الأساس العلمي للتطبيق الجديد لـ Cistanche
Mar 09, 2022
جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com
صن ويدونغ 1 ، تشن في 2 ، صن يون 2
(1. مستشفى يانغتشو للطب الصيني التقليدي ، يانغتشو 225009 ، جيانغسو ؛ 2. كلية الطب ، جامعة يانغتشو ، يانغتشو 225001 ، جيانغسو)
الملخص: تم إنشاء نموذج الفئران التسعة لتضخم البروستاتا (BPH) ، وتم إعطاء ثلاث مجموعات جرعة من الأكتيوسايد عن طريق الفم لمدة 4 أسابيع ، لدراسة تأثير الأكتيوسايد المقطر منCistanche tubulosaعلى موت الخلايا المبرمج والبنية المجهرية الفائقة لغدة البروستاتا في الفئران المصابة بتضخم البروستاتا الحميد. تمت ملاحظة التغيير في البنية التحتية لغدة البروستاتا بواسطة الفحص المجهري الإلكتروني النافذ. أظهرت النتائج أن موت الخلايا المبرمج لبروستات الفئران الطبيعي لم يكن واضحًا ، كان هناك انخفاض
معدل موت الخلايا المبرمج في البروستاتا في المجموعة النموذجية ، في جرعة عالية من أكتيوسيد منCistanche tubulosaالعلاج ، كان موت الخلايا المبرمج للبروستات أعلى بكثير من النموذج.
الكلمات الدالة:سيستانش, Cistanche tubulosa، أكتيوسيد. فأر؛ تبدأ تضخم البروستاتا موت الخلايا المبرمج. البنية التحتية
في عملية تضخم البروستاتا الحميد (BPH) ، يعد موت الخلايا المبرمج إحدى الآليات التي تجذب الانتباه حاليًا. يحدده الترميز الجيني ويمكّن الخلايا من التحكم في موت الخلايا المبرمج من خلال الاستجابة لإشارات محددة.
بعد تطور البروستاتا إلى حجم البالغين ، يتم الحفاظ على معدل تكاثر خلايا البروستات عند 1٪ إلى 2٪ من خلال توازن متوسط معدل موت الخلايا المبرمج. بمجرد كسر التوازن ، يعتبر سبب تضخم البروستاتا الحميد. في ظل الظروف العادية ، تعد مستويات هرمون الاستروجين والأندروجين والدورة الدموية الطبيعية في البروستات نوعًا من حالة التوازن الذاتي الموجودة في عملية الانتشار والاستماتة. عندما يكون التوازن بين الانتشار والاستماتة غير متوازن ، سيؤدي ذلك إلى مزيد من النمو والتوسع في الغدة ، مما يؤدي بشكل أساسي إلى تمدد حجرة الخلايا الظهارية [1].
في هذه التجربة ، أنشأنا نموذجًا لتضخم البروستاتا عند الفئران لمراقبة وتحليل تأثير الأكتيوسايد (التماسك الشبيه بالجليكوزيد) ، وهو أحد المكونات الكيميائية لـسيستانشعلى موت الخلايا المبرمج والتغيرات الهيكلية لخلايا البروستاتا في الفئران ، من أجل تقييم تأثير الأكتيوسايد. يوفر تأثير تثبيط تضخم البروستاتا أساسًا علميًا لتطوير واستخدام الاستخدامات الجديدة للطب الصيني Cistanche.
سيستانشمقتطف
1 المواد والطرق
1. 1 حيوان تجريبي
تم توفير خمسين جرذًا من ذكور الفئران المصابة بمرض التصلب العصبي المتعدد بعمر 6-7 أسبوع ، من الدرجة النظيفة ، ووزنها 80-100 غرام ، من قبل مركز الطب المقارن بجامعة يانغتشو.
1. 2 الكواشف والأدوية
حقن بروبيونات التستوستيرون من شركة Shanghai General Pharmaceutical Co.، Ltd. والمواصفات 25 مجم · مل -1 ورقم الدفعة هو 060708. محلول صبغة PI من مركز اختبار جامعة Yangzhou. محتوى Aktiside 945 جم · كجم-1، من إعداد قسم تحليل الطب الصيني ، جامعة الصين الصيدلانية.
1. 3 معدات تجريبية
المجهر الإلكتروني لناقل الحركة Philips Tecnai 12 هو من شركة Philips في هولندا ؛ مقياس التدفق الخلوي FACSAria هو من BD في الولايات المتحدة.
1. 4 التجميعات والنمذجة
بعد الإخصاء وفقًا لطريقة الأدب [3] ، تم حقن الجرذان بجرعة 5 ملجم · (كجم · د)-1من بروبيونات التستوستيرون على ظهر الفئران لمدة 4 أسابيع لتأسيس نموذج تضخم البروستاتا. تم تقسيم الفئران النموذجية بشكل عشوائي إلى مجموعات نموذجية: نموذج زائد مجموعة جرعة عالية أكتيوسيد ، نموذج زائد مجموعة جرعة متوسطة أكتيوسيد ، نموذج زائد مجموعة جرعة منخفضة أكتيوسيد ، عشرة فئران في كل مجموعة ؛ كانت هناك عشرة فئران عادية أخرى كمجموعة تحكم.
1. 5 طريقة الإدارة
بعد أسبوع واحد من النمذجة ، تم إعطاء مجموعات الجرعات العالية والمتوسطة والمنخفضة من أكتيوسيد 60 ، 30 ، 15 ملجم · (كجم · د) -1 بالتزقيم ، على التوالي. وضعت مجموعة النموذج والمجموعة الضابطة كمية متساوية من المحلول الملحي الطبيعي مرة واحدة يوميًا لمدة أربعة أسابيع ، ووزنها مرة واحدة في الأسبوع ، وتم تعديل الجرعة وفقًا لوزن الجسم.
1. 6 جمع العينات ومعالجتها
1) تحضير المواد والعينة: بعد 24 ساعة من تناول آخر جرعة ، وزن الفئران الصائمة والتضحية بالفئران عن طريق خلع عنق الرحم. افتح أسفل البطن على الفور ، وانزع الأنسجة حول البروستاتا ، وحرر البروستاتا ، وخذ جزءًا من البروستاتا لاستخدامه في حمام جليدي. مجانس الأنسجة متجانس ، محضر معلق من خلية واحدة للبروستاتا ، وملطخ بطريقة خطوة واحدة يوديد البروبيديوم [4] ؛ تم تثبيت جزء آخر من أنسجة البروستاتا في 25 جم · لتر -1 جلوتارالدهيد لتحضير أقسام رقيقة جدًا.
2) تحضير تعليق خلية واحدة: في ظل ظروف معقمة ، قم بإزالة البروستاتا تمامًا وانقلها إلى طبق بتري ، واغسل الدم والجلطات الدموية على سطح أنسجة البروستاتا باستخدام برنامج تلفزيوني ، وأزل الدهون المحيطة والألياف الزائدة ، وأغشية الخلايا. من البروستاتا نفسها ، أنسجة البروستاتا الطازجة بحجم حوالي 0 .5 سم3تم أخذها وتقطيعها إلى قطع لتحضير تعليق خلية البروستاتا [5]. ضع كتلة أنسجة البروستاتا في طبق بتري ، وأضف كمية صغيرة من برنامج تلفزيوني ؛ استخدم مقصات طب العيون لقطع الأنسجة في حمام جليدي ، وطحن المجانس إلى التعليق ، وإضافة 1 0 مل من PBS ، ماصة تجانس الأنسجة ، واستخدام 0.074 مم من شبكة النايلون ذات المسام التي تم ترشيحها في أنبوب الاختبار ، وطردها مركزيًا في 1 500 ص دقيقة-1لمدة 3 دقائق ، وغسل الراسب ثلاث مرات باستخدام PBS ، في كل مرة عند 500 دورة دقيقة-1جهاز طرد مركزي منخفض السرعة على المدى القصير لإزالة بقايا الخلايا ، 0 مرشح شبكي نايلون شبكي بحجم مسام 037 مم لإزالة كتل الخلايا. عد الخلايا واضبط تركيز الخلية إلى 2 × 109 خلية · L.-1. وصمة عار بمحلول تلطيخ 1 مل PI ، يحفظ من الضوء عند 4 درجات لمدة 10 دقائق.
3) إعداد قسم سامسونج: لإعداد قسم الأنسجة الرقيقة ، راجع الأدبيات [6].
2 النتائج والتحليل
الشكل 1 موت الخلايا المبرمج لنموذج الفئران BPH والعمل الناجم عن الأكتيوسايد
أ. مجموعة عادية ب. مجموعة نموذجية ج. مجموعة جرعة عالية من Acteoside. د. مجموعة جرعة منخفضة من Acteoside
2. 1 تأثير أكتيوسيد على موت الخلايا المبرمج لبروستات الفئران
يوضح الشكل 1 ذروة موت الخلايا المبرمج التي تم اكتشافها بواسطة قياس التدفق الخلوي ، مما يدل على أن الأكتوزيد له تأثير مؤيد لموت الخلايا المبرمج. أظهر التحليل الإحصائي لنتائج موت الخلايا المبرمج أن معدل موت الخلايا المبرمج للخلايا قد زاد بشكل ملحوظ (24.7 ± 1.85) بالمائة و (16.1 ± 1. 0 4) بالمائة بعد العلاج بجرعات عالية ومتوسطة ومنخفضة من أكتيوسيد. ، (14.5 ± 0. 68) بالمائة ، والمجموعة العادية (1.1 ± {{2 0}. 06 بالمائة ، مجموعة النماذج (9.5 ± 0.5) بالمائة ، مجموعة موجبة (9.83 ± 0.76) الفرق في النسبة المئوية للمقارنة معنوي (P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">
التين. 2 راديو موت الخلايا المبرمج في نموذج الفئران BPH و effection of acteoside
2.2 تأثير أكتيوسيد على البنية التحتية لخلايا تضخم البروستاتا.
تظهر ملاحظات المجهر الإلكتروني أن البروستاتا الطبيعي لديها نوى كاملة ، ومن الواضح أن النوى ، وتوزيع الكروماتين النووي المنتظم ؛ الشبكة الإندوبلازمية الخشنة لها نفس الحجم ، وهي مرتبة بدقة ، ولا تحتوي على فجوة. لا توجد ميكروفيلي تشبه الإصبع على سطح الظهارة ، ولا يوجد تورم في الميتوكوندريا ، وقليل من الإفرازات في التجويف. كانت نوى خلايا البروستاتا في المجموعة النموذجية مشوهة ومنكمشة ، وكان السيتوبلازم وفيرًا. تم توسيع الشبكة الإندوبلازمية الخشنة في شكل يشبه الكيس ، وتم ملء الكيس بجزيئات بروتينية عالية الكثافة. كانت الميتوكوندريا منتفخة قليلاً (كانت هناك فجوات أيضًا) ، وهناك إفرازات متوسطة الكثافة في التجويف ، وتم العثور على حبيبات إفراز دائرية كثيفة في بعض الخلايا. في الفئران التي عولجت بالأكتوزيد ، كانت النواة سليمة مقارنة بالمجموعة النموذجية. تم تركيز النواة ، وزيادة الكثافة النووية ، وتراكم الكروماتين المغاير ، ووجود فجوات في السيتوبلازم ، وتقليل الفجوات الشبكية الإندوبلازمية الخشنة. كان لدى مجموعة الجرعات المنخفضة من أكتيوسيد تقلص النوى المتجعد قليلاً ، والسيتوبلازم غير المنتظم ، والأكثر ثراءً ، والشبكة الإندوبلازمية الخشنة (الشكل 3).
فائدة cistanche:موت الخلايا المبرمج
3 مناقشة
موت الخلايا المبرمج هو عملية موت الخلايا المبرمج في الكائنات متعددة الخلايا التي تنظم تطور الجسم وتحافظ على استقرار البيئة الداخلية ، وتحدده الشفرات الجينية.
تتميز الخلايا الأبوطوزية بخصائصها المورفولوجية والبيولوجية الفريدة: انكماش الكروماتين النووي ، وتدهور وتفتيت الحمض النووي على نطاق واسع ، وانكماش الخلايا على نطاق واسع ، وانكماش أغشية الخلايا والنتوءات الخارجية التي تغطي العضيات (مثل الميتوكوندريا والريبوزومات) ، وتشكيل خصائص نووية مميزة شظايا أجسام موت الخلايا المبرمج ، لا تحتفظ الخلايا المبرمجية ببنية ووظيفة غشاء الخلية الكاملة فحسب ، بل تمتلك أيضًا بنية كاملة من العضيات ، والتي تختلف عن نخر الخلية.
لم يتم توضيح الآلية الجزيئية لموت الخلايا المبرمج بشكل كامل حتى الآن. أظهرت الدراسات [7] أن هناك العديد من الجينات المشاركة في التنظيم الجيني لموت الخلايا المبرمج.
موت الخلايا المبرمج هو عملية تضخم البروستاتا الحميد التي تجذب المزيد من الاهتمام حاليًا. يتم تحديده عن طريق الترميز الجيني ويمكّن الخلايا من التحكم في موت الخلايا من خلال الاستجابة لإشارات محددة [1]. بعد تطور البروستاتا إلى حجم البالغين ، يتم الحفاظ على معدل تكاثر خلايا البروستات عند 1٪ إلى 2٪ من خلال توازن معدل موت الخلايا المبرمج. لطالما اعتبر تدمير هذا التوازن سبب تضخم البروستاتا الحميد [8]. في ظل الظروف العادية ، يعتبر مستوى هرمون الاستروجين والأندروجين والدورة الدموية المنتظمة في البروستات نوعًا من حالة التوازن الذاتي الموجودة في عملية الانتشار والاستماتة. عندما يكون التكاثر والاستماتة غير متوازنين ، سيؤدي ذلك إلى نمو وتوسع الغدد بشكل أكبر ، ويرجع ذلك أساسًا إلى توسع حجرة الخلايا الظهارية [9]. قد يكون انقطاع هذا التوازن بسبب التغيرات في مستويات الأندروجين أو وظائفه ؛ قد يكون أيضًا بسبب أي استجابة ناتجة عن تحفيز AR لـ DHT أو تغييرات في مستويات عامل النمو بوساطة DHT [2]. في هذه الدراسة ، اكتشف FCM موت الخلايا المبرمج الخلوي ووجد أن معدل موت الخلايا المبرمج لخلايا البروستاتا في الفئران عند إعطاء جرعات عالية من الأكتوزيد زاد بشكل ملحوظ. أظهرت نتائج الفحص المجهري الإلكتروني أن نوى خلايا البروستات في المجموعة النموذجية كانت مشوهة ، وأن الشبكة الإندوبلازمية الخشنة تمدد بشكل كبير في شكل يشبه الكيس ، وتم ملء الكيس بجزيئات بروتينية عالية الكثافة ، وتم العثور على فجوة. كانت الميتوكوندريا منتفخة بشكل خفيف ، والدراسات ذات الصلة [10-11] التقرير متسق.
بعد تدخل أكتيوسيد ، كانت درجة تضخم البروستاتا في الفئران أقل. أظهرت مجموعة الجرعات العالية أيضًا علامات مبكرة على موت الخلايا المبرمج: ظلت نواة خلايا البروستاتا سليمة ، وكانت فجوات الشبكة الإندوبلازمية أقل بشكل ملحوظ. تكثف النوى ، زيادة الكثافة النووية ، تراكم الكروماتين المغاير ، مشابه لتوصيف خلايا أنسجة البروستاتا في الفئران بعد الإخصاء [12-13]. يظهر أن acteoside منcistancheيمكن أن يحفز موت الخلايا المبرمج في الفئران المصابة بتضخم البروستاتا ، وينظم ويعيد توازن خلايا البروستاتا وتكاثرها ، ويلعب دورًا في منع تكاثر خلايا البروستاتا. تشير نتائج هذه الدراسة والدراسات السابقة [14] إلى أن التأثير المثبط للأكتيوسايد ، وهو مكون كيميائي لـCistanche tubulosa، على تضخم البروستاتا قد يكون مرتبطًا بتعزيز موت الخلايا المبرمج ، والحد من AR و TGF-UR1 المفرط. لا تزال آلية العمل التفصيلية بحاجة إلى مزيد من الدراسة.
فائدة Cistanche: تحسين المناعة
مراجع:
[1] جياكومو إن ، أنطونيو جي ، را فا إل بي بي ، وآخرون. التهاب ، موت الخلايا المبرمج ، و BPH ، ما هو الدليل [J]. مكملات المسالك البولية الأوروبية ، 2006 (5): 401-408.
[2] ابن السيارة IC ، Rittmaster R. دور ثنائي هيدروتستوستيرون في تضخم البروستاتا الحميد [J]. طب المسالك البولية ، 2003 ، 61: 2-7.
[3] شو شويون ، بيان جوليان ، تشين يوكسيو. منهجية التجربة الدوائية [م]. الطبعة الثالثة. بكين: دار النشر الطبية الشعبية ، 2002: 1552-1553.
[4] Zhai Qiwei و Ji Hongbin و Yan Mingda وآخرون. استخدام نظام التعبير المحرض tet-off لدراسة وظيفة Akt [J]. نشرة العلوم الصينية ، 2000 ، 45 (16): 1738-1741.
[5] Xia Anzhou و Xing Shuhua و Zhu Xuewen وآخرون. دراسة مقارنة حول طرق تحضير المعلق وحيدة الخلية للنسيج الكلوي [J]. مجلة كلية Xuzhou الطبية ، 2004 ، 24 (1): 50-53.
[6] صن يون ، وانج ديجون ، وليو شياومي ، وآخرون. التغييرات في البنية التحتية الرئوية في الفئران التجريبية الشيخوخة وتأثير Cistanche deserticola polysaccharide [J]. نشرة علم الأدوية الصينية ، 2002 ، 18 (1): 84-87.
[7] ليو تشينغ مينغ ، لو مينجزهي. تقدم البحث في التسبب في تكاثر خلايا تضخم البروستاتا الحميد وموت الخلايا المبرمج [J]. Jiangxi Medical Laboratory Science، 2005 ، 23 (2): 141-143.
[8] Sharia t SF، Ashfaq R، Roehrborn CG، et al. التعبير عن المؤشرات الحيوية الناجين والاستماتة في فرط البروستاتا الحميد [J]. J Urol، 2005، 174: 2046-2050.
[9] Unter G، Madersbacher S، Berg er P. تضخم البروستاتا الحميد: إعادة تشكيل الأنسجة المرتبطة بالعمر [J]. Exp Gerontol، 2005، 40: 121-128.
[10] زينج هينج ، شاو تشونلي ، تشيان جياكينج. التأثير المثبط لهيدروكلوريد على تضخم البروستاتا في الفئران [J]. مجلة جامعة تونغجي الطبية ، 1999 ، 28 (3): 227-229.
[11] Zhong Wei، Qiu Shudong، Jiang Sailing. التغيرات المورفولوجية لتضخم البروستاتا الحميد والاختلاف في تعبير ARmRN A [J]. مجلة جامعة شيان الطبية ، 1999 ، 20 (2): 145-149.
[12] نيو يوانجي ، دونج كيكوان ، باي جينجوين ، وآخرون. التغيرات المرضية الديناميكية في البروستاتا النابية بعد الإخصاء [J]. المجلة الصينية لجراحة المسالك البولية ، 1998 ، 19 (7): 429-433.
[13] Ye Zhangqun و Lan Ruzhu و Zhou Yusheng وآخرون. التغيرات الديناميكية في البنية المجهرية للبروستاتا البطني للجرذ بعد الإخصاء [J]. المجلة الصينية لجراحة المسالك البولية ، 2001 ، 22 (8): 468-472.
[14] صن ويدونغ ، تشن فاي ، صن يون. التأثير المثبط لأكتيسيد على نموذج تضخم البروستاتا الحميد التجريبي [J]. مجلة جامعة يانغتشو: الزراعة وعلوم الحياة
إصدار 2008 ، 29 (3): 55-58.