مجموعات خلايا CD8 و CD4 T في الكلى البشرية

edmund.chen@wecistanche.com

الملخص:الخلفية: في المواقع الحدودية ، وفي الأعضاء الداخلية ، تساهم خلايا الذاكرة المقيمة في الأنسجة (TRM) في بناء الحاجز المناعي ضد مسببات الأمراض مثل الفيروسات والبكتيريا والفطريات والسرطان. ومع ذلك ، فإن المعلومات عن وجود ووظيفة هذه الخلايا في الكلى البشرية شحيحة. من أجل فهم أفضل للدفاع المناعي بوساطة الخلايا التائية في هذا العضو ، كنا نهدف إلى تحديد الجوانب المظهرية والوظيفية لخلايا CD8 و CD4 T الموجودة في الطعم الصحي والطعم الخيفي.الكلى الانسجة. الطرق: باستخدام القياس الخلوي الزميل متعدد القنوات ، قمنا بتقييم النمط الظاهري ووظيفة الخلايا التائية في عينات الأنسجة الكلوية السليمة (ن=5) والكلىنسيج الطعم الخيفي (ن=7) وقارن هذه الجوانب بالخلايا التائية في الدم المحيطي من عناصر التحكم السليمة (ن=13). نتائج:الكلىاحتوت عينات الأنسجة على كميات كبيرة من خلايا CD8 و CD4 T. على عكس الخلايا المنتشرة ،الكلىتعبر الخلايا التائية بشكل متكرر عن CD69 و CD103 وكانت في الغالب أكثر نشاطًا في ركوب الدراجات. علاوة على ذلك ، تقريبا كل شيءالكلىأعربت الخلايا التائية عن CXCR3 ، وغالبًا ما عبرت عن CXCR6 مقارنة بالخلايا التائية في الدورة الدموية. بشكل ملحوظ ،الكلىأنتجت الخلايا التائية كميات أكبر من IFN من الخلايا المنتشرة وكانت في كثير من الأحيان متعددة الوظائف. الخلاصة: الخلايا التائية الوظيفية ذات السمات المميزة لـ TRM موجودة في الإنسانالكلىمناديل. غالبًا ما تقوم هذه الخلايا بالدوران بنشاط وعادة ما تعبر عن CXCR3 و CXCR6.

الكلمات الدالة:الخلايا الليمفاوية المقيمة في الأنسجة. الخلايا التائية. CD8 ؛ CD4 ؛ CD69 ؛ CD103 ؛ الكلى؛ allograft

سيحسن القسطرة من أمراض الكلى / الكلى

1 المقدمةتستمر خلايا الذاكرة المقيمة (TRM) في الأنسجة لتوفير دفاع موضعي طويل الأمد ضد مسببات الأمراض. على عكس الخلايا التائية المعاد تدويرها ، لا يمكن اكتشاف مجموعات TRM في الدم المحيطي ، وتختلف بشكل كبير عن إعادة تدوير مجموعات الخلايا التائية فيما يتعلق بنمطها الظاهري ، ووظيفتها ، واستقلابها [1]. في الواقع ، هذا ليس مفاجئًا بالنظر إلى حقيقة أن أجهزة الأعضاء المختلفة ، مثل الرئتين ، تتعرض لأحمال أعلى من مسببات الأمراض المختلفة مما هو عليه الحال بالنسبة للدورة الدموية ، المعزولة عمومًا عن العالم الخارجي [2].يستمر الاحتفاظ بأنسجة TkM لسنوات ويتم توسطه من خلال الآليات التي تتضمن محور Sphingosine -1- مستقبلات الفوسفات 1 (S1PR1) - السفينغوزين 1- الفوسفات (SP1). S1PR1 هو مستقبل تعبر عنه الخلايا التائية التي تتوسط الخروج من الأعضاء اللمفاوية الثانوية عند الارتباط بجزيء الإشارة النشط بيولوجيًا SP1 ، وهو وسيط مهم لتهريب الخلايا التائية. يمكن مقاطعة هذا المحور بواسطة CD69 ، وهو عبارة عن كتين من النوع C مرتبط بالغشاء يعاكس تعبير S1PR1 ، وبالتالي يتوسط في الاحتفاظ. علاوة على ذلك ، في الفئران ، يتم تحفيز التعبير S1PR1 عن طريق عامل النسخ 2 (KLF2) الذي يشبه Krüppel ، والذي وجد أنه خاضع للتنظيم في TRM ، وبالتالي يمنع أيضًا خروج الخلايا الليمفاوية [3]. في المقابل ، تبين أن تقليل تنظيم KLF2 يتم توسطه بواسطة متماثل عامل النسخ لـ Blimpl في الخلايا التائية (Hobit) ، والذي يتم التعبير عنه بطريقة خاصة بـ TpM في خلايا الفئران التائية [4]. علاوة على ذلك ، تعبر بعض TRM أيضًا عن CD103 (إنتجرين E) ، حيث يمكن تحديد TRM باستخدام تعبير CD69 و CD103 [1].

بينما تتزايد المعرفة بالنمط الظاهري والوظيفة TRM للأنسجة البشرية المختلفة ، لا يُعرف الكثير عن هذه الجوانب فيالكلى. هنا ، تتعرض الخلايا التائية لمجموعة مميزة من مسببات الأمراض مثل البكتيريا الصاعدة من المسالك البولية السفلية والفيروسات الموجه للقلب مثل الفيروس التورامي BK (BKPyV). في الواقع ، وصفنا مؤخرًا كيف تحتوي الكلى البشرية على مجموعة فرعية من الخلايا التائية التي تعبر عن CD69 و / أو CD103 ، من بينها خلايا CD8 T تستهدف بشكل خاص بروتينات BKPyV virion protein1 (VP1) وبروتين مستضد T كبير (LTAG) [5]. أظهرنا ، وآخرون ، أيضًا وجود CD69 / CD 103- الذي يعبر عن خلايا T (MAIT) المرتبطة بالغشاء المخاطي فيالكلىالأنسجة [6،7].

لفهم نوع الخلايا التائية التي تشكل الاستجابة المناعية الموضعية في هذا العضو بشكل أفضل ، استخدمنا قياس التدفق الخلوي متعدد القنوات للتحقيق في النمط الظاهري ووظيفةالكلىTRMs ، معزولة عن المانحينالكلىمواد من متلقي زراعة الكلى (RTRs) ومن الأصحاءالكلىالأنسجة المجاورة لسرطان الخلايا الكلوية الصافية ، لمعرفة كيف يقارن هؤلاء السكان مع مجموعات الخلايا التائية في الدورة الدموية.وجدنا ذلك الإنسانالكلىتحتوي الأنسجة على كميات كبيرة من خلايا CD4 و CD8 T تعبر فقط عن CD69 و CD69 و CD103 ، أو لا تعبر عن أي من هذه العلامات. وجدنا أن CD 69- CD {6}} خلايا فيالكلىتختلف الأنسجة اختلافًا كبيرًا عن الخلايا التائية في الدورة الدموية وقد تمثل مجموعة TRM تفتقر إلى علامات TRM الكنسية. علاوة على ذلك ، نوضح أن خلايا الكلى التائية غالبًا ما تعمل بشكل نشط ، كما يتضح من زيادة التعبير عن Ki -67 ، عند مقارنتها بالدم. وجدنا أيضًا أن خلايا CD8 و CD4 T فيالكلىدائمًا ما تعبر الأنسجة عن CXCR3 وغالبًا ما تعبر عن CXCR6. تشير هذه النتائج إلى دور هذه المستقبلات الكيميائية في جذب وصيانة مجموعات خلايا الذاكرة التائية المقيمة في الكلى.

2. المواد والأساليب

2.1. المرضى والعيناتتم الحصول على عينات من Biobank Renal Diseases of the Amsterdam UMC location AMC. في هذا البنك الحيوي ، عينات المرضى ، مثل الدم والكلىالأنسجة ، يتم جمعها وتخزينها من الحياة الصحيةالكلىالمتبرعين و RTRs التي يتم متابعتها قبل وبعد زراعة الكلى. أجريت هذه الدراسة وفقًا للمبادئ الموضحة في تصريحات هلسنكي وإسطنبول وقدم جميع المشاركين موافقة خطية مستنيرة قبل التسجيل في Biobank. بالإضافة إلى ذلك ، تم التبرع بالأنسجة المتبقية من المرضى الذين خضعوا لعملية استئصال الكلية للورم (أنسجة الكلى البعيدة عن الورم) من قبل قسم علم الأمراض وتم تخزينها أيضًا في Biobank. تمت معالجة هذه الأنسجة بشكل مجهول وفقًا لمدونة سلوك اتحاد الجمعيات العلمية الطبية الهولندية (الأنسجة البشرية والبحوث الطبية: مدونة قواعد السلوك للاستخدام المسؤول ، 2011 www.federa.org).

2.2. الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي (PBMCs)تم الحصول على عينات الدم من الفيروس المضخم للخلايا (CMV) - الضوابط الصحية السلبية (الحيةالكلىالمتبرعين قبل الجراحة ، ن=13). يتم عرض خصائص المشاركين في هذه الدراسة في الجدول 1. تم عزل PBMCs من دم الهيبارين الصوديوم عن طريق الطرد المركزي المتدرج الكثافة القياسية ثم حفظها بالتبريد حتى يوم التحليل.

2.3 أنسجة الكلىتم الحصول على عينات أنسجة الكلى السليمة (ن {0}}) من الكلى التي تمت إزالتها جراحيًا بسبب سرطان الخلايا الكلوية (نسيج بعيد غير مسامي من القطب المقابل للكلية) وزرع أنسجة الكلى (ن {{1) }}) من الطعوم الكلوية المزروعة بعد فشل الزرع. يشار إلى هذه العينات على أنها عينات كلى صحية وعينات مزروعة على التوالي. تم تقطيع شرائح قشرة الكلى إلى مكعبات بحجم 1- مم باستخدام مفرمة الأنسجة McElwain (Ted Pella ، Redding ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وتم نقلها إلى 5 0 أنابيب مل ، وغسلها باستخدام برنامج تلفزيوني بارد حتى لا يكون هناك دم كان حاضرًا بوضوح وكان الطاف واضحًا. تمت إضافة وسط هضم مسخن مسبقًا (37 درجة) ، 40 مل لكل 10 جم من الأنسجة (نوع DNAse IV (50 KU / mL) (Sigma Aldrich ، Zwiindrecht ، هولندا) ، نوع الكولاجيناز الرابع (0.5 مجم / مل) (Worthington Biochemical ، ليكوود ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، BSA (60 مجم / مل) (Sigma Aldrich) ، 20 uL / ​​mL مصل العجل الجنيني (FCS ، VWR International BV ، أمستردام ، هولندا) ، TRIS (0.025 M) (Merck BV ، أمستردام ، هولندا) ، البنسلين - الستربتومايسين (Biochrom GMBH ، برلين ، ألمانيا) في HBSS (Westburg BV ، Leusden ، هولندا)) ، وحضنت في شاكر لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة. تم نقل التعليق الدافئ إلى أنبوب C (Miltenvi ، بيرجيش جلادباخ ، ألمانيا) وخضع لبرنامج M _ الطحال _04 01 على GentleMacs (Miltenyi). تم إلغاء تنشيط وسيط الهضم باستخدام PBS بارد ومرر تعليق الخلية الناتج عبر مصفاة خلية للحصول على تعليق أحادي الخلية ، والذي تعرض لطرد مركزي متدرج الكثافة وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة (Lymphoprep ، Abbott Diagnostics Technologies AS ، أوسلو ، النرويج ). كانت الخلايا أحادية النواة المعزولة (الكلى MNCs)cryopreserved حتى يوم التحليل في IMDM مكملًا بنسبة 20 بالمائة FCS و 000036 v / v بالمائة -mercaptoethanol و 5 بالمائة DMSO والبنسلين والستربتومايسين.

2.4 التدفق الخلويتم إجراء القياسات على مقياس التدفق الخلوي LSRFortessa (BD Biosciences). لكل عينة ، تم تحليل 2 × 1 0 6 PBMCs أو 0.5 × 106 إلى 10 × 106 MNCs في الكلى. كان حجم كل تفاعل تلطيخ متناسبًا مع عدد الخلايا وظلت تركيزات الجسم المضاد ثابتة. تم تحضين الخلايا بالأجسام المضادة السطحية (الجدول التكميلي S1) لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات في الظلام. تم استبعاد الخلايا الميتة باستخدام صبغة eFluor455UV القابلة للتثبيت (eBioscience Inc. ، Thermo Fisher Scientific ، San Diego ، CA ، USA). تمت إضافة الأجسام المضادة أحادية النسيلة ذات الأهداف داخل الخلايا (الجدول التكميلي S1) بعد التثبيت والنفاذية للخلايا باستخدام مجموعة تلوين عامل FoxP3 / النسخ (eBioscience Inc.). تم اتباع الطرق المنشورة لقياس التدفق الخلوي وفرز الخلايا للأغراض المناعية [8]. يمكن العثور على استراتيجية البوابة المستخدمة لتحليل النمط الظاهري في الشكل التكميلي S1. لقد أظهرنا سابقًا أن أيا من العلامات التي تم تحليلها لم يتأثر بطريقة الهضم المستخدمة لعزل MNCs في الكلى [7].

أدت قيود عينة الأنسجة إلى استبعاد العينات من الألواح الستائرية. يمكن العثور على عدد خلايا CD3 plus التي تم تحليلها لكل عينة في PBMCs الصحية ، والكلى الصحية MNCs وكلى TX في الشكل S3. تم تحليل عينات MNCs فقط عندما احتوت على أكثر من 50 في المائة من الخلايا الحية داخل الخلية الليمفاوية ، كما تم تقييمه بواسطة قابلية البقاء ، وتم تمييز مجموعات الخلايا التائية المستندة إلى CD69 / CD103 فقط إذا تجاوز إجمالي عدد خلاياها 50.

سيحسن الكستانش الفشل الكلوي / الفشل الكلوي

2.5 فحص التحفيزتم تحفيز PBMC والكلى MNC كما هو موضح سابقًا [7،9]. تم إذابة PBMCs و MNCs في الكلى في وجود DNAse I (200 KU / mL) ، وغسلها ، والسماح لها بالتعافي طوال الليل في لوحات جيدة غير معالجة ، مستديرة القاع ، 96- في وسط الثقافة (RPMI مكمل بـ 10 بالمائة FCS والبنسلين الستربتومايسين) بتركيز 20 × 106 / مل （100 ميكرولتر / بئر）.

في صباح اليوم التالي ، تمت إضافة phorbol 12- myristate 13- acetate (PMA، 10 ng / mL؛ Sigma Aldrich) وأيونوميسين (1 ميكروغرام / مل ؛ Sigma Aldrich) لتحفيز الخلايا. تمت إضافة المتوسط ​​وحده كعنصر تحكم سلبي. تم إجراء جميع الحضانات في وسط الثقافة في وجود CD28 (استنساخ 15E8 ؛ 2 ميكروغرام / مل) و CD29 (استنساخ TS 2/16 ؛ 1 ميكروغرام / مل) و brefeldin A (10 ميكروغرام / مل ، Invitrogen) و GolgiStop ( BD Biosciences) بحجم نهائي 200 ميكروليتر لمدة 4 ساعات عند 37 درجة و 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون.

بعد ذلك ، تم تحضين الخلايا لمدة 30 دقيقة مع الأجسام المضادة السطحية (الجدول التكميلي S2). تم استبعاد الخلايا الميتة باستخدام صبغة قابلة للتثبيت eFluor780 (bioscience Inc. ، Thermo Fisher Scientific ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تمت إضافة الأجسام المضادة أحادية النسيلة للتلوين داخل الخلايا (الجدول S1) بعد التثبيت والنفاذية للخلايا باستخدام مجموعة كاشف Cytofix / Cytoperm (BD Biosciences). تم غسل الخلايا مرتين وتحليلها على مقياس التدفق الخلوي LSRFortessa. يمكن العثور على استراتيجية البوابة المستخدمة في التحليل الوظيفي في الشكل التكميلي S2. لتحديد الوظائف المتعددة لكل مجموعة فرعية من الخلايا التائية ، تم حساب متوسط ​​عدد الوظائف لكل مجموعة باستخدام الصيغة التالية: ((النسبة المئوية للخلايا التي تنتج 1 سيتوكين] * 1) زائد ([النسبة المئوية للخلايا التي تنتج 2 سيتوكينات] * 2) زائد ([النسبة المئوية للخلايا التي تنتج 3 سيتوكينات] * 3) زائد ([النسبة المئوية للخلايا التي تنتج 4 سيتوكينات] * 4) زائد ([النسبة المئوية للخلايا التي تنتج جميع السيتوكينات الخمسة] * 5)) / 100.

2.6 تحليل البيانات

تم تحليل البيانات باستخدام FlowJo الإصدار 10 (FlowJo، Ashland، OR، USA). تم إنشاء جميع الرسوم البيانية والأشكال باستخدام Graphpad Prism الإصدار 8. 00 لنظام التشغيل Windows (برنامج GraphPad ، لا جولا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). كما تم استخدام نفس البرنامج للتحليلات الإحصائية للبيانات. تم استخدام اختبار Mann-Whitney-U اللامعلمي لتحديد أهمية العينات غير المزاوجة. لمقارنة العينات المزدوجة ، تم استخدام اختبار تصنيف موقع Wilcoxon. قيم p<0.05 were="" considered="" statistically="">

3. النتائج

3.1 التعبير الواضح عن CD8 و / أو CD4 وعلامات إقامة الأنسجة بواسطة الخلايا التائية في أنسجة الكلى السليمةأولاً ، قارنا التعبير عن CD4 و CD8 بواسطة الخلايا التائية الموجبة للقرص المضغوط 3- في الدم المحيط بالخلايا المكتشفة في أنسجة الكلى السليمة. تم اكتشاف الخلايا التائية CD 4- CD8 plus (CD8) بشكل ملحوظ في أنسجة الكلى أكثر من الدم ((المتوسط) 25 بالمائة مقابل 38 بالمائة) (الشكل la). بالمقابل ، CD4 * CD {{9} } (CD4) تم اكتشاف الخلايا التائية في الدم بترددات أعلى منها في أنسجة الكلى ((70 بالمائة مقابل 52 بالمائة) الشكل لا). بشكل عام ، شوهدت خلايا CD4 T بشكل متكرر في أنسجة الكلى السليمة مقارنة بخلايا CD8 T (الشكل 1 ب).

بعد ذلك ، قمنا بالتحقيق في تعبير علامات تواجد الأنسجة ، CD69 و CD1 0 3 ، في مجموعات فرعية من الخلايا التائية المحددة CD8 و CD 4-. كما هو متوقع ، لم يتم التعبير عن CD69 و CD1 0 3 تقريبًا بواسطة الخلايا في الدم المحيطي (الشكل 1 ج). في الأنسجة السليمة ، تم التعبير عن CD 69- CD 103- و CD69 بالإضافة إلى CD 103- و CD69tCD103 plus و CD 69- CD103 بالإضافة إلى الأنماط الظاهرية بنسبة 46 بالمائة و 45 بالمائة ، 6.6 بالمائة و 1.8 بالمائة من خلايا CD8T و 61 بالمائة و 38 بالمائة و 0.44 بالمائة و 0.43 بالمائة من خلايا CD4T على التوالي (الشكل lc). في الختام ، تم اكتشاف خلايا CD8 ، ولكن بشكل خاص CD4 T بأعداد كبيرة في أنسجة الكلى البشرية السليمة. علاوة على ذلك ، تم الكشف عن التعبير عن CD69 و CD103 ، علامات تواجد الأنسجة ، بشكل أساسي بين الخلايا التائية الموجودة في الأنسجة السليمة وليس في الدم.

3.2 أنماط التعبير التكاثر للعلامات المميزة للمجموعة الفرعية المشتركة بواسطة الخلايا التائية في الصحة / عن طريق نسيج الكلى

CD45RA ، وهو أحد فوسفاتيز التيروزين ، CCR7 ، وهو مستقبل كيميائي معروف بأنه يتوسط في تهريب الخلايا التائية إلى الأعضاء الليمفاوية الثانوية ، و CD28 و CD27 ، وكلاهما من المستقبلات التكلفة التي تشارك بقوة في تنشيط الخلايا التائية ، كلها علامات تستخدم تقليديًا لتحديد المجموعات الفرعية للخلايا التائية الوظيفية J1 { {53}} ، 1 لتر. أردنا أن نتحرى إلى أي مدى يختلف توزيع هذه المجموعات الفرعية في الدم عن التوزيع في أنسجة الكلى. كما هو متوقع ، كانت أكبر مجموعات فرعية من خلايا CD8 T تم اكتشافها في الدورة الدموية (أي تلك المتعلقة أكبر من أو تساوي 5 في المائة من إجمالي السكان) كانت تلك التي تحتوي على CD45RA بالإضافة إلى CCR7 بالإضافة إلى CD28 بالإضافة إلى CD27 plus (الخلايا التائية الساذجة أو TN ، ( متوسط) 13 بالمائة) ، CD45RA-CCR7 plus CD28 plus CD27 plus (ذاكرة مركزية Tcells أو TcM ، 6 بالمائة) ، CD45RA-CCR 7- CD28 plus CD27 plus (TEv1،3 0 بالمائة) ، CD45RA-CCR 7- CD28 plus CD 27- (Tau2،1 0 بالمائة) ، CD45RA-CCR 7- CD 28- CD27 * (TEy3،6 بالمائة) و CD45RA-CCR 7- قرص مضغوط 28- قرص مضغوط 27- (TM4،6 بالمائة) و ​​CD45RA بالإضافة إلى CCR 7- قرص مضغوط 28- قرص مضغوط 27- (TEMRA ، 10٪) النمط الظاهري. في الأنسجة السليمة ، لم يتم اكتشاف أي خلايا CD8 T تقريبًا (0.6 بالمائة) بنمط ظاهري TN ، ولم يظهر سوى عدد قليل (0.8 بالمائة) نمطًا ظاهريًا ضريبيًا. في المقابل ، كانت خلايا CD8 T المكتشفة في أنسجة الكلى السليمة تتكون من TEv كبير 1- (22 بالمائة) ، TEM 2- (12 بالمائة) ، Tpx 3- (18 بالمائة) ، TEx { {65}} (23 بالمائة) ، ومجموعات الخلايا التائية TEyRA (11 بالمائة) (الشكل 1 والشكل S4). عند النظر إلى خلايا CD4 T في الدم ، كانت أكبر المجموعات السكانية هي تلك التي تعبر عن Ty- (35 بالمائة) ، TcM- (25 بالمائة) ، TEMl- (16 بالمائة) ، TFM 2- (9 بالمائة) ، و عدد السكان الذين لم يتم تحديدهم بخلاف ذلك CD45RAtCCR 7- CD28 بالإضافة إلى النمط الظاهري CD27 * (0.4 بالمائة) (الشكل 1 د والشكل S4). في أنسجة الكلى السليمة ، أظهر عدد قليل من خلايا CD4 T TN- (3 بالمائة) أو TcM - (3٪) صفة ظاهرية. بدلاً من ذلك ، تم اكتشاف عدد كبير من الخلايا ذات النمط الظاهري TEM 1- (22 بالمائة) أو TEM 2- (40 بالمائة) أو TEM4 (14 بالمائة) في الأنسجة السليمة (الشكل 1 والشكل S4) . في الختام ، يختلف توزيع CD45RA / CCR7 / CD28 / CD 27- المحدد لمجموعات الخلايا الفرعية CD8 و CD4 T اختلافًا كبيرًا بين الدم وأنسجة الكلى السليمة.

3.3 غالبًا ما تضم ​​خلايا CD8 و CD4 T الموجودة في أنسجة الكلى البشرية السليمة خلايا ركوب الدراجات النشطةبعد ذلك ، درسنا ما إذا كانت هناك اختلافات في التعبير عن العلامات النموذجية لملف تعريف ذاكرة المستجيب السام للخلايا ، بين مجموعات الخلايا CD8 و CD4 T في أنسجة الدم والكلى. أولاً ، نظرنا في التعبير عن عوامل نسخ T-box T-bet و eomeso-dermin (Eomes). تشارك منظمات النسخ هذه بشكل مباشر في توليد خلايا مستجيبة المرحلة الحادة ، وتحفيز التعبير عن جزيئات مثل interferon-y و granzyme B ، وفي توليد استجابات الذاكرة الثانوية. كما هو متوقع ، كان التعبير عن T-bet متكررًا بين خلايا CD8 T في الدورة الدموية (54 بالمائة) ، بينما نادراً ما تضغط خلايا CD4 T الدموية على عامل النسخ هذا (13 بالمائة). ومن المثير للاهتمام ، بالنسبة لخلايا CD4 T ، أن تعبير T-bet كان أعلى بشكل ملحوظ بين الخلايا التائية المكتشفة في أنسجة الكلى السليمة مقارنة بالدورة الدموية (53 بالمائة مقابل 13 بالمائة). تم اكتشاف بعض التعبيرات بشكل متكرر بين خلايا CD8 T في الدورة الدموية (59 بالمائة) ، بينما كانت نادرة مرة أخرى بين خلايا CD4 T في الدورة الدموية (15 بالمائة). ومع ذلك ، كان تعبير Eomes أكثر تواترًا بين خلايا CD4 T في أنسجة الكلى (32 بالمائة) منه في الدم (الشكل 2 أ ، ب).

بعد ذلك ، قمنا بالتحقيق في تعبير Granzyme B ، وهو بروتين سيرين معروف بالتوسط في موت الخلايا المبرمج بعد الحقن في السيتوبلازم بواسطة الخلايا التائية السامة للخلايا. تمشيا مع التقارير السابقة ، تم اكتشاف تعبير T-bet و granzyme B بأعداد كبيرة في تعميم خلايا CD8 T (28 بالمائة). ومع ذلك ، كان تعبيره نادرًا بين خلايا CD4 T المنتشرة (1 بالمائة) ، بالنسبة لخلايا CD8 T ، كان تعبير الجرانزيم B مشابهًا في أنسجة الكلى والسكان المنتشرين (28 بالمائة ys.23 بالمائة) (الشكل 2 ج). ومن المثير للاهتمام ، أن الترددات العالية للتعبير عن T-bet و Eomes المكتشفة في خلايا CD4 T الكلوية لم تتوافق مع تردد تعبير أعلى للجرانزيم B في هذه الحجرة (5 بالمائة). بعد ذلك نظرنا في التعبير عن KLRGl ، وهو مستقبل التثبيط المعروف أنه يتم التعبير عنه في الغالب بواسطة خلايا المستجيب للطور الحادة السامة للخلايا وخلايا الذاكرة المستجيب. 10 في المئة ). لم يتم العثور على اختلافات بين المقصورات التشريحية في تعبير KLRG1l لخلايا CD8 أو CD4 T. أخيرًا ، درسنا تعبير Ki -67 ، وهو علامة تدل على تدوير الخلايا بشكل نشط. تماشياً مع الملاحظات السابقة ، كان تعبير Ki -67 بين خلايا CD8 و CD4 T المنتشرة نادرًا (1 بالمائة و 2 بالمائة على التوالي). ومن المثير للاهتمام ، أنه بين خلايا CD8 T ، ولكن بشكل خاص بين خلايا CD4 T ، تم اكتشاف تعبير Ki -67 بشكل ملحوظ في الخلايا التائية في أنسجة الكلى (3 بالمائة و 11 بالمائة على التوالي) (الشكل 2 هـ). في الختام ، تم اكتشاف خلايا CD4 T في أنسجة الكلى البشرية السليمة ، ولكن ليس خلايا CD8 T في هذه المقصورة ، والتي تم التعبير عنها بشكل متكرر عن T-bet و Homes. ومع ذلك ، فإن هذا لم يُترجم إلى تعبير أكثر تواترًا عن جرانزيم B بواسطة خلايا CD4 T. علاوة على ذلك ، على الرغم من أن الأعداد الإجمالية للخلايا المتدرجة كانت منخفضة ، إلا أن أنسجة الكلى احتوت على خلايا CD8 و CD4 T بشكل أكثر نشاطًا من الدورة الدموية.

3.4. خلايا CD8 و CD4 T في أنسجة الكلى السليمة تقريبًا جميع مواقع CXCR 3-بعد ذلك ، بحثنا عن الاختلافات في التعبير عن العلامات الأخرى ، النموذجية في التجمعات المنتشرة من أجسام الذاكرة غير السامة للخلايا على الفور ، كما هو موضح سابقًا بالنسبة لمجموعات الخلايا التائية المنتشرة. نظرنا أولاً إلى تعبير IL -7 R ، الذي يتم التعبير عنه بشكل أساسي على خلايا الذاكرة الساذجة والمبتكرة في الدورة الدموية ، حيث تشارك في الحفاظ على تكاثر الاستتباب [10،12،13]. في الدم المحيطي ، تم التعبير عن IL -7 Ra بشكل متكرر بواسطة خلايا CD8 T (84 بالمائة) وخلايا CD4 T (98 بالمائة). عبّرت خلايا CD8 و CD4 T في أنسجة الكلى السليمة عن هذه العلامة بشكل أقل كثيرًا من الخلايا التائية المنتشرة (71 بالمائة و 76 بالمائة على التوالي) (الشكل 2 و).

بعد ذلك ، درسنا التعبير عن العديد من المستقبلات الكيميائية الأخرى ومن المثير للاهتمام ، أن CXCR3 ، وهو مستقبل كيميائي يشارك في تهريب الخلايا T إلى الأنسجة الملتهبة [14-17] ، تم التعبير عنه بأعداد كبيرة جدًا من خلايا CD8 و CD4 T في أنسجة الكلى (99 في المائة و 91 في المائة ، على التوالي) ، وأقل كثيرًا عن طريق تعميم الخلايا التائية (58 في المائة و 26 في المائة ، على التوالي) (الشكل 2 ز). أخيرًا ، حددنا تعبير CXCR6 ، المعروف بتورطه في تكوين مجموعات TRM [18-22]. بينما تم التعبير عن CXCR6 من قبل مجموعة صغيرة فقط من خلايا CD8 T المنتشرة (16 بالمائة) ، وتقريباً ليس عن طريق تعميم خلايا CD4 T. عبرت نسبة أكبر بكثير من خلايا CD8 و CD4 في أنسجة الكلى عن هذا الجزيء (40 بالمائة و 40 بالمائة على التوالي) (الشكل 2 ح). في الختام ، فإن العلامات المرتبطة عادةً بحالة غير متباينة على الفور في الدورة الدموية ، على الأرجح -7 Ra و CCR7 و CD28 و CD27 ، تم التعبير عنها بشكل أقل كثيرًا بواسطة خلايا CD8 و T في الكلى عند مقارنتها بتلك الموجودة في الدم. على النقيض من ذلك ، فإن خلايا T في الكلى غالبًا ما تعبر عن CXCR6 ودائمًا ما تعبر عن CXCR3.

3.5 الفروق في النمط الظاهري بين الكلى السليمة وخلايا الطعم الخيفي هي الحد الأدنىبعد ذلك ، أردنا التحقق مما إذا كانت هذه النتائج لا تزال قائمة في الأنسجة المأخوذة من طعوم الكلى المزروعة التي تم الحصول عليها للعديد من المؤشرات السريرية (الجدول 1).فيما يتعلق بأعداد خلايا CD8 و CD4 T في الأنسجة السليمة والطعم الخيفي ، لم تُلاحظ اختلافات (الشكل 3 أ). ومع ذلك ، لاحظنا اتجاهًا غير مهم نحو المزيد من خلايا CD4T وخلايا CD8T أقل في الأنسجة السليمة مقارنة بنسيج الطعم الخيفي (الشكل 3 ب). بالإضافة إلى ذلك ، عند النظر إلى CD69 / CD103expression و CD45RA / CCR7 / CD28 / CD 27- مجموعات فرعية محددة ، لا توجد اختلافات في توزيع CD69 / CD 103- أو CD45RA / CCR7 / CD28 / CD 27- تمت ملاحظة مجموعات فرعية محددة ، بغض النظر عن النمط الظاهري لـ CD8 / CD4 (الشكل ثلاثي الأبعاد والشكل S5). عند فحص ترددات التعبير للعلامات الأكثر شيوعًا للخلايا التائية السامة للخلايا ، لم نجد أي اختلافات في التعبير عن T-bet أو KLRG1 أو Granzyme B بين الكلى السليمة أو الخلايا التائية الخيفية (الشكل 3 أ ، gh). لقد وجدنا أن تعبير Eomes شوهد بشكل أقل تواترًا في خلايا CD4 T لأنسجة الطعم الخيفي ، مقارنة بخلايا الأنسجة السليمة T (الشكل 3f). لم يلاحظ أي اختلافات في التعبير عن العلامات الأخرى. (الشكل 3- l والشكل S5b-d). في الختام ، بصرف النظر عن التردد المنخفض للتعبير عن Eomes بين خلايا CD4 T الخيفي ، لم تختلف مجموعات الخلايا بين مجموعات الدراسة.

3.6 تختلف الخلايا التائية CD 69- CD 103- في أنسجة الكلى عن الخلايا المنتشرةنظرًا للتركيب الظاهري المماثل لخلايا CD8 و CD4 T الموجودة في أنسجة الكلى السليمة وفي أنسجة الطعم الخيفي للكلى ، قمنا بتجميع البيانات من كلا مجموعتي الدراسة لفحص خصائص هذه الخلايا وفقًا لتعبير CD69 و CD103. منذ أن تم اكتشاف خلايا CD103 plus CD 69- دائمًا بترددات منخفضة جدًا (<50 events),="" we="" excluded="" these="" cells="" from="" further="" analyses.="">أولاً ، بحثنا في الاختلافات في هذه المجموعات الفرعية وفقًا لـ CD69 / CD1 0 3 التعبير المشترك في مجموعات الخلايا التائية الكلوية (الشكل 4 والشكل S6). ومن المثير للاهتمام ، أنه بالنسبة لخلايا CD8 و CD4 T ، لوحظت اختلافات جوهرية في توزيع مجموعات فرعية محددة CD45RA / CCR7 / CD28 / CD 27- بين CD 69- CD 103- و CD69 بالإضافة إلى القرص المضغوط { {14}} ومجموعات فرعية CD69 * CD103 *. بالنسبة لخلايا CD8 T ، احتوت خلايا CD 69- CD 103- على مجموعة كبيرة من خلايا TeyRA (21 بالمائة) والتي كانت أصغر بكثير بين مجموعات CD69 بالإضافة إلى CD 103- و CD69 بالإضافة إلى CD103 (5.8 بدلاً من ذلك ، احتوت هذه المجموعات السكانية الأخيرة على مجموعات سكانية فرعية أكبر بكثير (13 في المائة و 30 في المائة و 32 في المائة على التوالي) و 4 في المائة (8 في المائة و 19 في المائة و 33 في المائة على التوالي). بالنسبة لخلايا CD4 T ، شوهد عدد قليل من خلايا TEyRA بين CD 69- CD 103- و CD69 * CD 103- و CD69 بالإضافة إلى مجموعات فرعية CD103 * (2.6 بالمائة و 0 بالمائة و 1.7 بالمائة ، على التوالى). بدلاً من ذلك ، احتوت هذه الخلايا على مجموعات سكانية فرعية كبيرة من TFw1 (26 بالمائة .24 بالمائة و 10 بالمائة على التوالي) و TEy2 ell (30 بالمائة و 46 بالمائة و 27 بالمائة على التوالي). بين خلايا CD69 * CD103 * ، شوهدت مجموعة سكانية فرعية TEM4 أكبر بكثير (6 بالمائة و 11 بالمائة و 34 بالمائة على التوالي).

بالنظر إلى هذه الفروق والملاحظة السابقة بأن تجمعات الخلايا التائية في الكلى تتكون بالكاد من خلايا TN و TcM ، فقد قمنا بفحص خلايا CD {0}} CD {1}} الموجودة في أنسجة الكلى من أجل تحديد إلى أي مدى كانت هذه الخلايا ليس فقط الخلايا المنتشرة التي تمر عبر الدورة الدموية في الكلى. من أجل القيام بذلك ، قمنا بمقارنة هذه الخلايا بالخلايا المنتشرة. تختلف خلايا CD {2}} CD103 ~ في أنسجة الكلى اختلافًا كبيرًا عن تلك الموجودة في الدورة الدموية: تم التعبير عن T-bet و Ki -67 و CXCR3 في كثير من الأحيان بواسطة خلايا T في الكلى ، بغض النظر عن النمط الظاهري CD8 / CD4 (الشكل 5 أ-ج). في المقابل ، تم التعبير عن IL -7 R و CCR7 و CD28 و CD27 بشكل أقل تكرارًا بشكل ملحوظ بواسطة خلايا T الكلوية CD 69- CD 103- ، بغض النظر عن النمط الظاهري CD8 / CD4 (الشكل 5 د- ز). CD 69- CD 103- CD4 Tcells في أنسجة الكلى يعبر عن KLRG1 بمعدل أكبر بكثير من خلايا الدم والأقراص المضغوطة 69- CD 103- CD8 T في أنسجة الكلى المعبر عنها بشكل ملحوظ أكثر من Eomes في الدم.

بعد ذلك ، أردنا أن نرى كيف أثر تعايش CD69 و CD103 على علامات الإمكانات الوظيفية. أولاً ، نظرنا إلى العلامات المرتبطة بالإمكانات السامة للخلايا. على الرغم من وجود اختلافات بين المجموعات السكانية الفرعية الفردية ، لم تُلاحظ أي أنماط لاحقة لـ T-bet و Eomes في خلايا CD8 T عندما تم تعايش CD69 أو CD103 (الشكل 6 أ ، ب). تعايش CD69 و CD103 (الشكل 6 أ ، ب). عند النظر إلى KLRG1 ، لاحظنا أنه بالنسبة لخلايا CD8 T ، انخفض تعبير KLRG1 جنبًا إلى جنب مع CD69 / CD103 coexpression. ولوحظ اتجاه مماثل لخلايا CD4 T. ومع ذلك ، هنا فقط خلايا CD 69- CD 103- تعبر عن KLRG1 بتردد أعلى من CD69 بالإضافة إلى CD 103- و CD69 بالإضافة إلى CD103 * الخلايا (الشكل 6 ج). تراجعت أيضًا ترددات التعبير عن جرانزيم B جنبًا إلى جنب مع علامات الإقامة في الأنسجة ، حيث كان تردد التعبير أقل بين خلايا CD69 بالإضافة إلى CD103 * ، داخل كل من خلايا CD8 و CD4 T (الشكل 6 د). لم يختلف تعبير Ki -67 ، الذي كان أعلى بين خلايا الكلى T مقارنة بالخلايا التائية في الدم ، وفقًا لتعايش CD69 أو CD103 (الشكل 6 هـ).

قمنا بعد ذلك بفحص العلامات المرتبطة عادةً بملف تعريف ذاكرة غير سام للخلايا وفقًا لتعايش CD69 / CD103. كان التعبير عن IL -7 Ra و CCR7 و CD28 في أعلى مستوياته ضمن مجموعات 69- القرص المضغوط 103- CD ، مع وجود اتجاه في تعريف التعبير جنبًا إلى جنب مع تعبير CD69 / CD103 (الشكل 6f-h ). ثم نظرنا إلى تعبير CXCR3 و CXCR6. غالبًا ما تم التعبير عن كلا المستقبلات الكيميائية بواسطة خلايا CD69tCD103t ، بغض النظر عن النمط الظاهري CD8 / CD4 ، وأظهرت اتجاهًا تصاعديًا مع تعايش CD69 / CD103. فقط بالنسبة لـ CXCR6 ، كان هذا الاتجاه ذا دلالة إحصائية ، حيث أثر على كل من CD8 و CD4 Tells (الشكل 6j ، k). في الختام ، تختلف خلايا CD 69- CD 103- في أنسجة الكلى اختلافًا جوهريًا عن الخلايا في الدورة الدموية وقد تتعلق بمجموعة TBv أخرى غير مميزة بتعبير CD69 أو CD103. العلامة الوحيدة التي اختلفت باستمرار ، بغض النظر عن النمط الظاهري CD8 / CD4 ، من حيث CD69 و CD103 coexpression ، كانت CXCR6.

3.7.T الخلايا في أنسجة الكلى تنتج إنترفيرون أكثر من الخلايا التائية في الدمأخيرًا ، قمنا بفحص قدرة إنتاج السيتوكين عن طريق CD8 / CD 4- المحدد من مجموعات الخلايا التائية في أنسجة الكلى. أولاً ، قارنا إنتاج interferon-y (IFNy) ، وعامل نخر الورم (TNF) ، والإنترلوكين -2 (IL -2) ، وعامل تحفيز مستعمرة الخلايا الضامة المحببة (GM-CSF) ، و حدد IL -17 بواسطة CD8 / CD محفز 4- تجمعات الخلايا التائية الموجودة في الدم لتلك الموجودة في أنسجة الكلى السليمة (الشكل 7 أ-هـ). ومن المثير للاهتمام ، أنه تم التعبير عن IFNy فقط بشكل ثابت من خلال نسبة أكبر من الخلايا التائية في أنسجة الكلى السليمة ، مقارنة بالخلايا التائية في الدم ، بغض النظر عن النمط الظاهري CD8 / CD4 (الشكل 7 أ). كما لوحظت الاختلافات على مستوى مجموعة فرعية فردية. على وجه التحديد ، تم إنتاج TNF و GM-CSF بشكل متكرر بواسطة خلايا CD4 T في أنسجة الكلى (الشكل 7 ب ج). فيما يتعلق بالوظائف المتعددة (أي عدد السيتوكينات المنتجة في وقت واحد) ، وجد أن خلايا CD4 T في أنسجة الكلى متعددة الوظائف أكثر من خلايا CD4 في الدم (الشكل 7f).

بعد ذلك ، نظرنا في الاختلافات في قدرة إنتاج السيتوكين بين الخلايا التائية المحفزة من الأنسجة السليمة والخيفية. لم يتم الكشف عن اختلافات في إنتاج السيتوكينات الفردية ، أو في عدد من السيتوكينات المنتجة في وقت واحد بين الخلايا التائية من أنسجة الكلى السليمة أو الخيفي (الشكل S7). نظرًا لأن CD69 يتم التعبير عنه عند تحفيز الخلايا التائية ، فقد درسنا فقط الفرق بين القرص المضغوط 103- السلبي والقرص المضغوط 103- الذي يعبر عن الخلايا التائية CD4 و CD8 (الشكل 7g-). عند مقارنة خلايا CD4 و CD8 T التي تعبر عن CD103 مع الخلايا التي لا تعبر عن CD103 في أنسجة الكلى ، لاحظنا أن خلايا CD8 و CD4 CD103 تعبر عن IFNy أكثر من خلايا CD 103- (الشكل 7g). بالإضافة إلى ذلك ، على الرغم من أن الخلايا المنتجة لـ IL -1 ZA كانت منخفضة بين خلايا CD103 بالإضافة إلى CD8 و CD4 T في أنسجة الكلى ، فقد تم العثور عليها بشكل متكرر أكثر في هذه المجموعة مقارنة بمجموعة CD 103-. في الختام ، أنتجت المزيد من الخلايا التائية في أنسجة الكلى IFNy عند مقارنتها بالخلايا التائية المنتشرة ، بغض النظر عن النمط الظاهري CD8 / CD4. في الواقع ، تم العثور على أعلى نسبة من الخلايا المنتجة لـ IFNy بين القرص المضغوط 103- الذي يعبر عن الخلايا التائية المشتقة من الكلى CD4 و CD8. بالإضافة إلى ذلك ، لم تختلف الخلايا التائية في الطعم الخيفي للكلى عن تلك الموجودة في أنسجة الكلى السليمة فيما يتعلق بهذه المعايير.

4. مناقشة

في الدراسة الحالية ، تناولنا تنوع مجموعات الخلايا التائية الفرعية ، وفقًا لتعبير CD8 و CD4 ، وعلامات تواجد الأنسجة ، CD69 و CD103 ، في الكلى البشرية ومقارنتها بالدم. تم اكتشاف أعداد كبيرة من خلايا CD8 و CD4 T بالفعل في أنسجة الكلى. علاوة على ذلك ، احتوت هذه الخلايا التائية في الكلى على أعداد كبيرة من خلايا CD69 * CD 103-. تم اكتشاف خلايا CD69 plus CD103 plus أيضًا ، ولكن في الغالب بين خلايا CD8 T وكانت غير موجودة تقريبًا بين خلايا CD4 T. نتيجة مماثلة تتعلق TRM الرئة سابقا [23]. كما هو متوقع ، كانت مجموعات CD69 و CD 103- التي تعبر عن السكان شبه غائبة عن الدورة الدموية. كان الاختلاف اللافت للنظر عند مقارنة الخلايا التائية في الكلى مع تلك الموجودة في الدم ، يتعلق بالتوزيع المتميز للمجموعات الفرعية التقليدية المحددة CD45RA / CCR7 / CD28 / CD 27-. ومن المثير للاهتمام ، أن التعبير عن CD28 لم يتم التعبير عنه في كثير من الأحيان عندما كانت الخلايا التائية تتعايش مع CD69 بمفردها أو بالاشتراك مع CD103. من الناحية النظرية ، يجب أن يجعل هذا هؤلاء السكان أقل عرضة للإشارات costimulatory بواسطة CD80 و CD 86. تتعلق الاختلافات الأخرى بتردد أعلى للتعبير عن CXCR3 و CXCR6 و Ki -67. بالإضافة إلى ذلك ، احتوت خلايا الكلى التائية في كثير من الأحيان على خلايا منتجة لـ IFNy وكثيراً ما كانت متعددة الوظائف. في الواقع ، داخل الكلى ، احتوت CD103 بالإضافة إلى Tpys على عدد أكبر من الخلايا المنتجة لـ IFN من نظائرها CD 103- السلبية. بالإضافة إلى ذلك ، أنتجت خلايا CD103T في كثير من الأحيان IL -17 ، على الرغم من أن هذا يتعلق بعدد متواضع من السكان.

سيحسن القسطرة من التهاب الكلى / التهاب الجلد

فيما يتعلق بالتعبير الأكثر شيوعًا عن CXCR3 بواسطة الخلايا التائية الكلوية CD8 و CD4 ، فقد تم سابقًا إظهار أن محور CXCR3 / CXCL10 متورط في تشكيل مجموعات TpM في الجلد والكبد والأنسجة اللمفاوية [24-28]. بالإضافة إلى ذلك ، فهو يشارك في تهريب الظهارة المجهدة والالتهاب بشكل عام [14-17]. بالنظر إلى الترددات العالية لـ CXCR3 بين هذه الخلايا التائية في أنسجة الكلى السليمة ، يبدو أن CXCR3 متورط في استتباب TRM في أنسجة الكلى أيضًا وقد لا يتضمن بالضرورة إشارات التهاب أو خطر للقيام بذلك. فيما يتعلق بـ CXCR6 ، تم بالفعل إثبات أن محور CXCR6 / CXCL16 ضروري بالفعل لتهريب Tpst إلى أجزاء مختلفة مثل الرئتين والجلد والكبد والدماغ ، وقد يتعلق بآلية عالمية ضرورية لتوجيه TRM والاحتفاظ به في الأنسجة ، وكذلك بخصوص TRM في أنسجة الكلى البشرية [18-22].

قام Farber وزملاؤه في العمل بتمييز ومقارنة مجموعات CD8 و CD4 TRM المقيمين في أنواع مختلفة من الأنسجة البشرية المشتقة من المتبرعين بالأعضاء. لقد وصفوا كيف تختلف مجموعات TRM في الرئة والطحال والأمعاء الدقيقة ومختلف الأنسجة اللمفاوية الثانوية فيما يتعلق بالنسخة ، ولكن أيضًا في التعبير عن البروتينات المختلفة ، بما في ذلك السيتوكينات ، التي تم فحصها في الدراسة الحالية [29-31. ومع ذلك ، فإن هذه التحقيقات لم تشمل مجموعات TRM في الكلى البشرية ، والبيانات الخاصة بذلك

الموضوع نادر. لقد أظهرنا سابقًا أن خلايا CD8 T التي تستهدف بروتينات الفيروسة التورامية BK VP1 و LTAG ، المشتقة من فيروس له مدارية قوية للخلايا الظهارية الكلوية ، يمكن اكتشافها في الكلى الخيفية. عبّرت هذه الخلايا التائية الخاصة بالفيروسات عن CD69 و CD103 بأعداد أعلى من نظيراتها الموجودة في الدورة الدموية لنفس المرضى. علاوة على ذلك ، أعربت هذه الخلايا التائية بشكل عام عن النمط الظاهري لـ CD45RA-CD 27- جرانزيم ب السلبي [5]. في وقت لاحق ، أبلغ آخرون أيضًا عن مجموعات TRM في أنسجة الكلى البشرية التي تم الحصول عليها من عمليات زرع الكلى. في هذا المنشور ، ذكر المؤلفون أن الخلايا التائية في هذه الأنسجة تتعلق بشكل أساسي بـ CD8 T cels [321. بدلاً من ذلك وجدنا أن خلايا CD4 T ، في الواقع ، تضم أكبر مجموعة فرعية من الخلايا التائية. ومع ذلك ، وجدنا أيضًا أن التوازن قد تحول ، وإن لم يكن بشكل كبير ، نحو أعداد أكبر من خلايا CD8 T في نسيج الطعم الخيفي مقارنة بأنسجة الكلى السليمة. على هذا النحو ، يمكن تفسير هذا التناقض من قبل مجموعة دراسة مختلفة ، وقد يكون ذلك في الصحة ، فإن الدفاع المناعي يكون أكثر تركيزًا على التهديدات خارج الخلية ، مثل البكتيريا ، مقابل المزيد من التهديدات داخل الخلايا ، مثل الفيروسات والسرطان في المضيفين الذين يعانون من نقص المناعة. لم نجد اختلافات أخرى في الواسمات المدروسة بين الكلى السليمة وخلايا الطعم التائي الخيفي. ومع ذلك ، ينبغي استخدام مزيد من البحث ، باستخدام تقنيات ذات رؤية أوسع حول الترانسكريبتومات ، مثل تسلسل الحمض النووي الريبي ، أو البروتين ، مثل قياس الطيف الكتلي ، لتحديد ما إذا كان هذا هو الحال بالفعل.

بالإضافة إلى ذلك ، de Leur et al. صف كيف يعبر TRM في الكلى بشكل متكرر عن جرانزيم ب ، بينما اكتشفنا كميات قليلة فقط من جرانزيم ب في كل من أنسجة الكلى السليمة وخيفي [32]. ومع ذلك ، فقد اكتشفنا وجود خلايا T-bet وخلايا T المعبرة عن Eomes في أنسجة الكلى ، والتي ترتبط عادةً بتعبير أعلى عن Granzyme B في مجموعات الخلايا التائية المنتشرة. في حين أن هذا الأخير قد لا يكون مفاجئًا ، نظرًا لحقيقة أن تعبير جرانزيم B يتم تحفيزها بشكل مباشر أيضًا بواسطة T-bet [33،34] ، لم يكن هذا الارتباط واضحًا بين خلايا الكلى التائية في الدراسة الحالية. كما أظهرنا نحن وآخرون أن TRM المشتق من الرئة البشرية والدماغ والجلد أيضًا [25،26،3536] ، بالإضافة إلى أنسجة MAIT المقيمة في الأنسجة المشتقة من الكلى 【6،7 منخفضة في جرانزيمها B المحتوى ، في حين أنه غالبًا ما يعبر عن كميات كبيرة من T-bet و Eomes ، فقد تكون هذه سمة مشتركة لـ TkM (البشرية). علاوة على ذلك ، في الرئة ، لوحظ أن تعبير جرانزيم B TRM يتم تنظيمه بسرعة عند التحفيز [35 لترًا ، مما يشير إلى أن هذا قد يحدث أيضًا في TeM الأخرى. هنا ، افترض المؤلفون أن مثل هذه السمية الخلوية الخفية تعمل على حماية السلامة الهيكلية للأنسجة من التلف الذي تسببه الخلايا التائية السامة للخلايا.

في الختام ، نوضح أن T clls في أنسجة الكلى موجودة بأعداد كبيرة وتتألف من مجموعات سكانية تعبر بشكل متكرر عن CD69 plus و CD103 plus ، وهي جزيئات تلتصق بها الخلايا التائية وتستمر في الأنسجة. ومع ذلك ، فإن الخلايا التائية CD 69- CD 103- في أنسجة الكلى تبدو مختلفة عن الخلايا التائية المنتشرة وقد تهم مجموعة أخرى متميزة من TiM ، وربما تستمر في الكلى عن طريق آليات بيطرية أخرى يتم كشف النقاب عنها. قد يكون الخيار الآخر هو أن هذه الخلايا التائية CD 69- CD 103- تهتم بالسكان الذين يخرجون من التبن مؤخرًا فقط من الدورة الدموية ، ولا يكتسب التبن سوى سمات نمطية جديدة عابرة بسبب التفاعل مع البيئة المكروية للكلية. هناك حاجة إلى مزيد من التحقيقات في هذه الفئة من السكان لتوضيح هذه الاحتمالات. بالإضافة إلى. غالبًا ما كانت خلايا الكلى التائية CD8 و CD4 تتنقل بشكل نشط ويتم التعبير عنها بشكل متكرر CXCR6. بالإضافة إلى ذلك ، أزاح سكان CD8 و CD4 تعبيرًا عاليًا بشكل خاص عن CXCR3 ، مما يشير بشدة إلى تورط هذه المستقبلات الكيميائية ، وكذلك CXCR6 في تراكم TRM واستمراره في الكلى البشرية. لذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من التحقيقات لتحسين صورتنا عن مجموعات Tpv في الكلى البشرية. ومع ذلك ، فإن النتائج المقدمة هنا تشكل خطوة أولى قوية نحو توصيف أكثر تفصيلاً لمجموعات الخلايا التائية في أنسجة الكلى ودورها في الصحة والمرض.