يلعب الجلد دورًا حيويًا في تعديل درجة حرارة الجسم وإدراك الألم والضغط

الرجاء التواصلoscar.xiao@wecistanche.comللمزيد من المعلومات

نبذة مختصرة

خلفية:الفاصوليا الخضراء للقهوة العربية L. العائلة: تعتبر الياقوت مصدرًا غنيًا بالبوليفينول الذي يمنع الضرر التأكسدي للجلد. في هذه الدراسة ، تمت صياغة الليبوزومات كناقلات للأدوية لتعزيز نفاذية الجلد لمادة البوليفينول للإعطاء الموضعي. المواد والطرق: تم تحضير مستخلصات حبوب البن الخضراء من خلال تغيير نسب الميثانول والماء. تم إجراء التحليل الكيميائي النباتي وتقييم مضادات الأكسدة في المختبر على جميع المستخلصات لاختيار أفضل مستخلص لمزيد من الدراسات. تم تقييم إمكانات السمية الخلوية (مقايسة MTT) والنشاط المضاد للإيلاستاز للمستخلص المختار على خطوط الخلايا L929 باستخدام مقياس التدفق الخلوي. تم تحضير الجسيمات الشحمية للمستخلص بطريقة الترطيب بالغشاء الرقيق وتم تحسينها عن طريق تغيير نسبة الفوسفاتيديل كولين إلى نسبة الكوليسترول وزيادة كمية المستخلص تدريجيًا. تم تحويل الصيغة الدهنية إلى هلام باستخدام كربوبول "974P كعامل تبلور. تم تقييم المعلق الدهني المحضر والهلام الدهني لمعايير الصياغة المختلفة. النتائج: نتائج التحليل الكيميائي النباتي ، مقايسات مضادات الأكسدة في المختبر ، والتقييم في المختبر على استنتجت سلالات الخلايا L929 أن 25٪ من المستخلص الميثانولي غير سام مع أعلى محتوى فينولي وأظهر نشاطًا جيدًا مضادًا للإيلاستاز. بلغت كفاءة تغليف حمض الكلوروجينيك في الصيغة الدهنية المحسنة 75٪. أظهر الجل الشحمي إطلاقًا مستدامًا للدواء لمدة تصل إلى 12 hr مقارنةً بـ 6-7 ساعة من الصيغة التقليدية. الخلاصة: قد يعمل الجل المحتوي على مادة دهنية محمل بمستخلص حبوب البن الأخضر كحامل محتمل للتأثيرات المضادة للشيخوخة.

الكلمات الدالة:حبوب البن الخضراء (GCB) ، حمض الكلوروجينيك ، خلاصة الجسيمات الشحمية ، مضادات الأكسدة ، مضاد للشيخوخة.

المقدمة

يلعب الجلد دورًا حيويًا في تعديل درجة حرارة الجسم ، وإدراك الألم والضغط ، ويعمل كحاجز حاسم ضد التلوث البيئي مما يجعل شيخوخة الجلد واضحة جدًا. يؤدي الجلد إلى تطور الشيخوخة الضوئية ، وحروق الشمس ، وتكوين الميلانين ، وكبت المناعة ، والتسرطن الضوئي .² الجذور الحرة هي جزيئات أكسجين شديدة التفاعل تعمل في تكوين روابط متقاطعة مع جزيئات الكولاجين مما يؤدي إلى فقدان مرونة الجلد. ترقق وجفاف وبقع على الجلد. وبالتالي ، مع الرغبة في المظهر الشاب ، هناك طلب كبير على المنتجات المضادة للشيخوخة. اكتسبت مضادات الأكسدة من أصل عشبي أهمية في صناعة مستحضرات التجميل. تساعد مضادات الأكسدة في إصلاح ومنع الأضرار التأكسدية التي تسببها الجذور الحرة. يرجع النشاط المضاد للأكسدة للأعشاب بشكل رئيسي إلى خصائص الأكسدة والاختزال للمركبات الفينولية.

تعتبر حبوب البن الأخضر (Coffea arabica L ، Rubiaceae) مصدرًا غنيًا للبوليفينول مثل حمض الكلوروجينيك والمركبات المرتبطة به مثل حمض الكافيك وحمض الكوماريك وحمض الفيروليك التي تمنع الجلد من الأكسدة. أظهرت الدراسات أن مستخلصات كافيا ارابيكا تحتوي على مضادات للبكتيريا ، 5 مضادات للفيروسات ، 6 مضادات للالتهابات ، 7 التئام الجروح الجلدية ، وتقليل الضرر التأكسدي للجزيئات الكبيرة؟ والنشاط القمعي لتعبير البروتين المعدني 10

حمض الكلوروجينيك ، مركب البوليفينول الرئيسي لحبوب القهوة الخضراء ، له خصائص مضادة للأكسدة ومزيل التصبغ ويمنع تلف الجلد الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية. I2 وفقًا للدراسات العلمية ، تحتوي حبوب البن الخضراء على كمية أعلى من حمض الكلوروجينيك مقارنة بحبوب البن المحمصة والنباتات الأخرى. "3

الرجاء الضغط هنا لمعرفة المزيد

يعتبر توصيل مادة البوليفينول عبر الجلد غير فعال بسبب تغلغلها المحدود. وبالتالي فإن قاعدة التركيبة أو معززات الاختراق التي تعزز تغلغلها مطلوبة. "لذلك تم اختيار الجسيمات الشحمية كناقلات للأدوية لأنها ذات طبيعة برمائية ويمكن بسهولة دمج الجزيئات المحبة للماء في الطبقات الثنائية متحدة المركز. - سامة بطبيعتها. إن وجود الدهون الفسفورية في الجسيمات الشحمية يحسن الامتصاص الموضعي للدواء من البشرة إلى الطبقات السفلية بسبب زيادة الالتصاق بمركب الفسفوليبيد على الجلد. هلام يحتوي على الجسيمات الشحمية المحملة بمستخلص حبوب البن الأخضر لاستخدامه كتركيبة تجميلية مضادة للأكسدة للتأثيرات المضادة للشيخوخة.

المواد والطرق المواد

تم الحصول على حبوب البن الأخضر أرابيكا L من السوق المحلي في مومباي في أغسطس 2019 وتم اعتمادها من قبل الدكتور هارشاد إم بانديت. رئيس سابق وأستاذ مشارك في علم النبات ، كلية جورو ناناك خالسا ، مومباي ، الهند. تم شراء الفوسفاتيديل كولين من HiMedia Laboratories Pvt Ltd ، وتم شراء الكوليسترول بنسبة 99 بالمائة من Loba Chemie Pvt Ltd ، 2 ، 2- diphenyl -1- picrylhydrazyl (DPPH) ، وتم شراء حمض الكلوروجينيك من Otto Chemie Pvt Ltd ، مومباي . تم شراء حمض الجاليك وحمض الأسكوربيك من SD Fine Chemicals Ltd ، مومباي. جميع المواد الكيميائية المستخدمة في هذه الدراسة كانت من فئة AR. تم إنتاج الجسيمات الشحمية باستخدام مبخر دوار ، Rotaeva ، Equitron ، ومقياس الطيف الضوئي المرئي للأشعة فوق البنفسجية ، تم استخدام Shimadzu 1800 لتقييم الجسيمات الشحمية.

يمكن للكيستانش مكافحة الشيخوخة

طُرق

منهجية الاستخراج

تمت إزالة الدهن عن حبوب البن الخضراء المجففة باستخدام الأثير البترولي 40-60 بدرجة (1: 6 بالمائة وزن / حجم) لمدة 3 ساعات في جهاز soxhlet. تم استخلاص مسحوق البن الأخضر منزوع الدسم بمذيبات مختلفة مثل الماء و 25 بالمائة ميثانول و 50 بالمائة ميثانول و 75 بالمائة ميثانول و 100 بالمائة ميثانول لمدة ساعتين باستخدام نظام سوكسليت. تم تركيز المستخلصات الناتجة في طبق من الخزف على حمام مائي كهربائي بدرجة 80 لإزالة المذيب. تم استخدام المستخلصات المعدة للتحليل النوعي والكمي.

إجمالي محتوى الفينول

تم تحديد إجمالي محتوى الفينول بواسطة طريقة كاشف Folin-Ciocalteu باستخدام الإجراء القياسي. تم استخدام حمض الجاليك كمعيار وتم التعبير عن محتوى البوليفينول الكلي على شكل مجم / جرام مكافئ لحمض الغال (GAE) من منحنى المعايرة لحمض الغال.

تراكب طيفي

تم استخدام طريقة القياس الطيفي للأشعة فوق البنفسجية لتحديد وجود حمض الكلوروجينيك في المستخلص. لتحضير المحاليل القياسية ، تم إذابة Img / ml من حمض الكلوروجينيك القياسي في محلول الفوسفات وتم تحضير مزيد من التخفيف للحصول على 10 ميكروغرام / مل من المحلول القياسي. بالنسبة لمحلول العينة ، تمت إذابة 25 بالمائة من 1 مجم / مل من المستخلص الميثانولي في محلول الفوسفات وتم تحضير مزيد من التخفيف للحصول على 10 ميكروغرام / مل من المحلول القياسي. تم الحصول على طيف تراكب لكلا المحلول باستخدام قياس الطيف الضوئي بالأشعة المرئية وفوق البنفسجية.

القياس الكمي لحمض الكلوروجينيك في كل مستخلص تحضير محلول معياري

تم إذابة حمض الكلوروجينيك القياسي في مذيبات مثل الماء ، و 25 بالمائة ميثانول ، و 50 بالمائة ميثانول ، و 75 بالمائة ميثانول ، و 100 بالمائة ميثانول. من أجل تقليل الخطأ في إجراء التحضير ، تم تحضير محلول حمض الكلوروجينيك 10 جزء في المليون في كل مذيب أعلاه ، ثم تم تحضير التخفيف المقابل الذي يتراوح من التركيز 2 إلى 10 جزء في المليون. تم عمل مخطط الخطي عن طريق تسجيل الامتصاصية عند 324 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV-Vis.

عينة تحضير الحل

لتحضير محلول العينة ، تم إذابة المستخلصات في المذيبات الخاصة بها وتم عمل محلول 10 جزء في المليون. تم تسجيل الامتصاصية لمحلول العينة عند 324 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV-Vis. تم استقراء الامتصاص الذي تم الحصول عليه في مخطط الخطي لإيجاد تركيز حمض الكلوروجينيك في كل مستخلص.

تحديد الأنشطة المضادة للأكسدة

PDF (2 ، 2- ثنائي فينيل -1- بيكريل هيدرازيل) مقايسة مضادات الأكسدة تم فحص نشاط الكسح الجذري للمستخلصات على جذور DPPH باتباع الطريقة القياسية. "تم استخدام حمض الأسكوربيك كمعيار. أجريت التجربة في ثلاث نسخ. تم رسم النسبة المئوية لنشاط الكسح الجذري DPPH مقابل كل تركيز مستخلص وتم تحديد IC. مقايسة مضادات الأكسدة بأكسيد النيتريك

تم التحقيق في نشاط الكسح الجذري لأكسيد النيتريك باستخدام تفاعل Griess Illosvoy.فقدت الإمبراطوريةl8 تم استخدام حمض الاسكوربيك كمعيار. وأجريت التجربة في ثلاث نسخ. تم رسم النسبة المئوية لنشاط الكسح الجذري لأكسيد النيتريك مقابل كل تركيز مستخلص وتم حساب تثبيط IC لكلتا الدراستين المضادتين للأكسدة باستخدام الصيغة المذكورة أدناه وتم التعبير عن نشاط الكسح كنسبة التثبيط المحسوبة باستخدام الصيغة التالية:

تم فحص تحديد قابلية بقاء الخلية بواسطة MTT Assay ، مستخلص حبوب البن الأخضر ، أي 25 بالمائة من المستخلص الميثانولي لدراسة السمية الخلوية مقابل خطوط الخلايا L929. 0 تم زرع 0 ماي من المعلق الخلوي في 96- طبق جيد مع كثافة الخلية (20 ، 000 خلية لكل بئر) ، بدون عامل الاختبار. تم السماح للخلايا بالنمو لمدة 24 ساعة تقريبًا. تمت إضافة تركيز مناسب لعامل الاختبار (25 بالمائة من المستخلص الميثانولي) ، وحضنت اللوحة لمدة 24 ساعة عند 37 درجة في 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون والجو ، وتمت إزالة الوسائط المستهلكة. تمت إضافة كاشف MTT إلى تركيز نهائي قدره (0.5 مجم / مل) من الحجم الكلي وتم تحضين الألواح لمدة 2-3 ساعة في الظروف المظلمة. تمت إضافة 100 ميكرولتر من DMSO بعد إزالة كاشف MIT ورجها برفق. تم قياس الامتصاصية عند 570 نانومتر و 630 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي على قارئ ELISA. تم تحديد قيمة IC.o باستخدام معادلة الانحدار الخطي. الصيغ المستخدمة للدراسة:

تحديد نشاط مضاد الإيلاستاز

تمت زراعة الخلايا بكثافة 3 × 1 0 5 خلايا / 2 مل وحضنت في حاضنة أول أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة عند 37 درجة. 1 بالنسبة لدراسة مضادات الإيلاستاز ، تم استخدام الخلايا المعالجة بـ 25 0 uM epigallocatechin gallate (EGCG) كعنصر تحكم إيجابي ، حيث عولجت الخلايا بـ 2 0 0 ميكروغرام / مل من تم استخدام 25 في المائة من المستخلص الميثانولي كعينة اختبار (الجدول 6) ، واستخدمت الخلايا التي تحتوي على وسط استنبات فقط كعينة تحكم سلبية وتم تحضينها في 2 مل من وسط المزرعة لمدة 24 ساعة. تم طرد الأنابيب لمدة خمس دقائق عند 300x جم عند 25 درجة وتم غسل الخلايا باستخدام PBS. تمت إضافة 0.5 مل من محلول BD Cytofix / Cytoperm بعد إزالة برنامج تلفزيوني وتم الاحتفاظ بالأنابيب دون إزعاج لمدة 10 دقائق 0.5 في المائة من ألبومين مصل الأبقار (BSA) في 'S [PO OU] USEM Ol pes sem op عند النسبة المئوية IO pue SEd 20 ميكرولتر من Mouse Anti-Human Neutrophil Elastase / ELA2 Alexa Fluor® 647- تمت إضافة الجسم المضاد أحادي النسيلة المترافق وخلطه واحتضانه لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة تحت ظروف مظلمة. عولجت الخلايا بـ 0.1٪ أزيد الصوديوم و 0.5 مل من PBS وتم تحليلها بواسطة Flow Cytometry بإثارة وانبعاث 650 نانومتر و 668 نانومتر على التوالي. في هذه الدراسة ، تم استخدام مركبات الاختبار وهي مستخلص حبوب البن الأخضر (25 بالمائة من خلاصة الميثانول) و Epigallocatechin gallate القياسي (EGCG) لتقييم تأثيرها على ELA -2 (جسم مضاد للإيلاستاز المترافق مع الإنسان) في خلية L929 خطوط.

تحضير مستخلص حبوب البن الأخضر المحمل بالجسيمات الشحمية

تم استخدام طريقة ترطيب الأغشية الرقيقة كما وصفها Bangham et al. 1 درجة لصياغة الجسيمات الشحمية. تم تحضير خليط الدهن بإذابة فوسفاتيديل كولين وكوليسترول في كلوروفورم وميثانول (2: 1) في دورق سفلي دائري (RBF) وأضيفت حبيبات زجاجية لتشكيل غشاء متجانس. تم إرفاق RBF بمبخر فلاش دوار (معادلة Roteva) وسمح له بالدوران عند 80 دورة في الدقيقة / دقيقة في حمام مائي منظم الحرارة عند 40 درجة. تمت إزالة المذيبات العضوية عن طريق التطبيق البطيء للفراغ مما يؤدي إلى تكوين غشاء دهني متجانس بنسبة 100٪ على جدران القارورة. تم السماح للفيلم ليجف لـ LH للإزالة الكاملة للمذيبات العضوية. تم ترطيب فيلم الدهن المجفف بمحلول فوسفاتي (درجة الحموضة: 5.4) يحتوي على مستخلص مذاب (25 بالمائة من مستخلص الميثانول) ثم تم تدوير RBF عند 150 دورة في الدقيقة / دقيقة في حمام مائي مُحافظ على درجة حرارة 46 أعلى من درجة حرارة الانتقال من الدهون. استمر الدوران لمدة 60 دقيقة حتى تم الحصول على التعليق المتجانس. تكون الجسيمات الشحمية المنتجة باستخدام هذه الطريقة كبيرة وغير متجانسة في الحجم ، وبالتالي تم استخدام طريقة صوتنة الحمام لمدة 30 دقيقة لتقليل حجم الجسيمات الشحمية. تم السماح للمعلق الشحمي المستند إلى مستخلص حبوب البن الأخضر بالوقوف لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة لضمان الترطيب الكامل. تم تخزين المعلق الشحمي في زجاجة زجاجية بلون العنبر في الثلاجة لحين استخدامها مرة أخرى.

توصيف الجسيمات الشحمية

فيما يلي المعلمات التي تم من أجلها توصيف الجسيمات الشحمية المحضرة

تم استخدام مقياس الطيف الضوئي UV-Vis لكفاءة التغليف لتقدير كفاءة التغليف لحمض الكلوروجينيك في الجسيمات الشحمية المحملة بمستخلص حبوب البن الأخضر. تم قياس امتصاص حمض الكلوروجينيك المتبقي في المادة الطافية بعد الطرد المركزي عند 324 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV-Vis.استخدامات الفلافونويد المنقى المجهرية 1000 مجمثم تم حساب التركيز من مخطط المعايرة الذي تم الحصول عليه لحمض الكلوروجينيك القياسي.

إجمالي كمية الدواء المضافة إلى الفحص المجهري البصري

تم وضع قطرة من التعليق الشحمي على شريحة زجاجية نظيفة ولوحظت تحت قوة 45X و 100X من المجهر الضوئي (Motic microscope). تحديد حجم الحويصلة ، مؤشر التشتت المتعدد (PDI) ، وإمكانات زيتا

تم تحليل حجم الحويصلة ومؤشر التشتت المتعدد باستخدام أداة تشتت الضوء الديناميكي مع نظام فحص محوسب (محلل حجم الجسيمات Malvern). تم تخفيف دفعات الليبوزومات المحضرة حديثًا بنسبة 1: 1 0 0 بالماء منزوع الأيونات. تم إجراء جميع القياسات في ثلاث نسخ عند 25 ± 0.5 درجة. تم تخفيف المعلق الشحمي بالماء منزوع الأيونات وتم تحديد جهد زيتا باستخدام Malvern Zetasizer.

تم إجراء تحليل المجهر الإلكتروني للإرسال (TEM) لتحليل التعليق المحمل بالدواء عن طريق المجهر الإلكتروني للإرسال (Tecnai T20 ، 200Kev ، FEI). تم وضع قطرة من التعليق بمساعدة ماصة مجهرية على الشبكة. تم تجفيف الشبكة جيدًا. تم قصف الشبكة المجففة التي تحتوي على العينة بالإلكترونات المتسارعة عند 200 VK. ثم تم تصور حجم الحويصلة والتشكل الشحمي بواسطة TEM تحت الفراغ (الشكل 1). تحضير الجل الشحمي

تم تحضير جل شحمي محمل بمستخلص حبوب البن الأخضر باستخدام قاعدة جل كاربوبول @ 974P. بدقة 0. تم ​​وزن 5 بالمائة من carbopol @ 974P وحفظها لترطيبها في ماء مقطر مزدوج يحتوي على مواد حافظة طوال الليل. الكريات الشحمية التي تم الحصول عليها بعد الطرد المركزي تم تشتيتها في الماء المقطر عن طريق الصوتنة وإضافتها إلى محلول الكاربوبول المائي مع التقليب. تم إحداث التبلور عن طريق التحييد باستخدام ثلاثي إيثانولامين (TEA). تم تقييم الجل من حيث اللون ، والملمس (النعومة والشحوم) ، ودرجة الحموضة ، واللزوجة ، ومحتوى الدواء ، وقابلية الانتشار ، ودراسة الإفراج عن الدواء.

دراسة إطلاق الدواء في المختبر

تم استخدام جهاز خلايا انتشار فرانز بسعة حجرة مستقبلات تبلغ 22 مل ومساحة سطح تبلغ 3.91 سم 2 لتقدير غشاء غسيل الكلى الذي يتم إطلاقه في المختبر (الوزن الجزيئي المقطوع 12 ، 000-14 ، 000) والذي تم ترطيبه مسبقًا عن طريق النقع في المخزن المؤقت طوال الليل على الخلايا. تم استخدام عازلة الفوسفات الرقم الهيدروجيني 5.4 (37 درجة ± 0. 5 درجة) كسائل المستقبل. تم تقليب محلول الخزان عند 1 0 0 دورة في الدقيقة / دقيقة باستخدام حبة مغناطيسية. تم وضع 0.5 جرام من الجل في الحيز المانح على الغشاء. تم جمع قسامات على فترات 1 ، 2 ، 3 ، 4 ، 5 ، 6 ، 7 ، 8 ، 12 ، 24 ساعة وتحليلها بواسطة مقياس الطيف الضوئي UV-Vis عند 324 نانومتر.

النتائج والمناقشة منهجية الاستخراج

يتم عرض النسبة المئوية لإنتاجية مستخلصات حبوب البن الأخضر أرابيكا L. في الجدول 3. كان المظهر المادي لجميع المستخلصات أصفر داكن وبني داكن اللون. أظهرت نسبة 25٪ من المستخلص الميثانولي أعلى نسبة إنتاجية عند 26.54 ± 0 13 مقارنة بجميع المستخلصات الأخرى.

إجمالي محتوى الفينول

تم استخدام طريقة Folin-Ciocalteu لتقدير المحتوى الفينولي الكلي لجميع المستخلصات. يتم التعبير عن TPC لجميع المستخلصات من حيث مكافئ حمض جاليك (معادلة المنحنى القياسية: y=0. 0 031 زائد 0.3477 ، r 2=0. 9953) المذكورة في الجدول 1. من بين جميع المستخلصات ، يقدر المحتوى الفينولي الرئيسي بنسبة 25 في المائة من المستخلص الميثانولي. التراكب الطيفي الكمي لحمض الكلوروجينيك في كل مستخلص تم ذكر كمية محتوى حمض الكلوروجينيك الموجود في كل مستخلص في الجدول 3 والشكل 2.oteflavonoidوفقًا للنتائج ، تم العثور على أعلى كمية من حمض الكلوروجينيك في 25 بالمائة من مستخلص الميثانول.

بناءً على النتائج التي تم الحصول عليها من المحتوى الفينولي الكلي ، والتقدير الكمي لحمض الكلوروجينيك ، ومقايسة مضادات الأكسدة ، وجد أن 25 بالمائة من المستخلص الميثانولي يحتوي على أعلى محتوى فينولي ، وكمية أكبر من حمض الكلوروجينيك ، ونشاط إزالة جذري قصوى مقارنة بالمستخلصات الأخرى.

تحديد قابلية الخلية للبقاء بواسطة مقايسة جدوى MTT هو اختبار يحدد قدرة الأنسجة أو الخلايا أو الأعضاء على الحفاظ على حالة البقاء على قيد الحياة أو استعادتها. اقترحت دراسة السمية الخلوية لمركب الاختبار ، مستخلص حبوب البن الأخضر مقابل خطوط الخلايا L929 في البيانات الإحصائية لدراسة السمية الخلوية للخلايا بواسطة قارئ ELISA ، أن مستخلص حبوب البن الأخضر أظهر خصائص محتملة للسمية الخلوية معتدلة مع تركيز مثبط （IC） عند 306.38 ميكروغرام / مل مقارنة بالمعيار القياسي عقار Camptothecin مع 23 ميكروغرام / مل الجدول 5. تشير الملاحظة بقوة إلى أن مستخلص حبوب البن الأخضر لا يحتوي على إمكانات سمية كبيرة للخلايا بتركيز يتراوح من 12. 5-200 ميكروغرام / مل على التوالي مع فترة حضانة 24 ساعة عند 37 درجة (الرسم البياني 1).

تحديد نشاط مضاد الإيلاستاز

إن إنزيم الإيلاستاز قادر على تكسير الإيلاستين ، وهو بروتين ليفي مرن غير قابل للذوبان يساهم مع الكولاجين في القوة الميكانيكية للنسيج الضام. اقترحت العديد من الدراسات أن كلا من شيخوخة الجلد وتأثيرات مكافحة التجاعيد تتوافق بشكل كبير مع انخفاض نشاط الإيلاستاز. ومن ثم أجريت دراسات حول مضادات الإيلاستاز لتأكيد فائدة مستخلص حبوب البن الأخضر كعامل مضاد للشيخوخة. في هذه الدراسة ، تم استخدام مركب الاختبار وهو مستخلص حبوب البن الأخضر و Std و EGCG لتقييم تأثيرهما على تعبير ELA -2 (جسم مضاد للإيلاستاز المترافق مع الإنسان) في خط الخلية L929. كانت تراكيز المركبات المستخدمة في التجربة على النحو التالي:

قام مستخلص حبوب GC المركب الاختباري بإيقاف تعبير ELA -2 في سطر الخلية L929. انخفضت قيم متوسط ​​شدة التألق النسبية لـ ELA -2 بشكل مماثل تقريبًا في std و Epigallocatechin gallate ومستخلص حبوب البن الأخضر المركب الاختباري. (الجدول 7 ؛ الشكل 3 والرسم البياني 1). وبالتالي ، يمكن اعتبار حبوب GC عاملًا جيدًا لمكافحة الإيلاستاز. تحضير مستخلص حبوب البن الأخضر المحمل بالجسيمات الشحمية

في هذه الدراسة تم استخدام طريقة ترطيب الأغشية الرقيقة لتكوين الجسيمات الشحمية.البيوريتان فيتامين جسبب اختيار هذا

هذه الطريقة هي أبسط طريقة لتحضير الحويصلات متعددة الطبقات وقادرة على تحميل كتلة أكبر من الجزيئات المحبة للماء مثل حمض الكلوروجينيك مقارنة بالحويصلات أحادية الطبقة. تم العثور على طريقة ترطيب الأغشية الرقيقة لإعطاء 75 بالمائة من كفاءة التغليف لحمض الكلوروجينيك الموجود في جدول المستخلص 2. وبالتالي ، تم استخدام هذه الطريقة لتحضير الجسيمات الشحمية.

توصيف المجهر البصري للجسيمات الشحمية

لوحظ بوضوح الحويصلة متعددة الطبقات (الشكل 4). تم استخدام الملاحظات المجهرية لتقييم شكل وحجم الحويصلات المذكورة لجميع الدُفعات المعدة.

تحديد مؤشر التشتت المتعدد (PDI) ، إمكانات زيتا ، وحجم الحويصلة

يظهر PDI أساسًا لتوزيع حجم الحويصلات في عينة معينة.سيستانشتبدأ القيمة العددية لـ PDI من {{0}. 0 (حجم جسيم موحد تمامًا) إلى 1.1 (حجم جسيم متعدد التشتت للغاية). في حالة الأنظمة الحاملة القائمة على الدهون مثل الجسيمات الشحمية و nanoliposomes بحجم 0.3 وما دون مقبولة لأنها تشير إلى وجود مجموعة متجانسة من حويصلات الفوسفوليبيد. تعتبر القيمة من -30 mV إلى زائد 30mV بشكل عام ذات قوة دافعة كافية لتحقيق استقرار غرواني فيزيائي أفضل.

طريقة ترطيب الأغشية الرقيقة تعطي حويصلات متعددة الطبقات كبيرة وغير متجانسة. كشف تحليل حجم الجسيمات الشحمية المنتجة عن متوسط ​​حجم z (d.nm) يبلغ 864. 2 نانومتر ، PDI يبلغ 0. 375 ، و Zeta Potential of -12. 4 مع جيد كفاءة فخ.

أظهر التحليل المجهري الإلكتروني للإرسال (TEM) التحاليل المورفولوجية لهذه الجسيمات الشحمية بواسطة TEM جسيمات شحمية كروية الشكل. تحضير الجل الشحمي

تم خلط المشتت الشحمي ببساطة مع البوليمر لإعطاء المواد الهلامية المقابلة. تعتبر تركيبة الهلام الشحمي مفيدة حيث يمكن تجنب اندماج الحويصلات بشكل فعال أو التقليل منه لأن البوليمر يعمل كفاصل بين الجسيمات الشحمية. وبالتالي ، لا يتأثر حجم الحويصلة لأنها عملية تفاعل البوليمر / الجسيمات الشحمية الخاضعة للرقابة. لم يتم اختيار تركيبة القشدة الدهنية حيث تم الإبلاغ عن مشكلات الاستقرار في المنتجات القائمة على المستحلب بسبب الطريقة لأنها أبسط طريقة لتحضير الحويصلات متعددة الطبقات وقادرة على تحميل كتلة أعلى من الجزيئات المحبة للماء مثل حمض الكلوروجينيك مقارنة مع حويصلات أحادية الطبقة. تم العثور على طريقة ترطيب الأغشية الرقيقة لإعطاء 75 بالمائة من كفاءة التغليف لحمض الكلوروجينيك الموجود في جدول المستخلص 2. وبالتالي ، تم استخدام هذه الطريقة لتحضير الجسيمات الشحمية.

توصيف المجهر البصري للجسيمات الشحمية

لوحظ بوضوح الحويصلة متعددة الطبقات (الشكل 4). تم استخدام الملاحظات المجهرية لتقييم شكل وحجم الحويصلات المذكورة لجميع الدُفعات المعدة.

تحديد مؤشر التشتت المتعدد (PDI) ، إمكانات زيتا ، وحجم الحويصلة

يظهر PDI أساسًا لتوزيع حجم الحويصلات في عينة معينة. تبدأ القيمة العددية لـ PDI من {{0}. 0 (حجم جسيم موحد تمامًا) إلى 1.1 (حجم جسيم متعدد التشتت للغاية). في حالة الأنظمة الحاملة القائمة على الدهون مثل الجسيمات الشحمية و nanoliposomes بحجم 0.3 وما دون مقبول لأنه يشير إلى مجموعة متجانسة من حويصلات الفوسفوليبيد. تعتبر القيمة من -30 mV إلى زائد 30mV بشكل عام ذات قوة دافعة كافية لتحقيق استقرار غرواني فيزيائي أفضل. 2

طريقة ترطيب الأغشية الرقيقة تعطي حويصلات متعددة الطبقات كبيرة وغير متجانسة. كشف تحليل حجم الجسيمات الشحمية المنتجة عن متوسط ​​حجم z (d.nm) يبلغ 864. 2 نانومتر ، PDI يبلغ 0. 375 ، و Zeta Potential of -12. 4 مع جيد كفاءة فخ.

أظهر التحليل المجهري الإلكتروني للإرسال (TEM) التحاليل المورفولوجية لهذه الجسيمات الشحمية بواسطة TEM جسيمات شحمية كروية الشكل.

تحضير الجل الشحمي

تم خلط المشتت الشحمي ببساطة مع البوليمر لإعطاء المواد الهلامية المقابلة. تعتبر تركيبة الهلام الشحمي مفيدة حيث يمكن تجنب اندماج الحويصلات بشكل فعال أو التقليل منه لأن البوليمر يعمل كفاصل بين الجسيمات الشحمية. وبالتالي ، لا يتأثر حجم الحويصلة لأنها عملية تفاعل البوليمر / الجسيمات الشحمية الخاضعة للرقابة. لم يتم اختيار تركيبة الكريم الدهنية حيث تم الإبلاغ عن مشكلات الاستقرار في المنتجات القائمة على المستحلب بسبب

وجود خافض للتوتر السطحي والزيت الزائد الذي قد يتفاعل مع الحويصلات. يمكن التحكم بسهولة في الخصائص المختلفة مثل اللزوجة عن طريق تغيير تركيز البوليمر أو تغيير نوع البوليمر. وهكذا تم تحضير المواد الهلامية الدهنية لأنها تتغلب على مشكلة الثبات ، وتوفر إطلاقًا متحكمًا ، وسهلة التحضير ، ولها جاذبية جمالية مثل مستحضرات التجميل للعناية بالبشرة. 0. تبين أن 5 بالمائة وزن / وزن من carbopol @ 974P تتمتع بقوام جيد ومظهر سلس خالٍ من أي تجمعات. تم العثور على محتوى الدواء للجل الدهني 94.16 ± 1.3 مع لزوجة هلام في نطاق 13500 cps إلى 16500 cps وقابلية الانتشار حول 7-8 g.cm / s.

ملف إطلاق المخدرات في المختبر

الطبقة الخارجية من الجلد هي الطبقة القرنية وتتكون أساسًا من بروتين الكيراتين والدهون. تلعب الدهون بين الخلايا دورًا حيويًا في التحكم في الامتصاص عن طريق الجلد. قد تتفاعل الدهون بين الخلايا مع الدهون الفوسفورية الموجودة في الجسيمات الشحمية وبالتالي تسبب تورمًا في الدهون دون تغيير بنية الطبقة الثنائية المتعددة للطبقة القرنية. تسبب هذه الدهون المتورمة تراكم الدواء وتشكيل مستودع داخل الجلد. على الرغم من أن آلية الجسيمات الشحمية المطبقة موضعياً ليست مفهومة تمامًا ، إلا أن تكوين الدهون والشحنة السطحية والصفائح الدهنية تلعب دورًا مهمًا في التخلص من الأدوية. كشفت الدراسات أيضًا أن الولادة الموضعية تتأثر أيضًا بحجم الجسيمات الشحمية .24 تم إطلاق الدواء في المختبر باستخدام غشاء غسيل الكلى. أظهرت دراسة التحرر في المختبر=للجيل الدهني تأثير إطلاق مستدام لمدة تصل إلى 12 ساعة مقارنة بـ 7-8 ساعة من الجل التقليدي في الرسم البياني 2.

استنتاج

تم فحص مستخلصات البن الأخضر من حبوب أرابيكا لمعرفة المحتوى الفينولي الكلي ، وتقدير حمض الكلوروجينيك ، ومقايسة مضادات الأكسدة. بناءً على النتائج التي تم الحصول عليها من هذه الدراسات ، تم اختيار 25 بالمائة من المستخلص الميثانولي ليتم دمجه في الجسيمات الشحمية حيث أظهر أعلى محتوى فينولي وكمية أكبر من حمض الكلوروجينيك ونشاط مضاد للأكسدة أفضل. قبل دمج المستخلص في الجسيمات الشحمية ، تم فحصه لفحص MTT ومقايسة مضاد الإيلاستاز. بناءً على مقايسة MT ، لم يكن للمستخلص إمكانات سمية خلوية للخلايا ووفقًا لمقايسة مضاد الإيلاستاز ، كان للمستخلص نشاط مضاد للإيلاستاز. وبالتالي يمكن استخدام المستخلص لتكوين الجسيمات الشحمية المضادة للشيخوخة. تم تحضير الحويصلات متعددة الطبقات باستخدام طريقة الترطيب بالغشاء الرقيق. تتمتع الجسيمات الشحمية المحضرة بكفاءة تغليف جيدة واستقرار مادي أفضل. تمت صياغة المعلق الدهني المستند إلى المستخلص في هلام شحمي. وفقًا لدراسة إطلاق الدواء في المختبر ، أظهر الجل الشحمي تأثيرًا طويل الأمد لمدة تصل إلى 12 ساعة مقارنة بالجيل التقليدي. ومن ثم يمكن اعتبار الجسيمات الشحمية المحملة بمستخلص حبوب البن الأخضر بمثابة ناقل فعال للتسليم الموضعي مع إمكانية مكافحة الشيخوخة.

إعتراف

المؤلفون ممتنون ل Stellixir Biotechechnology و Bengaluru و Karnataka لمساعدتهم في إكمال دراسات اختبار MTT ومقايسة Anti-elastase ، ونشكر أيضًا حلول اختبار Sprint ، و Mumbai للتصوير TEM وكلية الصيدلة في الكلية SVKM للدكتور Bhanuben Nanavati من أجل تقديم أفضل التسهيلات لإجراء هذه الدراسة.

تضارب المصالح

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

الاختصارات:

TPC: إجمالي محتوى الفينول ؛ DPPH: 2 ، 2- ثنائي فينيل -1- بيكريلهيدرازيل ؛ GAE: مكافئ حمض الجاليك ؛ GC: قهوة خضراء ؛ GCB: حبوب البن الخضراء. ELA -2 (جسم مضاد للإيلاستاز المقترن بالفأر البشري): Neutrophil Elastase؛ EGCG: Epigallocatechin gallate ؛ PC: Phosphatidylcholine ؛ CH: الكوليسترول ؛ RBF: قارورة قاع مستديرة ؛ TEM: المجهر الإلكتروني للإرسال ؛ MTT: 3- (4، 5- diemthylthiazol -2- yl) -2، 5- diphenyl tetrazolium bromide؛ PDI: مؤشر التشتت المتعدد ؛ IC ": تركيز مثبط نصف أقصى.

تم استخلاص هذه المقالة من Desai and Mallya: تطوير مستخلص حبوب البن الخضراء المحملة بالجل الدهني المضاد للشيخوخة