التغييرات في نشاط مضادات الأكسدة أثناء تخمير الإنزيم

الفصل 4 التغييرات في نشاط مضادات الأكسدة أثناء تخمير الإنزيم

الفواكه غنية بالمواد المغذية وتأتي في العديد من الأصناف. إنتاج المواد أثناء التخمير معقد ومتنوع ، وهناك العديد من الدراسات علىنشاط مضادات الأكسدة. يستكشف الناس دائمًا ويكتشفون ، يبحثون عن الأطعمة المفيدةصحة الإنسان، لذلك أصبحت الإنزيمات موضوعًا ساخنًا في السنوات الأخيرة. تتمثل عملية إنتاج الإنزيم التقليدية في الحصول على الإنزيمات عن طريق التخمير الطبيعي للفواكه والخضروات. بناءً على الأبحاث السابقة ، تضيف هذه المقالة 4 بكتيريا التخمير المفيدة. هذه البكتيريا نفسها موجودة أيضا في الإنزيم. بعد الإضافة الإضافية للبكتيريا ، يتم تغيير عدد ونوع الكائنات الحية الدقيقة في عملية التخمير. ما هو تأثير هذا التغيير على نشاطه المضاد للأكسدة؟ في الفصل السابق ، أخذنا التفاح كمثال لتفسير مفصل. أظهرت مقارنة النشاط المضاد للأكسدة للمجموعة التجريبية والمجموعة الضابطة بتركيزات إنزيم مختلفة أن النشاط المضاد للأكسدة للإنزيم في المجموعة التجريبية كان أكبر من مجموعة التحكم. تعكس شدة نشاط مضادات الأكسدة أيضًا موثوقية الإنزيم بطريقة معينة.

الأعشاب الجديدة cistanche مع قوة مضادة للأكسدة قوية

 

خدمة داعمة لـ Wecistanche-أكبر مصدر Cistanche في الصين:
البريد الإلكتروني: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950

 

يضيف هذا الفصل الفواكه المشتركة للكمثرى والحمضيات إلى التجربة الأصلية ، ويتتبع ويكتشف التغييرات فينشاط مضادات الأكسدةأثناء التخمير. على أساس تقليل التكاليف ، من خلال التجارب ، نأمل أن تعكس بشكل شامل النشاط البيولوجي للإنزيمات بعد إضافة البكتيريا ، وتوفير أساس نظري معين ودعم بيانات لإنتاج الإنزيمات الميكروبية بy التلقيح الاصطناعي للسلالات.

 

 

 

4.1 المواد والطرق

4.1.1 المواد

(1) المواد التجريبية

اغسل التفاح الطازج والكمثرى والفواكه الحمضيات مع ماء معقم تحت ظروف معقمة ، وتجفيفها بشكل طبيعي على طاولة تشغيل معقمة ، وقشرها وشريحةها للاستخدام لاحقًا. يُضاف السكر الأبيض والفواكه إلى جرة زجاجية معقمة بنسبة الكتلة من 1: 1. قم بتنشيط البكتيريا المطلوبة للتجربة وتلقيحها في الإنزيم وفقًا للمخطط الأمثل (تم حذف خطوة العملية هذه لمجموعة التحكم) ، وقم بإغلاقها ووضعها في مكان بارد وجاف. خذ عينات في فترات زمنية مختلفة من التخمير في درجة حرارة الغرفة للحصول على جميع السائل الإنزيم الذي يحتوي على لب الفاكهة ، وتصفيةه. خذ طافًا كعينة تجريبية ، واستخدمه لقياس البيانات ذات الصلة بعد الطرد المركزي في 10 ، {3}} rpm في جهاز طرد مركزي عالي السرعة لمدة 15 دقيقة. تجدر الإشارة إلى أنه في عملية صنع الإنزيمات ، من أجل تجنب التلوث غير الضروري ، يتم تنفيذ جميع عملياتنا في ظل ظروف معقمة.

(2) الأدوات الرئيسية

الأدوات المطلوبة للتجربة هي نفسها 3.1.1 (2).

 

4.1.2 الطرق

(1) التغييرات في إجمالي محتوى الفينول أثناء التخمير

تمت إضافة 450 ميكرولتر من محلول العينة بالماء المقطر لجعل المجلد 46 مل ، ثم تمت إضافة 1 مل من كاشف فولن فينول. تخلط جيدا وتفاعل لمدة 3 دقائق. ثم تمت إضافة 3 مل من 20 ٪ NACO3. اهتز الخليط في حمام ماء درجة حرارة ثابتة في 25 درجة لمدة 2 ساعة. تم استخدام الماء المقطر كعنصر تحكم فارغ. تم قياس الامتصاصية A في 760nm بواسطة مقياس الطيف. تم إجراء ثلاث نسخ متكررة لكل علاج. تم حساب إجمالي محتوى الفينول وفقًا لمعادلة المنحنى القياسية.

(2) التغييرات في تقليل الطاقة أثناء التخمير

أضف 45 0 ميكرولتر من العينة إلى 2.5 مل من المخزن المؤقت للفوسفات مع تركيز 0. (ث/ت) مع تركيز الكتلة 10 ٪ ، الطرد المركزي عند 3000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ، أخرج وارسم على الفور 2.5 مل من طاف إلى قارورة حجمية ، أضف 2.5 مل من الماء المقطر و 0.5 مل من كلوريد الحديديك (W/V) مع تركيز الكتلة 0.1 ٪. استخدم الماء المقطر كعنصر تحكم فارغ ، وقياس الامتصاصية A على طول موجة 700 نانومتر مع مقياس الطيف. أداء 3 مكررات لكل علاج. يتم تحديد قوة الحد من الطاقة بناءً على قيمة الامتصاص.

 

(3) التغييرات في قدرة الأنيون المتطرف على أنيون الفائق أثناء التخمير
ضع 4.5 مل من 0. {{1 0}} 5 mol/l ph 8.2 tris-hcl buffer في حمام ماء درجة حرارة ثابت وضبط درجة الحرارة إلى 25 درجة. بعد 20 دقيقة ، أضف 1 مل من محلول عينة الإنزيم و 0.4 مل من محلول البيروغالول مع تركيز مولي 25 مليمول/لتر. تخلط جيدا ووضع في حمام مائي 25 درجة لمدة 5 دقائق. أضف 1.0 مل من 8 مول/لتر HCL لإنهاء التفاعل. استخدم العازلة Tris-HCL كمرجع واستخدم مقياس الطيف لقياس الامتصاص A عند 299 نانومتر لحساب معدل الكسح. تستخدم مجموعة التحكم الفارغة 1 مل من المذيب بدلاً من العينة. يتم حساب معدل الكسح الجذري للأكسيد الفائق وفقًا للصيغة 4.1: معدل الكسح الجذري للأكسيد (٪)=(A 1- A2)/A1 × 100 (4.1) حيث: A1 هو امتصاص مجموعة التحكم الفارغة ؛ A2 هو امتصاص محلول عينة الإنزيم للمجموعة التجريبية.

 

(4) التغيرات في القدرة على الكسح الجذرية للهيدروكسيل أثناء التخمير

 

أضف الماء إلى محلول عينة 45 0 ميكرولتر إلى 2 مل ، ثم أضفه إلى 1.4 مل من بيروكسيد الهيدروجين مع تركيز الكتلة المولي من 6 مم/لتر ، ثم أضف 0.6 مل من ساليسيلات الصوديوم مع تركيز ميناء مولي من ميناء المزيج المتردد في الستار. 1H. الصفر مع الماء المقطر ، وقياس الامتصاصية A على طول موجة 562 نانومتر مع مقياس الطيف. تم إجراء ثلاث نسخ متكررة لكل علاج. تم حساب معدل الكسول الجذري للهيدروكسيل وفقًا للصيغة 4.2: معدل الكحول الجذري للهيدروكسيل (٪)=[(A 1- A2)/A1] × 100 (4.2) حيث: A1 هو متوسط ​​امتصاص الفارين ؛ A2 هو متوسط ​​امتصاص محلول العينة.

 

(5) التغيرات في قدرة الغطاء الجذري الحرة DPPH أثناء التخمير
نقل بدقة 2 مل من محلول عينة الإنزيم إلى قارورة حجمية 1 0 مل ، ثم أضف 2 مل من محلول مائي إيثانول DPPH 80 ٪ إلى القارورة الحجمية ، مع تركيز الكتلة المولي من 2 × 10-4 mol/l. تخلط جيدا واتركها في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. خذ محلول الإيثانول بنسبة 80 ٪ كمرجع وقياس امتصاص العينة بطول موجة يبلغ 517 نانومتر ، والذي يتم تسجيله كـ A1. مزيج 2 مل من محلول DPPH و 2 مل من محلول الإيثانول 80 ٪ ، وقياس امتصاصها في نفس الطول الموجي ، والتي يتم تسجيلها كـ A0. مزيج 2 مل من محلول الإنزيم و 2 مل من محلول الإيثانول 80 ٪ ، وقياس امتصاصها في نفس الطول الموجي ، والتي يتم تسجيلها كـ A2. تم إجراء ثلاث نسخ متكررة لكل علاج. احسب معدل الكسح الجذري الحرة DPPH وفقًا للصيغة 4.3:
DPPH Free Radical Scavenging Rate (٪) {{0}}} [1- (a 1- a2)/a 0] × 100 (4.3) حيث: A1 هو متوسط ​​امتصاص 2 ml DPPH 80 ٪ ethaous solution ؛ A2 هو امتصاص محلول إنزيم 2 مل ومحلول إيثانول 2 8 ملاب 80 ٪ ؛ A0 هو امتصاص محلول DPPH 2 مل ومحلول إيثانول 2 ملاب 20 ٪.

(6) التغييرات في ABTS Free Radical Scavengening القدرة أثناء التخمير
تم استكمال محلول عينة 8 ميكرولتر إلى 10 ميكرولتر مع عازلة الفوسفات (5 مليمول/لتر درجة الحموضة 7.4) ثم تم خلطها بالتساوي مع 10 مل من كبريتات البوتاسيوم ومحلول مختلط ABTs للتفاعل عند درجة حرارة التفاعل 30 درجة ووقت التفاعل 5 دقائق. صفر المحلول بالماء المقطر وقياس الامتصاص A على طول موجي يبلغ 734 نانومتر باستخدام مقياس الطيف. تم إجراء ثلاث نسخ متكررة لكل علاج. تم حساب معدل الكسح الجذري ABTS وفقًا للصيغة 4.4:
ABTS Free Radical Scavenging Rate (٪)=[(A 1- A2)/A1] × 100 (4.4) حيث: A1 هو امتصاص مجموعة التحكم الفارغة ؛ A2 هو امتصاص المجموعة التجريبية العينة.