علاج الالتهاب وأمراض الكلى: ما هو سبب الدور الممرض للالتهاب في تورط الكلى في اعتلال المثانة؟
Mar 13, 2022
اتصال:joanna.jia@wecistanche.com
يكشف التفاعل بين الجالكتين -3 والسيستينوسين عن دور مسبب للأمراض للالتهاب في تأثر الكلى بداء السيستين
تاتيانا لوبري1,2 وآخرون
اشتعاليشارك في التسبب في العديد من الاضطرابات. ومع ذلك ، فإن الآليات الأساسية غالبًا ما تكون غير معروفة. هنا ، نختبر ما إذا كانداء السيستين، البروتين المتضمنداء السيستين، هو منظم مهم للغالكتين-3، عضو في عائلة بروتين b-galactosidase ، أثناءاشتعال. داء السيستينهو اضطراب التخزين الليزوزومي ، وعلى الرغم من التعبير في كل مكان عن داء السيستين ، فإنالكلىهو العضو الأساسي الذي يتأثر بالمرض.داء السيستينلتعزيز توطين الجسيمات الليزوزومية وتدهور الجالكتين -3. في كتنس–/–الفئران ، نموذج الفأرداء السيستين، يتم التعبير عن galectin -3 بشكل مفرط فيالكلى. يؤدي غياب الجلكتين -3 في الفئران السستينية إلى تحسين الوظيفة الكلوية المرضية وبنيتها ويقلل من البلاعم / تسلل الخلايا الأحادية في كلية Ctns–/–جال 3–/–مقارنة الفئران بـ Ctns–/– الفئران. تشير هذه البيانات بقوة إلى أن الجلكتين -3 يتوسطاشتعالتشارك فيالكلىتطور المرض في داء السيستين. علاوة على ذلك ، وجد أن الجالكتين -3 يتفاعل مع بروتين الجاذب الكيميائي أحادي الخلية المؤيد للالتهابات -1 ، والذي يحفز تجنيد الخلايا الأحادية / الضامة ، وثبت أنه يزداد بشكل ملحوظ في مصل Ctns - / - الفئران وكذلك مرضىداء السيستين. وبالتالي ، فإن النتائج التي توصلنا إليها تسلط الضوء على دور جديد لتفاعل cystinosis و galectin -3 في الالتهاب وتقدم تفسيرًا ميكانيكيًا إضافيًا لالكلىمرض داء السيستين. قد يؤدي هذا إلى تحديد أهداف جديدة للمخدرات للتأخيرداء السيستينتقدم.
الكلمات الدالة:فشل كلوي مزمن; داء السيستين؛ جالكتين -3 ؛اشتعال؛ بروتين جذاب كيميائي وحيد الخلية -1
يمكن أن يعالج cistanche مرض الكلى المزمن و cystinosis
السبب الجذري للالتهاب هو أن أكسيد النيتريك يمكن أن يؤدي إلى إنتاج الخلايا الالتهابية.سيستانشهو دواء عشبي صيني قيم. يمكن لمكوناته الفعالة أن تمنع إفراز أكسيد النيتريك وتلعب دورًا في منع وعلاج الالتهابات وأمراض الكلى.
بيان متعدية
على الرغم من العلاج ، لا يزال المرضى يتقدمون إلى المرحلة النهائية من الفشل الكلوي. في هذه الدراسة ، أظهرنا أن عدم وجودداء السيستينيؤدي إلى ضعف الجالكتين -3 (غال -3) تدهور الجسيمات ، مما يؤدي إلىاشتعالوتطورفشل كلوي مزمنفيداء السيستين. تفتح هذه النتائج آفاقًا جديدة حول الأهداف العلاجية المحتملة التي يمكن أن تحد أو تؤخر تنكس الكلى لدى المرضى المصابينداء السيستين. على هذا النحو ، فإن العقاقير المضادة للالتهابات ومثبطات غال -3 مثل العقاقير غير الستيرويدية المضادة للالتهابات أو الإندوميتاسين قد تحسن من التسبب في أمراض الكلى في داء السيستين.
اشتعالهي استجابة طبيعية حادة للكائن الحي للإصابة أو العدوى ،1لكنها مزمنةاشتعاليرتبط بتلف الأنسجة. في حالة الأمراض المزمنة ، مثل مرض السكري ، تعمل الأنسجة التالفة على تنشيط جهاز المناعة ، مما يؤدي إلى استجابة التهابية مستمرة ، وفي النهاية تنكس الأنسجة.2 السيتوكينات هي العوامل الرئيسية فياشتعالوقادرة على تنشيط أو حلاشتعالprocess.3 في المرضى الذين يعانون منفشل كلوي مزمن(كد) ، وارتفاع تركيز البلازما من السيتوكينات (إنترلوكين [IL] -6 وعامل نخر الورم-أ) واشتعالالواسمات (البروتين التفاعلي C ، IL -6 ، الهيالورونان ، والنيوبترين) مرتبطة بالتقدم إلى مرض الكلى في نهاية المرحلة. .
داء السيستينهو مرض استقلابي وراثي متنحي ينتمي إلى عائلة اضطراب التخزين الليزوزومي ويتميز بتراكم السيستين في جميع الأعضاء.5 الجين معيب فيداء السيستين، CTNS ، يشفر الناقل المشترك للسيستين / البروتون الليزوزومي ، داء السيستين.6,7 على الرغم من التعبير عن CTNS في كل مكان ، فإنالكلىهو أول عضو يصيب الأشخاص المصابينداء السيستين. يتواجد المرضى عادةً في السنة الأولى من حياتهم مع متلازمة فانكوني ، والتي تتميز باضطرابات شديدة في السوائل والكهارل ، وضعف النمو ، والكساح.8يتطور مرض الكلى المزمن بعد ذلك ، والذي يتطور إلى المرحلة النهائية من مرض الكلى ويتطلبالكلىالزرع. يؤدي تراكم السيستين في جميع الأنسجة في النهاية إلى اختلال وظيفي في العديد من الأعضاء ؛ يعاني المرضى من رهاب الضوء والعمى وقصور الغدة الدرقية وقصور الغدد التناسلية والسكري والاعتلال العضلي وتدهور الجهاز العصبي المركزي.9 في الخلفية C57BL / 6 ، يظهر نموذج الماوس بالضربة القاضية (Ctns–/–) 10 يكرر النمط الظاهري للكلى لمرضى الكستئين ،11 وكذلك ترسب بلورات السيستين في القرنية12و ضعف الغدة الدرقية.13
في هذه الدراسة ، نكشف عن دور جديد لـداء السيستينفياشتعالمن خلال تفاعلها مع Gal -3. Gal -3 هو عضو في عائلة البروتين المرتبطة بـ Lectin و b-galactoside 21 ويشارك في وظائف بيولوجية متعددة ، بما في ذلكاشتعال.22في سياقالكلىالأمراض ، فقد تبين أن تثبيط Gal -3 يقلل من التعبير المؤدي للالتهابات والتليف الكلوي ويمنع انخفاض معدل الترشيح الكبيبي في نماذج فرط الألدوستيرونية أو ارتفاع ضغط الدم أو السمنة.23–26نقدم هنا دليلاً على أن ، فيداء السيستين، وغيابداء السيستينيؤدي إلى جال -3 التعبير الزائد فيالكلى، وتعزيز تسلل البلاعم وتقدم CKD. بالإضافة إلى ذلك ، نحدد بروتين الجذب الكيميائي وحيد الخلية -1 (MCP -1) كوسيط محتمل ، يكشف عن أهداف جينية جديدة للعلاج الدوائي. يتفاعل RESULTS Gal -3 مع داء السيستين عبر مجال التعرف على الكربوهيدرات لتحديد تفاعل معين الشركاء الذين يستخدمون مطياف الكتلة الكمي ، كلب مادين داربيالكلىتم نقل خلايا (MDCK) ببنية لينتيفيرال للتعبير بثبات عن بروتين اندماج البروتين الفلوري الأخضر (GFP). بالإضافة إلى 9 وحدات فرعية من نوع Hþ أدينوسين ثلاثي الفوسفاتيز المنشور سابقًا ،19تم تحديد Gal -3 كأحد البروتينات التي تتفاعل معهاداء السيستين(الشكل 1 أ). تم تأكيد هذا التفاعل بشكل أكبر من خلال الترسيب المناعي المشترك يليه النشاف الغربي (الشكل 1 ب و ج). بالإضافة إلى ذلك ، أظهرنا هذا التفاعل بين غال -3 وداء السيستينتم التوسط من خلال Gal -3 مجال التعرف على الكربوهيدرات (CRD) المترجم في الذيل الطرفي C للبروتين. تم تثبيط التفاعل بواسطة ثيوديجالاكتوزيد ، وهو مثبط قوي لتفاعلات الجالكتين والكربوهيدرات (الشكل 1 د). مثل كل الجلكتين ، فإن Gal -3 له صلة بالبروتينات الغليكوزيلاتية ، 21 لذلك من المحتمل أن يحدث التفاعل مع Gal -3 من خلال جزء cystinosis glycosylated الموجود في الذيل الطرفي N من البروتين.27
يحسن السيستينوسين توطين الجسيمات الليزوزومية وتدهورها. -3
للتحقق من التوطين الليزوزومي المحتمل لـ Gal -3 عند التفاعل معهاداء السيستين، أظهرنا أن Gal -3 ، مثل cathepsin D (بروتياز داخل الجسم) ، تمت حمايته من الهضم بواسطة بروتيناز K ، بينما تم هضم كلا البروتينين عندما تم نفاذ الجسيمات الحالة باستخدام Triton X - 100 (الشكل 2 أ والتكميلي الشكل S1). تم الحصول على بيانات مماثلة في الجسيمات الحالة المعزولة من كبد الفأر ، مما يؤكد توطين الليزوزومات لـ Gal -3 في الجسم الحي (الشكل 2 ب و ج). بسبب عدم وجود جسم مضاد موثوق للكشفداء السيستين، تم إجراء التلقيح المناعيداء السيستين-GFP - التعبير عن خطوط خلايا MDCK بجسم مضاد لـ Gal -3. وأكدت وجود Gal -3 في تجويف الجسيمات الحالة ، بينما تم العثور على cystinosis-GFP و Lamp -2 (بروتين الغشاء الليزوزومي) فقط في غشاء الحويصلات (الشكل 2 د).
للتحقيق في ما إذا كانسيستينوسينكان متورطًا في حركة -3 غال ، قمنا بتحليل ديناميكيات كليهماداء السيستينو Gal -3 - حويصلات موجبة باستخدام الانعكاس الداخلي الكلي للخلية الحية المزدوجة اللون ، الفحص المجهري FL مضان في الخلايا الليفية الجنينية للفأر (MEFs) من النوع البري (WT) و Ctns–/–الفئران التي تعبر عن كل من CTNS-DsRed و Gal -3 - GFP. أكد تحليلنا ذلكداء السيستينو Gal -3 خضعوا لعملية تحديد مواقع ملونة حقيقية في Ctns - / - MEFs كما تم التحقق من صحتها من خلال التوزيع الزماني المكاني المماثل لهذه الجزيئات في منطقة الفحص المجهري للانعكاس الداخلي الكلي FL (الشكل 2 هـ). كانت البيانات في WT MEFs متشابهة (البيانات غير معروضة). علاوة على ذلك ، عندما تم نقل MEFs فقط مع Gal - 3 - تم تحليل GFP ، Gal -3 - تم العثور على GFP في السيتوبلازم ولم يلاحظ أي بنية حويصلية مميزة ، على عكس تعداء المشترك مع CTNS-DsRed ( البيانات غير ظاهرة).
تم تأكيد هذه البيانات في خلايا 293T ، حيث لوحظت إشارة GFP قوية في السيتوبلازم في الخلايا التي تعبر فقط عن Gal -3 - GFP ، بينما في الخلايا التي تعبر عن كل من Gal -3 - GFP وسيستينوسين-DsRed، Gal -3 - كان GFP مترجمًا بشكل أساسي داخل cystinosis-DsRed- معربًا عن الجسيمات الحالة (الشكل 3 أ). علاوة على ذلك ، القياس الكمي لتعبير البروتين Gal -3 في الخلايا المنقولة باستخدام Gal -3 - GFP وحده أو غال - 3 - GFP و CTNS-DsRed ، و Gal -3 - GFP و DsRed كعنصر تحكم ، أظهر عددًا أقل بكثير من Gal -3 - بروتينات GFP في الخلايا التي تم نقلها بشكل مشترك مع CTNS-DsRed مقارنة بالخلايا المنقولة باستخدام Gal -3 - GFP وحدها أو المنقولة بشكل مشترك مع DsRed (الشكل 3 ب). إجمالاً ، تشير هذه النتائج إلى ذلكسيستينوسينيعزز التوطين الليزوزومي وتدهور غال -3. ثبت أن السيستينوسين متورط في CMA. 28 يشارك بروتين الصدمة الحرارية 70 كيلو دالتون (Hsc70) في CMA من خلال المساعدة في الكشف عن بروتينات الركيزة وانتقالها عبر الغشاء إلى التجويف الليزوزومي بطريقة تعتمد على LAMP2A. 29،30 لأن Gal { تم اقتراح تدهور {8}} بواسطة CMA ، 31 لقد بحثنا في توطين Gal -3 بالنسبة إلى Hsc70 في MEFs cystinotic. أكد التحليل المجهري متحد البؤر تلازم البنى الموجبة لـ Gal -3 - GFP في Hsc 70- في كل من WT (البيانات غير معروضة) و Ctns–/–الخلايا (الشكل 3 ج) ، التي تدعم النقل المشترك لـ Gal -3 مع Hsc70 وتشير إلى أن استيعاب الجسيم ولكن ليس التعرف على Gal -3 بواسطة المرافق معيب فيداء السيستين.
يشارك جال -3 في التهاب الكلى في Ctns–/–الفئران
لدراسة دور غال -3 فيداء السيستينفي الجسم الحي ، أنشأنا نموذجًا مزدوجًا لفأر بالضربة القاضية ناقصًا في كليهماسيستينوسينوجال -3 (Ctns–/–غال -3–/–الفئران). WT ، Ctns–/–و غال -3–/–تم استخدام الفئران كمواضيع تحكم. في C57BL / 6 Ctns–/–على الفئران ، تظهر التشوهات الكلوية في حوالي 10 أشهر من العمر .11 لذلك ، أجريت الدراسات في عمر 8 إلى 9 أشهر ، عندماالكلىيبدأ اكتشاف الحالات الشاذة ، وفي عمر 12 إلى 15 شهرًا عندما تتطور التشوهات الكلوية. لأنه وجد أن محتوى السيستين مختلف في Ctns للذكور والإناث–/– الكلى، تم تحليلها بشكل منفصل. إذا زاد محتوى السيستين مع تقدم العمر في كلا النوعين الجينيين ، فلم يلاحظ اختلاف كبير في كليتي الذكور والإناث بين الفئران Ctns - / - Gal -3 - / - و Ctns–/– الفئران في عمر 8 إلى 9 أشهر ومن 12 إلى 15 شهرًا (الشكل 4 أ).
تم تقييم وظيفة الكلى في مصل الدم والبول ولم يلاحظ أي فرق كبير بين WT و Ctns–/–الفئران من 8 إلى 9 أشهر (البيانات غير معروضة) ، ولكن من 12 إلى 15 شهرًا ، Ctns–/–أظهرت الفئران مستويات الكرياتينين واليوريا في الدم أعلى بشكل ملحوظ مقارنة مع الفئران WT. ومن المثير للاهتمام ، Ctns–/–غال -3–/–أظهرت الفئران تحسنا في وظائف الكلى مقارنة مع Ctns–/–الفئران في عمر 12 إلى 15 شهرًا ، مع انخفاض مستوى الكرياتينين في الدم (P <0. 0 5) واليوريا (P <0.05 ؛ الجدول 1).
دراسات نسيجية من 8- إلى 9- شهر و 12- إلى 15- شهر من الفأرالكلىكشفت المقاطع عن وجود تشوهات شديدة في كتنس–/– الكلى، بما في ذلك ضمور أنبوبي ، وتراجع الكبيبات ، وتسلل أحادي النواة. تراوح التحليل الأعمى لأقسام الكلى من مدى الضرر القشري من 1 (بنية الأنسجة المحفوظة) إلى 6. متوسط درجة Ctns–/–كان عمر الفئران 2. 64 - 0. 36 في عمر 9 أشهر (ن ¼ 7) و 4.12 0. 37 في عمر 12 إلى 15 شهرًا (ن ¼ 16). في كلى كتنس–/–غال -3–/–الفئران في نفس العمر ، كانت هذه الحالات الشاذة أقل انتشارًا بشكل ملحوظ: 1. 62 - 0. 11 في 9 أشهر (n ¼ 21 ؛ P <0. 0="" 5="" ،="" mann-whitney="" t-="" test)="" و="" 3.="" 04="" -="" 0="" .22="" في="" 12="" إلى="" 15="" شهرًا="" (n="" ¼="" 33="" ؛="" p=""><0.05 ،="" اختبار="" mann-whitney="" t)="" (الشكل="" 4="" ب="" والشكل="" التكميلي="" s2).="" علاوة="" على="" ذلك="" ،="" تم="" تخصيص="" نسبة="" من="" الضمور="" الأنبوبي="" لكل="" نسيج="" ،="" ومتوسط="" لـ="">–/–الفئران والكتنس–/–غال -3–/–كانت الفئران 66 في المائة و 42 في المائة ، على التوالي ، في عمر 12 إلى 15 شهرًا (P 0. 01). علاوة على ذلك ، هناك فرق مذهل بين Ctns–/–و Ctns–/– غال -3–/– الكلىالمقاطع كان وجود عدد قليل من التسلل أحادي النواة في Ctns–/–غال -3–/–المقاطع ، في حين لوحظت عمليات التسلل الثقيلة باستمرار في Ctns–/– الكلى(الشكل 4 ب).
وصفنا التسلل أحادي النواة الذي لوحظ من خلال الفحص النسيجي في 8- إلى 9- شهرًا من Ctns–/– الكلىكخلايا ضامة / وحيدات عن طريق المناعة المشتركة مع CD68 و CD45 ومع CD68 وفئة التوافق النسيجي الرئيسية من الدرجة الثانية (الشكل التكميلي S3) ، ولكن ليس مع CD68 و CD163 ، مما يشير إلى أن هذه الضامة لها 1- ملف تعريف محرض للالتهاب .32 ، 33 أظهر القياس الكمي للقرص المضغوط 68- الخلايا الإيجابية عددًا أقل بكثير من الضامة / الوحيدات في WT و Gal -3–/–و Ctns–/–غال -3–/– الكلىمقارنة مع Ctns–/– الكلى(الشكل 4 ج) ، تأكيد البيانات النسيجية (الشكل 4 ب).
إجمالاً ، تشير هذه النتائج إلى أن غال -3 متورط في تجنيد الضامة / وحيدات في cystinoticالكلىوأن غيابه يحسن من أمراض الكلى في ctns–/–الفئران. ومن ثم يقترح ذلكاشتعالمسؤول ، على الأقل جزئيًا ، عن تدهور الكلى في Ctns–/– الفئران.
تظهر الكلى التي تعاني من نقص Ctns زيادة في التعبير -3
باستخدام تحليل اللطخة الغربية ، وجدنا أن تعبير Gal -3 زاد بشكل ملحوظ فيالكلىمن 12- شهر Ctns–/–مقارنة الفئران مع الفئران WT (الشكل 5 أ و ب). للتحقق مما إذا كان هذا التعبير المتزايد لـ Gal -3 خاصًا بـ Ctns–/– الكلى، حددنا تعبير Gal -3 عند مستويات النص والبروتين فيالكلىمن الفئران المصابة بمرض الكلى المزمن الناجم عن المجموع الفرعي القياسي لعملية استئصال الكلية التدريجي 2- ومن الحيوانات التي خضعت لعملية زائفة. WT و Ctns–/–تم استخدام الفئران كمواضيع تحكم. تمت زيادة نصوص Gal -3 بشكل ملحوظ في Ctns - / - والكلى الزائفة ولكن زادت بشكل كبير في CKDالكلىمقارنة مع الفئران WT (الشكل 5 ج). في المقابل ، على مستوى البروتين ، تم اكتشاف Gal -3 فقط في Ctns–/–الكلى ، مما يوحي بشدة أن Ctns فقط–/–الكلى غير قادرة على تحلل بروتين غال -3 (الشكل 5 د). تلطيخ الفلورسنت المناعي للغال -3 في الفئرانالكلىفي عمر 8 إلى 9 أشهر ، أظهر أيضًا الإفراط في التعبير عن Gal -3 في Ctns–/– الكلىمقارنة مع WTالكلى(الشكل 5 هـ). علاوة على ذلك ، تم التعبير عن Gal -3 بواسطة الضامة CD68þ ، وكذلك الخلايا الكلوية في Ctns–/– الكلىفي عمر 8 إلى 9 أشهر (الشكل التكميلي S4). إجمالاً ، تتوافق هذه البيانات مع تدهور غال -3 في حالة عدم وجودداء السيستينكما هو موضح في المختبر (الشكل 3 أ و ب) ، مما يؤدي إلى تراكم بروتين غال -3 في Ctns–/– الكلى.
يؤدي غياب السيستينوسين إلى زيادة MCP في المصل -1 عبر تنظيم Gal -3
غال -3 ينظماشتعالمن خلال آليات مختلفة .34 وبالتالي ، للحصول على مزيد من الأفكار حول الآلية فيداء السيستين، بحثنا في التعبير عن السيتوكينات المختلفة المؤيدة للالتهابات أو المضادة للالتهابات في مصل 12- إلى 15- شهر من WT ، Ctns–/–، غال -3–/–و Ctns–/–غال - 3–/–الفئران. تم قياس ستة مستويات من السيتوكينات بواسطة مصفوفة حبات القياس الخلوي للفأر ، MCP -1 ، interferon-g ، عامل نخر الورم ، و IL -10 ، IL -6 ، و IL -12 p70. تم زيادة تعبير MCP -1 فقط بشكل ملحوظ في مصل الفئران Ctns مقارنة مع الفئران WT و Gal -3 - / - وكذلك Ctns–/–غال -3–/–الفئران ، التي كانت مستويات مصلها MCP {0}} قابلة للمقارنة مع الفئران WT (الشكل 6 أ). يتم إنتاج MCP -1 بواسطة أنواع مختلفة من الخلايا ، والمصدر الرئيسي لـ MCP -1 هو الضامة والخلايا الأحادية ، 35 ويعمل كجاذب كيميائي للخلايا الوحيدة والضامة التي تنظم ترحيلها وتسللها. في المقابل ، في نفس العمر ، وجد أن تعبير Gal -3 متشابه في مصل Ctns - / - الفئران (44.33 9.81 نانوغرام / مل ؛ ن ¼ 5) وفئران WT (40. {{12} } .41 نانوغرام / مل ؛ ن ¼ 7).
تم إجراء مزيد من التحقيق في العلاقة بين Gal -3 و MCP -1 من خلال الترسيب المناعي المشترك باستخدام Gal -3 - GFP و MCP -1 - DsRed- أو Gal -3 - GFP و CTNS-DsRed- (كعنصر تحكم إيجابي) معربًا عن 293T خلية. لوحظ التفاعل بين Gal -3 و MCP -1 (الشكل 6 ب) ، مما يشير إلى تحريض مباشر لـ MCP -1 بواسطة Gal -3. أظهر الحضانة باستخدام N-Acetyl-D-lactosamine (LacNAc) ، وهو مثبط لـ Gal -3 CRD ، أنه على عكسسيستينوسينالتفاعل ، لا يشارك CRD في التفاعل بين Gal -3 و MCP -1 (الشكل 6 ج).
لتقييم ما إذا كانت هذه النتيجة ذات صلة بالبشر ، قمنا بقياس مستويات Gal -3 و MCP -1 في المرضى الذين يعانونداء السيستينالذين لم يخضعوا للعلاج المثبط للمناعة أو تناول الأدوية المضادة للالتهابات. على الرغم من اكتشاف زيادة طفيفة في مستوى Gal -3 في مصل المرضى الذين يعانون من داء السيستين مقارنة بالمتبرعين الأصحاء ، لم يكن الاختلاف كبيرًا (الشكل 6 هـ) ، مما يؤكد النتائج التي تم الحصول عليها في Ctns–/–الفئران. كان لدى مريضان فقط مستوى غال -3 مرتفع (25.34 و 39.54 نانوغرام / مل) ؛ تم اعتبارها قيمًا متطرفة وبالتالي لم يتم تضمينها في الشكل 6 هـ. في المقابل ، باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم الموجه ضد MCP البشري -1 (الشكل 6 د) ، تم العثور على زيادة كبيرة في مستويات MCP في المصل -1 في المرضى الذين يعانون منداء السيستين(252. 1 - 18. 4 جزء من الغرام / مل ؛ ن 19 ؛ الفئة العمرية 1-23 عامًا) على الرغم من العلاج بالسيستامين مقارنة مع الأشخاص الأصحاء (166. 9 -13. 5 جزء من الغرام / مل ؛ ن 1 0 ؛ الفئة العمرية من 8 إلى 63 عامًا) (P <0.001). لم="" يتم="" العثور="" على="" أي="" ارتباط="" بين="" العمر="" ومستوى="" mcp="" -="" 1="" في="" كلا="">داء السيستينوالمتبرعين الأصحاء (البيانات غير معروضة).
سيستانشلديهامضاد التهابالخصائص
نقاش
على الرغم من حقيقة أن السيستين يتراكم في جميع الأنسجة لدى المرضى المصابين بهداء السيستين، الكلى هي الأعضاء الأكثر عرضة للتلف. وبالتالي نعتقد أن تراكم السيستين ليس المسؤول الوحيد عن تنكس الكلى. هنا ، نصف دور جديد لـسيستينوسينفي تنظيماشتعالتشارك في تطور مرض الكلى المزمن فيداء السيستين. قد تشرح هذه الدراسة سبب تطور المرضى إلى المرحلة النهائية من الفشل الكلوي على الرغم من خضوعهم للعلاج بالسيستامين.
كشفت دراسة شركاء cystinosis الجزيئي عن تفاعل مباشر مع Gal -3 ، والذي يمكن تثبيطه بواسطة مثبطات Gal -3 CRD. أظهرت الدراسات الحديثة أن Gal -3 يمكن أن يتفاعل مع الجليكانات الموجودة في التجويف الليزوزومي بعد التلف الليزوزومي مثل تراكم البلورات. 36 في دراستنا ، التفاعل بين Gal -3 وسيستينوسينتمت دراسته في الخلايا السليمة المعبر عنهاسيستينوسينوبالتالي ، لا تتراكم بلورات السيستين أو السيستين. بالإضافة إلى ذلك ، أدى التعبير المفرط لكل من Gal -3 و cystinosin في الخلايا السليمة إلى تعديل التوطين تحت الخلوي لـ Gal -3 ، والذي تم ترجمته بعد ذلك إلى الجسيمات الحالة ، مقارنة بالتعبير الزائد عن Gal -3 فقط ، والذي كان يقع في السيتوبلازم. تشير هذه النتائج بقوة إلى أن التفاعل بين Gal -3 وسيستينوسين يحدث بشكل مستقل عن التلف الليزوزومي وأن السيستينوسين مسؤول بشكل فعال عن توطين جال -3 الليزوزومات. في السابق ، تم إثبات أن Gal -3 يتحلل من خلال التحلل البروتيني المعتمد على الليزوزومات في غياب Abl و Arg ، 2 كينازات التيروزين.31
بالإضافة إلى ذلك ، أظهرنا ذلكداء السيستينو Gal -3 يشاركون في التوطين في الهياكل الحويصلية الديناميكية ويتم تعبئتهم معًا بطريقة زمانية مكانية.سيستينوسينكان مرتبطًا سابقًا بآليات تهريب LAMP2A الليزوزومي ، وهو مستقبل CMA الوحيد المعروف ، والذي تم تحديد موقعه بشكل خاطئ فيداء السيستين.28تم سابقًا إثبات أن تدهور Gal -3 يتم توسطه بواسطة CMA.31أكد التحليل المجهري متحد البؤر تلازم البنى الموجبة لـ Gal -3 في Hsc 70- في كل من Ctns–/– وخلايا WT ، التي تدعم النقل المشترك لـ Gal -3 مع Hsc70 للعرض في الجسيمات الحالة والتدهور بواسطة CMA حيث يساعد Hsc70 في نقل بروتينات الركيزة عبر الغشاء إلى التجويف الليزوزومي.29,30التفسير المحتمل لنتائجنا هو ذلكسيستينوسينينظم تهريب وتسليم غال -3 إلى الجسيمات الحالة النشطة CMA للتدهور.
هذا المسار الجديدسيستينوسين- يعتمد غال -3 التوطين الليزوزومي وتدهوره في الجسم الحي حيث تظهر الفئران التي تعاني من نقص في مركب الكربون (Ctns) إفراطًا في التعبير عن Gal -3 داخلالكلى. علاوة على ذلك ، في حين أن زيادة Gal -3 mRNA كانت محدودة في Ctns–/–الكلى مقارنة بنموذج آخر من CKD ، تم اكتشاف كمية كبيرة من بروتين Gal -3 فقط بالـ ctns–/– الكلى. هذه البيانات تدعم بقوة الاستنتاج القائل بأنسيستينوسينيشارك في تدهور بروتين Gal -3 ، والذي يمكنه التحكم في الإفراط في التعبير عن Gal -3 mRNA في ظروف الإجهاد مثل CKD.
جال -3 له عدة أدوار بيولوجية ، بما في ذلك الأدوار في الأدوار الحادة والمزمنةاشتعالعن طريق جذب الخلايا الوحيدة والضامة.37,38في كتنس–/– الفئران ، لاحظنا تسلل ثقيل أحادي النواة بشكل رئيسي فيالكلىكما هو موضح سابقا،11,39والتي تم تصنيفها على أنها حيدات / بلاعم. في المقابل ، الكلى من الضربة القاضية المزدوجة Ctns–/–غال -3–/–أظهرت الفئران عددًا قليلاً جدًا من الخلايا الأحادية / البلاعم التي تتسلل ، مما يشير بقوة إلى أن غال -3 متورط فياشتعالفي كليتي ctns–/–الفئران. في سياق إصابة الأنسجة المتكررة ، قد يؤدي جال -3 إلى الانتقال إلى الحالة المزمنةاشتعالوالتليف.34تمشيا مع هذه النتائج ، توضح بياناتنا مشاركة غال -3 في تطور CKD فيداء السيستين. في الواقع ، الضربة القاضية المزدوجة كتنس–/– غال -3–/–عرضت الفئران بشكل أفضلالكلىالوظيفة والهيكل مقارنة بـ Ctns–/–الفئران. وبالمثل ، غال -3 - تظهر الفئران التي تعاني من نقص في تليف كلوي أقل فيالكلىمقارنة مع الفئران WT بعد انسداد الحالب أحادي الجانب ،40 و Gal {0}} كانت الفئران التي تعرضت للإصابة بنقص التروية - ضخه لها وظيفة كلوية أفضل مقارنة بفئران WT التي تعرضت لإصابة نقص التروية - ضخه.41
على الرغم من وجود علاقة بين مستويات Gal -3 في البلازما وتطور CKD ، لم يلاحظ 42 أي اختلاف في تعبير Gal -3 في مصل الفئران والبشر المتأثرينداء السيستينوموضوعات تحكم صحية. من خلال قياس مستويات السيتوكينات المختلفة في المصل ، وجدنا زيادة ملحوظة في MCP -1 في Ctns–/–الفئران ، في حين أن Ctns–/–غال -3–/–كان لدى الفئران مستويات مماثلة لتلك الموجودة في الفئران WT. MCP -1 عبارة عن سيتوكين يمكن إطلاقه في مصل الدم ويشكل تدرجًا لجذب الخلايا الوحيدات والضامة إلى موقع الإصابة. 35 زيادة MCP -1 في مصل Ctns–/–الفئران مقارنة مع Ctns–/–غال -3–/–كانت الفئران مستقلة عن تراكم السيستين بسببالكلىكان محتوى السيستين متشابهًا في كلا الطرازين. علاوة على ذلك ، على الرغم من العلاج بالسيستامين الذي سمح بخروج السيستين من الجسيمات الحالة ، فقد وجد أن MCP -1 يزداد بشكل كبير في مصل المرضى الذين يعانون منداء السيستينمقارنة مع المتبرعين الأصحاء. هذه البيانات تشير بقوة إلى أن عدم وجودسيستينوسين، بدلاً من تراكم السيستين ، هو المسؤول عن زيادة MCP -1 في مصل الدم. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرنا تفاعلًا مباشرًا بين Gal -3 و MCP -1 ، والذي اقترحه مؤخرًا Gordon-Alonso et al 43 ولكن لم تتم دراسته أكثر. لم تتم دراسة آلية تنشيط Gal -3 - MCP بوساطة -1 هنا. الفرضية هي وجود ببتيد إشارة في MCP البشري -1 ، والذي يمكن قصه لتعزيز إفرازه. 44 علاوة على ذلك ، يمكن أن يشق البلازمين الطرف C لـ MCP -1 ، مما يزيد من عامل الجذب الكيميائي له. 45 بالإضافة إلى ذلك ، بالارتباط مع بياناتنا ، منع تثبيط MCP -1 في نموذج فأر لاعتلال الكلية السكري ارتشاح البلاعم الكلوي وتحسين وظائف الكلى.داء السيستين، تشير بياناتنا بقوة إلى أن غيابسيستينوسينيؤدي إلى زيادة نسبة الجال -3 ، مما يؤدي إلى تنشيط حركة الدم MCP -1 ، وتعزيز الكلىاشتعالوتطورفشل كلوي مزمن.
تفتح هذه النتائج آفاقًا جديدة حول الأهداف العلاجية المحتملة التي يمكن أن تحد أو تؤخر تنكس الكلى لدى المرضى المصابينداء السيستين. في الواقع ، تم اكتشاف أن العقاقير غير الستيرويدية المضادة للالتهابات مثل الأسبرين والإندوميتاسين تثبط تعبير Gal -3 عن طريق تثبيط نسخها.داء السيستينأظهرت دراسة حديثة أجريت على 307 مريضًا أوروبيًا مصابًا بداء السيستين تحسنًا في النتائج الكلوية في المرضى الذين عولجوا بالإندوميتاسين .50 في ضوء دراستنا ، فإن استخدام الإندوميتاسين أو الأدوية المضادة للالتهاباتداء السيستينيمكن إعادة النظر في المرضى.
طُرق
التجارب على الحيوانات
C57BL / 6 Ctns–/–تم توفير الفئران من قبل الدكتور أنجناك (Inserm U1163 ، باريس ، فرنسا). C57BL / 6 غالكتين -3 خالية (غال -3–/–) تم توفير الفئران من قبل الدكتور فو تونج ليو (جامعة كاليفورنيا ، ديفيس) والدكتور جيرولد إم أوليفسكي (جامعة كاليفورنيا ، سان دييغو). استراتيجية التربية لتوليد WT، Ctns–/–، غال -3–/–و Ctns - / - وجال - 3–/–تم وصف الفئران في الطرق التكميلية.
خطوط الخلية
تم إنشاء الفوضى من خزعات جلد حديثي الولادة من WT و Ctns–/–الفئران. نمت خطوط الخلايا MEF و 293T و MDCK من النوع الثاني (ATCC ، Manassas ، VA) في وسط Dulbecco المعدل النسر الذي يحتوي على 1 0 بالمائة من مصل العجل الجنيني أو مصل بقري جنيني ، 100 وحدة / مل بنسلين ، 0.1 مجم / مل ستربتومايسين ، و 2 ملي L- الجلوتامين.
الترسيب المناعي المشترك وتحليل الطيف الكتلي
لدراسة تفاعلات البروتين والبروتين ، تم نقل خلايا MDCK باستخدام العمود الفقري المتجه pRRL.SIN.cPPT.PGK / WPRE للتعبير بشكل ثابتسيستينوسين-GFP.51تم إجراء الترسيب المناعي المشترك كما هو موضح في الطرق التكميلية. تم حل البروتينات المناعية المشتركة عن طريق الرحلان الكهربائي لهلام دوديسيل كبريتات-بولي أكريلاميد الصوديوم (SDS-PAGE) وتم تحليلها بواسطة مطياف الكتلة ، LTQ Orbitrap كما هو موصوف بالفعل.19
تم استخدام خلايا 293T التي تعبر عن Gal -3 - GFP و MCP -1 - DsRed أو Gal -3 - تم استخدام GFP و CTNS-DsRed في الترسيب المناعي المشترك كما هو موضح في الطرق التكميلية. تم حل البروتينات المثبطة للمناعة بواسطة SDS-PAGE ، وتم اكتشاف Gal -3 - MCP ملزم -1 باستخدام جسم مضاد لـ DsRed (Clontech Laboratories ، Mountain View ، CA).
تجزئة خلوية
تم الحصول على ثمانية أكباد من الفئران C57BL / 6 وتم تحضيرها كما هو موصوف سابقًا. 52 كانت ظروف التدرج بشكل أساسي هي نفسها كما هو موصوف في المنشور الأصلي ، 52 باستثناء أنه تم استخدام Nycodenz بدلاً من metrizamide.
غال -3 - مثبطات وعلاجات بروتيناز ك
ليساتس منسيستينوسين- خلايا GFP MDCK و 293 T معبرة عن Gal -3 - GFP و CTNS-DsRed أو Gal -3 - GFP و MCP -1 - تم تحضين DsRed مع أو بدون 5 ملي ثيوديغالاكتوزيد أو 5 ملي مولار من N -Acetyl-D-Lactosamine ، على التوالي ، 2 من مثبطات Gal -3 CRD. بعد 30 دقيقة من الحضانة عند درجة حرارة 4 - درجة مئوية مع الاهتزاز المستمر ، تم تحضين المحللات بـ 50 مل من الميكروبيدات المضادة لـ GFP ، وتم إجراء الترسيب المناعي كما ذكرنا سابقًا. تم حل البروتينات المترسبة بواسطة SDS-PAGE على هلام بنسبة 10 بالمائة.
ليساتس منسيستينوسين- تم تحضين خلايا GFP MDCK والكسور المخصبة بجسيم الليزوزوم في كبد الفأر مع أو بدون 2٪ Triton X -100 لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة 4 - C ثم حضنت لمدة 30 دقيقة مع أو بدون 2.5 مجم / مل و 25 مجم / مل بروتيناز ك ، على التوالي. بعد تعطيل الإنزيم باستخدام 1 ملي مولار من فلوريد فينيل ميثيل سلفونيل لمدة 5 دقائق عند درجة حرارة 4 - C ، تم حل البروتينات بواسطة SDS-PAGE على هلام بنسبة 10 بالمائة.
تحليل التألق المناعي
تم تحضين خلايا MDCK الثابتة باستخدام الأجسام المضادة المضادة للمصباح -2 (OriGeneTechnologies ، Rockville ، MD) والجسم المضاد المضاد لـ Gal -3 (CedarlaneLaboratories ، Burlington ، أونتاريو ، كندا) لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة ، تليها Alexa Fluor 555 جسم مضاد ثانوي (Invitrogen ، Carlsbad ، CA) لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة. تم التقاط صور متحد البؤر باستخدام مجهر Zeiss LSM 700 (Carl ZeissMicroscopy ، Jena ، ألمانيا).
293T خلية تعبر بشكل عابر عن Gal -3 - GFP وحده ، و Gal -3 - GFP ، و DsRed أو Gal -3 - GFP وسيستينوسينتمت تربية -DsRed على ساترة قبل تركيبها على شريحة. تم تصوير الخلايا باستخدام أداة Keyence BZ-X700 (Keyence Corp. ، أوساكا ، اليابان).
مُثَبَّتالكلىتم تحضين المقاطع طوال الليل في 4 - درجة مئوية مع مضاد CD68 (BioLegend ، سان دييغو ، كاليفورنيا) أو جسم مضاد لـ Gal -3 (BioLegend) ، متبوعًا بجسم مضاد ثانوي Alexa Fluor 488 (Invitrogen) ، لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. تم الحصول على الصور باستخدام أداة Keyence BZ-X700. يتم وصف القياس الكمي لتعبير CD68 في الطرق التكميلية.
MEFs التي تعبر عن Gal -3 - تم تلوين GFP باستخدام جسم مضاد لـ Hsc70 (Enzo Life Sciences ، Farmingdale ، NY) وتم تصويره كما هو موضح سابقًا.53
إجمالي الانعكاس الداخلي FL المجهري مضان
WT و Ctns–/–MEF معبرًا عن Gal -3 - تم زرع GFP و CTNS-DsRed في طبق سفلي 4- حجرة 35- ملم (سيلفيس ، ماونتن فيو ، كاليفورنيا). بعد يومين في الثقافة ، تم تحليل MEFs عن طريق الفحص المجهري للانعكاس الداخلي الكلي FL كما هو موضح سابقًا54والطرق التكميلية. تم تحليل الصور باستخدام برنامج ImageJ.
غال -3 تحليل التعبير
293T خلايا تعبر عن Gal -3 - GFP ، و Gal -3 - GFP ، و DsRed ، أو Gal -3 - GFP و CTNS-DsRed و explantedالكلىتم تحليلها في المخزن المؤقت لفحص الترسيب المناعي الإشعاعي الذي يحتوي على كوكتيل مثبط للبروتيناز. تم فصل البروتينات على مادة هلامية بنسبة 4 إلى 15 بالمائة وكشف عنها باستخدام الأجسام المضادة المضادة لجال -3 (Abcam ، كامبريدج ، المملكة المتحدة) أو مضادات الجلسيرالديهيد -3- نازعة هيدروجين الفوسفات (تقنية تشوير الخلية ، Danvers ، MA) .
الكلىتم تجانسها في محلول RLT الذي يحتوي على b-mercaptoethanol باستخدام Precellys 24 (Bertin Instruments ، Montigny-le-Bretonneux ، فرنسا). تم عزل الحمض النووي الريبي (RNA) وتم إجراء تفاعل سلسلة البوليميراز الرقمي للقطيرات المحددة من Gal -3 كما هو موضح في الطرق التكميلية. تم التعبير عن تعبير نص Gal -3 كنسبة مقارنة مع عنصر التحكم الداخلي 18S. تم استخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (Abcam) لاكتشاف مستوى Gal -3 في الفئران والأمصال البشرية ، وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة.
وظيفة الكلى
تم تقدير مستويات فوسفات المصل والبول والكرياتينين في الدم واليوريا باستخدام مجموعة مقايسة الفوسفات QuantiChrom ومجموعة الكرياتينين Quanti Chrom ومجموعة مقايسة اليوريا QuantiChrom (BioassaySystems ، Hayward ، CA). تم قياس مستويات البروتين في البول باستخدام Pierce BCA Protein Assay Kit (Rockford ، IL).
علم الانسجة
وقت قتل الفئرانالكلىتم جمعها وتثبيتها في الفورمالين ودمجها في البارافين. تمت مراجعة المقاطع الملطخة بالهيماتوكسيلين ويوزين بطريقة أعمى بواسطة الدكتورة ماري كلير جوبلر كما هو موضح في الطرق التكميلية.
قياس محتوى السيستين
تم إجراء قياس السيستين للأنسجة عن طريق قياس الطيف الكتلي (LC-ESI-MS / MS) كما هو موضح سابقًا.39
استئصال الكلية القياسي والعملية الصورية
تم تحفيز CKD في الفئران بواسطة المجموع الفرعي القياسي لعملية استئصال الكلية للمرحلة 2- كما هو موضح سابقًا.55,56خضعت المجموعة الصورية من الفئران لنفس الإجراء ولكن دون تقطيع أي منهاالكلىالانسجة.
مستوى السيتوكين في مصل الدم
لقياس مستويات السيتوكين في مصل الفأراشتعالتم إجراء مجموعة خرز القياس الخلوي (BD Biosciences ، سان خوسيه ، كاليفورنيا) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. تم تحديد تركيز MCP -1 في مصل الدم البشري باستخدام مقايسة ممتص مناعي مرتبط بالإنزيم موجه ضد MCP -1 (Abcam ، كامبريدج ، المملكة المتحدة) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة.
تحليل احصائي
يتم التعبير عن القيم بالمتوسط - التسويق عبر محرك البحث. تم تقييم أهمية النتيجة من خلال 2- tailed t-test أو unpaired 2- tailed tailed مع تصحيح ويلش. تم إجراء مقارنات جماعية لـ 3 شروط أو أكثر باستخدام التحليلات البارامترية للتباين ، متبوعة باختبار مقارنات Tukey المتعددة للمقارنات الزوجية. تمت مقارنة النتائج النسيجية باستخدام اختبار مان ويتني. تم إجراء التحليلات باستخدام برنامج Prism 6 (GraphPad ، سان دييغو ، كاليفورنيا). قيمة P أقل من 0. 05 اعتبرت هامة.
الموافقة على الدراسة
أجريت تجارب الفئران وفقًا لبروتوكولات لجنة استخدام الحيوانات المؤسسية. تمت الموافقة على استخدام الأنسجة البشرية في هذه الدراسة من قبل جامعة كاليفورنيا ، سان دييغو ، برنامج حماية البحوث البشرية.
إفشاء
SC هو عضو المجلس العلمي وعضو مجلس أمناء فيداء السيستينمؤسسة البحث. SC هي شريك مؤسس ومساهم وعضو في كل من المجلس العلمي ومجلس إدارة GenStem TherapeuticsInc. تمت مراجعة شروط هذا الترتيب والموافقة عليها من قبل جامعة كاليفورنيا - سان دييغو وفقًا لسياسات تضارب المصالح الخاصة بها. أعلن جميع المؤلفين الآخرين عدم تضارب المصالح.
تقديم غال -3–/–الفئران. نشكر Lou Devanneaux و NicholeFlerchinger على مساعدتهم الفنية وإليزابيث سوتر لمراجعة المخطوطة. نعترف كريستوفر ألفونسو من BDBioscience لتوفيره الماوساشتعالصفيف حبة السيتومتري ولمساعدته في تفسير النتائج. تم دعم هذا العمل من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة RO 1- DK090058 و R 01- DK110162 ،داء السيستينResearch Foundation ، ومعهد كاليفورنيا للطب التجديدي (CIRM ، CLIN -09230). يتم دعم TL من خلال زمالة الدراسات العليا من Vaincre Les MaladiesLysosomales. يتم دعم AB و JZ بواسطة زمالة منداء السيستينمؤسسة البحث. تم تمويل مرفق UCSD لعلم الأعصاب المجهري المشترك من قبل المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية (NINDS) بمنحة P 30- NS047101.
المراجع
1. Medzhitov R. الأصل والأدوار الفسيولوجيةاشتعال. طبيعة سجية. 2008 ؛ 454: 428-435.
2. دوناث ماي. الاستهدافاشتعالفي علاج مرض السكري من النوع 2. السكري السمنة ميتاب. 2013 ؛ 15 (ملحق 3): 193-196.
3. Jaffer U، Wade RG، Gourlay T. Cytokines in the systemic in amatory response syndrome: مراجعة. HSR Proc العناية المركزة Cardiovasc Anesth. 2010 ؛ 2: 161 - 175.
4. Pecoits-Filho R و Heimburger O و Barany P et al. الارتباطات بين العلامات الداخلية المتداولة والوظيفة الكلوية المتبقية في مرضى CRF. أنا Jالكلىديس. 2003 ؛ 41: 1212-1218.
5.Gahl WA، Thoene JG، Schneider JA.داء السيستين. إن إنجل جي ميد. 2002 ؛ 347: 111 - 121.
6.Cherqui S ، Kalatzis V ، Trugnan G ، Antignac C. استهدافسيستينوسينيتطلب الغشاء الليزوزومي إشارة قائمة على التيروزين وفكرة فرز جديدة. J بيول كيم. 2001 ؛ 276: 13314-13321.
7. Kalatzis V، Cherqui S، Antignac C، Gasnier B.سيستينوسين، البروتين المعيب فيهداء السيستين، هو ناقل السيستين الليزوزومي الذي يحركه H (). EMBO J. 2001 ؛ 20: 5940-5949.
8. Cherqui S، Courtoy PJ. متلازمة فانكوني الكلوية فيداء السيستين: الرؤى المسببة للأمراض ووجهات النظر العلاجية. نات ريف نفرول. 2017 ؛ 13: 115 - 131.
9. نيستيروفا جي ، جهل دبليو أمراض الكلىداء السيستين: المضاعفات المتأخرة لمرض متعدد الأجهزة. بيدياتر نيفرول. 2008 ؛ 23: 863 - 878.
10. Cherqui S ، Sevin C ، Hamard G ، et al. نقص تراكم السيستين داخل الجسم في الفئرانسيستينوسين، البروتين المعيب فيهداء السيستين. مول الخلية بيول. 2002 ؛ 22: 7622-7632.
11. Nevo N ، Chol M ، Bailleux A ، وآخرون. النمط الظاهري الكلويداء السيستيننموذج الفأر يعتمد على الخلفية الجينية. زراعة الكلى. 2010 ؛ 25: 1059-1066.
12. Kalatzis V ، Serratrice N ، Hippert C ، et al. تشوهات العين في أداء السيستيننموذج حيواني يحاكي التسبب في المرض. بيدياتر الدقة. 2007 ؛ 62: 156–162.
13. دليل Chevronnay HP، Janssens V، Van Der Smissen P، et al. يقترح نموذج الفأر آليتين لتعديلات الغدة الدرقية عند الأطفالداء السيستين: انخفاض تخليق الثيروجلوبولين بسبب إجهاد الشبكة الإندوبلازمية / استجابة البروتين غير المطوية وضعف المعالجة الليزوزومية. طب الغدد الصماء. 2015 ؛ 156: 2349-2362.
14. Brodin-Sartorius A ، Tete MJ ، Niaudet P ، et al. يؤخر علاج السيستامين تطور اعتلال الكليةداء السيستينفي أواخر المراهقين والبالغين.الكلىكثافة العمليات 2012 ؛ 81: 179-189.
15. العلاج Cherqui S. Cysteamine: علاج لـداء السيستين، ليس علاجًا.الكلىكثافة العمليات 2012 ؛ 81: 127-129.
16. جال WA ، Balog JZ ، Kleta R. أمراض الكلىداء السيستينفي البالغين: التاريخ الطبيعي وآثار العلاج بالسيستامين عن طريق الفم. آن متدرب ميد. 2007 ؛ 147: 242 - 250.
17. Cherqui S، Courtoy PJ. متلازمة فانكوني الكلوية فيداء السيستين: الرؤى المسببة للأمراض ووجهات النظر العلاجية. نات ريف نفرول. 2017 ؛ 13: 115 - 131.
18. Napolitano G ، Johnson JL ، He J ، et al. يؤدي ضعف الالتهام الذاتي بوساطة المرافق إلى عيوب انتقائية في التدهور الليزوزومي في مرض التخزين الليزوزوميداء السيستين. EMBO Mol Med. 2015 ؛ 7: 158-174.
19. Andrzejewska Z ، Nevo N ، Thomas L ، et al.سيستينوسينهو أحد مكونات مجمع H -ATPase-regulator-rag الفراغي الذي يتحكم في هدف الثدييات في إشارات مجمع الراباميسين 1. J آم سوك نفرول. 2016 ؛ 27: 1678-1688.
20. Rega LR ، و Polishchuk E ، و Montefusco S ، وآخرون. تنشيط عامل النسخ EB ينقذ التشوهات الليزوزومية في cystinoticالكلىالخلايا.الكلىكثافة العمليات 2016 ؛ 89: 862 - 873.
21. دوميك ج ، دابليك إس ، فلوجل إم جالكتين -3: قصة مفتوحة. Biochim Biophys Acta. 2006 ؛ 1760: 616-635.
22. Sciacchitano S ، Lavra L ، Morgante A ، et al. Galectin -3: جزيء واحد لأبجدية الأمراض ، من الألف إلى الياء. Int J Mol Sci. 2018 ؛ 19 (2).
23. Calvier L، Martinez-Martinez E، Miana M، et al. تأثير تثبيط الجالكتين -3 على إصابات القلب والكلى التي يسببها الألدوستيرون. فشل القلب JACC. 2015 ؛ 3: 59-67.
24. Frenay AR ، Yu L ، van der Velde AR ، et al. يقي التثبيط الدوائي للغالكتين -3 من اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم. أنا J Physiol الكلوي Physiol. 2015 ؛ 308: F500 – F509.
25. Kolatsi-Joannou M، Price KL، Winyard PJ، Long DA. يقلل بكتين الحمضيات المعدل من تعبير الجلكتين -3 وشدة المرض في الحالات الحادة التجريبيةالكلىإصابة. بلوس واحد. 2011 ؛ 6: e18683.
26. Martinez-Martinez E ، Ibarrola J ، Clavier L ، et al. يقلل حصار Galectin -3 من التليف الكلوي في نموذجين تجريبيين عاديين للضرر الكلوي. بلوس واحد. 2016 ؛ 11: e0166272.
27. Nevo N ، Thomas L ، Chhuon C ، et al. تأثيرداء السيستينالارتباط بالجليكوزيل على استقرار البروتين عن طريق وضع العلامات على النظائر الديناميكية التفاضلية بواسطة الأحماض الأمينية في ثقافة الخلية (SILAC). بروتينات الخلايا المولية. 2017 ؛ 16: 457-468.
28. Napolitano G ، Johnson JL ، He J ، et al. يؤدي ضعف الالتهام الذاتي بوساطة المرافق إلى عيوب انتقائية في التدهور الليزوزومي في مرض التخزين الليزوزوميداء السيستين. EMBO Mol Med. 2015 ؛ 7: 158-174.
29. Majeski AE، Dice JF. آليات الالتهام الذاتي بوساطة المرافق. Int ياء Biochem خلية بيول. 2004 ؛ 36: 2435-2444.
30. Xie W ، Zhang L ، Jiao H ، وآخرون. يمنع الالتهام الذاتي بوساطة المرافق موت الخلايا المبرمج عن طريق تحطيم BBC3 / PUMA. الالتهام الذاتي. 2015 ؛ 11: 1623-1635.
31. Li X ، Ma Q ، Wang J ، et al. تنظم c-Abl و Arg tyrosine kinases التحلل الليزوزومي للبروتين الورمي Galectin -3. موت الخلية يختلف. 2010 ؛ 17: 1277-1287.
32. Takeuchi H ، Tanaka M ، Tanaka A ، وآخرون. تؤثر هيمنة البلاعم 2- المستقطبة في سرطان المثانة على تكوّن الأوعية ، ودرجة الورم ، والغزو. اونكول ليت. 2016 ؛ 11: 3403-3408.
33.Chavez-Galan L و Olleros ML و Vesin D و Garcia I. أكثر بكثير من الضامة M1 و M2 ، هناك أيضًا CD169 () و TCR () الضامة. الجبهة المناعية. 2015 ؛ 6:263.
34. هندرسون نورث كارولاينا ، سيثي ت. تنظيماشتعالبواسطة galectin -3. القس المناعي 2009 ؛ 230: 160-171.
35. Deshmane SL، Kremlev S، Amini S، Sawaya BE. بروتين monocyte chemoattractant -1 (MCP -1): نظرة عامة. J انترفيرون سيتوكين ريس. 2009 ؛ 29: 313-326.
36.Skowyra ML، Schlesinger PH، Naismith TV، Hanson PI. يعزز التوظيف المشغل لآلات ESCRT إصلاح الجسيمات الداخلية. علوم. 2018 ؛ 360 (6384).
37- ماك كينون إيه سي ، فارنوورث إس إل ، هودكينسون بي إس وآخرون. تنظيم التنشيط البديل للبلاعم بواسطة galectin -3. ياء إمونول. 2008 ؛ 180: 2650-2658.
38. Sano H ، Hsu DK ، Yu L ، et al. يعد الجلكتين البشري -3 جاذبًا كيميائيًا جديدًا للخلايا الوحيدة والخلايا الضامة. ياء إمونول. 2000 ؛ 165: 2156-2164.
