جسيمات نانوية تستهدف الكلى لزيادة الكثافة اللمفاوية الكلوية تقلل من ضغط الدم لدى الفئران المصابة بارتفاع ضغط الدم

1 المقدمة

لقد اجتذب تحديد المكونات الغذائية ذات الخصائص المناعية جنبًا إلى جنب مع الأهداف الجزيئية الخاصة بها اهتمامًا متزايدًا في السنوات الأخيرة. نظرًا لتنوع الروابط العالية، تمثل فصيلة المستقبلات العابرة المحتملة للقنوات الأيونية (قنوات TRP) فئة مثيرة جدًا للاهتمام من الهياكل المستهدفة المحتملة.

تتضمن فصيلة قنوات TRP الفائقة في الثدييات ست عائلات بروتينية ذات صلة، وهي الأنكيرين (TRPA)، والعائلة الأساسية (TRPC)، والميلاستاتين (TRPM)، والموكوليبين (TRPML)، والبوليسيستين (TRPP)، وعائلة الفانيلويد (TRPV)، وجميعها من والتي تشترك عادةً في ستة أجزاء غشائية تتجمع على شكل رباعيات لتشكل مسام نفاذية الكاتيون مع انتقائية كاتيونية متفاوتة. [1] قد تكون قناة TRPV1، إلى حد بعيد، العضو الأكثر بحثًا بشكل مكثف في عائلة TRP الفائقة. تم تحديد TRPV1 في البداية على أنه مستقبل الكابسيسين، وهو المكون اللاذع للفلفل الحار. وفي وقت لاحق، تبين أيضًا أن المكونات اللاذعة من الزنجبيل، جينجيرول، تنشط TRPV1.[3]

انقر هنا للحصول على العشبية CISTANCHE للكلاب

لا يزال الدور البيولوجي لـ TRPV1 في أنواع الخلايا غير العصبية قيد البحث المكثف، ومع ذلك فإن النتائج المتاحة تشير ضمنًا إلى وظائف تتجاوز بكثير الإدراك الحسي والحراري. على سبيل المثال، تدخل لمدة 12-أسبوع بجرعة يومية قدرها 0 0.15 مجم من ناهض TRPV1، وهو نظير هيكلي للكابسيسين، يمنع زيادة كتلة الدهون في الجسم بسبب النظام الغذائي، ويزيد من مستويات السيروتونين في البلازما لدى الأشخاص الأصحاء الذين يعانون من زيادة الوزن.

في 3T3- تنشيط الخلايا الشحمية L1 لـ TRPV1 بواسطة النونيفاميد أدى إلى انخفاض تراكم الدهون أثناء التمايز والنضج عن طريق قمع تعبير PPAR𝛾.[5] في البلاعم، يخفف الكابسيسين والنونيفاميد من إطلاق السيتوكينات المؤيدة للالتهابات التي يسببها LPS مثل IL6، وCXCL8، وTNF-alpha، بطريقة تعتمد على TRPV1-.[6] ومع ذلك، فإن الوظائف المحددة لـ TRPV1 في كريات الدم البيضاء البشرية تظل غامضة. في خلايا NK البشرية، تسبب 10 و50 ميكرومتر من الكابسيسين في زيادة تركيزات Ca2+ داخل الخلايا، مما يشير إلى وجود قناة TRPV1 وظيفية.

ومع ذلك، فإن وظائف مستجيب الخلايا القاتلة الطبيعية المخففة مثل تحلل السموم الخلوي وإفراز السيتوكينات، الناجمة عن المعالجة المسبقة للخلايا بالكابسيسين لمدة ساعة واحدة في نطاق تركيز 10–100 ميكرومتر، كانت مستقلة إلى حد كبير عن TRPV1.[7] في الخلايا التائية، تم توثيق TRPV1 للمشاركة في عمليات إشارات مستقبلات الخلايا التائية، وتكاثر الخلايا التائية وتمايزها، بالإضافة إلى إنتاج السيتوكينات. أظهر العمل السابق لمجموعتنا أيضًا التعبير الوظيفي لـ TRPV1 في الخلايا التائية الأولية البشرية.[9] علاوة على ذلك، كشفت تحليلات استجابة الجرعة للتركيزات التي تتراوح من 0.03 إلى 300 ميكرومول لتر أن [6] - جينجيرول يثبط إفراز السيتوكين بواسطة كريات الدم البيضاء البشرية الأولية بقيمة IC50 تبلغ 82.2 ميكرومول لتر-1.

ومع ذلك، كشفت كمية [6]-الجنجيرول في عينات البلازما من الأشخاص الأصحاء عن متوسط ​​تركيز بلازما أقصى يبلغ 42 فقط. 0 ±16.3 نانومول لتر−1 بعد تناول 1 لتر من شاي الزنجبيل. نظرًا لأن تركيزات الجينجيرول [6] هذه لم يكن لها تأثير كبير على إفراز السيتوكين في الدراسات السابقة، [9] فمن غير الواضح ما إذا كان التركيز الغذائي ذو الصلة البالغ 50 نانومول لتر، قد تم الوصول إليه في بلازما الدم بعد استهلاك 1 لتر من شاي الزنجبيل. ، يكفي لتعديل الاستجابات المناعية الخلوية في كريات الدم البيضاء الأولية البشرية الأخرى.

بالنسبة للعدلات البشرية، فإن المعرفة حول الدور الوظيفي لـ TRPV1 محدودة. في حين أظهر Köse وNazıroglu˘ [10] تدفقات الكالسيوم 2+- في العدلات استجابة لـ 10 ميكرومتر من الكابسيسين ليتم تقليلها بواسطة الكابزازيبين المضاد TRPV1، فإن النتائج الأخرى لم تثبت أن الكابسيسين يحفز تدفق الكالسيوم 2+ عند اختباره في تركيز يتراوح من 1 إلى 100 ميكرومتر، على الرغم من تعبير TRPV1RNA القابل للاكتشاف.

العدلات هي الكريات البيض الأكثر وفرة في دم الإنسان، وتمثل 60-70% من جميع خلايا الدم البيضاء المنتشرة. وهي الخلايا المناعية الأولى التي يتم تجنيدها في مواقع العدوى؛ ولذلك يُشار إليهم غالبًا بخط الدفاع الأول.[12] يتم تحفيز تجنيد العدلات، من بين أمور أخرى، بواسطة الأوركيموكينات البكتيرية أو المشتقة من الميتوكوندريا N-Formylmethionine-leucyl-phenylalanine (fMLF) مثل CXCL8 (IL-8).[13]

تشمل آليات الدفاع عن العدلات البلعمة، [14] وإطلاق إنزيم مضاد للميكروبات عن طريق إزالة التحبب، [15] توليد أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS)، [16] وتكوين مصائد العدلات خارج الخلية. [17] إلى جانب آليات الدفاع المباشرة هذه، توجد العدلات. تساهم أيضًا في الاستجابات المناعية اللاحقة عن طريق إطلاق العديد من السيتوكينات والكيموكينات.[18] أيضًا، يمكن أن تخضع العدلات لعملية تهيئة تمكنها من الاستجابة بقوة أكبر للتنشيط الكامل اللاحق.[16ب]

في السنوات الأخيرة، تزايدت الأدلة على أن المكونات الغذائية أو النباتات الطبية يمكن أن تعدل واحدًا أو أكثر من الاستجابات الدفاعية المذكورة للعدلات البشرية. تتضمن هذه التعديلات زيادة نشاط البلعمة [19] وتوليد ROS، [20] زيادة الانجذاب الكيميائي نحو fMLF، [21] وتشكيل مصائد العدلات خارج الخلية. [20] ومع ذلك، لم يتم تحديد المركب (المركبات) النشطة. مكونات من Ferula akitschkensis (𝛽-pinene، sabinene، 𝛾-terpinene، geranylacetone، andisobornylacetate) من العدلات المزالة الحساسية إلى fMLF- وCXCL 8- الناجم عن تدفق Ca 2+ وتثبيط التسمم الكيميائي الناجم عن fMLF، حيث يحدث التسمم الكيميائي الناجم عن geranylacetone تم التوسط في التأثيرات عبر TRPV1.[22]

استنادًا إلى البيانات المتاحة، افترضنا أن تنشيط TRPV1 بواسطة المركب [6] - جينجيرول يمكن أن يؤثر على وظائف العدلات العامة، إما بشكل مباشر أو من خلال تعزيز استجاباتها للمحفزات التنشيطية. في نطاق هذه الفرضية، نحن نهدف بشكل خاص إلى توضيح ما إذا كان التركيز ذو الصلة من الناحية التغذوية الذي تم التحقق منه كافيًا لتعديل الاستجابات المناعية الخلوية في العدلات الأولية البشرية كجزء من تعداد الكريات البيض. '

علاوة على ذلك، سعينا إلى مقارنة مستويات تعبير الحمض النووي الريبي (RNA) لجميع أعضاء فصيلة TRP الفائقة للثدييات في خمسة من أبرز أنواع الخلايا في دم الإنسان من أجل الحصول على نظرة عامة شاملة نوعيًا وكميًا لتعبير قناة TRP في كريات الدم البيضاء البشرية.

2. النتائج

2.1. الوفرة ومستويات النسخ النسبية لقنوات TRP في كريات الدم البيضاء البشرية

من أجل تقييم تعبير RNA لقناة TRP في كريات الدم البيضاء، تم عزل خمسة من أبرز أنواع خلايا الكريات البيض من دم المتبرعين الأصحاء وتم تحليل تعبير RNA لقنوات TRP عبر RT-PCR الكمي (الشكل 1).

تم اكتشاف نصوص محددة لـ TRPV وكذلك عائلة TRPM بترددات عالية تبلغ 75–100% في جميع أنواع الخلايا التي تم تحليلها. كان متوسط ​​​​التكرار الإجمالي بالنظر إلى جميع أنواع الخلايا 96٪ لعائلة TRPV و 98٪ لعائلة TRPM. كانت النصوص الخاصة بـ TRPC أقل وفرة بكثير، حيث تتراوح من 0% في الخلايا الوحيدة والخلايا NK والخلايا التائية والخلايا البائية إلى 100% في الخلايا NK والخلايا التائية بمتوسط ​​تردد إجمالي يبلغ 53% فقط (الشكل 1A). تم اكتشاف نسخة TRPC5- المحددة من العدلات فقط، بتردد 70%.

بالإضافة إلى ذلك، كشف النص النوعي لـ TRPA1- بشكل عام عن وفرة منخفضة نوعًا ما في أنواع الخلايا التي تم تحليلها بتكرار 100% في العدلات، و25% في الخلايا الوحيدة، و80% في الخلايا القاتلة الطبيعية، و100% في الخلايا التائية، و60% في الخلايا الوحيدة. خلايا ب. وبالمثل، أظهر النص المحدد لـ TRPML3- ترددًا منخفضًا في العدلات (50%)، والخلايا الوحيدة (25%)، والخلايا القاتلة الطبيعية (40%)، والخلايا البائية (20%)، ولكن ترددًا قدره 100% في الخلايا التائية. تم اكتشاف نسخة TRPV1- المحددة في جميع أنواع الخلايا، مما يُظهر تكرارًا بنسبة 100% في الخلايا الوحيدة والخلايا القاتلة الطبيعية والخلايا التائية، وتكرارًا بنسبة 90% في العدلات و80% في الخلايا البائية.

فيما يتعلق بتعبير الحمض النووي الريبي (RNA) النسبي، بالمقارنة مع الترددات المعنية، كشفت قنوات TRP عن نمط تعبير أكثر تحديدًا لنوع الخلية، كما يتضح من مقارنة قيم Δct المعنية في أنواع الخلايا المختلفة التي تم تحليلها (الشكل 1B). على سبيل المثال، تم اكتشاف TRPP3 بتردد 100% في جميع أنواع الخلايا، لكنه كشف بوضوح عن أعلى مستوى تعبير في الخلايا الوحيدة.

في المقابل، تم اكتشاف قناة TRPV2 في جميع أنواع الخلايا التي تم فحصها، مع مستوى تعبير RNA مرتفع نسبيًا بالإضافة إلى تردد عالٍ. وبالمثل، كانت مستويات النسخ من TRPV1 متشابهة في جميع أنواع الخلايا التي تم فحصها (الشكل 1B).

2.2. التعبير السطحي TRPV1 على العدلات

المعرفة الحالية حول وظيفة TRPV1 في العدلات البشرية لا تزال غير واضحة. لمزيد من استكشاف أدوار TRPV1in العدلات البشرية، قمنا بعد ذلك بالتحقيق فيما إذا كان يتم التعبير عن قناة TRPV1 على سطح العدلات البشرية الأولية باستخدام قياس التدفق الخلوي للخلايا الحية (الشكل 2).

كانت العدلات المعزولة ملطخة بـ CD15 كعلامة سطحية للعدلات (الشكل 2A، B) وفي نفس الوقت إما ملطخة بجسم مضاد مرفوع ضد حاتمة في الحلقة الأولى خارج الخلية من بروتين TRPV1 (الشكل 2B) أو عنصر تحكم النظير المعني، الأخير بمثابة بديل لقياس الربط غير محدد (الشكل 2A). ضمن مجموعة CD15+ السكانية، تم تحليل كثافة التألق لـ FITC. أدى تلطيخ العدلات مع الجسم المضاد TRPV1 إلى إشارة فلورية يمكن تمييزها بوضوح مقارنة بتحكم النظير، مما يؤكد التعبير السطحي لـ TRPV1 في العدلات البشرية الأولية (الشكل 2C). كشف تحليل العدلات من أربعة متبرعين فرديين عن تعبير سطحي مماثل لـ TRPV1 (الشكل 2D).

2.3. [6]-الجينجيرول يسبب زيادة في الكالسيوم داخل الخلايا2+

نظرًا لأن تنشيط TRPV1 الناجم عن الربيطة سيؤدي إلى تدفق Ca2+،[23] تم تحديد تركيزات Ca2+ داخل الخلايا من العدلات عبر صبغة Ca2+- الحساسة Fura-2. بناءً على النتائج السابقة التي توصلنا إليها،[9] تم اختيار تركيز 50 نانومتر من يجند TRPV1 المعروف [6]-جينجيرول ووقت حضانة قدره ساعتين. أظهرت التحليلات أن حضانة العدلات مع 50 نانومتر [6] - جينجيرول أدى إلى زيادة تركيزات الكالسيوم داخل الخلايا 2+ والتي كانت في المتوسط ​​18.4% ± 1.0% من القيمة القصوى، كما هو محدد من خلال تطبيق 1 ميكرومتر من الأيونوفوريونوميسين. وكانت الزيادة الناجمة عن DMSO عند 4.7% ± 1.2%(الشكل 3).

2.4. تأثير [6] -جينجيرول على تعبير TRPV1

بعد ذلك، استهدفنا تحليل تأثير تحفيز TRPV1 بواسطة [6] - جينجيرول على تعبير TRPV1 على مستوى النص عبر q-RTPCR وكذلك على مستوى البروتين السطحي عبر تلطيخ الخلايا الحية. لهذا الغرض، تم تحضين العدلات البشرية بـ 50 نانومتر [6]-جينجيرول لمدة ساعتين وتم قياس مستويات التعبير المعنية.

لم تؤثر هذه الحضانة لمدة ساعتين على مستويات نسخة TRPV1 ولا البروتين (الشكل 4) ، ولم تتغير أيضًا ، باستثناء IL6 و IL17A و IL24 و C5 و GDF5 ، تعبير RNA عن جينات السيتوكينات والكيموكين الشائعة التي تم فحصها (الشكل S1 ، الجدول S2) ،دعم المعلومات).

2.5. تأثير [6]-الجينجيرول على التعبير عن علامات سطح العدلات

الخدمة الداعمة لشركة Wecistanche - أكبر مصدر للسيستانش في الصين:

البريد الإلكتروني:wallence.suen@wecistanche.com

واتساب/هاتف:+86 15292862950

تسوق لمزيد من تفاصيل المواصفات:

https٪3a٪2f٪2fwww.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop

احصل على مستخلص السيستانش العضوي الطبيعي الذي يحتوي على 25% من الإكيناكوسيد و9% من الأكتيوسايد.