امتصاص السيتوكين أثناء التروية الكلوية البشرية يقلل من تأخر وظيفة الكسب غير المشروع - توقيع الجين الالتهابي المرتبط

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

جون آر فرديناند 1،2|سارة أ. هوسجود 2،3|توم مور 2،3|اشلي فيرو 1|كريستوفر جيه وارد 1|توماس كاسترو دوبيكو 1|مايكل ل.نيكلسون 2،3|منة ر.كلاتوورثي 1،2

1 وحدة المناعة الجزيئية ، قسم الطب بجامعة كامبريدج ، مختبر البيولوجيا الجزيئية ، كامبريدج ، المملكة المتحدة

2 المعهد الوطني للبحوث الصحية وحدة أبحاث الدم والزرع في التبرع بالأعضاء ، كامبريدج ، المملكة المتحدة

3 جامعة كامبريدج ، قسم الجراحة ، كامبريدج ، المملكة المتحدة

الزرع هو العلاج الأمثل لمعظم المرضى في المرحلة النهائيةالكلىمرضلكن نقص الأعضاء يمثل تحديًا كبيرًا. تم استخدام نضح آلة نورموتيرميك (NMP) لتجديد الأعضاء الهامشية ؛ ومع ذلك ، فإن الآليات التي قد تفيد بها NMP الأعضاء ليست مفهومة جيدًا. باستخدام أزواج من الكلى البشرية تم الحصول عليها من نفس المتبرع ، قارنا تأثير NMP مع تأثير التخزين البارد على المستوى العالمي.الكلىنسخة. وجدنا أن التخزين البارد أدى إلى انخفاض عالمي في التعبير الجيني ، بما في ذلك جينات المسار الالتهابي وتلك المطلوبة لعمليات توليد الطاقة ، مثل الفسفرة المؤكسدة (OXPHOS). في المقابل ، خلال NMP ، كان هناك زيادة ملحوظة في تنظيم جينات OXPHOS ، ولكن أيضًا لعدد من جينات المسار المناعي والالتهابي. باستخدام الخزعات من الكلى التي خضعت لـ NMP والتي تم زرعها لاحقًا ، وجدنا أن التعبير الجيني الالتهابي الأعلى حدث في الأعضاء ذات وظيفة الكسب غير المشروع لفترات طويلة (DGF). لذلك ، استخدمنا هيم adsorber (HA) لإزالة السيتوكينات المؤيدة للالتهابات. زاد هذا التعبير الجيني الالتهابي الموهن من جينات مسار OXPHOS وكان له تأثيرات مهمة سريريًا محتملة في تقليل التعبير عن توقيع الجين المرتبط بـ DGF. معًا ، تشير بياناتنا إلى أن امتزاز الوسطاء المؤيدين للالتهابات من السائل الإروائي يمثل تدخلاً محتملاً قد يحسن قابلية الأعضاء للحياة.

الكلمات الدالة:البحث / الممارسة السريرية ، وظيفة الكسب غير المشروع المتأخرة (DGF) ، المتبرعون والتبرع: متوفى ،الكلى(طعم خيفي) وظيفة / خلل وظيفي ،الكلىمرض: مناعي / التهابات ، كلوي

Cistanche عشب يحسن وظائف الكلى

1 المقدمة

الكلىيمثل زرع الأعضاء العلاج الأمثل لمعظم المرضى الذين يعانون منالمرحلة النهائيةالكلىمرض، مع فوائد لكل من نوعية وكمية الحياة. 1 يعتبر نقص الأعضاء تحديًا كبيرًا ، وقد تم استخدام العديد من الاستراتيجيات لزيادة عدد الكلى المتاحة ، بما في ذلك استخدام المتبرعين بالموت الدوري المتوفى (DCD) والمتبرعين بمعايير موسعة (ECD) ) ، وكلاهما مرتبطان بمعدلات أعلى من تأخر وظيفة الكسب غير المشروع (DGF) مقارنة بالمتبرع بموت جذع الدماغ المتوفى (DBD). . يحدث DGF بسبب تلف الخلايا الأنبوبية الإقفارية أو الوفاة ، والتي يمكن أن تحفز التنشيط المناعي الفطري عبر تجمع NLRP3 الالتهابي مما يؤدي إلى إنتاج إنترلوكين (IL) 1 و IL18. 4-6 في الواقع ، كان وجود السيتوكينات الالتهابية في البول تستخدم كعلامة حيوية لـبَصِيرالكلىإصابةو DGF. 7-9

يسمح نضح الآلة العادية (NMP) بتروية الأعضاء المزروعة بخلايا الدم الحمراء الدافئة المؤكسجة ، في غياب المكونات المناعية المنتشرة ، بما في ذلك المكملات والعدلات. 10-14 وقد تم استخدام هذه العملية لتقييم الأعضاء الهامشية 15 و " تجديد "الأعضاء لتسهيل زرع الكلى التي تم رفضها في البداية بعد عرض من خلال خدمة تخصيص الأعضاء الوطنية .16 قدمت تجربتنا السابقة باستخدام NMP الأساس المنطقي لتجربة عشوائية محكومة لتقييم فعاليتها في منع DGF في الكلى DCD ، 17 ولكن إن الآليات التي قد تفيد بها NMP الكلى المزروعة ليست مفهومة تمامًا. علاوة على ذلك ، فإن مسألة ما إذا كان التلاعب الإضافي فيالكلىخلال NMP ، على سبيل المثال عن طريق إزالة السيتوكينات والكيماويات المؤيدة للالتهابات من سائل الإرواء ، قد تقدم فوائد إضافية في تحسين العضو قبل الزرع في الكلى البشرية ، ولكن دراستنا لـ NMP الخنازير أظهرت نتائج واعدة.

هنا اتخذنا نهجًا غير متحيز لمعالجة هذين السؤالين باستخدام التحليل النسخي للإنسانالكلىالخزعات المأخوذة في بداية ونهاية NMP لتقييم التغيرات العالمية في التعبير الجيني. استخدمنا أزواجًا من الكلى البشرية من متبرع واحد مما مكننا من مقارنة تأثير التدخلات المختلفة في الأعضاء ذات الخلفية الجينية المتطابقة وتمكنا من تقييم تأثير هذه التغييرات على التنبؤ بنتيجة الكسب غير المشروع.

فوائد مستخلص الكستانش: منع الحادةالكلىإصابة

2. النتائج

2.1. الكلى المزدوجة متشابهة وراثيا وهي نموذج مفيد لتقييم التدخلات

لقد بحثنا في التغييرات النسخية المرتبطة بحفظ الأعضاء و NMP في دراستين مستقلتين ، كل منهما تحتوي على خمسة أزواج من الكلى ، مما يجعل المجموع 10 أزواج / 20 كلية بشرية. من هؤلاء ، كان اثنان من DBD وثمانية من متبرعين DCD (الجدول S1 و S2 والشكل S1). في هذه الدراسات ، أخذنا خزعات قشرية قبل وبعد التدخل (التخزين البارد أو NMP) وبحثنا في المشهد النسخي باستخدام تسلسل الحمض النووي الريبي (RNA-Seq). استخدام الكلى المقترنة والخزعات المقترنة من نفس النوعالكلىسمح لنا بالتحكم في التباين البيولوجي والتراجع عن هذا المربك خارج التحليل (الشكل S2A). أكدنا ذلكالكلىتبدأ الأزواج بمشهد نصي مشترك (الشكل S2B) ومن خلال تطبيق تدخلات مختلفة على كل منهماالكلىفي الزوج ، نحن قادرون على دراسة تأثير التدخل المستقل عن التباين البيولوجي.

الشكل 1 تظهر الكلى المعرضة للتخزين البارد تغييرات محدودة في التعبير الجيني مقارنة بتلك التي تخضع لـ NMP. تم الحصول على زوج من الكلى تم رفض استخدامها في الزرع. واحدالكلىتم الاحتفاظ بها في التخزين البارد الثابت وخضع الآخر لنضح آلة الحرارة الطبيعي (NMP). تم أخذ الخزعات من القشرة الخارجية في البداية وبعد ساعتين. ب ، مؤامرة البركان تشير إلى حدوث تغيير في التعبير الجيني في ساعتين للمجموعة المشار إليها مقارنة بالبداية. تشير النقاط الحمراء إلى الجينات المعبر عنها تفاضليًا بقيمة P المعدلة<0.05 and="" the="" experimental="" group="" is="" indicated="" above="" the="" plot.="" c,="" gene="" set="" enrichment="" analyses="" of="" the="" differential="" expressions="" from="" b="" against="" the="" hallmarks="" pathways.="" only="" significant="" pathways="" (fdr="" q="" value=""><0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="" (nes).="" d,="" heatmap="" of="" the="" top="" 20="" significantly="" upregulated="" genes="" during="" nmp,="" genes="" are="" ranked="" by="" log2="" fold="" change.="" e,="" string="" analysis="" of="" the="" top="" 50="" genes="" upregulated="" during="" nmp.="" the="" color="" of="" each="" node="" indicates="" membership="" of="" each="">

الشكل 2 ارتباط النسخة التي تلي NMP بطول وظيفة الكسب غير المشروع المتأخرة. ارتبط التعبير الجيني بطول DGF في الخزعات المأخوذة بعد NMP كجزء من تجربة سريرية عشوائية. تم رسم مستويات التعبير عن 1000 جين مع أكبر ارتباط بالنتيجة. تم إجراء B ، GSEA للارتباط من A مقابل مجموعة بيانات السمات المميزة. المسارات المهمة فقط (قيمة FDR q<0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="">

2.2. ينتج عن NMP زيادة في OXPHOS وجينات المسار الالتهابي مقارنة بالتخزين البارد

للتحقيق في الآليات المحتملة التي قد تؤثر بها NMP على الكلى ، أخذنا في البداية خمسةالكلىأزواج (n {0}} متبرعون DCD و n=1 متبرع متوفى في جذع الدماغ [DBD] ، الشكل S1 ، الجدول S1) وأجروا فترة زمنية 0 (0 ساعة) خزعة قشرية . في هذه المرحلة ، تم اختيار الكليتين بصورة عشوائية للتخزين البارد الثابت أو NMP ، كما هو موضح سابقًا 10 (الشكل 1A). بعد ساعتين ، تم أخذ خزعة ثانية من كلا الكليتين وتم إجراء RNA-Seq. عند مقارنة التعبير الجيني بين الخزعات الزمنية 0- و 2- ساعة ، وجدنا أن الكلى الموضوعة في التخزين البارد الثابت لم يكن لها أي تغيير ذي دلالة إحصائية في التعبير عن أي جين فردي عند تصحيحها للاختبارات المتعددة (الشكل 1 ب) ، اللوحة اليسرى). في المقابل ، خلال ساعتين من NMP ، تم تنظيم 956 جينًا وتم تنظيم 353 جينًا (الشكل 1 ب ، اللوحة اليمنى). قمنا بعد ذلك بتقييم التغييرات في التعبير عن مجموعات الجينات ضمن مسار مشترك ، بمقارنة عشرات أو مئات الجينات بدلاً من أي جين فردي ، وبالتالي تقليل تأثير التباين البيولوجي بين الأفراد على التحليل. كشف هذا عن تغييرات في المسارات المهمة وظيفيًا ، حيث لم يتم تغيير تعبير كل جين فردي داخل هذا المسار بحجم كافٍ للوصول إلى أهمية إحصائية. أظهر تحليل تخصيب مجموعة الجينات (GSEA) أن التخزين البارد كان له تأثير كبير على عدد من المسارات الأيضية (الشكل 1C ، اللوحة اليسرى). على وجه الخصوص ، كان هناك انخفاض ملحوظ في الجينات المشاركة في الفسفرة المؤكسدة (OXPHOS) ، وهو مسار رئيسي مطلوب لتوليد ATP .19 في المقابل ، كان OXPHOS من بين المسارات التي تم تنظيمها بشكل كبير خلال NMP (الشكل 1C ، اللوحة اليمنى) ، مع الفوائد المحتملة من أجل بقاء الخلية واستعادة التوازن الخلوي. بالإضافة إلى ذلك ، تم إحداث عدد من المسارات المشاركة في العمليات المناعية أو الالتهابية أثناء NMP ، مع "إشارات TNF عبر NFkB" مما يدل على أكبر زيادة. تمشيا مع هذا ، كان TNF ، وكذلك IL1B والكيموكينات CXCL8 (IL8) و CXCL2 لتجنيد العدلات ، من بين الجينات الأكثر تنظيمًا في خزعات NMP لمدة 2- ساعة (الشكل 1 د). كشف تحليل السلسلة لأعلى 50 جينًا منظمًا عن انتظام الجينات المرتبطة بالكيمياء الحيوية والتي تم تجميعها في أربع عقد رئيسية ؛ IL8 و chemokines تجنيد العدلات ، الجينات المرتبطة بـ Inflammasome ، إشارات NFkB ، وتنظيم النسخ (الشكل 1E). تجدر الإشارة إلى أن كليتي DBD و DCD كانت متشابهة نسبيًا في خط الأساس (الشكل S2C) ، وكانت مسارات الجينات المتغيرة أثناء NMP متشابهة في الكلى DBD و DCD (الشكل S2D). يوضح تحليلنا معًا أنه خلال NMP ، هناك تعبير متزايد عن الجينات التي تعزز توليد الطاقة ، مع تأثيرات مفيدة محتملة للعضو ، ولكن التحريض المتزامن للجينات المسببة للالتهابات ، والتي قد تكون ضارة.

مستخلص توبولوسا سيستانش: تحسين وظائف الكلى

2.3 ترتبط جينات المسار الالتهابي في الكلى NMP بتأخير وظيفة الكسب غير المشروع لفترات طويلة

من أجل ربط التغييرات النسخية التي تحدث أثناء التخزين البارد و NMP بالنتائج السريرية ، أجرينا RNA-Seq على الخزعات المأخوذة من 33 كلية DCD خضعت لـ NMP كجزء من تجربة سريرية عشوائية تقيم حاليًا فعاليتها. مجموعة فرعية من الكلى المعشاة إلى ذراع NMP للدراسة والتي تم زرعها لاحقًا (الجدول S3 ، الشكل S1). يعتبر DGF أكثر شيوعًا في الكلى DCD ويتم تعريفه تقليديًا على أنه شرط لغسيل الكلى في الأسبوع الأول بعد الزرع. ومع ذلك ، في فترة ما بعد الزرع مباشرة ، يتلقى بعض المرضى نوبة واحدة من غسيل الكلى لفرط بوتاسيوم الدم ، والتي لا تعكس بالضرورة وجود نخر أنبوبي حاد كبير. لذلك ، استخدمنا نموذجًا يربط التعبير الجيني مع الوقت بين جراحة الزرع وجلسة غسيل الكلى الأخيرة (أي مدة DGF). أظهر هذا تغييرات نسخية أكثر وضوحًا في عمليات الزرع التي تتطلب غسيل الكلى بعد الـ 24 ساعة الأولى بعد الزرع (الشكل 2 أ) ، بالإضافة إلى وجود ارتباط إيجابي كبير بين التعبير عن جينات المسار الالتهابي بما في ذلك "إشارات TNFA عبر NFkB" ومسارات "الاستجابة الالتهابية" و طول DGF ، مع إثراء أكبر لهذه المسارات في الكلى التي شهدت فترة أطول بعد زرع DGF (الشكل 2 ب). على العكس من ذلك ، يرتبط طول DGF سلبًا بحجم التعبير عن جينات مسار "OXPHOS" (الشكل 2 ب). مجتمعة ، تشير هذه البيانات مجتمعة إلى أنه بعد NMP ، فإن الكلى التي لديها تعبير أقل عن جينات المسار الالتهابي والتعبير الأعلى عن جينات مسار "OXPHOS" تكون أقل عرضة لعملية زرع DGF لفترات طويلة بعد الزرع. قد يدعم هذا الاستنتاج بأن التغييرات الجزيئية التي تحدث أثناء NMP قد يكون لها تأثيرات مفيدة (تحريض جينات مسار OXPHOS) وضارة (تحريض جينات المسارات الالتهابية).

2.4 يُظهر إخراج البول وتدفق الدم الكلوي خلال NMP ارتباطات مختلفة مع OXPHOS وجينات مسار الالتهاب

كمية البول التي يتم إنتاجها خلال NMP هي واحدة من عدد من المعلمات المدرجة في درجات تقييم الجودة الجراحية المستخدمة لتوجيه قرارات استخدام الأعضاء ، 15 ولكن ما إذا كان إنتاج البول المرتفع أثناء NMP ينذر حقًا بتشخيص جيد للكلية والمسارات الجزيئية الأساسية التي يتم تنشيطها في الكلى مع ارتفاع كمية البول غير واضح. في إجمالي 1 0 كلية تخضع لـ NMP (الكلى فقط NMP ، الجدول S1 و S2 ، الشكل S1) ، لاحظنا مجموعة من نواتج البول من 0 إلى 340 مل خلال فترة 2- ساعة من التروية (الشكل 3A اللوحة اليسرى). من الجدير بالملاحظة ، عندما قارنا المسارات المتغيرة أثناء NMP في خمس كلى في تجربتين مستقلتين ، وجدنا أن مسارات مماثلة تم إحداثها (الشكل S3A) تؤكد قابلية استنساخ تصميمنا التجريبي وفائدة مقارنة المسارات بدلاً من الجينات الفردية. في خزعات ما بعد التروية 2- ساعة ، ارتبط التعبير عن 11 جينًا بشكل كبير مع حجم البول الناتج خلال هذه الفترة. وشمل ذلك بروتينات الصدمة الحرارية (HSPs) و HSPA1A و HSPA1B و HSPH1 ، والتي ترتبط ارتباطًا إيجابيًا بزيادة إنتاج البول (الشكل 3 أ اللوحة اليمنى). أظهر تحليل تخصيب مجموعة الجينات أن إخراج البول أيضًا مرتبط بشكل إيجابي مع إشارات مسار "TNF عبر جينات مسار NFkB" ، ويرتبط سلبًا بجينات OXPHOS في خزعات ما بعد التسريب (الشكل 3 ب ، S3C). وبالمثل ، في خزعات ما قبل التروية ، يرتبط OXPHOS سلبًا بإخراج البول في هذه الكلى بينما المسارات المرتبطة بالتنشيط المناعي بما في ذلك "إشارات TNF عبر NFkB" و "رفض الطعم الخيفي" مرتبطة بشكل إيجابي بإخراج البول ، مما يشير إلى أن NMP كان له تأثير ضئيل على هذه العمليات ، أو على مسارات أخرى تم تحليلها ، في ارتفاع الكلى الناتج من البول (الشكل 3 ب ، S3C-D). نظرًا لأن تحريض جينات المسار الالتهابي لوحظ في عيناتنا السريرية باستخدام DGF لفترات طويلة (الشكل 2 ب) ، فإن هذه البيانات تتحدى العقيدة القائلة بأن إنتاج البول المرتفع يحدث في كلى "صحية" أكثر قابلية للحياة وتشير إلى أنه في الواقع ، قد تحتوي هذه الكلى على المزيد القدرة الالتهابية ، أقل قدرة على توليد الطاقة وأن هذا لا يتغير بشكل كبير خلال NMP.

تم أيضًا تقييم تدفق الدم الكلوي أثناء التروية كمعامل قد يعكس وظيفة الزرع التالية. في 2- ساعة من خزعات ما بعد التروية ، ارتبطت ثمانية جينات بشكل إيجابي بشكل كبير بزيادة تدفق الدم الكلوي (الشكل 3C اللوحة اليمنى) ، بما في ذلك HSPA1L ، ولكن لم يكن هناك تداخل مباشر بين قائمة الجينات هذه وتلك المرتبطة بإخراج البول (الشكل 3 أ) ). أظهر تحليل تخصيب مجموعة الجينات أن ارتفاع تدفق الدم الكلوي يرتبط ارتباطًا إيجابيًا بجينات OXPHOS في خزعات لمدة 0- ساعة ، ولكن على عكس تلك التي تحتوي على أعلى كمية من البول ، كان للتروية تأثير كبير ، مما أدى إلى وجود علاقة سلبية مع "OXPHOS" جينات المسار بمقدار ساعتين (الشكل ثلاثي الأبعاد ، الشكل S4A-B). يتدفق الدم الكلوي المرتبط سلبًا بعدد من مسارات الجينات المناعية والالتهابية في كل من الخزعات 0- و 2- ساعة (الشكل ثلاثي الأبعاد ، الشكل S4B) ، على عكس إخراج البول (الشكل 3 ب ، الشكل S3C). تشير هذه البيانات مجتمعة إلى أن تدفق الدم الكلوي ومخرجات البول قد لا يكونا مؤشرات مكافئة لكلى أكثر قابلية للحياة ، ولكن قد تحدد الأولى بدقة أكبرالكلىأقل عرضة ل DGF لفترات طويلة.

الفوائد والآثار الجانبية لل cistanche: مضاد للالتهابات

2.5 لا تؤثر إضافة أداة الامتزاز إلى دائرة التروية على معلمات التروية ولكنها تقلل بشكل كبير من التعبير الجيني الالتهابي ، بما في ذلك NLRP3 و IL1B

تحليلاتالكلىأظهر سائل الإرواء زيادة كبيرة في تركيز السيتوكينات المؤيدة للالتهابات والكيموكينات أثناء انخفاض درجة الحرارة و NMP.20،21. بالنظر إلى أن تحليلنا للمزروعالكلىأشارت العينات إلى أن تحريض الجينات المعتمدة على عامل نخر الورم في الكلى NMP كان مرتبطًا بـ DGF (الشكل 2 ب) ، وافترضنا أن إزالة السيتوكينات والكيموكينات من دائرة التروية قد تخفف من تحريض الجين الالتهابي ، مع آثار مفيدة محتملة للكلية. أظهر هذا النهج بعض الفعالية في المرضى الذين يعانون من متلازمة الاستجابة الالتهابية الجهازية ، 22،23 ، وكان مرتبطًا بزيادة تدفق الدم الكلوي في كلى الخنازير التي تخضع لـ NMP.18 لاختبار هذا في الكلى البشرية ، أخذنا خمسة أزواج إضافية من الكلى وقمنا بإجراء NMP لمدة 4 ساعات مع الخزعات المأخوذة في 0 و 2 و 4 ساعات (الشكل S1). في كل حالة ، تمت إضافة ممزز العصارة الخلوية (HA) الذي يزيل الجزيئات ذات الوزن الجزيئي 10-50 كيلو دالتون إلى دائرة التروية لكلية واحدة داخل كل زوج (NMP plus HA) (الشكل 4A). كما هو متوقع ، أدت إضافة HA إلى تركيزات أقل لمجموعة متنوعة من السيتوكينات في سائل الإرواء (الشكل 4 ب) ولكن لم يكن لها أي تأثير على تدفق الدم الكلوي ، وإخراج البول أو تكوينه ، واستهلاك الأكسجين ، والتوازن الحمضي القاعدي (الشكل 4 ج ، الجدول S4 ، S5). وبالتالي ، على مدى 4 ساعات من NMP ، لم يكن لـ HA أي تأثير على معلمات التروية المستخدمة حاليًا سريريًا لتوليد درجات تقييم الجودة ولكن كان لها تأثير كبير على التعبير الجيني ؛ بعد NMP ، تم تنظيم جينات 1794 و 4026 في 2 و 4 ساعات ، على التوالي ، بما في ذلك TNF و IL6 (الشكل 4D ، E). ولكن تم زيادة نصف هذا الرقم فقط (ن=898 ون=2606) عندما كان HA موجودًا (الشكل 4 د ، الشكل S5A و B). تم أيضًا تقليل عدد الجينات التي تم تنظيمها عن طريق إضافة HA (الشكل 4 د). بعد 4 ساعات من NMP ، تم تنظيم 46 جينًا بشكل كبير و 181 تم تنظيمها مع إضافة HA (الشكل 4F). تضمنت استجابة النسخ المخففة NLRP3 الجينات المرتبطة بتنشيط الجسيمات الالتهابية ، مثل IL1B و NLRP3 و CASP1 (الشكل 4G ، الشكل S4B) وبعض الكيماويات الكيميائية التي تجند العدلات (الشكل S5C) ، والتي كانت مرتبطة سابقًا بإصابة الكلى في النماذج الحيوانية. هذا يدل على أن الوسطاء القابل للذوبان تم إطلاق سراحهم منالكلىإعادة تدوير ودفع التعبير عن الجينات الالتهابية داخل العضو ، ولكن يمكن التخفيف من ذلك عن طريق إزالتها من دائرة التروية.

الشكل 4 إضافة أداة امتصاص إلى دائرة نضح الآلة الحرارى لها تأثيرات كبيرة على مستوى السيتوكين في سائل الإرواء والنسخة ولكن ليس على المعلمات الفيزيائية المسجلة على منصة الحفر. تم أخذ زوج من الكلى البشرية من نفس المتبرع ، وخضع أحد الزوجين لبروتوكول نضح الآلة الحرارى المعياري (NMP) لمدة 4 ساعات والآخرالكلىخضع لـ NMP مع إضافة ممزز تنحنح إلى الدائرة. تم أخذ عينات لـ RNA-Seq قبل التروية (0 ساعة) ، وبعد ساعتين ، وفي النهاية (4 ساعات). ب ، تركيز السيتوكينات الرئيسية في سائل الإرواء بعد 4 ساعات من NMP. يشير الخط إلى أزواج من الكلى. تم تطبيع قياسات السيتوكين لمحتوى بروتين الإرواء الكلي. القيمة P المذكورة مأخوذة من اختبار t الزوجي لتقليل السيتوكينات مع إضافة HA. C ، إنتاج البول وتدفق الدم الكلوي (RBF) عبر الدورة الزمنية للتروية. يشير الخط الأخضر إلى NMP وحده والبرتقالي مع إضافة hem-adsorber. يوضح مخطط D ، Venn عدد الجينات المعبر عنها بشكل تفاضلي بشكل كبير عند مقارنة عينات 2- ساعة أو 4- ساعة بالعينات السابقة (0- ساعة). المخططات الحمراء عبارة عن جينات منتظمة وزرقاء منظمة. التقاطع هو الجينات التي يتم التعبير عنها بشكل تفضيلي في كلتا النقطتين الزمنيتين في نفس الاتجاه. E ، سجل 2 قيم التعبير الطبيعية للجينات المشار إليها عبر نضح من نسخة الأنسجة ، يشار إلى أشرطة الخطأ القياسية. مؤامرة F ، Volcano للمقارنة الزوجية لـ NMP وحدها مع NMP plus HA في 4 ساعات. يشير اللون الأحمر إلى الجينات المعبر عنها تفاضليًا بقيمة P المعدلة<0.05. g,="" as="" for="">

علاج أمراض الكلى استخراج cistanche

2.6. يرتبط HA بتخفيض توقيع الجين المرتبط بوظيفة التطعيم المتأخر

أظهر تحليل تخصيب مجموعة الجينات انخفاضًا كبيرًا في مسار "TNF الإشارات عبر NFkB" في الكلى NMP بالإضافة إلى HA مقارنةً بـ NMP وحده (الشكل 5A-B). والجدير بالذكر أن وجود HA لم يقلل فقط من التعبير الجيني الالتهابي داخلالكلىولكن أيضًا زاد من مسارات استقلاب الأوكسجين والأحماض الدهنية ، وكلاهما يساهم في توليد الطاقة (الشكل 5 أ-ب). لذلك ، فإن التغييرات في مسارات التعبير الجيني التي تحدث مع HA ستدعم الاستنتاج القائل بأن آثاره مفيدة سريريًا ، لأنها قللت من إشارات TNFA عبر جينات مسار NFkB وزادت جينات مسار "OXPHOS" ، وكلاهما ارتبط بجينات أقصر مدة DGF (الشكل 2 ب).

لمزيد من استكشاف العلاقة بين التغييرات النسخية في NMP والنتائج السريرية ، سعينا إلى تنظيم توقيع الجين الموجود في الكلى باستخدام DGF. حددنا أفضل 100 جينات منظمة بشكل إيجابي (UP) وسلبي (DOWN) (مرتبة حسب تغيير أضعاف السجل) والتي ارتبطت بطول DGF في 33 عينة من التجارب السريرية (الشكل 5C ، البيانات S1). لقد وجدنا إثراءًا كبيرًا لتوقيع الجين المرتبط بزيادة طول DGF في العينات ذات إنتاج البول العالي (الشكل 5 د) ، مما يشير إلى أن إنتاج البول المرتفع أثناء NMP يحدد الكلى المعرضة لخطر DGF لفترات أطول. لم يكن هناك ارتباط ذي دلالة إحصائية بين توقيع DGF والجينات المرتبطة بارتفاع تدفق الدم الكلوي (الشكل 5E). قمنا بعد ذلك بتقييم ما إذا كانت إضافة HA إلى دائرة NMP قد أثرت على التعبير عن التوقيعات الجينية لـ DGF "UP" و "DOWN" وكيف. بشكل ملحوظ ، أظهر هذا أن التعبير عن توقيع الجين المرتبط بزيادة طول DGF قد انخفض بشكل كبير عن طريق إضافة HA ، وزاد التوقيع المرتبط بانخفاض طول DGF بشكل كبير عن طريق إضافة HA (الشكل 5F).

بشكل عام ، تشير التغييرات النصية التي حددناها إلى أن NMP له فوائد محتملة على التخزين البارد من حيث تأثيره على توليد الطاقة في الكلى. ومع ذلك ، أثناء التروية ، يتم إطلاق بعض الجزيئات النشطة بيولوجيًا من الكلى إلى دائرة التروية ، مما ينتج عنه حلقة تضخيم تؤدي إلى حدوث الالتهاب عند دخولها الكلية مرة أخرى. إزالة هذه الجزيئات يقطع هذه الحلقة وقد يكون مفيدًا لتقليل الالتهاب وزيادة توليد الطاقة ، وزيادة تعزيز الآثار المفيدة لـ NMP وتقليل التعرض لـ DGF (الشكل 6).

الشكل 5 تقلل إضافة ممزز لحم الخنزير من توقيع الجين المرتبط بـ DGF. تحليل GSEA لتأثير إضافة HA إلى النسخ بعد 4 ساعات NMP مقابل مسار السمات المميزة لمجموعات الجينات. يتم رسم مسارات مهمة فقط. تشير النقاط الحمراء إلى التخصيب الإيجابي والسالب الأزرق ، ويرتبط حجم النقطة عكسيًا بقيمة FDR q ويشير الموضع إلى درجة الإثراء الطبيعية (NES). B ، مخططات الإثراء من GSEA للمسارات الرئيسية من قاعدة بيانات Hallmark للمقارنة من A. يشير السطر إلى درجة الإثراء الجارية ويشير مخطط الكمان إلى توزيع جينات الأعضاء في مجموعة الجينات عبر قائمة الجينات المرتبة المستخدمة في كل تحليل. C ، خريطة الحرارة لأكبر أربعة علاقة إيجابية (UP) وسلبية (DOWN) مع طول DGF وتستخدم كجزء من توقيع التعبير الجيني لـ DGF. يتم تقديم توقيع DGF الكامل في البيانات التكميلية. تم استخدام توقيع الجين المرتبط DF و DGF مع GSEA للتحقيق في تعبير التوقيع في ارتباط 2- إخراج البول بالساعة 2- hr transcriptome (D) ، ارتباط 2- hr RBF مع 2- hr transcriptome (E) ، وتأثير إضافة HA على النسخة في 4 ساعات (F). المؤامرات كما ل

الشكل 6 ملخص رسومي. أ ، أثناء التخزين البارد ، هناك انخفاض عالمي في النسخ. خلال NMP ، يتم تنظيم التعبير عن الجينات في عدد من المسارات بما في ذلك الفسفرة المؤكسدة (OXPHOS) وجينات المسار الالتهابي مثل TNF و IL8 و NFkB. اللوحة اليسرى B ، أثناء NMP ، يتم تحرير وسطاء التهابات (دوائر صفراء) منالكلىفي محلول التروية. إنها تعيد توزيع وتحفيز نسخ الجينات المؤيدة للالتهابات في الكلى ، وترتبط بتقليل جينات إنتاج مسار الطاقة ، مما يقلل من ATP. اللوحة اليمنى ، وجود هيم الممتز (HA) يكسر حلقة التضخيم الالتهابي

Cistanche عشب يحسن وظائف الكلى

3. المناقشة

تظهر بياناتنا أن التخزين البارد فعال في الحد من التغييرات الجوهرية في التعبير الجيني. يتماشى هذا مع نماذج القوارض ، حيث أظهرت الكلى المخزنة لمدة تصل إلى 18 ساعة في التخزين البارد تغيرًا طفيفًا في التعبير عن السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ، بما في ذلك IL1 و TNF و IL6.26 استخدامنا للتنميط النسخي العالمي غير المتحيز بدلاً من سمح لنا قياس عدد صغير من الجينات المرشحة بتحليل تعبير مجموعات الجينات الموجودة ضمن مسارات محددة. أظهر هذا انخفاضًا كبيرًا في التعبير عن جينات مسار OXPHOS ومسار تحلل السكر في الكلى المخزنة على البارد ، مما قد يقلل من قدرة هذه الكلى على إنتاج ATP ، بما يتماشى مع دراسة سابقة أظهرت انخفاض ATP في الكلى البشرية المخزنة على البارد. تم أيضًا تقليل تنظيم المسارات المؤيدة للالتهابات أثناء التخزين البارد ، بما في ذلك تنشيط TNF عبر مسارات أنواع الأكسجين التفاعلية NFkB والتي قد تكون مفيدة. ومع ذلك ، قد يكون أن التخزين البارد يضع فقط تعليقًا مؤقتًا على هذه المسارات ، وأنه بعد ضخه في المتلقي ، ستحدث تغييرات مماثلة في التعبير الجيني الالتهابي كما لوحظ في NMP.

كان لـ NMP تأثير معاكس للتخزين البارد على جينات مسار OXPHOS ومسار تحلل السكر ، مما يزيد من تعبيرها ، مع إمكانية زيادة القدرة الخلوية لتوليد ATP واستعادة التوازن. من الجدير بالذكر أن التروية المؤكسدة منخفضة الحرارة للكلى البشرية قد ثبت أيضًا أنها تزيد من مستويات ATP مقارنة بالتخزين البارد 27 ، وبالتالي قد تكون استعادة الأوكسجين هي الحافز الرئيسي لهذه العمليات بدلاً من الحرارة العادية. ومع ذلك ، من المحتمل أن تكون هذه التغييرات مفيدة للعضو نظرًا لملاحظتنا للعلاقة السلبية بين زيادة التعبير عن جينات مسار OXPHOS و DGF المطول.

كما أجرى Hameed et al ، بحثًا حديثًا ، تحليلًا نصيًا لـ NMP في ثلاث كلى تخضع لـ NMP. لسوء الحظ ، لم يجعل المؤلفون بياناتهم متاحة للجمهور ، وبالتالي لا يمكن إجراء مقارنة متعمقة مع مجموعة البيانات الخاصة بنا. ومع ذلك ، أشارت مخطوطاتهم إلى تحريض الجينات المرتبطة بالاستجابة المناعية أثناء NMP ، بما في ذلك IL1B و CXCL2 و TNF ، وهو ما يتوافق مع النتائج التي توصلنا إليها.

في تحليلنا للكلى التي تخضع لـ NMP في سياق تجربة سريرية ، قمنا بربط توقيعات التعبير الجيني بطول DGF بدلاً من حدوث DGF (تم تعريفه على أنه الحاجة إلى غسيل الكلى خلال الأسبوع الأول بعد الزرع). والجدير بالذكر أن الكلى ذات مدة DGF ليوم واحد أو أقل كانت مشابهة نسبيًا للغاية لتلك التي لا تحتوي على DGF ، مما يعكس على الأرجح متطلبات غسيل الكلى بسبب فرط بوتاسيوم الدم المرتبط بالجراحة بدلاً من DGF حسن النية. وجدنا أن DGF الأطول كان مرتبطًا بالتعبير العالي لإشارات TNFA عبر جينات مسار NFkB والتعبير الأقل عن الجينات المرتبطة بـ OXPHOS. تشير هذه البيانات إلى أن الكلى مع زيادة OXPHOS وانخفاض الإشارات المناعية قد تقدم إمكانات أفضل ككلى المتبرعين ، لكن هذا الاستنتاج يتطلب التحقق من صحة في دراسة مستقبلية أكبر.

قمنا أيضًا بتقييم العمليات الجزيئية التي ترتبط بإخراج البول والدم الكلوي خلال NMP. تم استخدام هذه المعلمات سابقًا ، جنبًا إلى جنب مع عدد من المقاييس الأخرى ، لإنشاء درجة تقييم جودة الكلى المروية. تم اعتبار القيم العالية لإخراج البول وتدفق الدم الكلوي على أنها تعكس طعمًا أكثر قابلية للحياة .15 تكشف بياناتنا أن المسارات المرتبطة بإنتاج البول المرتفع وتدفق الدم الكلوي المرتفع تختلف ، وفي الواقع ، توضح هذه المعلمات ارتباطات قطبية معاكسة مع مسارات الالتهاب . ارتبط ارتفاع إنتاج البول بزيادة التعبير عن جينات المسار المناعي بينما ارتبط ارتفاع تدفق الدم الكلوي سلبًا بهذه المسارات. وجدنا أيضًا أن توقيع جين DGF الذي أنشأناه قد تم إثرائه في الكلى مع زيادة إنتاج البول خلال NMP ، مما يشير إلى أن هذه المعلمة قد تحدد الكلى المعرضة لخطر DGF الأطول ، على عكس العقيدة الحالية. أحد التفسيرات المحتملة هو أن إنتاج البول المرتفع للغاية يعكس الكلى مع تلف أنبوبي أكثر يفتقر إلى القدرة على تركيز البول. وبالتالي ، قد يكون هناك "تأثير معتدل" فيما يتعلق بإخراج البول ، حيث تكون الكلى ذات إنتاج البول المنخفض / القليل هي تلك التي تعاني من شذوذ كبير في إنتاج المرشح ، وتلك التي لديها مخرجات بول عالية للغاية لديها تلف أنبوبي كبير يمنع تركيز البول. يجب اختبار هذه الفرضية في عدد أكبر من الكلى التي تم زرعها لاحقًا.

خلال 4 ساعات من NMP ، كان هناك تحريض للجينات الالتهابية في الكلى. ومع ذلك ، تجدر الإشارة إلى أن الممارسة السريرية الحالية تتضمن ساعة واحدة من NMP فقط ، وقد لا يكون هذا التأثير واضحًا خلال وقت التروية الأقصر. ومع ذلك ، قد يكون للنضح الأطول فوائد من حيث استعادة الأوكسجين وتوليد الطاقة ، وفي تجربتنا ، يمكن إبطال الآثار السلبية لتحريض الجين المناعي بشكل كبير عن طريق إدخال العصارة الخلوية HA إلى دائرة التروية. تشير هذه البيانات إلى أن الوسطاء الالتهابيين الذي تولده الكلى خلال مسار NMP يدخلون دائرة التروية ويمكنهم تفاقم الالتهاب العقيم وأن إزالتها تخفف من تحريض جينات مسار الالتهاب التي لوحظت خلال NMP. الأهم من ذلك ، لقد أظهرنا أن إضافة HA تؤثر على تعبير الجينات المرتبطة بنتائج أسوأ سريريًا. تم اشتقاق توقيعنا الجيني DGF من العينات التي خضعت لـ NMP كجزء من تجربة إكلينيكية لتقييم فعاليتها ، مما يسمح لنا بربط التغييرات التي لاحظناها في دراساتنا المزدوجة على الكلى بنقاط النهاية السريرية في الكلى التي تخضع لعمليات زرع. ومع ذلك ، فإن تطبيقه في سياق تجربة سريرية سيكون ضروريًا لإثبات فائدة تطبيقه في عملية زرع الكلى مسبقًا. إن حمض الهيالورونيك غير محدد وقد يزيل الجزيئات المفيدة ، بالإضافة إلى الجزيئات الضارة بالعضو. لقد وجدنا أن التأثير الصافي لـ HA على نسخة الكلى يبدو مفيدًا ، ولكن قد يكون التحسين لإزالة الوسطاء المؤذيين المثبتين على وجه التحديد أكثر فاعلية.

كانت أزواج الكلى التي استخدمناها من نفس الفرد وبالتالي كانت متطابقة وراثيًا وشهدت بيئة مماثلة طوال حياة المتبرع. لقد أكدنا أن وقتهم 0 كان متشابهًا للغاية (الشكل S2 A ، B). ومع ذلك ، فإن هذه الخزعات تأخذ عينة من جزء صغير من الكلى ، ويمكن أن تتأثر أزواج الكلى بشكل غير متماثل بعلم الأمراض ، على سبيل المثال ، الخراجات ، أو مرض الأوعية الدموية الصغيرة. تحذير إضافي هو أن جميع الكلى المستخدمة في تجارب التدخل المعروضة هنا قد تم رفضها للزرع وبعضها يمثل الأعضاء المزروعة في الطرف الأدنى من طيف الجودة. ومع ذلك ، لاحظنا نتائج عالية التكاثر عند مقارنة مسارات الجينات في مجموعات من خمس كلى. تمكنا أيضًا من إثبات أن الكلى من DCD و DBD لديها استجابة مماثلة للتروية. من خلال دمج هذا مع توقيع DGF المنسق بعد NMP ، تمكنا من التنبؤ بالفوائد السريرية المحتملة. يمكن استخدام هذا النهج التجريبي كأداة قبل السريرية لفحص التدخلات المستقبلية للفعالية العلاجية المحتملة لتمكين الاختيار العقلاني للتدخلات المرشحة للتجارب السريرية.

باختصار ، توفر دراستنا أول ملف نسخي عالمي للكلى البشرية التي تخضع لـ NMP ، وحل المسارات الجزيئية المختلفة التي يتم تنشيطها في NMP مقارنة بالتخزين البارد ، وإظهار أن الآثار الضارة للجزيئات النشطة بيولوجيًا التي يتم إنتاجها أو إطلاقها من الكلى خلال NMP يمكن يمكن عكسها بإضافة HA. علاوة على ذلك ، قلل هذا التدخل من التعبير عن الجينات المرتبطة بـ DGF المطول مما وفر أساسًا ميكانيكيًا قويًا لتطبيق مثل هذا التدخل في تجربة سريرية مستقبلية. بياناتنا لها أيضًا آثار على استراتيجيات التروية خارج الكلى ، بما في ذلك زراعة الكبد والرئة ، مما يشير إلى أنه يجب التحقيق في إزالة الجزيئات النشطة بيولوجيًا من السوائل في هذه السياقات حيث يتم استخدام NMP بشكل متزايد. أخيرًا ، تسلط دراستنا الضوء على فائدة التنميط النسخي العالمي في أزواجالكلىلتقييم التدخلات الجديدة للأعضاء المروية ؛ التغييرات النسخية تسبق التغييرات في وفرة البروتين (تستخدم تقليديًا كمؤشرات حيوية لـالكلىإصابة) وعشرات الآلاف من نسخ الجينات يمكن قياسها بسهولة. وبالتالي ، فإن قياس الحمض النووي الريبي لديه القدرة على توفير قراءة مبكرة وحساسة للوظيفة الخلوية للأعضاء البشرية المسترجعة للزرع والتي يمكن تطبيقها على الدراسات المستقبلية.

شكر وتقدير

المؤلفون أشكر جميع المتبرعين بالأعضاء وعائلاتهم. يُعرب مختبر Clatworthy عن امتنانه للمرافق الأساسية التي يوفرها مختبر MRC للبيولوجيا الجزيئية. تم تنفيذ هذا العمل باستخدام الموارد المقدمة من Cambridge Service for Data-Driven Discovery (CSD3) التي تديرها خدمة الحوسبة البحثية بجامعة كامبريدج ، والتي تقدمها Dell EMC و Intel باستخدام تمويل من المستوى -2 من أبحاث الهندسة والعلوم الفيزيائية المجلس (منحة رأس المال EP / P020259 / 1) ، وتمويل DiRAC من مجلس منشآت العلوم والتكنولوجيا (www. Dirac. ac. the UK).

إفشاء

الكتاب ليس لديهم تضارب في الكشف عن المصالح كما هو موضح في المجلة الأمريكية للزرع.

الكاتب الاشتراكات

صممت JRF و SH و MLN و MRC الدراسة وفسرت البيانات. أجرى JRF و SH و TM و CJW و AF و TCD التجارب. قامت JRF و SH و MRC بإنشاء أشكال وجداول. كتب MRC المخطوطة الرئيسية. قام JRF و SH بإنشاء الأساليب والأساطير الشكلية ، وقام JRF و SH و MLN بتحرير المخطوطة.

فائدة Cistanche: تحسين وظائف الكلى

مراجع:
1. Methven S، Steenkamp R، Fraser S. UK Renal Registry، التقرير السنوي التاسع عشر: الفصل الخامس البقاء وأسباب الوفاة في المرضى البالغين في المملكة المتحدة على علاج استبدال الكلى في عام 2015: التحليلات الوطنية والمركزية المحددة. نفرون. 2017 ؛ 137 (1): 117-150.
2. سامرز DM ، جونسون RJ ، ألين J ، وآخرون. تحليل العوامل التي تؤثر على النتيجة بعد زراعة الكلى المتبرع بها بعد الموت القلبي في المملكة المتحدة: دراسة جماعية. لانسيت. 2010 ؛ 376 (9749): 1303-1311.
3. سامرز دم ، جونسون آر جيه ، هدسون أ ، كوليت د ، واتسون سي جيه ، برادلي جا. تأثير عمر المتبرع ووقت التخزين البارد على النتائج في متلقي الكلى المتبرع بهم بعد موت الدورة الدموية في المملكة المتحدة: دراسة جماعية. لانسيت. 2013 ؛ 381 (9868): 727-734.
4. Friedewald JJ ، Rabb H. الخلايا الالتهابية في الفشل الكلوي الحاد الإقفاري.الكلىكثافة العمليات 2004 ؛ 66 (2): 486-491.
5. كونو إتش ، روك كوالا لمبور. كيف تنبه الخلايا المحتضرة جهاز المناعة إلى الخطر. نات ريف إمونول. 2008 ؛ 8 (4): 279-289.
6. بيري إم ، كلاتوورثي إم آر. العلاج المناعي للحالات الحادةالكلىإصابة. العلاج المناعي. 2012 ؛ 4 (3): 1-12.
7. Parikh CR ، و Coca SG ، و Thiessen-Philbrook H ، وآخرون. تتنبأ المؤشرات الحيوية بعد الجراحة بالحادةالكلىالإصابة والنتائج السيئة بعد جراحة القلب للبالغين. J آم سوك نفرول. 2011 ؛ 22 (9): 1748-1757.
8. Hall IE ، Yarlagadda SG ، Coca SG ، et al. يتنبأ IL -18 و NGAL البولية بغسيل الكلى واستعادة الكسب غير المشروع بعد ذلكالكلىالزرع. J آم سوك نفرول. 2010 ؛ 21 (1): 189-197.
9. Malyszko J ، Lukaszyk E ، Glowinska I ، Durlik M. المؤشرات الحيوية لوظيفة الكسب غير المشروع المتأخرة كشكل من أشكال الحادةالكلىإصابة فيالكلىالزرع. مندوب علوم .2015 ؛ 5: 11684.
10. Hosgood SA ، Nicholson ML. أول زرع كلى في الرجل بعد نضح طبيعي حراري خارج الجسم. الزرع. 2011 ؛ 92 (7): 735-738.
11. يونغ سي ، هوسجود سا ، نيكلسون مل. نضح طبيعي حراري خارج الجسم الحي في زراعة الكلى: الماضي والحاضر والمستقبل. زرع الأعضاء بالعملة. 2016 ؛ 21 (3): 301-307.
12. فيشر أ ، أندريسون أ ، كريسوس أ ، وآخرون. دراسة قائمة على الملاحظة حول Donor Ex Vivo Lung Perfusion في زراعة الرئة في المملكة المتحدة: DEVELOP-UK. تقييم Health Technol. 2016 ؛ 20 (85): 1–276.
13. Slama A ، Schillab L ، Barta M ، et al. شراء الرئة من المتبرع المعياري باستخدام نضح الرئة الطبيعي خارج الجسم الحي: تجربة سريرية عشوائية مستقبلية. زرع القلب والرئة. 2017 ؛ 36 (7): 744-753.
14. نصرالله D ، Coussios CC ، Mergental H ، وآخرون. تجربة عشوائية للحفظ الطبيعي للحرارة في زراعة الكبد. طبيعة سجية. 2018 ؛ 557 (7703): 50-56.
15. بارلو أد ، حامد مو ، مالون د إتش ، وآخرون. استخدام التروية الحرارية العادية خارج الجسم الحي لتقييم الجودة للبنكرياس المتبرع البشري المهملة. أنا زرع الأعضاء. 2015 ؛ 15 (9): 2475-2482.

16. Hosgood SA، Saeb-Party K، Hamed MO، Nicholson ML. زرع ناجح للكلى البشرية يعتبر غير قابل للزرع ولكن تم إنعاشه عن طريق نضح الجهاز الطبيعي للحرارة. أنا زرع الأعضاء. 2016 ؛ 16 (11): 3282-3285.
17. Hosgood SA ، Saeb-Party K ، Wilson C ، Callaghan C ، Collett D ، Nicholson ML. بروتوكول تجربة معشاة ذات شواهد مفتوحة التسمية للتروية الحرارية الطبيعية خارج الجسم الحي مقابل التخزين البارد الثابت في التبرع بعد زرع الكلى بموت الدورة الدموية. BMJ مفتوح. 2017 ؛ 7 (1): e012237.
18. Hosgood SA، Moore T، Kleverlaan T، Adams T، Nicholson ML. يقلل Haemoadsorption من الاستجابة الالتهابية ويحسن تدفق الدم أثناء التروية الكلوية خارج الجسم الحي في نموذج تجريبي. جي ترجمة ميد. 2017 ؛ 15 (1): 216.
19. كريبس ها. تاريخ دورة حمض الكربوكسيليك. منظور بيول ميد. 1970 ؛ 14 (1): 154-170.
20. Hoogland ER، de Vries EE، Christiaans MH، Winkens B، Snoeijs MG، van Heurn LW. قيمة تركيز المرقم الحيوي نضح الآلة في DCDالكلىالزرع. الزرع. 2013 ؛ 95 (4): 603-610.
21. فان بالكوم BWM ، Gremmels H ، Ooms LSS ، وآخرون. البروتينات الموجودة في سائل الحفظ كمتنبئات لتأخر وظيفة الكسب غير المشروع في الكلى من المتبرعين بعد موت الدورة الدموية. كلين J آم سوك نيفرول. 2017 ؛ 12 (5): 817-824.
22. Kogelmann K، Jurczak D، Scheller M، Druner M. Hemoadsorption by CytoSorb في مرضى الإنتان: سلسلة حالات. العناية الحرجة. 2017 ؛ 21 (1): 74.
23. David S، Thamm K، Schmidt BMW، Falk CS، Kielstein JT. تأثير إزالة السيتوكينات خارج الجسم على وظيفة الحاجز الوعائي في مريض الصدمة الإنتانية. العناية المركزة. 2017 ؛ 5:12.
24. Li L ، Huang L ، Vergis AL ، et al. ينظم IL -17 الذي تنتجه العدلات ترحيل العدلات IFN بوساطة جاما في الماوسالكلىإصابة نقص تروية ضخه. ياء كلين إنفست. 2010 ؛ 120 (1): 331–342.
25. Hayama T ، Matsuyama M ، Funao K ، et al. تأثير مفيد لمثبط الإيلاستاز العدلات على إصابة نقص التروية الكلوية الدافئة - ضخه في الفئران. عملية الزرع. 2006 ؛ 38 (7): 2201-2202.
26. Saat TC ، Susa D ، Roest HP ، وآخرون. مقارنة بين ملامح التعبير الجيني الالتهابي والواقي للخلايا والإصابة في الكلى من الموت الدماغي والمتبرعين بالموت القلبي. الزرع. 2014 ؛ 98 (1): 15-21.
27. Ravaioli M ، Baldassare M ، Vasari F ، et al. استراتيجيات لاستعادة مستوى الأدينوزين ثلاثي الفوسفات (ATP) بعد أكثر من 20 ساعة من وقت نقص التروية الباردة في الإنسان الهامشيالكلىالطعوم. زرع آن. 2018 ؛ 23: 34-44.
28. حميد آم ، لو دي بي ، باتريك إي وآخرون. يجدد نضح آلة نورموثرميك وجيز الكلى البشرية المهملة. الزرع المباشر. 2019 ؛ 5 (11): e502.