التطورات في طب الأمراض الجلدية باستخدام ابتكار DNA Aptamer "Aptamin C": منع الإجهاد التأكسدي وتعظيم تأثير فيتامين C من خلال مضادات الأكسدة

joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

سوهو تشوي دكتوراه 1|جيونغمين هان دكتوراه. المرشح 2|جي هيون كيم إم إس المرشح 1|أ ‐ رو كيم Ph.D. المرشح 3|سانج ‐ Heon Kim Ph.D. المرشح 3|ويونتاي لي دكتوراه ، أستاذ 2|مون ‐ يونغ يون دكتوراه ، بروفسور 3|جيويوب كيم دكتوراه 1|يون سيونغ كيم دكتوراه ، أستاذ 1

الملخص

خلفية:فيتامين سي(المعروف أيضًا باسم حمض الأسكوربيك L) يلعب دورًا مهمًا في تقليل أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) وتجديد الخلايا عن طريق حماية الخلايا من الإجهاد التأكسدي. على الرغم من أن فيتامين سي يستخدم على نطاق واسع في أسواق مستحضرات التجميل والعلاج ، إلا أن هناك أدلة كبيرة على أن فيتامين سي يخضع بسهولةأكسدةعن طريق الهواء ودرجة الحموضة ودرجة الحرارة وضوء الأشعة فوق البنفسجية عند التخزين. هذا النقص في فيتامين سي يقلل من فعاليته كمضاد للأكسدة ويقلل من العمر الافتراضي للمنتجات التي تحتوي على فيتامين سي كمكون. للتغلب على نقص فيتامين سي ، قمنا بتطوير Aptamin C ، وهو aptamer DNA مبتكر يزيد من فعالية مضادات الأكسدة لفيتامين C من خلال الارتباط بالشكل المنخفض من فيتامين C وتأخيره.أكسدة.

طُرق:تم تحديد ارتباط Aptamin C بفيتامين C باستخدام تحليل مركز التجارة الدولية. تم إجراء تجربة ITC باستخدام 0. 2 مليمول / لترفيتامين سيتم حقنها 25 مرة في 2 ميكرولتر في عينة خلية سعة 1.8 مل تحتوي على Aptamin C بتركيز 0. 0 2 مليمول / لتر. تم تركيب البيانات على متساوي حرارة ربط موقع واحد باستخدام البرنامج الأصلي لـ ITC v.5.0.

نتائج:للتحقيق في تأثير Aptamin C وفيتامين سيمعقدة في جلود الإنسان ، أجريت في المختبر والاختبارات السريرية. لاحظنا أن مركب Aptamin C وفيتامين C كان فعالًا بشكل كبير في تحسين التجاعيد وتأثير التبييض وزيادة الترطيب. في الاختبار السريري ، أظهر الأشخاص الذين عولجوا بالمركب تحسنًا كبيرًا في تهيج الجلد والحكة. لم يتم تقديم أي تفاعل سلبي بواسطة مجمع Aptamin C في الاختبار.

استنتاج:أظهرت هذه النتائج مجتمعة أن Aptamin C ، وهو مركب مبتكر جديد ، يجب أن يُستخدم كمكون رئيسي للتجميل لمجموعة من الأمراض الجلدية.

الكلمات الدالةمضادات الأكسدة ، Aptamin C (فيتامين C ملزم Aptamer) ،أكسدة، الاكسدة،فيتامين سي(L ، حمض الاسكوربيك)

cistancheتمتلك قدرة قوية على مضادات الأكسدة

1|المقدمة

أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) هي أنواع كيميائية تفاعلية كيميائية تحتوي على الأكسجين ، والتي تلعب دورًا مهمًا في إشارات الخلايا والتوازن. {0}} لا تشمل هذه التأثيرات الإيجابية فقط مثل تحفيز جينات الدفاع المضيفة وتعبئة أنظمة النقل الأيوني ، ولكن أيضا أدوار في موت الخلايا المبرمج (موت الخلية المبرمج). يمكن زيادة مستويات 4،5ROS بسبب الإجهاد البيئي ، مما يؤدي إلى تلف هياكل الخلايا .3 وتسمى هذه الظاهرة "الإجهاد التأكسدي". الإجهاد التأكسدي هو أحد الأسباب الرئيسية للعديد من الأمراض بما في ذلك الأمراض التنكسية العصبية ، ومرض لو جيريج ، والتوحد ، والتصلب المتعدد ، وأمراض الجلد. 6-15 علاوة على ذلك ، فإن الإجهاد التأكسدي له تأثير مباشر على عملية شيخوخة الجلد. تتفاعل البروتينات والدهون والحمض النووي بحساسية مع الإجهاد التأكسدي الذي يسببه ROS. 17 مضادات الأكسدة فعالة للغاية في حماية الجلد لأنها تتفاعل مباشرة مع ROS وتمنعها من الوصول إلى الجزيئات المستهدفة البيولوجية.فيتامين سيوفيتامين E والإنزيم المساعد Q10 والمركبات البوليفينولية تحمي البشرة من التلف الناتج عن أنواع الأكسجين التفاعلية. وبالتالي تساعد مضادات الأكسدة في الوقاية من الأمراض الجلدية المختلفة وعلاجها وإبطاء عملية شيخوخة الجلد .20 يرجع استخدام فيتامين ج في الصناعات بشكل أساسي إلى خصائصه المضادة للأكسدة ، والتي تنتج عنفيتامين سيقدرة الجزيء على تحييد جذور الأكسجين الحرة ، من خلال عملية تسمى المسح الجذري.أكسدة. لحل هذه المشكلة ، قمنا بتطوير Aptamin C ، وهو aptamer DNA الذي يرتبط على وجه التحديد بفيتامين C ويمنع أكسدة فيتامين C. Aptamers عبارة عن oligonucleotides أحادية الشريطة من الحمض النووي RNA أو RNA قادرة على الارتباط بشكل انتقائي بمجموعة واسعة من الجزيئات. يتم تحديد Aptamers بشكل شائع من خلال طريقة اختيار في المختبر يشار إليها باسم التطور المنهجي للروابط بواسطة الإثراء الاستثنائي أو "SELEX". حددنا أن Aptamin C يثبطأكسدةمن فيتامين ج من عدة عوامل مؤكسدة ويحافظ على نشاط مضادات الأكسدة أثناء التخزين على المدى الطويل. لتأكيد تقييم سلامة Aptamin C ، أجريت تجارب على المستوى الخلوي وطبقت مباشرة على البشر ولم يلاحظ أي سمية. ترتبط الأمراض الجلدية مثل التهاب الجلد التأتبي والصدفية وحب الشباب بالاستجابة المناعية وأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS).فيتامين سيلديه القدرة على إزالة ROS وله تأثير مضاد للالتهابات 24 يمنع Aptamin Cأكسدةمن فيتامين ج ويزيد من فعاليته من خلال الإطلاق البطيء. لذلك ، نتوقع أن يُظهر مجمع Aptamin C ‐ vitamin C تأثيرًا تآزريًا.

2|المواد والأساليب

2.1|فحص Aptamer ضد فيتامين C مع انخفاض أكسيد الجرافين

تم تنفيذ هذه الطريقة من خلال تعديل طريقة البحث السابق.فيتامين سيتم تطويرها من مكتبة ssDNA عشوائية تتكون من حوالي 1X1018 متواليات مختلفة. بالنسبة لمكتبة ssDNA ، استخدمنا تسلسلًا مخصصًا بحجم 60mer ويحتوي على 30 تسلسل نيوكليوتيد تم إنشاؤه عشوائيًا وموقع تمهيدي للتضخيم (5′ ATGCGGATCCCGCGC‐ (N) 30 GCGCGAAGCTTGCGC ‐ 3). أجرينا ما مجموعه خمس جولات أثناء تغيير الحالة التجريبية لتحديد تسلسل أكثر تحديدًا. كان الحجم الإجمالي للتفاعل 200 ميكرولتر. حوالي 20 ميكرولتر من 10 × عازلة ملزمة (أضاف 10 × PBS 10 مليمول / لتر MgCl) ، و 80 ميكرولتر من rGO (5 مجم / مل ، مخفف في الماء) ، و 200 بيكومول من مكتبة ssDNA (20 ميكرولتر من 100 ميكرولتر / لتر مخزون ) تم إضافتها وتقديمها من dH2O إلى 200 ميكرولتر. استمر التفاعل لمدة 30 دقيقة لربط مكتبة ssDNA بـ rGO ، وبعد ذلك ، تم طرد الخليط عند 20 000 جم لمدة 20 دقيقة للتخلص من المادة الطافية. تم غسل بيليه rGO مرة واحدة مع 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت للربط وهو نفس تركيز حالة الربط المستهدفة لكل جولة. لاستخلاص المرشحين ، 200 نانومول منفيتامين سيتم تخفيفه في 2 0 0 ميكرولتر من المخزن المؤقت للربط تمت إضافته إلى حبيبات rGO ، وتم إجراء خطوة الشطف لمدة ساعة واحدة. تم تقسيم ssDNA المزال عن طريق الطرد المركزي وتم إجراؤه عند 20 000 جم لمدة 20 دقيقة وتضخيمه. فعلنا ترسيب EtOH لإزالة الشوائب باستثناء ssDNA قبل التضخيم. لقد فعلنا PCR غير المتماثل للحصول على ssDNA المضخم. كانت نسبة إعادة توجيه التمهيدي إلى التمهيدي العكسي لـ PCR غير المتماثل 10: 1. لقد أجرينا رحلانًا كهربائيًا على هلام agarose بنسبة 2.5 بالمائة لتأكيد منتج PCR ببضعة ميكرولترات منه. لا يمكن أن ينتج PCR غير المتماثل ssDNA فقط. لذلك ، قمنا بعمل طريقة السحق والنقع لعزل مرشحي ssDNA. بالنسبة لهذه الطريقة ، أجرينا رحلانًا كهربائيًا على هلام أصلي من البولي أكريلاميد بنسبة 12 بالمائة وصبغنا الجل ببروميد الإيثيديوم (EtBr). لفصل الحمض النووي المزدوج الذي تقطعت به السبل (dsDNA) و ssDNA ، تم قطع جزء الجل الملون بواسطة ssDNA وسحقه واستخراجه مع محلول سحق ونقع (500 مليمول / لتر NH4OAc ، 0.1 بالمائة SDS ، 0.1 مليمول / لتر EDTA) بين عشية وضحاها. تم فصل الهلام المسحوق بالطرد المركزي. يتم تركيز وتنقية المادة الطافية التي تحتوي على ssDNA عن طريق القيام بترسيب EtOH. تم جمع ssDNA المجفف مع dH2O المعقم وتم استخدامه للجولة التالية كمكتبة.

مكونات طبيعيةcistanche الأمازون

2.2|تجربة قياس مسعر المعايرة الحرارية (ITC)

تم إجراء تجربة قياس درجة حرارة المعايرة الحرارية باستخدام نظام VP ITC (MicroCal Inc نورثامبتون) عند 25 درجة في محلول ملحي فوسفاتي مكون من 1 مليمول / لتر كلوريد المغنيسيوم (الرقم الهيدروجيني 7.4). قبل كل تجربة معايرة ، استخدم Aptamin C 2 مل وفيتامين سيتم تفريغ 6 0 0 عينات µL لمدة 3 0 دقائق في الفراغ ، بدون تقليب ، عند درجة حرارة أقل ببضع درجات من درجة حرارة التجربة. قمنا بتحضير 0.2 مليمول / لتر من فيتامين ج الذي تم حقنه 25 مرة في 2 ميكرولتر في خلية عينة 1.8 مل تحتوي على Aptamin C بتركيز 0.02 مليمول / لتر. تم تركيب البيانات على متساوي حرارة ربط موقع واحد باستخدام البرنامج الأصلي لـ ITC v.5.0 (MicroCal Inc).

2.3|مقايسات الصفيحة الدقيقة القائمة على الإسفار لأكسدة فيتامين سي

أكسدةمنفيتامين سيتم قياسه عن طريق الكشف عن المنتج المؤكسد dehydroascorbate (DHA) باستخدام نسخة معدلة من الطريقة التي وصفها Vislisel وآخرون. 7 في هذه الطريقة ، يتم اكتشاف DHA عن طريق التفاعل مع o‐ phenylenediamine (OPDA) لتشكيل منتج التكثيف الفلوري 3‐ ( ثنائي هيدروكسي إيثيل) فورو [3،4 ‐ ب] كينوكسالين ‐ 1 واحد. تم إجراء الفحص على النحو التالي في لوحات بئر أسود 384 (Greiner Bio One). تم إذابة Aptamers أولاً في محلول ملحي مخزّن من الفوسفات ، pH 7.2 ، يحتوي على 1 ملي مولار MgCl ، بتركيز 200 ميكرولتر / لتر ثم يتم طيه بالتسخين إلى 95 درجة ويترك ليبرد ببطء إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. تم بعد ذلك تخفيف الأبتاميرات المطوية 1: 1 (ت: ت) في محلول طازج 5 مليمول / لترفيتامين سيفي المخزن المؤقت للمقايسة [5 0 مليمول / لتر أسيتات الصوديوم ، 1 بالمائة (وزن / حجم) BSA ، 0.05 بالمائة (حجم / حجم) توين 20 ، 1 ملي مولار MgCl2 (سيغما ، جميع المكونات) معدلة على الرقم الهيدروجيني 5.5] ، و تم تحضين الخليط لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة للسماح للأبتاميرات بالارتباط قبل إضافة المؤكسد. تمت إضافة المؤكسدات بعد ذلك إلى محاليل فيتامين C / aptamer بتركيزات (EM) H2O2 (Sigma). تم تخفيف المؤكسدات مسبقًا لتركيزات عملها في محلول الفحص. تم تحضين العينات بعد ذلك في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق قبل إضافة OPDA (Sigma) بتركيز 5.5 مليمول / لتر في محلول الفحص. مباشرة بعد إضافة OPDA ، تم تحديد مضان العينات عند 425 نانومتر باستخدام قارئ لوحة SpectraMax® i3X (الأجهزة الجزيئية) مع الإثارة عند 345 نانومتر ، على مدار 45 دقيقة مع القياسات التي أجريت كل 60 ثانية. تم لف جميع العينات والأوعية المحتوية على الكاشف في رقائق معدنية لحمايتها من الضوء أثناء جميع الحضانات التي أجريت لفحوصات التألق.

2.4|قياس تقليل فيتامين C باستخدام DCPIP (2،6 ‐ Dichlorophenolindophenol)

لتحديد الحد منفيتامين سي، أجرينا التجارب باستخدام تفاعل DCPIP. يتفاعل فيتامين سي مع DCPIP ، ويغير اللون من الأزرق إلى عديم اللون. تمت معالجة فيتامين ج المحضر بنسبة 5 في المائة من Aptamin CTM ، وتم تحضين فيتامين C غير المعالج في درجة حرارة الغرفة لمدة 8 أسابيع. تم قياس العينة بعد 2 و 4 و 8 أسابيع. تمت إضافة حوالي 2 مل من DCPIP إلى الدورق المخروطي باستخدام ماصة ، وأضيف فيتامين C غير المعالج حتى يصبح المحلول عديم اللون. كميةفيتامين سيتم قياسه وتكراره مع عينات أخرى. تم حساب درجة التخفيض لكل عينة حسب هذه البيانات.

2.5|دراسة في المختبر للتأثير المضاد للتجاعيد في الخلايا الليفية الجلدية البشرية

لتقييم قابلية بقاء الخلايا في الخلايا الليفية الجلدية البشرية ، عولجت الخلايا بتركيزات نهائية مختلفة من Aptamin C باستخدامفيتامين سي(Aptamin C ug plus vitamin C ug / ml) {{0}}. 0 1 plus 0. 5 ug / mL، 0.1 plus 5 ug / ml، 0.5 plus 25 ug / مل ، 1 زائد 50 ميكروغرام / مل ، و 2 زائد 100 ميكروغرام / مل. وبعد ذلك ، عولجت الخلايا بتركيزات من Aptamin C مع فيتامين C للكشف عن الكولاجين داخل الخلايا ، الكولاجيناز داخل الخلايا (MMP ‐ 1) ، ونشاط الإيلاستاز.

تم اختيار الخلايا الليفية الجلدية البشرية (HDFs) على أساس "المبادئ التوجيهية لتقييم فعالية مستحضرات التجميل الوظيفية (ΙI)" من MFDS. تمت زراعة HDFs في DMEM / F 12 3: خليط واحد يحتوي على نسبة عالية من الجلوكوز مع 10 بالمائة من FBS و 1 بالمائة مضاد حيوي ‐ مضاد حيوي في جو رطب بنسبة 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية.

تم بذر HDFs (5 × 104 خلية / بئر) في 24 طبق بئر وحضنت لمدة 24 ساعة وعولجت بتركيزات مختلفة من Aptamin C معفيتامين سيوحضنت لمدة 24 ساعة. بعد 24 ساعة ، تم جمع المادة الطافية ، وتم قياس كمية البروكولاجين المحررة في الوسط عند 450 نانومتر باستخدام مجموعة ELISA من نوع Procollagen Type IC Peptide (PIP). تمت معايرة درجة إنتاج الكولاجين بمحتوى البروتين الكلي ومقارنتها بـ TGF‐ 1 كعنصر تحكم إيجابي. تم استخدام الوسائط بدون مواد الاختبار كعنصر تحكم في المذيبات.

تم بذر HDFs (5 × 104 خلية / بئر) في 24 طبق بئر وحضنت لمدة 24 ساعة وعولجت بتركيزات مختلفة من Aptamin C معفيتامين سيوحضنت لمدة 48 ساعة. بعد 48 ساعة ، تم قياس نشاط الكولاجيناز عند 450 نانومتر باستخدام MMP 1 Human ELISA Kit. تم تقييم نشاط MMP-1 من خلال محتوى البروتين الكلي ومقارنته مع TGF 1 كعنصر تحكم إيجابي. تم استخدام الوسائط بدون مواد الاختبار كعنصر تحكم في المذيبات.

تم التعبير عن جميع البيانات على أنها متوسط ​​± الانحراف المعياري وجاءت من 3 تجارب مستقلة. تم إجراء التحليل الإحصائي بواسطة عينات مستقلة اختبار t باستخدام برنامج SPSS® (IBM) عند مستوى أهمية P <>

2.6|قياس تجاعيد الجلد بنظام تحليل الصور ثلاثي الأبعاد

شاركت اثنتان وعشرون من الإناث (متوسط ​​العمر: 50.05 ± 2.94 سنة) في هذه الدراسة. تم تقييم التجاعيد الجلدية لأقدام الغراب بواسطة نظام تحليل صور ثلاثي الأبعاد في الأساس ، 4 و 8 أسابيع. تم تقييم ترطيب الجلد بطريقة السعة ، وتم تقييم مرونة الجلد بطريقة الشفط في الأساس ، 2 ، 4 ، 8 أسابيع بعد العلاج. أيضًا ، تم ملء الاستبيانات الذاتية المتعلقة بالفعالية من قبل الأشخاص في 2 و 4 و 8 أسابيع ، وتم ملء تلك المتعلقة بقابلية الاستخدام من قبل الأشخاص في 8 أسابيع بعد العلاج. تم تحليل جميع البيانات التي تم الحصول عليها إحصائيًا بواسطة برنامج SPSS®. تم تقييم معاملات التجاعيد لأقدام الغراب باستخدام PRIMOS® Premium (GFMesstechnik GmbH). يسمح هذا النظام بالتحليل الكمي لخشونة تجاعيد الجلد وعمقها ومساحتها وحجمها. تم تحليل الصورة في نفس المنطقة من حيث معاملات تجاعيد الجلد (1 ، متوسط ​​عمق التجاعيد ؛ 2 ، متوسط ​​عمق التجاعيد الأكبر ؛ 3 ، أقصى عمق أكبر تجعد ؛ 4 ، إجمالي مساحة التجاعيد ؛ 5 ، إجمالي حجم التجاعيد ؛ 6 ، إجمالي تجاعيد عامل الشكل ؛ 7 ، إجمالي طول التجاعيد ؛ 8 ، Ra ؛ 9 ، Ry ؛ و 10 ، Rz) عند خط الأساس ، 4 و 8 أسابيع بعد العلاج بواسطة Primos 5.8 E ver. برمجة.

3|النتائج

3.1|كان مطلوبًا اتباع نهج صارم لإعداد المخزن المؤقت لأداء rGO-SELEX بنجاح مع هدف غير مستقر

مكتبة ssDNA ، التي كانت مرتبطة بـ rGO عبر π ‐ تفاعلات متداخلة بين الحلقات العطرية لسطح الجرافين وقواعد الحمض النووي 26،27 و ssDNA غير المرتبط على rGO ، تم فصلها وإزالتها عن طريق الطرد المركزي. تمت إزالة ssDNA الذي تم امتصاصه على سطح rGO من خلال المعالجة بالمركب المستهدف. وفقًا لتقارير الأدبيات ، يتغير تكوين aptamer بعد الارتباط بالهدف وبإضعاف تفاعلات التراص مع π ‐ مع rGO. 28-31 تكررت هذه العملية لخمس جولات. استمرت كل جولة لاحقة بظروف عازلة أقسى وأوقات شطف أقصر. سمح لنا هذا الأداء بالحفاظ على ssDNA بخصوصية أفضل للمركبات المستهدفة.

أسفرت بيانات NGS للمكتبة المخصبة التي أنتجتها عملية rGO-SELEX عن 404071 تسلسل. اخترنا 119 تسلسلًا من هذه البيانات ، وقمنا بفرزها في 11 مجموعة بناءً على تشابه الهيكل ، واختيار التسلسلات التمثيلية لمرشحي aptamer (الشكل 1 أ).

3.2|اختيار Aptamin C

تم توقع الهياكل الثانوية لمرشحي Aptamin C باستخدام برنامج M Fold المجاني. DHA ، أكسيدفيتامين سي، من خلال تفاعله مع o ‐ فينيلين ديامين (OPDA) الذي يلعب دوره كمؤشر .34أكسدة، لفيتامين C ويمنع أكسدة منه ، فإن إشارة التألق من 3‐ (ثنائي هيدروكسي إيثيل) ‐فور‐ [3،4 ‐ ب] كينوكسالين 1 1 ، منتج التكثيف لفيتامين C و OPDA ، ستكون أقل من تلك الموجودة في لا تحكم aptamer. قطعة من كل أبتامر مرشح ممزوج بفيتامين ج والمؤكسد مع الضوابط الإيجابية ،فيتامين سيبالإضافة إلى مؤكسد وتسلسل التدافع الممزوج بفيتامين ج والمؤكسد (الشكل 1 ج). تبين أن خمسة من الأبتاميرات ، Aptamin Cb ، و Cc ، و Cf ، و Cg ، و Ck ، لها تأثيرات مضادة للأكسدة.

3.3|تثبيط أكسدة فيتامين سي بواسطة أبتامين سي

يحتوي Aptamin C على ألفة ارتباط عالية لـفيتامين سي. تم تحديد ارتباط Aptamin C مع فيتامين C باستخدام تحليل مركز التجارة الدولية. من خلال ربط iso therm ، يمكن الحصول على المحتوى الحراري (ΔH) ، والنتروبيا (ΔS) ، والقياس المتكافئ (n) لتفاعل الارتباط. تم اكتشاف ارتباط Aptamin Cb الطارد للحرارة من قياس مركز التجارة الدولية ، وتم حساب المحتوى الحراري (ΔH) على أنه 3 0 2.5 ± 3.788 ، تم حساب الانتروبيا (ΔS) على أنه 18.9 ، وتم حساب القياس المتكافئ (n) على أنه 56.7 ± {{21 }}. 426 ، وتم حساب ثوابت التفكك (Kd) على أنها 2.13uM لفيتامين C. تم اكتشاف ارتباط Aptamin Cf الطارد للحرارة من قياس ITC ، وتم حساب المحتوى الحراري (ΔH) على أنه 279.2 ± 2.992 ، تم حساب الانتروبيا (S) في الشكل 18.4 ، تم حساب قياس العناصر المتكافئة (n) على أنه 167 ± 1.15 ، وتم حساب ثوابت التفكك (Kd) على أنها 0. تم ​​الكشف عن 89 ميكرو مولار لفيتامين سي Aptamin Ck من قياس ITC ، وتم اكتشاف المحتوى الحراري (ΔH ) تم حسابه على أنه 25 0 .4 ± 3.742 ، تم حساب الانتروبيا (ΔS) على أنه 19.8 ، وتم حساب قياس العناصر المتكافئة (n) على أنه 82.2 ± 0.732 ، وتم حساب ثوابت التفكك (Kd) على أنها 0.90 ميكرو مول / لتر لـ فيتامين ج (الشكل 2 أ). تكشف قياسات مركز التجارة الدولية أن التغيير في الانتروبيا عند الارتباط بـ Aptamin C هو قوة دافعة رئيسية لـفيتامين سي. كى تمنعأكسدةمن فيتامين ج في الحالة السائلة ، تم تحضير جميع المحاليل بماء منزوع الأيونات معالج بالنيتروجين. تم التعبير عن التألق وتحليل كمي عندما يرتبط OPDA (o ‐ phenylenediamine) بـ DHA الناتج عنأكسدةتمت مقارنة وتأكيد درجة أكسدة فيتامين سي حسب تركيز الأبتامين سي (125 ، 250 ، 500 ، 1000 نانومول / لتر) بواسطة مقايسة OPDA. أظهرت النتائج أنفيتامين سيكان التحويل إلى حمض ديهيدرواسكوربيك أبطأ عندما كان تركيز الأبتامين سي أعلى. (الشكل 2 ب). تثبت هذه البيانات أن Aptamin C هو مثبط يعتمد على الجرعة لأكسدة فيتامين سي.

لقد أجرينا تجارب لتحديد ما إذا كان Aptamin C يمكنه منعأكسدةمن فيتامين سي على مدى فترة طويلة من الزمن. تمت معالجة Aptamin C بشكل مشتركفيتامين سي، وتم تعريض فيتامين ج غير المعالج للضوء وتركه يقف في درجة حرارة الغرفة لمدة 8 أسابيع. نتيجة لذلك ، عندما يُترك فيتامين سي غير المعالج بمفرده ، انخفضت درجة الانخفاض إلى أقل من النصف في أسبوعين ، وتم أكسدة جميعها تقريبًا بعد 4 أسابيع. في وجود Aptamin C ، تم تقليل فيتامين C إلى حوالي نصف ما يصل إلى 8 أسابيع (الشكل 2C). يشير هذا إلى أن أبتامين سي يمنع أكسدة فيتامين سي على مدى فترة طويلة من الزمن.

cistanche كمال الاجسام

3.4|تحليل نشاط الكولاجين داخل الخلايا (MMP ‐ 1) والكولاجين

عند تحليل نشاط كولاجيناز ، تم تقليل إنتاج البروتين المعدني المصفوف 1 (MMP 1) بشكل كبير بطريقة تعتمد على الجرعة ، بنسبة 7. 0 6 في المائة و 9.29 في المائة و 31.81 في المائة بتركيزات {{1 { {12}}}}. 0 1 زائد 0. 5 ميكروغرام / مل ، 0. 1 زائد 5 ميكروغرام / مل ، و 0. 5 زائد 25 ميكروغرام / مل مل ، على التوالي (الشكل 3 أ). عند تحليل تخليق الكولاجين ، تمت زيادة نوع procollagen Ι carboxy ‐ الببتيد الطرفي (PIP) بشكل كبير بطريقة تعتمد على الجرعة ، مع زيادة قدرها 25. {2 0} في المائة عند 0.01 زائد 0.5 ميكروغرام / مل ، 41.99 بالمائة عند 0.1 زائد 5 ميكروغرام / مل ، و 71.18 بالمائة عند 0.5 زائد 25 ميكروغرام / مل (الشكل 3 ب).

3.5|دراسة سريرية لتأثيرات تحسين تجاعيد الجلد على جلد الإنسان

تم إجراء التحليل الإحصائي لمعايير التجاعيد بواسطة نظام تحليل صور ثلاثي الأبعاد ، لتقييم آثار تحسين تجاعيد الجلد لمنتج الاختبار على جلد الإنسان. مقارنة بالمجموعة الضابطة ، انخفض معامل "متوسط ​​عمق التجاعيد" بنسبة 4.77 في المائة في 4 أسابيع و 4.25 في المائة في 8 أسابيع ، وانخفض مؤشر "متوسط ​​العمق الأكبر للتجاعيد" بنسبة 3.37 في المائة في 4 أسابيع و 4.53 في المائة في 8 أسابيع ، " الحد الأقصى لعمق أكبر معامل التجعد "انخفض بنسبة 4.36 بالمائة في 4 أسابيع و 7.19 بالمائة في 8 أسابيع ، وانخفض معامل" الطول الكلي للتجاعيد "بنسبة 1.61 بالمائة في 4 أسابيع و 2.67 بالمائة في 8 أسابيع ، وانخفض معامل" Ra "بنسبة 4.22 بالمائة في 4 أسابيع و 3.90 في المائة في 8 أسابيع ، انخفض معامل "Ry" بنسبة 2.66 في المائة في 4 أسابيع و 7.11 في المائة في 8 أسابيع ، وانخفض معامل "Rz" بنسبة 3.69 في المائة في 4 أسابيع و 6.22 في المائة في 8 أسابيع ، وكان الانخفاض 3.69 في المئة ‐7.11 في المئة (الشكل 4).

4|استنتاج

فيتامين سيهو جزيء مهم تجاريًا ولكنه غير مستقر ، لذا فإن تحسين استقراره أمر يهم قطاعات السوق المختلفة. يوضح عملنا أن Aptamin C ، aptamers DNA ، يحتمل أن يطيل العمر الافتراضي ويزيد من فاعلية هذه المنتجات عن طريق تأخيرفيتامين سي أكسدةفي حل. أظهرنا الفعالية السريرية لمركب Aptamin C في تحسين التجاعيد وترطيب البشرة. يمكن أن يساعد مجمع Aptamin C أيضًا على إراحة البشرة القاسية.

تحسين تبييض البشرة