الجزء 1 التأثيرات الشبيهة بمضادات الاكتئاب لمستخلص القيسانش توبولوسا على فئران الإجهاد المزمن التي لا يمكن التنبؤ بها من خلال استعادة توازن ميكروبيوتا الأمعاء

تظهر الأدلة المتزايدة أن الاضطرابات العصبية والنفسية ، مثل الاكتئاب ، مرتبطة بميكروبيوم الأمعاء من خلال محور الأمعاء والدماغ.سيستانش هربايشتهر بعلاج نقص "الكلى واليانغ" في الطب الصيني التقليدي (TCM) وقد استخدم في علاج الأمراض التنكسية العصبية في السنوات الأخيرة. في هذه الدراسة ، تم إنشاء نموذج الاكتئاب الناجم عن الإجهاد المزمن غير المتوقع (CUS) لاستكشاف تأثيرCistanche tubulosaمستخلص (CTE) في الاختبارات السلوكية ، والناقلات العصبية أحادية الأمين ، والعوامل التغذوية العصبية في الحصين والقولون ، وتكوين الميكروبات المعوية ، وإنتاج الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة (SCFAs). علاوة على ذلك ، تم استخدام تحليل الارتباط لتقييم العلاقة الوظيفية بين الجراثيم المعوية المتغيرة ، والناقلات العصبية المتغيرة والتروفين العصبي في الحصين والقولون ، والتركيز المضطرب لـ SCFAs. تحسن CTE بشكل ملحوظ السلوكيات الشبيهة بالاكتئاب في الفئران تحت CUS. تمت استعادة مستوى الدماغ لـ 5- هيدروكسي تريبتامين (5- HT) وعامل التغذية العصبية المشتق من الدماغ (BDNF) في فئران CUS بواسطة CTE. يمكن أيضًا تعديل الوفرة النسبية لميكروبات الأمعاء وتركيزات حمض الأسيتات وحمض الهكسانويك عن طريق معالجة CTE. أظهرنا كذلك أن تطبيق CTE في فئران CUS أدى إلى ارتباط قوي بين تركيبة ميكروبيوتا الأمعاء المعطلة ، ومستويات الناقل العصبي للحصين ، وإنتاج SCFAs المستقلب العصبي. إجمالاً ، تحدد هذه النتائج الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن كعلاج محتمل لأعراض الاكتئاب من خلال استعادة التوازن في ميكروبيوتا الأمعاء لاضطرابات محور الجراثيم المعوية والدماغية ، وفتح طرق جديدة في مجال علم الأدوية النفسية والعصبية.

الكلمات الدالة: Cistanche tubulosa، مضاد للاكتئاب ، إجهاد مزمن لا يمكن التنبؤ به ، ميكروبيوتا الأمعاء ، ميكروبيوتا - محور الأمعاء - الدماغ

للمزيد من المعلومات أرجو الأتصال:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola له العديد من التأثيرات ، انقر هنا لمعرفة المزيد

المقدمة

سيستانش هربا(Rou Cong-Rong بالصينية) مسجل رسميًا على أنه السيقان النضرة المجففةCistanche Deserticola(YC Ma) وCistanche tubulosa(شرينك) في لجنة دستور الأدوية الصينية (2015). إنه دواء صيني تقليدي معروف (TCM) لعلاج نقص الكلى والعجز الجنسي والعقم عند النساء وسيلان الدم المرضي والنزيف الرحمي الغزير

إشيناكوسايدفي cistanche يمكن أن تعززالتئام الجروح

والإمساك الشيخوخة (هيئة دستور الأدوية الصينية ، 2015). كشفت الدراسات السابقة عن العديد من المكونات الكيميائية الرئيسية لـسيستانش هربا، بما في ذلك جليكوسيدات فينيل إيثانويد (PhGs) ، إيريديويد ، جليكوسيدات إيريدويد ، قشور ، ألديتول ، سكريات قليلة التعدد ، السكريات المتعددة. أظهر التحليل الدوائي أن Cistanches Herba تعرض مجموعة واسعة من الأنشطة الوقائية للأعصاب ، والتعديل المناعي ، والمضادة للالتهابات ، والوقاية الكبد (Jiang and Tu ، 2009 ؛ Fu et al. ، 2017). تم اعتبار PhGs المكونات النشطة الرئيسية لـ Cistanches Herba التي تمتلك العديد من الأنشطة الدوائية ، مثل الحماية العصبية ، والمناعة ، ومضادات الالتهاب ، والوقاية الكبد ، ومضادات الأكسدة ، وما إلى ذلك (Jiang and Tu ، 2009 ؛ Fu et al. ، 2017). تم تسجيل Cistanches Herba في الأصل في Classic of Herbal Medicine ("Shennong Bencao Jing" باللغة الصينية) ، وهو كتاب مشهور عن النباتات الطبية كتب بين حوالي 200 و 250 بعد الميلاد ، باعتباره "عشبًا مرتفعًا" يمكنه تنظيم "خمسة (أحشاء) ) سلالات وسبع (الإفراط في الأكل ، والغضب ، والرطوبة ، والبرد ، والقلق ، والرياح والأمطار ، والخوف) ضعف "(هوانغ ، 1982). في الوقت الحاضر ، يُقبل Cistanches Herba على نطاق واسع كمقوٍ عشبي للوهن العام (Fu et al. ، 2017).C. tubulosaتستخدم كبسولات الجليكوزيد (Memoregain®) لعلاج مرض الزهايمر (Guo et al. ، 2013). يعد نظام الدوبامين المختل أحد الأسباب الرئيسية لفرضية أحادي الأمين للاكتئاب (دومان وآخرون ، 1997 ؛ كريشنان ونستلر ، 2008). تم العثور على Echinacoside (أحد PhGs) و PhGs من Cistanche salsa لحماية الخلايا العصبية للدوبامين من السمية العصبية للدوبامين (DA) التي يسببها 1- الميثيل -4- فينيل -1 ، 2،3 ، { {8}} رباعي هيدروبيريدين (MPTP) الذي يمكنه زيادة مستويات DA في المخطط لفئران C57 (Tian and Pu، 2005؛ Geng et al.، 2007). بالإضافة إلى ذلك ، فإن catalpol و geniposide هما نوعان من أنواع الإيريويد التمثيلية في Cistanches Herba ، وقد وُجِد أنهما يخففان من الإجهاد المزمن الذي لا يمكن التنبؤ به (CUS) الناجم عن السلوك الشبيه بالاكتئاب من خلال استعادة اختلالات محور الغدة النخامية والكظرية (HPA) ويمكن لـ catalpol تنظيم الدماغ- تعبير عامل التغذية العصبية المشتق (BDNF) (Cai et al. ، 2015 ؛ Wang et al. ، 2015). علاوة على ذلك ، يقدم المنشور الأخير دليلًا جديدًا على أن مغلي Cistanches Herba قلل بشكل كبير من فترة عدم الحركة في اختبار تعليق ذيل الفأر ، مما يشير بقوة إلى أن Cistanches Herba تمتلك صفات محتملة شبيهة بمضادات الاكتئاب (WangD. et al. ، 2017).

يجذب الطب الصيني التقليدي اهتمامًا متزايدًا كعلاج للاكتئاب بسبب آثاره الجانبية المعتدلة نسبيًا (Sarris et al. ، 2011 ؛ Feng et al. ، 2016). أنواع مختلفة من TCMs ، مثل المركبات الفردية من الأدوية الخام (ginsenoside Rb1 و ginsenoside Rg3 و Yuanzhi -1) (Jin et al.، 2015؛ Kang et al.، 2017؛ Wang GL et al.، 2017 ) ، المواد الطبية الصينية الفردية (جذر الجينسنغ ، Acorus tatarinowii rhizome ، و Morinda Officinalis) (Dang et al. ، 2009 ؛ Han et al. ، 2013 ؛ Xu et al. ، 2016) ، و TCM decoctions (Kai-Xin- سان ، تشيهو-شو-جان-سان ، شياوياوسان ، وشياوتشايوتانج) (داي وآخرون ، 2010 ؛ سو وآخرون ، 2011 ؛ سو وآخرون ، 2014 ؛ يان وآخرون ، 2016) تمت دراستها بعمق وعرضها لعكس أو تخفيف الأعراض الشبيهة بالاكتئاب. على سبيل المثال ، تم العثور على Kai-Xin-San للتخفيف بشكل ملحوظ من أعراض الاكتئاب الناجم عن CUS عن طريق زيادة عدد الناقلات العصبية ، والعوامل التغذوية العصبية ، والمستقبلات المقابلة لها ، وتعزيز التعبير عن synaptotagmin وكثافة العمود الفقري التغصني (Yan et al. ، 2016).

ومع ذلك ، فإن الدراسات السابقة للطب الصيني التقليدي تعتمد على نتائج الاختبارات السلوكية الشبيهة بالاكتئاب وتركز على آلية العمل الدوائية التقليدية. العلاقة بين فعالية مضادات الاكتئاب للطب الصيني التقليدي عن طريق الفم وميكروبات الأمعاء ليست مفهومة جيدًا. تدعم الأدلة المتزايدة أن ميكروبيوتا الأمعاء تلعب دورًا حاسمًا في تنظيم وظائف المخ ، وخاصة الاكتئاب وغيره من الاضطرابات المرتبطة بالتوتر (Foster and Neufeld، 2013؛ Sherwin et al.، 2017). على سبيل المثال ، ينتج عن الإجهاد المزمن خلل في التنظيم في التركيب الجرثومي لأمعاء الفئران ، مع انخفاض في نسبة الثبات / البكتيريا ، وبشكل أكثر تحديدًا ، انخفاض في الوفرة النسبية من العصيات اللبنية وزيادة في Oscillibacter (Meng et al. ، 2017). علاوة على ذلك ، أعطى زرع البراز للميكروبات غير المنتظمة من مرضى الاكتئاب إلى الفئران الخالية من الجراثيم نمطًا ظاهريًا يشبه الاكتئاب في هذه الحيوانات ، مما يشير إلى أن ميكروبيوتا الأمعاء غير المنتظمة تسبب أعراضًا سلوكية وفسيولوجية للاكتئاب والقلق (Kelly et al. ، 2016 ؛ Zheng et al. . ، 2016). في التجارب على الحيوانات ، تم العثور على بعض مُعدِّلات الجراثيم مثل البروبيوتيك والبريبايوتكس لتحسين السلوك الشبيه بالاكتئاب في الفئران التي تعاني من الإجهاد المزمن عن طريق تحسين ميكروبيوتا الأمعاء (Bravo et al. ، 2011 ؛ Bharwani et al. ، 2017 ؛ Burokas et al. ، 2017 ).

نظرًا للارتباط بين ميكروبيوتا الأمعاء وتطور المرض ، فضلاً عن مرونة بنية ميكروبيوتا الأمعاء ، فقد قررنا دراسة التأثيرات الموجودة في ميكروبيوتا الأمعاء للتوسط في الاكتئاب ، والتي جذبت انتباهنا وتم فحصها (Chang et al. ، 2017 ؛ Xu et al. . ، 2017). لتحقيق ذلك ، تم إجراء تسلسل جيني 16S rRNA معًا تحليل إحصائيات ميتا (White et al. ، 2009) لتحليل تكوين ميكروبيوتا الأمعاء. في الدراسة الحالية ،C. tubulosaتم اختياره لتقييم آثاره الشبيهة بمضادات الاكتئاب لأنه يحتوي على مستوى أعلى من PhGs مقارنة بـجيم الصحراء. تم إنشاء نموذج الاكتئاب الناجم عن الفئران CUS لاستكشاف تأثيراستخراج C. tubulosa(CTE ، يتكون من 48.6 بالمائة PhGs ، 6.9 بالمائة جليكوسيدات إيريدويد ، و 2 0. 0 بالمائة إجمالي السكريات) في الاختبارات السلوكية ، الناقلات العصبية أحادية الأمين ، والعوامل التغذوية العصبية في الحصين والقولون ، وتكوين ميكروبيوتا الأمعاء ، والسلسلة القصيرة إنتاج الأحماض الدهنية (SCFA). علاوة على ذلك ، فإن العلاقة الوظيفية بين ميكروبات الأمعاء المتغيرة قد غيرت الناقلات العصبية والتغذيات العصبية في كل من الحصين والقولون ، وتم دراسة التركيز المضطرب لـ SCFAs. تم استخدام تحليل الارتباط لإثبات الدليل على أن الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن يستهدف جراثيم الأمعاء لعلاج الاكتئاب عن طريق تعديل محور الجراثيم والأمعاء والدماغ.

المواد والأساليب

المواد

تم شراء Fluoxetine (FLX) من Aladdin Industrial Inc. (شنغهاي ، الصين). 5- تم شراء مجموعات هيدروكسي تريبتامين (5- HT) ، ونوربينفرين (NE) ، و BDNF ELISA من معهد Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (نانجينغ ، الصين). تم شراء الأسيتونتريل من فئة HPLC من شركة Merck (دارمشتات ، ألمانيا). تم تحضير الماء منزوع الأيونات من الماء المقطر باستخدام نظام تنقية المياه Milli-Q (Millipore ، Bedford ، MA ، الولايات المتحدة). جميع الكواشف والكيماويات الأخرى المستخدمة كانت من الدرجة التحليلية.

المجففة ينبع منC. tubulosaتم جمعها من مقاطعة Hetian (شينجيانغ ، الصين). تم توثيق عينات عينة القسيمة من قبل البروفيسور شياوبو لي وتم إيداعها في المعشبة التابعة لكلية الصيدلة ، جامعة شنغهاي جياو تونغ (شنغهاي ، الصين). البودرة المتجانسةC. tubulosaتم تعليق السيقان في عشرة أضعاف من 70 في المائة من الإيثانول ، وتم إعادة تدفق الحرارة ثلاث مرات ، لمدة ساعة واحدة عند 100 درجة. تم ترشيح المستخلصات باستخدام الشاش ، وتبخيرها تحت ضغط بدرجة 65 درجة مئوية وتجفيفها بالتجميد. تمت إعادة إذابة العينة ثم فصلها بواسطة الراتنج الكبير المسام D101. بعد الامتزاز ، يتم التخلص من الجزء المملوء بالماء. تم الحصول على CTE بعد التصفية التتابعية باستخدام 40 في المائة من الإيثانول ، ثم تبخيره تحت فراغ عند 65 درجة وتجفيفه بالتجميد.

تحليل التركيب الكيميائي للـ CTE

تم تحديد المحتوى النسبي لـ PhGs في CTE بواسطة قياس الطيف الضوئي بالأشعة فوق البنفسجية عند 330 نانومتر باستخدام إشنكوسايد كمعيار. تم قياس المحتوى النسبي للأيريويد والجليكوسيدات القزحية بواسطة القياس الطيفي للأشعة فوق البنفسجية باستخدام طريقة الطول الموجي المزدوج لتجنب التداخل الطيفي من PhGs (تم استخدام 237 نانومتر للتقدير الطيفي ، وتم استخدام نقطة متساوية معدة 280 نانومتر لطول الموجة المرجعية) ، تم استخدام جينيبوسيد كمعيار. تم تحديد إجمالي محتوى الكربوهيدرات في CTE بواسطة طريقة القياس اللوني لحمض الفينول - الكبريتيك مع الجلوكوز كمعيار (Chow and Landhausser ، 2004).

تميزت المكونات الكيميائية الرئيسية لـ CTE بـ UPLC-Q-TOF-MS. تم إجراء تحليل UPLC-Q-TOF-MS على نظام Waters ACQUITY UPLC (Waters Corp. ، Milford ، MA ، الولايات المتحدة) مع عمود ACQUITY UPLC BEH C18 (1 0 0 مم × 2.1 mm id، 1.7 段 m، Waters Corp.، United States) عن طريق شطف التدرج باستخدام 0. 1٪ حمض الفورميك أسيتونيتريل (أ) و 0. 1٪ حمض الفورميك في الماء (ب) عند أ معدل التدفق 0.4 مل / دقيقة. كان ملف تعريف التدرج: 0-5 دقيقة (أ: 5-20 بالمائة) ، 5-7. 5 دقائق (أ: 20-30 بالمائة) ، 7. 5-10 دقيقة ( ج: 30-70 بالمائة) ، 10-11 دقيقة (أ: 70-100 بالمائة) ، وتبقى لمدة 1.5 دقيقة. تم إعادة تدوير التدرج مرة أخرى إلى 5 بالمائة في 0.5 دقيقة واستمر لمدة 2.5 دقيقة للتشغيل التالي. كان حجم الحقن 3 [il. تم ضبط درجة حرارة فرن العمود على 35 درجة.

تم إجراء قياس الطيف الكتلي باستخدام مطياف الكتلة Waters Vion IMS (ووترز كورب ، ميلفورد ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة). تم إجراء التأين في وضع الرش الكهربائي السلبي (ESI). كانت معلمات MS كالتالي: الجهد الشعري ، 2. 0 kV؛ جهد المخروط ، 2 0 فولت ؛ درجة حرارة المصدر ، 12 0 درجة ؛ درجة حرارة الذوبان ، 5 0 0 درجة ؛ تدفقات الغاز من المخروط والذوبان ، 50 و 1 ، 000 لتر / ساعة ، على التوالي. لقياس الكتلة بدقة ، تم استخدام leucine-enkephalin ككتلة قفل لتوليد [MH] - أيون (m / z 554.2615). تم إجراء تجربة MSE (قياس الطيف الكتلي ، الطاقة المرتفعة) في وظيفتي مسح على النحو التالي: الوظيفة 1 (طاقة منخفضة): m / z 50-1 ، 000 ، وقت مسح 0.25 ثانية ، تأخير بين المسح 0.02 ثانية ، طاقة تصادم 6 فولت ؛ الوظيفة 2 (طاقة عالية): m / z 50-1 ، 000 ، وقت المسح 0.25 ثانية ، تأخير المسح الداخلي 0.02 ثانية ، منحدر طاقة التصادم 20-45 eV. تمت معالجة البيانات باستخدام برنامج UNIFI 1.8.1 (Waters Corp. ، Milford ، MA ، الولايات المتحدة).

cistancheيستطيعتحسين وظائف الكلى

التجارب على الحيوانات

تم شراء ذكور فئران سبراج داولي (200 20 جم) من شركة Beijing Vital River لتكنولوجيا الحيوانات (بكين ، الصين) ، وتم إيواؤها في مركز حيوانات المختبر بجامعة شنغهاي جياو تونغ (شنغهاي ، الصين). تم إيواء الحيوانات في مجموعات تحت درجة حرارة غرفة مضبوطة (25 درجة 2 درجة ، رطوبة نسبية 55 × 10 بالمائة) مع دورة مظلمة فاتحة تبلغ 12:12 ساعة. سمح للفئران بالوصول المجاني إلى فئران المختبر العادية والطعام والماء لمدة أسبوع. تمت الموافقة على المرافق والبروتوكولات الحيوانية من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة شنغهاي جياو تونغ (شنغهاي ، الصين).

بعد أسبوع واحد من التأقلم ، تعرض 40 فأرًا ساذجًا لفترة 72 ساعة من التدريب على السكروز واختبار خط الأساس للسكروز. تم تقسيم الفئران إلى خمس مجموعات (ن=8) بناءً على تفضيل السكروز في اختبار خط الأساس للسكروز (الشكل التكميلي S1). أعطيت المجموعة الضابطة ومجموعة CUS محلول ملحي (10 مل / كغ). بالنسبة للمجموعات الثلاث الأخرى ، CTE بجرعة عالية (CTEH) (4 00 ملغم / كغم) ، جرعة منخفضة (CTEL) (2 00 ملغم / كغم) ، FLX (10 ملغم / كغم) تم إعطاؤها داخل المعدة قبل ساعة واحدة من إجراء CUS (8:00 صباحًا إلى 9:00 صباحًا) على مدار 4 أسابيع.

تم تطوير الإجهاد المزمن غير المتوقع كما هو موصوف سابقًا (Willner ، 1997 ؛ Xue وآخرون ، 2013) ، باستثناء المجموعة الضابطة غير المجهدة ، تم تطبيق سلسلة من الضغوط على الفئران: إضاءة اصطرابية منخفضة الكثافة طوال الليل (120 ومضة / دقيقة) ، ضوضاء بيضاء (100 ديسيبل) لمدة ساعة واحدة ، الحرمان من الماء لمدة 24 ساعة ، زجاجات مياه فارغة لمدة ساعة واحدة (بعد الحرمان من الماء) ، الحرمان من الطعام لمدة 24 ساعة ، السباحة القسرية (5 دقائق) ، تقييد جسدي ({{11) }} ح) ، قفص متسخ لمدة 24 ساعة (200 مل ماء في 100 جرام فراش نشارة الخشب) ، قرصة الذيل (دقيقة واحدة) ، إمالة القفص 45 درجة لمدة 24 ساعة ، صدمة لمدة 30 دقيقة ، وإضاءة ليلية (12 ساعة). تم تطبيق الضغوطات بشكل مستمر وعشوائي لمدة 4 أسابيع ، تم وصف تفاصيلها في الجدول التكميلي S1. كان الطعام والماء متاحين مجانًا للفئران التي لم تتعرض للإجهاد ، والتي ظلت غير مضطربة في غرفة أخرى ، باستثناء فترة 14 ساعة من الحرمان قبل كل اختبار سكروز. مات فأر واحد أثناء إجراء CUS. تم إجراء اختبار السباحة القسري (FST) بعد ذلك

4 أيام من الإعطاء الحاد وبعد 28 يومًا من الإجهاد ، تم إجراء اختبار تفضيل السكروز (SPT) (اليوم 29) ، واختبار الحقل المفتوح (اليوم 31) ، واختبار التغذية المكبوتة (NSFT) (اليوم 33). يظهر مخطط تصميم اختبارات CUS والاختبارات السلوكية في الشكل التكميلي S2.

تم إجراء اختبار السباحة القسري كما هو موضح سابقًا (Porsolt et al. ، 1978). يتكون الإجراء من جلسات الاختبار القبلي والاختبار ، باستخدام نفس الجهاز والظروف (قطر 20 سم ، ارتفاع 45 سم ، يحتوي على 25 سم من الماء المحفوظة عند 26 درجة). خلال جلسة الاختبار التمهيدي ، أجبرت الفئران على السباحة لمدة 15 دقيقة. بعد 24 ساعة ، تم وضع الفئران في نفس الجهاز لمدة 5 دقائق من جلسة اختبار السباحة. سلوك السباحة في الداخل

تمت ملاحظة 5 دقائق بكاميرا فيديو ، وتم قياس وتحليل مدة الجمود.

بالنسبة لـ SPT ، تم تدريب الفئران أولاً على استهلاك محلول السكروز بنسبة 1 في المائة (حجم / حجم) لمدة 72 ساعة قبل SPT. تم إجراء اختبار خط الأساس للسكروز قبل إجراء CUS و SPT في نهاية CUS كما هو موضح سابقًا (Xue et al. ، 2013).

تم إجراء اختبار المجال المفتوح في نهاية إجراء CUS ، وكان الجهاز والطريقة كما هو مفصل سابقًا (Xue et al. ، 2013). تم استخدام نظام تتبع الفيديو (Shanghai Mobile Datum Information Technology Co.، Ltd.) لتسجيل إجمالي المسافة المقطوعة.

تم تقييم اختبار التغذية المكبوتة على النحو الموصوف سابقًا (Xue وآخرون ، 2013) وتم تسجيل وتحليل زمن الوصول لبدء الأكل في غضون 5 دقائق.

قياس النواقل العصبية وعوامل التغذية العصبية

بعد الاختبارات السلوكية ، تم الحصول على ما لا يقل عن أربع كريات برازية من كل فأر ، ووضعها في أنابيب مخروطية معقمة ، وتم تجميدها فورًا عند درجة حرارة -80 درجة مئوية لتحليل المجتمع الميكروبي وتحليل SCFAs. بعد ذلك تم التضحية بالفئران. تم عزل الحصين والقولون ووزنها على الفور. تم غسل عينات الأنسجة بمحلول ملحي ، وتم تجميدها بشكل مفاجئ في نيتروجين سائل ، وحفظها في درجة حرارة -80 درجة مئوية للتخزين. بعد الذوبان المتسلسل عند -20 درجة مئوية و 4 درجات مئوية ، تم تجانس عينات الأنسجة في محلول ملحي وطردها لمدة 25 دقيقة عند 2500 دورة في الدقيقة / 4 درجات مئوية. تم جمع المادة الطافية الناتجة وتخزينها في 4OC حتى الاستخدام. تم تحديد مستويات 5- HT في الحصين والقولون ، و NE في الحصين ، و BDNF في الحصين بواسطة مجموعات ELISA التجارية وفقًا لبروتوكولات الشركة المصنعة (Hou et al. ، 2017).

تحليل الملف الشخصي التركيبي لميكروبات الأمعاء

تم استخراج الحمض النووي الكلي لميكروبات الأمعاء من عينات البراز كما هو موضح سابقًا (Wei et al.، 2 0 {{2 0}} 4). تم خلط كل عينة برازية (0. 2 جم) في 1 مل من PBS ، وتم تجانسها بالكامل مرتين ، ثم بالطرد المركزي عند 200 جم لمدة 6 دقائق. تمت إضافة المادة الطافية بـ 20 20 بالمائة من PVP وطردها عند 300 جم لمدة 6 دقائق. تم بعد ذلك طرد الطاف الناتج عند 12 ، 000 جم لمدة 6 دقائق وتم حصاد كريات الخلية. تم غسل كريات الخلايا بواسطة PBS ثم تم تعليقها في 300 محللة I (150 ملي كلوريد الصوديوم ، 100 ملي مولار EDTA - Na2 - 2H2. ، درجة الحموضة 8.0). تم خلط المعلق مع 100 ميكرولتر من محلول الليزوزيم (100 مجم / مل) و 20 × 1 بالمائة من RNase ، 37 درجة مئوية مع حمام دافئ لمدة 30 دقيقة ، ثم تمت إضافة 300 ميكرولتر من محلول II (100 ملي كلوريد الصوديوم ، 500 ملي مولار قاعدة تريس ، درجة الحموضة 8.0) . تم خلط المعلق الخلوي برفق مع 50 20 بالمائة من SDS ، وغمره بالثلج لمدة 5 دقائق. تمت تنقية الحمض النووي بعد ذلك عن طريق الاستخراج المتسلسل باستخدام 1 في المائة من PVP ، والفينول المتساوي Tris وكحول كلوروفورم-أيزو أميل (المجلد / المجلد / المجلد / المجلد ، 3.125: 25: 24: 1) ، وكحول كلوروفورم أيزو أميل (المجلد / المجلد ، 24 : 1) متبوعًا بالترسيب عند -20 درجة مئوية لمدة ساعتين مع مجلدين من الإيثانول و 50 [il 3 M NaAc. تم جمع الحمض النووي عن طريق الطرد المركزي ، والتجفيف بالهواء ، والمذاب في 100 ميليلتر من الماء المعقم منزوع الأيونات. تم اختبار نقاء الحمض النووي باستخدام مقياس الطيف الضوئي NanoDrop 2000c (Thermo Fisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة). ثم تعرض إجمالي الحمض النووي لتضخيم PCR باستخدام مواد أولية خاصة بمناطق V 3- V4 من جين 16S rRNA: التمهيدي الأمامي 338F (5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA -3 ') والتمهيدي العكسي 806R (5) "-GGACTACHVGGGTWTCTAAT - 3"). تمت تنقية أمبليكونات PCR باستخدام خرز Agencourt AMPure (Beckman Coulter ، Indianapolis ، IN ، الولايات المتحدة) وقياسها باستخدام مجموعة اختبار PicoGreen dsDNA (Invitrogen ، Carlsbad ، CA ، الولايات المتحدة). بعد خطوة التقدير الكمي الفردية ، تم تجميع الأمبليكونات بكميات متساوية ، وتم إجراء تسلسل نهاية الزوج 2 × 300 نقطة أساس باستخدام منصة Illumina MiSeq مع MiSeq Reagent Kit v3 في Shanghai Personal Biotechnology Co. ، Ltd (شنغهاي ، الصين). تم تجميع قراءات النهاية المزدوجة باستخدام برنامج FLASH (الإصدار 1.2.7) ، وتم قطع قراءات التسلسل الأولي بجودة عالية باستخدام برنامج QIIME (الإصدار 1.8.0) لإزالة الرموز الشريطية غير المتطابقة والتسلسلات التي تقل عن عتبات الطول. بعد ذلك ، تم تجميع التسلسلات التي تمت تصفيتها في وحدات تصنيف تشغيلية (OTUs) بحد أدنى 97 بالمائة من تشابه التسلسل باستخدام QIIME مع UCLUST. تم إجراء تنوع بيتا على QIIME لتحليل إحداثيات UniFrac الرئيسي الموزون (PCoA). أخيرًا ، تم استخدام برنامج Meta stats لمقارنة الاختلافات في التركيب التصنيفي للميكروبات المعوية بين المجموعات المختلفة.

تحليل تركيز SCFAs

تم تحديد تركيز SCFAs (بما في ذلك الأسيتات ، والبروبيونات ، والزبدات ، والأيزوبوتيريت ، وحمض الفاليريك ، وحمض الأيزوفاليريك ، وحمض الهكسانويك) في عينات براز الفئران بواسطة كروماتوجراف الغاز GC {0} (شيمادزو ، اليابان) ، المجهز مع عمود DB-FFAP (3 0 mx 0. 25 ملم × {{1 0}. 25 سم ، Agilent ، الولايات المتحدة). تم تحضير المحاليل القياسية للأسيتات ، والبروبيونات ، والزبدات ، والأيزوبوتيريت ، وحمض الفاليريك ، وحمض الأيزوفاليريك ، وحمض الهكسانويك في 1 ، 0. 4 ، 0. 2 ، 0. 1 ، {{ 21}}. 0 5 و {{25}. 01 و 0.005 مجم / مل مع الأثير (بما في ذلك 2- ميثيل فاليريك 0.1 مجم / مل كمعيار داخلي) ، على التوالي. تم خلط كل عينة برازية (0.2 جم) في 0.8 مل من الماء منزوع الأيونات عن طريق التدوير والطرد المركزي عند 5 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية ، تمت إضافة 450 ميكرولتر من المادة الطافية بنسبة 50 في المائة من H2SO4 و 500 ميكرولتر. المحلول ، دوامة لمدة دقيقة واحدة وطرده عند 12 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ، ثم يوضع الخليط في 4 درجات مئوية لمدة 30 دقيقة. تم أخذ المادة الطافية لتحليل GC. تم إجراء تحليل SCFAs كما هو موضح سابقًا (Wang et al. ، 2016).

تحليل احصائي

تم تقديم جميع البيانات كوسيلة 土 SEM. تم إجراء التحليل الإحصائي باستخدام برنامج SPSS 21. 0 (SPSS Inc. ، Chicago ، IL ، الولايات المتحدة) مع ANOVA أحادي الاتجاه متبوعًا باختبار Dunnett أو اختبار الطالب t. تم استبعاد البيانات من التحليلات إذا كان أكبر من انحرافين معياريين عن المتوسط. قيم p <0. 05="" اعتبرت="" ذات="" دلالة="" إحصائية.="" تم="" استخدام="" تحليل="" الارتباط="" لبيرسون="" لتقييم="" الارتباط="" بين="" الوفرة="" النسبية="" لميكروبات="" الأمعاء="" و="" scfas="" ومستويات="" الحُصين="" 5-="" ht="" و="" ne="" و="" bdnf="" والقولون="" 5-="">

النتائج

تحليل التركيب الكيميائي للـ CTE

تم أولاً تحليل التركيب الكيميائي للـ CTE بشكل شامل. كما هو مبين في الجدول 1 ، كانت PhGs هي المكون الرئيسي لـ CTE ، بمحتوى نسبي قدره 48.6٪ ، و iridoids و iridoid glycosides كانت 6.9٪ ، والسكريات الكلية 2 0. 0٪. هؤلاء

تم بعد ذلك توصيف مكونات CTE باستخدام UPLC-Q- TOF-MS. تم اكتشاف وتحديد ما مجموعه 27 مكونًا ، بما في ذلك 20 مكونًا من PhGs ، وخمسة إيريديويد وجليكوسيدات إيريدويد ، واثنين من السكريات قليلة السكاريد. يتم سرد المعلومات التفصيلية بما في ذلك وقت الاستبقاء ، ودقة MS ، وشظايا MS / MS في المعلومات الداعمة (الجدول التكميلي S2). يظهر الشكل التكميلي S3 مخطط كروماتوجرام الأيونات الكلي UPLC-Q-TOF-MS (TIC) لـ CTE.

تحسين CTE السلوكيات الاكتئابية في CUS الجرذان

في فئران CUS ، انخفض إجمالي وقت عدم الحركة في FST والكمون للأكل في NSFT بشكل كبير من خلال علاج CTE ، وزاد تفضيل السكروز في SPT والمسافة الإجمالية المغطاة في OFT.

يوضح الشكل 1 أ الآثار الحادة لـ CTE على وقت عدم الحركة في FST في فئران CUS. مقارنة بمجموعة نماذج CUS ، 3- أدى تناول اعتلال الدماغ الرضحي المزمن عن طريق الفم الحاد يوميًا إلى تقليل إجمالي وقت عدم الحركة في FST [أحادي الاتجاه ANOVA ، F (3،26)=4. 983 ، ص {{7} } .007]. كشف مزيد من التحليل اللاحق عن تلك الإدارة

الجدول 1|التركيب الكيميائي للC. tubulosaأظهر مستخلص CTE مع مجموعة الجرعات العالية (اختبار Dunnett ، p <{0}. 05) ومجموعة الجرعات المنخفضة (اختبار Dunnett ، p <0.05) انخفاضًا ملحوظًا في إجمالي وقت عدم الحركة في FST .

تظهر آثار CTE على تفضيل السكروز في SPT في CUS الفئران في الشكل 1B. تسبب إجراء الإجهاد لمدة ثمانية وعشرين يومًا في انخفاض كبير في تفضيل السكروز في مجموعة نموذج CUS مقارنة بالفئران غير المجهدة التي لم تتعرض للإجهاد [أحادية الاتجاه ANOVA ، F (4،34)=3. 993 ، ص {{8) }}. {{1 0}} 0 9 ؛ اختبار Dunnett ، p <0.05] ،="" يشير="" إلى="" أن="" نموذج="" cus="" قد="" تم="" تطويره="" بنجاح.="" كعنصر="" تحكم="" إيجابي="" ،="" زادت="" مجموعة="" flx="" بشكل="" ملحوظ="" من="" تفضيل="" السكروز="" في="" فئران="" cus="" [أحادي="" الاتجاه="" anova،="" f="" (4،34)="3." 993،="" p="0." 009؛="" اختبار="" dunnett="" ،="" p=""><0.05] ،="" يوضح="" الصلاحية="" التنبؤية="" لنموذج="" cus.="" أظهر="" الإعطاء="" الفموي="" المزمن="" للاعتلال="" الدماغي="" الرضحي="" المزمن="" في="" مجموعة="" الجرعات="" العالية="" تأثيرات="" رئيسية="" على="" تفضيل="" السكروز="" [أحادي="" الاتجاه="" anova،="" f="" (4،34)="3." 993،="" p="0." 009؛="" اختبار="" dunnett="" ،="" p=""><0.01] ،="" والذي="" أعاده="" إلى="" المستويات="" الطبيعية="" في="" الفئران="" cus.="" أظهر="" cte="" مع="" مجموعة="" الجرعات="" المنخفضة="" اتجاهًا="" متزايدًا="" ولكن="" التأثير="" لم="" يكن="" ذا="" دلالة="" إحصائية="" (اختبار="" dunnett="" ،="" ص="0.">

كما هو مبين في الشكل 1C ، تم استخدام المسافة الإجمالية المغطاة في OFT أيضًا لتقييم آثار CTE على فئران CUS. مقارنة بالفئران غير المجهدة ، أظهرت مجموعة نماذج CUS مسافة إجمالية أقصر بكثير [اتجاه واحد ANOVA ، F (4،34)=7. 845 ، ص=0. 0 {{ 19}} 0 1 ؛ اختبار Dunnett ، p <0. 001]="" بعد="" 4-="" أسبوعًا="" من="" التعرض="" لـ="" cus="" ،="" وزاد="" علاج="" flx="" بالتحكم="" الإيجابي="" المسافة="" الإجمالية="" في="" فئران="" cus="" [أحادية="" الاتجاه="" anova="" ،="" f="" (4،34)="7." 845="" ،="" ص="0." 0001="" ؛="" اختبار="" دونيت="" ،="" ف=""><0.05]. أظهر="" الإعطاء="" الفموي="" للاعتلال="" الدماغي="" الرضحي="" المزمن="" بجرعة="" عالية="" وجرعة="" منخفضة="" تأثيرًا="" واضحًا="" على="" المسافة="" الإجمالية="" في="" فئران="" cus="" [أحادية="" الاتجاه="" anova،="" f="" (4،34)="7." 845،="" p="0." 0001="" ؛="" اختبار="" dunnett="" ،="" p=""><0.01 لمجموعة="" الجرعات="" العالية="" ،="" p=""><0.001 لمجموعة="" الجرعات="" المنخفضة="" ،="" على="" التوالي].="" يوضح="" الشكل="" التكميلي="" s4="" خريطة="" مسار="" النشاط="" في="">

يوضح الشكل 1 د آثار CTE على الكمون لتناول الطعام في NSFT في فئران CUS. تسبب إجراء الإجهاد لمدة ثمانية وعشرين يومًا في زيادة كبيرة في وقت الاستجابة لبدء تناول الطعام في مجموعة نموذج CUS مقارنة بالفئران غير المجهدة التي لم تتعرض للإجهاد [أحادية الاتجاه ANOVA ، F (4،33)=3. 434 ، ص { {8}}. {{1 0}} 19 ؛ اختبار Dunnett ، p <0.05] ،="" يشير="" إلى="" أن="" نموذج="" cus="" قد="" تم="" تطويره="" بنجاح.="" أظهر="" الإعطاء="" الفموي="" للاعتلال="" الدماغي="" الرضحي="" المزمن="" بجرعة="" عالية="" تأثيرات="" واضحة="" على="" الكمون="" لبدء="" الأكل="" مقارنة="" بمجموعة="" cus="" (اختبار="" الطالب="" ،="" t="2." 759="" ،="" p=""><0.05) ،="" بينما="" أظهرت="" جرعة="" منخفضة="" من="" الاعتلال="" الدماغي="" الرضحي="" المزمن="" بدون="">

استعاد CTE مستوى الناقلات العصبية وعوامل التغذية العصبية في فئران CUS

تظهر تأثيرات CTE على {{{1 0}}} مستويات HT و NE في قرن آمون من جرذان CUS في الأشكال 2 أ ، ب. تسبب إجراء الضغط لمدة أربعة أسابيع في انخفاض كبير في 5- HT [one-way ANOVA، F (4،34)=17. 13، p=0. 0 {{39 }} 0 1 ؛ اختبار Dunnett ، p <0. 0="" 01]="" و="" ne="" [one-way="" anova،="" f="" (4،34)="6." 376،="" p="0." 0006؛="" اختبار="" dunnett="" ،="" p=""><0.001] تركيز="" في="" قرن="" آمون="" من="" فئران="" cus="" مقارنةً="" بالمجموعة="" الضابطة="" ،="" واستعاد="" flx="" المضاد="" للاكتئاب="" 5-="" مستويات="" ht="" في="" الحُصين="" بشكل="" كبير="" [أحادي="" الاتجاه="" anova="" ،="" f="" (4،34)="" {="" {25}}.="" 13،="" p="0." 0001؛="" اختبار="" دونيت="" ،="" ف=""><0.001]. بعد="" الإعطاء="" الفموي="" للاعتلال="" الدماغي="" الرضحي="" المزمن="" في="" مجموعة="" الجرعات="" العالية="" ،="" لوحظ="" زيادة="" كبيرة="" في="" مستوى="" ht="" 5-="" [أحادي="" الاتجاه="" anova،="" f="" (4،34)="17." 13،="" p="0." 0001="" ؛="" اختبار="" دونيت="" ،="" p=""><0.001] بينما="" لم="" تتغير="" تركيزات="" ne.="" وبالمثل="" ،="" تم="" تقليل="" تعبير="" bdnf="" بشكل="" كبير="" في="" مجموعة="" نموذج="" cus="" مقارنة="" بالفئران="" غير="" المجهدة="" (اختبار="" الطالب="" ،="" t="4." 171="" ،="" p=""><0.01) (الشكل="" 2c).="" كل="" من="" الإعطاء="" الفموي="" للاعتلال="" الدماغي="" الرضحي="" المزمن="" بجرعة="" عالية="" (اختبار="" الطالب="" ،="" t="2." 548="" ،="" p=""><0.05) و="" flx="" (اختبار="" الطالب="" ،="" t="2." 263="" ،="" p=""><0.05 )="" زيادة="" تعبير="" bdnf="" مقارنة="" بمجموعة="" نموذج="" cus.="" لم="" يظهر="" cte="" بجرعة="" منخفضة="" أي="" تأثير="" معنوي="" على="" تعبير="">

كان مستوى {0} HT في القولون في فئران CUS مختلفًا عن مستواه في قرن آمون ، ولم يكن لإجراء ضغط الأسبوع 4- أي تأثير على القولون 5- HT (الشكل 2 د ). على العكس من ذلك ، فإن الإعطاء الفموي للاعتلال الدماغي الرضحي المزمن بجرعة عالية يحفز 5- مستويات HT في القولون بالمقارنة مع مجموعة نموذج CUS (Student's t-test ، t=2. 173، p <0.05). لم="" يظهر="" cte="" بجرعة="" منخفضة="" أي="" تأثير="" على="" مستوى="" ht="" للقولون="">

نظمت CTE التركيب الميكروبي للأمعاء لجرذان CUS

تم تقييم تأثير CTE على التركيب الميكروبي لأمعاء فئران CUS من خلال طريقة تسلسل الجين 16S rRNA. وجد أن 28 يومًا من الإعطاء الفموي للاعتلال الدماغي الرضحي المزمن قد أدى إلى تغيير التركيب الميكروبي في القناة الهضمية لجرذان CUS وأثر على العديد من الكائنات الحية.

مستويات التصنيف الميكروبي بين مجموعات الفئران (مستوى الفئة 1 ، مستوى الترتيب 1 ، مستوى الأسرة 1 ، مستوى الجنس 8 ، مستوى الأنواع 2). يشير هذا إلى أن المجتمع الميكروبي في الأمعاء يمكن أن يلعب دورًا في التأثيرات المضادة للاكتئاب من الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن. يتم عرض معلومات مفصلة عن الأصناف الميكروبية المعوية المتغيرة بشكل كبير على مستويات تصنيفية مختلفة في الجدول 2.

أسفر تسلسل MiSeq عن ما مجموعه 2،132،980 قراءة أولية ، بعد مراقبة الجودة وتقليل الضوضاء وعملية إزالة الوهم. بعد ذلك ، تم تجميع القراءات في OTUs ، والتي تم تخصيصها للتصنيف من فئة إلى مستوى الأنواع. تم إجراء دراسة تحليل تنوع بيتا لاستكشاف تشابه أنماط المجتمع البكتيري بين مجموعات الفئران الخمس. يظهر PCoA استنادًا إلى مسافات UniFrac الموزونة لميكروبات الأمعاء من مجموعات الفئران الخمس للدراسة في الشكل 3 أ. أظهر تحليل تنوع بيتا بواسطة PCoA فصلًا واضحًا للمجتمع الميكروبي عن المجموعة الضابطة ومجموعة نموذج CUS ، في حين أن CTE مع مجموعة الجرعات العالية تميل إلى أن تكون أقرب إلى المجموعة الضابطة مقارنة بمجموعة CUS.

Metastatic analysis was used to investigate the differences in gut microbial taxonomic composition among different groups. At the phylum level, the most dominant microbial taxa in the five rat groups were Firmicutes and Bacteroidetes (Figure 3B). Lactobacillus, Ruminococcus, Blautia, Bacteroides, and Prevotella were the most highly abundant microbial taxa at the genus level (Figure 3C). The two dominant phyla, Firmicutes and Bacteroidetes, accounted for a combined relative abundance of >90 بالمائة . كما هو مبين في الأشكال التكميلية S5A و B ، تسبب إجراء الإجهاد لمدة 4 أسابيع في اتجاه غير مهم نحو زيادة مستوى الثبات وانخفاض غير ملحوظ في Bacteroidetes في مجموعة نموذج CUS مقارنة بمجموعة التحكم. بعد الإعطاء اليومي للاعتلال الدماغي الرضحي المزمن بجرعة عالية وجرعة منخفضة ، عادت الوفرة النسبية للعناصر المتينة والجراثيم إلى مستويات مماثلة للمجموعة الضابطة ، على الرغم من عدم وجود دلالة إحصائية. وعلى الرغم من ملاحظة تغييرات مماثلة في نسبة Firmicutes / Bacteroidetes بين مجموعات الفئران ، لم تظهر فروق ذات دلالة إحصائية (الشكل التكميلي S5C). تم العثور على اتجاه غير مهم نحو انخفاض مستوى البكتيريا الزرقاء في مجموعة نموذج CUS مقارنة بالفئران غير المجهدة ؛ في حين أن إعطاء CTE بجرعة عالية أدى إلى زيادة كبيرة في الوفرة النسبية للبكتيريا الزرقاء مقارنة بمجموعة CUS (الشكل التكميلي S5D).

على مستوى الجنس ، كانت Bacteroides و Ruminococcus من أكثر الأصناف الميكروبية وفرة والتي تمثل ما يقرب من 30 في المائة من الوفرة النسبية في جميع مجموعات الفئران الخمس. تسبب إجراء الإجهاد لمدة أربعة أسابيع في انخفاض كبير في الوفرة النسبية من Bacteroides وزيادة كبيرة في Ruminococcus في مجموعة نموذج CUS مقارنة بالفئران غير المجهدة (الأشكال 4 أ ، ب). أدت الإدارة طويلة المدى لـ CTE إلى زيادة معنوية في وفرة Bacteroides بالإضافة إلى انخفاض كبير في Ruminococcus مقارنة بفئران CUS. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت ستة أجناس من Parabacteroides و Butyricimonas و Deinococcus و Weissella و Trichococcus و Brachybacterium فروق ذات دلالة إحصائية بين مجموعة نموذج CUS والمجموعة الضابطة (الأشكال 4C-H). بعد 28 يومًا من علاج الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن ، تم تغيير الوفرة النسبية للأجناس الستة المذكورة أعلاه على التوالي إلى مستويات مماثلة لمجموعة التحكم.

تم اكتشاف وفرة منخفضة من Deinococcus في مستويات تصنيفية مختلفة بما في ذلك مستوى الفئة (Deinococci) ، ومستوى الترتيب (Deinococcales) ، ومستوى الأسرة (Deinococcaceae) ، ومستوى الجنس (Deinococcus) في مجموعة الفئران CUS ، بينما فشل في الكشف عنها في مجموعة السيطرة المجموعة ومجموعات الإدارة (الأشكال 5 أ-د).

على مستوى الأنواع ، كان Weissella beninensis أقل بكثير في مجموعة CUS منه في المجموعة الضابطة ، ولوحظت زيادة كبيرة في الوفرة النسبية بعد إعطاء CTE بجرعة عالية (الشكل 5E). على العكس من ذلك ، عكست إدارة CTE الزيادة الكبيرة في الوفرة النسبية لتكتل Brachybacterium الذي لوحظ في فئران CUS (الشكل 5F).

CTE SCFAs المعدلة CTE في CUS الجرذان

تم تحليل تركيزات SCFAs (بما في ذلك الأسيتات ، والبروبيونات ، والزبدات ، والأيزوبوتيريت ، وحمض الفاليريك ، وحمض الأيزوفاليريك ، وحمض الهكسانويك) في عينات براز الفئران بواسطة GC وهي موضحة في الشكل 6. مستويات الأسيتات [أحادي الاتجاه ANOVA ، F ( 4،32)=2. 721 ، ص=0. 0 467 ؛ اختبار Dunnett ، p <0. 0="" 5]="" وحمض="" hexanoic="" [أحادي="" الاتجاه="" anova،="" f="" (4،3="" 0)="3." 028،="" p="" {{15="" }}.="" 0328="" ؛="" تمت="" زيادة="" اختبار="" dunnett="" ،="" p=""><0.05] بشكل="" كبير="" في="" مجموعة="" الفئران="" النموذجية="" cus="" مقارنة="" بمجموعة="" التحكم.="" بعد="" تناول="" cte="" لفترة="" طويلة="" بجرعة="" عالية="" ،="" أسيتات="" (اختبار="" الطالب="" ،="" t="2." 182،="" p=""><0.05) وحمض="" هيكسانويك="" [أحادي="" الاتجاه="" anova،="" f="" (4،30)="3" .028="" ،="" ص="0." 0328="" ؛="" انخفض="" اختبار="" dunnett="" ،="" p=""><0.05] في="" الغالب="" عند="" مقارنتها="" بمجموعة="" cus="" ،="" مما="" يشير="" إلى="" أن="" cte="" قد="" يمارس="" نشاطه="" المضاد="" للاكتئاب="" من="" خلال="" تعديل="" scfas="" المستقلب="" العصبي="" المضطرب.="" أظهرت="" إدارة="" cte="" مع="" مجموعة="" الجرعات="" المنخفضة="" اتجاهاً="" تنازلياً="" ولكن="" لم="" يكن="" لها="" تأثير="" ملحوظ="" على="" تركيزات="" الأسيتات="" وحمض="">

تحليل الارتباط بين ميكروبيوتا الأمعاء ، والناقلات العصبية ، والغذاء العصبي في الحصين ، 5- في القولون ، و SCFAs

لاستكشاف العلاقة الوظيفية لميكروبات الأمعاء المتغيرة في مستوى الجنس ، والنواقل العصبية المتغيرة والتغذيات العصبية في الحصين والقولون ، والتركيز المزعج لـ SCFAs ، تم تطوير معاملات ارتباط بيرسون (Meng et al. ، 2 0 17). يظهر الارتباط بينهما (r> 0. 4 أو r <-0. 4،="" p=""><0.05) في="" الشكل="" 7.="" تشير="" المعاملات="" إلى="" ارتباطات="" قوية="" بين="" تكوين="" الكائنات="" الحية="" الدقيقة="" المعوية="" المتغيرة="" في="" مستوى="" الجنس="" ،="" والتركيز="" من="" سبعة="" أنواع="" من="" scfas="" ،="" والناقلات="" العصبية="" أحادية="" الأمين="" المرتبطة="" بالاكتئاب="" (5-="" ht="" و="" ne).="" أظهرت="" وفرة="" ruminococcus="" ارتباطًا="" سلبيًا="" مهمًا="" مع="" تركيز="" ht="" 5-="" في="" الحصين="" ،="" مما="" يعني="" أن="" إجراء="" cus="" يؤدي="" إلى="" زيادة="" الوفرة="" النسبية="" لـ="" ruminococcus="" وانخفاض="" في="" 5-="" تركيزات="" ht.="" بعد="" العلاج="" بـ="" cte="" ،="" تم="" تقليل="" الوفرة="" النسبية="" لـ="" ruminococcus="" إلى="" مستوى="" المجموعة="" الضابطة="" ،="" ووجد="" أن="" مستويات="" ht="" 5-="" قد="" تحسنت.="" علاوة="" على="" ذلك="" ،="" كانت="" الوفرة="" النسبية="" من="" bacteroides="" مرتبطة="" بشكل="" إيجابي="" بمستوى="" ht="" 5-="">

الحصين ، ويرتبط سلبًا بتركيز الزبدات ، الأيزوبوتيريت ، حمض الفاليريك ، حمض الأيزوفاليريك ، وحمض الهكسانويك ؛ أظهرت وفرة البارابكتيرويد ارتباطًا إيجابيًا مهمًا مع مستوى HT في الحصين وتركيز البروبيونات 5- ، بينما أظهرت ارتباطًا سلبيًا بتركيزات الأيزوبوتير وحمض الأيزوفاليريك ؛ كما لوحظ وجود ارتباط إيجابي كبير بين الوفرة النسبية لمستوى Butyricimonas ومستوى NE في قرن آمون ، وكانت الوفرة النسبية لـ Deinococcus مرتبطة بشكل إيجابي بتركيز الأسيتات. أظهر هذا أن الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن قد يمارس نشاطه المضاد للاكتئاب عن طريق تغيير تركيبة ميكروبيوتا الأمعاء ، وإزعاج مستويات الناقل العصبي للحصين ، واستعادة المستقلبات العصبية النشطة SCFAs. يتم عرض البيانات التفصيلية لتحليل الارتباط في الجدول التكميلي S3.

cistancheيمكن أن يعالجداء السكري

نقاش

تحديد النشاط المضاد للاكتئاب للاعتلال الدماغي الرضحي المزمن ومزاياه السريرية

قيمت هذه الدراسة النشاط المضاد للاكتئاب لـ CTE في فئران CUS ، وأكدت فعالية النماذج في الجسم الحي مثل FST و SPT و OFT و NSFT ، وأكدت النشاط المضاد للاكتئاب لـC. tubulosaفي فئران CUS التي تستخدم بشكل متكرر لعلاج نقص الكلى والعجز الجنسي والعقم عند النساء في الطب الصيني التقليدي. حاليًا ، أكثر مضادات الاكتئاب شيوعًا هي مثبطات امتصاص السيروتونين والنوربينفرين (SNRI) فينلافاكسين ، يليها مثبط امتصاص السيروتونين الانتقائي (SSRI) FLX (Thase et al. ، 2001 ؛ Mcintyre ، 2017). ومع ذلك ، فقد ثبت أن هذه مضادات الاكتئاب لها آثار جانبية شديدة بما في ذلك تسمم القلب وضغط الدم والضعف الجنسي واضطرابات النوم (فيرغسون ، 2001 ؛ جين وآخرون ، 2015). من بين جميع فئات مضادات الاكتئاب ، يرتبط SSRI و SNRI بأعلى نسبة من الخلل الوظيفي الجنسي (Montejogonzalez et al. ، 1997 ؛ Clayton et al. ، 2014). وتجدر الإشارة بشكل خاص إلى معدل الإصابة العام بالعجز الجنسي ، والذي يبلغ 59.1٪ (604/1022) عندما يتم اعتبار جميع مضادات الاكتئاب ككل ؛ وحوالي 40 في المائة من المرضى يظهرون تحملاً منخفضًا للضعف الجنسي ، وبالتالي فإن الامتثال للأدوية يتأثر بشدة (كلايتون ، 2001). في ضوء عيوب علاج الاكتئاب الحالي ، يُظهر Cistanches Herba إمكانات كبيرة للتطبيق السريري ، ليس فقط بسبب نشاطه القوي كمضاد للاكتئاب ولكن أيضًا بسببسيستانش هرباتم استخدامه تقليديًا لعلاج العجز الجنسي ، والذي ينبغي على الأقل القضاء على مصدر قلق واحد من الآثار الجانبية الأكثر شيوعًا التي تسببها مضادات الاكتئاب الأخرى (فو وآخرون ، 2017). بالإضافة إلى ذلك ، لا تظهر Cistanches Herba أي علامات على السمية والتغيرات المرتبطة بالعلاج