خلاصة:أعطت الدراسة الكيميائية النباتية لبذور برتقال الماندرين المصري (Citrus reticulata Blanco، F. Rutaceae) ثلاثة عشر مركبًا معروفًا ، 1-13. تم تعيين هياكل المركبات المعزولة باستخدام تحليلات 1D و 2 D NMR و HRESIMS. لتوصيف النشاط الدوائي لهذه المركبات ، تم تطبيق العديد من التجارب القائمة على الفرز الافتراضي والديناميكيات الجزيئية المتكاملة. نتيجة لذلك ، تم تحديد المركبات 2 و 3 و 5 افتراضيًا على أنها هيالورونيداز ، زانثين أوكسيديز ، ومثبطات التيروزيناز. تم إجراء الاختبار اللاحق في المختبر للتحقق من صحة التجارب القائمة على السيليكو لإبراز إمكانات مركبات الفلافونويد هذه كمثبطات الهيالورونيداز الواعدة ، وأكسيداز الزانثين ، ومثبطات التيروزيناز مع قيم IC5 0 التي تتراوح من 6.39 ± 0.36 إلى 73.7 ± 2.33 ميكرومتر . ألقت الدراسة الحالية الضوء على إمكانات منتج مخلفات برتقال اليوسفي المصري (أي بذوره) كعامل طبيعي يعزز صحة الجلد. بالإضافة إلى ذلك ، كشفت عن إمكانية تطبيق الفحص الظاهري القائم على الإرساء العكسي المتكامل والتجارب القائمة على MDS في التنبؤ الفعال بالإمكانيات البيولوجية للمنتجات الطبيعية.

يمكن أن يزيد الجليكوزيد من cistanche أيضًا من نشاط SOD في أنسجة القلب والكبد ، ويقلل بشكل كبير من محتوى lipofuscin و MDA في كل نسيج ، ويزيل بشكل فعال العديد من جذور الأكسجين التفاعلية (OH- ، H₂O₂ ، إلخ) والحماية من تلف الحمض النووي الناتج عن ذلك. بواسطة OH- الجذور. جليكوسيدات Cistanche phenylethanoid لديها قدرة قوية على إزالة الجذور الحرة ، وقدرة تخفيض أعلى من فيتامين C ، وتحسن نشاط SOD في تعليق الحيوانات المنوية ، وتقليل محتوى MDA ، ولها تأثير وقائي معين على وظيفة غشاء الحيوانات المنوية. يمكن أن يعزز عديد السكاريد القارص نشاط SOD و GSH-Px في كريات الدم الحمراء وأنسجة الرئة للفئران المسنة تجريبياً الناتجة عن D-galactose ، وكذلك تقليل محتوى MDA والكولاجين في الرئة والبلازما ، وزيادة محتوى الإيلاستين ، تأثير الكسح الجيد على DPPH ، وإطالة وقت نقص الأكسجة في الفئران الشائخة ، وتحسين نشاط SOD في مصل الدم ، وتأخير التنكس الفسيولوجي للرئة في الفئران الشائخة تجريبياً مع التنكس المورفولوجي الخلوي ، أظهرت التجارب أن Cistanche لديه قدرة جيدة على مضادات الأكسدة وله القدرة على أن يكون دواءً لمنع وعلاج أمراض شيخوخة الجلد. في الوقت نفسه ، يتمتع إشنكوسايد في Cistanche بقدرة كبيرة على البحث عن الجذور الحرة لـ DPPH ولديه القدرة على البحث عن أنواع الأكسجين التفاعلية ومنع تدهور الكولاجين الناجم عن الجذور الحرة ، وله أيضًا تأثير إصلاح جيد على تلف أنيون الثايمين الجذور الحرة.

انقر فوق فوائد Cistanche Tablets

【لمزيد من المعلومات: david.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】

1 المقدمة

الماندرين ، C. reticulata ، هي بعض من محاصيل الحمضيات الأكثر شهرة للاستخدام الطازج [1]. كثيرا ما يتم تقديمها على أنها "اليوسفي" ؛ ومع ذلك ، فإن "Mandarin" هو الاسم الأكثر شيوعًا. يتم توزيع العديد من الأنواع الهجينة والأصناف من أنواع اليوسفي في الطبيعة [1]. الأنواع الأكثر شهرة وتطورًا تتكون من C. unshiu Marcovitch و C. nobilis Loureiro و C. deliciosa Tenore و C. reticulata Blanco [1،2]. اليوسفي هي من بين ثمار الحمضيات الرئيسية التي يتم حصادها في العديد من البلدان. على الرغم من أن المحاصيل تستخدم بشكل أساسي في الحلوى ، إلا أنها تمتلك أهمية تجارية كبيرة بسبب زيوتها الأساسية [3]. يتم تطبيق نكهات الحمضيات في المشروبات والحلويات والبسكويت والحلويات [4]. أيضا ، يستخدم قشر C. reticulata لمنكهات الخمور [4].

الالتحام العكسي هو نوع من طرق الفحص الافتراضية التي يمكن معالجتها لتوقع الأهداف الجزيئية المحتملة لهيكل مركب معين. في السابق ، استخدمنا طريقة الفحص الافتراضية الفعالة هذه لتحديد أفضل أهداف البروتين للعديد من المنتجات الطبيعية المعزولة [5]. ومع ذلك ، فإن درجات الالتحام التي نتجت عن خطوة الفرز الأولية هذه توفر فقط بعض المعلومات حول التكامل الهيكلي بين أهداف البروتين وبنية مركب الاستعلام [6]. وفقًا لذلك ، توفر تجارب محاكاة الديناميكيات الجزيئية (MDS) ، بما في ذلك الطاقة الحرة الملزمة المطلقة (الربط) نتائج أكثر صرامة وموثوقية يمكن اختيارها للاختبار في المختبر. هنا ، قمنا بتعريض بذور C. reticulata لعزل كروماتوغرافي متدرج للحصول على فكرة عن المادة الكيميائية النباتية الرئيسية في منتج النفايات هذا. بعد ذلك ، قمنا بالتحقق مما إذا كانت هذه المواد الكيميائية النباتية لها تأثيرات دوائية معينة عن طريق إخضاعها لتحليل متدرج في تحليل قائم على السيليكون بدأ من خلال الالتحام العكسي الشامل وانتهى بالعديد من تجارب MDS. تسلط إمكانات المواد الكيميائية النباتية النشطة بيولوجيًا المستمدة من بذور C.

2. المواد والأساليب

2.1. المواد النباتية

تم جمع ثمار C. reticulata في يناير 2021 من منطقة محلية في بني سويف ، مصر ، وتم توثيقها من قبل عالم النبات البارز ، الأستاذ الدكتور عبد الحليم أ.محمد ، قسم بحوث النباتات وعلم النبات ؛ معهد بحوث البستنة؛ الدقي. القاهرة ؛ مصر). تم الاحتفاظ بعينة من الثمار تحت رقم القسيمة 2021- BuPD 80 في قسم العقاقير ؛ كلية الصيدلة؛ جامعة بني سويف؛ مصر).

2.2. المواد الكيميائية والكواشف

تم الحصول على إيثيل أسيتات (EtOAc) ، ميثانول (MeOH) ، n-Hexane (n-Hex) ، إيثانول (EtOH) ، ثنائي كلورو ميثان (DCM) ، و n- بيوتانول (n-BuOH) من شركة النصر ، مصر. قدمت سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية ، مذيبات مخففة لتحليل الرنين المغناطيسي النووي وكذلك مذيبات عالية النقاء لتحليلات HPLC ، والتحليل الطيفي ، والكروماتوجرافي (على سبيل المثال ، الميثانول- d4 (CD3OD) ، ثنائي ميثيل سلفوكسيد- d6 (DMSO) ، الكلوروفورم -d (CDCl3) ، والميثانول لـ HPLC ، والمياه من فئة HPLC ، والأسيتونتريل من فئة HPLC). للعزل الكروماتوغرافي ، Sephadex LH2 0 (0. 25–0.1 مم ، GE Healthcare ، Sigma-Aldrich ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) و Silica gel (E-Merck ، Sigma-Aldrich ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) استخدمت. بالنسبة للكروماتوغرافيا السائلة الفراغية ، تم استخدام هلام السيليكا لـ TLC (الأدوية والكيماويات ، شركة النصر ، القاهرة ، مصر) (VLC). تم استخدام هلام السيليكا المطلي مسبقًا (E-Merck ، دارمشتات ، ألمانيا) لدراسات TLC. تم تحديد البقع المنتجة بواسطة بارا أنيسالديهايد بعد التسخين عند 110 درجة مئوية [7]. تم الحصول على جميع المواد الخاصة بالفحوصات البيولوجية من شركة Sigma Chemical Company (SCC ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية).

2.3 التحليلات الطيفية

تم الحصول على إشارات NMR عند 400 لـ 1H-NMR و 100 ميجا هرتز لـ 13C-NMR. تم استخدام قمم المذيبات CDCl 3- d و CD3OD-d4 و DMSO-d6 كإشارات مرجعية. تم الحصول على إشارة NMR باستخدام جهاز NMR Bruker Advance-III بسرعة 400 ميجاهرتز (Bruker AG-Billerica ، كاليفورنيا ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية).

تم جمع بيانات الكتلة عالية الدقة باستخدام جهاز Acquity-Ultra-Performance-Liquid Chromatography مرتبط بمقياس مطياف رباعي الأقطاب (Waters ، Milford ، MA ، USA). تم استخدام Agilent / 1260- Infinity-Preparative-HPLC لتحقيق عمليات فصل كروماتوجرافي HPLC.

2.4 تحضير مستخلص بذور C. reticulata

تم شراء بذور C. reticulata (1 كيلوغرام) طازجة ثم تجفيفها بالهواء في الظل. بعد ذلك ، تم طحن البذور باستخدام آلة طحن (خنان ، البر الرئيسي للصين). ثم تم استخلاص المنتج المسحوق جيدًا بنسبة 7 0 بالمائة EtOH (1 لتر × 5). تم تركيز المستخلص السائل الناتج باستخدام مبخر دوار (Buchi-Rotavapor-R -300 ، ColeParmer ، Vernon Hills ، IL ، الولايات المتحدة الأمريكية) تحت فراغ عند 45 درجة مئوية لتوفير 1 0 0 g مستخلص جاف خام ، والذي تم بعد ذلك تقسيمه باستخدام سلسلة من مذيبات القطبية المتزايدة: n-Hex-DCMEtOAc-n-BuOH. تم الحصول على الكسور I (24. 0 g) ، II (5.0 g) ، III (3.0 g) ، و IV (6.0 g) عن طريق تبخير الطور العضوي المنفصل عند ضغط منخفض. تم تخزين جميع المقتطفات والكسور في 4 درجات مئوية لتحليل الكيمياء الحيوية والحيوية اللاحقة.

2.5 عزل أهم المنتجات الطبيعية لبذور C. reticulata 

تم استخدام عمود TLC-silica gel لفضح الكسر I (2 0 g) إلى VLC العادي. تم استخدام EtOAc و n-Hex المتتالي (0 - 1 0 0 بالمائة ، زيادة بنسبة 5 بالمائة). تم الحصول على ثلاثة كسور فرعية (I1 – I3) عن طريق تجميع كسور متطابقة وتبخيرها تحت ضغط منخفض. في عمود آخر من هلام السيليكا ، تم تجزئة الجزء I1 (1.0 جم) على نطاق واسع. تم إجراء الشطف الكروماتوجرافي بواسطة n-Hex إلى EtOAc ، خلطات متدرجة (0-10 بالمائة ، ارتفاع 1 بالمائة ، 100 مل لكل منهما) لتوفير المركب 13. (10 مجم).

تم إجراء فصل كروماتوجرافي للجزء الفرعي I2 (5 0 مجم) على هلام السيليكا -60 (1 0 0 × 1 سم ، 20 جم). تم تنفيذ الإجراء الكروماتوغرافي باستخدام DCM: MeOH ، خليط متساوي (0.5 بالمائة ، 500 مل) لتقديم المركبات 8 (20 مجم) و 9 (15 مجم). تم تجزئة الجزء الفرعي I3 إلى حد ما على هلام السيليكا 60 (100 × 1 سم ، 20 جم). تم إنتاج شطف باستخدام DCM: MeOH ، خليط متساوي (0.5 بالمائة ، 500 مل) لتحمل 10 (20 مجم).

تم استخدام عمود هلام السيليكا TLC لفضح الجزء الثاني (2.5 جم). DCM: تم استخدام EtOAc (0 - 1 0 0 بالمائة ، زيادة بنسبة 5 بالمائة) لاستخراج العينات. تم استلام المخلفات السائلة المنتجة في 250 مل أجزاء. تم الحصول على كسور متطابقة واختزالها إلى جزأين فرعيين (II1 - II2) عند ضغط منخفض. في عمود آخر من هلام السيليكا ، تم تجزئة الجزء I1 (1.0 جم) على نطاق واسع. تمت التصفية التتابعية للمركب 5 باستخدام DCM: EtOAc (0-10 بالمائة ، ارتفاع 1 بالمائة ، 100 مل لكل منهما) (10 مجم).

تمت إضافة فصل كروماتوجرافي للجزء الفرعي I2 (5 0 مجم) على هلام السيليكا 60 (100 × 1 سم ، 20 جم). تم تطبيق الشطف الكروماتوغرافي باستخدام DCM إلى MeOH ، (شطف متساوي ؛ 0.5 بالمائة ، 500 مل) لتقديم المركبات 11 (20 مجم) و 12 (15 مجم).

على VLC العادي ، تم فصل الجزء الرابع (6. 0 جم) باستخدام هلام السيليكا. DCM: تم استخدام EtOAc (0 - 100 بالمائة ، ارتفاع 5 بالمائة ، 250 مل لكل منهما) لاستخراج العينات. تم استلام النفايات السائلة الكروماتوغرافية بزيادات قدرها 250 مل.

تم تجميع الكسور المتطابقة وتقليلها تحت ضغط منخفض لإنتاج خمسة كسور فرعية (IV1 - V5) ؛ تم فصل الكسور الفرعية IV1 و IV2 و IV3 و IV4 بشكل طفيف فقط على عمود Sephadex-LH20 مع MeOH لإنتاج 4 (30 مجم) و 6 (50 مجم) و 7 (70 مجم) و 1 (15 مجم ، على التوالي ، بينما كان الجزء الفرعي IV5 نقي معنويا (10 ملغ).

2.6. في دراسة سيليكو

2.6.1. الإرساء العكسي

تم الانتهاء من الأهداف الجزيئية المحتملة لمركبات الفلافونويد المنفصلة عن طريق إخضاع هياكلها لفحص افتراضي اعتمادًا على الالتحام العكسي ضد جميع البروتينات تقريبًا التي يتم تسليمها في بنك البيانات البروتيني ؛ PDB.

تم استخدام منصة IdTarget القائمة على الإنترنت لهذه الخطوة. يستخدم برنامج الفرز التافه للبنية الافتراضية طريقة إرساء عكسية خاصة ، وهي DivideConquer-Docking ، والتي تبني شبكات متداخلة محدودة ، مما يجعل استكشاف البروتين أكثر تقييدًا. نتيجة لذلك ، يمكنها تنفيذ عدد كبير من عمليات الإرساء في فترة زمنية قصيرة [8]. تم وصف الدرجات الناتجة على أنها قائمة تصنيفات تتراوح من الأسوأ إلى الأفضل. لتحديد أهداف البروتين المثلى لكل بنية معينة ، استخدمنا درجة تقارب 10 كيلو كالوري / مول كقيمة قطع (الجدول 1).

تم إجراء تجارب محاكاة الديناميكيات الجزيئية (MDS) كما ورد سابقًا بواسطة الحضرمي وآخرون. 2021 [6]. تم استخدام آلة MDS لبرنامج Maestro (مثل Desmond v.2.2 ؛ Hamburg ، ألمانيا) لتشغيل تجارب MDS [9-11]. تم استخدام OPLS-Force-Field لعمليات المحاكاة.

تم إجراء تحضير الهياكل البروتينية بواسطة خوارزمية System-Builder ، حيث تم تعبئتها داخل صندوق ماء لتقويم العظام (2 0 Å3) باستخدام نموذج الماء TIP3P بالاشتراك مع Na plus و Cl− أيونات ، {{ 16}} .15 م لكل منهم. بعد ذلك ، خضعت الهياكل النموذجية المحسّنة لموازنة أولية لمدة 10 نانوثانية. تم تحديد معلمات هياكل Ligand تلقائيًا أثناء خطوة إعداد الهيكل وفقًا لـ OPLSForce-Field. يجب تحديد معلمات البروتينات المحتوية على معادن مثل MMPs التي تتضمن مركب هيستيدين- Zn plus 2 في الموقع الفعال أثناء خطوة تكوين البروتين. للمتابعة ، يجب إعداد حالة غير متجانسة للذرات غير المتجانسة مثل Zn (إنشاء حالات مغايرة). هذه الوظيفة هي جزء من معالج تكوين البروتين في مايسترو. ستسهل هذه الخطوة تطوير حالة غير متجانسة مناسبة أو حالة تساهمية منسقة ، للذرة غير المتجانسة (أي Zn plus 2) في شبكة مع البروتين بحيث يمكن لحقول القوة مثل OPLS أن تراقب بسرعة ذرة الزنك. بالنسبة لعمليات النسخ التي تم إجراؤها بواسطة برنامج الديناميكيات الجزيئية على نطاق النانو (NAMD 3.0) [12] ، تم تحديد طبولوجيا ومعلمات الهياكل النموذجية بواسطة النظام الأساسي عبر الإنترنت Ligand Reader و Modeler. تم استخدام قوى Tcl المتناسقة لتثبيت Zn plus 2 في مكانه.

تم إجراء حساب الطاقة الحرة الملزمة (∆Gbinding) كما هو موضح سابقًا بواسطة الحضرمي وآخرون. 2021 [6]. تم إجراء الطحن باستخدام إجراء اضطراب الطاقة الحرة (FEP) [12] ، والذي تم تفصيله في منشور Kim et al. باختصار ، تحسب هذه التقنية الطاقة المطلوبة التي يمكن الوصول إليها ∆ الربط باستخدام المعادلة ∆Gbinding=∆GComplex - ∆GLigand. يتم حساب قيمة كل Grinding باستخدام برنامج NAMD في تجارب منفصلة.

يمكن تحضير جميع ملفات الإدخال عبر موقع الويب CharmmGUI. ثم تم استخدام الملفات لإنتاج حسابات الربط المخطط لها باستخدام بروتوكول FEP في NAMD. تم ضبط الموازنة لاحقًا في NPT (300 K ، 1 atm ، Langevin-Piston-Pressure "Complex" - "Ligand") في وجود نموذج الماء TIP3P. في وقت لاحق ، تم إنتاج 10 ns محاكاة FEP لكل هيكل ، وتم حساب آخر 5 نانو ثانية من كميات الطاقة المتاحة لمعدلات الطاقة الحرة النهائية [12]. في النهاية ، تم توقع أوضاع الربط وتقييمها من خلال استخدام برنامج VMD [13].

2.7. فحص في المختبر لنشاط الهيالورونيداز

تم تشكيل نشاط مثبط الهيالورونيداز وفقًا للإجراء المحدد مسبقًا الممنوح لـ Chaiyana et al. 2019 [14]. تم تقدير التأثير المثبط لنشاط الهيالورونيداز من المعادلة التالية: تثبيط الهيالورونيداز (النسبة المئوية)=(1 - A / B) × 100 ، حيث A و B هما صفة حمض الهيالورونيك بعد العلاج في وجود أو نقص العينة بشكل منفصل. كعنصر تحكم إيجابي ، تم تطبيق 6- حمض O-palmitoyl-Lascorbic. تم إجراء التجربة في ثلاث نسخ.

2.8 فحص في المختبر لنشاط أوكسيديز زانثين

تم إجراء جهد تثبيط Xanthine oxidase (XO) وفقًا للطريقة الموصوفة سابقًا [15]. تم قياس اللون الناتج بسبب إطلاق بيروكسيد الهيدروجين أثناء عملية أكسدة XO عند 570 نانومتر باستخدام قارئ اللوحة EPOCH ™ "MICROPLATE READER (BIOTEK)". تم خلط أربعة وأربعين ميكرولتر من محلول زانثين أوكسيديز مع 2 ميكرولتر من محلول ركيزة الزانثين و 2 ميكرولتر من XO. تم تطبيق L-mimosine كعنصر تحكم إيجابي. تم إجراء هذه التجربة في ثلاث نسخ.

2.9 فحص في المختبر لنشاط التيروزيناز

لوحظ نشاط مثبط التيروزيناز لكل فلافونويد باستخدام عملية DOPAchrome المطابقة لمخطط Momtaz et al. 2008 [16] ، الذي تم تعديله من Nerya et al. 2003 [17] ، وكيرتو وآخرون. 1999 [18]. تم قياس النشاط المثبط للتيروزيناز من المعادلة التالية: النشاط المثبط (النسبة المئوية)=(1 - A / B) × 100 ، (9) حيث A و B هما الامتصاصان للخليط في وجود أو عدم وجود اختبار الفلافونويد ، على التوالي. تم إجراء كل تجربة في ثلاث نسخ.

3. النتائج والمناقشة

3.1. التحقيق الكيميائي النباتي لبذور C. reticulata

باستخدام UV و 1H و DEPT-Q NMR ، بالإضافة إلى المقارنة مع الأدبيات واستخدام بعض العينات الأصلية ، المركبات المعروفة kaempferol 1 [19] ، kaempferol -40 - O - - Dglucopyranoside 2 [19] ، kaempferol -7- O - - D-glucopyranoside 3 [19] ، 2- hydroxy genistein 4 [19] ، hesperetin 5 [19] ، 3000 (1000- O - - D-glucopyranosyl) -sucrose 6 [20]، 6 (1000 - O - - Dfructofuranosy) -30 (1 "-O - - D-glucopyranosyl) -sucrose 7 [20 ] ، 1- O-elaidoyl-glycerol 8 [21] ، 1- O-oleoyl -2- palmitoyl-glycerol 9 [22] ، 1- O-oleoyl-glycerol 10 [ 21] ، (هـ) -3- ((4- ميثيل هيبتيل أوكسي) كاربونيل) حمض الأكريليك 11 [23] ، (هـ) -3- ((6- ميثيل نونيل أوكسي) تم تحديد الكربونيل) حمض الأكريليك 12 [23] و -سيتوستيرول 13 [24] (الشكل 1) من المستخلص الإيثانولي الخام لبذور C. reticulata. تم فصل جميع المركبات المحددة 11 و 12 هنا لأول مرة من جنس الحمضيات ( الأشكال 1 و S1-S28) وتجدر الإشارة إلى أنه على عكس الفلافونونات والفلافونات الموزعة على نطاق واسع في الأجزاء الهوائية من C.

3.2 في تحقيق سيليكو

لتوصيف النشاط البيولوجي للمركبات المعزولة ، أخضعناها لسلسلة من التحليلات القائمة على السيليكو. أولاً ، ركزنا على مركبات الفلافونويد المعزولة (1-5) لخطوة الفحص الافتراضية الأولية لأن مركبات الفلافونويد هي نواتج أيضية ثانوية للنباتات النشطة بيولوجيًا معروفة جيدًا. بالإضافة إلى ذلك ، فإن المركبات المعزولة المتبقية (6-13) هي مستقلبات أولية شائعة ليس لها على الأرجح أي فعالية علاجية.

خضعت هياكل مركبات الفلافونويد 1-5 لفحص افتراضي قائم على الالتحام ضد جميع البروتينات الموجودة في PDB تقريبًا. تم استخدام المنصة الإلكترونية ، وهي idTarget ، في مهمة الفحص الافتراضية الأولية هذه [8]. تم استرداد الدرجات المستردة كقائمة من أكبر قيمة سلبية إلى أصغر قيمة. وضعنا درجة تقارب قاطعة 10 كيلو كالوري / مول كقيمة مقطوعة لتحديد الأهداف الجيدة لكل فلافونويد معزول (1-5). تم العثور على العديد من الأهداف الجزيئية المثيرة للاهتمام لتكون أهدافًا جيدة على الأرجح لهذه المركبات ذات الصلة ، بما في ذلك البروتينات كينازات وتركيبات (الجدول 1).

ومن المثير للاهتمام ، أنه تم الإبلاغ عن ثلاثة أهداف جزيئية مشتركة بين إنزيمات الفلافونويد ، والهيالورونيداز ، وأكسيداز الزانثين ، وإنزيمات التيروزيناز. ترتبط هذه الإنزيمات بالحفاظ على بشرة صحية [25-30] ، وبالتالي فإن خطوة الفحص الافتراضية الأولية حددت هذه الفلافونويد على أنها عوامل محتملة لتعزيز العناية بالبشرة.

3.3 محاكاة الديناميات الجزيئية وحساب الطاقة الحرة الملزمة المطلقة

لدعم خطوة الفرز الأولية القائمة على الإرساء ، قدرنا الطاقات الحرة الملزمة المطلقة (∆ الربط) للمركبات 1-5 مع إنزيمات هيالورونيداز ، وزانثين أوكسيديز ، وإنزيمات التيروزيناز باستخدام الطريقة المعتمدة على MDS ، وهي طريقة اضطراب الطاقة الحرة ( FEP) [26،31].

كما هو مبين في الجدول 2 ، كانت المركبات 2 و 3 و 5 فقط قادرة على تحقيق أعلى تقارب تجاه إنزيمات الهيالورونيداز وزانثين أوكسيديز والتيروزيناز بقيم طحن تتراوح من −8.1 إلى 9.9 كيلو كالوري / مول. حصلت المركبات المتبقية على قيم ربط أعلى من 6 كيلو كالوري / مول.

تم إجراء تجارب 50 نانوثانية أخرى MDS لاستقصاء التفاعلات واستقرار الارتباط للمركبات 2 و 3 و 5 مع إنزيمات هيالورونيداز وأكسيداز زانثين وإنزيمات التيروزيناز. كما هو مبين في الشكل 2 ، حقق كل من المركب 3 والرابط المشترك المتبلور استقرارًا مشابهًا للربط داخل موقع ربط الإنزيم في جميع أنحاء MDS مع RMSD يبلغ حوالي 2.8 من وضع الإرساء الأولي. كانت RMSD للمركب 2 0 أيضًا مثل تلك الموجودة في المركب 3 حتى 28.7 نانوثانية عندما تبدأ في الانحراف أعلى قليلاً من المركب 3 والرابط المشترك البلوري لتحقيق متوسط ​​RMSD يبلغ 3.8 في جميع أنحاء MDS. أشارت آخر لقطة مشتقة من MDS للمركبات 2 و 3 والرابط المشترك المتبلور إلى أن TYR -75 و ASP -129 و GLU -131 كانت بقايا الأحماض الأمينية المتفاعلة الشائعة عبر H- الترابط.

فيما يتعلق بأكسيداز الزانثين ، حقق المركب 3 ارتباطًا مستقرًا داخل موقعه النشط في جميع أنحاء MDS ، مسجلاً متوسط ​​RMSD يبلغ 2.6 Å والذي كان متقاربًا مع مثبط التبلور المشترك (RMSD ~ 2.4 Å). من الواضح أن هذا الارتباط المستقر للمركب 3 يرجع إلى شبكة H-bonds التي أنشأتها باستخدام LYS -771 و PHE -798 و GLU -802 و SER -876 و ARG {{ 12}} و PHE -911 و ARG -912 و THR -1010 (الشكل 3).

أخيرًا ، كان المركب 5 مستقرًا أيضًا داخل الموقع النشط للتيروزيناز خلال 50 نانوثانية MDS بمتوسط ​​قيمة RMSD يبلغ 4.9 Å ، وهو أعلى من مثبط التبلور المشترك (RMSD ~ 3.8 Å). كما هو موضح في اللقطة الأخيرة المشتقة من MDS ، كان المركب 5 قادرًا على التفاعل مع أيوني Zn2 plus بشكل مشابه لمثبط التبلور المشترك. بالإضافة إلى ذلك ، تم تثبيته مع العديد من روابط H مع LYS -198 و GLY -209 و TYR -362 و ARG -374 و THR -391 (الشكل 4 ).

【لمزيد من المعلومات: david.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】