تعمل سلالات البروبيوتيك القابلة للحياة والقتلة بالحرارة على تحسين مناعة الفم عن طريق رفع تركيز IgA في الغشاء المخاطي للفم

خلاصة

تلعب مناعة الغشاء المخاطي للفم والأنف دورًا حاسمًا في حماية الجسم من الغزو البكتيري والفيروسي. تم استخدام منتجات البروبيوتيك الآمنة لتعزيز مناعة الإنسان وصحة الفم. في هذه الدراسة، تحققنا من التأثيرات المفيدة لأقراص البروبيوتيك المختلطة القابلة للحياة، والتي تتكون من Lactobacillus salivarius subsp. salicinius AP-32, Bifdobacterium Animalis subsp. لاكتيس CP-9، ولاكتوباسيلوس باراكاسي ET-66، وأقراص بروبيوتيك مقتولة بالحرارة، تتكون من L. salivarius subsp. salicinius AP-32 وL. paracasei ET-66، على المناعة الفموية بين 45 مشاركًا أصحاء. تم تقسيم المشاركين بشكل عشوائي إلى مجموعات بروبيوتيك قابلة للحياة، وبروبيوتيك مميت بالحرارة، ومجموعات دواء وهمي. استمرت إدارة العلاج لمدة 4 أسابيع. تم جمع عينات اللعاب في الأسابيع 0، 2، 4، و6، وتم قياس تجمعات Lactobacillus وBifidobacterium وStreptococcus mutans وتركيز IgA. تم قياس كمية تركيزات IgA ومستويات TGF-beta و IL -10 في خلايا PBMC بواسطة طريقة ELISA. أظهرت النتائج أن مستويات IgA اللعابية زادت بشكل ملحوظ عند إعطاء كل من العقارين القابلين للحياة (119.30±12.63%، ***P<0.001) and heat-killed (116.78±12.28%, ***P<0.001) probiotics for 4 weeks. Among three probiotic strains, AP-32 would effectively increase the levels of TGF-beta and IL-10 in PBMCs. The oral pathogen Streptococcus mutans was significantly reduced on viable probiotic tablet administration (49.60±31.01%, ***P<0.001). The in vitro antibacterial test confirmed that viable probiotics effectively limited the survival rate of oral pathogens. Thus, this clinical pilot study demonstrated that oral probiotic tablets both in viable form or heat-killed form could exert beneficial effects on oral immunity via IL-10, TGB-beta mediated IgA secretion. The effective dosage of viable probiotic content in the oral tablet was 109 CFUs/g and the heat-killed oral tablet was 1× 1010 cells/g.

فوائد مكملات cistanche - زيادة المناعة

مقدمة

الغشاء المخاطي للفم والأنف، بوابة الاتصال بالمستضدات المستنشقة، هو خط الدفاع الأمامي لجهاز المناعة البشري [1، 2]. عادة، تغزو الفيروسات أو البكتيريا المسببة للأمراض الأسطح المخاطية للتجويف الفموي الأنفي عن طريق القتال ضد جهاز المناعة المحلي والميكروبات الحيوية السليمة [3]. تتطور الالتهابات والأعراض، بما في ذلك السعال والتهاب الحلق وسيلان الأنف والحمى، بسبب الاستجابات المناعية ضد الفيروسات والبكتيريا المسببة للأمراض الغازية [4]. بالإضافة إلى ذلك، يعد الغلوبولين المناعي A (IgA) هو العامل المناعي الرئيسي في اللعاب وينظم توازن الكائنات الحية الدقيقة في الفم [5]. أفادت العديد من الدراسات قدرة الإفراز IgA على حماية الجسم من العدوى بمسببات الأمراض الفيروسية، بما في ذلك الفيروس المخلوي التنفسي [6]، والفيروس العجلي [7]، وفيروس الأنفلونزا [7]. يعمل الإفراز IgA على حماية الظهارة المخاطية. نيكولا ميليت وآخرون. اكتشف أن الغشاء المخاطي IgA يمكن أن يمنع داء المبيضات البيضاء المتعايش في تجويف الفم [8]. كما أنه يمنع تراكم مسببات الأمراض عن طريق الفم العقدية الطافرة، والتي تسبب لوحة الأسنان [9].

علاوة على ذلك، اكتشف الباحثون أن الكائنات الحية الدقيقة عن طريق الفم ومستقلباتها قد تؤثر محليًا على المناعة عند الحاجز الفموي [10]. أظهرت الدراسات السابقة فعالية البروبيوتيك في رفع تركيز IgA في الغشاء المخاطي للفم [11]. إريكسون وآخرون. أثبت أن مضغ العلكة التي تحتوي على Lactobacillus reuteri شارك في الاستجابة المناعية التكيفية للأشخاص الأصحاء عن طريق زيادة مستويات IgA اللعابية [12]. في البشر، ترتبط السيتوكينات المناعية TGF-beta وIL-10 بإنتاج IgA [13].

ومع ذلك، لا يزال من غير الواضح ما إذا كانت الكائنات الحية الدقيقة عن طريق الفم قد رفعت مستويات IgA الإفرازية من خلال السيتوكينات TGF-beta و IL-10. علاوة على ذلك، تشمل مسببات الأمراض الفموية S. mutans وP. gingivalis وF. nucleatum subsp. أظهر تعدد الأشكال و A. actinomycetemcomitans وجود علاقة عالية مع أمراض اللثة ورائحة الفم الكريهة [14]. يمكن أن تكون منتجات البروبيوتيك علاجًا بديلاً محتملاً لالتهاب اللثة عن طريق تثبيط مسببات الأمراض عن طريق الفم Fusobacterium nucleatum، لكن Porphyromonas gingivalis وAggregatibacter actinomycetemcomitans لم يظهرا أي انخفاض كبير [15]. مكملات البروبيوتيك يمكن أن تمنع أيضًا الالتهابات المسببة للأمراض [16]. تم الإبلاغ عن أن الأنواع الرئيسية من الكائنات الحية الدقيقة قد حدت من نمو الالتهاب الرئوي العقدي الممرض [17]. وبالتالي، فإن الحفاظ على نظام بيئي ميكروبي متوازن عن طريق امتصاص سلالات البروبيوتيك قد يكون طريقة بديلة لتنظيم مناعة الفم وتعزيز صحة الفم. كشفت النتائج السابقة حول تثبيط مسببات الأمراض عن طريق الفم بواسطة سلالات الكائنات الحية المجهرية أن Lactobacillus salivarius subsp. salicinius AP-32، Bifdobacterium Animalis subsp. اللبنية CP -9، و Lactobacillus paracasei ET -66 تمارس تأثيرات مضادة للجراثيم ممتازة في المختبر؛ ومع ذلك، ليس من خلال آلية زيادة مستويات H2O2 [18]. كانت الاستراتيجيات الرئيسية لسلالات البروبيوتيك للحد من نمو مسببات الأمراض عن طريق الفم هي تجميع مسببات الأمراض عن طريق الفم، وإنتاج المواد الخافضة للتوتر السطحي، وتغيير بيئة الفم، وتوليد مواد مضادة للميكروبات [19]. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت دراسة في المختبر أن L. salicinius AP-32 يتوسط تعبير السيتوكينات الالتهابية [interleukin (IL)-8, IL-10] في الخلايا الظهارية البشرية [20]. ولذلك، في هذه الدراسة، تحققنا مما إذا كانت أقراص بروبيوتيك مختلطة قابلة للحياة، تتكون من L. salivarius subsp. salicinius AP-32, B. Animalis subsp. لاكتيس CP-9، وL. باراكاسي ET-66، وأقراص بروبيوتيك مقتولة بالحرارة، تتكون من L. salivarius subsp. Salicinius AP-32 وL. paracasei ET-66، تحسين وظيفة المناعة عبر TGF-beta، IL-10 أو رفع مستوى تركيز IgA اللعابي. تم اختبار الوظيفة المضادة للبكتيريا لامتصاص منتج البروبيوتيك في تجويف الفم.

فوائد ملحق cistanche-كيفية تقوية جهاز المناعة

انقر هنا لعرض منتجات Cistanche Enhance Immunity

【اطلب المزيد】 البريد الإلكتروني: cindy.xue@wecistanche.com / تطبيق Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

المواد والطرق

مشاركون

في المجمل، تم تجنيد 45 مشاركًا يتمتعون بصحة جيدة تتراوح أعمارهم بين 20 و40 عامًا، وتم تقسيمهم عشوائيًا إلى ثلاث مجموعات فرعية: أقراص البروبيوتيك القابلة للاستخدام عن طريق الفم، وأقراص البروبيوتيك الفموية المقتولة بالحرارة، ومجموعات الدواء الوهمي. وتتكون كل مجموعة من 15 مشاركا. تم استبعاد المشاركين الذين يعانون من عادات التدخين وتناول جوز التنبول. تم تخصيص الأقراص الفموية بشكل أعمى للمشاركين. تناول جميع المشاركين الأقراص عن طريق الفم ثلاث مرات يوميًا (صباحًا وظهرًا ومساءً) لمدة 4 أسابيع. تم جمع عينات اللعاب (2 مل) لقياس تركيز IgA ومجموعات الكائنات الحية الدقيقة في الأسابيع 0 و2 و4 و6. تم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المشاركين المشمولين في هذه الدراسة. تمت الموافقة على البروتوكول من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لجامعة تشونغ شان الطبية، تايوان (CS19052).

أقراص بروبيوتيك عن طريق الفم قابلة للحياة

يحتوي قرص البروبيوتيك الفموي القابل للحياة (1 جم) على ثلاث سلالات بروبيوتيك قابلة للحياة، L. salivarius subsp. salicinius AP-32, B. Animalis subsp. لاكتيس CP -9، و L. باراكاسي ET -66. قمنا بخلط 0.0 1 جم من 10 11 وحدة تكوين مستعمرة (CFUs) بروبيوتيك واحد في القرص الفموي. تم قياس كل سلالة بروبيوتيك واحدة حوالي 0.33 * 109CFUs/g. كان إجمالي محتوى البروبيوتيك في القرص الفموي 109 مستعمرة CFUs / جم. كانت الجرعة النشطة للقرص الفموي بروبيوتيك تتبع الأعمال المنشورة السابقة [18]. تم الحصول على جميع سلالات البروبيوتيك من مختبر Biofag Biotech Co., Ltd. (تاينان، تايوان). L. اللعابية subsp. تم عزل salicinius AP-32 من أمعاء بشرية صحية وتم ترسيبه في معهد أبحاث وتطوير صناعة الأغذية في تايوان (المعرف: BCRC 910437) وفي جامعة ووهان، الصين (المعرف: CCTCC-M2011127)؛ ب. أنيماليس سوبسب. تم عزل اللبنيك CP-9 من حليب الثدي البشري الصحي وتم ترسيبه في معهد أبحاث وتطوير الصناعات الغذائية، تايوان (المعرف: BCRC 910645) وفي جامعة ووهان (المعرف: CCTCC-M2014588)؛ تم عزل L. paracasei ET-66 من حليب الثدي البشري الصحي وتم ترسيبه في معهد أبحاث وتطوير الصناعات الغذائية، تايوان (المعرف: BCRC 910753) وفي المركز الصيني العام لتجميع الثقافة الميكروبيولوجية، بكين، الصين (المعرف: CGMCC{ {22}}). ملبنة. اللعابية الفرعية. تم استزراع salicinius AP -32 وL. paracasei ET -66 على ألواح أجار de Man وRogosa وSharpe (MRS) (110660، Merck، Darmstadt، ألمانيا) وتم تحضينها تحت ظروف لاهوائية اختيارية عند 37 درجة لمدة 48 ساعة. ب. أنيماليس سوبسب. تمت زراعة Lactis CP-9 على أجار MRS المضاف إليه 0.05% سيستين وحضنت لاهوائيًا عند درجة حرارة 37 درجة لمدة 48 ساعة. تم إجراء عد المستعمرات لقياس CFU البكتيرية بعد زراعة سلالات الكائنات الحية المجهرية [18].

نبات السيستانش - يعمل على زيادة جهاز المناعة

أقراص بروبيوتيك عن طريق الفم تقتل الحرارة

تتألف أقراص البروبيوتيك الفموية المقتولة بالحرارة (1 جم) من L. salivarius subsp المعطل. salicinius AP -32 و L. paracasei ET -66. تم استزراع واحتضان السلالات القابلة للحياة، كما هو موضح سابقًا. بعد ذلك، تم تعطيل AP-32 وET-66 عن طريق احتضان السلالات القابلة للحياة في وسائط MRS عند 100 درجة لمدة ساعة واحدة. كان محتوى البروبيوتيك في القرص الفموي 1 × 1010 خلية / جم. كانت الجرعة النشطة لأقراص البروبيوتيك عن طريق الفم المقتولة بالحرارة تتبع المنشورة مسبقًا في الاختبارات المختبرية [11]. تم تنفيذ جميع الإجراءات التجريبية في مختبر شركة Biofag Biotech Co., Ltd. (تاينان، تايوان).

قياس تجمعات البكتيريا اللبنية والبيفيدوباكتريوم في عينات اللعاب

تم جمع عينات اللعاب (2 مل) من كل مشارك في الأسابيع 0 و2 و4 و6. تم تخفيف عينات اللعاب (100 ميكرولتر) بشكل تسلسلي وإضافتها إلى MRS لوحات. لقياس أعداد الملبنة، تم استزراع الملبنة واحتضانها على ألواح أجار MRS تحت ظروف لاهوائية اختيارية عند 37 درجة لمدة 48 ساعة. لقياس أعداد بكتيريا Bifdobacterium، تم استزراع وحضانة Bifdobacterium لاهوائيًا على أجار MRS المضاف إليه 0.05% سيستين عند 37 درجة لمدة 48 ساعة. تم إجراء عد المستعمرات لقياس CFU البكتيرية بعد زراعة سلالات الكائنات الحية المجهرية. تم تطبيع معدلات تعداد Lactobacillus و Bifidobacterium إلى عدد السكان بروبيوتيك في الأسبوع 0. واعتبر معدل تعداد Lactobacillus و Bifidobacterium الذي تم جمعه في الأسبوع 0 100٪. اتبعت الطريقة التجريبية الأعمال المنشورة سابقًا [18].

قياس تركيز IgA في الغشاء المخاطي للفم

تم جمع عينات اللعاب (2 مل) من كل مشارك في الأسابيع 0 و2 و4 و6 وتم الحفاظ عليها عند 20 درجة. تم استخدام مجموعة ELISA IgA Human Uncoated (الكتالوج رقم 88-50600-88؛ Invitrogen، Thermo Fisher Scientific، San Jose، CA، USA) لتحليل تركيز IgA. أولاً، قمنا بتغليف الأجسام المضادة IgA المضادة للإنسان على 96-طبق جيد. تمت إضافة IgA اللعابي الموجود في العينة أو المعيار إلى البئر الصغير، ثم تمت إضافة الجسم المضاد IgA المضاد للإنسان المصاحب لـ HRP في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. بيبيتينج الركيزة TMB إلى كل بئر لمدة 30 دقيقة. وأخيرا، تم قياس حفل IgA على مقياس الطيف الضوئي عند 450 نانومتر. تم تنفيذ جميع الإجراءات التجريبية في ثلاث نسخ، وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تم اعتبار معدل تركيز IgA الذي تم جمعه في الأسبوع 0 100%. اتبعت الطريقة التجريبية الأعمال المنشورة سابقًا [18].

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

قياس تركيز TGF-Beta وIL-10 في PBMC

اختبار الارتفاع الناجم عن البروبيوتيك لمستويات TGF-beta و IL -10 بعد الدراسة السابقة [20]. تم الحصول على خلايا الدم وحيدة النواة المحيطية (PBMCs) من عينات دم من متبرعين أصحاء (مركز تاينان للدم، مؤسسة خدمات الدم التايوانية). تمت إزالة الدم الكامل بالطرد المركزي من خلال تدرج Ficoll-Hypaque (Pharmacia، السويد)، وجزء كثافة الضوء من الواجهة 42.5%-50%. البذر 4 * 105 خلية مستخرجة من خلايا PBMC في 100 ميكرولتر RPMI -1640 مع 1٪ FBS (Sigma Chemical Co.، St. Louis، MO، USA) لكل بئر مكون من 96 لوحة جيدة. ثم إضافة 5 * 105 وحدة تشكيل مستعمرة/20 ميكرولتر معالجة بروبيوتيك إلى كل بئر من PBMCs (الخلايا: سلالات بروبيوتيك =1:10). كانت الضوابط الإيجابية تضيف 10 ميكروغرام / مل من Phytohaemagglutinin (PHA) (Sigma-Aldrich، ميونيخ، ألمانيا) إلى الآبار المصنفة PBMCs لإنتاج TGF-، IL -10 على التوالي [21]. شارك في زراعة البروبيوتيك مع PBMCs لمدة 48 ساعة. قياس المادة الطافية التي تحتوي على السيتوكينات IL -10 و TGF- عن طريق تحليل مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) (Thermo Scientific، Carlsbad، CA، USA). تم قياس جميع التجارب واتباع البروتوكول التجاري على الأقل في ثلاث نسخ.

تقييم الوظيفة المضادة للبكتيريا في تجويف الفم

تعد المكورات العقدية الطافرة تهديدًا شائعًا لصحة الفم، والتي تسبب تسوس الأسنان عن طريق تكوين الطاعون أو الأغشية الحيوية [22]. تم جمع عينات المكورات العقدية الطافرة من المسحات، والتي من خلالها جمعنا المكورات العقدية الطافرة على الجزء فوق اللثة واللثة والغشاء المخاطي للفم، في الأسابيع 0 و2 و4 و6. وتم الحفاظ على المكورات العقدية الطافرة في التربتيك. مرق الصويا (TSB، 5 مل) مضاف إليه 50% جلسرين. تم تخفيف وسط S. mutans بشكل تسلسلي وإضافته إلى لوحة Mitis Salivarius-Bacitracin Agar (MSBA، 0.2 U / mL)، والتي تم تحضينها عند 37 درجة لمدة 2 يومًا. وأخيراً، تم حساب عدد مستعمرات S. mutans في كل عينة مشاركة لحساب معدلات البقاء على قيد الحياة المسببة للأمراض؛ معدل البقاء على قيد الحياة لـ S. mutans التي تم جمعها في الأسبوع 0 كان يعتبر 100%. اتبعت الطريقة التجريبية الأعمال المنشورة سابقًا [18].

النشاط المضاد للبكتيريا في المختبر للأقراص الفموية

Oral tablets (1 g) that contained viable (AP-32, CP-9, and ET-66; > 109 CFUs) and heat-killed (AP-32 and ET-66,>تم إذابة 1010 وحدات CFU) سلالات بروبيوتيك في وسط TSB ووسط ضخ قلب الدماغ، على التوالي، للحصول على تركيز نهائي قدره 0.1 جم/مل. تم استخدام الوسيط فقط للمجموعة الفارغة، في حين تم إذابة الأقراص (1 جم) التي لا تحتوي على أي مكونات بروبيوتيك في الوسائط الخاصة بمجموعة الدواء الوهمي. بعد ذلك، تم إدخال مسببات الأمراض عن طريق الفم (106 وحدة تشكيل مستعمرة) في المحاليل اللوحية وتم تحضينها بشكل مشترك عند 37 درجة لـ 2 (S. mutans) أو 3 (Porphyromonas gingivalis، Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum، و Aggregatibacter actinomy cetemcomitans) د. تم الحصول على مسببات الأمراض من BCRC. تم حساب معدل تثبيط مسببات الأمراض عن طريق الفم (٪) على النحو التالي: (التحكم CFUblank - المجموعة التجريبية CFU) / التحكم CFUblank. اتبعت الطريقة التجريبية الاختبارات المنشورة مسبقًا [11].

تحليل احصائي

تم استخدام برنامج GraphPad Prism للتحليل الإحصائي لنتائج اختبار t ثنائي الذيل. تم تقديم البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط ​​(SD) أو متوسط ​​نتائج تجربتين أو ثلاث تجارب مستقلة. واعتبرت الاختلافات الإحصائية كبيرة عند قيمة P<0.05.

نتائج

أقراص البروبيوتيك تزيد من أعداد البيفيدوباكتريوم في تجويف الفم

كان عدد سكان Bifidobacterium مرتفعًا بشكل ثابت في تجويف الفم بعد تناول أقراص البروبيوتيك. تم تطبيع التجمعات البكتيرية بعد العلاج بواسطة التجمعات البكتيرية قبل العلاج (معدل السكان٪ =CFU بعد العلاج / CFU قبل العلاج). في مجموعة الكائنات الحية المجهرية القابلة للحياة، زاد معدل السكان بشكل ملحوظ إلى 244.14 ± 164.96٪ في الأسبوع الثاني (** P<0.01, Fig. 1a) and 438.41±308.58 at Week 4 (***P<0.001), compared to Week 0. The Bifidobacterium population rate remained high at Week 6 (no administration of viable probiotic tablets for 2 weeks after Week 4, 550.16±448.19%, ***P<0.001), compared to Week 0. The Bifidobacterium population number was significantly different between the viable probiotic and placebo groups at Week 6 (**P<0.01). In the heat-killed probiotic group, the Bifidobacterium population was increased at Weeks 2 (149.92±60.47%, **P<0.01) and 4 (199.87±148.64%, *P<0.05), but was decreased at Week 6 after administration of the heat-killed probiotic tablets was stopped for 2 weeks (182.98±163.73%, Fig. 1a).

أقراص البروبيوتيك تزيد من عدد العصيات اللبنية في تجويف الفم

كشف التغير في مجموعة Lactobacillus عن طريق الفم بسبب تناول أقراص البروبيوتيك عن نمط مشابه للنمط الذي أعقبه التغيير في مجموعة Bifidobacterium عن طريق الفم. تم تطبيع التجمعات البكتيرية بعد العلاج بواسطة التجمعات البكتيرية قبل العلاج. في مجموعة البروبيوتيك القابلة للحياة، ارتفع معدل تعداد اللاكتوباكيللوس بشكل ملحوظ إلى 447.74 ± 337.89٪ في الأسبوع الثاني (**P<0.01, Fig. 1b) and 982.27±726.66% at Week 4 (***P<0.001), compared to Week 0. The Lactobacillus population rate was higher at Week 6 (no administration of viable probiotic tablets for 2 weeks after Week 4, 727.57±539.76%, ***P<0.001) than at Week 0. The Lactobacillus population number was significantly different between the viable probiotic and placebo groups at Week 6 (***P<0.001). In the heat-killed probiotic group, the Lactobacillus population was increased at Weeks 2 (256.66±183.78%, **P<0.01) and 4 (312.85 ± 279.71%, *P < 0.05). Additionally, the Lactobacillus number remained but showed no significant difference at Week 6 after the administration of heat-killed probiotics was stopped for 2 weeks (208.00±199.50%, Fig. 1b).

الشكل 1: قياس أعداد البيفيدوباكتريوم على الأسطح المخاطية للفم. أقراص بروبيوتيك قابلة للحياة؛ أقراص بروبيوتيك غير نشطة تم قتلها بالحرارة؛ أقراص الدواء الوهمي C (التحكم) ؛ وبكتيريا حمض اللاكتيك LAB. تم إجراء جمع وتحليل عينات اللعاب في الأسابيع 0 و2 و4 و6. تم تقديم البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط ​​(SD). تم استخدام اختبار t ثنائي الذيل لتحليل الفروق الإحصائية. تم وضع علامة على الدلالات الإحصائية بـ * P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001. b Measurement of Lactobacillus populations on the oral mucosal surfaces. V viable probiotic tablets; H heat-killed inactivated probiotic tablets; C placebo tablets (control); and LAB lactic acid bacteria. Collection and analysis of salivary samples at Weeks 0, 2, 4, and 6 were performed. Data were presented as the mean standard deviation (SD). A two-tailed t-test was used to analyze statistical differences. Statistical significances were marked with *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001

أقراص البروبيوتيك التي تحتوي على AP-32 وET-66 وCP-9 ترفع بشكل ملحوظ تركيز IgA في الغشاء المخاطي للفم

نظرًا لأن استهلاك أقراص البروبيوتيك (الحيوية أو المقتولة بالحرارة) قد ثبت أنه يرفع مستويات Bifidobacterium و Lactobacillus في تجويف الفم، فقد قمنا بتحليل تغييرات تركيز IgA اللعابية، والتي حدثت بسبب امتصاص منتجات البروبيوتيك. تم تطبيع مستويات IgA بعد العلاج عن طريق مستويات IgA قبل العلاج. في مجموعة الكائنات الحية المجهرية القابلة للحياة، زاد تركيز IgA اللعابي بشكل طفيف إلى 103.24 ± 8.10% في الأسبوع 2 (الشكل 2) و104.81 ± 13.26 في الأسبوع 4، ولكن بدون فروق ذات دلالة إحصائية. ومع ذلك، فإن تركيز IgA اللعابي في مجموعة البروبيوتيك القابلة للحياة، مقارنة بمجموعة الدواء الوهمي، ارتفع بشكل ملحوظ إلى 119.30 ± 12.63% في الأسبوع 6 (لا يتم إعطاء أقراص بروبيوتيك قابلة للحياة لمدة أسبوعين بعد الأسبوع 4)، مقارنة بالأسبوع 0 ( *** ص<0.001). Furthermore, in the heat-killed probiotic group, the salivary IgA concentration was slightly increased at Weeks 2 (102.51± 7.20%) and 4 (104.35 ± 10.27%). The saliva IgA concentration was increased at Week 6 (116.78 ± 12.28%, ***P < 0.001, Fig. 2), compared to Week 0.

أدت السلالات القابلة للحياة إلى زيادة مستويات IL-10 وTGF-Beta في PBMCs

نجح التحكم الإيجابي في 1 0 ميكروغرام / مل من Phytohaemagglutinin (PHA) في رفع مستويات IL -10 (58.2 ± 7.9 بيكوغرام / مل، *** P <0.001، الشكل 3 أ) وTGF- (53.4±8 بيكوغرام/مل، ***ص<0.001, Fig. 3b) in PBMCs by comparing to the negative control (PBMCs treated with medium only). Viable strains of CP-9, AP-32 and ET-66 signifcantly increased the levels of IL-10 in PBMCs to 84.2±9 pg/ml (***P<0.001, ##P<0.01), 303.1±170.9 pg/ml (*P<0.05, ##P<0.01) and 98.2±17.5 pg/ml (***P<0.01, ##P<0.01), respectively. Symbol *indicated a significant difference by comparing to the medium-treated control; symbol #indicated a significant difference by comparing to the PHA control (Fig. 3a). Besides, viable strains of CP-9, AP-32, and ET-66 significantly increased the levels of TGF-beta in PBMCs to 23.2 ± 4.7 pg/ml (***P < 0.001), 130.9 ± 16 pg/ ml (***P < 0.001, ###P < 0.001) and 31.4 ± 5.5 pg/ml (***P<0.01), respectively (Fig. 3b).

الشكل 2: تركيز الغلوبولين المناعي A (IgA) في عينات اللعاب. أقراص بروبيوتيك قابلة للحياة؛ أقراص بروبيوتيك غير نشطة تم قتلها بالحرارة؛ أقراص الدواء الوهمي C (التحكم) ؛ وبكتيريا حمض اللاكتيك LAB. تم إجراء جمع وتحليل عينات اللعاب في الأسابيع 0 و2 و4 و6. تم تقديم البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط ​​(SD). تم استخدام اختبار t ثنائي الذيل لتحليل الفروق الإحصائية. إحصائية

أقراص البروبيوتيك التي تحتوي على AP-32، ET-66، وCP-9 منعت تجمعات S. mutans في اللعاب

قد يساهم ارتفاع أعداد البكتيريا Bifidobacterium و Lactobacillus وزيادة تركيز IgA اللعابي في مكافحة الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض عن طريق الفم. في التجربة اللاحقة، قمنا باختبار التغيير في مسببات الأمراض عن طريق الفم S. mutans بسبب التدخل بروبيوتيك. تم تطبيع التجمعات البكتيرية بعد العلاج بواسطة التجمعات البكتيرية قبل العلاج. في مجموعة الكائنات الحية المجهرية القابلة للحياة، انخفض عدد سكان S. mutans بشكل ملحوظ في الأسابيع 2 (53.55 ± 31.60٪، ***P<0.001), 4 (49.60±31.01%, ***P<0.001), and 6 (55.19±42.72%, **P<0.01, Fig. 4). At week 6, S. mutans was significantly inhibited in the viable probiotic group (55.19±42.72%, ***P<0.001), compared to in the placebo group. Furthermore, in the heat-killed probiotic group, the S. mutans population was slightly decreased at Week 2 (85.81±49.87%) and significantly reduced at Week 4 (58.35 ± 33.17%, ***P<0.001). The S. mutans population level in the heat-killed probiotic group (202.81±167.99%) reverted to that in the placebo group (225.05±127.01%) at Week 6 (no administration of heat-killed probiotic tablets for 2 weeks from Week 4) (Fig. 4).

الشكل 3: زادت السلالات القابلة للحياة من مستويات IL-10 وTGF-beta في PBMCs. تم اختبار مستوى IL-10 وb TGF-beta في PBMCs عن طريق معالجة سلالات الكائنات الحية المجهرية. إضافة 5 * 105 وت م/20 ميكرولتر سلالات قابلة للحياة من CP -9، AP -32، وET -66 إلى PMBCs 10 ميكروغرام / مل. تم استخدام Phytohaemagglutinin (PHA) كعنصر تحكم إيجابي. تمت معالجة التحكم السلبي باستخدام PBMCs باستخدام وسيط RMPI -1640 فقط. تم إجراء اختبارات ثلاث نسخ. تم تقديم البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط ​​(SD). تم استخدام اختبار t ثنائي الذيل لتحليل الفروق الإحصائية. تم وضع علامة على الدلالات الإحصائية بـ P<0.05, P<0.01, P<0.001. The symbol *indicated a significant difference by comparing to the medium-treated control; symbol #indicated significant difference by comparing to the PHA control

الشكل 4: قياس أعداد البكتيريا العقدية الطافرة المسببة للأمراض على الأسطح المخاطية للفم. أقراص بروبيوتيك قابلة للحياة؛ أقراص بروبيوتيك غير نشطة تم قتلها بالحرارة؛ أقراص الدواء الوهمي C (التحكم) ؛ وبكتيريا حمض اللاكتيك LAB. تم إجراء جمع وتحليل عينات اللعاب في الأسابيع 0 و2 و4 و6. تم تقديم البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط ​​(SD). تم استخدام اختبار t ثنائي الذيل لتحليل الفروق الإحصائية. تم وضع علامة على الدلالات الإحصائية بـ * P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001

تأكيد قدرة أقراص البروبيوتيك على تثبيط نمو مسببات الأمراض عن طريق الفم عن طريق اختبار في المختبر

كشفت الدراسة المختبرية أن أقراص البروبيوتيك القابلة للحياة تمنع بشكل كبير معدل البقاء على قيد الحياة لمسببات الأمراض عن طريق الفم (الشكل 5 أ). تم تطبيع التجمعات البكتيرية بعد العلاج بواسطة التجمعات البكتيرية قبل العلاج. انخفض معدل البقاء على قيد الحياة لـ S. mutans وP. gingivalis وF. nucleatum وA. actinomy cetemcomitans في مجموعة الكائنات الحية المجهرية القابلة للحياة، مقارنة بمجموعة الدواء الوهمي، إلى 4.23% (***P < 0 .001، الدواء الوهمي=91%)، 8.64% (***P < 0.001، الدواء الوهمي=89%)، 5.77% (**P<0.01, placebo=98%), and 6.23% (**P<0.01, placebo=87%), respectively. However, the heat-killed probiotic tablet exerted weaker antibacterial effects than the viable probiotic tablet (Fig. 5b). The survival rate of S. mutans, P. gingivalis, F. nucleatum, and A. antinomy cetemcomitans in the heat-killed probiotic group, compared to in the placebo group, was slightly decreased without statistical significance (82%, placebo=91%), significantly reduced to 53% (*P<0.05, placebo=89%), not inhibited (96.88%, placebo=98%), and significantly reduced to 80% (**P<0.01, placebo=87%), respectively.

مناقشة

بالمقارنة مع مجموعة الدواء الوهمي، ستزداد أعداد بكتيريا Lactobacillus وBifidobacterium عن طريق الفم بشكل ملحوظ عن طريق تغذية أقراص بروبيوتيك قابلة للحياة أو أقراص بروبيوتيك تم قتلها بالحرارة لمدة 4 أسابيع. بالإضافة إلى ذلك، ظلت أعداد Lactobacillus وBifidobacterium عند مستويات عالية بشكل ملحوظ لمدة أسبوعين بعد تعليق استهلاك استهلاك البروبيوتيك القابل للحياة (الشكل 1 أ و ب). وبالمثل، كاميلا كاسوتشيو ألميدا وآخرون. أثبت أن تناول علاج بروبيوتيك لمدة أربعة أسابيع يمكن أن يستمر في تخفيف الأعراض لدى المرضى الذين يعانون من عدم تحمل اللاكتوز لمدة 3 أشهر على الأقل بعد التوقف عن استهلاك البروبيوتيك [23]. ومع ذلك، ينبغي تقييم التأثير المستمر للبروبيوتيك في العلاج طويل الأمد في المستقبل. بالإضافة إلى ذلك، تم زيادة تركيز IgA في اللعاب بشكل ملحوظ عند تناول أقراص البروبيوتيك القابلة للحياة والقتلة بالحرارة. قامت كل من مجموعات البروبيوتيك التي تم قتلها بالحرارة والقابلة للحياة برفع مستوى IgA اللعابي عن طريق تناول أقراص عن طريق الفم لمدة 4 أسابيع، ولكن دون إظهار فرق إحصائي مقارنة بالعلاج الوهمي. أظهر تركيز IgA في مجموعات البروبيوتيك التي تم قتلها بالحرارة والقابلة للحياة زيادة كبيرة في الأسبوع 6. ومع ذلك، يجب إجراء مزيد من الدراسة لآلية ارتفاع IgA بعد التوقف عن تناول البروبيوتيك لمدة أسبوعين (الشكل 2). أبلغ عن نتائج مماثلة حول دور سلالات الكائنات الحية المجهرية في تعديل المناعة في تجويف الفم [24]. بالإضافة إلى ذلك، تم الإبلاغ عن أن سلالات البروبيوتيك تزيد من تركيز IgA في البراز بشكل ملحوظ في الخنازير والخنازير [25]. ومع ذلك، فإن الدراسات حول تخفيف أعراض IgA في التهابات مجرى الهواء العلوي لا تزال غير كافية. يمكن دراسة الآلية الجزيئية التفصيلية للتثبيط والوقاية من التهابات مجرى الهواء العلوي بواسطة سلالات البروبيوتيك CP -9، AP -32، و ET -66 في الدراسات المستقبلية. في الدراسة الحالية، فإن السلالات القابلة للحياة CP-9 وAP-32 وET-66 من شأنها رفع مستوى IL-10 وTFG-beta في خلايا PBMC. أظهر AP -32 قدرة فعالة في زيادة IL -10 و TFG-beta في PBMCs من خلال مقارنتها بالتحكم الإيجابي PHA (الشكل 3 أ و ب). من المفترض أن السلالات القابلة للحياة CP -9 و AP -32 و ET -66 قد تحفز إفراز الخلايا B IL -10 و TFG-beta لزيادة مستويات IgA اللعابية. ومع ذلك، يجب اختبار العلاقة بين IL-10 اللعابي، وTFG-beta، وIgA اللعابي بشكل أكبر [26]. علاوة على ذلك، ما إذا كانت البروبيوتيك المقتولة بالحرارة ترفع مستوى IgA عن طريق تحفيز IL-10 و TFG-beta لا يزال غير واضح. أشار اختبار في المختبر إلى أن AP-32 المقتول بالحرارة يعزز إفراز الإنترفيرون و IL-12p70 ويقلل مستويات IL-13 [27]. وبالتالي، في هذه الدراسة السريرية، تم تحديد قدرة سلالات البروبيوتيك CP-9 وAP-32 وET-66 وAP-32 وET-66 المقتولة بالحرارة تم التحقق من صحة سلالات لمنع البكتيريا المسببة للأمراض في تجويف الفم (الشكل 4). قدمت معينات البروبيوتيك القابلة للحياة قدرة أفضل على مكافحة مسببات الأمراض من المعينات المقتولة بالحرارة عن طريق إفراز الأحماض العضوية والببتيدات المضادة للميكروبات [28] والسكريات الخارجية (EPSs) [29] البكتريوسينات [30] (الشكل 5 أ و ب). يجب اكتشاف المكونات الوظيفية المضادة للميكروبات التي تنتجها سلالات الكائنات الحية المجهرية القابلة للحياة بواسطة تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء (HPLC) وكروماتوجرافيا سائلة (LC) - قياس الطيف الكتلي في المستقبل [31]. يُذكر أن البروبيوتيك المقتول بالحرارة يمتلك مزايا رئيسية للبروبيوتيك القابل للحياة ولكن دون بعض المخاوف المتعلقة بالسلامة لسلالات البروبيوتيك القابلة للحياة [32]. ومع ذلك، ينبغي التحقق من المكونات المضادة للميكروبات في البروبيوتيك التي تم قتلها بالحرارة بشكل أكبر.

الشكل 5: تأكيد قدرة أقراص البروبيوتيك على تثبيط نمو مسببات الأمراض عن طريق الفم عن طريق اختبار في المختبر. تم التحقق من صحة قدرة أقراص البروبيوتيك القابلة للحياة والمقتولة بالحرارة على تثبيط معدل البقاء على قيد الحياة لمسببات الأمراض عن طريق الفم، بما في ذلك المكورات العقدية الطافرة، والبورفيروموناس اللثوية، والبكتيريا المغزلية النووية، وAggregatibacter actinomycetemcomitans. مجموعة فارغة، متوسطة فقط؛ مجموعة الدواء الوهمي، أقراص (1 جرام) بدون أي مكونات بروبيوتيك. تم إجراء اختبارات ثلاث نسخ. تم تقديم البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط ​​(SD). تم استخدام اختبار t ثنائي الذيل لتحليل الفروق الإحصائية. تم وضع علامة على الدلالات الإحصائية بـ * P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001

خاتمة

أقراص بروبيوتيك مختلطة قابلة للحياة، تتكون من L. salivarius subsp. salicinius AP-32, B. Animalis subsp. اللبني CP-9، وL. paracasei ET-66، والبروبيوتيك المقتول بالحرارة، بما في ذلك L. salivarius subsp. قام كل من salicinius AP-32 وL. paracasei ET-66 بوظائفهما المفيدة من خلال رفع أعداد بكتيريا Lactobacillus وBifdobacterium عن طريق الفم، وتقليل S. mutans في تجويف الفم، وزيادة تركيز IgA اللعابي لدى المشاركين الأصحاء. أثبتت نتائج الاختبارات المختبرية أن البروبيوتيك القابل للحياة يمنع بشكل فعال مسببات الأمراض عن طريق الفم، بما في ذلك S. mutans وP. gingivalis وF. nucleatum subsp. تعدد الأشكال، و A. actinomycetemcomitans. تعد مناعة الغشاء المخاطي للفم والأنف بمثابة خط الدفاع الأمامي ضد الكائنات الحية الدقيقة الغازية، وقد أصبحت هذه قضية حاسمة. وبالتالي، ستقدم هذه الدراسة استراتيجية بديلة (مكملات البروبيوتيك) للحفاظ على مناعة الفم وصحة الفم.

فوائد ملحق cistanche-كيفية تقوية جهاز المناعة

مراجع

1. تاكاكي إتش، إيتشيميا إس، ماتسوموتو إم، سيا تي (2018) الاستجابة المناعية المخاطية في الأنسجة اللمفاوية المرتبطة بالأنف عند إعطاء المواد المساعدة عن طريق الأنف. J المناعة الفطرية 10 (5-6):515-521

2. Wu RQ، Zhang DF، Tu E، Chen QM، Chen WJ (2014) الجهاز المناعي المخاطي في تجويف الفم - أوركسترا لتنوع الخلايا التائية. إنت J عن طريق الفم العلوم 6 (3): 125-132

3. Man WH, de Steenhuijsen Piters WAA, Bogaert D (2017) الكائنات الحية الدقيقة في الجهاز التنفسي: حارس البوابة لصحة الجهاز التنفسي. نات ريف ميكروبيول 15(5):259–270

4. Wald ER، Guerra N، Byers C (1991) التهابات الجهاز التنفسي العلوي لدى الأطفال الصغار: مدة المضاعفات وتواترها. طب الأطفال 87 (2): 129-133

5. Marcotte H, Lavoie MC (1998) البيئة الميكروبية للفم ودور الغلوبولين المناعي اللعابي A. Microbiol Mol Biol Rev 62(1):71–109

6. Weltzin R، Traina-Dorge V، Soike K، Zhang JY، Mack P، Soman G et al (1996) الأجسام المضادة IgA أحادية النسيلة داخل الأنف للفيروس المخلوي التنفسي تحمي قرود الريسص من عدوى الجهاز التنفسي العلوي والسفلي. J إنفيكت ديس 174(2):256–261

7. Ruggeri FM، Johansen K، Basile G، Kraehenbuhl JP، Svensson L (1998) الغلوبولين المناعي المضاد للفيروسات A يحيد الفيروس في المختبر بعد النقل الخلوي من خلال الخلايا الظهارية ويحمي الفئران الرضع من الإسهال. ي فيرول 72(4):2708-2714

8. Millet N, Solis NV, Swidergall M (2020) الغشاء المخاطي IgA يمنع خلل المبيضات البيضاء المتعايش في تجويف الفم. الجبهة المناعيول 11:2448

9. Katz J، Harmon CC، Buckner GP، Richardson GJ، Russell MW، Michalek SM (1993) الغلوبولين المناعي اللعابي الوقائي A استجابات ضد عدوى المكورات العقدية الطافرة بعد التحصين داخل الأنف باستخدام مستضد S. mutans I / II مقترنًا بالوحدة الفرعية B من ذيفان الكوليرا . تصيب المناعة 61 (5): 1964-1971

10. Moutsopoulos NM، Konkel JE (2018) المناعة الخاصة بالأنسجة عند حاجز الغشاء المخاطي للفم. الاتجاهات Immunol 39 (4): 276-287

11. Lin CW، Chen YT، Ho HH، Hsieh PS، Kuo YW، Lin JH، Liu CR، Huang YF، Chen CW، Hsu CH، Lin WY، Yang SF (2021) أقراص المعين التي تحتوي على سلالات بروبيوتيك تعزز الاستجابة المناعية عن طريق الفم والصحة . ديس عن طريق الفم. https://doi.org/10.1111/odi.13854

12. Ericson D، Hamberg K، Bratthall G، Sinkiewicz-Enggren G، Ljunggren L (2013) استجابة اللعاب IgA للبكتيريا بروبيوتيك والمكورات العقدية الطافرة بعد استخدام العلكة التي تحتوي على Lactobacillus reuteri. باثوغ ديس 68(3):82-87

13. Defrance T، Vanbervliet B، Briere F، Durand I، Rousset F، Banchereau J (1992) يتعاون Interleukin 10 وعامل النمو المتحول لتحفيز الخلايا البائية البشرية الساذجة المضادة 40- المنشطة لإفراز الغلوبولين المناعي A. J إكسب ميد 175(3):671-682

14. Papone V, Verolo C, Zafaroni L, Batlle A, Capo C, Bueno L et al (2015) الكشف عن مسببات أمراض اللثة وانتشارها لدى سكان أوروغواي المصابين بالتهاب اللثة المزمن باستخدام المنهجية التقليدية وعلم الميتاجينوميات. أمراض الأسنان 17 (25): 23-32

15. Butera A، Gallo S، Maiorani C، Molino D، Chiesa A، Preda C، Scribante A (2021) بديل بروبيوتيك للكلورهيكسيدين في علاج اللثة: تقييم المعلمات السريرية والميكروبيولوجية. الكائنات الحية الدقيقة 9(1):69

16. Wang Y, Li X, Ge T, Xiao Y, Liao Y, Cui Y et al (2016) البروبيوتيك للوقاية من التهابات الجهاز التنفسي لدى الأطفال وعلاجها: مراجعة منهجية وتحليل تلوي للتجارب العشوائية ذات الشواهد. الطب 95(31):e4509. https://doi.org/10.1097/ MD.0000000000004509

17. Laufer AS، Metlay JP، Gent JF، Fennie KP، Kong Y، Pettigrew MM (2011) المجتمعات الميكروبية في الجهاز التنفسي العلوي والتهاب الأذن الوسطى عند الأطفال. مبيو 2(1):هـ00245-10. https://doi.org/10. 1128/مبيو.00245-10

18. Chen YT، Hsieh PS، Ho HH، Hsieh SH، Kuo YW، Yang SF، Lin CW (2020) النشاط المضاد للبكتيريا لسلالات البروبيوتيك القابلة للحياة والقتلة بالحرارة ضد مسببات الأمراض عن طريق الفم. ليت أبل ميكروبيول 70(4):310-317

19. Bonifait L، Chandad F، Grenier D (2009) البروبيوتيك لصحة الفم: أسطورة أم حقيقة؟ جي كان دنت مساعد 75(8):585-90

20. هسيه PS، An Y، Tsai YC، Chen YC، Chuang CJ، Zeng CT، King AE (2013) إمكانات سلالات الكائنات الحية المجهرية لتعديل الاستجابات الالتهابية للخلايا الظهارية والمناعية في المختبر. نيو ميكروبيول 36 (2): 167-179

21. الرفاعي M، Burke CM، Baker CA، Jones NG، Bousheri S، Bangsberg DR، Cao H (2009) يتم إنتاج TGF- و IL -10 بواسطة خلايا CD 8+ T من فيروس نقص المناعة البشرية (HIVspecifc) بواسطة CTLA{ {5}} إرسال الإشارات على خلايا CD4+ T. بلوس وان 4(12):e8194

22. Ranganathan V، Akhila CH (2019) المكورات العقدية الطافرة: هل أصبحت مرتكبًا رئيسيًا للمظاهر الفموية؟ J ميكروبيول إكسب 7 (4): 207-213

23. Almeida CC، Lorena SLS، Pavan CR، Akasaka HMI، Mesquita MA (2012) قد تستمر الآثار المفيدة للاستهلاك طويل المدى لمزيج بروبيوتيك من Lactobacillus casei Shirota و Bifidobacterium breve Yakult بعد تعليق العلاج في المرضى الذين يعانون من عدم تحمل اللاكتوز. نوتر كلين براكت 27(2):247-251

24. Braathen G، Ingildsen V، Twetman S، Ericson D، Jørgensen MR (2017) يتزامن وجود Lactobacillus reuteri في اللعاب مع ارتفاع IgA اللعابي لدى الشباب بعد تناول معينات البروبيوتيك. الميكروبات المفيدة 8 (1): 17-22

25. Scharek L، Guth J، Filter M، Schmidt MFG (2007) تأثير البكتيريا بروبيوتيك Enterococcus faecium NCIMB 10415 (SF68) وBacillus cereus var. إليكم NCIMB 40112 بشأن تطور مصل IgG وبراز IgA في الخنازير وخنازيرها. قوس أنيم نوتر 61(4):223-234

26. Ebrahimpour-Koujan S، Milajerdi A، Larijani B، Esmaillzadeh A (2020) تأثيرات البروبيوتيك على السيتوكينات اللعابية والجلوبيولين المناعي: مراجعة منهجية وتحليل تلوي في التجارب السريرية. مندوب العلوم 10 (1): 1-11

27. Ou CC، Lin SL، Tsai JJ، Lin MY (2011) تعمل بكتيريا حمض اللاكتيك المقتولة بالحرارة على تعزيز إمكانات التعديل المناعي عن طريق تحريف الاستجابة المناعية نحو استقطاب Th1. J الغذاء العلمي 76 (5): M260 – M267. https://doi.org/10.1111/j.1750-3841.2011. 02161.x

28. Nair MS، Amalaradjou MA، Venkitanarayanan K (2017) خصائص البروبيوتيك المضادة للفيروسات في مكافحة التسبب في الأمراض الميكروبية. Adv Appl Microbiol 98: 1–29

29. Wu MH، Pan TM، Wu YJ، Chang SJ، Chang MS، Hu CY (2010) أنشطة عديد السكاريد الخارجي من البيفيدوبكتريا بروبيوتيك: التأثيرات المناعية (على البلاعم J774A.1) وخصائص مضادة للميكروبات. إنت J الغذاء ميكروبيول 144 (1): 104-110

30. Barefoot SF، Klaenhammer TR (1983) كشف ونشاط اللاكتاسين ب، وهو البكتريوسين الذي تنتجه الملبنة الحمضية. أبل إنفيرون ميكروبيول 45(6):1808-1815

31. Kim PI، Sohng JK، Sung C، Joo HS، Kim EM، Yamaguchi T، Kim BG (2010) توصيف وتحديد هيكل الببتيد المضاد للميكروبات، أشباه البشر، الذي تنتجه المكورات العنقودية البشرية MBBL 2-9. الكيمياء الحيوية Biophys Res Commun 399 (2): 133-138

32. Piqué N، Berlanga M، Miñana-Galbis D (2019) الفوائد الصحية للبروبيوتيك (Tyndallized) المقتول بالحرارة: نظرة عامة. إنت J مول العلوم 20(10):2534