تأثير خفض حمض اليوريك وآلية acteoside و echinacoside المستخرجة من cistanche أنبولوسا

خلاصة:تهدف إلى استكشاف آثار خفض حمض اليوريك وآليات acteoside (AS) و Echinacoside (ECH) المستخرجة منCistanche Tubulosa.

طُرقتم إنشاء نموذج الفئران (HUA) بتفتيرريك الدم باستخدام أوكسونات البوتاسيوم (1.5 جم · كجم -1 · d -1) مع الأدينين (100 ملغ · kg -1 · d -1). تم تقسيم فئران نموذج HUA بشكل عشوائي إلى مجموعة تحكم النموذج ، مجموعة allopurinol (30 ملغ · kg -1 · d -1) ، مثل مجموعة منخفضة وارتفاع (50 ، 100 mg · kg -1 · d {{13}). mg · kg -1 · d -1) مجموعات الجرعة. تم إنشاء مجموعة مراقبة طبيعية مسبقًا. بعد أربعة أسابيع من الإدارة ، تم استخدام محلل الكيمياء الحيوية للدم للكشف عن مستويات Sua Urea و Crea و Deaminase (ADA) وحمض اليوريك (UUA) في البول. تم استخدام مقايسة المناعة المناعية للإنزيم للكشف عن مستويات أوكسيديز الزانثين (XOD) في المصل. تم جمع أنسجة الكلى ، وتم وزن معامل الكلى وحسابها. تم استخدام تلطيخ الهيماتوكسيلين eosin (HE) لمراقبة التغيرات المرضية الكلوية. تم استخدام الكيمياء المناعية (IHC) و PCR في الوقت الفعلي للكشف عن مستويات التعبير البروتين و mRNA لناقل اليورات 1 (urat1) ، ناقل الجلوكوز 9 (GLUT9) ، ناقل الأنيون العضوي 1 (OAT1) ، وناقل الأنيون العضوي 3 (OAT3) في الأوعية الكلوية. يمكن أن تحسن النتائج AS و ECH وظائف الكلى في فئران نموذج HUA ، وتقليل مستويات حمض اليوريك في الدم ، وتعزيز إفراز حمض اليوريك ، وتخفيض مستويات المصل من ADA و XOD ، وتعبير البروتين المنتظم والتعبير mRNA من urat1 و glut9 في الأنسجة الكلوية ، أثناء تنظيم البروتين والتعبير mRNA من OAT1 و OAT3 في tissue renal.

الاستنتاجات: قد يمارس جليكوسيدات فينيل إيثانويد AS و ECH من أنابولوسا cistanche تأثيرات خفض حمض اليوريك عن طريق تحسين وظيفة الكلى في فئران نموذج HUA ، وتقليل مستويات ADA و XOD ، وتنظيم التعبير عن urat1 ، glut9 ، OAT1 ، OAT3.

الكلمات الرئيسية: Cistanche Tubulosa; أكتيوسيد؛ Echinacoside فرط يوريك الدم تقليل حمض اليوريك. آلية

 

 

 

مستخلص Cistanche Tubulosa مع 16 ٪ من acteoside

اتصل بنا الآن

 

 

 

فرط يوريك الدم (HUA) هو مرض استقلابي ناتج عن استقلاب البيورين المضطر في جسم الإنسان ، مما يؤدي إلى ارتفاع مستويات حمض اليوريك في الدم [1]. يتم تشخيصه عادةً عندما تتجاوز مستويات حمض اليوريك في الدم 7. 0 mg · dl⁻⁻ (416. 0 μmol·l⁻⁻) في الرجال و 6. 0 mg · dl⁻⁻ (357. يرتبط تطور فرط حمض يوريك الدم في المقام الأول بعوامل مثل الوجبات الغذائية عالية البورين ، واستهلاك الكحول المزمن ، واستخدام الأدوية ، وقصور الغدة الدرقية. إنه لا يزيد فقط من خطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية والسكري وارتفاع ضغط الدم [3-4] ولكن أيضًا يؤثر بشكل كبير على صحة المرضى.

حاليًا ، تشمل العلاجات السريرية لفرط حمض يوريك الدم الأدوية التي تمنع إنتاج حمض اليوريك وتعزيز إفراز حمض اليوريك. ومع ذلك ، فإن هذه العلاجات لها قيود معينة للمرضى الذين يعانون من ضعف وظيفة الكبد أو الكلى [5-6]. لذلك ، فإن استكشاف الأدوية الفعالة ذات الآثار الجانبية المنخفضة له أهمية كبيرة للوقاية من فرط حمض يوريك الدم وعلاجه.

Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight، يتم استخدامه بشكل شائع في الطب الصيني التقليدي باعتباره عشبًا متهالكًا في الكلى ، لعلاج الحالات مثل العجز الجنسي والعقم ونقص الجوهر والدم ، والضعف في أسفل الظهر والركبتين ، وضعف العضلات ، والإمساك بسبب جفاف الأمعاء [7]. أظهرت الدراسات ذلكCistanche Tubulosaيمتلك الحماية العصبية [8] ، ومضاد للالتهابات [9] ، وتنظيم استقلاب العظام [10] ، والآثار المعززة للفعالية في العلاج الكيميائي لمرضى السرطان [11]. من بين مكوناتها النشطة المختلفة ، تعد جليكوسيدات فينيل إيثانويد الأكثر وفرة.

acteoside (AS) و echinacoside (ECH) ، جليكوسيدات فينيل إيثانويد مع محتوى عالي فيCistanche Tubulosa، معرض نشاط بيولوجي قوي ويحمل إمكانات كبيرة للتنمية والتطبيق. وبالتالي ، اختارت مجموعة الأبحاث الخاصة بنا AS و ECH لمزيد من الدراسة. من خلال تنبؤات صيدلة الشبكة والتخريب المسبق في الفئران ، اكتشفنا أن مستخلصات الجليكوسيد فينيل إيثانويدCistanche Tubulosaقد يكون لها تأثير لخفض حمض اليوريك. ومع ذلك ، فإن مسارات وآليات هذه الآثار لا تزال غير واضحة.

وبالتالي ، باستخدام آليات إنتاج حمض اليوريك ومسارات إفرازه الأولية كتركيز البحث ، قمنا بالتحقيق في آثار خفض حمض اليوريك لمستخلصات الجليكوسيد فينيل إيثانويد كما و ECH. تهدف هذه الدراسة إلى توضيح المسارات والآليات التي من خلالها تمارس آثار خفض حمض اليوريك.

1 مواد

1.1 الحيوانات التجريبية

تم شراء سبعين من الفئران من فئران Sprague-Dawley (SD) من فئران SPF-SPF ، التي تزن 150-180 جم ، من المركز التجريبي للحيوانات في جامعة شينجيانغ الطبية. رقم ترخيص الإنتاج الحيوان: SCXK (XIN) 2023-0001. تمت الموافقة على هذه التجربة من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان التابعة لمعهد أبحاث الطب في منطقة شينجيانغ ، مع رقم الموافقة على أخلاقيات الحيوان: Iacuc- (Zhun) -2024-009.

1.2 المخدرات والكواشف

مستخلصات الجليكوسيد فينيل إيثانويد (AS و ECH)منCistanche Tubulosa (purity >98 ٪ ، تم التحقق منه بواسطة كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء) تم استخلاصها وتنقيتها وإعدادها من قبل المختبر الرئيسي لعلوم صياغة أويغور ، معهد أبحاث الطب الحجري لشينجيانغ. أرقام الدُفعات: 20220617 (AS) و 20220526 (ECH).

أقراص الووبورينول، رقم الدُفعة: 62208726 ، تم تصنيعه بواسطة Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co. ، Ltd.

أوكسونات البوتاسيوموالأدينين، أرقام الدُفعات: I2130050 و C2202255 ، تم شراؤها من شركة Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co. ، Ltd.

Crea (الكرياتينين) ، UA (حمض اليوريك) ، يوريا ، و ADA (أدينوسين ديميناز)، أرقام الدُفعات: 141123010 ، 141223004 ، 141323008 ، و 043624005 ، تم شراؤها من شركة Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics ، Ltd.

XOD (Xanthine Oxidase) مجموعة مقايسة النشاط، رقم الدُفعة: Y10001219 ، تم شراؤه من شركة Shanghai Macklin Biochemical Technology ، Ltd.

الأجسام المضادة (URAT1 ، GLUT9 ، OAT1 ، OAT3)، أرقام الدُفعات: 3i5723 0 ، 92f0296/4 ، 0f33081/2i44618 ، تم شراؤها من Affinity Biosciences.

الماعز المظهول المضاد لـ HRP IgG، رقم الدُفعة: 245440113 ، تم شراؤه من ZSGB-Bio.

محلول تلطيخ الهيماتوكسيلين، رقم الدُفعة: 24135741H ، تم شراؤها من شركة Beijing Lanjieke Technology Co. ، Ltd.

طقم الكاشف الكروموجيني، رقم الدُفعة: 240010512 ، تم شراؤه من ZSGB-Bio.

DEPC (البيروكربونات ثنائي إيثيل)، رقم الكتالوج: D 60029-500 ML ، تم شراؤه من Amresco (الولايات المتحدة الأمريكية).

M5 Hiclear DL2000 DNA Marker، رقم الكتالوج: MF025 ، تم شراؤه من شركة Beijing Genomics Biotechnology Co. ، Ltd.

Trizol ™ كاشف، رقم الكتالوج: 15596026 ، تم شراؤه من Thermo Fisher Scientific (الولايات المتحدة الأمريكية).

5x الكل في واحد RT MastermixوEvagreen Express 2 × QPCR Mastermix-Low Rox، أرقام الكتالوج: G492 و G891 ، كلاهما تم شراؤه من Applied Biological Materials Inc. (ABM).

2 طرق

2.1 إنشاء النموذج والتجميع

تم تأقلم سبعين من الفئران من Sprague-Dawley (SD) وتقسيمها إلى مجموعتين: مجموعة مراقبة طبيعية (1 {3}} الفئران) ومجموعة تحكم النموذج (60 فئران). كانت تدار المجموعة الضابطة العادية 0.5 ٪ CMC-NA عبر gavage. كانت تدار مجموعة مراقبة النماذج من أوكسيونيت البوتاسيوم (1.5 جم · كجم) مع الأدينين (100 ملغ · كجم) بجرعة 10 مل · كجم ، مرة واحدة يوميًا لمدة 14 يومًا متتاليًا. تم النظر في النموذج بنجاح عندما زادت مستويات اليوريا و CREA و SUA بشكل كبير ، كما تم قياسه بواسطة محلل كيميائي حيوي.

تم تقسيم الفئران النموذجية فرط يوريكوم الدم إلى المجموعات التالية بناءً على مستويات SUA و UEA و CREA: مجموعة مراقبة النماذج ، مجموعة Allopurinol (3 {12}} mg · kg⁻) ، جرعة منخفضة مثل المجموعة (50 ملغ · kg⁻) ، جرعة عالية مثل المجموعة (100 ملغ · kg⁻⁻). (100 ملغ · kg⁻) ، مع 10 فئران في كل مجموعة. للحفاظ على فرط حمض يوريك الدم المستقر ، كانت جميع المجموعات باستثناء المجموعة الضابطة العادية تدار أوكسونات البوتاسيوم (500 ملغ · kg⁻) جنبا إلى جنب مع الأدينين (100 ملغ · kg⁻) عن طريق gavage في الصباح ، تليها إدارة الأدوية المعنية في كل مجموعة معالجة في فترة ما بعد الظهر. تلقت مجموعة التحكم العادية محلول CMC-NA بنسبة 0.5 ٪ في الصباح ومياه الشرب في فترة ما بعد الظهر بجرعة 10 مل · كجم ، مرة واحدة يوميًا لمدة 14 يومًا متتاليًا. بعد ذلك ، تم إيقاف إدارة عوامل النمذجة ، وتم إعطاء الأدوية المعنية بشكل مستمر يوميًا لمدة 14 يومًا إضافية.

 

2.2 مجموعة العينات

بعد الجرعة النهائية ، تم صيام الفئران بين عشية وضحاها (لم يكن الماء مقيدًا). تم جمع البول من كل مجموعة لاختبار حمض اليوريك. تم قياس وزن الجسم بعد الصيام ، وتم جمع عينات الدم تحت التخدير. تم فصل المصل عن طريق الطرد المركزي وتخزينه للاستخدام في المستقبل. تم جمع أنسجة الكلى ووزنها. تم إصلاح إحدى الكلى في محلول بارافورمالدهيد بنسبة 4 ٪ ، بينما تم تجميد الآخر في النيتروجين السائل لمزيد من التحليل.

 

2.3 قياس حمض اليوريك في بول الفئران

تم الطرد المركزي لعينات البول من كل مجموعة (3 ، 000 r · min⁻⁻ ، 10 دقائق ، دائرة نصف قطرها الطرد المركزي 14 سم) ، وتم جمع طاف. تم تخفيف عينات البول 1: 9 مع محلول ملحي وتحليل لمحتوى حمض اليوريك باستخدام محلل كيميائي حيوي.

2.4 قياس ADA و Urea و Crea و Sua في مصل الفئران

تم الطرد المركزي لعينات الدم من كل مجموعة (3 ، 000 r · min⁻ ، 10 دقائق ، نصف قطر الطرد المركزي 14 سم) ، وتم جمع المصل. تم قياس مستويات ADA و UEA و CREA و SUA في المصل باستخدام محلل كيميائي حيوي.

 

2.5 قياس XOD في مصل الفئران

تم قياس التغييرات في مستويات XOD في مصل الفئران باستخدام مقايسة إنزيمية وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تم تسجيل الامتصاص الأولي (A₁) والامتصاص النهائي (A₂) عند 290 نانومتر ، وتم حساب ΔA (ΔA=A₂ - A₁). تم استبدال ΔA في الصيغة:
xod (nmol⁻⁻ · min⁻⁻ · ml⁻) =,
لحساب كمية حمض اليوريك المحفز في الدقيقة لكل ملليلتر من المصل.

 

2.6 قياس معامل الكلى

تم جمع أنسجة الكلى وغسلها بالمحلول الملحي وإزالة الماء الزائد. تم قياس وزن الأعضاء بدقة ، وتم حساب معامل الكلى على النحو التالي:
معامل الكلى=وزن الكلى (ملغ) / وزن الجسم (ز).

 

2.7 الملاحظة النسيجية لأنسجة الكلى من خلال تلطيخ

تم تجفيف أنسجة الكلى التي تم تثبيتها في محلول بارافورمالدهيد بنسبة 4 ٪ مع تركيزات الإيثانول المتدرجة ، وتم مسحها مع الزيلين ، المضمّن في البارافين ، ومقطّعة في شرائح {1}}. تم deparaffinists الأقسام مع xylene ، رطبة مع الإيثانول المتدرج ، ملطخة بالهيماتوكسيلين وإيوسين (HE) ، ومختومة مع اللثة المحايدة. وقد لوحظت التغيرات المورفولوجية في أنسجة الكلى تحت المجهر الضوئي ، وتم التقاط الصور في التكبير 400 ×.

 

2.8 اكتشاف تعبير بروتين urat1 و glut9 و OAT1 و OAT3 في أنسجة الكلى بواسطة IHC

تم تجفيف أنسجة الكلى التي تم تثبيتها في محلول بارافورمالدهيد بنسبة 4 ٪ مع تركيزات الإيثانول المتدرجة ، وتم تطهيرها مع الزيلين ، المضمّن في البارافين ، ومقطوع. تم إجراء استرجاع المستضد وحظر مصل الماعز. تمت إضافة الأجسام المضادة الأولية (URAT1 ، GLUT9 ، OAT1 ، OAT3) في التخفيف 1: 200 وحضنت بين عشية وضحاها في 4 درجة. في اليوم التالي ، تم غسل الأقسام باستخدام PBS ، مجفف الهواء ، وحضنت مع IgG الماعز المسمى البيوتين المضاد للأرنب عند 37 درجة لمدة 30 دقيقة. تم غسل الأقسام باستخدام PBS وحضنت مع كاشف كروموجين DAB لمدة 10 دقائق ، تليها شطف PBS ، تلطيخ الهيماتوكسيلين لمدة 3 دقائق ، التمايز مع محلول الإيثانول حمض الهيدروكلوريك ، كربونات الليثيوم الزرقاء ، الجفاف مع الإيثانول التدرج ، مسح مع الويتيلين ، والختم مع gum المحايدة.

لكل فأر ، تم اختيار اثنين عشوائي 4 0 0 × من أقسام الكلى. تم تحليل تلطيخ إيجابي (صفراء بنية) ، وتم قياس الكثافة البصرية المتكاملة (IOD) لكل حقل باستخدام Image-Pro Plus 6.0 للتحليل الإحصائي.