المكونات الكيميائية لأوراق القسطرة

الملخص: Cistancheمنذ فترة طويلة تستخدم أوراق الطب التقليدي لعلاجالسكتة الدماغية الإقفارية, ذبحة، وارتفاع ضغط الدموكمشروب صحي ومستحضرات التجميل لمكافحة الشيخوخة. هدفت هذه الدراسة إلى عزل أكبر عدد ممكن من المركبات من مستخلص الإيثانولمن أوراق الكاكي لتحديد المركبات النشطة بيولوجيا. التأثير المضاد للأكسدةمن طبقة أسيتات الإيثيل من مستخلص الإيثانول لأوراق الكاكي2 ، 2- ثنائي فينيل -1- بيكريل هيدروزيل (DPPH) والكروماتوجرافيا السائلة عالية الأداء عبر الإنترنت-2,20 -casino-bis (3- ethylbenzothiazoline -6- sulfonic acid) (HPLC-ABTS). فلافونويد جديد ،كايمبفيرول -3-O- -D-2 "- coumaroylgalactoside (1) ، ومركب طبيعي جديد ، kaempferol -3-O- -D-2 "- feruloylglucoside (3) من طبقة أسيتات الإيثيل ، جنبًا إلى جنب مع 25 سابقًاالمركبات المعروفة ، بما في ذلكأربعة عشر فلافونويد، أيونون واحد ، اثنان من الكومارين ، سبعة ترايتيربينويدات ،وواحد أسيتوفينون. يحدد تفسير البيانات الطيفية والطيفية هياكلها. تم تقييم جميع المركبات المعزولة بسرعة باستخدام الإنترنتHPLC- ABTSفحصومن هذه المركبات4–8, 11, 13, 15، و16 أظهر بوضوحتأثيرات مضادة للأكسدة. الكمية هذه المركبات كانت {{0}} .3–0.65 بالمائة من المستخلص.

الكلمات الدالة:ديوسبيروس كاكي؛ أوراق البرسيمون الفلافونويد. مضادات الأكسدة

انقر هنا للحصول على سيستانش غني بالفلافونويد لمستحضرات التجميل المضادة للشيخوخة

1 المقدمة

ديوسبيروس كاكيثونب. (البرسيمون) ينتمي إلى عائلة Ebenaceae وهو واسع الانتشارموزعة في كوريا والصين واليابان. تؤكل ثمارها طازجة أو جافة ، بينما تؤكل الأوراقمنذ فترة طويلة كدواء تقليدي لعلاج السكتة الدماغية والذبحة الصدرية وارتفاع ضغط الدم ،تصلب الشرايين والأمراض المعدية [1]. علاوة على ذلك ، تم استخدام أوراقهاكمشروبات ومستحضرات تجميل صحية لما لها من خصائص مقاومة للشيخوخة وقدرتها على ذلكتساعد في منع تراكم الكوليسترول والميلانين [1]. اقترحت الأبحاث الحديثةأن مستخلصات أوراق الكاكي تمتلك مجموعة واسعة من الخصائص البيولوجية ،بما في ذلك الكسح الجذري ، والحماية العصبية ، وتثبيط التخثر ، ومضادات تصلب الشرايين ،ومضاد للحساسية [2–6]. اقترح تحقيق سابق كيميائي نباتي أن مختلفانواع منمركبات الفلافونويدو terpenoids هي المكونات الرئيسية [7] ، والعديد من العفص ،تم الإبلاغ أيضًا عن النافثوكينون والكومارين والأيونونات والأحماض الدهنية [8–12]. أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) هي جزيئات تفاعلية تنتج في الأنظمة البيولوجية ،ويتم التحكم بشكل جيد في التوازن بين توليد ROS والقضاء عليهفسيولوجيا الخلية [13]. ومع ذلك ، فإن التوليد المفرط لـ ROS يسبب أضرارًا مؤكسدة ،وبالتالي الشيخوخة والأمراض المرتبطة بالعمر بما في ذلك السرطان والسكري ومرض باركنسونمرض [14]. ومن ثم اكتشاف مضادات الأكسدة مثل مركبات الفلافونويد والفينوليمكن أن تكون استراتيجية واعدة لعلاج هذه الأمراض.

كجزء من مشروعنا المستمر لإيجاد مركبات نشطة بيولوجيا [15]، الالتأثير المضاد للأكسدة لمستخلص الإيثانول (EtOH) وأقسام المذيبات من البرسيمونتم تقييم الأوراق باستخدام 2 ، مقايسة 2- ثنائي فينيل -1- بيكريل هيدرازيل (DPPH) وعالية الأداء عبر الإنترنتالكروماتوغرافيا السائلة -2 ، 20 -casino-bis (3- ethylbenzothiazoline -6- حمض السلفونيك)(HPLC-ABTS) تحليل. أدت دراسة كيميائية نباتية على أوراق البرسيمون إلى العزلمن واحد جديد من الفلافونويد (1) ، مركب طبيعي واحد جديد (3) ، و25 سابقاالمركبات المعروفة. كان تطبيق الأساليب الطيفية والطيفية يميز الهياكل. تم فحص جميع المركبات المعزولة بسرعة بحثًا عنالتأثيرات المضادة للأكسدة باستخدام HPLC-ABTS عبر الإنترنت. علاوة على ذلك ، فإن التحليل الكمي لـتم إجراء جميع المركبات المعزولة في هذه الدراسة.

2. النتائج والمناقشة

2.1. التأثير المضاد للأكسدة لأوراق البرسيمون

تم تقييم التأثير المضاد للأكسدة لمستخلص الإيثانول (EtOH) لأوراق الكاكيللفحص الأولي من خلال DPPH (الشكل1أ). 0. 125 مجم / مل مناستخراج ما يقرب من 8 0 في المئة من جذور DPPH ، بينما 0.025 ملغ / مل من الأسكوربيكحمض 94 في المئة من الراديكالي. تم إجراء اختبار HPLC-ABTS عبر الإنترنت بسرعةتأكد من مصداقية هذه النتائج (الشكل1د). تم استخدام حمض الجاليك وترولوكس كداخليالمعايير. اقترح الرسم اللوني عند 734 نانومتر (ذروة سلبية) ذلك تقريبًاتسعة مكونات يمكن أن يكون لها أنشطة مضادة للأكسدة. حمض الغاليك وترولوكس (6- هيدروكسي - 2 ، 5،7 ، 8- رباعي ميثيل كرومان -2- كربوكسيلحمض) كمعايير داخلية لضمانموثوقية النتائج. تم استنتاج أن معظم هذه القمم كانت من مشتقات الفلافونويدمثل جليكوسيد الفلافونويد والفلافانول ، بناءً على تحليل إزالة التكرار الذي تم إجراؤهمن خلال مقارنة الأشعة فوق البنفسجية (UV) والأطياف الكتلية للمركبات مع المنشوربيانات. اقترح التجزيء الموجه بالمقايسة الحيوية أن هذه المركبات المضادة للأكسدة كانت كذلكوفيرة في طبقة أسيتات الإيثيل (EtOAc) ، بينما يتواجد الماء (H.2س) أظهرت طبقة ضعيفةنشاط (الشكل1B,C). 

الشكل 1. تأثيرات مسح DPPH لمستخلص EtOH (A) وطبقة EtOAc (B) وطبقة HO (C) HHO من أوراق الكاكي: (D) مخطط كروماتوجرافي ABTS-HPLC عبر الإنترنت من مستخلص EtOH.

2.2. التحقيق الكيميائي النباتي

للتعرف على هذه المركبات المضادة للأكسدة ، كروماتوغرافيا وطيفية مختلفةتم تنفيذ طرق للعزل والتوصيف الهيكلي لـمجمعات سكنية. فلافونويد جديد (1) ومركب طبيعي جديد (3) منطبقة أسيتات الإيثيل من مستخلص الإيثانول ، مع 25 مركبًا تم الإبلاغ عنها سابقًا ،وبالتحديد kaempferol -3-O- -2 "- coumaroylglucoside (2) [16] ، (زائد) -كاتشين (4) [17] ، فرط(5) [17] ، isoquercitrin (6) [18] ، كيرسيتين -3-O- -2 "- galloylgalactoside (7) [19] ، كيرسيتين -3-O- -2 "- galloylglucoside (8) [20] ، تريفولين (9) [18] ، استراغالين (10) [18] ، كايمبفيرول -3-O- - 2 "-غلويل جالاكتوزيد (11) [21] ، كايمبفيرول -3-O- -ارابينوسيد (12) [22] ، كايمبفيرول -3-O- - 2 "-غلويل جلوكوزيد (13) [23] ، كيرسيتين -3-O- -2 "- coumaroylglucoside (14) [24] ، كيرسيتين(15) [15] ، kaempferol (16) [25], (6S,9S) -روزوسيد (17) [26] ، سكوبوليتين (18) [27] ، umbelliferone(19) [28] ، 1- (2 ، 4- ثنائي هيدروكسي -6- ميثيل فينيل) إيثانون (20) [29] ، حمض باربينيرفيك (21) [30], حمض ديوسبيريك ب (22) [7] ، وحمض روتونجينيك (23) [31] ، حمض بوموليك (24) [32] ، حمض السيارسينوليك(25) [33] ، حمض الأولينوليك (26) [25] ، وحمض أورسوليك (27) [25] باستخدام التحليل الطيفي والبيانات الطيفية والفيزيائية بالمقارنة مع البيانات المنشورة وكذلك مع البيانات الرقيقةتحليل كروماتوغرافيا الطبقة (TLC) (الأشكال2 و3). من بين هذه المركبات2, 16, 17, 19, 20، و24 تم عزلهم أولاً عند. كاكي. 

تم الحصول على المركب 1 كمسحوق أصفر ، حيث تم إنشاء الصيغة الجزيئية كـ C3olO3 بناءً على بيانات قياس الطيف الكتلي عالية الدقة (HRMS). أظهر الطيف نطاقات امتصاص عند 2 0 7 و 315 نانومتر ، مما يشير إلى أن المركب 1 له عمود فقري من الفلافونول. أظهرت بيانات الرنين المغناطيسي النووي (NMR) (الجدول 1 الشكل S1) نمطًا نموذجيًا من مركبات الفلافونول غليكوزيد المتراكبة ، والتي تُظهر مجموعتين من الإشارات من نوع AA'BB ({{1 0}}. {11 }} (2H، d، J=8. 5 Hz، H -2 'and H -6)، 6.87 (2H، d، J {{2 0}} .5 HzH -3 'و H -5')) في الحلقة B من kaempferol بالإضافة إلى الإشارات (0 7. 45 (2H، d، J=8. 5 هرتز -2 و H {{3 {{1 0 4}}} ") ، 6.81 (2H ، د ، J=8. 5 هرتز ، H -3 و H -5 بالمائة) في الحلقة العطرية لمجموعة الكومارويل. إشارتان مزدوجتان (8H 7.65 (1H ، d ، J=15. 5 Hz ، H -7 "") و 6.35 (1Hd، J=16. 0 Hz، H -8 ") تمت ملاحظتها ، مما يشير إلى البروتونات عبر الأوليفينية لمجموعة البلدان. ​​بالإضافة إلى ذلك ، إشارة بروتون شاذة (0H 5.57 (1H ، d، J=8. 0 Hz، H -1) تمت ملاحظته في منطقة السكر ، مما يشير إلى وجود مجموعة السكر الدوري المكون من B. درجة الحرارة 13C والتحسين الخالي من التشوه عن طريق نقل الاستقطاب بيانات NMR (Iable أظهر الشكل 1 S2) 30 صدىًا يشتمل على ذرتي كربون عابر أوليفيني ، وعشرة ذرات كربون عطرية ، وستة كربون شطر جلوكوزيل ، وعشرة كربون غير بروتوني بما في ذلك كربونيل كربونيل. على وجه الخصوص ، كانت التحولات الكيميائية عند C -2 و C -3 و C -4 (8c 158.1 و 134.9 و 179.2) إشارات مميزة للفلافونول 3-0- جليكوسيد. بالإضافة إلى ذلك ، إشارة الكربونيل عند C -1 "(8c 168.7) وإشارات الكربون الأوليفيني عند C -2" و C -3 "(6 146. 9 ، 115.2) عبارة عن تحولات كيميائية نموذجية لمجموعة coumaroyl. إشارة الكربون الشاذة عند C -1 (6C 100.4) وإشارات أخرى لشق الجليكوزيل من C -2 "إلى C -6" (6c74.3 ، 73.4 ، 70.5 ، 77.4 ، و 62.0) تمت ملاحظتها. كانت بيانات NMR أحادية البعد (1D) قابلة للتركيب على تلك الخاصة بـ kaempferol -3-0- B -2 "- coumaroylucoside (2) (16]. ومع ذلك ، فإن المقارنة الدقيقة لبيانات 13C NMR بين المركبين تشير إلى أن المركب 1 يحتوي على جزء من الجالاكتوز ، والذي تم توضيحه بشكل أكبر بواسطة التحليل الطيفي للتحسين النووي (NOESY) بالرنين المغناطيسي النووي (الشكل S6). في حين أن ارتباط NOES بين لوحظ H -2 و H -4 في المركب 2 ، ولم يكن هناك ارتباط بين هذه البروتونات في المركب 1. بشكل عام ، يعد تفسير بيانات 13C NMR و NOESYNMR طريقة فعالة لتحديد نوع جزء الجليكوزيل . تم استنتاج موقع جزء الجالاكتوز ليكون عند C -3 وفقًا للتحول السفلي لـ C -2 و C -4 ، كما يتضح من ارتباط الرابطة المتعددة النواة غير المتجانسة (HMBCbetween H { {123}} "و C -3 (الشكل S5). تم توضيح موضع مجموعة coumaroyl ليكون عند C -2 "استنادًا إلى التحول في الحقل السفلي (0 5. 36 (1H، dd، J=10. 0، 8.0 Hz، H { {134}} ")) وعلاقة HMBC بين H -2 'و C -1. نتيجة لذلك ، تم تحديد بنية المركب 1 على أنها kaempferol -3-0- B -2 "- coumaroylgalactoside. على الرغم من أن المركب 2 كان معزولًا سابقًا عن مصادر مختلفة ، بما في ذلك Ouercus suber (16] و Alliumporrum (34) ، تم عزل المركب 1 وتمييزه هيكليًا لأول مرة.

مُجَمَّع3 تم عزله كمسحوق أصفر وتم إنشاء الصيغة الجزيئيةمثل ج31H28O14 من خلال تحليل بيانات نظام إدارة الموارد البشرية. أظهر طيف الأشعة فوق البنفسجية الأشعة فوق البنفسجيةامتصاص عند 210 و 327 نانومتر بسبب نفس الاجليكون مع المركبات1 و2. ال1H بيانات الرنين المغناطيسي النووي (الجدول1، الشكل S10) مماثلة لتلك الخاصة بالمركب2، لكنها مركبة3 كان لديه مجموعة feruloyl بدلاً من مجموعة coumaroyl ، كما يتضح من وجودمجموعة methoxy إضافية (δH 3.91 (3H, s, 3000 -أوك3)). بالإضافة إلى ذلك ، بروتون شاذالإشارة (δH 5.64 (1H, d, J {0}. 0 هرتز ، ارتفاع -100 )) ، مما يشير إلى ارتباط الجليكوزيلكان-إعدادات، والإشارة المتغيرة لأسفل (5.03 (1H ، t ،J = 8. 5 هرتز ، ارتفاع -200 )) تم عرضه في منطقة السكر ، كما هو الحال مع المركب1. ال13بيانات C NMR (الجدول1، شكلS11) 31 صدى يتألف من اثنينعبر- الكربون أوليفينيك ، عشرة ذرات كربون رباعي ،عشرة ذرات كربون عطرية ، وستة ذرات من شطر الجلوكوزيل ، وكربون ميثوكسي واحد ، وعشرة كربون غير بروتونيالكربون ، بما في ذلك اثنين من الكربونيل الكربوني المقابل لل kaempferol ، feruloyl ،ومجموعات الجلوكوز. على وجه الخصوص ، إشارات الكربون من C -200 إلى C -600 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 و 62.5) يشير إلى وجود جزء جلوكوز. مواقع جزء الجلوكوزومجموعة feruloyl تم تعيينها بواسطة ارتباطات HMBC طويلة المدى بين H -100 وC-3 (δC 134.8) و H -200 و -1000 (δC 168.4) (الشكل S14). موقف إضافيتم تحديد مجموعة الميثوكسي من خلال الارتباط الرئيسي بين 3000 -أوك3 و -3000 (δC 149.4). النتائج أعلاه اقترحت هيكل المركب3 كـ kaempferol -3-O- - 2 "-فيرولويل جلوكوزيد. على حد علمنا ، مركب3 تم الإبلاغ عنه فقط باعتباره aنتاج التحلل المائي لـ 3-O- -(2-O-feruloyl) -جلوكوزيل -7، 40 -di-O - - جلوكوزيل كايمبفيرول, معزول عنAllium tuberosum[35]. لذلك ، فإن هيكل3 تم توضيحه على أنه جديدمركب طبيعي.

مُجَمَّع11 تم عزله كمسحوق أصفر. ال1بيانات H NMR (الشكل S19)عرض مجموعة من AA0 ب ب0 إشارات من النوع (δH 8.06 (2H, d, J {0}. 0 هرتز ، ارتفاع -20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {0}. 0 هرتز, H-30, H-50 )) في الحلقة B من kaempferol وإشارة القميص عندδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) لشق جالويل في المنطقة العطرية ، وهي إشارة مميزةمن الفلافونول المخصص. إشارة بروتون شاذة (δH 5.78 (1H, d, J {0}. 0 هرتز ، ارتفاع -100 )) أشار إلى أن ارتباط الجليكوزيل كان-إعدادات. علاوة على ذلك ، downfieldإشارة بروتون محولة (5.27 (1H ، t ،J = 9. 5 هرتز ، ارتفاع -200 )) اقترح أن مجموعة galloylتم إرفاقه في مجموعة الهيدروكسيل من C -200 لأن هذا التحول يمكن أن يعزى إلىتأثير متباين الخواصO- شاردة غلويل [21]. ال13بيانات C NMR (الشكل S20)عرضت 26 صدى ، مما يشير إلى تخصيص جليكوسيد الفلافونول. إشارات الكربونمن ج -200 إلى C -600 (δC 71.1 و 72.7 و 68.2 و 76. 0 و 60.1) اقترحوا وجود الجالاكتوزشاردة. لذلك ، هيكل المركب11 تم التأكيد على أنه kaempferol -3-O- -200 - غالويل جالاكتوزيد. على الرغم من المركب11 كانت معزولة سابقًا عن مصادر مختلفة ،مشتملد. كاكي[21,36] ، فقط1تم الإبلاغ سابقًا عن بيانات H NMR و MS. هكذا،ال13تم الإبلاغ عن بيانات C NMR لأول مرة في هذه الدراسة

2.3 الأنشطة المضادة للأكسدة للمركبات المعزولة

تم تقييم جميع المركبات المعزولة لتأثيراتها المضادة للأكسدة باستخدام سريعخط تحليل HPLC-ABTS لتحديد المركبات التي تساهم في مضادات الأكسدةتأثير أوراق الكاكي. مجمعات سكنية4–8, 11, 13, 15، و16 أظهر مضادات الأكسدة القويةالأنشطة الفكرية (الشكل4). وكانت معظم هذه المركبات عبارة عن كايمبفيرول وكيرسيتينالمشتقات ، ولكن بعض المشتقات (1–3, 9, 10, 12، و14) لم تظهر الأنشطة. اللم يتم تحديد العلاقة بين البنية والنشاط بشكل كامل ولكن تم الكشف عنها جزئيًا. فيخاص ، كيرسيتين وكايمبفيرول مع شقوق جويلويل (7, 8, 11، و13) للديهم أنشطة قوية ، ولكن أولئك الذين لديهم شقوق الكومارويل أو الفيرولويل (1–3 و16) لمعرض أي أنشطة.

الشكل 4.أنشطة الكسح الجذري للمركبات المعزولة (4–8, 11, 13, 15، و16) تم تقييمها عبر الإنترنتفحص HPLC-ABTS.

2.4 التحليل الكمي للمركبات المعزولة

التحليل الكمي لجميع المركبات المعزولة في مستخلص EtOAc القابل للذوبانللتأكد من أن الآثار المضادة للأكسدة لأوراق البرسيمون يمكن أن تكون كذلكبسبب هذه المركبات النشطة. طريقة HPLC محددة مع كشف صفيف الصمام الثنائي وتم تطوير كاشف تشتت الضوء التبخيري من أجل التحديد المتزامنمن 27 مجمعا. كانت محتويات جميع ترايتيربينويدات المعزولة حوالي 5.9 في المائة منخلاصة ، ومن هؤلاء ، تلك من حمض سيارسينوليك (25) ، حمض الأولينوليك (26) و ursolicحمض (27) تمثل جزءًا كبيرًا ، كما ورد في الدراسات السابقة [7]. الكانت محتويات الفلافونويد حوالي 5.4 في المائة ، ومن هذه المركبات النشطةكانت 3.2 في المائة (الجدول2). على وجه الخصوص ، محتويات kaempferol -3-O- -200 - جلويل جالاكتوزيد(9) ، كايمبفيرول -3-O- -2 "- galloylglucoside (10) ، isoquercitrin (13) وكيرسيتين -3-O- -2"- جالويل جلوكوسيد (15) كانت أكثر من 0. 3 بالمائة. تم التحقق من الطريقة التحليلية باستخدامإجراء تحقق بسيط لضمان ملاءمة الطريقة ، والتي أظهرت أنها كافيةالخصوصية والخطية والدقة والدقة.

يطلب المزيد:

البريد الإلكتروني: wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950