السكريات الخام من Cistanche Deserticola YC Ma كمنظم مناعي ومساعد

للمزيد يرجى الاتصالoscar.xiao@wecistanche.comللمزيد من

الملخص:Cistanche deserticola YC Ma (CD) هي علاجات عشبية مثالية للمشاكل الصحية. في هذه الدراسة ، أنشطة المغير لـ CPCD على التنشيطالخلايا الجذعية(DC) والإمكانات المساعدة للقاح مرض الحمى القلاعية (FMDV) تم تقييمها. CPCD بدونالسمية الخلويةإحداث تنشيط DC عن طريق تنظيم الواسمات المظهرية وامتصاص المستضد. قامت الأجسام المضادة TLR -2 أو TLR -4 بقمع مستويات CD40 و CD بوساطة CPCD 86 بالإضافة إلى IL -6 و IL -1 في DC. تسبب CPCD في فسفرة الجزيئات ذات الصلة بـ MAPKs و NF- B. عند الحقن العضلي المشترك مع FMDV في الفئران ، زاد CPCD من الأجسام المضادة الخاصة بـ FMDV ، وتكاثر الخلايا الليمفاوية ، وخلايا T المستجيبة. على وجه التحديد ، أثار CPCD استجابة Th1 ، كما يتضح من التعبيرات الأعلى من CD4 بالإضافة إلى استجابة IFN- و CD8 بالإضافة إلى IFN- و CTL. قام CPCD بتحسين تعبيرات MHC-II و CD80 و CD 86 و CD40 في DC وخفض تردد Tregs. لذلك ، يمكن أن يحفز CPCD استجابات خلطية وخلوية أقوى بشكل فعال من خلال تعديل تنشيط DC من خلال TLR -2 / TLR -4 MAPKs ومسارات NF-B ذات الصلة.

الرجاء الضغط هنا لمعرفة المزيد

1 المقدمة

أكثر منالسكرياتالمستمدة من الأعشاب الطبية قد اجتذبت اهتمامًا متزايدًا في مجال المواد المساعدة نظرًا لسميتها المنخفضة وتقويتها المناعية واسعة النطاق (Chen & Huang ، 2018 ؛ He et al. ، 2020). نجح العديد من الباحثين في استخدام الأعشاب الطبية كمرشحين مساعدين للعديد من اللقاحات. السكريات النموذجية بما في ذلك Astragalus polysaccharide و Panax ginseng polysaccharide و Poria cocos polysaccharide و lentinan تستخدم على نطاق واسع كمواد مساعدة للقاحات العديد من الأمراض المعدية (P. Li & Wang ، 2015 ؛ Rey Ladino ، Ross ، Cripps ، McManus ، & Quinn ، 2011 ؛ ب.صن وآخرون ، 2018). تم استخدام Cistanche deserticola YC Ma (C. Wu، & Le، 2021؛ Yong & Tu، 2009). أظهرت الدراسات التي أجريت في الجسم الحي وفي المختبر أن مستخلصات C.الوظائف الدوائيةبما في ذلك تخفيف التعب ومضاد التهاب، وظائف الحماية العصبية ، والمضادة للفيروسات ، والمناعة (فو ، فان ، وانج ، وغاو ، 2018 ؛ تيان وانج ، 2012). لقد ثبت أن عديد السكاريد من C. ، 2007 ؛ W. Zhang et al. ، 2016). في عامي 2018 و 2019 ، أظهرنا أن عديد السكاريد الخام لـ C. يمكن أن يؤدي CPCD إلى تنشيط DC من خلال مستقبل يشبه Toll 4 (TLR -4) (Zhang et al. ، 2018). تم العثور على CPCD أيضًا على استجابات مناعية Th1 ، بما في ذلك إفراز IFN و IgG2a جيل ضد لقاح الأنفلونزا في الفئران (Zhao ، Lian ، Wang ، Li ، & Zhang ، 2019). لذلك ، من الضروري الكشف عن الآلية الكامنة وراء الاستجابة المناعية الناتجة عن CPCD والتأثير المعزز للمناعة لـ CPCD على FMDV المعطل.

يعد مرض الحمى القلاعية (FMD) مرضًا فيروسيًا مهمًا في الحيوانات لأنه قد يؤدي إلى خسائر اقتصادية كبيرة وعواقب اجتماعية. لقاحات الحمى القلاعية المعطلة (FMDV) هي أكثر تدابير المكافحة فعالية لمرض الحمى القلاعية. يعتبر FMDV المعطل حاليًا آمنًا ولكنه ضعيف المناعة بسبب انخفاض إنتاج الأجسام المضادة والمدة القصيرة لاستمرار الأجسام المضادة بالإضافة إلى ضعف الاستجابة المناعية في الخنازير (Y. Cao، Lu، & Liu، 2016؛ Doel، 2003). تم استخدام جرعات اللقاح العالية أو أوقات العلاج المتزايدة ، وطرق الحقن المختلفة (التطعيم العضلي مقابل التطعيم داخل الأدمة) ، وبرامج الجرعات المعجلة كاستراتيجيات مهمة لتحسين الفعالية الوقائية للقاحات. أثبتت الأدلة المتزايدة أن المواد المساعدة يمكن أن تعزز فعالية اللقاح ضد الأمراض المعدية (Steven G.Reed، Orr، & Fox، 2013؛ N. Zhang et al.، 2010). المواد المساعدة الجديدة وإدماجها في FMDV قد يزيد من المناعة بل ويحسن مدة الحماية (Y. Cao، 2014؛ Dar، Kalaivanan، Sied، Mamo، & Kondabattula، 2013). في الوقت الحالي ، يتم تكريس العديد من الجهود لتطوير مواد مساعدة آمنة وفعالة يمكنها زيادة المناعة مع استجابة مناعية مخصصة (Pulendran & O'Hagan ، 2021). المواد المساعدة المتنوعة مطلوبة للقاحات. بالمقارنة مع المواد المساعدة التقليدية ، قد تكون مواد عديد السكاريد المساعدة من الطب الصيني التقليدي مفيدة لممارسة تأثيرات تقوية المناعة على FMDV عن طريق تعديل مستويات الخلايا الليمفاوية والسيتوكينات والأجسام المضادة وتوليد استجابات مناعية خلوية وخلطية أقوى.

لقد ثبت أن تنشيط الخلايا التغصنية (DCs) يبدأ استجابات مناعية تكيفية وينظم توازن المناعة Th1 / Th2 (Kapsenberg ، 2003). يجب توضيح تأثير المواد المساعدة الجديدة على DCS. يمكن أن يحسن عديد السكاريد TCM من التعبير عن الجزيئات السطحية في DC ، بما في ذلك MHC II و CD80 و CD 86 و CD40 ، وزيادة مستوى السيتوكينات المسببة للالتهابات ، مثل IL -6 و IL {{ 8}} (J. Li، Li، & Zhang، 2015). يتم تحقيق الأنشطة المناعية لعديد السكاريد TCM من خلال مستقبلات غشاء ملزمة مباشرة في DC (Jiang ، Zhu ، & Jiang ، 2010). بعبارة أخرى ، يرتبط النشاط المناعي للـ CPCD بالتأثيرات المناعية على البلدان النامية. بالإضافة إلى ذلك ، المستقبلات TLRs هي مستقبلات خافرة تعزز تنشيط وتوظيف DC وتحفيز استجابات الخلايا البائية والخلايا التائية. إن مسارات البروتين كيناز المنشط بالميتوجين (MAPK) والعامل النووي كابا- B (NF-κB) هي مسارات مهمة في اتجاه مجرى المستقبلات TLRs ويمكن أن يؤدي تنشيط هذه المسارات إلى إنتاج السيتوكينات المسببة للالتهابات بما في ذلك IL -6 و IL {{15} } (أكيرا وتاكيدا ، 2004). لذلك ، من الضروري التحقيق في مسارات المصب ذات الصلة بـ TLR لغرض فهم استجابات الخلايا المناعية للعدوى. في هذه الدراسة ، تم اختيار فأر ICR عادة كحيوان نموذجي في المختبر من أجل FMDV لتحديد العلاقة بين الفاعلية المساعدة وفعالية اللقاح بسبب الاستخدام غير الملائم للحيوانات المستهدفة ، وتم فحص CPCD كمساعد FMDV في المختبر وفي الجسم الحي لاستكشاف دوره في تنشيط DC من خلال TLR -2 / TLR -4- ذات الصلة MAPKs و NF-B المسارات. توفر هذه الدراسة الأساس لفهم آليات التحريض لأنشطة تعديل المناعة بواسطة CPCD وكذلك إمكانات CPCD كمساعد متعدد السكاريد لـ FMDV في الحيوانات المستهدفة.

2: المواد والأساليب

تم تقديم التعريف من قبل البروفيسور جيانغ هي لـ C. تم تقديم مستضد O-serotype 146S الفيروسي المعطل من مرض الحمى القلاعية ومساعد ISA -206 من قبل شركة Tecon Biology Co.، Ltd. (الصين). مصل بقري الجنين (FBS) كان من الصناعات البيولوجية. تم شراء وسيط RPMI 1640 من GIBCO (الولايات المتحدة الأمريكية). بوليميكسين ب (PMB) ، عديد السكاريد الدهني (LPS) ، 3- (4 ، 5- ثنائي ميثيل ثيازول -2- يل) -2 ، 5- ثنائي فينيل تيترازوليوم بروميد (MTT) كانت منتج سيجما. مجموعة عد الخلايا -8 (CCK -8) كانت من Biosharp (الصين). كان عامل تحفيز مستعمرة الفئران المحببة - البلاعم (GM-CSF) من شركة PeproTech (الولايات المتحدة الأمريكية). كانت مجموعات IL -6 و IL -1 من Boster (الصين).

Golgistop و Cytofix / Cytoperm و Perm / Wash buffer والأجسام المضادة ضد CD3 و CD4 و CD8 و CD44 و CD11c و MHC-II و CD80 و CD 86 و CD40 كانت من BD Biosciences (الولايات المتحدة الأمريكية). كانت مجموعات الاستخراج النووية والهيولية ومجموعات تقدير كمية بروتين BCA من Cwbiotech (الصين). تم شراء الأجسام المضادة لـ TLR -2 والأجسام المضادة TLR -4 من Novus Biologicals (الولايات المتحدة الأمريكية). كانت مجموعات مسار MAPKs و NF-κB من تقنية تشوير الخلايا (الولايات المتحدة الأمريكية). أجسام مضادة للفأر / الأرانب تحمل علامة بيروكسيديز الفجل (IgG / IgG1 / IgG2a) من Southern Biotech (الولايات المتحدة الأمريكية). طقم تلوين Tregs من eBiosciences (الولايات المتحدة الأمريكية).

3: النتيجة

تم تحديد محتوى الكربوهيدرات المحايدة ليكون 5 0. 53٪ ± 1.28٪ ومحتوى الكربوهيدرات الحمضية 17.81 ± 0.51٪. تم حساب متوسط ​​الوزن الجزيئي (Mw) لـ CPCD ليكون 46.77 كيلو دالتون مع وقت الاحتفاظ (الشكل 1 أ). يكشف تكوين السكاريد الأحادي لـ CPCD أن مكونات السكر الرئيسية في CPCD هي Glc و Ara و Gal و Rha و GlaA و Man بنسب مولارية تبلغ 33.17 بالمائة و 28.98 بالمائة و 16.39 بالمائة و 10.97 بالمائة و 8.05 بالمائة و 2.42 بالمائة (الشكل. 1 ب). يوضح الشكل 1 ج طيف FT-IR الخاص بـ CPCD. كانت العلامات التجارية عند 3383.64 سم مكعب بسبب مجموعة الهيدروكسيل. لوحظت نطاقات الامتصاص لمجموعة الألكيل عند 2926.97 سم مكعب و 1417.99 سم ​​1.كاربونيللوحظت المجموعة عند 1635.56 سم -1. أشارت الإشارات من 1257.06 إلى 1032.02 سم 1 إلى وجود حلقات بيرانوز. لمزيد من التحقيق فيما إذا تم تنشيط مسارات MAPKs و NF-B بواسطة علاج CPCD ، تم تحفيز DC باستخدام CPCD في وقت مختلف وتم فحص تعبيرات البروتينات الرئيسية المشاركة في المسارين. تسبب CPCD في فسفرة JNK و ERK و p38 بطريقة تعتمد على الوقت وكانت مستويات الفسفرة لـ JNK و ERK و p38 هي الأعلى بعد 15-30 دقيقة (الشكل 5AD). بالإضافة إلى ذلك ، تم أيضًا إحداث الفسفرة في السيتوبلازم NF-κB p65 و IκB و IKK / والنووي NF-κB p65 بطريقة تعتمد على الوقت. كانت مستويات الفسفرة السيتوبلازمية p65 و IκB و IKK / ونسبة p65 في النواة هي الأعلى بعد أوقات مختلفة: 15-30 دقيقة لـ p65 و 30 دقيقة لـ IκB و 60 دقيقة لـ IKK / و 20 دقيقة لـ نسبة p65 في النواة (الشكل 5E -5 J).

تم استخراج هذا المقال من مجلة Journal of Functional Foods 87 (2021) 104800 الصفحة الرئيسية للمجلة: www.elsevier.com/locate/jff