التأثيرات المضادة للأكسدة ومضادات التخثر لجليكوسيدات فينيل بروبانويد

لمزيد من المعلومات: ali.ma@wecistanche.com

بارتوش سكالسكي وآخرون

الملخص

تشتهر نباتات الطفيليات Holoparasitic في Orobanchaceae ، بما في ذلك Cistanche و Orobanche و Phelipanche spp ، بثرائها فيفينيل بروبانويدجليكوسيدات(PPGs). تم العثور على العديد من مركبات PPG تمتلك مجموعة واسعة من الأنشطة ، مثل مضادات الميكروبات ومضادات الالتهابات ومضادات الأكسدة وتقوية الذاكرة. لاستكشاف إمكانات النشاط الحيوي لعنب البروم الأوروبي بشكل أفضل (O. Caryophyllaceae - OC ، P. Arenaria - PA ، P. ramosa - PR) وعشرة مكونات فردية معزولة من فينيل بروبانويد ، قمنا بفحص تأثيرها المضاد للفطريات ، وتأثيرها الوقائي ضد الأكسدة في البلازما في نظام المختبر والتأثير على معاملات التخثر. أظهرت المستخلصات المختبرة نشاط تنظيف بنسبة 50-70 في المائة من قوة ترولوكس. يحتوي مستخلص OC ، الغني بالأكتيوسيد ، على إمكانات مضادة للجراثيم أفضل بنسبة تزيد عن 20 في المائة من مستخلص PR الذي كان الوحيد الذي يحتوي على PPGs الذي يفتقر إلى جزء الكاتيكول الدائري B في وحدة الأسيل. علاوة على ذلك ، وجد أن ثمانية فقط PPGs تم اختبارها(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)أظهرت إمكانات مضادات الأكسدة في البلازما البشرية المعالجة بـ H2O2 / Fe ؛ ومع ذلك ، تم اختبار PPGs الثلاثة(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)يمتلك إمكانات مضادة للتخثر بالإضافة إلى خصائصه المضادة للأكسدة. يبدو أن بنية PPGs ، وخاصة وجود شقوق الأسيل والكاتيكول ، ترتبط بشكل أساسي بخصائصها المضادة للأكسدة. ترتبط أيضًا إمكانات مضادات التخثر لهذه المركبات بتركيبها الكيميائي. تظهر PPGs المختارة إمكانية علاج أمراض القلب والأوعية الدموية المرتبطةمؤكسدضغط عصبى.

الكلمات الدالة:Broomrape ، جليكوسيدات فينيل بروبانويد ، الإجهاد التأكسدي ، إرقاء البلازما

سيستانشلديهافينيل بروبانويدجليكوسيدات

انقر لمنتجات Cistanche

1 المقدمة

مؤكسدضغط عصبىمعروف على نطاق واسع بتأثيره السلبي على صحة الكائنات الحية ، بما في ذلك الشيخوخة المتسارعة وبعض أنواع السرطان. وقوعمؤكسدضغط عصبىيرتبط باضطراب التوازن بين الآليات المؤكسدة ومضادات الأكسدة (بما في ذلك الأنزيمية (الكاتلاز ، الجلوتاثيون بيروكسيديز) والدفاع غير الأنزيمي (الجلوتاثيون)) في خلايا الجسم [1]. يعد الإفراط في إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ، بما في ذلك الجذور المؤكسدة وأنواع القشرة المغلقة ، أحد الآليات الرئيسية وراء تكوين الإجهاد التأكسدي. ومع ذلك ، فإن التأثير البيولوجي الناجم عن أنواع الأكسجين التفاعلية يعتمد إلى حد كبير على التركيز ووقت التعرض والموقع. في ظل الظروف العادية (تركيز منخفض) ، يمكن أن تلعب جذور الأكسجين / النيتروجين دور الرسل الثانوي ، ولكن في المستوى الأعلى ، قد تبدأ في التفاعل مع الهياكل البيولوجية ، مثل أغشية الخلايا [2]. من بين جميع أنواع أنواع الأكسجين التفاعلية ، تسبب جذور الهيدروكسيل (H O.) في حدوثمؤكسدالضغوطمن المعروف أنه يلعب دورًا مهمًا في مجموعة من الأمراض ، بما في ذلك أمراض القلب والأوعية الدموية. ارتبطت اضطرابات نظام الدم و / أو سبقتها تغيرات في معايير مختلفة للإرقاء والعلامات الحيوية في البلازما [1 ، 3].

من ناحية أخرى ، تم تحديد العديد من المواد الطبيعية ، مثل البوليفينول والأحماض الدهنية المتعددة غير المشبعة ، كمضادات أكسدة قوية قادرة على منع تكوين و / أو تقليل أنواع الأكسجين التفاعلية. تم العثور على المركبات مع هذه الخصائص في العديد من المنتجات الغذائية والمستحضرات الصيدلانية من أصل نباتي. لذلك يوصى على نطاق واسع باتباع نظام غذائي غني بالخضروات والفواكه الطازجة والعلاجات المضادة للأكسدة القائمة على مضادات الأكسدة الطبيعية لأنها يمكن أن تقلل من مستوىمؤكسدضغط عصبىومنع العمليات المرضية الفيزيولوجية المختلفة [4،5]. البوليفينول النباتي عبارة عن مجموعة متنوعة من المستقلبات الثانوية ، من بينها تحتل الأحماض الفينولية مكانًا مهمًا ، حيث يتم توزيعها على نطاق واسع وتظهر مجموعة متنوعة من التأثيرات البيولوجية ، مثل مضادات الميكروبات ومضادات الأكسدة ومضادات الالتهابات.فينيل بروبانويدجليكوسيدات(PPGs) هي مشتقات إستر لحمض الهيدروكسيسيناميك وهي الفئة الرئيسية / الوحيدة من المستقلبات الثانوية الموجودة في نباتات Orobanchaceae ، بما في ذلك Cistanche و Orobanche و Phelipanche spp. العديد من الأنواع من هذه العائلة هي آفات خطيرة للمحاصيل التي يريد المزارعون التخلص منها في الحقول (مثال على Phelipanche ramosa) ، القليل منها يستخدم في علم الأدوية ، بينما معظمها ليس له أهمية كبيرة للإنسان. يستخدم Herba Cistanche على نطاق واسع في الطب التقليدي الآسيوي في علاج قصور الكلى وكعامل لتقوية المناعة والذاكرة ، ومكافحة الشيخوخة ، ومضاد التعب [6]. أثبتت التحليلات الكيميائية النباتية لمجموعات البحث المختلفة ذلكفينيل بروبانويدجليكوسيدات، مثل acteoside و echinacoside و podium side ، هي واحدة من المكونات النشطة الرئيسية لـ Herba Cistanche [7]. دراسة حديثة للعديد من أنواع broomrape وجدت في بولندا بواسطة Jedrejek et al. [8] أظهر أن هذه المادة النباتية لها تركيبة نوعية مماثلة (هيمنة PPGs)(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)علاوة على ذلك ، فإنه يساوي أو حتى يتجاوز Cistanche spp. من حيث محتوى المواد الفعالة [8]

هدفت الدراسة الحالية إلى تقييم إمكانات مضادات الأكسدة ومضادات التأكسد ، وكذلك التأثير على عوامل الإرقاء في مستخلصات الهالوك الثلاثة (Orobanche caryophyllacea - OC ، Phelipanche Arenaria - PA ، and P. ramosa - PR) الغنية بمختلف الفينيل بروبانويد ، مثل بالإضافة إلى مكونات PPG الفردية الخاصة بهم. تم قياس السعة المضادة للفطريات باستخدام 2،2′-azinobis -3- ethylbenzthiazoline -6- حمض السلفونيك / مكافئ ترولوكس (ABTS / TE) و 2 ، 2- ثنائي فينيل -1- بيكريل هيدرازيل (DPPH ) الاختبارات. المؤكسدضغط عصبىفي نظام اختبار البلازما باستخدام شق الهيدروكسيل (H2O2 / Fe) ، ثم بيروكسيد الدهون (مقايسة الأنواع المتفاعلة لحمض الثيوباربيتوريك (TBARS)) ، وتم قياس مستوى البروتينات الكربونية ومجموعات الثيول. من بين المعلمات المحددة للإرقاء: زمن الثرومبوبلاستين الجزئي المنشط (APTT) ، زمن البروثرومبين (PT) ، ووقت الثرومبين (TT).

سيستانشلديهافينيل بروبانويدجليكوسيدات

2. المواد والأساليب

2.1. مواد كيميائية

2 ، 2- diphenyl -1- picrylhydrazyl root (DPPH) ، 2،2′-azinobis -3- ethylbenzthiazoline -6- حمض السلفونيك (ABTS) ، بيرسلفات البوتاسيوم ، 6- هيدروكسي -2 ، 5،7 ، 8- رباعي ميثيل كرومان -2- حمض الكربوكسيل (ترولوكس) ، ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) ، حمض الثيوباربيتوريك (TBA) ، حمض الفورميك (درجة LC-MS) ، و H2O2 تم شراؤها من Sigma-Aldrich (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الحصول على الميثانول (درجة التدرج HPLC) والأسيتونيتريل (درجة LC-MS) من شركة Merck (دارمشتات ، ألمانيا). تم اختبار عشرة مركبات فينيل بروبانويد في هذا العمل ، بما في ذلك 2′-O-acetylacteoside (97 بالمائة) ، 2′-O-acetylpoliumoside (98 بالمائة) ، 3- O-methylpoliumoside (96 بالمائة) ، أكتيوسيد (99 بالمائة) ، الساحة الداخلية (97 في المائة) ، كريناتوسيد (98 في المائة) ، تينيبوسيد (99 في المائة) ، بوليوموسيد (99 في المائة) ، توبولوسيد أ (96 في المائة) ، ومانيوسيد مانيوسيد د (96 في المائة) تم عزلهم سابقًا من قبلنا من نبات أدناه مادة [8]. تم تقييم نقاء المركبات باستخدام تحليل UHPLC-PDA-MS. تم تحضير المياه عالية النقاء داخل المنزل باستخدام نظام تنقية المياه Milli-Q (شركة Millipore Co.). كانت الكواشف الأخرى من الدرجة التحليلية وقدمها الموردون التجاريون المحليون.

2.2. المواد النباتية

تم التعرف على النباتات المزهرة من ثلاثة أنواع من الهالووين ، بما في ذلك Orobanche Caryophyllaceae Sm. و Phelipanche Arenaria Pomel و P. ramosa (L.) Pomel بواسطة الأستاذ. Renata Piwowarczyk (Jan Kochanowski Uni versity ، كيلسي ، بولندا) وتم جمعها من مصدر طبيعي في بولندا. عينات القسائم (O. Caryophyllaceae - Chomentowek ´ (50.3349◦N ، 20.4000◦E) ، والأراضي العشبية الجافة ، وتطفل على Galium boreale ، مايو 2014 ؛ P. Artemisia campestris ، يونيو 2014 ؛ تم إيداع P. ramosa - Szewce (50.3553◦N ، 22.3038◦E) ، الحقل ، التطفل Solanum Lycopersicum ، سبتمبر 2014) في معشبة جامعة Jan Kochanowski في Kielce (KTC). تم تجفيف المواد النباتية بالتجميد وطحنها جيدًا قبل الاستخراج.

2.3 تحضير مستخلصات المكانس

المواد النباتية المسحوقة (O. Caryophyllaceae (OC) - 2 جم ، P. Arenaria (PA) - 3 جم و P. ramosa (PR) - 3 جم) تم استخلاصها بنسبة 80 بالمائة MeOH عند 40 درجة مئوية و 1500 رطل / بوصة مربعة (ضغط المذيب ) باستخدام مستخرج المذيبات المعجل ASE 200 (Dionex ، Sunnyvale ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تبخير المستخلصات وتجفيفها بالتجميد (مجفف التجميد Gamma 2–16 LSC ، Christ ، ألمانيا). كانت كفاءة الاستخراج لـ OC و PA و PR 55 بالمائة و 37 بالمائة و 43 بالمائة من وزن المادة النباتية على التوالي. بسبب المحتوى العالي من الكربوهيدرات (البيانات غير معروضة) ، تمت تنقية المستخلصات الخام بشكل أكبر عن طريق استخلاص المرحلة الصلبة (SPE) على العمود الصغير Oasis HLB (500 مجم ؛ ووترز ، ميلفورد ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية). تمت إزالة السكريات بنسبة 1 في المائة MeOH ، ثم تمت التصفية من المركبات ذات الأهمية بنسبة 80 في المائة MeOH. بعد إزالة المذيب ، تم تجميد مستخلصات OC و PA و PR بالتجميد (مجفف التجميد Gamma 2-16 LSC) ، وكانت حصيلة تنقية SPE 53 بالمائة (OC) و 67 بالمائة (PA) و 51 بالمائة (PR) .

2.4 الخصائص الكيميائية النباتية لمستخلصات المكانس

تم إجراء التحليلات النوعية والكمية لمستخلصات broomrape باستخدام نظام ACQUITY UPLC (Waters) المتصل بكاشف صفيف الثنائي الضوئي (PDA) ومقياس طيف كتلة رباعي الترادف (TQD-MS / MS). تم إذابة مستخلصات OC و PA و PR المجففة بالتجميد في 5 0 بالمائة من الميثانول بتركيز 0 .5 0 مجم / مل ثم تم تحليلها كروماتوجرافيًا على عمود BEH C18 (1 { {21}} 0 × 2.1 مم ، 1.7 ميكرومتر ، مياه). كانت الظروف الكروماتوغرافية على النحو التالي: درجة حرارة الفرن - 25 درجة مئوية ، التدرج الخطي 10 → 25 بالمائة من الطور المتحرك B (0.1 بالمائة حمض الفورميك في الأسيتونتريل) في الطور المتحرك A (0.1 بالمائة حمض الفورميك في H O) خلال 12 دقيقة ، معدل التدفق - 0.4 مل / دقيقة ، حجم الحقن - 2 ميكرولتر ، نطاق الأشعة فوق البنفسجية - 190-490 نانومتر (دقة 3.6 نانومتر). تم إجراء تحليل MS في وضع الأيونات السالبة مع التأين بالرش الكهربائي (ESI) ، باستخدام الإعدادات التالية: نطاق المسح 100-1200 م / ع. الجهد الشعري 2.8 كيلو فولت ؛ جهد مخروط 35 فولت ؛ درجة حرارة المصدر 150 درجة مئوية ؛ درجة حرارة الذوبان 450 درجة مئوية ؛ تدفق غاز الانحلال 900 لتر / ساعة ، وتدفق الغاز المخروطي 100 لتر / ساعة. تم إجراء الحصول على البيانات ومعالجتها باستخدام برنامج Waters MassLynx 4.1.

تم تحديد قمم Phenylpropanoid glycoside (PPG) من خلال مقارنة بيانات LC-MS التي تم الحصول عليها مع تلك الخاصة بالمركبات المعزولة سابقًا [8]. الكمي من PPGs(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)في مقتطفات broomrape على أساس طريقة UPLC-UV مع الكشف عند 33 0 نانومتر ، ومعايرة قياسية خارجية باستخدام أكتيوسيد (Sigma-Aldrich ، أكبر من أو يساوي 99 بالمائة ، HPLC) كمعيار جماعي. تم تحضير منحنى معايرة خطي بستة تركيزات في حدود 1-200 ميكروغرام / مل وأظهر خطية جيدة (R2 أكبر من أو يساوي 0.999). تمثل النتائج الكمية متوسط ​​± قيمة SD لثلاث حقن وتم التعبير عنها كمكافئات أكتيوسيد ملليغرام (مكافئ) لكل جرام من المستخلص (مجم أكتيوزيد مكافئ / جم).

سيستانشلديهافينيل بروبانويدجليكوسيدات

2.5 نشاط مضاد للشيخوخة في المختبر

2.5.1. مقايسة الكسح الجذري ABTS

تم إجراء اختبار ABTS المضاد باستخدام الطريقة التي وصفها Kontek et al. [9] ، مع تعديلات طفيفة على النحو التالي: تم استخدام 20 بالمائة MeOH لتحضير الكواشف (7 ملي مولار أبس و 4.9 ملي مولار كبريتات البوتاسيوم) ؛ محاليل مستخلصات OC و PA و PR ، بأربعة مستويات تركيز في حدود 100 400 ميكروغرام / مل ، ومحاليل ترولوكس عند ستة مستويات تركيز في حدود 10 250 ميكروغرام / مل ، تم تحضيرها بنسبة 50 بالمائة. MeOH. كانت نسبة العينة إلى محلول ABTS بالإضافة إلى العمل 1:25 (ت / ت). تم قياس الامتصاصية عند 734 نانومتر بعد 30 دقيقة من الحضانة في الظلام باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV-vis (Evolution 260 Bio، Thermo Fisher Scientific Inc.، Waltham، MA، USA).

تم حساب تثبيط الامتصاصية (النسبة المئوية) على النحو التالي: [(Abscontrol – Abssample) / Abscontrol] × 100.

تم حساب معادلات Trolox (TE) لمستخلصات عشبة المكان باستخدام الصيغة TE {0} العينة / المعيار ، حيث m هو ميل منحنيات الخط المستقيم (تثبيط الامتصاص مقابل التركيز). تصف قيمة TE للعينة نشاطها الطبيعي ضد Trolox (TEstandard =1. 0). تم الوصول إلى قيم IC 50 لمستخلص OC و PA و PR و Trolox بشكل تجريبي ، ثم تم حسابها من منحنيات الخط المستقيم (تثبيط الامتصاص مقابل التركيز) وتم التعبير عنها في ميكروغرام / مل.

تم إجراء الفحص في ثلاث نسخ ، وعرضت النتائج كوسيلة ± الانحرافات المعيارية (SD).

2.5.2. مقايسة الكسح الجذري DPPH

تم إجراء اختبار DPPH المضاد للجراثيم باستخدام الطريقة التي وصفها Jedrejek et al. [8] وبراند ويليامز وآخرون. [10] ، مع تعديلات طفيفة على النحو التالي: محاليل مستخلصات OC و PA و PR ، بأربعة مستويات تركيز في نطاق 50 250 ميكروغرام / مل ، ومحاليل ترولوكس ، عند مستوى تركيز ستة في نطاق 10− 250 ميكروغرام / مل ، تم تحضيرها بنسبة 50 بالمائة MeOH. كانت نسبة العينة إلى DPPH 1:19 (ت / ت). تم قياس الامتصاصية عند 517 نانومتر بعد 30 دقيقة من الحضانة في الظلام باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV-vis (Evolution 260 Bio).

تم حساب تثبيط الامتصاصية (النسبة المئوية) على النحو التالي: [(Abscontrol – Abssample) / Abscontrol] × 100.

تم حساب قيم مكافئ ترولوكس (TE) و IC50 لعينات الاختبار بنفس الطريقة كما في اختبار ABTS (القسم 2.5.1). تم إجراء الفحص في ثلاث نسخ ، وعرضت النتائج كوسائل ± SD.

2.6. مخزون الحلول من المركبات النباتية المختبرة والمستخلصات للتجارب مع البلازما البشرية

تم تحضير محاليل مخزون المركبات المختبرة والمستخلصات النباتية في 5 0 بالمائة من DMSO. كان التركيز النهائي لـ DMSO في العينات المختبرة أقل من 0.05٪ وتم تحديد تأثيره في جميع التجارب.

2.7. عزل البلازما البشرية

تم الحصول على الدم البشري ، أو البلازما ، من ستة متبرعين منتظمين (رجال ونساء غير مدخنين) إلى بنك الدم (لودز ، بولندا) ومركز طبي (لودز ، بولندا). تم جمع الدم كمحلول CPD (سترات / فوسفات / سكر العنب ؛ 9: 1 ؛ v / v دم / CPD) أو محلول CPDA (سترات / فوسفات / ديكستروز / أدينين ؛ 8.5: 1 ؛ ت / ت ؛ دم / CPDA). لم يأخذ المتبرعون أي دواء أو مواد مسببة للإدمان (بما في ذلك التبغ والكحول ومكملات مضادات الأكسدة) لمدة أسبوعين على الأقل قبل التبرع. تم إجراء تحليلنا لعينات الدم وفقًا للمبادئ التوجيهية لإعلان هلسنكي للبحوث البشرية وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات البحث في التجارب البشرية في جامعة لودز. تم تحضير البلازما بالطرد المركزي لدم الإنسان الطازج عند 4500x جم لمدة 25 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. تم حساب تركيز البروتين عن طريق قياس امتصاص العينات المختبرة عند 280 نانومتر ، وفقًا لإجراء ويتاكر وجرانوم [11].

سيستانشلديهافينيل بروبانويدجليكوسيدات

2.8. علامات الإجهاد التأكسدي في بلازما الإنسان

2.8.1. قياس بيروكسيد الدهون

تم تحديد كمية بيروكسيد الدهون في البلازما عن طريق قياس تركيز المواد المتفاعلة لحمض الثيوباربيتوريك (TBARS). تم حساب تركيز TBARS باستخدام معامل الانقراض المولي (ε =156 ، 000 M− 1cm− 1). يتم وصف الطريقة بشكل أكثر دقة في مكان آخر [12 ، 13].

2.8.2. قياس مجموعة كاربونيل

تم حساب مستوى مجموعات الكاربونيل باستخدام معامل الانقراض المولي (ε=22 ، 000 M− 1 cm− 1) وتم التعبير عنها كمجموعات nmol carbonyl / mg من بروتين البلازما ، وفقًا لبارتوش [13 ] وليفين وآخرون. [14].

2.8.3. تحديد مجموعة ثيول

تم قياس محتوى مجموعة الثيول في بروتينات البلازما بطريقة طيفية باستخدام SPECTROstar Nano Microplate Reader (BMG LABTECH ، ألمانيا) عن طريق الامتصاص عند 412 نانومتر مع 5،5′-dithiol-bis - (2- nitrobenzoic acid). تم وصف الطريقة بمزيد من التفصيل في مكان آخر [15–17].

2.9 معلمات الارقاء

2.9.1. قياس زمن البروثرومبين (PT)

تم تحديد PT بطريقة قياس التخثر باستخدام محلل التخثر البصري (نموذج K -3002 ، Kselmed ، Grudziadz ، بولندا) وفقًا لمالينوسكا وآخرون. [18].

2.9.2. قياس زمن الثرومبين (TT)

تم تحديد TT بطريقة قياس التخثر باستخدام محلل التخثر البصري (نموذج K -3002 ، Kselmed ، Grudziadz ، بولندا) ، وفقًا للطريقة التي وصفها Malinowska et al. [18].

2.9.3. قياس زمن الثرومبوبلاستين الجزئي المنشط (APTT)

تم تحديد APTT بقياس تجلط الدم باستخدام محلل التخثر البصري K {{0} (Kselmed ، Grudziadz ، بولندا) وفقًا لـ Malinowska et al. [18].

2.10. تحليل البيانات

تم إجراء اختبار Q-Dixon للتخلص من البيانات غير المؤكدة. تم اختبار البيانات للتوزيع الطبيعي باستخدام اختبار شابيرو-ويلك ومساواة التباين مع اختبار ليفين. تم تحديد فروق ذات دلالة إحصائية باستخدام ANOVA ، متبوعة باختبار Tukey للمقارنات المتعددة أو اختبار Kruskal-Wallis. تم اعتبار المقارنات مهمة في p <0. 05.="" يتم="" تقديم="" القيم="" كوسائل="" ±="" sd="">

3. النتائج والمناقشة

عشرة سبق عزلنا من قبلنافينيل بروبانويدجليكوسيدات[8] ، بما في ذلك 2′-O-acetylacteoside ، و 2′-O-acetylpoliumoside ، و 3- O-methylpoliumoside ، و acteoside ، و arena inside ، و crenatoside ، و pheliposide ، و podium side ، و tubuloside A ، و wiedemannioside D ، مع ثلاثة تمت دراسة مستخلصات broomrape (Orobanche Caryophyllaceae (OC) و Phelipanche are naria (PA) و P. ramosa (PR)) للتخفيف حاليًا.مؤكسدضغط عصبىوخصائص مضادة للتخثر في نظام البلازما البشري. يتم عرض التركيبات الكيميائية لمركبات فينيل بروبانويد المختبرة في الشكل 1 ، وكما يمكن رؤيته ، فقد تم بناؤها جميعًا وفقًا لنمط مماثل ، مع نفس الوحدات الفرعية / المتشابهة: هيدروكسي إيروسول ، السكريات الأحادية (الجلوكوز ، الرامنوز ، و / أو زيلوز) وحمض هيدروكسي سيناميك. يتم استبدال معظم مركبات PPG التي تم فحصها بحمض الكافيين ، ولكن يمكن استبدالها إما بحمض الكوماريك أو حمض الفيروليك.

بصرف النظر عن مركبات PPG الفردية ، هناك ثلاثة مستخلصات هالة - OC و PA و PR ، وهي عبارة عن خليط من عدة PPGs(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)وخدم سابقًا كمواد أولية للعزل المركب ، تم تضمينه أيضًا في الدراسة البيولوجية. سبب آخر لاختيار ثلاثة أنواع مختلفة هو الاختلاف الكبير في المظهر الكيميائي النباتي فيما بينها ، كما يتضح من الشكل 2. وترد في الجدول مقارنة أكثر تفصيلاً بين مستخلصات OC و PA و PR ، بما في ذلك البيانات الكمية. 1. كان Acteoside هو المكون الرئيسي لمستخلص O. Caryophyllaceae (690 مجم / جم) ، تينيبوسيد ، والساحة الداخلية التي يغلب عليها P. مستخلص P. ramosa (معًا 640 مجم / جم). اختلفت المستخلصات التي تم فحصها أيضًا في المحتوى الكلي لـ phenylpropanoids ، تم العثور على أعلى كمية في OC (810 مجم / جم) ، وأقل قليلاً في PR (795 مجم / جم) ، وأقل في PA (685 مجم / جم). علاوة على ذلك ، تجدر الإشارة إلى أنه تم اكتشاف وجود PPGs مع شقوق أخرى غير الكافيين ، مثل الكومارويل أو الفيرولويل ، فقط في مستخلص P. ramosa ، حيث شكلت هذه المركبات حوالي سدس إجمالي PPGs (حوالي 120 مجم /. ز) (الجدول 1).

الدراسات السابقة للنشاط المضاد للشيخوخةفينيل بروبانويدجليكوسيداتبواسطة Heilmann et al. [19] و Jedrejek وآخرون. [8] ، بما في ذلك حوالي 30 PPGs مختلفة(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)مثل acteoside و isoacteoside و crenatoside ، كشفت علاقتها القوية ببنية شقوق الأسيل (حمض الفينول والتيروزول). بشكل عام ، أدى تعديل أو استبدال جزء الكاتيكول من وحدة الأسيل إلى انخفاض كبير في نشاط الكسح ضد أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) وجذر DPPH. في الدراسة الحالية ، تم فحص الإمكانات المضادة للجراثيم في المختبر لثلاثة مستخلصات هالة (OC ، PA ، و PR) باستخدام مقايسات ABTS و DPPH ، وتمت مقارنة النتائج مع بعضها البعض وكذلك مع نشاط مكونات فينيل بروبانويد الفردية المقاسة في دراستنا السابقة [8]. تم التعبير عن النتائج كقيم ترولوكس (TE) و IC5 0 (الجدول 2). بشكل عام ، كانت المقتطفات الثلاثة أدوات تنظيف جيدة لكل من جذور ABTS و DPPH ولكن لوحظت أيضًا اختلافات بين العينات المختبرة (قدر TE كان في نطاق 0. 5 - 0. 7 ؛ 1.0 كان ما يعادل ترولوكس). كان نشاط الكسح المضاد للعينات بالترتيب التالي: Trolox> OC> PA> PR. كان لمستخلص Orobanche Caryophyllaceae (IC 50=155 - 275 ميكروغرام / مل) نشاطًا أكبر بنسبة 20 بالمائة من مستخلص راموزا Phelipanche (IC 50=200 - 320 ميكروغرام / مل).

يمكن تفسير أعلى نشاط للكسح الجذري المبلغ عنه لمستخلص OC بواسطة أعلى PPGs(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)المحتوى في هذه العينة ، بالإضافة إلى مدخلات مركب أكتيوسيد السائد ، والذي وفقًا للبحث السابق [8،19] هو أحد أقوى أدوات إزالة الجذور الحرة بين المستقلبات من هذه المجموعة (TEDPPH=0 .87 ؛ [4]). ومع ذلك ، بالنظر إلى العلاقة المتبادلة بين النشاط المضاد للشيخوخة ومحتوى فينيل بروبانويد في مستخلصات OC و PA و PR ، لم يتم العثور على ارتباط بسيط بين هذين العاملين (r <0. 5)="" ،="" مما="" يشير="" إلى="" مدخلات="" مهمة="" من="" الملف="" النوعي.="" يرتبط="" هذا="" بشكل="" أساسي="" بمستخلص="" p.="" ramosa="" ،="" والذي="" على="" الرغم="" من="" ارتفاع="" مستوى="">(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)({0}. 8 جم / جم) تتميز بأقل نشاط بيولوجي بين العينات المختبرة (TE ~ 0. 5). كان مستخلص PR ، كما هو مذكور أعلاه ، هو العينة الوحيدة التي تمتلك فينيل بروبانويد مع أحماض الكوماريك أو الفيروليك ، وهي مواد تفتقر إلى جزء كاتيكول الحلقة B ، والتي تم الإبلاغ عن أنها قللت من إمكانات مضادات الأكسدة. أربعة مركبات PPG بعد تعديل حمض الكافيين ، بما في ذلك 3- O-methylpoliumoside و ramose A و wiedemannioside D ، والتي تم اختبارها من قبلنا كانت TEDPPH حوالي 0.3 [8]. وبالتالي ، فإن النتائج الحالية تتوافق مع وتؤكد نتائج التجارب السابقة لمضادات الجراثيم في المختبر على فينيل بروبانويد.

كما تشين وآخرون. [20] موصوفًا ، يرتبط بقدرة أكبر على التبرع بـ H أو استقرار الراديكالي من خلال مجموعات وظيفية مختلفة من خليط من المركبات. تم تحديد العديد من العناصر الهيكلية على أنها تعزز النشاط المضاد للأكسدة المباشر للبوليفينول ، خاصة تلك المرتبطة بعدد مجموعات الهيدروكسيل وموقعها. من المعتقد أن نشاط إزالة الجذور الحرة يزداد مع زيادة عدد مجموعات –OH. ومع ذلك ، فإن موقع هذه المجموعات ، في الجزيء ، له تأثير أكبر على النشاط المبذول. المركبات القوية المستقرة نسبيًا هي تلك التي تمتلك 3 ، 4- جزء ثنائي هيدروكسي في بنيتها ، بالإضافة إلى تلك التي تمتلك أكثر من مجموعتي هيدروكسيل [21]. يسمح التركيب الكيميائي للمادة المضادة للأكسدة بفهم آلية تفاعل مضادات الأكسدة. Lopez-Munguía et al. [22] بناءً على نظرية الكثافة الوظيفية (DFT) ، حددت حسابات PPGs(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)تستمر آلية مضادات الأكسدة من خلال نقل الإلكترون الفردي المتسلسل لفقدان البروتون (SPLET). ومع ذلك ، Li et al. [23] في محاولة لاستكشاف آليات مضادات الأكسدة الفينول بروبانويد ، خلصت إلى أن PPGs (أكتيوسيد ، فورسيثوسيد ب ، وبوليوموسيد) قد تشارك في مسارات متعددة لممارسة عمل مضادات الأكسدة ، وتعزيز دور مخلفات السكر.

أظهرت الدراسات أن مضادات الأكسدة المشتقة من النباتات هي عوامل فعالة للإرقاء في أمراض القلب والأوعية الدموية [24-26]. النباتات المختلفة المستخدمة في الطب التقليدي تحتوي على مستويات كبيرة من PPGs [27 ، 28]. بالإضافة إلى ذلك ، PPGs(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)من المعروف أن لديها مجموعة من الأنشطة البيولوجية ، بما في ذلك الخصائص المضادة للالتهابات ومضادة للالتهاب الكلوي ومضادة للتسمم الكبدي [29 - 33].

في دراستهم الأخيرة ، Jedrejek et al. [8] وصف عزل PPGs(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)من ثلاث حبات بولندية وقيمت نشاطها المضاد للأكسدة عن طريق اختبار DPPH. بناءً على ذلك ، تقوم الدراسة الحالية بتقييم ما إذا كانت مجموعات PPG العشرة المختارة المعزولة من هذه النباتات يمكن أن تقللمؤكسدضغط عصبىفي البلازما البشرية المعالجة بأكسدة بيولوجية قوية ، أي مانح جذري الهيدروكسيل H2O2 / Fe ، وتعديل خصائص تخثر البلازما في المختبر. تم تحديد الخصائص المضادة للأكسدة لعشرة PPGs المعزولة وفقًا لمعايير مختارة منمؤكسدضغط عصبى: مستوى TBARS كعلامة على بيروكسيد الدهون ، جنبًا إلى جنب مع مجموعة الكاربونيل ومستويات مجموعة الثيول ، كعلامات لتلف البروتين المؤكسد.

تم تقليل كل من بيروكسيد الدهون في البلازما ومستويات البروتين الكربوني في البلازما التي يسببها H2O2 / Fe بشكل كبير في وجود ثمانية مركبات مختبرة ، بمعنى. أكتيوسيد ، كريناتوسيد ، 2′-O-acetylacteoside ، pheliposide ، arena inside ، tubuloside A ، poliumoside و 3- O-methylpolimuoside ، في جميع التركيزات المختبرة (1 و 5 و 50 ميكروغرام / مل) ؛ ومع ذلك ، لم يلاحظ أي تأثير بالنسبة لاثنين من المركبات المختبرة ، بمعنى. 2′-O-acetylpoliumoside و wiedemannioside D ، أو أي من المستخلصات المختبرة بأي تركيز (1 و 5 و 50 ميكروغرام / مل). بالإضافة إلى ذلك ، لم يتم العثور على أي من المركبات المختبرة أو المستخلصات المختبرة لحماية البلازما من أكسدة مجموعة الثيول المستحثة بـ H2O2 / Fe في البروتينات (الأشكال 3-5). ومع ذلك ، قد تكون المستخلصات المختبرة مصدرًا لمركبات ذات خصائص بيولوجية مختلفة.

لأول مرة ، تشير نتائج الدراسة الحالية إلى ثمانية من PPGs المختبرة(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)إظهار إمكانات مضادات الأكسدة في البلازما البشرية في وجود أنواع الأكسجين التفاعلية الخارجية عن طريق تثبيط بيروكسيد الدهون والبروتين الكربوني في البلازما المعالجة بـ H2O2 / Fe. بالإضافة إلى ذلك ، لم يقدم 2′-O-acetylpoliumoside و wiedemannioside D أي تأثير من هذا القبيل. بشكل عام ، تتوافق النتائج التي توصلنا إليها مع التجارب السابقة في المختبر على PPGs. هيلمان وآخرون. [19] و Jedrejek وآخرون. [8] أبلغ عن ارتباط بين التركيب الكيميائي لمجموعات PPG وأنشطتها. خصائص مضادات الأكسدة لـ PPGs(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)يبدو أنه مرتبط بشكل أساسي ببنية شقوق الأسيل ، أي وحدة حمض الفينول وفينيل بروبانويد ، بما في ذلك وجود و / أو تعديل جزء الكاتيكول. على سبيل المثال ، وجد أن wiedemannioside D يفقد قدرته المضادة للأكسدة تجاه البلازما المعالجة بـ H2O2 / Fe بعد استبدال جزء الكافويل بشق الفيرولويل.

غالبًا ما تنتج التغييرات في عملية التخثر عنمؤكسدضغط عصبى؛ هذه التغييرات يمكن أن تعدل وظائف الجهاز القلبي الوعائي ويمكن أن تؤدي إلى تطور أمراض القلب والأوعية الدموية [1]. من بين المركبات النباتية العشرة والمستخلصات النباتية الثلاثة التي تم اختبارها في الدراسة الحالية ، أظهر tubuloside ، جانب المنصة ، و 3- O-methylpoliumoside وجميع المستخلصات المختبرة لإطالة وقت الثرومبين بشكل كبير في جميع التركيزات المختبرة ، أي. 1 و 5 و 50 ميكروغرام / مل (الشكل 6 ب). ومع ذلك ، لم يغير أي من هذه المقتطفات ، ولا أي من المركبات المختبرة ، PT أو APTT (الشكل 6 أ و ج).

الشكل 6. تأثيرات المركبات المختبرة (أكتيوسيد ، كريناتوسيد ، 2′-O-acetylacteoside ، pheliposide ، arenarioside ، tubuloside A ، poliumoside ، 3- O-methylpoliumoside ، 2′-O-cetylpolimuoside ، wiedemannioside D) المستخلصات (مستخلص P. arenaria - PA ، مستخلص P. ramosa - PR ، و O. caryophyllacea extract - OC) (1-5 0 ميكروغرام / مل) على معلمات تخثر الدم المحددة للبلازما: PT (A) ، TTn (ب) و APTT (ج). تمثل البيانات يعني ± SEM لست تجارب مستقلة. n * p <0. 05="" (مقابل="" التحكم)="" ،="" ns="" -="" p=""> 0.05 (مقابل التحكم).

يقارن الجدول 3 تأثيرات PPGs (5 ميكروغرام / مل) على المؤشرات الحيوية لـمؤكسدضغط عصبىفي البلازما المعالجة بـ H2O2 / Fe وتأثيرها على التخثر. ثمانية من PPGs المختبرة(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)أظهر إمكانات مضادات الأكسدة فقط في البلازما البشرية المعالجة ؛ ومع ذلك ، وجد أن ثلاثة PPGs التي تم اختبارها تمتلك خصائص مضادة للأكسدة وإمكانات مضادة للتخثر. ومن المثير للاهتمام ، أن نتائج اختبار DPPH لم تتطابق مع تلك التي تم الحصول عليها في النموذج البيولوجي باستخدام البلازما البشرية المعالجة بـ H2O2 / Fe: قد يتم حظر إمكانات مضادات الأكسدة في المستخلصات المختبرة بواسطة مركبات معينة موجودة في البلازما.

في الختام ، تلقي نتائجنا الحالية ضوءًا جديدًا على إمكانات مضادات الأكسدة وخصائص مضادات التخثر لـ PPGs(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات). يبدو أن هيكل PPGs(pهينيلبروبانويدجليكوسيدات)، وخاصة وجود شقوق الأسيل والكاتيكول ، ويرتبط بشكل أساسي بخصائصهما المضادة للأكسدة ومضادات التخثر. قد يكون لدى PPGs المحددة القدرة على علاج أمراض القلب والأوعية الدموية المرتبطةمؤكسدضغط عصبى. ومع ذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من التجارب لتحديد تركيزات هذه المركبات اللازمة لنماذج الجسم الحي.

بيان تضارب المصالح

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة معروفة أو علاقات شخصية يمكن أن يبدو أنها تؤثر على العمل الوارد في هذه الورقة.

مراجع

[1] أ. دايبر ، س. كلوبيكي ، إعادة النظر في علم الصيدلةمؤكسدضغط عصبىوالخلل البطاني في أمراض القلب والأوعية الدموية: دليل على العلاجات القائمة على الأكسدة والاختزال ، Free Radic. بيول. ميد. 157 (2020) 15–37.
[2] J.-J. Sauvain، A. Setyan، P. Wild، P. Tacchini، G. Lagger، F. Storti، S. Deslarzes، MJ Guillemin، M. Rossi، M. Riediker، Biomarkers ofمؤكسدضغط عصبىوارتباطه بقدرة الحد من المسالك البولية في عمال صيانة الحافلات ، J. Occupat. ميد. توكسيكول. 6 (2011) 18-23.
[3] P. Nowak، B. Olas، B. Wachowicz،مؤكسدضغط عصبىوالارقاء ، بعد. بيوتشيم. 56 (2010) 239 - 247.
[4] M. Martinez-Huelamo، J. Rodriguez-Morato، A. Boronat، R. de la Torre، Modulation of Nrf2 بواسطة زيت الزيتون وبوليفينولات النبيذ والحماية العصبية ، مضادات الأكسدة 6 (2017) 73.
[5] S. Amor، P. Chalons، V.
[6] Z. Li، H. Lin، L. Gu، J. Gao، CM Tzeng، Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): واحدة من أفضل الهدايا الصيدلانية للطب الصيني التقليدي ، Front. فارماكول. 7 (2016) 41-49.
[7] Y. Jiang، P.-F. Tu ، مراجعة: تحليل المكونات الكيميائية في أنواع Cistanche ، J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970-1979.
[8] D. Jedrejek ، S. Pawelec ، R. Piwowarczyk ، L. Precio ، A. Stochmal ، تحديد وحدوث جليكوسيدات الفينيثانويد والقزحية في ستة مكنسة بولندية (Orobanche spp. and Phelipanche spp. ، Orobanchaceae) ، كيمياء نباتية 170 ( 2020) ، 112189.
[9] B. Kontek ، D. Jedrejek ، W. Oleszek ، B. Olas ، نشاط مضاد للأكسدة ومضاد للأكسدة في المختبر من المستخلصات المشتقة من نبات القفزات الغنية بالأحماض المرة و xanthohumol ، Ind. Crops Prod. 161 (2021) 1-9.
[10] W. Brand-Williams، ME Cuvelier، C. Berset ، استخدام طريقة الجذور الحرة لتقييم نشاط مضادات الأكسدة ، Lebensm. ويس. تكنول. 28 (1995) 25-30.
[11] JR Whitaker ، PE Granum ، طريقة مطلقة لتقدير البروتين بناءً على الاختلاف في الامتصاص عند 235 و 280 نانومتر ، الشرج. بيوتشيم. 109 (1980) 156-159.
[12] B. Wachowicz ، نيوكليوتيدات الأدينين في الصفيحات الدموية للطيور ، خلية الكيمياء الحيوية. Funct. 2 (1984) 167-170.
[13] G. Bartosz، Druga twarz tlenu، Warsz. PWN 1 (2008) 7.
[14] RL Levine، D. Garland، CN Oliver، A. Amici، I. Climent، AG ​​Lenz، BW Ahu، S. Shaltier، ER Stadtman، تحديد محتوى الكربونيل في البروتينات المعدلة مؤكسدًا ، طرق الإنزيم. 186 (1990) 464-478.
[15] DM Joel، J. Gressel، LJ (Eds.)، Musselman، Parasitic Orobanchaceae: Parasitic Mechanisms and Control Strategies، Springer، Heidelberg، Germany، 2013، pp.1-10.
[16] Y. Ando ، M. Steiner ، Sulphydryl و disulfide مجموعات أغشية الصفائح الدموية: تحديد مجموعات ثاني كبريتيد ، Biochim. بيوفيز. اكتا 311 (1973) 26–37.
[17] Y. Ando ، M. Steiner ، Sulphydryl و disulfide مجموعات أغشية الصفائح الدموية: تحديد مجموعات السلفيدريل ، Biochim. بيوفيز. اكتا 311 (1973) 38-44.
[18] J. Malinowska، J. Kołodziejczyk-Czepas، M. Moniuszko-Szajwaj، I. Kowalska، W. Oleszek، A. Stochmal، B. Olas، Phenolic fractions from Trifolium pallidum and Trifolium scabrum in human plasma تحمي من التغييرات الناجمة عن فرط الهوموسستئين في الدم ، Food Chem. توكسيكول. 50 (2012) 4023-4027.
[19] J. Heilmann، I. Calis، H. Kirmizibekmez، W. Schuhly، S. Harput، O. Stiher، Radical scavenger activity ofفينيل بروبانويدجليكوسيداتفي كريات الدم البيضاء متعددة الأشكال المحفزة FMLP: العلاقات بين الهيكل والنشاط ، بلانتا ميد. 66 (2000) 746-748.
[20] H. Chen ، Y. Zhou ، Y. Shao ، F. Chen ، الأحماض الفينولية الحرة في خل شانشي القديم: التغيرات أثناء الشيخوخة والأنشطة المضادة للأكسدة التآزرية ، Int. J. الدعامة الغذائية .19 (2015) 1183-1193.
[21] CA Rice-Evans، NJ Miller، G. Paganga، علاقات نشاط التركيب بمضادات الأكسدة للفلافونويد والأحماض الفينولية ، Free Radic. بيول. ميد. 20 (1996) 933-956.
[22] A. Lopez-Munguía، ´ Y. Hernandez-Romero، ´ J. Pedraza-Chaverri، A. MirandaMolina، I. Regla، A. Martínez، E. Castillo، Phenylpropanoid glycoside analogs: enzymatic synthesis، antioxidant and theoretical دراسة آلية كاسح الجذور الحرة ، PloS One 6 (2011) 20115.
[23] X. Li، Y. Xie، K. Li، A. Wu، H. Xie، Q. Guo، P. Xue، Y. Maleshibek، W. Zhao، J. Guo، D. Chen، Antioxidation and cytoprotection أكتيوسيد ومشتقاته: المقارنة والكيمياء الميكانيكية ، جزيئات 23 (2018) 498.
[24] SE Kulling ، HM Rawel ، Chokeberry (Aronia melanocarpa) - مراجعة للمكونات المميزة والتأثيرات الصحية المحتملة ، Planta Med. 74 (2008) 1625–1634.
[25] BJ Mc Even ، تأثير النظام الغذائي والعناصر الغذائية على وظيفة الصفائح الدموية ، سيمين. ثرومب. هيموست. 40 (2008) 214-226.
[26] ب. أولاس ، تعدد وظائف التوت تجاه الصفائح الدموية ودور الفينول التوت في اضطرابات القلب والأوعية الدموية ، الصفائح الدموية 5 (2016) 1-10.
[27] UB Ismailoglu، I. Saracoglu، US Harput، I. Sahin-Eredemli، آثار فينيل بروبانويد و جليكوسيدات إيريدويد على الضعف الناجم عن الجذور الحرة للاسترخاء المعتمد على البطانة في حلقات الشريان الأورطي للفئران ، J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 193-197.
[28] ZF Bai ، Y. Liu ، XQ Wang ، التحقيق في النباتات الطبية العرقية Orobanche ، Cistanche و Boschniakia ، Zhongguo Zhong Yao Zhi 93 (2014) 4548-4552.
[29] K. Hayashi ، T. Nagamatsu ، M. Ito ، H. Yagita ، Y. Suzuki ، Acteoside ، أحد مكونات Stachys sieboldii MIQ ، قد يكون عامل مضاد للكلية (3): تأثير الأسيتونيد على التعبير بين الخلايا جزيء التصاق -1 في الكبيبات الكلوية التجريبية في الفئران والخلايا البطانية المستزرعة ، Jpn. فارماكول. 70 (1996) 157–168.
[30] Q. Xiong، K. Hase، Y. Tezuka، T. Tani، T. Namba، S. Kadota، Hepatoprotective active of phenylpropanoids from Cistanche deserticola، Planta Med. 64 (1998) 120-125.
[31] WF Chiou و LC Lin و CF Chen و Acteoside يحمي الخلايا البطانية ضد الجذور الحرة التي يسببهامؤكسدضغط عصبى، جيه فارم. فارم. 56 (2004) 743-748.
[32] S. Sahpaz ، N. Garbacki ، M.Tits ، F. Bailleul ، العزلة والنشاط الدوائي لاسترات فينيل بروبانويد من Marrubium vulgare ، J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 389-392.
[33] L. Lie-Chwen ، و W. Yea-Hwey ، و H. Yu-Chang ، و Ch Shiou ، و L. Kuo-Tong ، و Ch Yueh-Ching ، و W. Wen-Yen ، و S. Yoh-Chiang ، والتأثير المثبط منفينيل بروبانويدجليكوسيداتوجلوكوزيدات إيريدويد على إنتاج الجذور الحرة وتعبير 2 إنتغرين في كريات الدم البيضاء البشرية ، J. Pharm. فارماكول. 58 (2006) 129-135.