المناعة المدربة التي يسببها BCG تعزز استجابات التطعيم ضد الشاهوق اللاخلوي في تجربة إكلينيكية عشوائية استكشافية

مقدمة

الشاهوق هو مرض تنفسي حاد شديد العدوى تسببه بكتيريا البورديتيلا السعال الديكي وقد ظهر مرة أخرى كمشكلة صحية عامة خطيرة على الرغم من التغطية العالية للقاح. لسنوات ، تمت السيطرة على المرض في البلدان الصناعية من خلال التطعيم بلقاح الشاهوق كامل الخلايا (wPs) الذي تم تطبيقه في الأربعينيات -1950. كانت هذه اللقاحات فعالة للغاية وتسبب في حماية طويلة الأمد.

ومع ذلك ، أدى ارتفاع التفاعل والمخاوف المتعلقة بالسلامة إلى استبدالها في تسعينيات القرن الماضي بلقاح السعال الديكي اللاخلوي (aPs). تم تقديم لقاحات معززة aP ، بما في ذلك اللقاحات المركبة التي تحتوي على ذوفان الكزاز والدفتيريا (Tdap) إما مع أو بدون فيروس شلل الأطفال المعطل (IPV) (Tdap-IPV) ، بعد ذلك بوقت قصير. تستخدم لقاحات aP الآن على نطاق واسع لتعزيز المناعة لدى الأطفال في سن ما قبل المدرسة والمراهقين والبالغين. على الرغم من هذه الإجراءات وملف تعريف الأمان المحسن ، فقد أظهرت دراسات متعددة أن المناعة المستحثة تظل دون المستوى الأمثل 2 وتتلاشى بمرور الوقت. علاوة على ذلك ، فإن مدة الحماية بعد الجرعات المتكررة من aP تقصر تدريجياً من 4 إلى 6. أدت الحاجة المتزايدة لاستراتيجيات تطعيم جديدة ومحسنة إلى استكشاف مواد مساعدة جديدة تستهدف المناعة الفطرية وتعزز مناعة معينة لـ aPs7–9.

يمكن للقاحات المركبة أن تعزز المناعة. اللقاحات المركبة هي مزيج من عدة لقاحات مختلفة للوقاية من الأمراض توفر حماية متعددة للمرضى في نفس الوقت ، مما يقلل من إجهاد وألم تلقي الحقن المتعددة. في الوقت نفسه ، يمكن للقاح المركب أيضًا تحسين مناعة اللقاح ، لأنه يمكن أن يحفز المزيد من الاستجابات المناعية وينتج المزيد من الأجسام المضادة والخلايا المناعية ، مما يحسن بشكل فعال القدرة على الوقاية من العديد من الأمراض المختلفة. تحسين المناعة مهم جدًا في حياتنا اليومية. يمكن أن يعزز cistanche المناعة. يمكن للسكريات المتعددة الموجودة في اللحوم تنظيم الاستجابة المناعية لجهاز المناعة البشري ، وتحسين القدرة على إجهاد الخلايا المناعية ، وتعزيز تأثير تعقيم الخلايا المناعية.

انقر لمعرفة ما هو cistanche

يحمي لقاح Bacille Calmette-Guérin (BCG) من العدوى الفطرية مثل السل ، فضلاً عن الحماية من العدوى الثانوية بمسببات الأمراض غير ذات الصلة في نماذج الفئران 1. في البشر ، تم ربط هذه الآثار المفيدة غير المحددة بخفض وفيات الرضع وتم التحقق من صحتها في التجارب السريرية العشوائية. يسبب BCG تغييرات طويلة الأمد في الخلايا المناعية الفطرية التي تعزز استجابتها للتحفيز مع مسببات الأمراض غير ذات الصلة. هذه العملية تسمى المناعة المدربة ، وتتضمن إعادة البرمجة اللاجينية للخلايا الأحادية وتستمر لمدة تصل إلى عام بعد تلقيح BCG. تم إثبات الأهمية السريرية للمناعة المدربة في البشر من خلال الدراسات التي تستخدم BCG كنموذج أولي لتحريض المناعة المدربة والتطعيم أو العدوى البشرية التجريبية باعتبارها اضطرابًا ثانويًا في المناعة 15-17. هناك أدلة متراكمة على أن لقاح BCG يعدل الاستجابات المناعية التكيفية للقاحات. من بين ثماني دراسات تم تقييمها في مراجعة حديثة ، أظهرت خمس دراسات استجابات خلطية خاصة باللقاح مُحسّنة.

تشير الجهود المبذولة لتحديد التأثيرات التفاعلية لقاحات BCG والسعال الديكي إلى أن المناعة المدربة التي يسببها BCG قد يكون لها تأثير إيجابي على الاستجابة المناعية للسعال الديكي. في الفئران ، أدى التطعيم المسبق باستخدام BCG إلى تعزيز الاستجابات المناعية الخلطية من Th1 بعد aP ، ولكن ليس لقاح wP. في البشر ، أظهرت إحدى الدراسات السكانية أن الإدارة المشتركة لـ BCG مع لقاح السعال الديكي قللت من معدل الوفيات عند الرضع مقارنةً بتلقي اللقاحات بالتتابع. على حد علمنا ، لم يتم التحقيق في أي دراسة حتى الآن في دراسة عشوائية محكومة فيما إذا كانت المناعة المدربة تعدل الاستجابات المناعية لقاحات السعال الديكي أو قارنت توقيت إعطاء لقاح BCG بالنسبة إلى التطعيم أو التحدي الثاني.

هنا ، قمنا باختبار ما إذا كان لقاح BCG يؤثر على الاستجابة المناعية التكيفية للتلقيح ، وما إذا كانت المناعة المدربة مرتبطة بهذه الاستجابات. لقد أظهرنا أن المناعة المدربة التي يسببها BCG تعزز الجسم المضاد الخاص بـ aP ، واستجابات خلية Th1 الخاصة بـ aP ، واستجابات خلية الذاكرة الإجمالية B بعد أسبوعين من تحصين Tdap-IPV. ارتبطت هذه الزيادات بشكل إيجابي مع زيادة المؤشرات الحيوية للمناعة ، بما في ذلك IL -1 و IL -6. تسلط النتائج التي توصلنا إليها الضوء على دور المناعة المدربة التي يسببها لقاح BCG في تقوية المناعة ضد لقاحات السعال الديكي.

نتائج

تصميم الدراسة

Seventy-five healthy female volunteers were randomized to one of three cohorts to receive BCG and Tdap-IPV vaccines in different orders21. We chose to enroll only women since gender-specific effects of pertussis vaccines have been reported 22. The median age of the volunteers was 23, with no significant difference in age between cohorts (Kruskal–Wallis test; P = 0.6), as previously reported21. Two subjects were excluded from analysis for having a high anti-pertussis toxin IgG concentration before Tdap-IPV vaccination (>100 وحدة دولية / مل) ، مما يدل على الإصابة الحديثة بالسعال الديكي (الشكل 1 أ).

لتحديد التغييرات في استجابة لقاح TdapIPV المرتبطة بالمناعة المدربة ، تلقت المجموعة "المدربة من قبل BCG" BCG قبل 3 أشهر من TdapIPV. قمنا أيضًا بتضمين مجموعتين من مجموعات التحكم لحساب توقيت لقاح BCG. تلقت مجموعة "BCG plus Tdap" التطعيمات في الأطراف المتقابلة في نفس الوقت ، وتلقت مجموعة "Tdap-IPV" اللقاح Tdap-IPV أولاً و BCG بعد 3 أشهر (الشكل 1 ب). تم جمع الدم في عدة نقاط زمنية قبل التطعيمات وبعدها. يتم تحديد الطوابع الزمنية بالنسبة إلى خط الأساس للتلقيح Tdap-IPV (- قبل 3=3 شهر ، - M3 بالإضافة إلى W 2 = 3 أشهر بالإضافة إلى أسبوعين ، D 0=خط الأساس لـ Tdap-IPV أو لقاحات BCG و Tdap-IPV المتزامنة ، W 2=2 أسبوعًا بعد ذلك ، M3 زائد W 2=3 شهرًا بالإضافة إلى أسبوعين بعد ذلك ، Y 1=1 عام بعد ذلك). تم تحديد النتائج الأولية على أنها زيادات في الاستجابات المناعية التكيفية بعد أسبوعين أو سنة واحدة من التطعيم Tdap-IPV.

في المجموع ، قمنا بتقييم 31 نتيجة مناعية عبر ثلاث مجموعات تلقيح. استخدمنا اختبارًا مناعيًا متعدد الإرسال قائم على حبة لقياس تركيزات الأجسام المضادة لـ IgG ضد مستضدات السعال الديكي ، وتوكسين الكزاز (TET). تم قياس الخلايا B الكلية والخلايا B الخاصة بـ PRN مباشرة في الدم الكامل عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام PRN المسمى بالفلوريسنت (الشكل التكميلي 1). تم قياس استجابات الخلايا التائية Th1 و Th17 ضد مستضدات السعال الديكي عن طريق تحفيز الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي باستخدام PRN أو PT أو FHA لمدة 7 أيام وقياس إفراز IFN و IL22 و IL -17 بواسطة ELISA26.

لقاح BCG يعزز استجابات خلوية الخلايا المناعية للمنبهات غير ذات الصلة ، وهي ظاهرة تم تفسيرها من خلال آليتين بيولوجيتين مختلفتين. تسمى العملية الأولى المناعة غير المتجانسة وتعتمد على التنشيط غير المحدد للخلايا التائية. العملية الثانية التي تسمى المناعة المدربة ، تؤدي إلى زيادة إنتاج السيتوكينات المنشطة للالتهابات بواسطة الخلايا المناعية الفطرية. لقد حددنا النتائج الثانوية لمجموعة BCGtrained على أنها تغييرات في إنتاج السيتوكين لـ PBMCs بعد التحفيز باستخدام Candida albicans التي تقتل الحرارة (C _ alb) ، Staphylococcus aureus (S {6}} aur) ، Bordetella الشاهوق (Bp) ، أو عديدات السكاريد الدهنية (LPS). كما في الدراسات السابقة 16،21 ، قمنا بتحديد Th1 / 17 السيتوكينات IFN أو IL -22 أو IL -17 بعد 7 أيام كقراءة للمناعة غير المتجانسة أو السيتوكينات أحادية الخلية IL -10 أو IL -6 أو IL -1 أو TNF بعد 24 ساعة كقراءة للمناعة المدربة (الشكل 1 ب). تم قياس إنتاج السيتوكين استجابةً لمرض السل المتفطرة (Mtb) لتحديد المناعة المضادة للفطريات.

لقاح BCG السابق يعزز الاستجابات المناعية التكيفية التي يسببها Tdap-IPV

لتقدير تأثيرات المناعة المدربة على لقاح Tdap-IPV ، لكل نقطة نهاية أولية ، قمنا ببناء نموذج خطي للتأثيرات المختلطة مع وقت العينة ، وعضوية الفوج ، بالإضافة إلى تفاعل الوقت والفوج كمتغيرات مشتركة. درسنا تباينين: (1) الاختلافات مقارنة بخط الأساس (D 0) داخل كل مجموعة (تأثيرات ما بعد التطعيم ، الجدول التكميلي 1) ، و (2) الاختلافات بين المجموعات في حجم تلك التغييرات (التفاضلية الآثار ، الجدول التكميلي 2). شنت جميع الأفواج زيادات كبيرة في استجابات الجسم المضاد للمستضدات الخمسة التالية للتمنيع Tdap-IPV. ظلت تركيزات الجسم المضاد أعلى من خط الأساس حتى عام بعد التطعيم (Y1) ، باستثناء TET ، التي تضاءلت في مجموعات BCGtrained و BCG plus Tdap (الشكل التكميلي 2 أ).

زادت جميع الأتراب بشكل كبير من أعداد خلايا PRN plus B المتداولة بعد أسبوعين من التحصين ، والتي كانت في الأساس خلايا ذاكرة B (MBCs) (الشكل التكميلي 3 أ). لم نلاحظ الاختلافات بين الأفواج (الجدول التكميلي 2 والشكل التكميلي 3 ب). مقارنة بالمجموعة النموذجية Tdap-IPV ، عرضت المجموعة النموذجية المدربة من قبل BCG تغييرات طية في سجل الأساس المحسّن {1 0} (W2 / D0) لاستجابات IgG لـ PT و FHA و PRN. لوحظ نمط مماثل عند مقارنة هذه الاستجابات مع مجموعة BCG بالإضافة إلى Tdap (الشكل 2 أ). لاحظنا أيضًا ارتفاع تركيزات IgG الخاصة بالسعال الديكي في المجموعة المدربة من قبل BCG بعد أسبوعين من التطعيم (الشكل التكميلي 2 ب) ، على الرغم من أن الاختلاف في القيم المطلقة كان أقل وضوحًا من الاختلاف في الزيادات المرتبطة بخط الأساس عند د 0.

علاوة على ذلك ، عرض الأشخاص في المجموعة المدربة من قبل BCG زيادة كبيرة في استجابات MBC الإجمالية ، بما في ذلك MBC بتبديل فئة IgG (الشكل 2 ب والشكل التكميلي 4). أظهرت الموضوعات في المجموعة المدربة من قبل BCG أيضًا ارتفاع إفراز IFN استجابة للتحفيز مع جميع مستضدات السعال الديكي الثلاثة. على العكس من ذلك ، لوحظت زيادات كبيرة في مستضد السعال الديكي الفردي في مجموعة Tdap-IPV (PT) واثنين من مستضدات السعال الديكي في مجموعة BCG بالإضافة إلى Tdap (PT و FHA ، الشكل 2 ج والشكل التكميلي 5). لاحظنا أيضًا وجود اتجاه حيث كانت الزيادات في إنتاج IFNg أعلى في المجموعة المدربة من قبل BCG مقارنة بالفئات الأخرى ، على الرغم من أن هذا لم يصل إلى دلالة إحصائية (الجدول التكميلي 2 والشكل التكميلي 5 ب). كانت استجابات IL -22 و IL -17 الخاصة بالسعال الديكي ضعيفة لجميع المجموعات (الجدول التكميلي 1). إجمالاً ، تشير هذه النتائج إلى استجابات الأجسام المضادة الخاصة بالسعال الديكي المحسّنة ، واستجابات MBC المحسّنة الإجمالية لـ IgG ، واستجابات IFN الأوسع نطاقًا للسعال الديكي في المجموعة المدربة من قبل BCG مقارنة بالمجموعتين الأخريين.

استكشفنا العلاقات بين الزيادات في النتائج الأولية التي تم تعزيزها في المجموعة المدربة من قبل BCG. لهذا التحليل الاستكشافي ، تم حساب الارتباطات بين الأجسام المضادة والخلايا البائية والسيتوكينات لكل مجموعة. عرضت المجموعة المدربة من قبل BCG العديد من الارتباطات الإيجابية الهامة والأقوى من الناحية الكمية بين هذه الاستجابات ، بينما عرضت مجموعات Tdap-IPV و BCG plus Tdap ارتباطات أضعف أو عكسية ، مع أقوى نمط يتوافق مع التغييرات في استجابات IFN (الشكل 3 أ). كانت معاملات الارتباط بين الاستجابات في BCGtrained أكبر بكثير من تلك الموجودة في مجموعات التحكم ، مما يشير تمامًا إلى تحريض استجابة مناعية تكيفية خاصة بالسعال الديكي أكثر تنسيقًا في مجموعة BCG المدربة (الشكل 3 ب).

يرتبط إنتاج السيتوكينات IL -1 و IL -6 بالاستجابات المناعية التكيفية الخاصة بالسعال الديكي

عرضت المجموعة المدربة من قبل BCG استجابات IFN الإجمالية المحسنة لـ IgG-switched و IFN الخاصة بالسعال الديكي. علاوة على ذلك ، مقارنةً بمجموعات Tdap-IPV و BCG plus Tdap ، أظهرت المجموعة المدربة من BCG أيضًا استجابات أعلى للأجسام المضادة للسعال الديكي. نظرًا لأن لقاح BCG في البشر يمكن أن يزيد من إنتاج السيتوكين للخلايا المناعية المنتشرة استجابة للتحفيز غير المتجانسة ، بعد أسابيع إلى شهور من التطعيم ، قمنا بتقييم ما إذا كانت استجابات السيتوكينات التي يسببها BCG مرتبطة بالتغيرات في الاستجابات المناعية الخاصة بالسعال الديكي بعد التطعيم Tdap-IPV. بعد أسبوعين و 3 أشهر من لقاح BCG ، كانت هناك استجابة محسنة بشكل كبير ضد البكتيريا الفطرية التي تتميز بزيادة إنتاج IL -22 و IFN مقارنة بخط الأساس للتلقيح BCG (الشكل التكميلي 6 أ ، ب).

بشكل عام ، لم تظهر المجموعة المدربة من قبل BCG زيادة في إنتاج المناعة غير المتجانسة أو السيتوكينات المدربة المرتبطة بالمناعة ، كما لوحظ سابقًا (الشكلان التكميليان 6 و 8). ومع ذلك ، نظرًا لأن تحريض إنتاج السيتوكين يختلف بين الأفراد ، فقد حسبنا التغييرات بين أسبوعين بعد BCG و 3 أشهر بعد BCG مقارنة بخط الأساس BCG (الشكلان التكميليان 7 و 9). تم حساب ارتباطات بيرسون لتحديد قوة الارتباط بين هذه القياسات في كل نقطة زمنية. بعد ثلاثة أشهر من تلقيح BCG ، أي عند خط الأساس Tdap-IPV ، كانت استجابات السيتوكينات للتحفيز في المختبر شديدة الترابط. ارتبطت استجابات السيتوكينات غير المتجانسة المرتبطة بالمناعة سلبًا باستجابات السيتوكينات المدربة المرتبطة بالمناعة ، ومن بين تلك الارتباطات بين IL -6 و IL -1 كانت أقوى (الشكل 4) ، كما تم وصفه سابقًا. كانت أنماط الارتباط بعد أسبوعين من لقاح BCG متشابهة مع السيتوكينات غير المتجانسة المرتبطة بالمناعة ، لكن الارتباطات بين السيتوكينات المرتبطة بالمناعة المدربة كانت أضعف بكثير ، باستثناء استجابات IL -10. مجتمعة ، تشير هذه النتائج إلى تنشيط مناعي فطري منسق لمدة 3 أشهر ، ولكن ليس بعد أسبوعين من تحصين BCG في المجموعة المدربة على BCG.

بعد ذلك ، اكتشفنا ما إذا كانت الاختلافات في استجابات السيتوكينات للمجموعة المدربة من قبل BCG مرتبطة بالتغيرات في نقاط النهاية المناعية التكيفية لـ TdapIPV. قمنا بفحص التغييرات في إنتاج السيتوكينات بعد أسبوعين و 3 أشهر من لقاح BCG. وجدنا أن الزيادات في السيتوكينات غير المتجانسة المرتبطة بالمناعة تميل إلى أن تكون ضعيفة ، وسلبية ، مرتبطة بنقاط النهاية الأولية في كل من أسبوعين (الشكل التكميلي 10) و 3 أشهر بعد لقاح BCG (الشكل 5 أ). على النقيض من ذلك ، فإن الزيادات في السيتوكينات المدربة المرتبطة بالمناعة بعد 3 أشهر من تلقيح BCG ، وخاصة IL -1 / IL -6 استجابة لتحفيز LPS ، كانت مرتبطة بشكل إيجابي بشكل كبير باستجابات الجسم المضاد PRN و FHA ، وإنتاج IFN في استجابة لتحفيز PT ، وإجمالي استجابات MBC بتبديل IgG (الشكل 5 ب ، ج).

تمشيا مع هذا ، لم نلاحظ التغييرات في الوفرة النسبية لأعداد خلايا الدم المحيطية (الشكل التكميلي 11 أ) ، ولم تكن التغييرات في الوفرة الخلوية 3 أشهر بعد التطعيم BCG مرتبطة بشكل إيجابي بنقاط نهاية السعال الديكي (الشكل التكميلي 11 ب). أظهرت الزيادات في إنتاج IL -1 استجابة لتحفيز LPS (IL1b. LPS) 3 أشهر بعد لقاح BCG ارتباطًا قويًا باستجابات Tdap-IPV المتعددة وتم اختيارها لتحديد مقدار التباين في كل استجابة يمكنهم شرحها . تم حساب التباين الكلي الموضح (Rsq المتوقع) لكل نتيجة ويمكن أن تفسر التغييرات في IL -1 ما يصل إلى 60 بالمائة من تباين الاستجابة (الشكل 5 د). بشكل عام ، تسلط هذه النتائج الضوء على أن استجابات السيتوكينات المدربة المرتبطة بالمناعة بعد 3 أشهر من تلقيح BCG مرتبطة بالزيادة في استجابات الأجسام المضادة الخاصة بالسعال الديكي وإنتاج IFN ، بالإضافة إلى استجابات MBC الإجمالية IgG.

مناقشة

يحدث تحريض المناعة المدربة لدى البشر بعد أسابيع إلى شهور من تلقي لقاح BCG ويمكن أن يؤثر على الاستجابة للتحصين اللاحق في البشر. هنا ، نظهر أن المناعة المدربة التي يسببها لقاح BCG قبل 3 أشهر ، ولكن ليس بالتزامن مع جرعة معززة من Tdap-IPV ، تزيد من استجابات IgG للسعال الديكي وتنظم الاستجابات الخلوية الخاصة بالسعال الديكي. قامت العديد من الدراسات بالتحقيق في التأثيرات التفاعلية لـ BCG واللقاحات الأخرى ، حيث أبلغت معظم هذه الدراسات عن تأثير إيجابي لـ BCG على الاستجابات المناعية للسعال الديكي. ومع ذلك ، على حد علمنا ، لم تحقق أي دراسة حتى الآن توقيت لقاح BCG بشأن الاستجابة للسعال الديكي أو درست ميزات الاستجابة المناعية المدربة BCGinduced التي ترتبط باستجابة اللقاح المعززة.

قامت الموضوعات في جميع المجموعات الثلاثة بتركيب استجابات خلطية مضادة للسعال الديكي و PRN بالإضافة إلى خلايا B بعد أسبوعين من التطعيم باستخدام TdapIPV. على الرغم من أن استجابات الجسم المضاد لـ PRN كانت أعلى بكثير في المجموعة المدربة على BCG ، إلا أننا لم نلاحظ نمطًا مشابهًا في استجابات الخلايا البائية الخاصة بـ PRN. يمكن تفسير ذلك من خلال تحريض أسرع للأجسام المضادة في مجموعة BCG المدربة ، والتي تتراكم بمرور الوقت بسبب نصف عمرها الطويل.

ومع ذلك ، نظرًا لعدم قياس تركيزات الجسم المضاد قبل أسبوعين بعد التطعيم ، لم يكن من الممكن تقدير الاختلافات في الحركية بين المجموعات. إلى جانب زيادة استجابات الجسم المضاد لـ PRN ، وجدنا أيضًا أن استجابات الأجسام المضادة لـ FHA و PT كانت أعلى في المجموعة المدربة على BCG. كنا ، لسوء الحظ ، غير قادرين على قياس استجابات الخلايا B الخاصة بـ PT- و FHA بسبب الارتباط العالي غير المحدد لخلايا FHA و PT مع الخلايا B. ومع ذلك ، من الواعد زيادة استجابات IgG MBC الإجمالية في المجموعة المدربة على BCG وأن هذه الزيادات كانت مرتبطة بزيادة في استجابات الجسم المضاد. وجدنا أيضًا أن استجابات IFN استجابةً لإعادة تحفيز مستضد السعال الديكي قد تم تحسينها في المجموعة المدربة من قبل BCG. على الرغم من أن هذه التغييرات كانت صغيرة نسبيًا ، إلا أننا لاحظنا اتجاهًا حيث كانت التغييرات من W2 إلى D 0 أعلى منها في المجموعات النموذجية الأخرى. قد تساعد الدراسات الإضافية التي أجريت على المزيد من الموضوعات في التحقق من صحة هذا النمط ، والذي تم تأكيده في دراسة على الفئران. وبالمثل ، فقد ثبت أيضًا أن لقاح BCG حديثي الولادة يحفز استجابات Th1 لذوفان الكزاز.

ارتبطت الزيادات في الأجسام المضادة للسعال الديكي ، وإجمالي استجابات IgG MBC ، والسعال الديكي استجابات IFNg ارتباطًا وثيقًا ببعضها البعض في المجموعة المدربة من قبل BCG ، مما يشير إلى التنشيط المنسق لوظائف المستجيب والذاكرة. علاوة على ذلك ، ارتبطت الزيادات في الأجسام المضادة للسعال الديكي ، وإجمالي استجابات MBC بتبديل IgG ، و IFN استجابةً لإعادة تنشيط PT في المجموعة المدربة من قبل BCG مع الاستجابات الفطرية ، ولا سيما IL -1 و IL -6. تتوافق هذه النتائج مع دراسة بشرية سابقة من مجموعتنا حيث درسنا تأثير BCG على لقاح الأنفلونزا. تم أيضًا إبراز أهمية مسار IL -1 / IL -6 كمؤشر حيوي للمناعة المدربة في نموذج للعدوى الفيروسية التجريبية بعد لقاح الحمى الصفراء. بشكل عام ، لم نلاحظ الارتباطات بين المحفزات الميكروبية المعينة والنتائج الأولية ، مما يشير إلى أن التغييرات الشاملة في مسارات استجابة السيتوكينات وليس أي حالة تحفيز معينة مرتبطة بالاستجابة المحسنة للتطعيم ضد السعال الديكي. بينما نتوقع أن تكون استجابة IL -6 و IL -1 السائدة للتحفيز الميكروبي مشتقة من الخلايا الوحيدة والخلايا التغصنية ، فقد تساهم الخلايا البائية أيضًا في إنتاج السيتوكين ولا يمكننا استبعاد مساهمتها المحتملة.
كان السؤال الرئيسي هو إلى متى تستمر المناعة المدربة التي يسببها BCG بعد التطعيم. في المختبر ، تم التعرف على بصمات المناعة المدربة التي يسببها BCG في البشر في وقت مبكر يصل إلى أسبوعين وحتى 1- عام بعد التطعيم 14. أدت الدراسات السريرية التي أجريت على البشر إلى ترجمة هذه النتائج إلى استجابة في الجسم الحي إلى تقييد فترة الملاحظة لما يصل إلى 5 أسابيع بعد تلقيح BCG 15-17. لاحظنا تحفيزًا أضعف للسيتوكينات IL -6 و IL -1 المرتبطة بالمناعة المدربة مقارنة بالدراسات السابقة 16 ، كما تم الإبلاغ سابقًا. قد تؤثر الاختلافات الدُفعة إلى الدُفعة في إنتاج لقاح BCG على تحريض المناعة المدربة وقد تفسر التأثير الذي لاحظناه في هذه الدراسة 33.

علاوة على ذلك ، لوحظت أيضًا اختلافات بين سلالات BCG تؤثر على المناعة والفعالية السريرية. على الرغم من ذلك ، فإننا مع ذلك نوضح أن استجابات IL -1 و IL -6 غير المتجانسة بعد 3 أشهر من لقاح BCG ، أي في لحظة التطعيم Tdap-IPV ، ولكن ليس بعد أسبوعين من لقاح BCG مرتبط بالسعال الديكي المحسن المناعة الخلطية والخلوية. تشير هذه النتائج إلى أن المناعة المدربة تستمر في التطور في الأسبوعين الماضيين بعد تلقيح BCG ، وتؤكد أن "الاستجابة" الوظيفية الأساسية للخلايا المناعية الفطرية المنتشرة قد تكون حاسمة لتطوير استجابة لقاح أكثر فعالية.

توضح هذه الدراسة أن لقاح BCG السابق يمكن أن يعزز الاستجابة لمستضدات لقاح aP. والمثير للدهشة أننا لم نلاحظ هذا التأثير على TET و DIPH. يمكن تفسير ذلك من خلال حقيقة أن جميع البالغين قد تلقوا تطعيمًا معززًا سابقًا مع Td-IPV ولكن ليس مع aP في سن 9 سنوات ، على النحو الموصى به في برنامج التحصين الوطني. تمشيا مع هذا ، وجدنا أن تركيزات الجسم المضاد الأساسية لمستضدات aP كانت مرتبطة بشكل كبير عبر الموضوعات في دراستنا ، ولكنها لم تكن مرتبطة بـ DIPH و TET ، مما يشير إلى أن المناعة الخلطية لهذه المكونات غير متزامنة مع مستضدات aP (تكميلية الشكل 12). كانت مستويات الأجسام المضادة DIPH و TET الأساسية مترابطة بشكل كبير ، وهو ما يتوافق مع إدارتهما المشتركة في اللقاحات. وبالتالي ، فإن الاختلافات في المناعة الموجودة مسبقًا ضد مكونات اللقاح المختلفة قد تلعب دورًا في قدرة لقاح BCG والمناعة المدربة للتأثير على الاستجابة لـ Tdap-IPV.

Although our study was not designed to investigate vaccine efficacy, a major question is whether the enhanced antibody response that we observed in the BCG-trained cohort may translate into better clinical protection. There is much debate about the correlates of protection against pertussis37. Nonetheless, PT antibodies have previously been used to correlate with clinical protection against disease (>25 وحدة دولية / مل) 29. باستخدام هذه العتبة ، تم تحقيق الحماية المصلي شبه الكاملة بعد أسبوعين من TdapIPV في مجموعات BCG المدربة و BCG plus Tdap ، في حين أن جزءًا صغيرًا من الموضوعات في مجموعة Tdap-IPV لم تكن محمية مصليًا (الشكل التكميلي 13).

إلى جانب الأجسام المضادة ، تم أيضًا تسليط الضوء على مناعة الخلايا التائية وخاصة استجابات Th1 و Th17 باعتبارها مهمة للحماية من السعال الديكي في النماذج الحيوانية. وجدنا أن المجموعة المدربة من قبل BCG عرضت IFN معززًا استجابةً لإعادة تحفيز مستضد السعال الديكي ، وهو عبارة عن قراءة لمناعة Th1 وبالتالي قد يقترح تحسين الحماية السريرية ضد السعال الديكي. أخيرًا ، لم يتم التحقق من صحة نقاط النهاية المناعية الحالية التي تهدف إلى قياس المناعة التكيفية الخاصة بالسعال الديكي ، مثل الخلايا التائية أو الخلايا البائية أو الاستجابات الخلطية ، باعتبارها ارتباطات مناعية للحماية. هناك العديد من الاحتمالات لسد هذه الفجوة المعرفية ، على سبيل المثال ، من خلال إجراء دراسات وبائية أو عن طريق استخدام نموذج العدوى البشرية الذي تم إنشاؤه مؤخرًا للسعال الديكي.

يتمثل أحد قيود دراستنا الاستكشافية في أن مجتمع الدراسة يتكون من البالغين الذين تم تحضيرهم في سن الرضاعة بلقاح DTP كامل الخلية ، والذي من المعروف أنه يؤثر على الاستجابة التكيفية للسعال الديكي بعد عقود من التهيئة ويؤثر على تحريض مناعة الخلايا التائية في الاستجابة للتطعيم المعزز 40. وبالتالي ، سيكون من المهم تحديد ما إذا كانت النتائج التي توصلنا إليها تترجم إلى الأطفال الذين ولدوا في عصر التطعيم الروتيني للأطفال. بالإضافة إلى ذلك ، نظرًا لأننا قمنا بتضمين الإناث فقط ، فسيكون من المهم تحديد ما إذا كانت هناك اختلافات مع الذكور. في هذه الدراسة الاستكشافية ، قمنا بقياس نقاط النهاية المناعية المضادة للسعال الديكي بما في ذلك استجابات الجسم المضاد ، والاستجابات الإجمالية وخلايا PRN بالإضافة إلى الخلايا البائية ، واستجابات الخلايا التائية الخاصة بمستضد معين. لم يتم تصحيح قيم P للاختبار المتعدد بسبب الطبيعة المستهدفة للاستجابات المناعية التي تم تقييمها. الأهم من ذلك ، تم إجراء هذه الدراسة على متطوعين من أصل أوروبي غربي (هولندي) ، ويجب أن تبحث الدراسات المستقبلية فيما إذا كان يمكن العثور على تأثيرات مماثلة في مجموعات من خلفيات وراثية مختلفة. قيد آخر هو أنه تم قياس مجموعة فرعية فقط من السيتوكينات. في حين أن هذا كان مناسبًا للفرضيات المحددة التي نهدف إلى اختبارها ، إلا أن تحديدًا أكثر شمولاً وغير متحيز للسيتوكين والاستجابات الأخرى قد يؤدي إلى رؤى جديدة.

في الختام ، في هذه الدراسة ، أبلغنا أن لقاح BCG الذي تم إعطاؤه قبل 3 أشهر من التطعيم Tdap-IPV يعزز بشكل كبير المناعة ضد السعال الديكي وأن المؤشرات الحيوية للمناعة المدربة هي أكثر الارتباطات موثوقية لاستجابات التطعيم المحسنة هذه. ستكون دراسات التحقق الإضافية ضرورية لتقييم هذه النتائج عبر مجموعات الدراسة المتنوعة ، وهناك حاجة إلى مزيد من الدراسات المناعية والجينية للتحقق ميكانيكيًا من دور مسارات IL -1 و IL -6. إجمالاً ، سيكون تحديد الوظيفة المناعية الفطرية الأساسية ، والتي يمكن تعديلها بواسطة BCG ، ضروريًا لفهم كيفية توجيه الاستجابات المناعية التكيفية التي يسببها اللقاح نحو الاستمناع الفائق والحماية من الأمراض.

طُرق

تجربة سريرية

تم إجراء هذه التجربة العشوائية ذات التسمية المفتوحة أحادية المركز في المركز الطبي لجامعة Radboud (نيميغن ، هولندا) من 2 مارس 0 15 إلى 2 يوليو 0 1621. تم تسجيل بروتوكول الدراسة في التجارب السريرية. gov (NCT02771782) وتمت الموافقة عليها من قبل اللجنة الأخلاقية الطبية في Arnhem-Nijmegen. تم تجنيد المتطوعين باستخدام لوحات الإعلانات وفي جامعة رادبود في نيميغن وحصلوا على تعويضات معتدلة. تم تضمين المتطوعين الذين لم يتم تطعيمهم سابقًا بلقاح BCG أو لقاحات السعال الديكي مؤخرًا. كانت معايير الاستبعاد هي (1) التطعيم السابق لـ BCG أو التطعيم الأخير بلقاحات تحتوي على السعال الديكي ، (2) الحساسية تجاه النيومايسين أو البوليميكسين أو رد الفعل التحسسي للتلقيح السابق مع لقاحات الدفتيريا أو الكزاز أو السعال الديكي أو لقاح شلل الأطفال ، (3) استخدام النظامية أدوية أخرى غير موانع الحمل الفموية ، و (4) الحمل أو تاريخ الأمراض الناتجة عن نقص المناعة. تم تحديد حجم الفوج بناءً على الدراسات السابقة التي أجرتها مجموعتنا والتي بحثنا فيها في تأثيرات لقاح BCG على الاستجابات المناعية الفطرية. تم إجراء التوزيع العشوائي عبر أذرع الدراسة باستخدام خوارزمية قائمة على البرامج. كان لجميع الأشخاص تاريخ من التهيؤ مع السعال الديكي كامل الخلية في السنة الأولى من العمر. تم تضمين 75 متطوعة. بعد الحصول على موافقة خطية مستنيرة ، تم جمع الدم في أنابيب حمض الإيثيلين أمينيتراسيتيك (EDTA) أو أنابيب الليثيوم هيبارين (LiHep) ، وتم إعطاء اللقاحات. تم الحصول على تعداد الدم الكامل باستخدام محلل أمراض الدم Sysmex XN -450. تلقى المشاركون BCG الدنماركي 1331 (معهد مصل ستاتين ، كوبنهاغن ، الدنمارك ؛ 0.1 مل داخل الأدمة) و Tdap-IPV (Boostrix Polio ، GlaxoSmithKline ؛ 0.5 مل في العضل). تم تخزين الأمصال في درجة حرارة -20 درجة حتى التحليل ، وتمت معالجة الدم الكامل لمزيد من التحليل كما هو موضح أدناه. تم استخدام إرشادات المعايير الموحدة لتجارب الإبلاغ (CONSORT) لإعداد هذه المخطوطة (الشكل التكميلي 14).

التحليل المصلي

تم تحليل الأمصال من أجل تركيزات الأجسام المضادة IgG الخاصة بـ PT- و FHA- و PRN- و TET- و DIPH باستخدام مقايسة مناعية متعددة تعتمد على حبة الفلورسنت. تم ربط المستضدات تساهميًا مع كريات MicroPlex المجهرية المنشطة بالكربوكسيل المشفرة بالألوان (الخرز) (Luminex ، أوستن ، تكساس ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم استخدام المستضدات التالية للاقتران: PT عالي النقاء (معهد اللقاحات الهولندي) ، FHA (Kaketsuken ، Kumamoto ، اليابان) ، P.69 PRN المعبر عنه وتنقيته من تركيبة الإشريكية القولونية 41 ، ذوفان الخناق (معهد اللقاحات الهولندي) ، والكزاز توكسين (T3194 ، سيجما الدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية). بعد خطوة الغسيل في برنامج تلفزيوني ، تم تنشيط 12.5 × 1 0 6 حبات كربوكسيلية / مل في برنامج تلفزيوني يحتوي على 2.5 ملغ من 1- إيثيل 3- ({{2 0}} ثنائي ميثيل أمينوبروبيل) - هيدروكلوريد الكربوديميد (Thermo Fisher Scientific ، Waltham ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) و 2.5 مجم من N-hydroxysulfosuccinimide (Thermo Fisher Scientific ، Waltham ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تخفيف مولدات الضد للاقتران في PBS إلى تركيز 10 ميكروغرام من PT أو FHA أو PRN أو 100 ميكروغرام من DT أو 25 ميكروغرام من TET لكل 12.5 × 10 حبات منشطة وحضنت لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة في الظلام تحت دوران مستمر. بعد ثلاث خطوات للغسيل ، تم تخزين الخرزات المقترنة بالمستضد في الظلام في برنامج تلفزيوني يحتوي على 0.03 بالمائة (وزن / حجم) أزيد الصوديوم و 1 بالمائة (وزن / حجم) ألبومين مصل بقري عند 4 درجات حتى الاستخدام. تم تحضين الأمصال المخففة 1/200 و 1/4000 في PBS المحتوية على 0.1 بالمائة (حجم / حجم) 20 و 3 بالمائة (وزن / حجم) BSA مع حبيبات مقترنة بمستضد في 96- لوحة مرشح جيد لمدة 45 دقيقة في درجة حرارة الغرفة الساعة 750 مساءً في الظلام. تم تضمين الأمصال المرجعية في سلسلة التخفيف ، والأمصال لمراقبة الجودة ، والفراغات في كل لوحة.

تمت معايرة المعيار المرجعي الداخلي لمرض السعال الديكي وفقًا لمنظمة الصحة العالمية الجزء الأول من IS الجزء 06/140 وتم تخفيفه بشكل متسلسل 4- أضعاف على 6 آبار (1/200 إلى 1/204800). تمت معايرة المعيار المرجعي الداخلي لـ DIPH و TET وفقًا لمنظمة الصحة العالمية NIBSC DI -3 و TE -3 وتم تخفيفه بشكل متسلسل 4- أضعاف على 8 آبار (1/50 إلى 1/819200). بعد الحضانة ، تم غسل الآبار 3 مرات باستخدام PBS ، واحتضانها بأجسام مضادة IgG من الماعز المسمى R-phycoerythrin (مختبرات Jackson Immunoresearch ، West-Grove ، PA ، الولايات المتحدة الأمريكية) لمدة 30 دقيقة ، وغسلها. تم تضمين الخرزات في برنامج تلفزيوني وتم الحصول على كثافة مضان متوسطة (MFI) على Bio-Plex LX200. تم تحويل MFI إلى IU / mL عن طريق الاستيفاء من 5- منحنى معياري لوجستي للمعلمة باستخدام برنامج Bioplex Manager 6.2 (مختبرات Bio-Rad ، Hercules ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) وتصديرها إلى Microsoft Excel.

عزل وتحفيز واكتشاف السيتوكينات PBMC

تم عزل PBMCs بواسطة الطرد المركزي المتدرج كثافة Ficoll وتم تعليقه عند 5 × 106 / مل في وسط ثقافة RPMI (وسط معهد Roswell Park Memorial ؛ Invitrogen ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) مكملًا بالجنتاميسين ، الجلوتاماكس (GIBCO) ، والبيروفات. إجمالاً ، تم اقتطاع 100 ميكرولتر لكل بئر في 96- ألواح بئر (كورنينج) وتم تحفيزها بواحد من RPMI (تحكم سلبي) ، عديد السكاريد الدهني Escherichia coli (LPS ؛ 10 نانوغرام / مل ، Sigma-Aldrich) ، Mycobacterium tuberculosis H37Rv (5 ميكروغرام / مل) ، المكورات العنقودية الذهبية المميتة بالحرارة (1 × 106 / مل ، عزل سريري) ، المبيضات البيضاء القاتلة بالحرارة (1 × 106 / مل ، سلالة UC820) ، والسعال الديكي البورديتيلا المقتول بالحرارة ( 1 ميكروغرام / مل ، سلالة B1917) ، PT (2 ميكروغرام / مل) ، PRN (4 ميكروغرام / مل ، بروتينات Reagent ، PFE -031) ، FHA (2 ميكروغرام / مل). تم توفير PT و FHA من قبل AM Buisman في المعهد الوطني للصحة العامة والبيئة (RIVM ، بيلتهوفن ، هولندا). تم تحضين الخلايا عند 37 درجة و 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة للكشف عن IL -1 و IL -6 و IL -10 و TNF أو 7 أيام لـ IFN و IL {{31} } و IL -17. تم تخزين المواد الطافية عند درجة −20. تم قياس السيتوكينات في طاف ثقافة PBMC باستخدام مجموعات مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) من أنظمة R&D (IL -1 ، TNF ، IL17 ، IL -22) أو Sanquin (IL -6 ، IL -10 ، IFN) وفقًا لإرشادات الشركة المصنعة.

قياس تدفق الخلايا البائية

تم إجراء تلطيخ الخلايا البائية مباشرة على الدم الكامل باستخدام لوحة تلطيخ الأجسام المضادة (الجدول التكميلي 3) بما في ذلك PRN المسمى بالفلوري للكشف عن الخلايا البائية الخاصة بالمستضد. لتسمية الخلايا B الخاصة بـ PRN ، تم ربط PRN (بروتينات ReagentProteins ، PFE -031) بالفلوريسين (مجموعة ملصقات FITC للجسم المضاد ، بيرس) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة (PRN-FITC). إجمالاً ، تم تخفيف 1-2 مل من الدم الكامل المسحوب حديثًا والمجمع في أنابيب LiHep في محلول FACS (PBS plus 0. {{1 0} 9 بالمائة NaN3 بالإضافة إلى 0.2 بالمائة ألبومين مصل البقر ، Calbiochem) والخلايا تم تكويرها ثم غسلها مرتين باستخدام محلول FACS. تم تعليق الخلايا في المخزن المؤقت FACS ثم تلطيخها بكوكتيل الأجسام المضادة للنمط الظاهري للخلية B لمدة 15 دقيقة ، ثابتة (FACSLysing ، BD Biosciences) ، وبعد غسل آخر باستخدام FACS تم تحليلها خلال ساعة واحدة من التلطيخ. تم إجراء قياس التدفق الخلوي للخلايا B الخاصة بمستضد PRN في الدم الكامل على مقياس التدفق الخلوي LSRII (BD Biosciences) مع إعدادات أداة معيارية. تم تحليل بيانات التدفق الخلوي باستخدام Infinicyte (الإصدار 2.0 ، Cytognos). لكل عينة ، تم الحصول على 2 × 106 خلية في بوابة الخلايا الليمفاوية (الشكل التكميلي 1 أ). تم إغلاق الخلايا الليمفاوية بعد إزالة المضاعفات والحطام. تم تحديد الخلايا البائية على أنها CD45 plus CD19 plus وتم تحديد الخلايا B الخاصة بـ PRN-FITC. تم تحديد مجموعات فرعية من الخلايا البائية باستخدام استراتيجية بوابة معدلة. حاولنا اكتشاف الخلايا البائية الخاصة بـ PT عن طريق قياس التدفق الخلوي ، لكننا لم ننجح بسبب الخلفية العالية الناتجة عن تلطيخ غير محدد.

إحصائيات

تم تحويل قيم السيتوكين والجسم المضاد 10- لحساب توزيعها المنحرف. تم تحليل تحليل استجابات النتائج الأولية أو الثانوية في نموذج انحدار الآثار المختلطة باستخدام حزمة 'lme4' 44 R. لكل نتيجة ، تكون صيغة النموذج (في تدوين R) هي:

تم حساب المقارنات باستخدام حزمة "الوسائل" 45 R وفحصنا تباينين. أولاً ، قمنا بفحص ما إذا كانت نقاط النهاية الأولية مختلفة بشكل كبير مقارنة بخط الأساس للتلقيح Tdap-IPV داخل كل مجموعة (تم تعريف تأثيرات ما بعد التطعيم على أنها W2-D 0 داخل كل مجموعة ، الجدول التكميلي 1). بعد ذلك ، درسنا الاختلافات بين المجموعات في حجم تلك التغييرات (التأثيرات التفاضلية ، الجدول التكميلي 2 ، المُعرَّف على أنه (W2c1 - D {{1 0}} c1) - (W2c2 - D 0 c2) حيث تشير c1 و c2 إلى مجموعات مختلفة لمقارنة معينة). تم تحليل التغييرات في السيتوكينات المناعية غير المتجانسة أو المدربة في المجموعة المدربة من قبل BCG بالمثل. تم الإبلاغ عن قيم P باستخدام طريقة درجات الحرية كينوارد روجر. يتم الإبلاغ عن المعلمات الإحصائية مباشرة في الأشكال والأرقام الإيضاحية. نظرًا لتصميم الدراسة الاستكشافية والاستجابات المناعية المستهدفة التي تم تقييمها ، لم يتم إجراء تصحيح اختبار متعدد. تم إجراء الارتباطات الزوجية مع قيم تغيير أضعاف السجل 10- على خط الأساس. تم إجراء تقدير التباين الموضح بقياسات السيتوكين على متغيرات النتائج الأولية باستخدام "علامة الإقحام" لحزمة R 46. لحساب التجاوز المحتمل ، تم إجراء التحقق المتقاطع من أضعاف 10 مرات ، 4-. قمنا بتحليل عيار الأجسام المضادة الواقية من المصل ضد PT أو TET أو DIPH من خلال اختبار فيشر الدقيق. تم تحديد الارتباطات بين حالة الحماية المصلي والفوج من خلال فحص بقايا اختبار خي مربع. كانت قيم عتبة الحماية المصلية لـ PT 25 وحدة دولية / مل و 0.1 وحدة دولية / مل لـ DIPH و TET).

ملخص التقارير

يتوفر مزيد من المعلومات حول تصميم البحث في Nature Research Reporting Summary المرتبط بهذه المقالة.

توافر البيانات

البيانات التي تدعم نتائج هذه الدراسة متاحة من المؤلف المقابل بناء على طلب معقول.

توافر الكود

يتوفر رمز R الذي يدعم نتائج هذه الدراسة من المؤلف المقابل بناءً على طلب معقول.

مراجع

1. تان ، ت. وآخرون. الشاهوق في جميع أنحاء العالم: الاتجاهات الوبائية الحديثة من 2000 إلى 2013. Pediatr. تصيب. ديس. J. 34، e222 –232 (2015).

2. لقاحات Warfel، JM، Zimmerman، LI & Merkel، TJ Acellular السعال الديكي تحمي من المرض ولكنها تفشل في منع العدوى وانتقالها في نموذج الرئيسيات غير البشرية. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 111 ، 787-792 (2014).

3. هوانغ ، إل إم وآخرون. الاستجابات للجرعة الأولية والمعززة من لقاحات السعال الديكي اللاخلية والمكوّنة وكاملة الخلايا التي بدأت في عمر شهرين. اللقاح 14 ، 916-922 (1996).

4. Klein، NP، Bartlett، J.، Rowhani-Rahbar، A.، Fireman، B. & Baxter، R. Waning Protection بعد الجرعة الخامسة من لقاح السعال الديكي اللاخلوي عند الأطفال. نيو إنجل. جيه ميد. 367 ، 1012-1019 (2012).

5. Misegades، LK et al. رابطة مرض السعال الديكي عند الأطفال مع تلقي 5 جرعات من لقاح السعال الديكي حسب الوقت منذ آخر جرعة لقاح ، كاليفورنيا ، 2010. JAMA 308 ، 2126-2132 (2012).

6. Hendrikx ، LH ، البربر ، GA ، Veenhoven ، RH ، Sanders ، EA & Buisman ، استجابات AM IgG بعد التطعيم المعزز بلقاحات السعال الديكي المختلفة في الأطفال الهولنديين بعمر 4 سنوات: تأثير محتوى اللقاح المضاد. اللقاح 27 ، 6530-6536 (2009).

7. ميسياك ، إيه وآخرون. إن إضافة ناهض TLR7 إلى لقاح السعال الديكي اللاخلوي يعزز استجابات Th1 و Th17 والمناعة الوقائية في نموذج فأر. اللقاح 35 ، 5256-5263 (2017).

8. Dunne، A. et al. ناهض TLR2 الجديد من البورديتيلا السعال الديكي هو مادة مساعدة قوية تعزز المناعة الوقائية بلقاح السعال الديكي اللاخلوي. مناعة الغشاء المخاطي. 8 ، 607-617 (2015).

9. سوجاي ، ت. وآخرون. أليغودوكسينوكليوتيد يحتوي على CpG كعامل مساعد فعال يوازن الاستجابة المناعية Th1 / Th2 في لقاح الخناق والكزاز والسعال الديكي. اللقاح 23 ، 5450-5456 (2005).

10. كولديتز ، GA وآخرون. فعالية لقاح BCG في الوقاية من مرض السل. التحليل التلوي للأدبيات المنشورة. جاما 271 ، 698-702 (1994).

11. كريستنسن ، آي ، آبي ، بي وجنسن ، التطعيمات الروتينية وبقاء الطفل على قيد الحياة: دراسة متابعة في غينيا بيساو ، غرب أفريقيا. BMJ 321 ، 1435-1438 (2000).

12. هيرف إس وآخرون. التأثيرات غير المحددة والتفاضلية بين الجنسين للتطعيمات على بقاء الطفل في المناطق الريفية بغرب الهند. اللقاح 30 ، 7300-7308 (2012).

13. آبي ، ب وآخرون. تجربة عشوائية للتلقيح BCG عند ولادة الأطفال منخفضي الوزن عند الولادة: آثار مفيدة غير محددة في فترة حديثي الولادة؟ J. تصيب. ديس. 204 ، 245-252 (2011).

14. نيتيا ، إم جي وآخرون. المناعة المدربة: برنامج للذاكرة المناعية الفطرية في الصحة والمرض. العلوم 352 ، aaf1098 (2016).

15. المشي ، ج. وآخرون. نتائج عدوى الملاريا البشرية الخاضعة للرقابة بعد التطعيم BCG. نات. كومون. 10 ، 874 (2019).

16. الفنون ، RJW وآخرون. يحمي لقاح BCG من العدوى الفيروسية التجريبية لدى البشر من خلال تحريض السيتوكينات المرتبطة بالمناعة الحبيبية. ميكروب مضيف الخلية 23 ، 89-100 e105 (2018).

17. Leentjens، J. et al. لقاح BCG يعزز مناعة التطعيم اللاحق ضد الإنفلونزا لدى المتطوعين الأصحاء: دراسة تجريبية عشوائية خاضعة للتحكم الوهمي. J. تصيب. ديس. 212 ، 1930-1938 (2015).

18. Zimmermann، P. & Curtis، N. تأثير BCG على استجابات اللقاح - مراجعة منهجية. خبير اللقاحات 17 ، 547-554 (2018).

19. بروسيت ، إي وآخرون. يحسن لقاح BCG الاستجابات المناعية لـ DTaP في الفئران ويرتبط بانخفاض معدل الإصابة بالسعال الديكي في الدراسات الوبائية البيئية. EBioMedicine 65 ، 103254 (2021).

20. Aaby، P.، Andersen، A.، Ravn، H. & Zaman، K. قد تؤدي الإدارة المشتركة لقاحات BCG والتطعيم ضد الخناق والكزاز والسعال الديكي (DTP) إلى تقليل وفيات الرضع أكثر من الجدول الزمني لمنظمة الصحة العالمية لـ BCG أولاً و ثم DTP. إعادة تحليل بيانات المراقبة الديموغرافية من المناطق الريفية في بنغلاديش. EBioMedicine 22 ، 173-180 (2017).

21. بلوك ، با وآخرون. التأثيرات المتفاعلة ، غير النوعية ، المناعية لقاحات شلل الأطفال المعطلة من عصية كالميت-غيرين والتتانوس والدفتيريا والسعال الديكي: تجربة عشوائية استكشافية. كلين. تصيب. ديس. 70 ، 455-463 (2020).

22. آبي ، بي ، رافن ، إتش ، فيسكر ، إيه بي ، رودريغز ، إيه ، بين ، سي إس. هل يرتبط الخناق والكزاز والسعال الديكي (DTP) بزيادة معدل وفيات الإناث؟ تحليل تلوي يختبر فرضيات التأثيرات غير النوعية التفاضلية بين الجنسين للقاح DTP. عبر. R. Soc. تروب. ميد. هيغ. 110 ، 570-581 (2016).

23. van der Lee، S. et al. معدل اكتساب البورديتيلا للسعال الديكي المعزز لدى المراهقين خلال وباء 2012 في هولندا ودليل على استمرار الأجسام المضادة لفترات طويلة بعد الإصابة. مسح اليورو. https://doi.org/10.2807/1560-7917. ES.2017.22.47. 17-00011 (2017).

24. البربر ، ج. وآخرون. انتشار السعال الديكي وضعف الحماية ضد الدفتيريا بين البالغين في منتصف العمر في 18 دولة أوروبية. نات. كومون. 12 ، 2871 (2021). 25. van Gageldonk، PG، van Schaijk، FG، van der Klis، FR & Berbers، GA تطوير والتحقق من صحة مقايسة مناعية متعددة من أجل التحديد المتزامن للأجسام المضادة في المصل للسعال الديكي ، والدفتيريا ، والكزاز. J. إمونول. الطرق 335 ، 79-89 (2008).

26. شور ، آر إم وآخرون. استجابات الخلايا التائية قبل وبعد التطعيم الخامس على التوالي ضد السعال الديكي في الأطفال الهولنديين بعمر 4- عام. كلين. لقاح إمونول. 19 ، 1879-1886 (2012).

27. Mathurin، KS، Martens، GW، Kornfeld، H. & Welsh، RM CD4 T- مناعة غير متجانسة بين البكتيريا الفطرية وفيروسات الجدري. J. فيرول. 83 ، 3528–3539 (2009).

28. Lertmemongkolchai، G.، Cai، G.، Hunter، CA & Bancroft، GJ Bystander Activation of CD8 plus T cells يساهم في الإنتاج السريع لـ IFN-gamma استجابة لمسببات الأمراض البكتيرية. J. إمونول. 166 ، 1097-1105 (2001).

29. زيمرمان ، ب. وآخرون. تأثير تمنيع عصيات كالميت غيران الوليدية (BCG) على استجابات اللقاح غير المتجانسة عند الرضع. لقاح 37 ، 3735-3744 (2019).

30. Ritz، N.، Mui، M.، Balloch، A. & Curtis، N. تأثير غير محدد للقاح Bacille CalmetteGuerin على الاستجابة المناعية للتحصينات الروتينية. لقاح 31 ، 3098-3103 (2013).

31. Libraty، DH et al. يرتبط لقاح BCG الوليدي بالاستجابة المناعية المعززة لـ T-helper 1 للقاحات الرضع غير المتجانسة. تجارب فاسينول. 3 ، 1-5 (2014). 32. du Plessis، WJ et al. الاستجابة الوظيفية للخلايا البائية لتحفيز المستضد: تقرير أولي عن مرض السل الكامن. بلوس وان 11 ، e0152710 (2016).

33. Biering-Sorensen، S. et al. تباين النمو في إنتاج لقاح BCG والارتباط بالاستجابة المناعية. دراسة قائمة على الملاحظة ضمن تجربة عشوائية. اللقاح 33 ، 2056-2065 (2015).

34. Ru، H. et al. تأثير منطقة اختلاف الجينوم 4 (RD4) على فوعة Mycobacterial وفعالية BCG. أمام. خلية. تصيب. ميكروبيول. 7 ، 239 (2017). 35. تشو ، ت. وآخرون. مراجعة لقاح BCG والنهج الأخرى لاستئصال السل. همم. مصل. مناعي. 17 ، 2454 - 2470 (2021).

36. Brosch، R. et al. اللدونة الجينومية لـ BCG وتأثيرها على فعالية اللقاح. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 104 ، 5596-5601 (2007).

37. Plotkin، SA ارتباطات الحماية التي يسببها التطعيم. كلين. لقاح. إمونول. 17 ، 1055-1065 (2010).

38. روس ، بي جيه وآخرون. المساهمة النسبية لخلايا Th1 و Th17 في المناعة التكيفية للسعال الديكي البورديتيلا: نحو التصميم العقلاني للقاح الشاهوق اللاخلوي المحسن. بلوس باثوج. 9 ، e1003264 (2013).

39. de Graaf، H. et al. التحقيق في استعمار البورديتيلة والسعال الديكي: بروتوكول لنموذج عدوى بشرية يتحكم فيها المرضى الداخليون. BMJ Open 7 ، e018594 (2017).

40. da Silva Antunes، R. et al. يستمر استقطاب Th1 / Th17 بعد تلقيح الخلية الكاملة ضد السعال الديكي على الرغم من المعززات اللاخلوية المتكررة. J. كلين. التحقيق. 128 ، 3853–3865 (2018).

41. Hijnen، M.، van Gageldonk، PG، Berbers، GA، van Woerkom، T. & Mooi، FR يحتفظ عامل الفوعة بورديتيلا السعال الديكي P.69 بيرتكتين بخصائصه المناعية بعد زيادة الإنتاج في الإشريكية القولونية. البروتين Expr. بوريف. 41 ، 106-112 (2005).

42. كالينا ، ت. وآخرون. توحيد EuroFlow لإعدادات أداة قياس التدفق الخلوي وبروتوكولات التنميط المناعي. اللوكيميا 26 ، 1986-2010 (2012).

43. Blanco، E. et al. التوزيع المرتبط بالعمر لمجموعات فرعية من خلايا B وخلايا البلازما في الدم المحيطي. كلين الحساسية. إمونول. 141 ، 2208-2219. e2216 (2018).

44. بيتس ، دي ، ماشلر ، إم ، بولكر ، بي إم ووكر ، إس سي ، تركيب نماذج خطية مختلطة التأثيرات باستخدام lme4. J. ستات. سوفتو. 67 ، 1–48 (2015).

45. Lenth، R. Emmeans: الوسائل الهامشية المقدرة ، المعروفة أيضًا باسم المربعات الصغرى ، تعني (2018).

46. ​​Kuhn، M. بناء نماذج تنبؤية في R باستخدام مجموعة الإقحام. J. ستات. سوفتو. 28 ، 1-26 (2008).

شكر وتقدير

نود أن نشكر Anne-Marie Buisman (RIVM) لتزويدها بمضادات PT و FHA التي تم استخدامها في تجارب إعادة تنشيط PBMC. نشكر جميع المتطوعين الذين شاركوا في التجربة. تم دعم هذا العمل من قبل المعهد الوطني للصحة العامة والبيئة (RIVM) ، هولندا (مشروع SPR S112200). تم دعم MGN من قبل ERC Advanced Grant (# 833247) ومنحة Spinoza من المنظمة الهولندية للبحث العلمي.

الكاتب الاشتراكات

التصور: BAB و MGN و RvC و DAD ؛ المنهجية: ES و MJE و GAMB و PGMvG و BAB و LCJdB ؛ التحقيق: ES و MJE و GAMB و PGMvG و BAB و LCJdB و JG ؛ التحليل الرسمي: JG؛ كتابة المسودة الأصلية: JG و DAD ؛ الكتابة والمراجعة والتحرير: الكل.

مصالح تنافسية

تمتلك MGN براءة اختراع في علم الأحياء الدقيقة لتثبيط المناعة المدربة المرخصة لـ TTxD ، وبراءة اختراع في علم الأحياء النانوية لتحفيز المناعة المدربة المرخصة لـ TTxD. لا يذكر جميع المؤلفين الآخرين أي تعارض محتمل. قدم جميع المؤلفين نموذج ICMJE للإفصاح عن تضارب المصالح المحتمل.

معلومات إضافية

معلومات تكميلية تحتوي النسخة المتوفرة عبر الإنترنت على مواد تكميلية متوفرة على https://doi.org/10.1038/s41541-022-00438-4.

يجب توجيه المراسلات وطلبات المواد إلى Dimitri A. Diavatopoulos.

تتوفر معلومات إعادة الطبع والإذن على http://www.nature.com/ reprints

ملاحظة الناشر تظل Springer Nature محايدة بشأن المطالبات القضائية في الخرائط المنشورة والانتماءات المؤسسية.

الوصول المفتوح

تم ترخيص هذه المقالة بموجب Creative Commons Attribution 4. 0 الترخيص الدولي ، الذي يسمح بالاستخدام والمشاركة والتكييف والتوزيع والنسخ بأي وسيط أو تنسيق ، طالما أنك تمنح الائتمان المناسب للمؤلف (المؤلفين الأصليين) ) والمصدر ، وتوفير رابط إلى ترخيص المشاع الإبداعي ، وبيان ما إذا تم إجراء تغييرات. يتم تضمين الصور أو مواد الطرف الثالث الأخرى الواردة في هذه المقالة في ترخيص المشاع الإبداعي الخاص بالمقال ما لم يُذكر خلاف ذلك في حد ائتمان المادة. إذا لم يتم تضمين المادة في ترخيص المشاع الإبداعي الخاص بالمقال وكان استخدامك المقصود غير مسموح به بموجب اللوائح القانونية أو تجاوز الاستخدام المسموح به ، فستحتاج إلى الحصول على إذن مباشر من صاحب حقوق الطبع والنشر.

For more information:1950477648nn@gmail.com