التأثير المضاد للميلانوجين للمستخلص الإيثانولي للذرة الرفيعة ثنائي اللون على تكوين الميلان المستحث بـ IBMX في خلايا سرطان الجلد B16 / F10
Mar 22, 2022
جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com
هي جو هان وسيون كيونغ بارك وجين يونغ كانغ وجونغ مين كيم وسول كي يو وهو جين هيو
الملخص:لتقييم الاحتمالية كعامل مبيض للبشرةالذرة الرفيعة ثنائية اللون(S. bicolor) ، لهامضادات الأكسدةالنشاط ، والتأثير المضاد لتولد الميلانين على 3- أيزوبوتيل -1- ميثيل زانثين (IBMX) الناجم عنتكون الميلانينفي B16 / F10 تم فحص خلايا سرطان الجلد. أظهرت نتيجة إجمالي محتويات الفينول (TPC) أن 60٪ من مستخلص الإيثانولS. ثنائي اللون(ESB) يحتوي على أعلى محتويات من مستخلصات الإيثانول الأخرى.مضادات الأكسدةتم تقييم النشاط باستخدام 2،2'-azino-bis - (3- ethylbenzothiazolin -6- حامض السلفونيك) Diammoniumsalt (ABTS) / 1 ، 1- diphenyl -2- picryl-hydrazyl (DPPH) أنشطة الكسح الجذري وتأثير تثبيط malondialdehyde (MDA). أظهرت هذه النتائج أن ESB له أهمية كبيرةمضادات الأكسدةأنشطة. تم أيضًا تقييم التأثير المثبط ضد التيروزيناز باستخدام L-tyrosine (قيمة IC=89. 25 ميكروغرام / مل) و 3 ، 4- ثنائي هيدروكسي- L- فينيل ألانين (L-DOPA) كركائز. بالإضافة إلى ذلك ، أدى علاج ESB بشكل فعال إلى إعاقة إنتاج الميلانين في خلايا سرطان الجلد B16 / F10 التي يسببها IBMX. لتأكيد آلية التأثير المضاد لتكوين الميلانين لـ ESB ، قمنا بفحص البروتينات المرتبطة بتكوين الميلانين. خفضت ESB اللوائحتكون الميلانينعن طريق تقليل التعبير عن عامل النسخ المرتبط بالميكروفيلم (MITF) والتيروزيناز والبروتين المرتبط بالتيروزيناز (TRP) -1. أخيرًا ، تم تحليل 9- حمض الهيدروكسيوكتاديكاديونويك (9- HODE) ، 1 ، 3- O-dicaffeoylglycerol و tricin كمركبات رئيسية لـ ESB باستخدام الفصل الكروماتوجرافي السائل ذي الأداء الفائق-فصل الحركة الأيونية-الرباعي وقت الرحلة / مطياف الكتلة الترادفية (UPLC-IMS-QTOF / MS2). تشير هذه النتائج إلى أن ESB قد يكون لها القدرة الفسيولوجية لاستخدامها كمواد تبييض للبشرة.
الكلمات الدالة:مضاد-تكون الميلانين؛ خلية سرطان الجلد B16 / F10 ؛ حمض هيدروكسيوكتاديكاديونويكالسرغومبيكولور؛ 3- إيزوبوتيل -1- ميثيل زانثين
يمنع Cistanche تكوين الميلانين.
1 المقدمة
يتم إنتاج الميلانين من خلال عملية تسمىتكون الميلانينداخل الخلايا الميلانينية داخل الخلايا في الخلايا الصباغية ، ويحدد إنتاج وتوزيع الميلانين الجلد والعينين ولون الشعر. بالإضافة إلى ذلك ، يلعب الميلانين دورًا حيويًا في حماية الجلد من الجزيئات والمنبهات المختلفة مثل الأشعة فوق البنفسجية وأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) وهرمون تحفيز الخلايا الصباغية (-MSH) وعوامل رفع الأدينوزين أحادي الفوسفات الحلقية (cAMP) بما في ذلك فورسكولين و آي بي إم إكس [1]. على وجه الخصوص ، تعمل الأشعة فوق البنفسجية ، بشكل مباشر وغير مباشر ، على إتلاف خلايا الجلد عبر أجيال ROS مثل جذور الهيدروكسيل ، وأنيونات الأكسيد الفائق ، وبيروكسيد الهيدروجين [2]. يتسبب ROS الذي تم إنشاؤه في تحطيم الحمض النووي أحادي ومزدوج الجديلة ومهاجمة الجزيئات الهيكلية الخلوية المهمة مثل البروتينات والدهون [2]. وهكذا ، الميلانين ومضادات الأكسدةتحافظ الإنزيمات مثل الجلوتاثيون بيروكسيديز ، وسوبروكسيد ديسموتاز ، والكتلاز على مستوى ثابت عن طريق إزالة ROS المنتج. ومع ذلك ، فإن إنتاج ROS المفرط نتيجة لعوامل مختلفة ينشط تكون الميلانين في الجلد ، ويؤدي تراكم الميلانين غير الطبيعي إلى تأثيرات فرط تصبغ سلبية ، مما يتسبب في تقدم العمر أو بقع الكبد ، والبقع ، والنمش [3،4]. في الوقت الحالي ، يتم استخدام المركبات الطبيعية مثل حمض الكوجيك ، والهيدروكينون ، والأربوتين ، وحمض الأسكوربيك ، والتي تُعرف باسم مثبطات تخليق الميلانين ، كمضافات لتبييض البشرة. ومع ذلك ، فإن هذه المكونات ليس لها اختراق ضعيف في الجلد فحسب ، بل تسبب أيضًا السمية الخلوية والالتهاب مع تناول طويل الأمد [5]. في هذا الصدد ، من الضروري تطوير عامل تبييض فعال وغير مهيج لعلاج فرط تصبغ جلد الإنسان ، وكذلك دراسة مواد الموارد الطبيعية لهذا الغرض.
عادة ما تولد خلايا الجلد البشرية الميلانين كرد فعل للحماية من الضوء. تشكل الميلانين عملية معقدة يتم تنظيمها عبر مجموعة متنوعة من مسارات الإشارات ، وتنظم جميع الإشارات في النهاية MITF. نظرًا لأن MITF المنشط يعزز تعبير عائلة جينات التيروزيناز (التيروزيناز و TRPs) ،تكون الميلانينيبدأ بجدية [6]. بشكل عام ، تتمثل الخطوة الأولى في تكوين الميلانين في أن التيروزيناز يحفز أكسدة L-tyrosine إلى 3 ، 4- ثنائي هيدروكسي-إل-فينيل ألانين (L-DOPA) ، ثم يؤكسد L-DOPA في DOPA كينون. ثم تحول TRP -2 كروم DOPA إلى 5 ، 6- ثنائي هيدروكسي إندول -2- حمض الكربوكسيل (DHICA) أو 5 ، 6- ثنائي هيدروكسي إندول (DHI). أخيرًا ، يتم أكسدة DHICA و DHI بواسطة TRP -1 ، مما يؤدي في النهاية إلى إنتاج الميلانين [6].
تحفز مادة آي بي إم إكس وميثيل زانتين أخرى تكون الميلانين عن طريق تثبيط الفوسفوديستيراز وبالتالي زيادة مستويات cAMP [7]. تم تنشيط cAMP بواسطة فسفوريلات آي بي إم إكس كيناز منظم بإشارة خارج الخلية (ERK) وفوسفوينوزيتيد 3- كينازات / بروتين كيناز ب (PI3K / Akt) مسارات إشارات ويؤدي في النهاية إلى تنشيط MITF في عمليات تكوين الميلانين [7]. لذلك ، يمكن اعتبار تقليل تنظيم هذه البروتينات عاملاً مهمًا للتأثير المضاد للتبييض.
الذرة الرفيعة ثنائية اللون(S. bicolor) ، الذي ينتمي إلى عائلة Poaceae ، يعتبر محصولًا مهمًا في المناطق الاستوائية ، بما في ذلك إفريقيا وأمريكا الوسطى والمناطق القاحلة ، وهو رابع أهم محصول حبوب في العالم بعد القمح والأرز والذرة. ]. أظهرت الدراسات الحديثة أن S. bicoloris مفيدة للبشر لأنها تحتوي على مواد كيميائية نباتية مثل المركبات الفينولية والعفص والأنثوسيانين [9]. اكتسبت هذه المواد الكيميائية النباتية اهتمامًا متزايدًا بسببمضادات الأكسدة، مضاد للسمنة ، مضاد للسكري ، ومضاد للالتهابات [10-14]. في حين أن هناك العديد من النتائج البحثية ، لم يتم بعد إجراء دراسات حول تأثير تبييض الجلد لعقار S. bicolor. لذلك ، هدفت الدراسة الحالية إلى التحقق من النشاط المضاد للأكسدة والتأثيرات المضادة لتكوين الميلانينS. ثنائي اللونوفحص تأثيرها على IBMXتكون الميلانينفي خلايا سرطان الجلد B16 / F10.
2. المواد والأساليب
2.1. مواد كيميائية
كاشف Folin – Ciocalteu ، L-DOPA ، L-tyrosine ، L-ascorbic acid ، arbutin ، acarbose ، dimethylsulfoxide (DMSO) ، ألبومين المصل البقري ، جلوكوزيداز ، تيروسيناز الفطر ، ألبومين مصل البقر ، 3- (4، تم شراء {6}} ثنائي ميثيل -2- ثيازوليل) -2 و 5- بروميد ثنائي فينيل تيترازوليوم (MTT) و IBMX من شركة سيجما ألدريتش للكيماويات (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء MITF (bsm -51339 M) و tyrosinase (bs -0819 R) من Bioss (بكين ، الصين). تم شراء TRP -1 (sc -166857) و -actin (sc -69879) من Santa Cruz Biotechnology (دالاس ، تكساس ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الحصول على الأجسام المضادة الثانوية (مضادات الأرانب والفئران) من Cell Signaling Technology (Danvers ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية).
2.2. إعداد عينة
S. ثنائي اللون(2 0 جم) بتركيز إيثانول مختلف (0 ، 20 ، 40 ، 60 ، 80 و 95 بالمائة ؛ 1 لتر) عند 40 درجة لمدة ساعتين باستخدام مكثف راجع. تمت تصفية المستخلصات باستخدام ورق الترشيح (WhatmanInternational Limited، Kent، UK) ، وتم تركيزها باستخدام مبخر فراغ (N -1000؛ EYELA Co.، Tokyo، Japan). بعد أن تم تجميد المستخلصات بالتجميد باستخدام مجفف التجميد بالتفريغ (Il Shin Lab Co.، Ltd. ، Yangju ، كوريا) ، تم تخزين المستخلصات المجففة في درجة -20 حتى استخدامها.
2.3 في نشاط مضادات الأكسدة المختبرية
2.3.1. إجمالي محتويات الفينول (TPC)
تم فحص إجمالي محتويات الفينول بناءً على مبدأ اختزال كاشف فولين-سيوكالتيو إلى منتج تفاعل أزرق تحت ظروف قلوية. عينة (1 مل) ممزوجة بكاشف فولين- سيوكالتيو و 7٪ كربونات الصوديوم. تم تنشيط الخليط لمدة ساعتين ، ثم تم قياس الامتصاصية عند 760 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي (UV -1201 ؛ شيمادزو ، كيوتو ، اليابان). تم حساب TPC من المنحنى القياسي لحمض الغال وتم التعبير عن النتائج كـmg GAE g 1.
2.3.2. نشاط الكسح الجذري
تم إنتاج محلول الكاتيون الجذري ABTS عن طريق خلط 2.45 ملي مولار من بيرسلفات البوتاسيوم و 7 ملي مولار بت مع 1 0 {{1 {18}}} ملي مولار من فوسفات البوتاسيوم (pH 7.4) يحتوي على 15 0 ملي مولار والسماح تعمل لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة. تم بعد ذلك تخفيف محلول ABTS بالماء المقطر للحصول على امتصاص 0.700 ± 0.020 عند 734 نانومتر. تم السماح للعينة بالتفاعل مع 980 ميكرولتر من محلول ABTS لمدة 10 دقائق عند 37 درجة ثم تم قياس الامتصاص عند 734 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي (الأشعة فوق البنفسجية -1201 ؛ شيمادزو ، كيوتو ، اليابان). إذابة 0.1 ملي مولار DPPH في 80 بالمائة من الميثانول. تم تخفيف محلول DPPH لامتصاص 1. 000 ± 0.020 عند 517 نانومتر. تم خلط 50 ميكرولتر من العينة مع 1.45 مل من محلول DPPH وتفاعلت لمدة 30 دقيقة في الظلام. بعد التفاعل ، تم تحديد الخليط عند 517 نانومتر.
2.3.3. التأثير المثبط على بيروكسيد الدهون
لقياس التأثير المثبط على بيروكسيد الدهون في أنسجة المخ ، تم استخدام طريقة المادة التفاعلية لحمض الثيوباربيتوريك (TBA). تم تجانس أنسجة المخ في 2 0 ملي مولتر Tris-HCl عازلة (pH 7.4) وطردها عند 6000 × جم لمدة 20 دقيقة. تمت إضافة المادة الطافية إلى 0.1 ملي مولار من حمض الأسكوربيك و 10 ميكرومتر من كبريتات الحديدوز 37 درجة لمدة ساعة حضانة. بعد ذلك ، تمت إضافة 30 بالمائة من حمض ثلاثي كلورو أسيتيك و 1 بالمائة TBA إلى الخليط ، والذي تم تحضينه بعد ذلك في حمام مائي عند 80 درجة لمدة 20 دقيقة. بعد ذلك ، تم قياس TBA-MDAcomplex باستخدام مقياس الطيف الضوئي (UV -1201 ؛ شيمادزو ، كيوتو ، اليابان) عند 532 نانومتر.
2.4 التأثير المثبط للتيروزيناز
تم تحديد التأثير المثبط للتيروزيناز باستخدام L-tyrosine كركيزة. تمت إضافة عينة إلى 96- صفيحة البئر وخلطها مع 0. 1 مولار من محلول فوسفات الصوديوم والتيروزيناز و 0. ركيزة 1 ملي مل-تيروزين لتتفاعل عند 37 درجة. بعد الحضانة ، تم قياس نشاط الإنزيم باستخدام microplatereader (EPOCH2 ؛ BioTek ، Winooski ، VT ، الولايات المتحدة الأمريكية) عند 490 نانومتر. أيضًا ، تم استخدام L-DOPA كعنصر أساسي لقياس النشاط المثبط للتيروزيناز. تمت إضافة 67 ملي محلول فوسفات الصوديوم ، التيروزيناز و 10 ملي مولار-دوبا الركيزة إلى العينة للتفاعل عند 37 درجة لمدة 10 دقائق. تم قياس نشاط التيروزيناز عند 415 نانومتر.
يمنع Cistanche تكوين الميلانين
2.5 - التأثير المثبط للجلوكوزيداز
تم قياس التأثير المثبط للجلوكوزيداز بخلط 0 1 مولار من فوسفاتيبوفير الصوديوم و -جلوكوزيداز عند 37 درجة لمدة 10 دقائق. بعد التنشيط ، تمت إضافة الخليط إلى 5 ملي مولار 4- نيتروفينيل - - D-glucopyranoside في المخزن المؤقت عند 37 درجة لمدة 5 دقائق ، ثم تم قياس الامتصاصية عند 405 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة (EPOCH2 ؛ BioTek ، Winooski ، VT ، الولايات المتحدة الأمريكية).
2.6. فحص جدوى الخلية
تم تقدير السمية الخلوية للعينة باستخدام مقايسة MTT. تمت زراعة خلايا سرطان الجلد B16 / F10 بمعدل 1 × 104 خلية / بئر في لوحة بئر 96- لمدة 24 ساعة. بعد ذلك تمت معالجة العينات بتركيزات 1 و 2 و 5 و 10 ميكروغرام / مل. عولجت العينات لمدة 48 ساعة ، وبعدها عولجت الخلايا بـ 10 ميكروغرام / مل من محلول مخزون MTT لمدة 3 ساعات. أخيرًا ، تمت إزالة الوسائط ، وتمت إضافة DMSO لإذابة الفورمازان. تم قياس كمية الفورمازان باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة (EPOCH2 ؛ BioTek ، Winooski ، VT ، الولايات المتحدة الأمريكية) عند 570 نانومتر (الطول الموجي للإثارة) و 655 نانومتر (الطول الموجي للانبعاث).
2.7. قياس محتويات الخلايا من الميلانين
لقياس كمية الميلانين ، تمت زراعة خلايا سرطان الجلد B16 / F10 في 24- صفيحة بئر بكثافة 4 × 104 خلايا / أعلى بكثير لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، تمت معالجة الخلايا باستخدام 100 ملي مولار من IBMX و ESB للتحكم التوافقي (أربوتين) لمدة 48 ساعة إضافية. بعد العلاج ، تم غسل الخلايا وحصادها باستخدام محلول ملحي من الفوسفات (PBS). تم بعد ذلك الطرد المركزي للخلايا التي تم حصادها عند 16 ، 000 × جم لمدة 10 دقائق ، وتم إذابة الحبيبات التي تم الحصول عليها باستخدام هيدروكسيد الصوديوم 1 نيتروجين يحتوي على 10 بالمائة DMSO عند 90 درجة لمدة 20 دقيقة. تم قياس محتويات الميلانين عند 490 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة (EPOCH2 ؛ BioTek ، Winooski ، VT ، الولايات المتحدة الأمريكية).
2.8. تحليل لطخة غربية
تم غسل خلايا سرطان الجلد B16 / F1 0 المُعالجة مسبقًا باستخدام برنامج تلفزيوني وتم تحليلها باستخدام محلول RIPA يحتوي على مثبطات الأنزيم البروتيني بنسبة 1 بالمائة على الجليد. تم تحديد تركيزات البروتين بواسطة اختبار برادفورد للبروتين ، وتم تغيير طبيعة البروتينات المتساوية باستخدام محلول لاملي لمدة 10 دقائق عند 95 درجة. تم فصل البروتينات المحولة الصفية بنسبة 10 في المائة من رحلان هلام دوديسيل كبريتات - بولي أكريلاميد الصوديوم (SDS-PAGE) ثم تم نقلها إلى أغشية بولي فينيلدين ديفلورايد (PVDF) (ميليبور ، بيليريكا ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية). بعد ذلك ، تم حظر الأغشية باستخدام 5 في المائة من الحليب الخالي من الدسم في محلول ملحي من نوع Tris مع 0.1 في المائة من Tween20 (TBST) لمدة ساعة واحدة ، ثم تفاعلت مع الأجسام المضادة الأولية طوال الليل عند 4 درجات. تم تفاعل الأغشية مع الأجسام المضادة الثانوية لمدة ساعة واحدة وتم تصور المجمعات المناعية باستخدام كاشف التلألؤ الكيميائي المعزز (Bionote ، Hwaseong ، كوريا). تم الكشف عن صور الفرقة وتحليلها بواسطة Chemi-doc (iBright Imager ، Thermo-Fisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية).
2.9 تحليل UPLC-IMS-QTOF / MS2
المركبات الرئيسية في مستخلصات الإيثانول بنسبة 60 بالمائةS. ثنائي اللونتم تحليلها بواسطة UPLC-IMS QTOF / MS2 (Vion، Waters Corp.، Milford، MA، USA). تم إجراء الفصل الكروماتوغرافي باستخدام عمود Acquity UPLC BEH C18 (2.1 × 1 0 {{1 {13}}} مم ، حجم جسيم 1.7 ميكرومتر ؛ Waters Corp.) بمعدل تدفق 0.35 مل / دقيقة. تتكون الأطوار المتنقلة من المذيب أ (0.1 بالمائة حمض الفورميك في الماء المقطر) وب (أسيتونتريل) ، وتضمنت ظروف التحليل التدرج الزمني التالي: 1 بالمائة ب عند 0-1 دقيقة ، 1 - 100 بالمائة ب عند 1-7 دقائق ، 100 في المائة ب في 7-8 دقائق ، 100-1 في المائة ب في 8-8.2 دقيقة ، 1 في المائة ب في 8.2-10 دقائق. تم إجراء قياس الطيف الكتلي في الوضع السلبي للتأين بالرش الكهربائي (ESI) في ظل الظروف التالية: درجة حرارة المصدر ، 100 درجة مئوية ؛ درجة حرارة خط الذوبان ، 400 درجة مئوية ؛ طاقة تصادم المنحدرات ، 10-30 فولت ؛ الجهد الشعري ، 2.5 كيلو فولت. تم الكشف عن المركبات الفينولية عن طريق مسح كامل يتراوح من m / z 50 إلى 1500.
2.10. تحليل احصائي
تم تقديم جميع النتائج كوسيلة ± الانحراف المعياري (SD). تم تحديد الفرق الإحصائي بين المجموعات من خلال تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) باستخدام اختبار Duncan الجديد متعدد النطاق (p <0. 05)="" مع="" إصدار="" برنامج="" sas="" 9.4="" (معهد="" sas="" ،="" كاري="" ،="" نورث="" كارولاينا="" ،="" الولايات="" المتحدة="" الأمريكية)="" والعلاقة="" المتبادلة="">مضادات الأكسدةالتأثيرات (نشاط الكسح الجذري ABTS / DPPH والتأثير المثبط لـ MDA) والتأثير المثبط لـتكون الميلانينتم تقييم الانزيمات الوسيطة (التيروزيناز و -جلوكوزيداز) تحليل ارتباط بيرسون.
3. النتائج
3.1. إجمالي محتويات الفينول
للمقارنةمضادات الأكسدةنشاط كل مستخلص إيثانولي منS. ثنائي اللون، تم فحص TPC. كما هو موضح في الشكل 1 ، كانت TPC مختلفة بين المستخلصات الإيثانولية ؛ كان مستخلص الإيثانول بنسبة 6 0 بالمائة (15 0. 08 ± 1.13 مجم GAE / جم) أعلى بكثير من المستخلصات الأخرى (0 بالمائة ؛ 70.83 ± 1.18 ، 20 بالمائة ؛ 100.42 ± 0.72 ، 40 بالمائة ؛ 114.67 ± 1.46 ، 80 بالمائة ؛ 118.33 ± 3.17 و 95 بالمائة ؛ 73.67 ± 1.46 مجم GAE / جم). لذلك ، تم استخدام مستخلص الإيثانول بنسبة 60 في المائة لإجراء مزيد من التحليلات التجريبية.
3.2 نشاط الكسح الجذري
المضادات الأكسدةالنشاط من 60 في المئة من استخراج الايثانول منS. ثنائي اللونتم قياس (ESB) باستخدام مقايسة ABTS / DPPH ومقايسة MDA ، وتم عرض النتائج في الشكل 2. تم عرض نشاط الكسح الجذري ABTS لـ ESB بنسبة 97.98 بالمائة بتركيز 1000 ميكروغرام / مل ، وفيتامين ج (99.82 بالمائة) ، والذي يستخدم كعنصر تحكم إيجابي وكان له أيضًا نشاط تنظيف جذري مماثل في نفس التركيز (الشكل 2 أ). وأظهر ESB تأثير تثبيط بنسبة 50 في المائة (قيمة IC50) لجذر ABTS عند تركيز 409.71 ميكروغرام / مل. كما هو مبين في الشكل 2 ب ، أظهر نشاط الكسح الجذري لـ DPPH لـ ESB 79.44 في المائة بتركيز 1000 ميكروغرام / مل ، وتمت الإشارة إلى قيمة IC عند 612.53 ميكروغرام / مل. أظهر التأثير المثبط لإنتاج MDA لـ ESB تأثيرًا مثبطًا بنسبة 89.54 في المائة عند تركيز 50 ميكروغرام / مل وأظهر تأثيرًا مثبطًا أعلى من الكاتشين (71.03 في المائة) ، وهو عنصر تحكم إيجابي ، في نفس التركيز (الشكل 2 ج). بالإضافة إلى ذلك ، لوحظت قيمة IC50 لـ MDA عند تركيزات 16.56 ميكروغرام / مل من ESB.
3.3 التأثير المثبط للإنزيمات التي تتوسط تكوين الميلانين
التأثير المثبط لـتكون الميلانينتم تقييم الإنزيمات الوسيطة باستخدام التيروزيناز و -جلوكوزيداز (الشكل 3). لقياس النشاط المثبط للتيروزيناز ضد تخليق الميلانين ، أجريت التجارب باستخدام L-tyrosine و L-DOPA كركيزة تحت ظروف خالية من الخلايا ، ونتيجة لذلك ، كانت قيمة IC5 0 89.25 ميكروغرام / مل عند L - تم استخدام التيروزين كركيزة (الشكل 3 أ) ، لكن L-DOPA لم يستطع ملاحظة أكثر من 5 0 في المائة من التأثير المثبط (الشكل 3 ب). في هذا الوقت ، كانت قيمة IC5 0 للتحكم الإيجابي (أربوتين) لـ L-tyrosine كانت 74.35 ميكروغرام / مل ، والتي كانت أعلى من ESB. وجد أن ESB له تأثير مثبط أفضل على التيروزيناز باستخدام L-tyrosine من استخدام L-DOPA كركيزة. لذلك ، بناءً على نتائج الفحص باستخدام ركيزتين ، يعتبر تأثير التيروزيناز التثبيطي لـ ESB مرتبطًا بأكسدة L-tyrosine إلى L-DOPA بدلاً من أكسدة L-DOPA إلى DOPA كينون في تكوين الميلانين. يشير التأثير المثبط للتيروزيناز باستخدام L-DOPA كنشاط للركيزة والكسح الجذري (ABTS ؛ 0. 943 ، p <0.05 ،="" dpph="" ؛="" 0.952="" ،="" p=""><0.05) إلى="" الارتباطات="" القوية="" الإيجابية="" في="" الجدول="">
لقياس التأثير المثبط لـتكون الميلانينتم قياس النشاط التثبيطي ضد -جلوكوزيداز من ESB. كما هو مبين في الشكل 3 ج ، فإن ESB يثبط الجلوكوزيداز بنسبة 33.72 في المائة عند تركيز 2 0 0 ميكروغرام / مل. وكان IC50 لـ ESB 46.29 ميكروغرام / مل ، وهو أعلى بخمس مرات من أكاربوز (216.05 ميكروغرام / مل). تشير هذه النتائج إلى أن ESB لديها نشاط مثبط أفضل للجلوكوزيداز من الأكاربوز كعنصر تحكم إيجابي. وكشف التأثير المثبط للجلوكوزيداز عن ارتباطات إيجابية قوية مع تأثير مثبط MDA (0.966 ، p <0.05) في="" الجدول="">
3.4. حيوية الخلية وتخليق الميلانين الخلوي
لتأكيد السمية الخلوية لـ ESB ، عولجت خلايا سرطان الجلد B16 / F10 باستخدام ESB لمدة 24 ساعة بتركيزات 1 و 2 و 5 و 10 و 20 ميكروغرام / مل. أظهرت النتائج أن ESB لم يؤثر على بقاء الخلية في التركيزات المشار إليها عند مقارنتها بعنصر التحكم (الشكل 4 أ). لذلك ، أجريت التجارب باختيار تركيزات 2 و 5 و 10 ميكروغرام / مل. بعد ذلك ، تمت معالجة خلايا سرطان الجلد B16 / F10 باستخدام IBMX لتحليل تأثير ESB على إنتاج الميلانين. كما هو مبين في الشكل 4 ب ، ارتفع مستوى محتوى الميلانين إلى 316.85 في المائة عند معالجته بـ IBMX. من ناحية أخرى ، أظهرت المجموعة المعالجة بـ ESB (108.60 بالمائة) عند تركيز 10 ميكروغرام / مل انخفاضًا ملحوظًا في محتويات الميلانين مقارنة بالمجموعة المعالجة بـ IBMX ، ومحتويات الميلانين المماثلة مقارنة بمجموعة أربوتين (101.79 بالمائة) كعنصر تحكم إيجابي.
3.5 مسار تكون الميلانيني في خلايا سرطان الجلد B16 / F10
تكون الميلانينهي عملية أساسية لحماية جلد الإنسان من المؤثرات الخارجية ، ويتم تنظيم هذه العملية من خلال آليات مختلفة. في هذه الدراسة ، قمنا بقياس مستوى التعبير عن الجزيئات المنظمة لتكوين الميلانين لتأكيد الآلية المثبطة المحتملة لإنتاج الميلانين الناجم عن ESB onIBMX في خلايا سرطان الجلد B16 / F10 (الشكل 5). وأظهرت النتائج أن ESB خفضت بشكل فعال تعبير MITF الناجم عن IBMX (الشكل 5 أ ، ب). وبالتالي ، تم تقليل التعبير عن التيروزيناز (الشكل 5 أ ، ج) و TRP -1 (الشكل 5 أ ، د) عن طريق تقليل MITF مع علاج ESB. ونتيجة لذلك ، أدى علاج ESB إلى تقليل تنظيم التعبير عن البروتينات ذات الصلة في خلايا سرطان الجلد B16 / F10 التي يسببها IBMX.
3.6 تحليل UPLC-IMS-QTOF / MS2
تم مسح ملف تعريف للمركبات الرئيسية لـ ESB بواسطة LC / MS في نطاق م / ض 50-1500 ، ويتم عرض الذروة اللونية الأساسية في الشكل 6. تم إجراء مزيد من تحديد وتوصيف المركبات بالمقارنة مع بيانات الأدبيات باستخدام بيانات التجزئة MS2 (الجدول 2). بناءً على الأجزاء الموجودة في الأدبيات السابقة ، كانت القمة 2 هي 1- O-caffeoylglycerol (m / z 253.07 ، 179.03 ، 161.02 و 135.04) [15] ؛ الذروة 3 ، dicaffeoylglycerides (m / z 415.10 ، 253.07 ، 179.03 و 135.04) [16] ؛ الذروة 4 ، 1 ، 3- O-dicaffeoylglycerol (m / z 415.10 ، 253.07 ، 179.03 ، 161.02 و 135.04) [16] ؛ الذروة 5 ، p-coumaroyl-caffeoylglycerol (m / z 399.10 ، 253.07 ، 179.03 ، 161.02 و 135.04) [17] ؛ الذروة 6 ، feruloyl-caffeoylglycerol (m / z 429.12 ، 253.07 ، 193.05 ، 161.02 و 134.03) [18] ؛ الذروة 7 ، تريسين (م / ض 329.23 ، 314.04 ، 299.01 و 271.02) [19] ؛ والذروة 9 ، 9- حمض الهيدروكسيوكتاديكاديونويك (9- HODE) (م / ض 295.22 ، 277.21 و 171.10) [20] ، على التوالي. من بينها ، تم تحديد 1 ، 3- O-dicaffeoylglycerol (الشكل 6B) ، والتريسين (الشكل 6C) و 9- HODE (الشكل 6 د) كمركبات رئيسية.
آثار cistanche:مضاد للأكسدة
4. مناقشة
تكون الميلانينتم الإبلاغ عن أنه ناتج عن زيادة الإجهاد التأكسدي من المنبهات الخارجية. يسبب الإجهاد التأكسدي أكسدة الحمض النووي والبروتينات ، وأكسدة الدهون ، وزيادة الأحماض الدهنية غير المشبعة. يؤدي هذا الإجهاد أيضًا إلى زيادة تخليق الميلانين غير الضروري في الخلايا الصباغية على الجلد. وبالتالي ، فإن إنتاج الميلانين المفرط يمكن أن يسبب تصبغ الجلد ، ويمكن أن يؤدي إلى سرطان الجلد. يحفز IBMX تكوين الميلانين عن طريق تثبيط فسفودايستراز وبالتالي زيادة مستويات cAMP [7]. مع زيادة مستوى cAMP في الخلايا ، فإنه يتسبب في تنشيط مسارات إشارات ERK و PI3K / Akt التي تعزز إنتاج البروتينات المرتبطة بتكوين الميلانين. لذلك ، قمنا بالتحقيق في التأثير المبيض لـ ESB على تكوين الميلانين الناجم عن IBMX في خلايا سرطان الجلد B16 / F10.
المركبات الفينولية باعتبارها المستقلبات الثانوية للنباتات لها خاصية الاستقرار من خلال بنية الرنين عندما تتفاعل مع الجذور [21]. أيضًا ، تعمل المركبات الفينولية كعوامل مهمة للنشاط المضاد للأكسدة مثل نشاط الكسح الجذري ABTS / DPPH ، ومثبطات Actas لتكوين الصباغ لأن لها بنية كيميائية مثل L-tyrosine [22،23]. الطريقة الأكثر شيوعًا وأبسطها للتقدير في المختبرمضادات الأكسدةنشاط. في هذه الدراسة ، أظهرت ESB ارتفاع TPC (الشكل 1) ونشاط الكسح الجذري ABTS / DPPH (الشكل 2 أ ، ب). على وجه الخصوص ، كان ESB أعلى في نشاط الكسح الجذري ABTS من نشاط الكسح الجذري DPPH. يستخدم اختبار DPPH لقياس نشاط الكسح الجذري للمركبات الكارهة للماء ، في حين أن اختبار ABTS يجعل من الممكن قياس نشاط الكسح الجذري ضد المركبات الكارهة للماء وكذلك المركبات المحبة للماء [24]. لذلك ، تم التأكيد على أن نشاط الكسح الجذري لـ ESB كان أكثر تأثرًا بالمركب المحبة للماء.
يتسبب التعرض للأشعة فوق البنفسجية في إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية وله تأثيرات مباشرة وغير مباشرة على الجلد ، خاصة أن أنواع الأكسجين التفاعلية تحفز بيروكسيد الدهون عن طريق مهاجمة الأحماض الدهنية غير المشبعة ، وهي مكونات أغشية الخلايا [2]. يؤدي تراكم بيروكسيدات الدهون إلى تدمير نظام مضادات الأكسدة في الجلد ، مما يؤدي إلى تصبغ الجلد والالتهاب والشيخوخة [25]. في هذه الدراسة ، أظهر ESB مثبطًا ممتازًا بيروكسيد الدهون (الشكل 2C). تم الإبلاغ عن أن المركبات الفينولية الموجودة في النباتات الطبيعية مرتبطة بنشاط الكسح الجذري [26]. أيضا ، Maresca et al. [27] ذكرت أن إزالة أنواع الأكسجين التفاعلية بمضادات الأكسدة فعالة في تثبيط تخليق الميلانين الحيوي. أفادت دراسة حديثة أن كسور أسيتات الإيثيل والأجليكون لأوراق Dendropanax morbifera يمكن أن تعمل كمواد واقية لخلايا الجلد ومضادات الأكسدة الطبيعية عن طريق حماية خلايا HaCaT من الإجهاد التأكسدي [28]. علاوة على ذلك ، أظهر العلاج بنفس الكسور تأثيرًا مضادًا للميلانين أفضل من Arbutin ، المستخدم كعنصر تحكم إيجابي ، ضد إنتاج الميلانين المفرط الناتج عن MSH في خلايا سرطان الجلد B16 / F10 [28].
ترتبط عدة آليات بتكون الميلانين، والهدف المشترك لمواد تبييض البشرة هو تنظيم إنزيم التيروزيناز ، وهو إنزيم مهم في تكوين الميلانين. يحفز Tyrosinase ، وهو إنزيم يحتوي على النحاس ، تفاعلين في هذا المسار: هيدروكسيل L-tyrosine toL-DOPA وأكسدة L-DOPA إلى DOPA كينون [6]. عند التعرض لكميات كبيرة من UV orROS ، يزداد نشاط التيروزيناز ويزداد أيضًا تخليق الميلانين. لذلك ، أظهرت نتائج قياس التأثير المثبط للتيروزيناز فيما يتعلق بتخليق الميلانين أن ESB كان له تأثير مثبط أفضل على التيروزيناز باستخدام L-tyrosine من استخدام L-DOPA كركيزة (الشكل 3 أ ، ب). أبلغت دراسة حديثة عن العلاقة بين TPC وتثبيط التيروزيناز لأن المركبات الفينولية لها بنية كيميائية مشابهة لتلك الموجودة في L-tyrosine ، وهي ركيزة من التيروزيناز. وفقًا لـ Choi et al. [29] ، لوحظ أن كفاءة نشاط إزالة الجذور الحرة والتأثير المثبط للتيروزيناز زاد بما يتناسب مع وقت التخمير في Cheonggukjang ، والذي كان بسبب زيادة كمية TPC مع وقت التخمير. لاحظ Im & Lee [30] أن جزء أسيتات الإيثيل من 75 في المائة من المستخلص الإيثانولي من Taraxacum core num يحتوي على TPC ونشاط مضاد للأكسدة ، وأن التأثير المثبط للتيروزيناز كان متفوقًا على الكسور الأخرى (الهكسان ، والكلوروفورم ، والبيوتانول ، والمائي).
إن التيروزيناز ، أحد البروتينات السكرية ، يتحول إلى جليكوزيلات عندما تنتقل سلاسل البولي ببتيد إلى شبكة الإندوبلازمية. تشارك العديد من الإنزيمات في هذه العملية ، ومن بينها تثبيط الجلوكوزيداز يمكن أن يمنع طي التيروزيناز لتشكيل بنية غير نشطة بدون النحاس ، ونتيجة لذلك ، لا يمكن نقل التيروزيناز إلى الميلانوسوم ويثبط إنتاج الميلانين. في النباتات ليس فقط قادرًا على تقليل الإجهاد التأكسدي ، ولكن أيضًا يمنع إنزيمات التحلل الكربوهيدراتي مثل الجلوكوزيداز عن طريق الارتباط بالبروتينات [31]. أشارت دراسة سابقة إلى أن خلايا الورم الميلانيني B16 / F10 في وجود مثبطات الارتباط بالجليكوزيل تؤدي إلى تقليل تكون الميلانين عن طريق تقليل المحتوى الكلي للتيروزيناز [32]. وتشوي وآخرون. [33] ذكرت أن ديوكسينوجيريمايسين ، أحد مثبطات -جلوكوزيداز ، منع ارتباط جليكوزيل التيروزيناز ومنع انتقال التيروزيناز إلى الميلانوسومات. أندو وآخرون. [34] وقد أظهر أنه من الممكن تثبيط تكوين الميلانين في خلايا الورم الميلانيني عن طريق التحكم في الارتباط بالجليكوزيل لمثبطات التيروزيناز بواسطة مثبطات الجلوكوزيداز مثل الجلوتاثيون والفيريتين والجلداناميسين. كيم وآخرون. [35] ذكرت الارتباطات الجيدة لحبوب لقاح النحل باعتبارها طبيعيةمضادات الأكسدةبين TPC والتأثير المثبط للتيروزيناز ({0}. 973 ، p <0. 0="" 5)="" ،="" كما="" أعطى="" tpc="" ارتباطًا="" إيجابيًا="" بنشاط="" الكسح="" الجذري="" لـ="" dpph="" (0.897="" ،="" ف=""><0.05). وتشير="" النتائج="" إلى="" أن="" مادة="" البوليفينول="" كمضادات="" أكسدة="" طبيعية="" يمكن="" أن="" تكون="" فعالة="" في="" تبييض="" البشرة="" بناءً="" على="" نشاطها="" الممتاز="" كمضاد="" للأكسدة.="" في="" دراستنا="" ،="" تمت="" الإشارة="" إلى="" أن="" التأثير="" المضاد="" للأكسدة="" لـ="" esb="" في="" عملية="" تثبيط="" عمل="" التيروزيناز="" مرتبط="" بشكل="" كبير="" من="" خلال="" تثبيط="" أكسدة="" l-dopa="" إلى="" dopa="" كينون="" والجليكوزيل="" في="" التيروزيناز="" (الجدول="" 1).="" تأثير="" esb="" له="" تأثير="" على="" تأثير="" تبييض="" البشرة="" من="" خلال="" التأثير="" على="">تكون الميلانينالإنزيمات الوسيطة.
مضادات الأكسدة الطبيعية: cistanche tubulosa
مسار إشارات PKA هو العملية الرئيسية المشاركة في تكون الميلانين ، ويتم تنشيطها بواسطة IBMX ، وهو عامل رفع cAMP. يمكن لمسار إشارات PKA تنظيم عوامل النسخ مثل MITF وبروتين ربط العناصر المستجيب لـ cAMP ، والتي تشارك في التعبير عنتكون الميلانينالمنظمين مثل tyrosinase و TRP -1 و TRP -2. وبالتالي ، يزيد علاج IBMX من تعبير MITF وعائلة الجينات التيروزيناز (التيروزيناز و TRP -1) من خلال تنشيط cAMP [7]. بارك وآخرون. [36] أظهر أن كمية تخليق الميلانين من مستخلص الإيثانول PapenfusiellaCuomo (65.17 ± 13.40 بالمائة) بتركيز 40 ميكروغرام / مل كانت مشابهة لحمض الكوجيك (72.30 ± 3.92 بالمائة) كعنصر تحكم إيجابي ، وأفاد بأنه أظهر إمكانية كمادة طبيعية للتبييض. في هذه الدراسة ، أظهر ESB تأثيرًا مثبطًا فعالًا على تخليق الميلانين مشابهًا لتأثير التحكم الإيجابي بتركيزات منخفضة (الشكل 4). بعد ذلك ، لتقييم التأثير المفصل المضاد للميلانوجين لـ ESB ، تم إجراء تحليل لطخة غربية على البروتين الذي يتوسط تكوين الميلانين باستخدام خلايا الورم الميلانيني B16 / F10.
يلعب Akt ، الذي يشارك في آليات مختلفة ، دورًا رئيسيًا في العمليات الخلوية المتعددة مثل موت الخلايا المبرمج والجلوكوز وأيض الجلد. على وجه الخصوص ، تؤدي زيادة cAMP بواسطة علاج IBMX إلى تقليل فسفرة Akt وتنشيطه. أيضًا ، يؤدي تعطيل Akt إلى تنشيط GSK -3 ، مما يعني عدم تحقيق الفسفرة ، أي أن مستوى p-GSK -3 منخفض [7]. وفقًا للأدبيات السابقة ، فإن الجزء الجوي من بوريريا ثونبيرجيا يقلل من تصنيف MITF عن طريق تنشيط مسار إشارات Akt / GSK -3 في خلايا سرطان الجلد B16 / F10 [37]. أيضا ، هوانغ إتال. [38] أظهرت [6] أن المدرسة شجعت تعبير p-Akt وتثبط تكوين الميلانين في خلايا سرطان الجلد B16 / F10. يعمل GSK المنشط -3 على تنظيم عائلة جينات التيروزيناز عن طريق فسفوريلاتينج سير 289 من MITF ، وبالتالي تعزيز تكوين الميلانين. MITF هو عامل نسخ رئيسي يرتبط بمحفز جيني التيروزيناز ، وبالتالي يزيد من التعبير عن الإنزيمات المتعلقة بتكاثر الخلايا الصباغية وتكون الميلانين[7]. عندما يتم تعزيز التعبير عن التيروزيناز بواسطة MITF ، فإنه يؤدي لاحقًا إلى زيادة مستويات TRP -1 و TRP -2 ، ونتيجة لذلك ، فإن هذه الإنزيمات المولدة للميلانين تنتج الميلانين [6]. الإجهاد التأكسدي الناجم عن ضوء الأشعة فوق البنفسجية يحفز تصبغ الميلانين في الجلد. لذلك ، فإن نشاط الجذور أو ROS فعال في تثبيط إنتاج الميلانين ، وقد يكون للبوليفينول مع نشاط مضاد للأكسدة تأثيرات تبييض ممتازة [38]. تشوي وآخرون. [39] أظهر أن سيقان الخيزران الكورية (نوع Phyllostachys nigra henosis) قللت من تنظيم PKA / CREB بوساطة MITF عن طريق تنظيف جذور ABTS / DPPH. كما أن المستخلص الإيثانولي بنسبة 70 بالمائة من Nelumbo nucifera G. Leaf منع التعبير عن MITF و tyrosinase و TRPs مع أنشطة الأكسدة مثل القدرة على التبرع بالإلكترون وتثبيط أوكسيديز الزانثين [40]. في هذه التجربة ، تبين أن علاج ESB قلل من التعبير عن عائلة MITF وعائلة التيروزيناز (التيروزيناز و TRP -1) ، مما يعزز أكسدة DHICA إلى DHI في مسار تكوين الميلانين (الشكل 5). بناءً على هذه النتائج ، ثبت أن ESB يقلل من تنظيم تكوين الميلان بوساطة IBMX بناءً على تفوقهمضادات الأكسدةتأثيرات.
استنادًا إلى الأدبيات السابقة ، تم تحديد المركبات الفينولية الرئيسية في ESB وهي 1 ، 3- O-di-caffeoyl glycerol (الشكل 6B) ، tricin (الشكل 6C) و 9- HODE (الشكل 6D) [16 ، 19،20]. من بينها ، 9- HODE ، وهو المركب الأكثر وفرة في ESB ، هو أحد مستقلبات حمض اللينوليك ويظهر تأثيرًا مبيضًا على الجلد المتهيج عن طريق تثبيط إنزيم التيروزيناز [41]. أيضًا ، على عكس المركبات الأليفاتية الأخرى ، 9- تم الإبلاغ عن ثبات HODE في جميع تجارب الأكسدة وله تأثير تبييض على تلف ROS [41]. وفي الوقت نفسه ، tricin (5 ، 7- dihydroxy - 2- (4- hydroxy -3 ، 5- di-methoxyphenyl) -4 H-chromene {{24 }} واحد) منذ فترة طويلة لآثاره الصحية المفيدة ، مثل مضادات الأكسدة ، ومضادات الفيروسات ، ومضادات الأورام / السرطان [42-44]. مو وآخرون. [45] ذكر أن التريسين أظهر تأثيرًا مثبطًا أفضل على نشاط التيروزيناز مقارنة مع أربوتين كعنصر تحكم إيجابي. علاوة على ذلك ، منغ وآخرون. [46] أفاد أن التريسين المعزول من مستخلص الميثانول لشعير يونغ جرين (Hordeum vulgare L.) يثبط تخليق الميلانين الحيوي ونشاط التيروزيناز في خلايا B16 / F10 الميلانوما من خلال مجموعة الهيدروكسيل في موضع C -4 ومجموعات الميثوكسي في C -3 '، 5'مواضع من الهيكل العظمي للتريسين. Phenylpropanoids مثل 1- O-caffeoylglycerol و dicaffeoylglycerides و 1 ، 3- O-dicaffeoylglycerol هي مركبات عضوية يتم تصنيعها بواسطة نباتات من فينيل ألانين والتيروزين. تم الإبلاغ عن Phenylpropanoid وأشكاله الغليكوزيلاتية كمضادات أكسدة قوية إما عن طريق الكسح المباشر لـ ROS أو من خلال العمل كمنظفات جذور البيروكسيل التي تكسر السلسلة [47].
يتنافس حمض p-Coumaric ، الذي له تركيب كيميائي مشابه لـ L-tyrosine ، مع L-tyrosin للمواقع النشطة على التيروزيناز [48]. يُعرف باسم مثبط قوي للتيروزيناز ، وقد تم الإبلاغ عن تأثيره المضاد لتكوين الميلانين أقوى من المركبات المماثلة هيكليًا مثل cinnamicacid [48]. بالإضافة إلى ذلك ، An et al. [48] ذكر أن حمض p-coumaric ، أحد مكونات Sasa quelpaertensisNakai ، يثبط نشاط التيروزيناز باستخدام L-DOPA كركيزة ، ويقلل من إنتاج الميلانين في خلايا سرطان الجلد B16 / F10. لذلك ، يمكن اعتبار أن ESB لها تأثير تبييض ممتاز من خلال حمض p-coumaric. علاوة على ذلك ، أظهر أطياف MS لـ 1- O-caffeoylglycerol و 1-3- O-dicaffeoylglycerol أنماط تجزئة مماثلة عند m / z 179 و 161 و 135 ، وتم الإبلاغ عن هذه الأجزاء على أنها بقايا حمض الكافيين. لديهم طيف للأشعة فوق البنفسجية مشابه لمشتقات حمض الكافيك مع λmax عند حوالي 326 نانومتر ، وبالتالي تعتبر من مشتقات حمض الكافيين [48]. تم الإبلاغ عن أن حمض الكافيك ، أحد مشتقات المركبات المختلفة ، هو أحد مضادات الأكسدة القوية في المختبر / في الجسم الحي ، ويقلل من نشاط وتكون الميلانينفي خلايا سرطان الجلد B16 / F10. وبالتالي ، يمكن اعتبار التأثير المضاد لتولد الميلانين لـ ESB بسببمضادات الأكسدةومواد تبييض البشرة مثل مركبات الأليفاتية والفينولية.
آثار cistanche: مضادات الأكسدة
5. الاستنتاجات
لتقييم الاحتمالية كعامل مبيض للبشرةالذرة الرفيعة ثنائية اللونتم تقييم التأثيرات المضادة للأكسدة والمضادة للميلانين لـ ESB على تكوين الميلانين الناجم عن IBMX في خلايا الميلانوما B16 / F10. عرضت ESB كبيرةمضادات الأكسدةالأنشطة في نشاط الكسح الجذري ABTS / DPPH وتأثير مثبط MDA. منع ESB الخطوة الأولى منتكون الميلانينعن طريق تثبيط الجلوكوزيداس والتيروزيناز باستخدام L-tyrosine و L-DOPA كركائز. التأثيرات المضادة للميلانين لـ ESB على المستحثة IBMXتكون الميلانينتم تقييمها في خلايا سرطان الجلد B16 / F10 ، وأظهرت النتائج أن ESB يثبط تكوين الميلان الناجم عن IBMX في خلايا سرطان الجلد B16 / F10. تم إعاقة تراكم الميلانين عن طريق تقليل تنظيم التعبير عن MITF وعائلة جين التيروزيناز (tyrosinasean و TRP -1) في تكوين الميلانين الناجم عن IBMX. تم تحليل المركبات الرئيسية لـ ESB على أنها 1 و 3- O-di-caffeoyl glycerol و tricin و 9- HODE. وبالتالي ، أظهر ESB في المختبرمضادات الأكسدةالنشاط والتأثير المضاد للميلانوجين في خلايا سرطان الجلد B16 / F10 ، وبالتالي ، يمكن استخدامها كعامل تبييض للبشرة في سوق مستحضرات التجميل.
مضاد للأكسدةأقراص cistanche