يتم تنظيم النشاط التكميلي في اعتلال كبيبات C3 بواسطة بروتينات الانصهار IgG-factor H مع وبدون مجالات الاستهداف المناسبة

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

أليسا سي جيلمور ، ويوشون زانغ ، وإتش تيرينس كوك ، وديبورا ب. لافين ، وسوريش كاتي ، ويوانج 2 ، وكريستا كيه جونسون ، وسونغ كوون كيم² ، وماثيو سي بيكرينغ

مركز الأمراض الالتهابية ، إمبريال كوليدج لندن ، المملكة المتحدة ؛ و² ألكسيون فارماسيوتيكالز ، نيو هافن ، كونيتيكت ، الولايات المتحدة الأمريكية

C3 اعتلال كبيباتيتميز بتراكم مكمل C3 داخل الكبيبات. تشمل الأسباب ، على سبيل المثال لا الحصر ، التشوهات في العامل H ، المنظم السلبي الرئيسي للمسار البديل التكميلي. العامل H- عامل (Cfh - / -) الفئران تطور C3اعتلال كبيباتمع انخفاض مستويات البلازما C3. باستخدام هذا النموذج ، قمنا بتقييم فعالية اثنين من بروتينات الاندماج التي تحتوي على المجالات التنظيمية للمسار البديل للعامل H (FH 1-5)

مرتبط إما بالجلوبيولين المناعي للفأر غير المستهدف (IgG-FH 1-5) أو الجسم المضاد البيردين المضاد للفأر (Anti-P- FH 1-5). زاد كلا البروتينين من البلازما C3 وقللوا ترسب C3 الكبيبي إلى حد مكافئ ، مما يشير إلى أن الاستهداف المناسب لم يكن مطلوبًا لـ FH 1-5 لتغيير تنشيط C3 في البلازما أو الكبيبات. بعد إعطاء IgG-FH 1-5 ، ارتبطت مستويات C3 في البلازما مؤقتًا بالتغيرات في مستويات العامل B بينما ارتبطت مستويات C5 في البلازما بالتغيرات في مستويات البروبدين في البلازما. والجدير بالذكر أن الزيادات في البلازما

استمرت مستويات C5 والبروليدين لفترة أطول من الزيادات في C3 والعامل B. في Cfh - / - الفئران IgG-FH 1-5 قلل من إصابة الكلى أثناء التهاب الكلية الكلوي المتسارع في الدم. وهكذا ، تُظهر بياناتنا أن IgG-FH 1-5 أعاد نشاط المسار البديل المتداول وقلل ترسب الكبيبي C3 في الفئران Cfh وأن مستويات البرودين في البلازما هي علامة حساسة لنشاط C5 convertase في عامل H ciency. قد يكون بروتين FH المترافق مع الغلوبولين المناعي 1-5 ، من خلال فترة نصف عمر البلازما الطويلة نسبيًا ، علاجًا محتملاً لـ C3اعتلال كبيبات.

يمكن أن يساعد Cistanche في اعتلال كبيبات الكلى

بيان متعدية

C3 اعتلال كبيبات(C3G) هو مرض كلوي يتميز بتراكم غير طبيعي للمكملات C3 داخل الكبيبات وتلف الكبيبات. يرجع ذلك إلى التنشيط غير المنضبط للمسار البديل التكميلي. بروتينات الانصهار ، التي تتكون من المجالات الوظيفية لمنظم المسار البديل ، العامل H (FH) ، المرتبطة بجسم مضاد ، واستعادة التنظيم التكميلي ، وتقليل الكبيبات C3 في نموذج الماوس C3G. أدى اقتران الجسم المضاد غير المستهدف إلى نصف عمر بلازما بروتين اندماج طويل نسبيًا ، ويمكن استخدام هذا ، أو طرق الاقتران المماثلة ، لزيادة وظيفة FH في علاج C3G.

C3 اعتلال كبيبات(C3G) هو اضطراب كلوي تكميلي يتميز بكميات غير طبيعية من C3 داخل الكبيبات .1 يمكن أن يتطور إلى فشل كلوي وليس له علاج محدد. 2 يرتبط C3G بتنشيط غير طبيعي للمسار البديل التكميلي (AP). يؤدي تنشيط AP إلى إنتاج C3bBb (C3 convertase) ، وهو إنزيم يشق C3. بعد إضافة جزيء C3b آخر ، يمكن لمركب C3bBbC3b الناتج (C5 convertase) أن يشق المكمل C5. غير منضبط

يمكن أن يترافق تنشيط AP في C3G مع انخفاض في تعميم C3 و C5 والعامل B (FB) والبروليدين. تشمل أسباب التنشيط غير المنضبط لـ AP فقدان التغييرات الوظيفية في المنظمين التكميليين واكتساب تغييرات الوظيفة في المنشطات التكميلية .2 منظم AP السلبي الرئيسي هو العامل H (FH) ، ويرتبط ضعف FH في البشر والخنازير والفئران بـ C3G. 3 عامل التهاب كلوي C3 ، وهو جسم مضاد يعمل على استقرار AP C3 convertase متكررًا في C3G.4 C3 قد يؤدي العامل الكلوي C3 إلى انخفاض في C3 وحده (عامل التهاب كلوي C3 مستقل عن البيردين) أو تقليل في كل من C3 و C5 (مناسب- عامل التهاب الكلية C3 المعتمد) .5،6

على الرغم من أن التحديد السليم لم يحسن مستويات C3 في البلازما ، إلا أن مستويات C5 زادت ، مما يشير إلى أن البروفدين كان ضروريًا لنشاط C5 ولكن ليس C3 convertase.

أدت إدارة الفأر 10 أو FH11،12 البشري إلى Cfh - / - الفئران إلى تقليل تلطيخ الكبيبات C3 وزيادة مستويات C3 المنتشرة. التركيبات التي تحتوي فقط على المجالات التنظيمية والاستهدافية لـ FH (جزيئات FH المصغرة) هي أيضًا فعالة في هذا النموذج .13 تشتمل الأساليب الأخرى على البروتينات التي تستهدف مواقع التنشيط التكميلي. يتضمن ذلك TT30،14 وهو بروتين يحتوي على المجالات التنظيمية التكميلية لـ FH (FH 1-5) المرتبط بنطاقات الربط التكميلي للمستقبلات المكملة 2 ، وجزيئات FH المتجانسة ، و 15 جزيء FH صغير يحتوي على نطاقات ربط مكمل من البروتين المرتبط بعامل H 1.

نظرًا لأن الفائدة العلاجية لتثبيط تنشيط C3 التكميلي قيد التحقيق في C3G ، 2 فمن المهم فهم حركية ترسب الكبيبات C3 وعلاقتها بتنشيط AP داخل كل من الكبيبات والدورة الدموية. في نماذج التهاب كبيبات الكلى المناعي بوساطة معقدة ، تم تطهير C3c الكبيبي في غضون 24 ساعة من منع تنشيط المكمل ، في حين استمر C3d الكبيبي لأسابيع .16 وبالمثل ، في Cfh - / - الفئران ، ينتج FH الخارجي انخفاض في تلطيخ الكبيبات C3c في 24 ساعة ، في حين ظل الكبيبي C3d دون تغيير

في هذه الدراسة ، قمنا بالتحقيق في فعالية 2 من بروتينات الاندماج الجديدة مع نشاط تنظيمي مكمل في نموذج Cfh - / - Mouse لـ C3G. احتوت البروتينات على المجالات التنظيمية للفأر FH (FH 1-5) ، والذي تم اقترانه بالفأر Ig لإطالة عمر النصف البيولوجي. تم ربط أحد بروتينات الاندماج ، المسمى IgG-FH 1-5 ، بجسم مضاد أحادي النسيلة لفأر غير مستهدف. أما الآخر ، الذي يطلق عليه anti-P-FH 1-5 ، فقد تم اقترانه بجسم مضاد أحادي النسيلة للفأر المناسب. تم إجراء ذلك لاختبار الفرضية القائلة بأن استهداف بروتين الاندماج هذا إلى مواقع تنشيط المكمل ، من خلال التفاعل مع ترسيب سليمدين ، من شأنه أن يعزز تنظيم الأنسجة التكميلية. توضح بياناتنا أن كلا من البروتينات غير المستهدفة (IgG-FH 1-5) والاستهداف المناسب (anti-P-FH 1-5) استعادت تنظيم C3 الكبيبي والبلازما في Cfh - / - الفئران. أظهرت دراسات Timecourse أن استعادة مستويات C3 و FB تعكس مستويات بروتينات الاندماج في الدورة الدموية. في المقابل ، استمرت الزيادات في البلازما C5 بعد إزالة بروتينات الاندماج من الدورة الدموية. لقد أظهرنا أن IgG-FH 1-5 خفف من إصابة الكبيبات أثناء التهاب الكلية الكلوي في الدم المتسارع في الفئران Cfh - / -.

يمكن علاج أمراض الكلى وتحسين وظائف الكلى

النتائج

إنشاء بروتينات الاندماج وتقييم النشاط في المختبر وفي الجسم الحي لبروتينات الاندماج عن طريق ربط أول 5 نطاقات تكرار إجماع قصير (SCR) لفأر FH (FH 1-5) إما بجسم مضاد مناسب للفأر (مضاد). -P-FH 1-5) أو جسم مضاد بنطاق Ig غير مستهدف (IgG-FH 1- 5 ، الشكل التكميلي S1). تم تقييم نشاط البروتينات باستخدام مقايسة انحلال الدم الخاصة بـ AP (الشكل 1 أ). مثبط Anti-P-FH 1-5 و IgG-FH 1-5 انحلال الدم بطريقة تعتمد على الجرعة مع فعالية أكبر لمضادات P-FH 1-5. كما أن مضادات البروبولين (anti-P) قللت من انحلال الدم بطريقة تعتمد على الجرعة ، لكن التحكم في IgG لم يكن له أي تأثير. بعد الحقن المتكافئ للبروتينات في الفئران Cfh - / - ، كان بروتين IgG-FH 1-5 قابلاً للاكتشاف لمدة تصل إلى 11 يومًا بعد الحقن ، في حين أن مضاد P- FH 1-5 كان قابلاً للاكتشاف لمدة تصل إلى 4 أيام بعد الحقن (الشكل التكميلي S2). لتحديد ما إذا كان IgG- FH 1-5 ومضاد P-FH 1-5 يمكنهما استعادة تنظيم AP البلازما في Cfh - / - الفئران ، قمنا أولاً بقياس مستويات C3 في البلازما بعد حقن بروتينات الاندماج (الشكل 1 ب) . أدى إعطاء أي من IgG-FH 1-5 أو مضاد P-FH 1-5 إلى زيادة ملحوظة في البلازما C3 في غضون 24 ساعة ، وبدرجة أقل ، بعد 96 ساعة من الحقن (الشكل 1 ب). أظهرت هذه البيانات أن كلاً من IgG-FH 1-5 ومكافحة P- FH 1-5 يمكنهما استعادة تنظيم AP البلازما مؤقتًا في الفئران Cfh - / -. أجرينا بعد ذلك تحليلاً مفصلاً لهذه التغييرات من خلال وصف المسار الزمني للتغيرات ليس فقط في البلازما C3 ولكن أيضًا في البلازما C5 وبروتينات المسار البديل FB و Properdin. تستمر الزيادات في مستويات C5 والبروليدين المنتشرة لفترة أطول من الزيادات في C3 و FB بعد إعطاء IgG-FH 1-5 ومضاد P-FH 1-5 في Cfh - / - الفئران

لقد قارنا حركية التغييرات في C3 و C5 و FB و السليم عن طريق قياس البروتينات على فترات تصل إلى 27 يومًا بعد حقنة واحدة إما من IgG-FH 1-5 أو مضاد لـ P-FH 1-5 ( الشكل 2). بعد إعطاء IgG-FH 1-5 ، حدثت ذروة الارتفاع في C3 ، C5 ، FB ، وبروليمين في اليوم الأول بعد الحقن. اختلف وقت انخفاض هذه التغييرات إلى مستويات ما قبل العلاج. حدثت العودة إلى مستويات المعالجة المسبقة بين اليومين 1 و 4 لـ FB ، وبين اليومين 7 و 11 لـ C3 ، وبين اليومين 14 و 21 لكل من Propdin و C5 (الشكل 2 أ ، ج ، هـ ، ز). بعد إعطاء مضاد P-FH 1-5 ، حدثت ذروة مستويات C3 في اليوم الأول ولكنها انخفضت إلى مستويات المعالجة بين اليومين الرابع والسابع (الشكل 2 ب). حدثت مستويات الذروة C5 في اليوم 4 وعادت إلى مستويات المعالجة بين الأيام 7 و 11 يومًا (الشكل 2 د). حدث ارتفاع الذروة في FB في اليوم الأول وانخفض إلى مستويات المعالجة بين اليومين 1 و 4 (الشكل 2f). كما هو متوقع ، تم استنفاد بروليدين البلازما الحرة بعد حقن مضاد P-FH 1-5 أو مضاد P (الشكل 2 ح). ظلت مستويات البروبدين في البلازما المجانية منخفضة لمدة تصل إلى 7 أيام بعد مضاد P-FH 1-5 وحتى 14 يومًا بعد مضاد P (الشكل 2 ح). على الرغم من أن كلا من بروتينات الاندماج استعادتا تنظيم AP البلازما مؤقتًا ، إلا أن مدة التحسين في مستويات C3 و FB و C5 عكست مدة اكتشافهما في البلازما ، والتي كانت أقصر بالنسبة لمضاد P-FH 1-5 (الشكل التكميلي S2) . باختصار ، كانت التغييرات في مستويات C3 و FB بعد حقن أي من البروتينات أقصر من تلك الموجودة في C5 و Properdin. تشير هذه البيانات إلى أن البلازما FB هي علامة حساسة لنشاط C3 convertase في هذا الإعداد ، في حين أن Propdin هو علامة على نشاط C5 convertase. والجدير بالذكر أنه بعد الحقن بمضادات P ، كان هناك ارتفاع في C5 عند 24 و 96 ساعة واليوم السابع

الشكل 1|(أ) تكملة مقايسة انحلال الدم البديلة المعتمدة على المسار. تمت معايرة الأجسام المضادة في 2- تخفيف أضعاف من 6 0 نانومتر حتى 0. 5 نانومتر. خفضت الكواشف IgG-FH 1-5 ومضادات P-FH 1-5 ومضادات P انحلال الدم في الأرانب بطريقة تعتمد على الجرعة. لم يتم استخدام أي تثبيط لبروتين التحكم في IgG. تشير الأشرطة الأفقية إلى القيم المتوسطة ، وتمثل أشرطة الخطأ SD. (ب) مكمل البلازما C3 في Cfh - / - الفئران بعد حقن بروتينات الاندماج. تم قياس البلازما C3 قبل و 24 ساعة و 96 ساعة بعد إعطاء IgG-FH 1-5 (مثلثات حمراء ، n ¼ 5) Anti – P – FH 1-5 (مثلثات أرجوانية ، n ¼ 6) ، مضاد -P (النقاط الخضراء ، n ¼ 5) ، والتحكم في IgG (النقاط الزرقاء ، n ¼ 5). تشير الأشرطة الأفقية إلى القيم المتوسطة ، بينما تشير الشعيرات إلى SD. *** P # 0.001 مقابل قيمة المعالجة المسبقة والمشتقة من 2- way ANOVA مع اختبار Bonferroni للمقارنات المتعددة. FH ، العامل H ؛ ف ، بروليدين.

(الشكل 2 د). كما ورد ذكره ، يشير 8،9 إلى أن C5 convertase يعتمد على البيردين في Cfh - / - الفئران.

قلل IgG-FH 1-5 ومضاد P-FH 1-5 الكبيبي C3c ولكنه لم يغير تلطيخ C3d في الفئران Cfh - / -

قمنا بعد ذلك بتقييم تأثير IgG-FH 1-5 ومضاد P-FH 1-5 على البروتينات الكبيبية C3b / iC3b / C3c و C3d والبروتين والبروتينات المرتبطة بـ FH (FHR). في 96 ساعة بعد حقن IgG- FH 1-5 ، تم تقليل تلطيخ الكبيبي C3b / iC3b / C3c ولكن لم يكن تلطيخ الكبيبي C3d (الشكل 3 أ) وتلطيخ FHR (الشكل 3 ب). بقي الكبيبي C3b / iC3b / C3c دون تغيير مع أي من IgG-control أو anti-P. ظل النمط الخطي غير الطبيعي لتلوين البروليدين الكبيبي في الفئران Cfh غير المعالجة بعد 96 ساعة من التحكم في IgG. في الفئران Cfh - / - التي تم حقنها إما بمضاد P أو IgG-FH 1-5 ، كان مستوى البروليدين الكبيبي غير قابل للكشف تقريبًا في 96 ساعة (الشكل 3 ب). بشكل غير متوقع ، أدى الحقن المضاد لـ P-FH 1-5 إلى نمط تلطيخ حبيبي حبيبي باستخدام أجسام مضادة مضادة للسكر ، ومضادة لـ FH / FHR ، ومضادة لـ IgG (الشكل 3 ب). هذا الاستنتاج يشير إلى أن البروتين المضاد لـ P-FH 1-5 كان يترسب في الكبيبات. أدى حقن البروتين المضاد لـ P-FH 1-5 في الفئران من النوع البري إلى تلطيخ الكبيبات بأجسام مضادة مضادة للسكر ، ومضادة لـ FH / FHR ، ومضادة لـ IgG في 96 ساعة (الشكل التكميلي S3) ، مما يشير إلى أن هذا يتفاعل الكاشف مع الكبيبات الطبيعية. ومع ذلك ، فقد توقعنا أن البروتين المضاد لـ P-FH 1-5 يمكن أن يتفاعل أيضًا مع البروتين الكبيبي الموجود مسبقًا في Cfh - / - الفئران. عندما قمنا بحقن الكاشف في Cfh - / - الفئران التي تم معالجتها مسبقًا بمضاد P لإزالة البروتين الكبيبي ، كان هناك انخفاض في أنماط تلطيخ الحبيبات باستخدام مضادات البيرولين ، ومضاد FH / FHR ، والأجسام المضادة لـ IgG ( الشكل التكميلي S4). تشير هذه الملاحظات إلى أن التفاعل الكبيبي للبروتين المضاد لـ P-FH 1-5 في الفئران Cfh - / - يعتمد جزئيًا على بروتين الكبيبات.

IgG-FH 1-5 تحسن الإصابة الكلوية أثناء التهاب الكلية الكلوي في الدم المتسارع في Cfh - / - الفئران

في المرضى الذين يعانون من C3G ، يمكن أن تتطور الإصابة الكلوية الحادة في سياق العدوى المتداخلة. على سبيل المثال ، يرتبط فقدان الوظيفة الكلوية في اعتلال الكلية FHR5 بنوبات بيلة دموية عيانية البلعوم. لنمذجة هذا ، تسببنا في التهاب الكلية الكلوي في الدم المتسارع ، وهو مركب مناعي

الشكل 2|دورة تدريبية مكملة للبلازما الوقت في Cfh - / - الفئران المحقونة بـ IgG-FH 1-5 ومضاد P-FH 1-5. Plasma C3 (a، b)، C5 (c، d)، FB (e، f)، and perfdin (P؛ g، h) من البداية التجريبية حتى 27 يومًا بعد الحقن الفردي لـ IgG-FH {{1 {{21) }}}} (أ ، ج ، هـ ، ز ؛ مثلثات حمراء ، n ¼ 5) أو ضد P- FH 1-5 (ب ، د ، و ، ح ؛ مثلثات أرجوانية ، ن ¼ 6). تضمنت الضوابط المضادة لـ P (النقاط الخضراء ، n ¼ 5) والجسم المضاد أحادي النسيلة المتطابق النظير (IgG- التحكم ؛ النقاط الزرقاء ، n 5). تشير الأشرطة الأفقية إلى القيم المتوسطة ، بينما تشير الشعيرات إلى SD. * P # 0. 0 5، ** P # 0.01، *** P # 0.001 مقابل قيمة المعالجة المسبقة والمستمدة من 2- تحليل طريقة التباين مع اختبار Bonferroni للمقارنات المتعددة. FB ، العامل ب ؛ FH ، العامل H.

نموذج التهاب كبيبات الكلى الذي يتضمن مسارات مكملة ومستقبلات Fc بوساطة ، 18،19 في Cfh - / - الفئران. لقد أظهرنا سابقًا أن الفئران Cfh - / - شديدة الحساسية للإصابة الكلوية في هذا الإعداد 7 وافترضنا أن بروتين FH 1-5 ، من خلال تعزيز تنظيم AP ، يمكن أن يحسن الإصابة الكلوية التكميلية في هذا النموذج. نظرًا لأن بياناتنا أشارت إلى أن البروتين المضاد لـ P-FH 1-5 قد ترسب في الكبيبات الطبيعية ، فقد استخدمنا IgG-FH 1-5 أثناء التهاب الكلية المتسارع في الدم. قبل أربع وعشرين ساعة من حقن المصل الكلوي للأغنام ، تلقت الفئران حقنة IP إما من IgG-control (n ¼ 7) أو IgG-FH 1-5 (n 8). تم توضيح البروتوكول التجريبي في الشكل 4 أ. تم إعدام الفئران بعد 6 أيام من إعطاء مصل الأغنام السام للكلية. كانت جميع المقاييس النسيجية الثلاثة لعلم أمراض الكبيبات (درجة الخطورة ، إجمالي عدد الخلايا ، وعدد البلاعم) أقل بشكل ملحوظ في مجموعة IgG-FH 1-5 (الشكل 4 ب). كانت الإصابة الأنبوبية الخلوية أيضًا أقل في مجموعة IgG-FH 1-5 (الشكل 4 ب). تم رفع اليوريا في الدم بشكل ملحوظ

الشكل 3|التلوين المناعي المكمل الكبيبي في الفئران Cfh - / - بعد 96 ساعة من حقن أي من IgG-FH 1-5 أو مضاد P-FH 1-5. (أ) الصور التمثيلية جنبًا إلى جنب مع التحديد الكمي للكبيبي C3b / iC3b / C3c و C3d في المجموعات التجريبية الأربع: IgG-FH 1-5 (مثلثات حمراء ، n ¼ 5) ، مضاد لـ P-FH 1-5 (مثلثات أرجوانية ، ن ¼ 6) ، وضد P (النقاط الخضراء ، ن ¼ 5) ، والتحكم في العناصر (النقاط الزرقاء ، ن ¼ 5). (ب) تمثل نقاط البيانات القيم المتوسطة ، وتشير الشعيرات إلى نطاق بين الشرائح الربعية. قيم P مشتقة من اختبار Kruskal-Wallis مع اختبار مقارنات دن المتعددة. (ب) الصور التمثيلية للكتل IgG ، FHR ، وتلطيخ في 4 مجموعات تجريبية. بار 100 مم ، وحدة تكثيف الدم ، وحدات تعسفية ، uorescent ؛ FH ، العامل H ؛ ف ، بروليدين. لتحسين عرض هذه الصورة ، يرجى الاطلاع على النسخة الموجودة على الإنترنت من هذه المقالة علىwww.kidney-international.org.

المجموعة الضابطة IgG ، لكن التغييرات في ألبومين المصل ونسبة البول الزلال إلى الكرياتينين لم تختلف (الشكل 4 ب). كما هو متوقع ، تم تقليل الكبيبات C3b / iC3b / C3c بشكل كبير في مجموعة IgG-FH 1-5 (الشكل 4 ب) ، لكن الماوس الكبيبي IgG (الشكل 4 ب) والأغنام IgG (البيانات غير معروضة) لم تختلف بين المجموعات .

الشكل 4|المعالجة المسبقة بـ IgG-FH 1-5 تحسن الإصابة الكلوية أثناء التهاب الكلية الكلوي في الدم المتسارع في Cfh - / - الفئران. (أ) رسم تخطيطي لبروتوكول التهاب الكلية الكلوي في الدم المعجل. تلقت الفئران التي تم تحصينها مسبقًا مع الأغنام IgG إما IgG-FH 1-5 (مجموعة العلاج ، ن ¼ 8) أو التحكم في IgG (مجموعة التحكم ، ن ¼ 7) قبل 24 ساعة من إعطاء مصل الأغنام السام للكلية. (ب) وظيفة الكلى والأنسجة بعد 6 أيام من تحريض التهاب الكلية الكلوي في الدم المتسارع في الفئران التي عولجت إما بـ IgG-FH 1-5 (علاج ؛ مثلثات حمراء ، n ¼ 8) أو تحكم IgG (تحكم ؛ دوائر زرقاء ، n ¼ 7). تشير الأشرطة الأفقية إلى القيم المتوسطة ، بينما تشير الشعيرات إلى نطاق بين الشرائح الربعية. * P # 0. 0 5، ** P # 0. 01، *** P # 0.001 مقابل مجموعة التحكم ومشتقة من اختبار Mann-Whitney. FH ، العامل H ؛ ف ، بروليدين.

نقاش

تم ضبط مستويات كل من IgG-FH 1-5 ومقاومة P-FH 1-5 لمستويات C3 و FB و C5 في Cfh - / - الفئران. تتوافق هذه النتيجة مع حقيقة أن المجالات التنظيمية التكميلية للماوس FH تقع داخل مجالات SCR من 1 إلى 5 (موقع ربط C3b ونشاط العامل المساعد لانقسام العامل I- بوساطة C3b) .20 مجالات التعرف على السطح ، والتي تأثير الارتباط بالخلايا البطانية والهيبارين ويتضمن موقعًا ثانيًا لربط C3b ، موجود داخل مجالات SCR 18 من خلال

20 (FH 18-20) وبالتالي فهي غير موجودة في بروتينات الاندماج. تتوافق هذه النتائج مع البيانات السابقة التي توضح أن الفئران Cfh - / - التي تعبر عن بروتين FH متحور يتكون من نطاقات SCR من 1 إلى 15 (Cfh - / - .FHD 16-20) لم تتطور إلى ترسب الكبيبات C3 غير الطبيعي. ومع ذلك ، فإن Cfh - / -. FH D 16-20 كانت الحيوانات غير قادرة على تنظيم تنشيط C3 على طول البطانة الكلوية وتطور اعتلال الأوعية الدقيقة الخثاري. من المحتمل أنه نظرًا لعدم وجود سطح مستهدف لنطاقات FH 18-20 ، فإن إعطاء بروتينات الاندماج التي تحتوي على FH 1-5 في ضعف FH يمكن أن يؤدي إلى التعرض لاعتلال الأوعية الدقيقة التخثري. من الممكن أيضًا أن تكون الرغبة المتزايدة في ربط C3b ، في ظل البنية القاتمة لبروتينات الاندماج ، كافية للتعويض عن عدم وجود نطاقات استهداف السطح 18-20. ومع ذلك ، فإن التعرف على السطح لـ C3b يتأثر أيضًا بالتغيرات التوافقية في FH.23 A Streptococcus pneumoniae بروتين رابط FH (PspCN ، الذي يربط مجال SCR 9) ، يؤدي إلى تغيير توافق FH ، وقد زاد مجمع FH-PspCN من ربط C3b و تعزيز نشاط تسريع الاضمحلال. لا يتم عرض موقع ربط FH20 C3d في FH ولكنه يتعرض في مجمع FH- PspCN. قد يفسر هذا سبب تفاعل FH 19-20 مع C3d السطحي ولكن FH لا. 24،25 نتوقع أن وكلائنا ، من خلال التغييرات التوافقية ، قد يتفاعلون بشكل فعال مع كل من الطور المائع والسطح C3b. والجدير بالذكر أن كلاً من IgG-FH 1-5 ومضاد P-FH 1-5 يحمي كريات الدم الحمراء من التحلل في اختبار انحلال الدم المعتمد على AP.

لم يقلل أي من بروتين الاندماج من تلطيخ الكبيبات C3d ، ربما بسبب الطبيعة المستمرة للكبيبي C3d. في التهاب الكلية المناعي المعقد التجريبي ، تم حل C3c الكبيبي في غضون 24 ساعة من توقف تنشيط المكمل ولكن استمر C3d لأسابيع .16 بالإضافة إلى ذلك ، يظل C3d الكبيبي ثابتًا في التهاب الكلية الذئبي. أظهرت الحقن المتكررة لـ FH البشري في Cfh - / - الفئران انخفاضًا في C3d الكبيبي على مدار 10 أيام. 11 من المحتمل أن الجرعات المتكررة من IgG-FH 1-5 قد تقلل C3d الكبيبي في هذا النموذج. لم يكن هناك أي تغيير في تلطيخ الكبيبات. لا يُعرف سوى القليل عن وظائف بروتينات FHR للفأر ، ولكنها يمكن أن تتفاعل مع كل من C3b27 و 28 و C3d. نتوقع أن بروتينات FHR الكبيبية من المحتمل أن تتخلص من الكبيبات فقط عند إزالة C3d. في هذا السياق ، من الملاحظ أنه في C3G البشري ، يرتبط البروتين 5 المرتبط بعامل H مع الكبيبات C3d.

البروتين المضاد لـ P-FH 1-5 يستنفد مستويات البلازما الحرة بالبلازما كما هو متوقع لأن الجزء المضاد للبروتين من بروتين الاندماج هذا يمكن أن يعيق نشاط AP (بسبب استنفاد propdin) لمدة 8 أيام بعد حقنة واحدة. أظهرت بياناتنا أن فعالية FH 1-5 في زيادة مستويات البلازما C3 وتقليل تلطيخ الكبيبات C3b / iC3b / C3c كانت قابلة للمقارنة بين بروتيني الاندماج (أي كان مستقلاً عن الاستهداف المناسب). علاوة على ذلك ، تم تقليل تلطيخ البروليدين الكبيبي غير الطبيعي بشكل ملحوظ بعد تناول مضاد P أو IgG-FH 1-5. من الواضح ، على عكس بروتينات C3d و FHR ، أن البروتين الكبيبي يتم إزالته بسهولة بعد استعادة تنظيم C3. تغير النمط الكبيبي البيردين بعد إعطاء البروتين المضاد لـ P-FH 1-5 ، ولكن هذا الأمر كان معقدًا من خلال ملاحظة أننا اكتشفنا ترسب بروتين الاندماج في كل من Cfh - / - والكبيبات من النوع البري. كان هذا جزئيًا بسبب التفاعل مع البروتين الكبيبي ، لكن الترسب في الكبيبات البرية يشير إلى أنه كان أيضًا يعتمد جزئيًا كليًا على المكمل الكبيبي ومن المحتمل أنه مرتبط بالخصائص الفيزيائية والكيميائية لبروتين الاندماج.

أظهرت بياناتنا الحركية نتائج جديدة تتعلق بالتغيرات الزمنية في FB و C5 والبروليدين المصاحبة للزيادات في C3 في Cfh - / - الفئران بعد حقن بروتينات الاندماج. ارتفعت مستويات FB بسرعة بعد الحقن

وعاد إلى مستويات خط الأساس في وقت ظل فيه كلا من مستويات C5 وبروليدين مرتفعة. تم تقليل المستويات المناسبة في Cfh - / - الفئران عند خط الأساس وزادت إلى المستويات الطبيعية (20 مجم / مل) بعد حقن IgG-FH 1-5 وظلت عند هذه المستويات لمدة 14 يومًا على الأقل. شوهدت دورة زمنية مماثلة لارتفاع مستويات البلازما C5. اللافت للنظر أن IgG-FH 1-5 كان غائبًا في الغالب عن الدورة الدموية في 11 يومًا ، مما يشير إلى أن تكوين C5 convertase في Cfh - / - الفئران أبطأ من C3 convertase (لأن مستويات C3 عادت إلى خط الأساس بين 7 و 11 يومًا). زادت البلازما C5 بعد العلاج بمضادات P وزادت أيضًا مع البروتين المضاد لـ P-FH 1-5. ومن ثم ، كان كل من استهداف السليم وتأثيرات FH 1-5 يسهمان في زيادة مستويات C5 ويشيران إلى أن C5 convertase جزئيًا يعتمد على السليم في Cfh - / - الفئران. تتوافق هذه النتائج مع تحسين خلل التنظيم C5 في الفئران مع الكفاءة المشتركة لـ FH و السليم. يمكن تقليل مستويات البيردين المتداولة في C3G ويبدو أنها مرتبطة بنشاط المحول C5 السطحي على النقيض من البلازما C5 أو C5b القابل للذوبان { {30}}. 31،32 تدعم بياناتنا ارتباطًا وثيقًا بين مستويات Propdin ونشاط C5 convertase وتدعم استخدام مستويات البيردين كمؤشر حيوي للتنشيط الكبيبي المستمر لـ C5.

والجدير بالذكر أن بروتين IgG-FH 1-5 لا يزال قابلاً للاكتشاف في الدورة الدموية حتى 11 يومًا بعد حقنة واحدة. هذا أطول بكثير مما ذكرناه سابقًا بالنسبة لبروتين FH 1-5 الفأر غير المقترن ، والذي تمت إزالته من الدورة الدموية في غضون 24 ساعة .14 تشير هذه النتيجة إلى أن عمر نصف البلازما الأطول لـ IgG-FH { {9}} البروتين مشتق من اقتران الجسم المضاد. كان نصف عمر البلازما لبروتين IgG-FH 1-5 أطول أيضًا مما لاحظناه سابقًا بالنسبة إلى FH كامل الطول .10،11 على سبيل المثال ، تمت إزالة FH البشري من الدورة الدموية بمقدار 96 ساعة بعد حقنة واحدة في الفئران Cfh - / - .11 جنبًا إلى جنب مع بياناتنا التي توضح فعالية بروتين IgG-FH 1-5 في التنظيم التكميلي ، فإننا نعتبر أن اقتران بروتين FH 1-5 لإطالة أمد خصائصه الحركية الدوائية له إمكانات علاجية فائدة في C3G.

باختصار ، أوضحنا أنه على الرغم من الافتقار إلى مجالات التعرف على السطح ، كانت بروتينات الاندماج FH 1-5 فعالة في تقليل تنشيط الكبيبات C3 واستعادة تنظيم مكمل البلازما في كفاءة FH. لم تكن هناك ميزة واضحة في اقتران نطاقات FH 1-5 بمضاد البيردين ، كما أن بروتين IgG-FH 1-5 قلل من إصابة الكلى في التهاب الكلية التجريبي. على عكس التحديات في إنتاج مستحضرات واسعة النطاق من FH للاستخدام العلاجي ، فإن الإنتاج الواسع النطاق للعلاجات القائمة على الأجسام المضادة أمر راسخ ، مما يجعل IgG-FH 1-5 علاجًا محتملًا جذابًا لـ C3G.

طُرق

بروتينات الانصهار

IgG-FH 1-5. تم ربط نطاقات أول 5 ماوس FH SCR (mFH 1-5)

إلى IgG1 فأر غير مستهدف Ig (جسم مضاد مضاد للشيء يرتفع ضد جسم مضاد وحيد النسيلة للفأر).

مكافحة P-FH 1-5. Murine FH 1-5 مرتبط بالجسم المضاد للفأر المضاد للفأر (anti-P) ، 30 تم تقديمه إلى Alexion بواسطة W. Song ، جامعة بنسلفانيا).

ضوابط. كانت عناصر التحكم مطابقة للنمط المتماثل للماوس غير المستهدف Ig (التحكم في IgG) والماوس المضاد للسكر (مضاد لـ P) (الشكل التكميلي S1). تم إنشاء البروتينات باستخدام نواقل pVEK وخلايا Expi293 (Thermo Fisher Scienti c، Waltham، MA) ، تم تنقيتها باستخدام البروتين A (MabSelect SuRe، Cytiva، Marlborough، MA).

الفحص الانحلالي AP- محدد

تم تحضين عشرين بالمائة من مصل الفأر العادي الذي تمت معايرته من 6 0 نانومتر إلى 0.5 نانومتر مع كريات الدم الحمراء للأرانب (1. 5 106 خلايا / مل) عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. تم تعديل كمية إطلاق الهيم بالطيف الضوئي (الكثافة الضوئية 415 نانومتر) ؛ كان التحلل بنسبة 100 في المائة مصلًا بدون مثبط.

البلازما FB و FH

تم الحصول على البلازما بعد الطرد المركزي للدم الذي تم جمعه في أنابيب تحتوي على حمض إيثيلين ديامين رباعي الخليك (سارستيدت ، نوردراين- فيستفالن ، ألمانيا). تم قياس البروتينات بالمقايسة المناعية للرحلان الكهربي الشعري (WES ، بروتين سيمبلي ، سان خوسيه ، كاليفورنيا). كانت الأجسام المضادة المستخدمة هي الأجسام المضادة لـ FH المضادة للفئران (Alexion Pharmaceuticals ، بوسطن ، ماساتشوستس) والأجسام المضادة FB المضادة للفأر (Abcam ، كامبريدج ، المملكة المتحدة) ؛ تم استخدام وحدة WES المضادة للأرانب (ProteinSimple ، سان خوسيه ، كاليفورنيا). تم تحليل إشارات اللمعان الكيميائي باستخدام برنامج Compass for SW (ProteinSimple ، الإصدار 5. 0. 1) ، وتم تحديدها كمناطق ذروة ، وتم تطبيعها للتحكم في الفحص.

الفئران

تم إيواء جميع الفئران في ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض. تم تنفيذ الإجراءات وفقًا للإرشادات المؤسسية وتمت الموافقة عليها من قبل المكتب الرئيسي للمملكة المتحدة. تم شراء الفئران من النوع البري C57BL / 6 من مختبر جاكسون (بار هاربور ، ME) ، وتم إنشاء الفئران C57BL / 6 كما هو موصوف سابقًا. تم إعطاء جرعات متساوية من البروتينات عن طريق الحقن عبر بروتوكول الإنترنت (1 مجم لمضاد البيرولين والتحكم في IgG ؛ 1.4 مجم لـ IgG-FH 1-5 ومضاد P-FH 1-5). تم تحفيز التهاب الكلية الكلوي المتسارع في الدم عن طريق الحقن الوريدي لمصل الأغنام السام للكلية في الفئران المحصنة مسبقًا مع الأغنام IgG.7 تم إجراء إدارة بروتينات الاندماج قبل 24 ساعة من تحريض مصل الأغنام السام للكلية (الشكل 4 أ).

تم قياس مستويات C3 و C5 والبلازما C3 المجانية من خلال مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم. تم قياس 14 مستويات من البلازما "الخالية" من البيردين و C5 باستخدام المقايسات المناعية اللمعان الكهربائي (Meso Scale Discovery [MSD] ، Meso Scale Diagnostics ، Rockville ، MD) مع مضاد - البروبدين أو مضاد للفأر C5 مخصص مطلي على ألواح MSD عالية الارتباط. تم اكتشاف بروبولين "مجاني" و C5 مع مضاد البيردين (من دبليو سونغ) أو مضاد أحادي النسيلة حيوي C5 (أليكسيون) مع الستربتافيدين-سولفو (MSD ، تشخيصات الميزو مقياس). تم الحصول على إشارة الإشعاع الكيميائي باستخدام جهاز تصوير SECTOR S 6000 (MSD ، تشخيصات مقياس الميزو) وتم تحليلها باستخدام برنامج MSD Discovery Workbench (مقياس Meso

التشخيص ، الإصدار 4. 0. 12.1). تم استخدام الفأر المؤتلف السليم و C5 كمعايير.

وظائف الكلى والأنسجة

تم تقييم بيلة دموية وبروتينية باستخدام Hema-Combistix (باير ، ريدينج ، المملكة المتحدة) ؛ تم قياس اليوريا البلازمية ومعالجة أنسجة الكلى كما هو موضح سابقًا. 9 تم تحديد الكرياتينين البولي على عينات البول الموضعية باستخدام مقايسة بروتوكول رفيق الكرياتينين (# 1 0 12 ؛ إكسيل ، فيلادلفيا ، بنسلفانيا) ، وبقع البول / تم قياس ألبومين البلازما عن طريق مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (#E 99-134 ؛ Bethyl Laboratories ، Montgomery ، TX). تم تقييم أقسام الكلى المصبوغة بحمض الشيف بطريقة عمياء وتم تصنيفها وفقًا لشدة الإصابة الكبيبية والنبيبية الخلوية (0 [لا شيء] ، 1 [خفيف] ، 2 [معتدل]). تم تقييم عشرة كُبيبات في كل قسم لتحديد متوسط ​​عدد الخلايا الكبيبية. تم إجراء تلطيخ التألق المناعي على 5- مم تجميد مركب باستخدام وسط Vectashield مع DAPI (Vector Laboratories ، Burlingame ، CA). كانت الأجسام المضادة المستخدمة uoressein isothiocyanate (FITC)-الماعز متعدد النسيلة المضاد للماوس C3B/ C3C/ IC3B (1: 200 ؛ #55500 ؛ MP Biomedical ، Santa Ana ، CA) 9 ؛ تشيين-سلسلة-ماعز الماعز المتعدد الماعز المضاد للفأر IgG (1: 400 ؛ #F5387 ؛ Sigma-Aldrich ، سانت لويس ، MO) ؛ الفأر أحادي النسيلة المترافق من FITC ضد الماعز / الأغنام IgG (1: 100 ؛ # F5137 ؛ Sigma-Aldrich) ؛ أو ماعز مضاد للإنسان مترافق مع FITC (1:50؛ # GAHu / PPD / FITC، Nordic Immu- no logic Laboratories، Copenhagen، Denmark) .9 goat anti-mouse C3d (1:10؛ # BAF2655؛ R&D Systems ، تم استخدام مينيابوليس ، MN) على الأقسام المغطاة بالبيوتين (نظام حظر البيوتين ؛ Agilent Dako ، Santa Clara ، CA) ، مع الجسم المضاد الثانوي Streptavidin AF488 (1: 200 ؛ #S -32354 ؛ Thermo Fisher Scienti-c). تم تصوير FH في أقسام محجوبة CD16 / CD {52}} مضادة للفئران النقية (1: 100 ؛ BD Biosciences ، Franklin Lakes ، NJ) باستخدام الماعز ضد الإنسان FH (1: 1000 ؛ # A312 ؛ Quidel ، سان دييغو ، CA) والأجسام المضادة الثانوية IgG-FITC المضادة للماعز وحيدة النسيلة (1: 100 ؛ استنساخ GT -34 ؛ F4891 ؛ سيجما ألدريتش). تم تحديد الضامة الكبيبية باستخدام CD68 المضاد للفأر المترافق مع FITC (FA -11 استنساخ GTX43518 ؛ GeneTex ، Irvine ، CA). تم إجراء تحليل التألق المناعي الكمي باستخدام مجهر Leica DM4B البصري إلى جانب الكاميرا الرقمية Leica DFC700T (Leica Microsystems ، Wetzlar ، ألمانيا) وبرنامج Image-Pro Plus (Media Cybernetics ، Rockville ، MD ، الإصدار 7). تم فحص عشرة من الكبيبات في كل قسم ، وتم التعبير عن شدة المتوسط ​​في وحدات علمية تعسفية.

تحليل احصائي

GraphPad Prism ، الإصدار 8. تم استخدام 0 (GraphPad ، سان دييغو ، كاليفورنيا) للتحليل الإحصائي. تم استخدام 2- المقاييس المتكررة لتحليل التباين مع اختبار Bonferroni للمقارنات المتعددة (كانت العوامل هي الوقت والعلاج) لتحليل الدورة الزمنية. تم استخدام اختبار Kruskal- Wallis مع Dunn للمقارنات المتعددة عند مقارنة مجموعات متعددة ، وتم استخدام اختبار Mann-Whitney لمجموعتين.

إفشاء

تلقت MCP أتعاب استشارية من Alexion و ChemoCentryx و Novartis و Gyroscope و Achillion Pharmaceuticals. تلقت HTC رسومًا استشارية من Alexion و Novartis و Aurinia و Achillion Pharmaceuticals. YZ و YW و KKJ و SK-K موظفون في شركة Alexion Pharmaceuticals. SK موظف سابق في شركة Alexion Pharmaceuticals ويعمل حاليًا في شركة Gemini Pharmaceuticals. أعلن جميع المؤلفين الآخرين عدم تضارب المصالح.

شكر وتقدير

MCP هو زميل أقدم في Wellcome Trust في العلوم السريرية (مرجع المنحة 212252 / Z / 18 / Z) ، وتدعم هذه الزمالة ACG و DPL. تم تمويل YZ و SK و YW و KKJ و SK-K من قبل شركة Alexion Pharmaceuticals.

المواد التكميلية

ملف تكميلي (PDF)

الشكل S1. يحتوي Fusionproteinsusedinthisstudy.IgG-FH 1-5 على أول 5 نطاقات لعامل الماوس H (FH 1-5) المرتبط بفأر Ig غير مستهدف. يتكون Anti-P-FH 1-5 من mFH 1-5 المرتبط بجسم مضاد من مادة البيردين للفأر المعادل (anti-P ؛ راجع Miwa et al. 30). تضمنت بروتينات عناصر التحكم (IgG-control) الفأر غير المتطابق مع النمط المتماثل (IgG-control) والجسم المضاد المناسب للفأر المضاد للفأر (Anti-P). الشكل S2. تحليل لطخة WES لاكتشاف FH 1-5 في عينات البلازما المأخوذة من الفئران المريضة FH المحقونة إما بـ (A) IgG-FH 1-5 أو (B) Anti-P-FH 1-5. يمكن اكتشاف البروتين 94- kDaIgheavychainlinkedtomouseFH 1-5 (HC-FH 1-5) حتى 11 يومًا بعد حقن IgG-FH 1-5 وما يصل إلى 4 أيام بعد حقن P-FH 1-5 (مربعات حمراء) تتضمن السيطرة على البلازما من الفئران من النوع البري حيث يتم الكشف عن بروتين عامل الطول الكامل H (FH ، الصناديق السوداء ، الممر C1) والفئران غير المحقونة FH غير المحقونة ، حيث لا يكون FH واضحًا (الصناديق السوداء ، الممر C2 ،). كما هو متوقع ، لا يمكن اكتشاف FHnorFH 1-5 في عينات البلازما المأخوذة من الفئران المحقونة بمضاد P أو IgG-control.

الشكل S3. المكمل الكبيبي المناعي بعد 96 ساعة من حقن IgG-control أو anti-P-FH 1-5 في الفئران البرية. تظهر الصور الكبيبية التمثيلية (شريط 100 مم).

الشكل S4. دور البروفين في ترسيب مضاد P-FH 1-5 في الكبيبات للفئران المعينة من FH. تم حقن الفئران Cfh - / - إما بمضاد IgG أو مضاد P (العلاج 1) متبوعًا بـ 24- ساعات لاحقًا إما عن طريق التحكم في IgG أو مضاد P-FH 1-5 (العلاج 2). تم إعدام الحيوانات بعد 120 ساعة من العلاج وتم تقييم تلطيخ الكبيبات من أجل IgG ، وبروليدين ، و FH / FHR. يتم عرض الصور التمثيلية. انخفض الحقن المضاد لـ P بشكل ملحوظ (الصف 1 ، العمود 2) ولكن ليس FH / FHR (يبقى دون تغيير) أو IgG (لا يزال غائبًا) تلطيخ. أدت إدارة مضادات P- FH 1-5 24- بعد ساعات من التحكم في IgG إلى ظهور تلطيخ حبيبي مع مضادات IgG و FH / FHR والأجسام المضادة لـ P كما يظهر بعد حقن مضادات P-FH 1-5 فقط (انظر الشكل 3 ب). تم تقليل هذا التلوين الحبيبي عندما سبق الحقن المضاد لـ P-FH 1-5 بحقن مضاد لـ P ، والذي يستنفد كلاً من الدوران (انظر الشكل 1 ح) والكبيبي (انظر الشكل 3 ب). كان تلطيخ الكبيبات بمضاد IgG واضحًا فقط في الفئران التي تم حقنها بمضاد P-FH 1-5 (الصف 3 ، العمودين 3 و 4) وكان أقل بشكل ملحوظ في الفئران التي تلقت مضادًا لـ P-FH 1-5 مسبوقة بمضاد P. استنتجنا أن ترسيب مضاد P-FH 1-5 في الكبيبات في الفئران Cfh - / - كان يعتمد جزئيًا على البيردين. تشير الأشرطة الأفقية إلى القيم المتوسطة ، بينما تشير الشعيرات إلى النطاق بين الشرائح الربعية. تم اشتقاق القيمة P من اختبار Mann-Whitney. شريط ¼ 100 مم.

المراجع

1.FakhouriF، Frémeaux-Bacchi V، Noöl LH، et al C glomerulopathy∶ anew dassification. Nat Rev Nephrol.20106: 494-499.

2 SmithRH.AppeG8.BlomAMet aLC3gkomeripathy - فهم المرض الحقيقي النادر الذي يحركه المكمل. نات رينيفرول. 201915129-143

3. Pickering MC و Cook HT سلسلة مراجعات مصغرة متعدية حول العامل التكميلي H: أمراض الكلى المرتبطة بالعامل التكميلي H رؤى جديدة من البشر والحيوانات. Cin Exp Immunol.2008 ؛ 151: 210-230.

4. Daha MR Fearon DT Austen KF ، C3 عامل النكريت （C3NeF） استقرار الطور المائع والمسار البديل المرتبط بالخلية. J إمونول 1976 ؛ 116: 1-7.

5. Mollnes TE ، Ng YC ، Peters DK ، تأثير عامل كلوي وآخرون على C3 وعلى المسار النهائي للمكملات في الجسم الحي وفي المختبر. أوين إكس إمونول. 1986 ؛ 65: 73-79.

6. Nq YC، Peters DK. العامل الكلوي G3 (C3NeF): تفكك المرتبط بالخلية وتثبيت الطور السائل للمسار البديل C3 convertase. Cn Exp Imunol.19865: 450-457.

7. يتسبب تنشيط C3 غير المنضبط ، و Pickering MC ، و Cook HT ، و Warren J ، وآخرون في التهاب كبيبات الكلى التكاثر الغشائي في الفئران التي تعاني من نقص العامل التكميلي H. Nat Genert.2002: 31 ؛ 424-428.

8. Lesher AM ، Zhou L ، Kimura Y ، وآخرون. يؤدي الجمع بين طفرة العامل H ونقص البرودين إلى التهاب كبيبات الكلى C3 الشديد. J آم سوك نفرول. 2013 ؛ 24: 53-65.

9. Ruseva MM ، Veron KA ، Lesher AM ، et al. يؤدي فقدان البرودين إلى تفاقم اعتلال كبيبات C3 الناتج عن نقص العامل H. J آم سوك نفرول. 2013 ؛ 24: 43-52.

10. Paixao-Cavalcante D، Hanson S، Botto M، et al. يعمل العامل H على تسهيل إزالة iC3b المرتبط بـ GBM من خلال التحكم في تنشيط C3 في مرحلة السوائل. مول إمونول 2009 ، 46: 1942-1950.

11 فاخوري ف ، دي خورخي. Brune F، et al ينعكس العلاج بعامل التكملة البشرية H بسرعة ترسب المكمل الكلوي في الفئران التي تعاني من نقص العامل H. كلية الكلى 2010: 78: 279-286.

12. Michelfelder S، Parsons J، Bohlender Ll، et al Moss المنتجة بواسطة العامل البشري المحسن بالجليكوزيل H للتطبيق العلاجي في الاضطرابات التكميلية. JAm Soc Nephrol.201728: 1462-1474.

13. Nichols EM ، Barbour TD ، Pappworth Y ، et al يعمل جزيء عامل التكميل المصغر H الممتد على تحسين اعتلال كبيبات C3 التجريبي. الكلى Int. 201588: 1314-1322.

14. روسيفا إم إم ، بينج تي ، ليزر إم إيه ، وآخرون فعالية تثبيط التكميل المستهدف في اعتلال كبيبات C3 التجريبي. J آم سوك نفرول. 2016 ؛ 27: 405-416.

15. Yang Y ، Denton H ، Davies OR ، et al بناء عامل تكميلي هندسي لعلاج اعتلال كبيبات C3. J آم سوك نفرول. 2018 ؛ 29: 1649-1661.

16. Schulze M ، Pruchno CJ ، Burns M ، et alL يشير تحديد موقع الكبيبات C3 إلى تكوين رواسب مناعية مستمرة وتنشيط مكمل في التهاب كبيبات الكلى التجريبي. أنا J باتول. 1993: 142179-187.

17. Athanasiou Y، Voskarides K Gale DP، et al Familial C3 glomerulopathy المرتبط بطفرات CFHRS الخصائص السريرية لـ 91 مريضًا في 16 سلالة. CTn JAm Soc Nephrol.20116: 1436-1446.

18. Kaneko Y، Nimmer 动 hn F، Madaio MP، et al يتم تحديد علم الأمراض والحماية في التهاب الكلية السام للكلية عن طريق الارتباط الانتقائي لمستقبلات معينة من Fc. J Exp Med.2006 ؛ 203: 789-797.

19. شيرين إن إس ، سبرينجول تي ، كارول إم سي إت آل. الحماية من الغشاء القاعدي المضاد للكبيبات (التهاب الكلية الذي يتوسطه GBM في الفئران الناقصة C 3- و C 4-. C Exp Immunol. 1997 ؛ 110: 403-409.

20. Cheng ZZ Hellwae J ، Seeberger H et al. مقارنة بين التعرف على السطح وخصائص ربط C3b للماوس والعامل المكمل البشري H.Mol Immunol.2006 ؛ 43. 972-979.

21dp رو EG. Macor P.Paixao-Caakante D. et al يعتمد تطور متلازمة انحلال الدم اليوريمية النموذجية على مكمل C5.J Am Soc Nephrol.2011 ؛ 22: 137-145.

22.Pdkering MC ، de Jorge EG.Martinez-Barricarte Ry وآخرون متلازمة انحلال الدم الانحلالي العفوية الناتجة عن العامل التكميلي H الذي يفتقر إلى مجالات التعرف على السطح. J Exp Med.2007 ؛ 204: 1249-1256.

23 هربرت أ. Mike E، Chen ZAet aL التهرب من المكمل بوساطة تعزيز العامل H الملتقط: الآثار المترتبة على حماية الأسطح الذاتية من المكمل. 2015 ؛ 195: 4986-4998.

24. Goicoechea de Jorge E Caesar JJ، Malik TH، et al Dimerization من البروتينات المرتبطة بالعامل التكميلي H ينظم التنشيط التكميلي في. بروك Natl Acad Sci US A.2013 ؛ 110: 4685-4690.

25. شميدت سي كيو ، باي إتش لين زد ، وآخرون ، هندسة عقلانية لمثبط مناعي مصغر بخصائص فريدة ثلاثية الاستهداف. ياء إمونول. 2013 ؛ 190: 5712-5721.

26. ويلسون إتش آر ، ميدجيرا توماس إن آر ، جيلمور إيه سي ، وآخرون. مجمع هجوم الغشاء الكبيبي ليس علامة موثوقة لتفعيل C5 المستمر في التهاب الكلية الذئبي. الكلى Int. 2019. 95655-665.

27. Antonioli AH White J، Crawford F، et al. تعديل المسار البديل للمكمل بواسطة البروتينات المرتبطة بعامل الفئران H. ياء إمونول. 2018 ؛ 200: 316-326.

28. Cserhalmi M ، CsincsiALMezei Z ، وآخرون. يعزز البروتين FHR-B المرتبط بعامل الفئران H تنشيط المكمل. جهاز المناعة الأمامي .2018: 1145.

29. Medjeral-Thomas NR، Moffett H، Lomax-Browne HJ et al. العامل التكميلي الكبيبي المرتبط بالبروتين 5 (FHR5) منتشر بشكل كبير في اعتلال الكبيبات C3 ويرتبط بالاعتلال الكلوي Kdney Int Ren. 2019 ؛ 4: 1387-1400.

30. Miwa T ، Sato S ، Gullipalli D ، وآخرون ، حظر البيرولين ، المسار البديل ، ومستقبلات Anaphylatoxin يخفف من إصابة نقص التروية الكلوية - ضخه في عامل تسريع التسوس و CD59 الفئران ذات الضربة القاضية المزدوجة. ياء إمونول. 2013 ؛ 190: 3552-3559.

31. Corillo F ، Bravo Garcia-Morato M ، Nozal P ، وآخرون استهلاك المصل السليم كمؤشر حيوي لخلل تنظيم C5 convertase في اعتلال كبيبات C3. Clin Exp Immunol.2016 ؛ 184: 118-125 .8. Lesher AM ، Zhou L Kimura Y ، وآخرون. يؤدي الجمع بين طفرة العامل H ونقص البيردين إلى التهاب كبيبات الكلى C3 الشديد. JAm Soc Nephrol.2013؛ 2453-65.

32. zhang Y، Nester OM Martin B.et al تحديد ملف العلامات الحيوية المتممة لاعتلال كبيبات C3. Clin J Am Soc Nephvol.20149: 186-1882.