نتيجة وحدة الرفض البولي الشائعة (uCRM) لمراقبة زراعة الكلى غير الغازية

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

الملخص

تم الإبلاغ سابقًا عن وحدة رفض مشتركة (CRM) تتكون من 11 جينًا معبرًا عنها في خزعات الطعم الخيفي لتكون بمثابة علامة بيولوجية للرفض الحاد (AR) ، وترتبط بمدى إصابة الكسب غير المشروع ، وتتنبأ بأضرار الطعم الخيفي في المستقبل. لقد حققنا في استخدام لوحة الجينات هذه على حبيبات خلايا البول لمرضى زرع الكلى. تم جمع رواسب الخلايا البولية من المرضى الذين يعانون من الرفض الحاد المؤكد الخزعة ، AR (BAR) الحدودي ، اعتلال الكلية الفيروسي BK (BKVN) ، وتم تحليل الطعوم الكلوية المستقرة مع خزعات البروتوكول الطبيعي (STA) للتعبير عن هذه الجينات الـ 11 باستخدام سلسلة البوليميراز الكمية. رد فعل (qPCR). قمنا بتقييم جينات CRM الـ 11 هذه من حيث وفرتها ، والارتباط التلقائي ، ومستويات التعبير الفردي ، وارتفع التعبير عن جينات 10/11 في الواقع المعزز مقارنةً بـ STA.Psmb9 و Cxcl10couldcouldclassify AR مقابل STA بدقة مثل نموذج الجين 11- ( الحساسية =93. 6 بالمائة ، الخصوصية =97. 6 بالمائة). يمكن أن تميز نتيجة Au CRM ، استنادًا إلى المتوسط ​​الهندسي لمستويات التعبير ، الواقع المعزز عن STA بدقة عالية (AUC=0. 9886) وترتبط بشكل خاص بالمقاييس النسيجية لالتهاب الأنابيب والتهاب الخلالي بدلاً من الضمور الأنبوبي وتصلب الكبيبات ، تكاثر داخلي ، تفريغ أنبوبي ، أو التهاب كبيبات حاد. قد تتيح هذه النتيجة المستندة إلى التعبير الجيني في البول المراقبة غير الغازية والكمية لـ AR.

آثار CSITANCHE: مضاد للالتهابات

مقدمة

يعتبر زرع الكلى (KTx) الطريقة المفضلة لعلاج الداء الكلوي بمراحله الأخيرة (الداء الكلوي بمراحله الأخيرة) لأي سبب [1]. في حين أن هذا النهج العلاجي أصبح ممارسة روتينية في جميع أنحاء العالم ، مما أدى إلى تحسن كبير في جودة حياة المريض والبقاء على قيد الحياة [2] ، لم تتحسن نتائج الطعم الخيفي للكلية على المدى الطويل كما هو متوقع على الرغم من الفهم الأفضل للبيولوجيا المناعية لرفض الطعم الخيفي وظهور الرواية. وعوامل أكثر فاعلية مثبطة للمناعة [3]. السبب الرئيسي لبقاء الكسب غير المشروع المستمر والضعيف هو عدم القدرة على التحديد الكمي غير الجراحي لعبء الإصابة المناعية للكسب غير المشروع والتنبؤ بالرفض الحاد قبل التدهور الوظيفي الجوهري والإصابة النسيجية. في الواقع ، في حين أنه من المعروف جيدًا أن مرضى KTx يتعرضون باستمرار للإصابات المناعية وغير المناعية [4 ، 5] ، فإن المراقبة الدورية لـ KTx تعتمد على علامات بديلة غير حساسة لخلل الطعم الخيفي مثل كرياتينين المصل (6 ، Z] ومراقبة KTx المتقطعة يعتمد على خزعات الطعم الخيفي للبروتوكول للكشف عن إصابة الكسب غير المشروع النسيجية شبه السريرية في حالة عدم وجود اضطراب في الكرياتينين في المصل. لديه خصوصية منخفضة لتشخيص الرفض الحاد (AR) ، حيث أن ارتفاع الكرياتينين في الدم يمكن أن يكون بسبب أسباب أخرى لا تتعلق مباشرة برفض الطعم الخيفي ، مثل السمية الكلوية ذات الصلة بالأدوية المثبطة للمناعة (IS) ، النخر الأنبوبي الحاد ، العدوى ، والتليف الخلالي والضمور الأنبوبي (IFTA). علاوة على ذلك ، في حين تم افتراض استخدام خزعات المراقبة كأداة قياسية ذهبية لتشخيص جميع آفات لوغرافت ، هذا النهج مكلف ، غازي ، مع المراضة الإجرائية (خطر النزيف ؛ الإجراء الذي يتطلب التخدير ، خاصة لمرضى KTx للأطفال) [9] ، محفوف بالمتغيرات قراءة بين المشغل ، وغالبًا ما يكون ممثلاً بشكل سيئ للإصابة النسيجية البؤرية ، لذلك ، استخدام العلامات البيولوجية غير الغازية التي يمكن أن تتنبأ بدقة وتحدد عبء قد تكون الإصابة المناعية في الطعم الخيفي تقدمًا كبيرًا لمراقبة دقيقة لـ KTx [10-12].

لقد أوضحت مجموعاتنا وغيرها [13-17] أن استجواب المؤشرات الحيوية البروتينية و RNA و microRNA في بول مرضى KTx هو سائل بيولوجي مثالي للمراقبة التسلسلية للطعم الخيفي في الكلى لأنه عبارة عن ترشيح فائق للـ ويعكس الكلى العمليات البيولوجية والعبء الالتهابي الموجود في الكسب غير المشروع الكلوي [18]. على الرغم من عدد من الدراسات التي قيمت سابقًا المؤشرات الحيوية للبول كنهج تشخيصي غير جراحي لتحليل AR في زراعة الكلى ، فإن التركيز الحصري على المؤشرات الحيوية الفردية مثل الكيماويات والمستقبلات المعينة مثل CXCR3 أو CXCL9 أو CXCL10 [{{ 6}}] تجعل من الصعب التقاط التعقيد الجزيئي وعدم التجانس للـ AR عبر مرضى KTx المختلفين. يعد التقاط هذا التباين ضروريًا لتحديد عبء الإصابة بطريقة يمكن استخدامها للمراقبة المستقبلية للواقع المعزز واستعادة إصابة الكسب غير المشروع بعد التدخل العلاجي [25 ، 26].

في هذه الدراسة ، نطبق المعرفة المكتسبة من تسخير وحدة رفض مشتركة (CRM) من 11 جينًا [27] ، تم تطويرها في الأصل باستخدام تحليل تلوي شامل لمجموعات بيانات ميكروأري أنسجة الزرع المتاحة للجمهور لعينات الخزعة من أربعة أنواع مختلفة من المواد الصلبة الأعضاء. تم التعبير عن جينات CRM في الأنسجة (tCRM) بشكل مفرط بين مرضى AR ، بغض النظر عن نوع العضو ، أو الاختلافات في بروتوكولات كبت المناعة ، أو الاختلافات في الأنظمة الأساسية التي تستجوب التعبير الجيني. تنبأت العتبة الكمية التي تم تحديدها من خلال التحليل الحسابي لدرجة الجينات المجمعة (درجة tCRM) بدقة بوجود الواقع المعزز عن طريق التحقق المتبادل من صحة توقيعات التعبير الجيني للنسيج في 8 مجموعات مستقلة (عدد=236 عينات) من الطعم الخيفي للكلى البشرية الخزعات [27]. تم التحقق من صحة درجة tCRM بشكل أكبر بواسطة qPCR في دراسة منفصلة على عينات خزعة KTx كتشخيص لكل من AR وإصابة الطعم الخيفي المزمنة (CAl) مع عتبات مجموعة جينية مختلفة [28]. علاوة على ذلك ، تم التحقق من صحة هذه المجموعة من جينات CRM في مجموعة مستقلة من الأنسجة المأخوذة من مرضى زرع الرئة المصابين بخلل وظيفي في طعم الرئة المزمن (CLAD) [29].

في هذه الدراسة ، قمنا بتقييم مجموعة جينات CRM لاستخدامها في عينات البول من مرضى KTx ، مقترنة بخزعات الطعم الخيفي ذات الأنسجة المعروفة ، من أجل التشخيص غير الجراحي للـ AR والإصابات المناعية الأخرى. علاوة على ذلك ، قمنا بتطوير درجة CRM (uCRM) في البول والتي تميز بدقة بين مرضى STA و AR. نقوم بتقييم الإمكانات السريرية لهذه النتيجة في اكتشاف بار من خلال ربط هذه النتيجة بعشرات الأنسجة من التهاب الأنبوب والالتهاب الخلالي.

آثار مرض CSITANCHE: تحسين المناعة

المواد والأساليب

عينات البول وفوج الدراسة

تم تضمين عينات بول البنك الحيوي (n {0}}) من متلقي KTx المسجلين في جامعة ستانفورد بين عامي 2000 و 2011 والمركز الطبي UCSF المسجل بين عامي 2014 و 2016 في الدراسة. تمت الموافقة على الدراسة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية ولجنة الأخلاقيات بجامعة كاليفورنيا سان فرانسيسكو ، كاليفورنيا. قدم جميع المرضى موافقة خطية مستنيرة للمشاركة في البحث ، مع الالتزام الكامل بإعلان هلسنكي. تتوافق الأنشطة السريرية والبحثية التي يتم الإبلاغ عنها مع مبادئ إعلان اسطنبول على النحو المبين في إعلان اسطنبول بشأن الاتجار بالأعضاء وسياحة زرع الأعضاء. بالنسبة لعينات البول المستخدمة في تحديد عتبة uCRM للـ AR ، تم تحديد 178 عينة بول مع خزعات الطعم الكلوي المزدوجة مع أمراض محددة بوضوح إما من AR المتدرج بانف [30،31] أو عدم وجود إصابة / طعوم مستقرة (STA) (Eig 1). بالإضافة إلى ذلك ، قمنا أيضًا بتقييم التوقيع لمقايسة uCRM في اعتلال الكلية الفيروسي BK ، والذي يعد مؤثرًا مهمًا لتشخيص AR وغالبًا ما يظهر مع التهاب كبير في خزعة الطعم الخيفي. بشكل عام ، تم تجاهل 28 عينة بسبب مشكلات مراقبة الجودة المتعلقة بالمحتوى المنخفض والحمض النووي الريبي رديء الجودة ، مما أدى إلى العد النهائي لـ 150 عينة بول من 150 فردًا لتحليل المقطع العرضي لإصابة KTx المناعية. تمت مطابقة كل عينة بول مع خزعة في وقت جمع البول والتي تم تقييمها من قبل أخصائي علم الأمراض في جامعة ستانفورد (ريتشارد سيبلي) أو في UCSF (Zol-tan Laszik).

خصائص المريض

150 unique urine samples were assessed for the uCRM assay in 150 unique kidney transplant patients. Baseline clinical and demographic variables by AR, bAR, BKVN, or STA phenotype are shown in Table1, There were no significant differences between the groups in the demographic variables, except in recipient age (p= 0.025) and in donor-source (p=0.0008). These samples were used in cross-sectional analyses for modeling of gene expression data and subsequent development and validation of the uCRM threshold for biopsy-proven AR. Samples were collected from both pediatric (n=94) and adult (n=56)patients to enable a model-independent of recipient age or baseline immunosuppression. Based on the matched biopsy diagnosis, urine samples were categorized in the following categories: AR(n=64;45 biopsies met criteria for Banff confirmed AR with >i2,t2, and infiltration by >4 خلايا أحادية النواة / مقطع عرضي أنبوبي ، في حين استوفى 19 معيارًا للحدود AR مع il / i2 و t 0 / t1 والتسلل بواسطة 1-4 الخلايا أحادية النواة / المقطع العرضي الأنبوبي) ، STA (n { {8}}) ​​، التهاب الكلية الفيروسي BK (ن =43) ، تلقى المرضى نظام ILS مثبط الكالسينيورين على أساس تاكروليموس وميكوفينولات موفيتيل ، مع أو بدون المنشطات ، والعلاج التعريفي إما باستخدام Thymoglobulin أو مضاد IL {{ 12}} مستقبلات الأجسام المضادة أحادية النسيلة (daclizumab أو basi. infliximab) [32]. تم الحصول على عينات البول بمتوسط ​​731 يومًا بعد الزرع (النطاق 169-1335 يومًا).

تعريف أنماط الإصابة

All kidney biopsies were blindly and centrally analyzed at each institution by staff pathologists (RS and ZL)and were graded by the Banff dassification[31,33] for acute rejection.Intragraft C4d stains were performed [34] to assess for acute humoral rejection(AHR)[35]. Transplant injury was defined as>زيادة بنسبة 20 في المائة في كرياتينين المصل عن القيمة الأساسية السابقة للحالة المستقرة والخزعة المصاحبة التي تم تصنيفها إما على أنها AR أو BKVN. درجة الالتهاب الخلالي أكبر من أو تساوي 1 مع كل من Cd و DSA سالب. تم إحداث كل من حالات AR (TCMR) بوساطة Tcell وحالات الرفض بوساطة الأجسام المضادة (ABMR) ، على الرغم من أن جميع حالات ABMR التي تمت ملاحظتها كان لها نمط ظاهري مختلط من TCMR و ABMR ، حيث نادرًا ما يتم ملاحظة ملاحظة ABMR النقي في مجموعات منخفضة المخاطر وغير حساسة. لوحظت تغيرات على الحدود (bAR) في بعض حالات TCMR ، والتي تتميز بتسلل الخلايا أحادية النواة (<25% of="" the="" parenchyma)or="" foci="" of="" mild="" tubulitis(1-4="" mononuclear="" cells/tubular="" cross-section),="" and="" for="" purposes="" of="" molecular="" correlation="" analysis,="" these="" have="" been="" shown="" as="" bar,="" as="" the="" burden="" of="" histological="" inflammation="" was="" overall="" lower="" for="" these="" biopsy="" samples.="" bkvn="" was="" defined="" as="" the="" positivity="" of="" polyomavirus="" pcr="" in="" peripheral=""><1000-28,800,000), together="" with="" a="" positive="" sv40="" stain="" in="" the="" concomitant="" renal="" allograft="" biopsy.="" normal="" (sta)="" allografts="" were="" defined="" by="" an="" absence="" of="" significant="" injury="" pathology="" on="" the="" 6-month="" protocol="" biopsy,="" as="" defined="" by="" banff="" schema,="" stable="" graft="" function,="" no="" proteinuria,="" and="" no="">

الشكل 1. اختيار العينة والدراسة التخطيطية للدراسة. تم جمع 1760 عينة بول بين عامي 2000 و 2016 ،

منها 643 يحتوي على بيانات خزعة مطابقة. 178 من هؤلاء 643 كان لديهم أنماط ظاهرية محددة جيدًا من AR أو bAR أو BKVN أو STA.

بعد استخراج الحمض النووي الريبي ، وتوليف (كدنا) ، وتقدير qPCR ، لم تمر 28 عينة من ضمان الجودة / مراقبة الجودة ، وترك 150 عينة

عينات للتحليل والنمذجة الإحصائية.

جمع البول ومعالجته واستخراج الحمض النووي الريبي الكلي وتوليف (كدنا) و qPCR

تم جمع البول (50 مل ، حاوية معقمة) من مرضى زرع الكلى قبل إجراء الخزعة وقبل أي تكثيف لعلاج AR. تم استخراج الحمض النووي الريبي من رواسب الخلايا البولية وفقًا لبروتوكولنا المبلغ عنه سابقًا [36]. باختصار ، تم الحصول على خلايا البول عن طريق الطرد المركزي لعينة بول 50- مل عند 2000xg لمدة 20 دقيقة. تم استخراج الحمض النووي الريبي من كريات خلايا البول باستخدام مجموعة RNeasy Plus Micro Kit (Qiagen ، فالنسيا ، كاليفورنيا). تم تقييم جودة الحمض النووي الريبي باستخدام مقياس الطيف الضوئي NanoDrop ND -2000 (ThermoFisher Scientific ، Waltham ، MA) بنسبة 260/280. تم إجراء تخليق (كدنا) باستخدام 50 نانوغرام من الحمض النووي الريبي المستخرج باستخدام SuperScript VILO "Master Mix (Invitrogen ، Carlsbad ، CA). تم إجراء qPCR على cDNA المركب من 50 نانوغرام من إجمالي الحمض النووي الريبي ، ثم تمت معالجة 1.56 نانوغرام من (كدنا) من خلال تضخيم الهدف المحدد والعينة التخفيف باستخدام مقايسات Taqman المجمعة لجينات 1l uCRM في تعدد الإرسال ، مع Taqman PreAmp Master Mix (ABI) إلى الحجم النهائي لـ 5ul ، لمدة 18 دورة في دورة حرارية ، ثم تم تخفيفها باستخدام محلول تعليق الحمض النووي (TEKnova ، CA). تم إجراؤها على المصفوفات الديناميكية 96.96 (Fluidigm ، جنوب سان فرانسيسكو ، كاليفورنيا） باستخدام 2.25 ميكرولتر من العينة المخففة من تضخيم هدف محدد ، جنبًا إلى جنب مع Taqman Assays (ABI) لكل نسخة جينية (S1Table) ، مزيج رئيسي عالمي Taqman (النظم البيولوجية التطبيقية ، Foster City، CA) وكاشف التحميل (Fluidigm) ، عن طريق تحضير الشريحة وتحميلها عبر وحدة تحكم HX IFC وتنفيذ qPCR في نظام BioMark (Fluidgm). تم حساب المقدار النسبي لتعبير RNA باستخدام cy المقارن طريقة عتبة كلي (CT). تم تطبيع قيم التعبير إلى 18 باستخدام المرجع الداخلي للحمض النووي الريبي الريبوسومي والحمض النووي الريبي العالمي (Agilent Inc. ، سانتا كلارا ، كاليفورنيا).

إحصائية

تم تشغيل جميع فحوصات qPCR في نسختين. يتم تقديم جميع البيانات على أنها تعني ± SEM. بالنسبة لمقارنات جينات CRM لكل نمط ظاهري ، تم استخدام نموذج التأثيرات المختلطة مع تصحيح Geisser-Greenhouse ، مع تصحيحات مقارنات متعددة تم إجراؤها باستخدام الإجراء الخطي المكون من مرحلتين لكل من Beniamini و Krieger و Yekutieli. تم إجراء ارتباط بيرسون والغبار الهرمي في مورفيوس (معهد برود). بالنسبة لنماذج توقع التعلم الآلي ، تم تقسيم البيانات إلى مجموعة تدريب (8 0 بالمائة) ومجموعة اختبار (20 بالمائة). تم استخدام نموذج تصنيف شجرة القرار ، الذي تم التحقق من صحته في مجموعة الاختبار ، لتحديد أكثر درجات القطع الدقيقة لـ uCRM. تم استخدام التحديد المتغير باستخدام الغابات العشوائية (VSURF) لتصنيف AR ys STA وكذلك لتقييم وترتيب أهمية الجينات الفردية. يتم تعريف ناتج أهمية متغير الغابة العشوائية على أنه تم استبعاد متوسط ​​النسبة المئوية لانخفاض عدم دقة نموذج المتغير (الجين) (تم تبديله عشوائيًا) من النموذج. تم عمل الغبار غير الخاضع للإشراف لتصور فصل النمط الظاهري باستخدام خوارزمية تضمين الجار العشوائي الموزعة (t-SNE) في الرياضيات 11.3 (Wolfram Research ، Champaign. IL). تم إجراء تحليل شبكة جينات CRM باستخدام GeneMANIA [37]. تم إجراء إحصائيات حول المتغيرات الديموغرافية باستخدام تحليلات Chi-Square المنفصلة واختبار Kruskal-Wallis للمتغيرات المستمرة في IMP 14.2 (SASInstitute ، كاري ، نورث كارولاينا). ما لم ينص على خلاف ذلك. تم إجراء جميع التحليلات الأخرى وتصورها باستخدام Prism 8.0.1 (GraphPad ، Carlsbad ، CA).

الموافقة على الدراسة

تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجان الأخلاقيات بكل من كلية الطب بجامعة ستانفورد والمركز الطبي UCSF. قدم جميع المرضى البالغين وأولياء الأمور / الأوصياء على المرضى غير البالغين موافقة خطية مستنيرة للمشاركة في البحث ، مع الالتزام الكامل بإعلان هلسنكي. تتوافق الأنشطة السريرية والبحثية التي يتم الإبلاغ عنها مع مبادئ إعلان اسطنبول على النحو المبين في إعلان اسطنبول بشأن الاتجار بالأعضاء وسياحة زرع الأعضاء.

آثار مرض CSITANCHE: تحسين المناعة

نتائج

تظهر المتغيرات السريرية والديموغرافية الأساسية لجميع متلقي KTx البالغ عددهم 150 مع أنماط ظاهرية AR و bAR و BKVN و STA في الجدول 1.

الوفرة النسبية ، وارتباط التعبير الجيني CRM في رواسب خلية الفئران

الوفرة النسبية. لتحديد الوفرة النسبية لنصوص الجينات CRM في رواسب البول ، تم استخدام قيم عتبة الدورة (Ct) كمقياس للوفرة. كلما انخفضت قيمة Ct ، زادت وفرته بين جينات CRM. من بين 11 جينة CRM ، كان BASP1 هو النص الأكثر وفرة في رواسب الخلايا البولية. تبع BASP1 كل من TAP1 و PSMB9 و ISG20 كأربع نسخ أعلى وفرة ، وكان LK و CD6 من بين أقل النصوص وفرة في رواسب البول في مجموعة الجينات CRM. نظرًا لأن قيم Ct تراوحت من أدنى قيمة Ct من 14 إلى أعلى قيمة Ct وهي 20 ، كان هناك 64- فرق أضعاف بين نسخ الجين BASP1 و CD6 ، مع أن CD6 هو أقل نسخة وفرة.

الشكل 2. الوفرة النسبية والارتباط بين وفرة جينات CRM في البول والتعبير عن جينات CRM عبر الأنماط الظاهرية السريرية المختلفة لزرع الكلى. مصفوفة ارتباط بيرسون توضح الارتباط بين 11 جينة CRM في تعبيرها في رواسب الخلايا البولية. يعمل حجم المربع كمؤشر مرئي لقوة الارتباط. B. Heatmap مع التجميع الخاضع للإشراف بواسطة النمط الظاهري مما يدل على التعبير النسبي لجينات CRM في AR و bAR و BKVN و STA. C. مؤامرات الكمان التي تصور توزيع جينات CRM في حبيبات خلايا البول AR و bAR و BKVN و STA. يشير إلى أن AR مقابل STA كان مهمًا بعد مقارنات متعددة. # يشير إلى أن bAR مقابل STA كان مهمًا بعد مقارنات متعددة. تتوفر إحصائيات إضافية في الجدول 2.

ارتباط التعبير الجيني بين الجينات الجينية CRM.

بعد ذلك ، قمنا بتقييم ارتباط التعبير الجيني بين 11 جينة CRM. تراوح الارتباط من ضعيف جدًا (ص=-0. 17 لـ CXCL9 و NKG7 و r=-0. 10 CXCL10 و RUNX3) إلى قوي جدًا (ص=0. 77 لـ INPP5D و TAP1 و نفس القيمة لـ CD6 و LCK). على الرغم من وجود CXCL9 و CXCL10 في نفس فئة الكيميائيات ، إلا أن ارتباط التعبير الجيني بينهما كان متوسطًا فقط (ص=0 .46). يتم تقديم العرض الرسومي لمصفوفة الارتباط في الشكل 2 أ. توضح خريطة الحرارة التي تم إنشاؤها باستخدام التجميع الخاضع للإشراف الزيادة الكبيرة في قيم التعبير الجيني لجينات CRM في AR و bAR و BKVN مقارنة بالنمط الظاهري STA (الشكل 2 ب).

التعبير الجيني uCRM في الرواسب البولية مع AR و BKVN المؤكدة بالخزعة

التعبير الجيني لـ CRMgenes في AR و bAR. بعد ذلك ، قمنا بتقييم التعبير الجيني لكل من 11 جينة CRM لتعبيرها النسبي في AR و bAR و BKVN و STA. تم تقديم ملخص لنتائج التحليل في الجدول 2 والشكل 2C.1 0 من أصل 11 جينًا تمت زيادتها بشكل كبير في رواسب بول AR بالمقارنة مع رواسب البول من STA. ومع ذلك ، فقط خمسة جينات CRM (Cd6 و Cxcll0 و Cxd9 و Nkg7 و Psmb9) تم تنظيمها بشكل كبير في عينات BAR مقارنة بـ STA وكان تعبيرها في مجموعة BAR أقل نسبيًا من مجموعة AR المتدرجة في Banff ، مما يبرز أن جينات uCRM يمكنها تعكس العبء الالتهابي داخل الطعم الخيفي Eig 2C.

الجدول 2. مستويات التعبير الجيني لجينات CRM عبر أنماط ظاهرية مختلفة

التعبير الجيني لـ CRMgenes في BKVN. تم تنظيم التعبير عن CD6 و CXCL10 و CXCL9 و LCK و NKG7 و PSMB9 بشكل تفاضلي في عينات البول مع مرضى BKVN بالمقارنة مع عينات مرضى STA. من بين الجينات الستة ذات قيم التعبير الجيني المختلفة إحصائيًا بين عينات BKVN و STA ، كان التعبير عن NKG7 فقط أقل بكثير في بول BKVN.

تحديد درجة التعبير الجيني للبول CRM (uCRM) لتحديد رفض زرع الكلى

نظرًا لأن التعبير عن مجموعة الجينات CRM لم يكن متجانسًا عبر الأنماط الظاهرية للزرع وكان هناك حديث فسيولوجي متقاطع بين الجينات المختلفة (S1 الشكل) ، استخدمنا طرقًا غير خطية خاضعة للإشراف لمزيد من التمييز بين الأنماط الظاهرية وتصنيفها. تم إجراء المجموعات غير الخاضعة للإشراف عبر t-SNE لتحديد العلاقات بين جينات uCRM والأنماط الظاهرية. يوضح الشكل 3A مخطط t-SNE ، مما يشير إلى أن 11 جينة CRM يمكن أن تفصل تقريبًا AR عن عينات STA. حدد نموذج VSURF ، المعتمد على درجات أهمية الغابات العشوائية ، أن PSMB9 و CXCL10 كانا الجينين الأكثر أهمية في إرضاء AR من STA. يوضح الشكل 3 ب كذلك أهمية هذين الجينين. تشير مؤامرة أهمية الأوزان الجينية إلى أن أيًا من الجينين إذا تم استبعادهما من النموذج ، يتوافق مع انخفاض تقريبي بنسبة 20 في المائة في عدم دقة النموذج. يمكن لهذين الجينين تصنيف AR مقابل STA بدقة عالية تقريبًا مثل نموذج الجين 1l ، مع حساسية 93.6 بالمائة وخصوصية 97.6 بالمائة. تم تحديد عتبات التعبير الجيني لهذين الجينين بواسطة مصنف شجرة القرار وتم توضيح قيم مقياس السجل لهذين الجينين في الشكل 3 ج. تم تصنيف عتبة 28 لـ CXCL10 و 3 لـ PSMB9 بشكل صحيح 86 / 88 حالة AR و STA للحصول على دقة إجمالية تبلغ 97.7 بالمائة. والجدير بالذكر أن عينات بار تقع بين النوعين الظاهريين AR و STA ، مما يشير إلى تدرج هذين الجينين في درجة التهاب الطعم الخيفي.

لاستكشاف أداء تصنيف درجة uCRM في حالات AR و AR و STA الحدودية ، تم إنتاج مصنف شجرة قرار (الشكل 4 أ). حددت شجرة القرار عتبات درجة UCRM المثلى لكل نمط ظاهري. درجة أكبر من 4 حالات مصنفة بشكل صحيح 44/49 AR ؛ كانت النتيجة أقل من 1.8 حالة تصنيفها بشكل صحيح 33/35 STA. كانت 14/23 حالة حدودية بين هذين العتبتين. تم توضيح توزيع درجات uCRM حسب النمط الظاهري في الشكل 4B. متوسط ​​درجات uCRM (SEM) لـ AR و bAR و STA كانت 8.195 (0. 631) ، 3.265 (0 .412 {{21) }}) و 1.404 (0.162) على التوالي وجميع المقارنات كانت معنوية بعد تصحيح المقارنات المتعددة. يمكن أن تميز درجة uCRM بين AR و STA بدقة عالية - عند عتبة 3.63 ، كانت الحساسية والنوعية 95.35 في المائة و 97.78 في المائة على التوالي (Eig 4C. عند التمييز بين AR ومجموعة من bAR و STA ، تم الاحتفاظ بدرجة uCRM دقة عالية في نفس العتبة ، كانت الحساسية والنوعية 87.10 في المائة و 97.78 في المائة على التوالي (S2A الشكل).

عند تضمين عينات BKVN ، كانت جميع الأنماط الظاهرية مختلفة بشكل كبير عن بعضها البعض بعد تصحيح المقارنات المتعددة باستثناء bAR و BKVN (S2BFig). عند التمييز بين AR ومجموعة من bAR و STA و BKVN ، لا تزال درجة uCRM تحتفظ بدقة عالية ولكن أقل. باستخدام نفس العتبات 3.63 ، كانت الحساسية والنوعية 76.92 في المائة و 97.78 في المائة على التوالي (S2CFig).

يرتبط ComScore بالآفات النسيجية الخاصة بخزعة AR بشكل خاص ، يشير الاتجاه المتمثل في زيادة درجة uCRM من STA إلى bAR إلى AR إلى أن درجة uCRM يمكن أن تكتشف تدرجات الالتهاب ذات الصلة سريريًا. على هذا النحو ، قمنا بتقييم ما إذا كانت درجة uCRM مرتبطة بمدى آفات AR النسيجية التي لوحظت في الخزعات المتطابقة من نفس المريض ، والتي تم جمعها في وقت واحد. كما هو موضح في الشكل 5 أ و 5 ب ، ترتبط درجات uCRM بمدى التهاب الأنبوب (t) والالتهاب الخلالي (1) درجات الخزعة في AR (R =0. 5479 ، P<0.0001 and="" r="0.4420,"><0.0001 for="" the="" ucrm="" score="" regarding="" t="" and="" ii,="" respectively).="" there="" was="" no="" correlation="" between="" the="" ucrm="" score="" and="" measures="" of="" tubular="" atrophy="" (ta),glomerulosclerosis="" (gs),mesangial="" matrix="" (mm),="" intimal="" proliferation="" (cv),="" medial="" arteriolar="" hyaline="" (ah),="" tubular="" vacuolization(tv),="" arteritis="" (v),="" or="" acute="" glomerulitis="">

آثار CSITANCHE: مكافحة التعب

مناقشة

هناك حاجة ملحة في طب الزرع لتطوير أدوات مراقبة موثوقة وغير جراحية قد تساعد أطباء الزراعة على التنبؤ بمخاطر إصابة الطعم الخيفي ، بشكل تفضيلي قبل إثبات تلف الطعم الخيفي بالفعل. في حين أن عددًا من المؤشرات الحيوية النسخية قد ارتبطت بالواقع المعزز ، ركزت معظم الدراسات أساسًا على عامل نسخ فريد أو مفرد ولا تعكس التعقيد الجزيئي الكامل للعملية البيولوجية لرفض الطعم الخيفي [11 ، 38]. علاوة على ذلك ، في حين أن المعيار الذهبي الحالي لتشخيص وجود إصابة الطعم الخيفي المناعي هو خزعة الطعم الخيفي ، فمن المعروف جيدًا أن الإجراء يحتوي على قيود رئيسية من حيث التمثيل المتكرر لأخذ العينات غير المنتظم ، والتكلفة العالية ، وعدم التطبيق العملي للتكرار. الفحص بسبب الطبيعة الغازية للتقنية.

أظهرت العديد من التقارير قيمة دراسة المؤشرات الحيوية المختلفة التي تتنبأ بالواقع المعزز في عينات البول لمتلقي زراعة الكلى [20-22]. زيادة مستويات المسالك البولية من جزيئات المستجيب المناعي والنصوص مثل جرانزيم B. CXCL10.CXCL9.IFN-y و CXCR3. تم إثبات ارتباطه الكبير بالواقع المعزز ، وفي بعض الحالات توقع ظهور الواقع المعزز مسبقًا [19،24 ، 39-43]. الاستفادة من البيانات التي تم الإبلاغ عنها مؤخرًا من قبل مجموعتنا [2Z، 29،44] التي تظهر وحدة رفض شائعة للتعبير الجيني في خزعات الطعم الخيفي أثناء AR ، بغض النظر عن نوع عضو الأنسجة ، كان الهدف الرئيسي من هذه الدراسة هو التحقق مما إذا كان التقييم يمكن أن يكون من CRM في بول مرضى زرع الكلى مفيدًا كمؤشر بيولوجي مثالي غير جراحي يتنبأ بظهور AR.

في حين تم تقييم العديد من جينات CRM الفردية والمنتجات الجينية بشكل فردي ، فإن هذا هو التقرير الأول عن الاستخدام الجماعي غير الموسع لجينات CRM في التنبؤ بالواقع المعزز في KTx. على سبيل المثال ، تم تقييم CXCL9 mRNA البولي والبروتين و CXCL10 mRNA سابقًا في دراسات متعددة المراكز لتشخيص AR [13،45،46. نسخ PSMB9 في خزعات الكلى كانت مرتبطة سابقًا بجودة الكسب غير المشروع والتنبؤ بالرفض الحاد [ 47].

لقد قمنا بتحليل بيانات التعبير الجيني على رواسب البول من مرضى KTx للوفرة النسبية لنصوص CRM وعلاقة التعبير بين جينات CRM (الشكل 2 أ). زادت CRMgenes من التعبير في AR وإصابات الزرع الأخرى مثل AR و BKVN (الشكل 2 ب و 2 ج). في هذا التقرير ، لاحظنا أيضًا وجود علاقة قوية بين درجة UCRM المطورة حديثًا ودرجات الالتهابات النسيجية (درجات t و ii من خزعات الكلى). نظرًا لأن معظم جينات CRM يتم التعبير عنها بشكل حصري تقريبًا في تسلل الخلايا المناعية ، فإن زيادة التعبير عن جينات CRM في رواسب البول تشير إلى وجود زيادة في إطلاق الخلايا المناعية المتسللة في بول متلقي زرع الكلى الذين يخضعون لإصابة الكسب غير المشروع.

بعد ذلك ، استخدمنا درجة مجمعة محسوبة من قيم التعبير الجيني الفردية لجينات CRM الفردية ، ComScore ، كمقياس لتصنيف مرضى زرع الكلى إلى مريض يعاني من رفض حاد أو بدون إصابة وحدد عتبة AR. تظهر نتائج هذه الدراسة أن قوة اختبار uCRM لا يقتصر فقط على تحديد المرضى الذين يعانون من AR ، ولكن أيضًا تحديد درجة الإصابة التي تحدث في الطعم الخيفي ، حيث تزداد النتيجة من القيم المنخفضة في مرضى STA ، إلى القيم المتوسطة في مرضى بار ، ولقيم عالية في مرضى AR ، كما ينعكس في درجات التهاب الأنبوب والالتهاب الخلالي. نعتقد أن درجة uCRM لها فائدة محتملة في مراقبة الزرع ويمكن أن تكون بمثابة اختبار مساعد أو إحالة للخزعات. قد يكون المريض الذي لديه درجة منخفضة من UCRM قادرًا على تجنب خزعات البروتوكول غير الضرورية بينما قد يحتاج المريض الذي لديه درجة عالية من UCRM إلى مراقبة تسلسلية أو خزعة للسبب لتقييم حالة الكسب غير المشروع.

نحن نقر بالعديد من قيود هذه الدراسة التي تشمل (1) حجم عينة محدود من الدراسة ، (2) عدم وجود أنماط ظاهرية أخرى لإصابة الزرع مثل إصابة الطعم الخيفي المزمنة أو سمية الدواء ، و (1) نقص تقييم درجة uCRM في الطول الطولي. العينة في حجم مجموعة أكبر. تشير هذه النتائج الواعدة إلى أن هناك حاجة لدراسات مستقبلية إضافية للتحقق من صحة الفائدة المحتملة لنتيجة UCRM وتقييمها بشكل كامل في الإعداد السريري. باختصار ، نقدم علامة حيوية غير جراحية تعتمد على البول تم تطويرها من وحدة الرفض الشائعة المكونة من 11 جينًا يمكنها تحديد إصابة الزرع ورفضه في مرضى زرع الكلى.

آثار CSITANCHE: تحسين الذاكرة

مراجع

1 Wolfe RA ، Ashby VB ، Milford EL ، Ojo AO ، Ettenger RE ، Agodoa LY ، et al. مقارنة الوفيات في جميع المرضى الذين يخضعون لغسيل الكلى ، والمرضى الذين يخضعون لغسيل الكلى في انتظار الزرع ، ومتلقي أول عملية زرع جثة. صحيفة الطب الانكليزية الجديدة. 1999 ؛ 341 (23): 1725-30.

2. Laupacis A و Keown P و Pus N و Krueger H و Ferguson B و Wong C وآخرون. دراسة نوعية الحياة والتكلفة المنفعة لزرع الكلى. الكلى الدولية. 1996 ؛ 50 (1): 235-42. بميد: 8807593.

3. Lodhi SA، Lamb KE، Meier-Kriesche HU. تحسين النتائج طويلة المدى لمرضى الزرع: إثبات الحاجة إلى إجراء أبحاث طويلة الأجل خاصة بمرض محدد ومتعددة التخصصات. المجلة الأمريكية لزراعة الأعضاء: الجريدة الرسمية للجمعية الأمريكية لزراعة الأعضاء والجمعية الأمريكية لجراحي زراعة الأعضاء. 2011 ؛ 11 (10): 2264-5.

4. Naesens M ، Khatri P ، Li L ، Sigdel TK ، Vitalone MJ ، Chen R ، et al. يرتبط الضرر النسيجي التدريجي في الطعوم الكلوية بالتعبير عن جينات المناعة الفطرية والتكيفية. الكلى الدولية. 2011 ؛ 80 (12): 1364–76.

5. Sigdel TK، Li L، Tran TQ، Khatri P، Naesens M، Sansanwal P، et al. تتنبأ الأجسام المضادة من غير HLA للحواتم المناعية بتطور إصابة الطعم الخيفي الكلوي المزمن. مجلة الجمعية الأمريكية لأمراض الكلى: JASN. 2012 ؛ 23 (4): 750-63.

6. بابي لام ، أوفنر جي ، إيريش جي إتش ، دي بوير جي ، بيرسيجن جي جي. وظيفة الطعم الخيفي الكلوي في أزواج متلقية متطابقة من الأطفال والبالغين من نفس المتبرع. الزرع. 2004 ؛ 77 (8): 1191-4. PMID: 15114083.

7. Provoost AP، Wolff ED، de Keijzer MH، Molenaar JC. تأثير حجم المتلقي على وظائف الكلى بعد زراعة الكلى. تحقيق تجريبي وسريري. مجلة طب الأطفال سور جيري. 1984 ؛ 19 (1): 63-7.

8. Moreso F و Lopez M و Vallejos A و Giordani C و Riera L و Fulladosa X وآخرون. خزعات البروتوكول التسلسلي لتوضيح تطور اعتلال الكلية المزمن في الطعوم الكلوية المستقرة. المجلة الأمريكية لزراعة الأعضاء: الجريدة الرسمية للجمعية الأمريكية لزراعة الأعضاء والجمعية الأمريكية لجراحي زراعة الأعضاء. 2001 ؛ 1 (1): 82-8. بميد: 12095044.

9. Davis ID ، Oehlenschlager W ، O'Riordan MA ، Avner ED. خزعة الكلى عند الأطفال: هل يجب إجراء هذا الإجراء في العيادة الخارجية؟ طب كلى الأطفال. 1998 ؛ 12 (2): 96-100. بميد: 9543363.

10. Roedder S ، Sigdel T ، Salomonis N ، Hsieh S ، Dai H ، Bastard O ، وآخرون. اختبار kSORT للكشف عن مرضى زرع الكلى المعرضين لخطر الرفض الحاد: نتائج دراسة AART متعددة المراكز. PLoS سينما. 2014 ؛ 11 (11): e1001759.

11. Sarwal M ، Chua MS ، Kambham N ، Hsieh SC ، Satterwhite T ، Masek M ، et al. عدم التجانس الجزيئي في رفض الطعم الكلوي الحاد الذي تم تحديده بواسطة التنميط الدقيق لمصفوفة الحمض النووي. صحيفة الطب الانكليزية الجديدة. 2003 ؛ 349 (2): 125–38.

12. Sigdel TK، Sarwal MM. التطورات الحديثة في اكتشاف العلامات الحيوية في زراعة الأعضاء الصلبة بواسطة ميكروفونات البروتيو. مراجعة الخبراء للبروتيوميات. 2011 ؛ 8 (6): 705-15. https://doi.org/10.1586/epr.11.66 PMID: 22087656.

13. Suthanthiran M و Schwartz JE و Ding R و Abecassis M و Dadhania D و Samstein B وآخرون. ملف mRNA للخلايا البولية والرفض الخلوي الحاد في الطعوم الكلوية. صحيفة الطب الانكليزية الجديدة. 2013 ؛ 369 (1): 20-31.

14. Sigdel TK ، Gao Y ، He J ، Wang A ، Nicora CD ، Fillmore TL ، et al. تعدين بروتين البول البشري لمراقبة إصابة زرع الكلى. الكلى الدولية. 2016 ؛ 89 (6): 1244-52. https://doi.org/10.1016/j. متماسكة. 2015.12.049 PMID: 27165815.

15. Sigdel TK و Ng YW و Lee S و Nicora CD و Qian WJ و Smith RD وآخرون. اضطرابات في إفرازات المسالك البولية في رفض الزرع. الحدود في الطب. 2014 ؛ 1:57.

16. يانغ جي ، ساروال مم. علم الوراثة وعلم الجينوم الزرع. مراجعات الطبيعة علم الوراثة. 2017 ؛ 18 (5): 309-26.

17. Loupy A و Lefaucheur C و Vernerey D و Chang J و Hidalgo LG و Beuscart T et al. استراتيجية المجهر الجزيئي لتحسين التقسيم الطبقي للمخاطر في الرفض المبكر للطعم الخيفي للكلى بوساطة الأجسام المضادة. مجلة الجمعية الأمريكية لأمراض الكلى: JASN. 2014 ؛ 25 (10): 2267 - 77. Epub 2014/04/05.

18. Sigdel TK ، Vitalone MJ ، Tran TQ ، Dai H ، Hsieh SC ، Salvatierra O ، et al. مقايسة سريعة غير باضعة للكشف عن إصابة زرع الكلى. الزرع. 2013 ؛ 96 (1): 97-101. PMID: 23756769.

19. Hauser IA و Spiegler S و Kiss E و Gauer S و Sichler O و Scheuermann EH وآخرون. التنبؤ برفض الطعم الخيفي الكلوي الحاد بواسطة مونوكين البولي الناجم عن الإنترفيرون-جاما (MIG). مجلة الجمعية الأمريكية لأمراض الكلى: JASN. 2005 ؛ 16 (6): 1849-1858.

20. Hu H، Kwun J، Aizenstein BD، Knechtle SJ. الكشف غير الباضع عن الإصابات الحادة والمزمنة في زراعة الكلى البشرية عن طريق رفع السيتوكينات / الكيماويات المتعددة في البول. الزرع. 2009 ؛ 87 (12): 1814–20. بميد: 19543058.

21. جاكسون جا ، كيم إي جيه ، بيغلي ب ، تشيزمان ج ، هاردن تي ، بيريز إس دي ، وآخرون. الكيماويات البولية CXCL9 و CXCL10 هي علامات غير باضعة لرفض الطعم الخيفي الكلوي والعدوى الفيروسية BK. المجلة الأمريكية لزراعة الأعضاء: الجريدة الرسمية للجمعية الأمريكية لزراعة الأعضاء والجمعية الأمريكية لجراحي زراعة الأعضاء. 2011 ؛ 11 (10): 2228–34.

22. Schaub S ، Nickerson P ، Rush D ، Mayr M ، Hess C ، Golian M ، et al. ترتبط مستويات CXCL9 و CXCL10 البولية بمدى التهاب الأنبوب تحت الإكلينيكي. المجلة الأمريكية لزراعة الأعضاء: الجريدة الرسمية للجمعية الأمريكية لزراعة الأعضاء والجمعية الأمريكية لجراحي زراعة الأعضاء. 2009 ؛ 9 (6): 1347–53.

23. Segerer S، Cui Y، Eitner F، Goodpaster T، Hudkins KL، Mack M، et al. التعبير عن chemokines ومستقبلات chemokine أثناء رفض زرع الكلى البشري. المجلة الأمريكية لأمراض الكلى: الجريدة الرسمية لمؤسسة الكلى الوطنية. 2001 ؛ 37 (3): 518-31. PMID: 11228176.

24. Tatapudi RR ، Muthukumar T ، Dadhania D ، Ding R ، Li B ، Sharma VK ، et al. الكشف غير الباضع عن التهاب الطعم الخيفي الكلوي عن طريق قياسات الرنا المرسال لـ IP -10 و CXCR3 في البول. الكلى الدولية. 2004 ؛ 65 (6): 2390-7.

25. مينون إم سي ، ميرفي بي ، هييجر بي إس. تحريك المؤشرات الحيوية نحو التنفيذ السريري في زراعة الكلى. جاسن. 2017.

26. Naesens M، Anglicheau D. Precision Transplant Medicine: Biomarkers to the Rescue. جاسن. 2017.

27. Khatri P، Roedder S، Kimura N، De Visser K، Morgan AA، Gong Y، et al. تحدد وحدة الرفض الشائعة (CRM) للرفض الحاد عبر أعضاء متعددة علاجات جديدة لزرع الأعضاء. مجلة الطب التجريبي. 2013 ؛ 210 (11): 2205 - 21.

28. Sigdel TK، Bestard O، Tran TQ، Hsieh SC، Roedder S، Damm I، et al. درجة التعبير الجيني الحسابي للتنبؤ بإصابة جهاز المناعة في الطعوم الكلوية. بلوس واحد. 2015 ؛ 10 (9): e0138133.

29. Secrets A و Yang JYC و Vanaudenaerde BM و Sigdel TK و Liberto JM و Damm I وآخرون. وحدة الرفض الشائعة في حالات الرفض المزمن بعد زراعة الرئة. بلوس واحد. 2018 ؛ 13 (10): e0205107. Epub 2018/10/06.

30. Sis B ، Mengel M ، Haas M ، Colvin RB ، Halloran PF ، Racusen LC ، وآخرون. تقرير اجتماع بانف 09: تدهور الكسب غير المشروع بوساطة الأجسام المضادة وتنفيذ مجموعات عمل بانف. المجلة الأمريكية لزراعة الأعضاء: الجريدة الرسمية للجمعية الأمريكية لزراعة الأعضاء والجمعية الأمريكية لجراحي زراعة الأعضاء. 2010 ؛ 10 (3): 464-71.

31. Solez K ، Colvin RB ، Racusen LC ، Haas M ، Sis B ، Mengel M ، وآخرون. تصنيف بانف 07 لأمراض الطعم الخيفي الكلوي: التحديثات والتوجيهات المستقبلية. المجلة الأمريكية لزراعة الأعضاء: الجريدة الرسمية للجمعية الأمريكية لزراعة الأعضاء والجمعية الأمريكية لجراحي زراعة الأعضاء. 2008 ؛ 8 (4): 753-60.

32. Sarwal MM ، Ettenger RB ، Dharnidharka V ، Benfield M ، Mathias R ، Portale A ، et al. يعتبر تجنب الستيرويد الكامل فعالًا وآمنًا عند الأطفال الذين يخضعون لعمليات زرع الكلى: تجربة عشوائية متعددة المراكز مع متابعة لمدة ثلاث سنوات. المجلة الأمريكية لزراعة الأعضاء: الجريدة الرسمية للجمعية الأمريكية لزراعة الأعضاء والجمعية الأمريكية لجراحي زراعة الأعضاء. 2012 ؛ 12 (10): 2719–29.

33. Racusen LC. مخطط بانف والتشخيص التفريقي لخلل الطعم الخيفي. إجراءات الزرع. 2004 ؛ 36 (3): 753-4.

34. Jianghua C ، Wenqing X ، Huiping W ، Juan J ، Jianyong W ، Qiang H. C4d كمتنبئ مهم للرفض الخلطي في الطعوم الكلوية. الزرع السريري. 2005 ؛ 19 (6): 785-91.

35. Crespo M ، Pascual M ، Tolkoff-Rubin N ، Mauiyyedi S ، Collins AB ، Fitzpatrick D ، et al. الرفض الخلطي الحاد في متلقي الطعم الخيفي الكلوي: 1. الوقوع ، الأمصال ، والخصائص السريرية. الزرع. 2001 ؛ 71 (5): 652–8. بميد: 11292296.

36. Keslar KS، Lin M، Zmijewska AA، Sigdel TK، Tran TQ، Ma L، et al. تقييم متعدد المراكز لبروتوكول موحد لتنميط التعبير الجيني غير الباضع. AJT. 2013.

37. Montojo J ، Zuberi K ، Rodriguez H ، Bader GD ، Morris Q. GeneMANIA: بناء شبكة الجينات السريع والتنبؤ بالوظائف لـ Cytoscape. F1000 البحث. 2014 ؛ 3: 153.

38. Der SD، Zhou A، Williams BR، Silverman RH. تحديد الجينات التي يتم تنظيمها تفاضليًا عن طريق الإنترفيرون ألفا أو بيتا أو جاما باستخدام مصفوفات أليغنوكليوتيد. وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم بالولايات المتحدة الأمريكية. 1998 ؛ 95 (26): 15623-8.

39. Hartono C ، Muthukumar T ، Suthanthiran M. التشخيص غير الجراحي للرفض الحاد للطعوم الكلوية الخيفية. الرأي الحالي في زراعة الأعضاء. 2 0 10 ؛ 15 (1): 35-41. https://doi.org/10.1097/MOT. 0b013e3283342728 بميد: 19935064.

40. Lazzeri E ، Rotondi M ، Mazzinghi B ، Lasagni L ، Buonamano A ، Rosati A ، et al. تعبير CXCL10 مرتفع في الكلى المرفوضة والدور التنبئي لمصل CXCL10 قبل الزرع من أجل الرفض الحاد واعتلال الكلية الخيفي المزمن. الزرع. 2005 ؛ 79 (9): 1215–20. بميد: 15880073.

41. ماتز إم ، باير جي ، ونش د ، مشريجي إم إف ، سيلر إم ، براتشكي جي ، وآخرون. يعد تعبير IP البولي بعد الزرع المبكر -10 بعد زرع الكلى تنبئيًا لوظيفة الكسب غير المشروع على المدى القصير والطويل. الكلى الدولية. 2006 ؛ 69 (9): 1683-90.

42. Simon T و Opelz G و Wiesel M و Ott RC و Susal C. قياسات التعبير الجيني التسلسلي للدم المحيطي و Granzyme B للتنبؤ بالرفض الحاد في متلقي الكسب غير المشروع الكلوي. المجلة الأمريكية لزراعة الأعضاء: الجريدة الرسمية للجمعية الأمريكية لزراعة الأعضاء والجمعية الأمريكية لجراحي زراعة الأعضاء. 2003 ؛ 3 (9): 1121-117. بميد: 12919092.

43. Yannaraki M ، Rebibou JM ، Ducloux D ، Saas P ، Duperrier A ، Felix S ، et al. الواسمات الجزيئية السامة للخلايا البولية للتشخيص غير الباضع في حالات رفض زرع الكلى الحاد. Transplant International: الجريدة الرسمية للجمعية الأوروبية لزراعة الأعضاء. 2006 ؛ 19 (9): 759–68. https://doi.org/10. 1111 / j. 1432-2277. 2006.00351.x PMID: 16918537.

44. Yang JYC ، Verleden SE ، Zarinsefat A ، Vanaudenaerde BM ، Vos R ، Verleden GM ، et al. الحمض النووي الخالي من الخلايا و CXCL10 المستمدة من تنبؤات زرع القصبات الهوائية. J كلين ميد. 2019 ؛ 8 (2). Epub 2019/02/20.

45. Faddoul G ، Nadkarni GN ، Bridges ND ، Goebel J ، Hricik DE ، Formica R ، et al. تحليل المؤشرات الحيوية خلال العامين الأوليين بعد الزراعة و 5- نتائج زراعة الكلى للعام: نتائج التجارب السريرية في زراعة الأعضاء -17. الزرع. 2018 ؛ 102 (4): 673-80. Epub 2017/12/01.

46. ​​Hricik DE، Nickerson P، Formica RN، Poggio ED، Rush D، Newell KA، et al. التحقق من صحة متعدد المراكز من CXCL9 البولي باعتباره علامة بيولوجية الطبقية للمخاطر لإصابة زرع الكلى. المجلة الأمريكية لزراعة الأعضاء: الجريدة الرسمية للجمعية الأمريكية لزراعة الأعضاء والجمعية الأمريكية لجراحي زراعة الأعضاء. 2013 ؛ 13 (10): 2634–44. Epub 2013/08/24.

47. Kotsch K ، Kunert K ، Merk V ، Reutzel-Selke A ، Pascher A ، Fritzsche F ، et al. تشير العلامات الجديدة في خزعات الكلى لمدة ساعة الصفر إلى جودة الكسب غير المشروع والنتائج السريرية. الزرع. 2010 ؛ 90 (9): 958-65. Epub 2010/09/23. PMID: 20859252.