التقييم السمي والتأثيرات الوقائية لمستخلص أوراق الإيثانول من نبات كاسيا سبيتابيليس DC على وظائف الكبد والكلى في الفئران المصابة ببلازموديوم بيرغي
Oct 30, 2023
1 المقدمة
حتى يومنا هذا، مشكلةالبلازموديوملا تزال المقاومة الطفيلية للأدوية المضادة للملاريا الموجودة تمثل مشكلة كبيرة للقضاء على الملاريا [1-3]. ولذلك، لا تزال الأبحاث مستمرة لاكتشاف مصادر جديدة للأدوية المضادة للملاريا، أحدها من النباتات الطبية.في الجسم الحيوفي المختبروقد استخدمت النماذج منذ فترة طويلة في الاختبارات المضادة للملاريا. وفي النصف الأخير من القرن العشرين،البلازموديوم بيرغيأوبلازموديوم يويليتم استخدامه لإصابة القوارض. في أثناء،P. بيرجيأصبح النوع الأكثر استخدامًا للدراسة في مرحلة الكبد، وخاصة تكوين التنويم المغناطيسي للتحقيق في تكرار الملاريا [5-7].
انقر هنا للحصول على التركيبة العشبية للسيستانش للكلى
أحد النباتات التقليدية في إندونيسيا، Cassia spectabilis DC من عائلة Caesalpiniaceae، تم إثباته تجريبيًا في المختبر ضد P. falciparum وفي علاج الملاريا في الجسم الحي ضد P. berghei [8، 9]، مما يشير إلى أن نبات C. spectabilis DC هو من المحتمل جدًا أن يتم تطويره بشكل أكبر كمرشح للأدوية المضادة للملاريا. ذكرت الأعمال السابقة أن اختبارًا على الجسم الحي على 90٪ من المستخلص الإيثانولي لأوراق C. spectabilis DC ضد P. berghei ANKA في الفئران BALB/c أظهر أن قيمة ED50 كانت 131.5 مجم/كجم من وزن الجسم [9]، وتم تصنيفها على أنها شديدة للغاية. نشاط جيد مضاد للملاريا [10].
علاوة على ذلك، تم اختبار المستخلص والكسور والكسور الفرعية والمركبات المعزولة لـ C. spectabilis DC في المختبر لأنشطتها المضادة للملاريا. *تم تحديد المركب النشط لهذا النبات بنجاح على أنه مركب مطابق لـ (-){{0}}هيدروكسي كاسين، وأظهر اختبار نشاطه المضاد للملاريا في المختبر انخفاضًا شديدًا في IC50 يبلغ 0.016 ميكروغرام/مل [ 11]، والذي يصنف على أنه نشاط قوي جدًا مضاد للملاريا [12].
استمرت الأبحاث على هذا النبات للتغلب على مقاومة أدوية الملاريا من خلال فحص سلامة وآثار تحسين مستخلص أوراق C. spectabilis DC على وظائف الكبد والكلى في الفئران المصابة بـ P. berghei ANKA. تم إجراء دراسات بحثية على نطاق واسع حول تأثير النباتات الطبية التي لها نشاط مضاد للملاريا على وظائف الكبد والكلى لدى الفئران المصابة بالطفيليات [13-16]، بالإضافة إلى اختبارات السمية الحادة وشبه الحادة [17-20]. للكبد دور مهم في تنظيم العمليات الفسيولوجية. هو عضو يشارك في العديد من الوظائف الحيوية مثل التمثيل الغذائي، والإفراز، والتخزين. بالإضافة إلى ذلك، للكبد دور مهم في إزالة السموم وإفراز المركبات الداخلية والخارجية [21-24].
تبدأ عدوى الملاريا عندما تصاب السبوروزويتات بلدغة أنثى بعوضة الأنوفيلة المصابة بطفيلي الملاريا. أثناء تغذية الدم، تقوم أنثى الأنوفيلة المصابة بحقن مرحلة السبوروزويت من الطفيلي [25، 26]. بعد حوالي ساعة من السفر في جسم الإنسان، تدخل السبوروزويتات إلى الكبد، وتهاجم خلايا الكبد، وتبدأ الدورة اللاجنسية لفصام الكريات الحمر الخارجية. داخل خلايا الكبد، تتكاثر الطفيليات لا جنسيًا، حتى تصل إلى المتقسمة الناضجة، وفي النهاية، ينتج عدد كبير من الميروزويتات وتدخل مجرى الدم بعد انفجار خلايا الكبد. * هـ خلايا الكبد المصابة التي تسبب تلف الكبد بسبب تمزق خلايا الكبد المصابة والميروزويتات تدخل مجرى الدم وتبدأ دورة كريات الدم الحمراء في خلايا الدم الحمراء [27، 28]. يمكن أن يؤدي الضرر الذي يحدث في خلايا الكبد إلى زيادة الإنزيمات التي تعمل على وظائف الكبد، وخاصة إنزيم الترانساميناز، والتغيرات المورفولوجية في مظهر الكبد [29، 30]، مثل تضخم الكبد. تضخم الكبد الطحال هو سمة شائعة لعدوى الملاريا لدى البشر [31] والفئران [32] الناجمة عن التعرض المزمن لطفيليات الملاريا. ومع ذلك، لا يوجد تضخم في الكلى في الإصابة بالملاريا.
يمكن الكشف عن الخلل الوظيفي في الكبد عن طريق النقل الكبدي لناقلة أميناز الجلوتاميك أوكسالوسيتيك البلازما (SGOT) وناقلة أميناز البيروفيك الجلوتاميكية (SGPT) المنطلقة في البلازما، أو عن طريق الفحص النسيجي للأنسجة [33]. الضرر الأكثر شيوعًا هو تنشيط موت الخلايا المبرمج أو نخر خلايا الكبد [34-36]. يرتبط تورط الكلى المهم سريريًا بالعدوى بالمتصورة المنجلية والمتصورة الملاريا. * تنتج عدوى P. falciparum مظاهر حادة، تتراوح من الاضطرابات البولية بدون أعراض، واضطرابات الكهارل الخفيفة للفشل الكلوي الحاد (ARF) أو إصابة الكلى الحادة (AKI) التي تتطلب دعم غسيل الكلى [27، 37]. *من المعروف أن حالات القصور الكلوي الحاد في مضاعفات الملاريا تساهم في ارتفاع معدل الوفيات، وهو حوالي 75% من الحالات. * تشير الدراسة النسيجية إلى وجود التهاب كبيبات الكلى، والنخر الأنبوبي الحاد، والتهاب الكلية الخلالي كعامل الدورة الدموية الرئيسي في التهاب المفاصل الروماتويدي المرتبط بالملاريا [38]. بشكل عام، يمكن اكتشاف درجة خلل الكلى من خلال وجود كميات كافية من البروتين في البول وزيادة في مستويات اليوريا والكرياتينين والكهارل في البلازما [39].
* سمية 90٪ من المستخلص الإيثانولي لأوراق C. spectabilis DC (EECS) في الفئران BALB / c، متبوعة بفحوصات الإنزيم، قد تؤثر على التشريح المرضي ووظائف الكبد والكلى بعد إدارة ECS.
2. المواد والأساليب
2.1. المواد النباتية وإعداد EECS. * ه C. Spectabilis
تم شراء أوراق DC وتحديدها في LIPI (مركز أبحاث إندونيسيا)، الحديقة النباتية، بورودادي، جاوة الشرقية، إندونيسيا (B-160/IPH.06/KS.02/III/ 2019). *تم إيداع العينة كمعشبة في قسم العقاقير والكيمياء النباتية، كلية الصيدلة، جامعة إيرلانجا. * تم شطف الأوراق جيدًا بماء الصنبور لإزالة الملوثات الدخيلة، وتجفيفها عند درجة حرارة 45 درجة، وطحنها إلى مسحوق باستخدام المطحنة. * تم إجراء الاستخلاص عن طريق نقع المواد النباتية المسحوقة (500 جم) في قارورة تحتوي على 2500 مل من 90٪ إيثانول (عند 25-30 درجة) لمدة 3 × 24 ساعة. *تم فصل مذيب الاستخلاص، وترشيحه من خلال ورق الترشيح، وتبخيره تحت ضغط منخفض عن طريق التبخر الدوار. * بلغ إنتاج المستخلص الإيثانولي 1000 جرام من الوزن المجفف لمسحوق أوراق C. spectabilis DC 10.20٪ (وزن / وزن) وتم استخدامه في هذه التجربة.
2.2. الحيوانات.
تم استخدام ذكور فئران BALB/c الذين تتراوح أعمارهم بين 6-8 أسابيع ووزن 25-30 جم في الدراسة. تم الحصول على جميع الفئران من مركز فارما البيطري، المديرية العامة للثروة الحيوانية والصحة الحيوانية بوزارة الزراعة، سورابايا، جاوة الشرقية، إندونيسيا. * تم إيواء الحيوانات في ظل ظروف قياسية وتم إطعامها بنظام غذائي مخزون وماء حسب الرغبة. *تم الحصول على الموافقة الإلكترونية على بروتوكول الدراسة من لجنة الأخلاقيات لأبحاث الحيوان، جامعة إير لانجا، إندونيسيا، رقم 2.KE.181.10.2018.
2.3. اختبار السمية الحادة.
تم وزن EECS وإعادة تعليقه باستخدام 0.5% كربوكسي ميثيل السليلوز الصوديوم (Na CMC) للحصول على الجرعات المطلوبة. تم صيام الفئران BALB/c لمدة 24 ساعة قبل إطعامها بالمستخلص. * تم تقسيم الحيوانات إلى ثلاث مجموعات، كل مجموعة تحتوي على خمسة فئران. *الجرعات الإلكترونية لكل مجموعة كانت 1,250؛ 2500؛ و5،000 ملغم/كغم من وزن الجسم، على التوالي. تمت ملاحظة السلوك العام لكل فأر بشكل مستمر لمدة ساعة واحدة بعد كل جرعة، وبشكل متقطع كل أربع ساعات، وبعد ذلك على مدى 24 ساعة [40-42].
2.4. اختبار السمية تحت الحاد.
في اختبار السمية تحت الحاد، تم تجميع الفئران في ثلاث مجموعات وعولجت كل مجموعة بـ EECS مرة واحدة، خمس مرات، وعشر مرات بجرعة فموية يومية تبلغ 150 ملغم/كغم من وزن الجسم لمدة 28 يومًا؛ تم إعطاء المجموعة الضابطة الطبيعية فقط الطعام والشراب حسب الرغبة [43]. * تمت مراقبة الحيوانات لمدة 28 يومًا بحثًا عن أي علامة للتسمم. في نهاية فترة المراقبة، تم التضحية بجميع الحيوانات تحت التخدير الأثيري وتم إزالة الأعضاء الحيوية مثل الكبد والكلى من جميع الحيوانات لإجراء الفحوصات الجسيمة والنسيجية.
2.5. طفيل القوارض.
تم الحصول على حساسية الكلوروكين لبكتيريا Plasmodium berghei ANKA من معهد إيكمان الجزيئي الحيوي، جاكرتا، إندونيسيا، وتم الحفاظ عليها عن طريق المرور التسلسلي الذي تم استخدامه في هذه الدراسة.
2.6. تأثير EECS على مستوى البلازما لـ SGOT وSGPT.
*كانت التجربة عبارة عن اختبار قمعي يعتمد على بيترز [44]. *تم إجراء الاختبار القمعي قبل تقييم EECS على مستوى البلازما لـ SGOT وSGPT. * تم إصابة الحيوانات بـ P. berghei ANKA وتم تقسيمها إلى خمس مجموعات من A و B و C و D و E. * تم علاج الحيوانات * بعد فترة قصيرة من الإصابة في اليوم 0 (D0) واستمر يوميا لمدة ثلاثة أيام (D1 – D3). تلقت المجموعة (أ) كعنصر تحكم سلبي 0.5٪ Na CMC شفويا. المجموعتان B وC حيث تم إعطاء المجموعات المعالجة EECS بجرعة فموية واحدة قدرها 150 و200 ملجم/كجم من وزن الجسم على التوالي. وكانت المجموعة د عبارة عن مجموعة تحكم إيجابية أُعطيت الكلوروكين بجرعة فموية واحدة قدرها 100 ملغم/كغم من وزن الجسم. علاوة على ذلك، فإن المجموعة E كمجموعة تحكم صحية لم تكن مصابة بالطفيليات وتم إعطاؤها فقط الطعام والشراب حسب الرغبة. في اليوم الرابع (D4)، تم تحضير مسحات الدم لكل فأر وفحصها مجهريا. علاوة على ذلك، تم جمع البلازما قبل قياس مستويات SGOT وSGPT.
2.7. تأثير EECS على التشريح المرضي للكبد والكلى.
في نهاية فترة المراقبة، تم التضحية بجميع الحيوانات تحت التخدير الأثير قبل إزالة الكبد والكلى. بعد وزن الأعضاء، تم تثبيت الأنسجة في محلول الفورمالديهايد بنسبة 10٪ ومعالجتها أيضًا لتلطيخ الهيماتوكسيلين أيوزين (H&E). * تم إجراء المراقبة النسيجية لمعرفة التأثير السمي لـ EECS على الخلايا التنكسية والنخرية للأنسجة. *تم تصنيف الأضرار بناءً على Gibson-Corley et al. [45].
2.8. تحليل احصائي.
* تم تمثيل البيانات الإلكترونية على أنها الانحراف المعياري المتوسط (SD). تم استخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) لمقارنة البيانات الموزعة بشكل طبيعي بين المعالجات، متبوعًا باختبار المقارنة المتعددة اللاحق عندما تم الحصول على أهمية مختلفة. عندما لم يتم توزيع البيانات بشكل طبيعي، تم استخدام اختبار كروسكال واليس واختبار مان ويتني U لتقييم الاختلافات بين المعالجات.
الخدمة الداعمة لشركة Wecistanche - أكبر مصدر للسيستانش في الصين:
البريد الإلكتروني:wallence.suen@wecistanche.com
واتساب/هاتف:+86 15292862950
تسوق لمزيد من تفاصيل المواصفات:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
