نقل حساس للفلوريدزين لإكيناكوسيد وأكتيوسيد وطريق امتصاص الأمعاء المتغير بعد تطبيق مستخلص القسطان توبولوسا

لمزيد من المعلومات: ali.ma@wecistanche.com

تاداتوشي تانينو وآخرون

الخلاصةالأهداف

كان الهدف من هذه الدراسة هو معالجة الآثار المفيدة لمستخلص سيستانش توبولوسافي تحسين النفاذية المعوية المنخفضة للكيناكوزيد (ECH) والأكتيوسايد (ACT).

طُرق

امتصاص ECH و ACT فيمستخلص سيستانش توبولوساتم تمييزه باستخدام طبقات أحادية الخلية Caco -2 المعوية البشرية مع مركبات سليمة. تم تأكيد الامتصاص المعتمد على Glucosetransporter لـ ECH و ACT عن طريق تقنية التروية المعوية في الموقع.

النتائج الرئيسية

لم تكن النفاذية الظاهرة (Papp) مختلفة بشكل كبير بين ECH السليم و ACT السليم. في ظل وجود فلوريدزين ، تم تقليل Papp of theECH و ACT بجرعة عالية إلى 20 بالمائة من عدم العلاج المعني ولكن لم يتم تغييره بواسطة phloretin و verapamil.مستخلص سيستانش توبولوساعند الجرعات المنخفضة والعالية ، عززت Papp من ECH و ACT (كلاهما بثلاثة أضعاف) ، مما أدى إلى مشاركتها الكبيرة في امتصاص الجلوكوز المعتمد على الصوديوم. عند التركيز المنخفض ، تم قمع مستويات ECH و ACT المصاحبة في دم البوابة بشكل كبير بواسطة phloridzin.

استنتاج

الغذائية والطبيةمستخلص سيستانش توبولوساقد يؤدي تعزيز الامتصاص المعوي لـ ECH و ACT إلى إدارة صحة الإنسان بشكل أفضل ، على الرغم من ضرورة تقليل مشاركة النقل الحساس للفلوريدزين.

الكلمات الدالةأكتيوسيد؛ طبقات خلية أحادية -2 Caco؛مستخلص Cistanchetubulosa; إشنكوسايد؛ ناقلة الجلوكوز الحساسة للفلوريدزين

مستخلص سيستانش توبولوسا

انقر فوق مسحوق Cistanche tubulosa

مقدمة

تم استخدام جذور Cistanche tubulosa تقليديا في الطب والطعام.مستخلص سيستانش توبولوسامن المعروف أن التأثيرات الدوائية في أمراض الدماغ المختلفة ، وظائف مكافحة الشيخوخة ، التمثيل الغذائي للدهون ، ونمو الشعر.Cistanche tubulosa[5،6] جليكوسيدات فينيلثانويد ، فئة من مركبات البوليفينول ، هي المكونات الكيميائية الرئيسية في أنواع Cistanche ، [7] على الرغم من اختلاف كمياتها بين الأنواع المختلفة. إشنكوسايد (ECH ، الشكل 1) هو أحد جليكوسيدات الفينيثانويد الرئيسية في HerbaCistanchis. ويتحلل إلى أكتيوسيد (ACT ؛ ويسمى أيضًا فيرباسكوسايد) بواسطة إنزيمات من أصل بكتيري في الأمعاء الغليظة. [8،9] تمتلك كل من ECH و ACT نشاطًا مفيدًا لحماية الكبد [10] ومضادة للالتهابات [11] في حيوانات القوارض. من المثير للدهشة أن ECH عالي الذوبان في الماء يحسن النتائج السلوكية والكيميائية العصبية في نموذج فأر لمرض باركنسون ويثبط تنشيط كاسباس -3 وكاسبيز -8 في الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية. [9] من المعروف أن الحاجز الدموي الدماغي يحد بشكل صارم من دخول وتوزيع المواد الغريبة الحيوية في الدماغ من الدم. وو وآخرون [12] أظهر أيضًا أن ACT القابل للذوبان في الماء يتوزع بسرعة في أنسجة المخ لدى الفئران. لذلك ، يمكن نقل ECH و ACT إلى الدماغ والأمعاء والكبد عن طريق النظام (الأنظمة) المحدد.

على الرغم من وجود أدلة قوية تشير إلى أن استهلاكمستخلص سيستانش توبولوسامفيد لصحة الإنسان ، حيث أن نفاذية ECH النقية عبر Caco 0} أحادي الطبقة بتركيز قمي يبلغ 8.4 ± 1.6 ميكروغرام / مل يساوي أو أقل من markermannitol النقل المجاور للخلايا. [13] عندما يتم إعطاء ECH الصافي عن طريق الفم للفئران (الجرعة ، 1 {{1 0}} 0 مجم / كجم) ، يكون الامتصاص سريعًا للغاية (Tmax ، 15 دقيقة) ، ويكون الحد الأقصى لتركيز المصل منخفضًا جدًا (Cmax ، 0. 61 ± 0. 32 ميكروغرام / مل). [14] التوافر البيولوجي المطلق لـ ECH هو فقط 0. 83 بالمائة. وبالمثل ، عندما يتم تحضين خلايا Caco -2 بجزء فينولي تمت تنقيته جزئيًا من مياه نفايات مصانع الزيتون ، يكون امتصاص ACT النقي سريعًا مع ذروة التراكم التي تحدث بعد 3 0 دقيقة وكفاءة تراكم كلية تبلغ 0.1 بالمائة ، مما يوفر مستويات داخل الخلايا تبلغ 130 pmol / mg بروتين الخلية. [15] في الجرذان ، تم الوصول إلى أقصى تركيز (0.13 ± 0.03 ميكروغرام / مل) من ACT النقي في غضون 30 دقيقة بعد جرعة فموية مع 100 مجم / كجم ، [12] مما يعني امتصاص معوي سريع. إن التوافر الحيوي الفموي لـ ACT ، وكذلك ECH ، منخفض جدًا (0.12 ± 0.04 بالمائة) ، مما يشير إلى احتمال حدوث تأثيرات المرور الأول في الأمعاء والكبد. في الفئران الصفراوية ، يعتبر اتحاد المثيلة والغلوكورونيد من ECH مستقلبات رئيسية ، [16] على الرغم من أن مدى الأيض الكبدي لا يزال غير واضح. اكتشفنا مبدئيًا أن ECH و ACT كانا مستقرين تمامًا في الجينات من الغشاء المخاطي لأمعاء الفئران والحمض المعدي الاصطناعي (البيانات غير معروضة). نجار وآخرون [17] أظهر أن ACT يثبط نشاط P-glycoprotein (P-gp) -ATPase في amanner على غرار فيراباميل (مثبط تمثيلي لـ P-gp) ، مما يعني ضمناً معدل P-gp ؛ ومع ذلك ، فمن غير المؤكد ما إذا كان ACT متاحًا كركيزة P-gp. ومن المثير للاهتمام ، أن النتائج الحديثة للفلافونويد-د-جلوكوزيدات الغذائية أظهرت أن البروتين المقاوم للأدوية المتعددة (MRP2) يخفي ناقل الجلوكوز المعتمد على الصوديوم (SGLT) 1- بوساطة امتصاص كيرسيتين 4′-O - - الجلوكوز ، [18 ، 19] وهو مسؤول عن امتصاص ضعيف للغاية. ومع ذلك ، لا يُعرف سوى القليل جدًا عن حساسية البوليفينوليك للجلوكوزيدات تجاه ناقلات امتصاص الجلوكوز ، بما في ذلك ناقلات الجلوكوز. tubulosa.

في هذه الدراسة ، قمنا بفحص امتصاص الجلوكوز بوساطة ناقلة ECH و ACT باستخدام طبقات أحادية الخلية Caco -2 المعوية البشرية. في نفس الوقت ، نقل الامتصاص لـ ECH و ACT المصاحبمستخلص سيستانش توبولوسايتميز بنظام التروية المعوي داخل الزجاج وفي الموقع مع أخذ عينات الدم البابي ، والتي يمكن أن تميز بسهولة بين مدى الامتصاص وتجنب المرور الكبدي الأول.

المواد والأساليب

المواد

كانت ECH و ACT هدايا سخية من شركة EishinTrading المحدودة (أوساكا ، اليابان). تم شراء Phloridzin و phloretin من شركة Tokyo Kasei Co.، Ltd. (طوكيو ، اليابان). تم الحصول على Verapamil و p-coumaric acid ، المستخدم كمعايير داخلية للمقايسة اللوني السائل عالي الأداء (HPLC) ، من Sigma-Aldrich (St Louis، MO ،الولايات المتحدة الأمريكية). جميع المواد الكيميائية الأخرى المستخدمة كانت من الدرجة التحليلية ومتاحة تجارياً.

المواد النباتية وتحضير مستخلص الميثانول

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) هو نبات طفيلي معمر ينمو على جذور أنواع Salvadoraor Calotropis ، وينتشر في دول شمال إفريقيا والعربية والآسيوية. السيقان المجففة من C. tubulosawere المسحوقة والمستخرجة ثلاث مرات مع ارتجاع الميثانول لمدة 3 ساعات. يتم توفير تبخير المذيب تحت الضغط المنخفض بالمستخلص الميثانولي. كان مستخلص الميثانوليك (الدرجة التجارية ، الدفعة رقم 20070130 ؛ تسجيل الاسم التجاري ، Sabaku Ninnjinn Kanka) هدية سخية من شركة Eishin Trading Co. معهد شينجيانغ للطب الصيني التقليدي والأثنولوجي.

تحليل المستخلصات النباتية: اللوني

حددنا محتويات ECH و ACT في ملفمستخلص سيستانش توبولوسا(الدفعة رقم 20070130) عن طريق تحليل HPLC الموضح أدناه. يتم عرض البيانات التي تم الحصول عليها في الجدول 1.

زراعة الخلايا

تم استخدام خلايا Caco {0} ، التي تم شراؤها من American Type CultureCollection (ATCC ، Rockville ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، في ممرات 38-53. لقد تم تربيتها في وسط استزراع يتكون من وسط Dulbecco's Eagle's المعدل (DMEM ، Nacalai Tesque Co. ، كيوتو ، اليابان) مكمل بـ 0. 1 ملي مولار من الأحماض الأمينية غير الأساسية ، 10 في المائة من مصل الأبقار المعطل بالحرارة ، 100 U / مل بنسلين G و 0.1 مجم / مل ستربتومايسين كبريتات.

دراسات النقل

تم طلاء خلايا Caco {0} بكثافة 6.4 × 103 خلية / سم 2 على مرشحات من البولي كربونات. تم استخدام الطبقات الأحادية في تجارب النقل بعد 21-25 يومًا من البذر. سليمة ECH و ACT التي كانت مكافئة لمحتوياتها فيمستخلص سيستانش توبولوسا (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω · سم 2.

اشيناكوسايد فيمستخلص سيستانش توبولوسا

نضح الأمعاء في الموقع

تم الحصول على ذكور فئران ويستار (230-250 جم) من SLCJapan (هاماماتسو ، اليابان). تم إيواء الحيوانات في غرفة مكيفة تحت 12 ساعة من الضوء / دورة الظلام لمدة أسبوع واحد قبل الاستخدام. تم تغذية الفئران بأغذية المختبرات القياسية (شركة الخميرة الشرقية المحدودة ، طوكيو ، اليابان) بالماء والصيام طوال الليل قبل الاختبار. تم إجراء دراسة التروية الدورانية في الموقع وفقًا للإجراء المعدل الذي وصفه ميهارا وآخرون. [20] باختصار ، تم تخدير الفئران بمحلول يوريتان بنسبة 25 بالمائة (1 مجم / كجم) لتجنب انخفاض ضغط الدم. تم عمل شق في منتصف البطن وتم تعريض الأمعاء الدقيقة. تم ربط القناة الصفراوية لتجنب إفراز العصارة الصفراوية في سائل الإرواء. تم شطف الأمعاء الدقيقة بأكملها كقطعة واحدة (من الاثني عشر إلى الدقاق) بمحلول ملحي طبيعي عند درجة 37 لمدة 10 دقائق حتى ظهر الغسيل واضحًا. تم بعد ذلك إدخال أنابيب زجاجية متصلة بأنابيب السيليكون في طرفي الأمعاء الدقيقة وتثبيتها بخيوط خياطة. بعد ذلك ، تم استبدال الأمعاء الدقيقة في البطن ، وتم توصيل القنيات بمضخة تمعجية. تم تجفيف الوريد البابي بأنابيب البولي إيثيلين (PE10).مستخلص سيستانش توبولوساالمتوفر تجارياً تم تعليقه في محلول كريبس-هينسيليت بيكربونات (pH 7.4) لإعطاء تركيز نهائي قدره 4.5 مجم / مل وتم الطرد المركزي لمدة 1 0 دقيقة عند 8 0 00 دورة في الدقيقة لإزالة المكونات غير القابلة للذوبان. تم إعادة تجميع المادة الطافية في غياب أو وجود فلوريدزين (1 مم) في خزان ، والذي تم الحفاظ عليه عند درجة حرارة 37 ± 0.5 درجة طوال فترة التجربة. في الأوقات المحددة ، كان الدم يمر عبر قنية الوريد البابي. بعد طرد عينات الدم ، تم نزع البروتين الناتج عن البلازما باستخدام الأسيتونتريل المحتوي على المعيار الداخلي وطرده عند 3000 دورة في الدقيقة. تم تبخير المواد الطافية ، وتم حل البقايا باستخدام طور متحرك يتكون من أسيتونيتريل و 0.5 بالمائة حمض أسيتيك. تم تحميل المحلول المختلط على عمود HPLC. تم استخدام الفئران وفقًا للإجراءات الأخلاقية التي تتبع الإرشادات الخاصة برعاية واستخدام حيوانات المختبر الصادرة عن الحكومة اليابانية وجامعة كينكي.

تحليل HPLC

تم إجراء تحليل HPLC على نظام مجهز بـ aShimadzu SPD {0} A ، كاشف الأشعة فوق البنفسجية ، مضخة Shimadzu LC -10 A ، ومتكامل كروماتوباك Shimadzu C-R4A (كيوتو ، اليابان). تم فصل ECH و ACT باستخدام عمود Inertsil ODS (5 ميكرومتر ، 4.6 × 15 0 مم ، GL Sciences Inc. ، أوساكا ، اليابان). تم استخدام طور متحرك من الأسيتونيتريل و 0.5 في المائة من حمض الأسيتيك بنسبة 15:85 (حجم / حجم) بمعدل تدفق 1.0 مل / دقيقة. تم إجراء الكشف عند 334 نانومتر

التحليل الحركي

تم تقدير معاملات النفاذية الظاهرة (Papp) من منحدر الجزء الخطي من المسار الزمني للنقل المركب عبر Caco {0}} طبقات أحادية الخلية ، كما يلي: P dQ dt AC app=() ()

حيث dQ / dt هو معدل النفاذية ، و C 0 هو التركيز الأولي للمذاب في الحجرة المانحة ، و A هي مساحة سطح الغشاء (4.7 سم 2).

في دراسة التروية المعوية للجرذان في الموقع ، تم حساب المنطقة الواقعة تحت منحنى زمن تركيز البلازما (AUC 0 - 90) في الوريد البابي من وقت صفر إلى آخر قياس وفقًا لقاعدة شبه منحرف خطية.

Acteoside فيمستخلص سيستانش توبولوسا

الخصائص الفيزيائية والكيميائية

تم حساب مساحة السطح القطبية ومساحة السطح غير القطبية للمركبات باستخدام برنامج SAS (الإصدار 0. 8 ، Olsson ، T .؛ Sherbukhin، V.، Synthesis and Structure Administration، 1997-2001، AstraZeneca، Cary ، نورث كارولاينا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الحصول على قيم السجل P و pKa المحددة تجريبياً من الأدبيات.

تحليل احصائي

تم تحليل البيانات من خلال تحليل التباين أحادي الاتجاه متبوعًا باختبار Tukey اللاحق. اعتبرت القيم الاحتمالية التي تقل عن 5 في المائة مهمة.

نتائج

النقل الامتصاصي لإشنكوسايد وإكتيوسيد عبر طبقات الخلية الأحادية {{0} Caco

في الفئران والجرذان ، يتم تناول ECH السليم [10،14] و ACT [12،21] عن طريق الفم بجرعات 100-1000 مجم / كجم. المستخلص سيستانش توبولوساالمستخدمة تحتوي على ما يقرب من 3 0 في المائة من ECH و 15 في المائة من ACT لكل جرعة. نظرًا لأن المستخلص غيّر الضغط الأسموزي ودرجة الحموضة في وسط الحضانة ، فقد تم تحديد تركيزات 4.5 و 13.5 مجم / مل بناءً على جرعة الفم (المركبات السليمة: 2 - 2 0 مجم / 2 {{2 {{31} }}} غرام من وزن الجسم) في الفئران. احتوى المستخلص عند الجرعات المنخفضة (4.5 مجم / مل) والجرعات العالية (13.5 مجم / مل) على 2. 0 و 6.1 مجم لـ ECH و 1. 0 و 3. 0 ملغ لـ ACT على التوالي. طبقنا كميات مستخلص C. tubulosa التي كانت أقل بكثير من الجرعة الفموية من ECH و ACT المبلغ عنها في البشر (البدل الغذائي الموصى به للمستخلص: 15 0 مجم تحتوي على حوالي 45 مجم forECH و 22.5 مجم لـ ACT). في الجرعات المنخفضة والعالية من المركبات السليمة ، لم تختلف ملفات تعريف الامتصاص (الشكل 2) و Papp اختلافًا كبيرًا بين ECH و ACT كمكافئ anECH (الجدول 2). عندما تم تحميل مستخلص C. tubulosa بجرعة عالية من 13.5 مجم / مل في الوسط ، قيم Pappvalues ​​(1.27 ± 0. 13 و 0. 34 ± 0.03 × 10−6 سم / ثانية ، على التوالي) من المصاحبات ECH و ACT كانت أعلى بثلاثة أضعاف من تلك (0.38 ± 0.09 و 0.10 ± 0.03 × 10−6 سم / ثانية ، على التوالي) من ECH و ACT (الجدول 2). المستخلص ، على عكس المركبات السليمة ، عزز بشكل كبير نقل الامتصاص لـ ECH و ACT.

التأثير المثبط للفلوريدزين والفلوريتين والفيراباميل

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0. 3 ملي مولار) من فلوريتين لا يمكن استخدامها بسبب سمية الخلايا الملحوظة. بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد P-gp باعتباره لاعبًا مهمًا مسؤولاً عن التفاعل بين الأدوية العشبية وركائز P-GPS المهمة سريريًا. لم يعزز فيراباميل النقل الامتصاصي للمركبات السليمة (الشكل 3).

تم تثبيط النقل الامتصاصي لـ ECH و ACT في المستخلص (جرعة منخفضة) بشكل كبير بواسطة phloridzin (الجدول 2 والشكل 4). المستخلص عند جرعة عالية من تثبيط حساسية الكلوريدزين ، على الرغم من أن نقل ECH و ACT كان أكثر حساسية للفلوريدزين (الجدول 2).

دراسة التروية المعوية في الموقع

في دراسة في الموقع ، اختبرنا ما إذا كان ECH و ACT فيمستخلص سيستانش توبولوساتم نقلها بواسطة SGLT1 الموجود على الجانب القمي للأمعاء الدقيقة. عندما تم تروية المستخلص الغذائي بجرعة منخفضة (4.5 مجم / مل) ، ظهر ECH و ACT بسرعة في الدم البابي (الشكل 5). تم تحديد AUC كـ 2702.8 ± 384.1 ميكرومتر · دقيقة لـ ECH و 698.3 ± 197.2 ميكرومتر · دقيقة لـ ACT. بعد تطبيع AUC مع محتوى منمستخلص سيستانش توبولوسا، الكمية الممتصة لم تكن مختلفة بشكل كبير بين ECH و ACT. SGLT 1- فلوريدزين حساس ، على عكس الفلوريتين ، قام بشكل كبير بقمع النقل الامتصاصي لـ concomitantECH (AUC ، 649.4 ± 248.2 ميكرومتر · دقيقة) و ACT (لم يتم اكتشافه).

مناقشة

بعض المكونات العشبية عبارة عن ركائز من P-gp عالية التعبير في الكبد والأمعاء والدماغ والكلى. P-gp هو عامل محدد للتوافر البيولوجي في الجسم الحي ، والتخلص من الأدوية العشبية وتوزيعها ، بما في ذلك عشبة سانت جون ، والكركمين ، وإشنسا ، والجينسنغ ، والجنكة ، والزنجبيل. [22،23] التوافر البيولوجي للجينيستين {{5} } الجلوكوزيد ، مشتق الفلافونويد ، كان محدودًا أيضًا بواسطة ناقل MRP2 المعوي. لذلك ، تم تصميم هذه الدراسة للتحقيق في خصائص امتصاص ECH و ACT المصاحبة للأغراض الصناعية والطبية.مستخلص سيستانش توبولوسا.

تعبر الطبقات الأحادية الخلية المستقطبة Caco {0} ، بالإضافة إلى الأمعاء ، [25] ، عن ناقلات الأدوية المعوية الرئيسية ، مثل P-gp ، و MRPs ، وبروتين مقاومة سرطان الثدي. [26] الفلافونويد الغذائية من الكيرسيتين [27] و myricetin [28] قد ثبت أنهما يثبطان تدفق P-gp بوساطة في كل من الخطوط الخلوية والنماذج الحيوانية. لم يغير فيراباميل ، مثبط P-gp ، نفاذية ACT و ECH عبر Caco {9}} أحادي الطبقة (الشكل 3) ، مما يشير إلى أن ECH و ACT السليم لم يتم تقييدهما بواسطة مضخة تدفق P-gp. أظهرت دراساتنا السابقة أنه لم يتم التعبير عن بروتينات MRP2 في الطبقات أحادية الخلية Caco -2. [29] يمكن استبعاد التدفق الوسيط لـ P-gp و MRP 2- في نقل ECH و ACT. تم امتصاص بعض الجليكوسيدات من الكيرسيتين مع انخفاض درجة ألفة الدهون بشكل أكثر كفاءة من الكيرسيتين نفسه. [3 0] من المهم أيضًا ملاحظة أن ACT مع جزء السكر يتوزع بسرعة في أنسجة المخ. تم تركيز انتباهنا على العمل المشترك لاثنين من الخلايا الداخلية لنقل الجلوكوز: SGLT في غشاء حدود الفرشاة ونقل الجلوكوز المنتشر الميسر (GLUT) في الغشاء الجانبي الجانبي. يمكن استخدام زراعة الخلايا Caco -2 كنموذج لدراسة GLUT2 الحساسة للفلوريتين والناقلات SGLT1 و 2 الحساسة للفلوريتين. [31-34] يتم نقل الجلوكوز من القمة إلى الطبقة الأحادية الجانب من Caco -2 بمعدل مرتفع مع Pappof 36.8 ± 1.1 × 1 0 - 6 سم / ثانية. [35] إنها تمتلك Pappthan أعلى من علامة النقل عبر الخلايا بروبرانولول (23.4 ± 2.8 × 1 0 - 6 سم / ثانية). كما هو مبين في الجدول 2 ، كان لدى ECH و ACT السليم Papp أقل بكثير من تلك المسجلة في الجلوكوز والبروبرانولول السلبي. حسبنا لوغاريتم معامل التقسيم (أوكتانول الماء) ، سجل P ، تم حسابه ليكون −2.32 و 0. 077 لـ ECH و ACT ، على التوالي. يُعتقد أن مركبات Polaror المحبة للماء تنتقل عبر مسار مجاور خلوي (عبر تقاطعات ضيقة). يبدو أن جليكوسيدات ثنائية الفينيل إيثانويد ، مثل المانيتول ، تم نقلها من خلال طريق مجاور للخلايا. ومع ذلك ، قلل فلوريدزين بشكل كبير من نفاذية امتصاص ECH و ACT سليمة (الجدول 2) ، مما يشير إلى أن apicalSGLT1 يلعب دورًا رئيسيًا في امتصاص الأمعاء لـ ECH و ACT السليم. بجرعة مكافئة ، كانت نفاذية ACT المرتفعة الكارهة للماء قريبة من نفاذية ECH (الشكل 2 والجدول 2). يوشيكاوا وآخرون [36] أظهر أن الناقلات الميسرة (GLUT 1 و 2) ، وكذلك SGLT1 الحساسة للفلوريدزين ، يتم التعبير عنها بشكل مكثف في الأمعاء الدقيقة. نظرًا لأن الكميات الممتصة من المركبات تعتمد على توازن الكتلة بين الامتصاص والتخلص ، قمنا بتقييم مشاركة GLUT2. يتقاطع الجلوكوز مع الأغشية القمية للخلايا المعوية بواسطة SGLT1 مع تقارب عالي وسعة منخفضة ويخرج عبر الغشاء الأساسي الوحشي من خلال GLUT2 مع تقارب منخفض وقدرة عالية. لم يقم Phloretin (مثبط محدد لـ GLUT2) بإلغاء نقل ECH و ACT السليم (الشكل 3). فونيس وآخرون [37] أظهر أن ACT يتفاعل بقوة مع مجموعات الفوسفات من أغشية الفسفوليبيد. نظرًا لوجود مجموعات الهيدروكسيل بكثرة في بنية ACT ، فإن الروابط الهيدروجينية بين هذه المجموعات والرؤوس القطبية للجليسرول أو مجموعات الفوسفات من الدهون الفسفورية هي الأكثر احتمالاً للتفاعلات التي تحدث. عندما تم تحضين ECH و ACT المكافئ مع Caco {62}} أحادي الطبقة لمدة 11 ساعة ، كان التراكم الخلوي لـ ACT (0.24 ± 0.04 نانومول / سم 2) أكبر بثلاثة أضعاف من ofECH (0.07 ± 0.01 نانومول / سم 2). كنا نظن أن SGLT 1- حساس ECH و ACT تم نقلهما ببطء من الخلايا المعوية إلى مجرى الدم ، مما قد يؤدي إلى انخفاض معدل الملاحظة. بالمقارنة مع ECH عالي المحبة للماء ، قد تكون النفاذية المنخفضة لـ ACT ناتجة عن إقحام أغشية الخلايا.

مستخلص سيستانش توبولوسا

تُستهلك مركبات البوليفينول في الخلائط العشبية أثناء تطبيقها السريري وهي متوفرة تجارياً كمكملات غذائية. في دراسة أجريت في المختبر ، تبين أن امتصاص الفينول إيبيكاتشين لم يتأثر بتركيب مكونات المشروبات الغذائية. في المقابل ، Hypericum perforatumL. تؤثر مصفوفات المنتج على نقل quercetinglucosides (rutin و isoquercitrin) وخلايا hyperosideacross Caco -2 بسبب الاختلافات في التركيب الكيميائي للمصفوفة وخصائص النقل ، أي النقل المجاور للخلايا والنقل بوساطة الناقل أو النشط. [39] في هذه الدراسة ، قدمت C. tubulosa النقل بطريق الظهارة ثلاثة أضعاف أعلى من ECH السليم و ACT (الشكل 2 والجدول 2). نحن نتوقع أن المكونات فيمستخلص سيستانش توبولوساتنشيط ناقل فلوريدزين الحساس و / أو تسريع التخلص من داخل الخلايا و ACT.مستخلص سيستانش توبولوسايبدو أن الجرعة العالية تخفي إلى حد كبير فاعلية النقل الحساس للفلوريدزين (الجدول 2). تتفاعل الكربوهيدرات الغذائية [40] والبروتينات [41] مع بعض البوليفينول في الجهاز الهضمي. موريكاوا وآخرون [10] أظهر أن خمسة إيريديويد ، كانكانوسيدات م ، وكانكانول ، أحادي الجليكوزيد أحادي التربين ، كانكانوسيد إي ، واثنين من أوليجوجليكوزيدات فينيليثانويد ، كانكانوسيدات F و G ، وسكر قليل الأسيلات ، كانكانوز ، يمكن عزله منمستخلص سيستانش توبولوسا

تستخدم حاليا. المكونات الأخرى ، بما في ذلك البروتينات الموجودة فيمستخلص سيستانش توبولوسا، يبقى غير واضح. جنبا إلى جنب مع التكهنات المذكورة أعلاه ، نحن مصممون لفحص ما إذا كانت المكونات الأخرى تتفاعل مع SGLT1 وتمنع امتصاص ECH و ACT.

لا يمكن للتجارب في الجسم الحي التمييز بسهولة بين مدى الامتصاص وتجنب التصرف الأولي عبر الكبد. يتميز نموذج التروية المعوي في الموقع بميزة على النماذج داخل الجسم الحي وفي المختبر نظرًا لسهولة التحكم في معلمات التجربة واستبعاد تأثير الأعضاء الأخرى والحفاظ على إمداد الدم المعوي غير السليم. تم تقييم تورط ناقل الجلوكوز الحساس للفلوريدزين في نظام نضح معوي في الموقع. كما هو مبين في الشكل 5 ، فإن الكميات الممتصة من المتزامنات ECH و ACT فيمستخلص سيستانش توبولوسا (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >يتم امتصاص 1 × 10−6 سم / ثانية تمامًا عند البشر ، بينما يتم امتصاص الأدوية والببتيدات بشكل سيئ (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10−6 سم / ث (الجدول 2) ، مما يشير إلى التوافر الحيوي الفموي العالي في الحيوانات والبشر. كريسبي وآخرون [43] أظهر أن التدفق في دراسة نضح الأمعاء في الموقع لم يكن مختلفًا بشكل كبير بين phloridzin و phloretin. [44] أظهروا أيضًا أن التوافر الحيوي الفموي للفلوريدزين مع حساسية عالية لـ SGLT1 كان 10 بالمائة فقط في الفئران. تحتاج الدراسات المستقبلية إلى تقييم التوافر البيولوجي وتأثير المرور الكبدي الأول المصاحب لـ ECH بعد تناول المستخلص الغذائي عن طريق الفم بجرعة عالية. تشير النتائج في الموقع إلى أن تناولمستخلص سيستانش توبولوساقد يحسن امتصاص الفم المنخفض لـ ECH و ACT.

استنتاج

الغذائية والطبيةمستخلص سيستانش توبولوساقد يؤدي تعزيز الامتصاص المعوي لـ ECH و ACT إلى تحسين إدارة صحة الإنسان ، على الرغم من ضرورة تقليل مشاركة النقل الحساس للفلوريدزين.

الإعلانات

تضارب المصالح

يصرح المؤلف (المؤلفون) أنه ليس لديهم تضارب في المصالح للإفصاح عنه

التمويل

كان هذا العمل مدعومًا جزئيًا من قبل مركز أبحاث التكنولوجيا الفائقة من جامعة كينكي.

شكر وتقدير

يرغب المؤلفون في شكر أوسامو موراوكا (جامعة كينكي ، أوساكا ، اليابان) وتوشيو موريكاوا (جامعة كينكي ، أوساكا ، اليابان) على توفيرمستخلص سيستانش توبولوساوالمكونات النقية. نحن ممتنون جدًا لماساهيرو إيواكي (جامعة كينكي) لدعم الدراسة.

مستخلص سيستانش توبولوسامنتجات

من: 'نقل حساس للفلوريدزين لإشنكوسايد وأكتيوسيد وتغيير مسار الامتصاص المعوي بعد تطبيقمستخلص سيستانش توبولوسا' بواسطةتاداتوشي تانينو وآخرون

--- © 2015 Royal Pharmaceutical Society، Journal of Pharmacy and Pharmacology، 67، pp. 1457–1465،غلوكوسيدات فينيلثانويد المنقولة بواسطة SGLT1

مراجع

1. Tanaka J وآخرون. تأثيرمستخلص سيستانش توبولوساعلى أمراض الدماغ المختلفة. نمط الطعام 21 2008؛ 12:24 - 26.

2. تاناكا ج وآخرون. وظائف مكافحة الشيخوخةمستخلص سيستانش توبولوسا. نمط الطعام 21 2008؛ 12:27 - 29.
3. تاناكا ج وآخرون. وظائف الجمال ونمو الشعرمستخلص سيستانش توبولوسا. نمط الطعام 21 2008؛ 12:29 - 32.
4. تاناكا ج وآخرون. تأثير التمثيل الغذائي للدهونمستخلص سيستانش توبولوسا. نمط الطعام 21 2008؛ 12:30 - 33.
5. يوشيزاوا ف وآخرون. مكونات Cistanche tubulosa Schrenk (هوك) f.II. عزل وهيكل جليكوسيد فينيليثانويد جديد وجليكوسيد نيوليجنان جديد. كيم فارم بول 1990 ؛ 38: 1927-1930.
6. يوشيكاوا إم وآخرون. oligoglycosides فينيلثانويد و oligosugars acylated مع نشاط vasorelaxant من Cistanche tubulosa. بيورج ميد كيم 2006 ؛ 14: 7468-7475.
7. Tu PF وآخرون. تحليل جليكوسيدات فينيل إيثانويد من ثبات Herba بواسطة RP-HPLC. ياو شيويه شيويه باو 1997 ؛ 32: 294 - 300.
8. Lei L et al. التنظيم الأيضي لجليكوسيدات الفينيثانويد من Herba cistanches في الجهاز الهضمي للكلاب. ياو شيويه شيويه باو 2001 ؛ 36: 432-435.
9. Geng X et al. التأثيرات الوقائية العصبية لإشنكوسايد في نموذج MPTP الفأري لمرض باركنسون. يور J فارماكول 2007 ؛ 564: 66-74.
10. Morikawa T et al. oligoglycosides فينيل إيثانويد مع نشاط وقائي للكبد من نبات الصحراء Cistanche tubulosa. بيورغ ميد تشيم 2010 ؛ 18: 1882 - 1890.
11. باولا آر دي وآخرون. آثار فيرباسكوسايد ، المنقى تقنيًا عن طريق مزارع الخلايا النباتية سيرينجا فولغاريس ، في نموذج القوارض لالتهاب دواعم السن. J فارماكول 2011 ؛ 63: 707-717.
12. وو واي تي وآخرون. تحديد الأكتيوسايد في Cistanche deserticola و Boschniakia rossica وحرائكه الدوائية في الفئران التي تتحرك بحرية باستخدام LC-MS / MS. ي تشروماتوجر ب أناليت تكنول بيوميد لايف سسي 2006 ؛ 844: 89-95.
13. ماتياس إيه وآخرون. دراسات النفاذية للألكيلاميدات وحمض الكافيين المقترنين من إشنسا باستخدام نموذج الخلية أحادي الطبقة -2. J كلين فارم ثيرابيوت 2004 ؛ 29: 7-13.
14. جيا سي وآخرون. تحديد إشنكوسايد في مصل الفئران عن طريق كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء عكسية الطور مع الكشف عن الأشعة فوق البنفسجية وتطبيقها على الحرائك الدوائية والتوافر البيولوجي. ي تشروماتوجر 2006 ؛ 844: 308-313.
15. Cardinali A et al. Verbascosides من ماء طاحونة الزيتون: تقييم إمكانية الوصول البيولوجي والامتصاص المعوي باستخدام نظام هضم في المختبر / caco -2. J Food Sci 2011 ؛ 176: H48 – H54.
16. جيا سي وآخرون. استقلاب إشنكوسايد ، وهو مضاد جيد للأكسدة ، في الفئران: عزل وتحديد مستقلباته الصفراوية. التخلص من تعاطي المخدرات 2009 ؛ 37: 431-438.
17. نجار IA وآخرون. تعديل نشاط P-glycoprotein ATPase بواسطة بعض المكونات النباتية. فيتوثر ريس 2009 ؛ 24: 454-458.
18. Walgren RA وآخرون. تدفق فلافونويد كيرسيتين 4′-بيتا-جلوكوزيد الغذائي عبر طبقات أحادية الخلية في الأمعاء البشرية -2 بواسطة بروتين مرتبط بمقاومة الأدوية المتعددة القمي -2. J فارماكول إكس ثير 2000 أ ؛ 294: 830 - 836.
19. والجرين RA وآخرون. الامتصاص الخلوي للفلافونويد الغذائي كيرسيتين 4′-بيتا جلوكوزيداز بواسطة ناقل الجلوكوز المعتمد على الصوديوم SGLT1. J Pharmacol Exp Ther 2000b ؛ 294: 837-843.
20. Mihara K et al. التمثيل الغذائي المعوي الأول من الإبيريزون في الفئران. فارم ريس 2001 ؛ 18: 1131-1137.
21. Isacchi B et al. النشاط المضاد لتخثر الآلام من فيرباسكوسايد في نموذجين من آلام الأعصاب. J فارماكول 2011 ؛ 63: 594-601.

22. Cook TJ et al. النفاذية المعوية للكلوربيريفوس باستخدام طريقة نضح الأمعاء أحادية المرور في الفئران. علم السموم 2003 ؛ 184: 125-133.

23. كومار يس وآخرون. يتوسط P-glycoprotein-and cytochrome P -450- تفاعل الأدوية العشبية. تفاعل عقار الأيض المخدرات 2010 ؛ 25: 3-16.
24. Walle UK وآخرون. نقل الجينيستين -7- الجلوكوزيد بواسطة خلايا CACO المعوية البشرية -2: دور محتمل لـ MRP2. ريس كومون مول باتول فارماكول 1999 ؛ 103: 45-56.
25. إيتو ك وآخرون. التعبير السطحي القمي / القاعدي لناقلات الأدوية ودوره في نقل الأدوية النواقل. فارم ريس 2005 ؛ 22: 1559-1577.
26. Laitinen L et al. كاكو -2 مزارع الخلايا في تقييم الامتصاص المعوي: تأثيرات بعض الأدوية التي يتم تناولها بشكل مشترك والمركبات الطبيعية في المصفوفات البيولوجية. (جامعة هلسنكي ، فنلندا ، 2006) أطروحة أكاديمية ، ص 1 - 66.
27. Scambia G et al. يعزز كيرسيتين تأثير الأدرياميسين في خط خلايا سرطان الثدي البشري المقاومة للأدوية المتعددة -7: البروتين السكري كهدف محتمل. السرطان الكيميائي فارماكول 1994 ؛ 34: 459–464.
28. Choi DH et al. تأثير myricetin ، أحد مضادات الأكسدة ، على الحرائك الدوائية للوسارتان ومستقلبه النشط ، EXP -3174 ، في الجرذان: الدور المحتمل للسيتوكروم P 450 3 A4 ، سيتوكروم P 450 2 C9 و P- تثبيط بروتين سكري بواسطة ميريستين. J فارماكول 2010 ؛ 62: 908-914.
29. Tanino T et al. Paclitaxel -2 ′ - يمكن لعقار إيثيل كاربونات الأولي التحايل على التدفق الخلوي بوساطة P-glycoprotein لزيادة السمية الخلوية للأدوية. فارم ريس 2007 ؛ 24: 555-565.
30. هولمان بيسي وآخرون. امتصاص غليكوسيدات كيرسيتين وكيرسيتين في متطوعين صحيين لفغر اللفائفي. آم J كلين نوتر 1995 ؛ 62: 1276-1282.
31. Kellett GL et al. يتم توسط المكون المنتشر لامتصاص الجلوكوز المعوي عن طريق توظيف GLUT2 الناجم عن الجلوكوز في غشاء لوحة الفرشاة. Biochem J 2000 ؛ 350: 155–162.
32. المادة K وآخرون. يحدث فرز بروتينات غشاء البلازما الذاتية من موقعين في الخلايا الظهارية المعوية البشرية المزروعة (كاكو -2). خلية 1990 ؛ 60: 429-437.
33. Mahraoui L et al. الوجود والتعبير التفاضلي لـ SGLT1 ، GLUT1 ، GLUT2 ، GLUT3 ، و GLUT5 hexose transporter mRNAs في Caco {6}} الحيوانات المستنسخة فيما يتعلق بنمو الخلايا واستهلاك الجلوكوز. Biochem J 1994 ؛ 298: 629-633.

34. Mesonero J et al. تعبير يعتمد على السكر لناقل الفركتوز GLUT 5 في خلايا Cac -2. Biochem J 1995 ؛ 312: 757-762.

35. Walgren RA وآخرون. نقل الكيرسيتين وجلوكوزيداته عبر خلايا Caco الظهارية المعوية البشرية -2. بيوكيم فارماكول 1998 ؛ 55: 1721-1727.
36. يوشيكاوا تي وآخرون. التعبير المقارن لناقلات السداسي (SGLT1 و GLUT1 و GLUT2 و GLUT5) في جميع أنحاء الجهاز الهضمي للماوس. هيستوكيم خلية بيول 2011 ؛ 135: 183–194.
37. فونيس إل وآخرون. آثار فيرباسكوزيد ، جليكوسيد فينيل بروبانويد من لويزة الليمون ، على أغشية نموذج الفوسفوليبيد. تشيم فيز ليبيدز 2010 ؛ 163: 190-199.
38. Neilson AP et al. تأثير تركيبة مصفوفة الشوكولاتة على -3- إمكانية الوصول الحيوي لفلافان الكاكاو في المختبر والتوافر البيولوجي في البشر. J أغريك فود تشيم 2009 ؛ 57: 9418-9426.
39. Gao S et al. تؤثر المحتويات شديدة التباين من الفينولات في منتجات نبتة سانت جون على نقلها في نموذج خلية Caco المعوي البشري -2: الأساس المنطقي الصيدلاني والصيدلاني الحيوي لتوحيد المنتج. J أغريك فود تشيم 2010 ؛ 58: 6650 - 6659.
40. شرام دد وآخرون. تأثيرات الغذاء على امتصاص ودوائية فلافانول الكاكاو. علوم الحياة 2003 ؛ 73: 857 - 869.
41. Laurent C et al. تحفز مصفوفة النبيذ الخالية من مادة البوليفينول والإيثانول على تمايز خلايا Caco المعوية البشرية -2. تأثير ارتباطهم بمستخلص بذور العنب الغني بالبروسيانيدين. J أغريك فود تشيم 2005 ؛ 53: 5541-5548.
42. Artursson P et al. الارتباط بين امتصاص الدواء عن طريق الفم لدى البشر ومعاملات نفاذية الدواء الظاهرة في الخلايا الظهارية الداخلية للإنسان (Caco -2). Biochem Biophys Res Commun 1991 ؛ 175: 880 - 885.
43. Crespy الخامس وآخرون. مقارنة الامتصاص المعوي للكيرسيتين والفلوريتين والجلوكوزيدات في الفئران. J نوتر 2001 أ ؛ 131: 2109-2114.
44. Crespy V et al. التوافر البيولوجي للفلوريتين والفلوريدزين في الفئران. J نوتر 2001 ب ؛ 131: 3227-3230.