هل cistanche مجموع الجليكوسيد له آثار على حاسة الشم؟

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

تأثير cistanche مجموع الجليكوسيدات على الخلايا المغلفة لحاسة الفئران وإفرازها لعوامل التغذية العصبية

Li Chuangfeng ، Guo Jinyu ، Zhang Xu ، Liu Yunnan

إصابة الحبل الشوكي (SCI) هي إصابة خطيرة بالجهاز المركزيالجهاز العصبي، وهو ما يمثل {{0}}. 2 بالمائة - 0.5 بالمائة من إجمالي الصدمات. في كسور العمود الفقري ، يعاني 16٪ - 40٪ من إصابات الحبل الشوكي ، وغالبًا ما تترك إعاقة شديدة ، مما يؤدي إلى صعوبات في الحياة اليومية تؤثر على نوعية حياة المرضى ، وتسبب عبئًا كبيرًا على الأسرة والمجتمع.شميخلايا التغليف (OECs) هي نوع خاص من غراء الأعصاب. يمكن لخلايا البلازما أن تهاجر إلى الدماغ بواسطةشمييمكن أن تفرز محاور عصبية العديد من عوامل النمو مثل NGF و GDNF و BDNF و NT -3 والببتيد العصبي Y و S -100. بسبب هذه الخصائصشميتغلف الخلايا ، تعتبر OECs واحدة من الخلايا البذرية الواعدة لزرع الخلايا لإصلاح اصابات النخاع الشوكي. في الوقت الحاضر ، يعتمد علاج اصابات النخاع الشوكي في مجال طب اعادة التأهيل بشكل اساسي على التأهيل الشامل. من أجل إيجاد طريقة أكثر فاعلية ، تم إجراء البحث التالي حول تأثيرcistancheالمجموعجليكوسيداتعلى OECs:

Cistanche إجمالي الجليكوسيد للخلايا المغلفة حاسة الشم

1 المواد والأساليب

1.1 المواد التجريبية

جرذ ويستار (مقدم من مركز الحيوان بجامعة منغوليا الداخلية) ؛cistancheالمجموعجليكوسيدات، متوسط ​​DMEM / F12 ، مصل العجل الجنيني (FCS) ، بولي- D- ليسين ، أرابينوسايد (Ara-C) ، التربسين ، محلول D -Hanks ، مضاد p75NGFR للأرنب (سانتا كروز) ، مجموعة ELISA (Promega) ، حاضنة الخلية (Thermo-HEPA Class 100) ، مجهر تباين طور مقلوب (Olympus CKX41 ، اليابان) ، منضدة عمل فائقة النقاء (Suzhou Antai Air Technology Co.، Ltd.) الشركة SW-CJ -2 FD) ، إنزيم محلل التسمية (Wellscan MKH) ، مقياس التدفق الخلوي ، إلخ.

1.2 طرق البحث

1.2.1 ثقافة منظمة التعاون الاقتصادي وتنقيتها وتحديدها: تم التضحية بفئران ويستار بقطع الرأس ونقعها في النبيذ لمدة 5 دقائق. تم فتح الجمجمة الأمامية لفضحشميمصباح. الاثنانشميتمت إزالة المصابيح بالكامل تحت مجهر تشريح. يغسل في محلول D-Hanks ؛ اقطع الشميلمبة مع مقص الجراحة المجهرية ، أضف 2 مل من 0. 25 بالمائة من البنكرياتين واحتضانها عند 37 درجة لمدة 20 دقيقة ؛ إضافة وسط استزراع D MEM / F12 يحتوي على 10 بالمائة من مصل العجل إلى أنبوب طرد مركزي سعة 2 مل ، تم إنهاء الهضم في الوسط ؛ تستنشق ماصة الحافلة الأنسجة المهضومة بشكل غير مكتمل عند 800 دورة في الدقيقة وتُطرد مركزياً لمدة 5 دقائق ، وتخلص من المادة الطافية ؛ أخيرًا استخدم الوسيط المكيف (20 بالمائة FCS بالإضافة إلى 20|i ، mol / LForskolin plus 20|ig / mlBPE plus DMEM / F12) اجعله في تعليق أحادي الخلية lx 107 مل ، قم بتلقيحه في قارورة ثقافة خلية مغلفة بالبوليليسين ، ضع في حاضنة 37 درجة ، 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون ، وبعد ذلك تم إجراء تنقية أراك في 36 ساعة. استخدم الأجسام المضادة IgG المضادة للأرانب المضادة لـ p75E والأرنب المسمى FITC لتحديد الخلايا الكيميائية المناعية ومراقبة مجهر التألق.

1.2.2 استخدم MTT وقياس التدفق الخلوي لتحديد تأثيرcistanche مجموع الجليكوسيداتعلىشميالخلايا المغلفة: تلقيح المستنبت وتنقيتهاشميتغليف الخلايا في 96- لوحة بئر عند 1X106 ، وإضافةcistanche مجموع الجليكوسيدات(تركيزات الإجراء هي Ijig / ml ، 10mg / ml ، 100mg / ml) ، قم بقياس قيمة OD وقياس تدفق الخلية بعد 24 ساعة من الإجراء. قم بإعداد مجموعة التحكم وCistanche مجموع الجليكوسيداتمجموعات التركيز المختلفة: المجموعة أ (المجموعة الضابطة): يتم استخدام وسط مزرعة يحتوي على مصل كعنصر تحكم سلبي ؛ المجموعة ب (cistanche مجموع الجليكوسيداتمجموعة التركيز المنخفض: llig / ml) ؛ المجموعة ج (cistanche إجمالي تركيز جليكوسيدات متوسط ​​المجموعة: L10jxg / MK) ؛ المجموعة د (cistanche مجموع الجليكوسيداتفئة التركيز العالي: 100|xg / ملو): 15 جرذًا في كل مجموعة.

1.2.3 تحديد محتوى عامل التغذية العصبية في المادة الطافية بواسطة ELISA: تلقيح المستنبت وتنقيتهشميتغليف الخلايا في 6- لوحة بئر بحجم 1x106 ، أضفcistanche مجموع الجليكوسيدات(نفس التركيز على النحو الوارد أعلاه) بعد 24 ساعة وعمل لمدة 24 ساعة ، وجمع المادة الطافية بشكل منفصل ، وحفظها في -80 لفترة طويلة. تم تحديد محتوى عوامل نمو الأعصاب في السائل بطريقة ELISA.

1.3 التحليل الإحصائي

يتم التعامل مع البيانات في هذه الدراسة على أنها بيانات قياس ، ويتم التعبير عن البيانات التي تم الحصول عليها على أنها متوسط ​​± الانحراف المعياري ، ويتم استخدام SPSS 11. 0 البرمجيات الإحصائية للتحليل الإحصائي. يتم تحليل البيانات التي تم الحصول عليها عن طريق تحليل التباين ، و P.<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 النتائج

2.1 تأثيرcistancheمجموع الجليكوسيدات علىشميتكفين الخلايا

2.1.1 نتائج تحديد طريقة ميثيل أوكسازوليل تترازول (MT): المجموعة أ: 0 .617 ± 0. المجموعة ب: 0. 589 ± 0. 147 ؛ المجموعة ج: 0. 761 ± 0 .138 ؛ المجموعة د: 0. 732 ± 0. 234. مقارنة بينCistanche مجموع الجليكوسيدات group (B) and Control group (A), P>0. 05 ، لم يكن الاختلاف كبيرًا ؛Cistanche مجموع الجليكوسيدات10 مجم / مل ، 100 مجم / مل لمجموعة التركيز (C ، D) مقارنة مع مجموعة التحكم (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 تظهر نتيجة تحديد التدفق الخلوي في الشكل 1. وبالمقارنة مع مجموعة التحكم ، فإنcistanche مجموع الجليكوسيداتكانت المجموعة أعلى من المجموعة الضابطة ، وكانت نسبة الخلايا المبرمج أقل من المجموعة الضابطة.

2.2 نتائج مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)

أظهرت نتائج الاختبار أن محتوى عامل التغذية العصبية المشتق من خط الخلايا الدبقية (GDNF): قبل الجرعات: 302.1 ± 16.6 بيكوغرام / مل ، المجموعة أ: 340.5 ± 13.2 جالون / مل ؛ المجموعة ب: 333.2 ± 23.6 جالون / مل ؛ المجموعة ج: 355.2 ± 17.6 جالون / مل ؛ المجموعة د 379.2 ± 15.3 جالون / مل. بالمقارنة مع ما قبل الإدارة ، تم زيادة محتوى GDNF بشكل كبير ؛ مقارنة بمجموعة التحكم (أ) ، فإن محتوى GDNF الخاص بـCistanche مجموع الجليكوسيداتتمت زيادة تركيز 100 مجم / مل معنويا (D).

3 مناقشة

تعد الصعوبة في تجديد المحاور أحد الأسباب الرئيسية التي تجعل من الصعب التعافي بعد إصابة الحبل الشوكي. تلعب OECs دورًا في تجديد المحاور العصبية المركزية التي يصعب استبدال أنواع أخرى من الخلايا. في السنوات الأخيرة ، تم البحث عنشميأصبح تغليف الخلايا نقطة ساخنة.شميالخلايا المغلفة هي نوع خاص من الخلايا الدبقية التي لها خصائص خلايا شوان والخلايا النجمية. نشأت منشمييتم توزيع الغشاء القاعدي على نطاق واسع على سطحشميالغشاء المخاطيشميالعصب وشميمصباح. لديه القدرة على الانقسام والتجديد مدى الحياة ويمكن أن يصاحبشميمحاور عصبية للهجرة إلى الدماغ. محاورشمييمكن أن يمر العصب عبر الموصل بين الجهاز العصبي المحيطي والجهاز العصبي المركزي كل {{0} يوم ، ويعود النمو فيشميغمد وإنشاء وصلات متشابكة 4.شمييمكن أن تفرز الخلايا المغلفة العديد من عوامل النمو مثل NGF و BDNF و GDNF و NT -3 و neuropeptide-Y و S -100. أظهرت الدراسات أن عامل نمو الأعصاب (NGF) يمكن أن يمنع الخلايا العصبية للنواة الحمراء في العمود الفقري من الضمور ويقوي السبيل القشري النخاعي ويعزز تجديد مسار العصب النخاعي للنواة الحمراء ؛ يمكن لكل من عامل التغذية العصبية المشتق من الدماغ (BDNF) و neurotrophin -3 (NT -3) منع موت الخلايا المبرمج للنواة الحمراء في النخاع الشوكي في الفئران البالغة التي تعاني من إصابة محورية وإنقاذ الخلايا العصبية المحتضرة وتعزيز التجدد المحوري P. بالإضافة الى،شميتعبر الخلايا المغلفة أيضًا عن عوامل أخرى على أغشية الخلايا الخاصة بها ، مثل عامل التصاق الخلايا العصبية (N-CAM) ، والتي تشارك في التصاق الخلايا ونمو محور عصبي. بسبب هذه الخصائصشميتغلف الخلايا ، تعتبر OECs واحدة من الخلايا البذرية الواعدة لزرع الخلايا لإصلاح اصابات النخاع الشوكي.

المكونات الكيميائية لـسيستانشتشمل بشكل أساسي جليكوسيدات فينيل إيثانويد ، إيريديويد ، مكونات متطايرة ، قشور ، عديد السكاريد ، وقلويدات. وجدت الدراسة أنسيستانشومكوناته الكيميائية لها تأثيرات اعصاب. دنغ وآخرون. درس تأثير tubulosa B على موت الخلايا المبرمج للخلايا العصبية SH-SY5Y التي يسببها عامل نخر الورم (TNF). أظهرت النتائج أنه بعد 100 ميكروغرام / الخلايا العصبية SH-SY5Y بعد 36 ساعة من علاج TNF بواسطة L أظهرت خصائص موت الخلايا المبرمج النموذجية ، في حين أن علاج tubulin B لمدة ساعتين يمكن أن يقلل بشكل كبير من موت الخلايا المبرمج الناجم عن TNF. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت الدراسات أيضًا أن جليكوسيدات الفينيثانويد يمكن أن تمنع موت الخلايا المبرمج للخلايا الحبيبية المخيخية للجرذان عن طريق تثبيط الكاسبيز -3 وكاسبيز -8 ، وضد الفأر C57 الأسود الناجم عن ميثيل فينيل رباعي هيدروبيريدين (MPTP). للضرر الذي يصيب الخلايا العصبية الدوبامينية عالية الجودة تأثير وقائي. ليس ذلك فحسب ولكنسيستانشيمكن أن يخفف أيضًا من الأضرار المختلفة مثل نقص التروية - ضخه للجهاز العصبي. تُظهر تجربة إصابة إقفار دماغ الفأر أن مدى احتشاء 24 ساعة و 48 ساعة بعد نقص التروية في مجموعة نقص التروية الدماغية - ضخه هو 72.98 بالمائة و 60.45 بالمائة في المتوسط. في المقابل ، فإنcistancheمجموع مجموعات الجليكوسيدات الكبيرة والمتوسطة والمنخفضة (25 0. 0 مجم / كجم / يوم ؛ 125.0 مجم / كجم / يوم ؛ 62.5 مجم · كجم / يوم) على التوالي يمكن أن تجعل دماغ الفئران بعد نقص التروية الدماغية - ضخه لمدة 24 ساعة تم تقليل حجم الاحتشاء إلى 25.94 بالمائة و 25.81 بالمائة و 31.13 بالمائة ، وتم تقليل حجم الاحتشاء الدماغي إلى 22.14 بالمائة و 20.06 بالمائة و 22.27 بالمائة بعد 48 ساعة. كان هناك فرق كبير بين الاثنين ، مما يدل على تأثير مثبط كبير على موت الخلايا المبرمج للخلايا العصبية.

في هذه الدراسة ، تركيزات مختلفة منcistanche مجموع الجليكوسيداتتم تطبيقها على OECs. أكدت طريقة MTT وقياس التدفق الخلوي أن 10 ملغ / مل 100 ملغ / ملcistanche مجموع الجليكوسيداتيمكن أن تعزز انتشارشميتكفين الخلايا. وأظهرت نتائج قياس التدفق الخلوي ذلكcistanche مجموع الجليكوسيداتيمكن أن تعزز انتشارشميتغلف الخلايا إنه يعزز بشكل أساسي تكاثر دورة G1 منشميخلايا الحيوانات المنوية ويقلل بشكل كبير من الخلايا المبرمج. وبالتالي،Cistanche مجموع الجليكوسيداتلا يمكن فقط تعزيز انتشارشميتغلف الخلايا ولكن أيضًا تزيد من نشاط الخلية وتمنع موت الخلايا المبرمج. تثبت مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم ذلكCistanche مجموع الجليكوسيداتيمكن أن تعزز بشكل كبير إفراز GDNF من خلالشميتكفين الخلايا. توفر النتائج المذكورة أعلاه أساسًا تجريبيًا للتطبيق السريري لـCistanche مجموع الجليكوسيدات.

مراجع

[1] Qiu Weihong و Zhu Hongxiang و Zhang Baixiang وآخرون. العوامل المؤثرة على نوعية حياة المرضى الذين يعانون من إصابات في النخاع الشوكي أثناء إعادة التأهيل [J]. المجلة الصينية لطب إعادة التأهيل ، 2009 ، 4 (24): 313.

[2] Richter MW و Fletcher PA و Liu J وآخرون. بروبريا لامينا وشميتظهر خلايا تغليف الثور تكاملًا تفاضليًا وهجرة وتعزز نمو محوار تأخري في الحبل الشوكي المصاب [J]. J Neurosci، 2005.25 (46): 10700 -10711.

[3] Fairless R، Bamet SC. الخلايا المغلفة بحاسة الشم: دورها في إصلاح الجهاز العصبي المركزي [J.Int J Biochem Cell Biol. 2005،37 (4): 693-699.

[4] Chen X، Fang H. Schwob JE. تعدد منقى. الخلايا القاعدية الجلوكوز المزروعة فيشميظهارة [J]. J Comp Neurol، 2004، 46914): 457-474.

[5] لا بي ، جونز إل إل. Tuszynski MH. BDNF- معربا عن خلية marostromal ؛ دعم نمو محور عصبي واسع النطاق في المواقع د إصابة الحبل الشوكي [J]. Exp Neurol، 2005،191 (2): 344-360.

[6] Deng M و Zhao JY و Ju XD وآخرون. التأثير الوقائي لـ tubulosa B على موت الخلايا المبرمج الناجم عن TNF في الخلايا العصبية [J]. Acta Pharmacol Sin، 2004،25 (102 1276

[7] TianXue-Fei، PuXiao-Ping.فينيلثانويدجليكوسيداتمنسيستانشالسالسا تمنع موت الخلايا المبرمج الناجم عن 1- ميثيل -4- أيون فينيل بيريدينيوم في الخلايا العصبية [J]. J Ethnopharmacol، 2005،97 (1): 59.

[8] Geng X ، Song L.Pu X ، وآخرون. تأثير وقائي