباتية مجموعة متنوعة من التأثيرات البيولوجية ، بما في ذلك نشاط مضادات الأكسدة [21]. يصور الجدول 1 المحتوى الفينولي الكلي لمستخلصات جذر الميثانول (500 ميكروغرام / مل) من الأصناف الحساسة من غاغراس بوفيجوس المصابة (BI) وغير المصابة (BNI) بواسطة FoA أو المقاومة مثل Taabdount (TAAR). تراوح تركيزهم من 171 ± 14 إلى 253 ± 47 مجم من حمض الغاليك مكافئ / جرام. تم العثور على أعلى كمية من هذه المركبات في صنف BNI ، بينما جاء أقل تركيز من مستخلص جذر الميثانول من BI. تباين عدد مركبات الفلافونويد في هذه المستخلصات نفسها (الجدول 1)) من 240 ± 25 إلى 406 ± 66 مجم من مكافئ كيرسيتين / جرام ، ومرة ​​أخرى ، تم إرجاع أعلى كمية إلى مجموعة BNI. هناك خسارة ما يقرب من ثلث كمية العدد الإجمالي من البوليفينول والفلافونويد بين الأصناف غير المصابة (BNI) والأصناف المصابة (BI) أو المقاومة (TAAR) لـ FoA. لذلك ، من الجدير بالملاحظة التحقق من كيفية تأثير فقدان المركبات ، الموصوف بأنه ضروري للقدرة المضادة للأكسدة للنبات ، على الأنشطة البيولوجية التي نهتم بها.

3.2 إمكانات مضادات الأكسدة من المستخلصات الميثانولية

نشاط الكسح الجذري DPPH هو طريقة تستخدم على نطاق واسع لفحص النشاط المضاد للأكسدة من المستخلصات النباتية [22]. يحدد هذا الاختبار ما إذا كانت المواد الكيميائية المضادة للأكسدة الموجودة في المستخلصات قادرة على تنظيف الأنواع الجذرية المستقرة DPPH. تكشف البيانات التجريبية (الشكل 1) أن جميع المستخلصات الميثانولية (عند 1 0 0 أو 500 ميكروغرام / مل) من المحتمل أن يكون لها تأثير تنظيف الجذور الحرة مع أعلى أنشطة الكسح DPPH التي لوحظت في جذور TAAR (87.0) في المائة من تثبيط DPPH). يبدو أن نشاط مضادات الأكسدة لا يعتمد على وجود الكمية الإجمالية من مركبات البوليفينوليك أو مركبات الفلافونويد. ومع ذلك ، قد يكون النشاط الأفضل لمستخلصات جذر TAAR الميثانولي بسبب وجود المزيد من المكونات التي تتبرع بالهيدروجين الموجودة في المستخلص.

يتم تقييم القدرة المختزلة من خلال قدرة المستخلص الميثانولي على تحويل Fe (III) إلى Fe (II). قد تُعزى هذه القدرة على تقليل الحديد (III) إلى عدد وموقع مجموعات الهيدروكسيل الموجودة في المركبات الفينولية وقدرتها على التبرع بالهيدروجين [23]. أظهر الجدول 2 الأنشطة المختزلة للمستخلصات الميثانولية لعينات نباتاتنا مقارنة بحمض الأسكوربيك كمعيار. تحتوي المستخلصات الميثانولية لجذور TAAR على تخفيضات عالية (95 ± 1 مجم من مكافئ حمض الأسكوربيك / جرام) ، بينما تم الحصول على أقل محتوى من مستخلصات جذر BNI (27 ± 2 مجم من مكافئ حمض الأسكوربيك / جرام).

تم إجراء تحليل الانحدار لربط النتائج المتحصل عليها (معامل الارتباط (R)). تم العثور على ارتباطات خطية كبيرة بين إجمالي محتوى الفينول والفلافونويد (R {0}. 849، p <0. 05) وبين DPPH ومقايسة القدرة المخفضة (R=0. 816، p <0.05) ، ولكن لم يكن هناك أي شيء بين محتويات الفينول أو الفلافونويد للمستخلصات الميثانولية وأنشطتها المضادة للأكسدة. أخيرًا ، أظهرت جميع المستخلصات الميثانولية أنشطة كبيرة مضادة للأكسدة ضد نشاط الكسح الجذري لـ DPPH وتقليل مقايسة الطاقة ، ولكن يبدو أن هذه الأنشطة المضادة للأكسدة لا علاقة لها بمحتويات الفينول أو الفلافونويد الكلية. لذلك ، تشير هذه النتائج إلى أن نوعًا معينًا من المواد الكيميائية ، بدلاً من كمية مركبات الفينول أو مركبات الفلافونويد الموجودة في مستخلصاتنا المتنوعة ، هو المسؤول على الأرجح عن النشاط المضاد للأكسدة في المستخلصات النباتية قيد المراجعة. قد يكون لبعض المكونات الفينولية التي تم وصفها سابقًا والأفراد النشطين للغاية تأثير على النشاط المضاد للأكسدة في المستخلصات النباتية: بغض النظر عن تركيزها ، قد تظهر المركبات الفينولية الموجودة في النبيذ الأحمر القديم العديد من الخصائص المضادة للجذور المرتبطة بجوانبها الهيكلية [ 24].

يُظهر الصنف TAAR FoA المقاوم أعلى نشاط مضاد للأكسدة بين الأنواع المختلفة من نخيل التمر. بالإشارة إلى الأدبيات ، قد يُعزى تطور المقاومة في نخيل التمر إلى زيادة في كمية الأيزومرات الموضعية المختلفة لحمض الكافويل شيكيميك [5].

3.3 نشاط الفطر التيروزينيز

يحفز نشاط الفطر التيروزيناز ديفينولاز أكسدة اثنين من مشتقات الدوباكينون مما يؤدي إلى تخليق الميلانين. توضح النتائج الواردة في الجدول 3 قدرة المركبات الموجودة في المستخلصات الميثانولية من TAAR و BI و BNI على التداخل مع الهيدروكسيل لـ L-DOPA من خلال تثبيط نشاط التيروزيناز في الفطر. علاوة على ذلك ، تُظهر هذه النتائج أن المستخلص الميثانولي لـ TAAR أكثر نشاطًا من الناحية الإحصائية من مستخلصات BI (p <0. 0 5) و BNI (p <0.05) في نشاط التيروزيناز في الفطر. لذلك ، يبدو أن قدرة مستخلصات جذر النخيل على تثبيط نشاط التيروزيناز تتبع نفس الاتجاه فيما يتعلق بقدرات مضادات الأكسدة.

ترتبط التيروزينات بشكل أساسي بالجلد والعينين وتصبغ الشعر. في الواقع ، إن إنزيمات التيروزينات هي إنزيمات تكون الميلانين تشارك في الخطوات الأولى لتخليق الميلانين الحيوي ، والميلانين مرتبط بالحماية من الأشعة فوق البنفسجية (UV) ، أو أشعة الشمس ، أو أشعة جاما ، وتقليل الحساسية الخلوية ، ومقاومة جدار الخلية ضد الإنزيمات المتحللة للماء [20]. على العكس من ذلك ، قد يلعب الإفراط في إنتاج الميلانين دورًا في تشوهات الجلد أو أمراض أكثر خطورة مثل السرطان (مثل الورم الميلانيني) ، وقد يؤدي فرط الدوباكينون إلى مرض التنكس العصبي (مثل مرض باركنسون) [20 ، 25]. علاوة على ذلك ، تم الإبلاغ عن تكوين الميلانين لإنتاج بيروكسيد الهيدروجين وأنواع أخرى من أنواع الأكسجين التفاعلية ، مما يعرض الخلايا الصباغية البشرية لمستويات عالية من الإجهاد التأكسدي [26]. العديد من المركبات الطبيعية المضادة للأكسدة (الفينولات ، الفلافونويد ، وغيرها) التي تم الحصول عليها من النباتات تثبط نشاط التيروزيناز الفينوليز [27 ، 28]. هنا ، يبدو أن مستخلص TAAR يحتوي على مركب (مركبات) عرضة لتثبيط شيخوخة الجلد وتكوين الميلانين.

3.4. النشاط البروتوزومي لمستخلصات نخيل التمر المثاني

تم الإبلاغ عن أن المستويات المرتفعة من 2 0 S البروتياز تؤدي إلى زيادة تحمل الإجهاد التأكسدي [13]. لذلك ، تم فحص تنظيم نشاط البروتياز بواسطة مستخلصات الجذر من أصناف BI و BNI و TAAR. يرتبط النشاط البروتيني المقاس 20S بالنشاط الشبيه بالكيموتريبسين (CT-L) في الخلايا التي تتراوح أعمارها بين NHDF (انظر المواد والطرق). كما هو موضح في الشكل 2 أ ، أظهرت الخلايا المعالجة بـ 50 ميكروغرام / مل من المستخلصات الميثانولية لمدة 24 ساعة تنشيطًا كبيرًا لـ CT-L لمستخلصات BI و TAAR وتثبيط BNI دون توليد أكثر من 30 بالمائة من سمية الخلية. أظهر مستخلص جذر TAAR انخراطًا في تنشيط البروتياز مقارنةً بتنشيط 1 ميكرومتر من حمض ليبويك (Ct plus) (212 بالمائة و 248 بالمائة على التوالي). البروتيازوم عبارة عن مركب بروتيناز أسطواني يحتوي على قلب من أربع حلقات مكدسة مسؤولة عن إزالة البروتينات التالفة بشكل غير طبيعي (26S) والأكسدة (مركب النواة المحللة للبروتين 20S) (Ciechanover ، 1998). كما ورد في عمل هوانج [29] ، قد يكون الخلل الوظيفي للبروتوزوم مساهمًا في شيخوخة جلد الإنسان. في الواقع ، تبين أن الشيخوخة والخلايا الشائخة التكاثرية قد قللت من نشاط البروتوزوم وكذلك مستويات البروتين للوحدات الفرعية البروتيازوم. حقيقة أن كلا البروتينات الخلوية المؤكسدة و / أو التالفة المتراكمة في كثير من الأحيان في هذه الخلايا تشير إلى أن مسار اليوبيكويتين-البروتوزوم لتدهور البروتين متورط في عمليات الشيخوخة الذاتية. يوضح الشكلان 2B و C قدرة مستخلص الميثانول TAAR على حماية الخلايا التي تبلغ أعمارها NHDF من تثبيط نشاط البروتيازوم 20S بواسطة مؤكسد OCl−. في الواقع ، يثبط مؤكسد OCl عند 50 في المائة من نشاط البروتوزوم لخلايا التحكم (Ct) ، بينما يفشل أعلى منشط 20S-proteasome (حمض ليبويك عند 1 ميكرومتر ، Ct plus) بأكثر من 50 بالمائة من نشاط التثبيط في عكس التثبيط. من نشاط البروتياز 20S بواسطة OCl− ، في حين أن جميع التركيزات الأخرى المختبرة (15 و 50 و 75 ميكروغرام / مل) من مستخلص TAAR الميثانولي يبدو أنها تعكس هذا التثبيط (0 إلى 19 بالمائة من التثبيط). تشير هذه النتائج إلى أن مستخلصات جذر TAAR قد تحتوي على جزيئات يمكن أن تؤخر شيخوخة الجلد ليس فقط من خلال تعزيز نشاط البروتياز ولكن أيضًا عن طريق مواجهة التأثيرات المثبطة للعوامل المؤكسدة. من بين هذه الجزيئات ، من المرجح أن يكون حمض الكافويل شيكيميك موجودًا ، بالإضافة إلى مركبات أخرى. علاوة على ذلك ، تم إجراء تحليلات LC-DAD-MS (MS) والرنين المغناطيسي النووي لتحديد المركبات الرئيسية للمستخلصات وتتم مناقشتها في القسم التالي.

3.5 التحليلات الطيفية

3.5.1. تحليل LC-DAD-MS للمستخلصات الميثانولية

لم تكشف الدراسة المقارنة لجذور النخيل عن أي فروق نوعية ، ولكن ، بدلاً من ذلك ، لوحظت فروق شبه كمية (في اللوني DAD و MS) بين الأصناف (الشكل 3 أ ، د) إلى حد ما. في الواقع ، لا تسمح النتائج الحالية بربط مقاومة نخيل التمر بزيادة كمية الأيزومرات الموضعية المختلفة لحمض الكافويل شيكيميك لأن الصنف المقاوم (TAAR) يظهر أدنى وفرة نسبية لهذه المركبات (الشكل 3 ج). تم تحديد جميع الأيزومرات الموضعية الثلاثة لحمض كافويل شيكيميك (m / z=335. 0 768 بخطأ 1.2 جزء في المليون) بواسطة أطياف MS / MS (الشكل S6) مع جزء عند m / z 179.0340 ، المقابلة لجزء حمض الكافيين A (C9H7O4) وجزء عند m / z 135.0443 ، المقابلة لنزع الكربوكسيل من حمض الكافيك (C8H7O2). ومع ذلك ، هناك مركب آخر لا يتوافق مع أحماض كافويل شيكيميك (الشكل 3 ج) والذي يكون وقت الاحتفاظ به 29 دقيقة مع m / z=259. 0607 (أو 373.0543 لمقبض TFA) ، يبدو أنه مميز بشكل واضح بين الأصناف المختلفة (الشكل ثلاثي الأبعاد). يمكن أن يفسر الاختلاف في تراكم هذا المركب في جذور الأصناف الحساسة والمقاومة (0.135 بالمائة) ، بنسبة حوالي 1:35 (من m / z=259. 06 ، بيانات MS) ، السمات البيولوجية البارزة الأنشطة التي لوحظت بالنسبة للمستخلص الميثانولي لهذا الجذر.

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】