الكشف عن الاستجابة المناعية الخلطية والخلوية للقاح المضاد لـ SARS-CoV-2 BNT162b2 لدى النساء المرضعات والأفراد الساذجين والمصابين سابقًا

استكشفت هذه الدراسة الاستجابات الخلطية والخلوية للقاح المضاد لـ SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA لدى النساء المرضعات والأفراد الساذجين والإيجابيين مصليًا في الأشهر الستة الأولى بعد التطعيم. تم تسجيل واحد وستين متطوعًا تم تطعيمهم بجرعتين من لقاح BNT162b2 mRNA في الدراسة. تم استخدام ELISA المطور داخليًا لتقدير الأجسام المضادة الخاصة بـ SARS-CoV-2 RBD. وأجريت التعبير علامة سطح الخلية وتحليل IFN داخل الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي. تم تحديد تركيزات IFN-، IL-6، وTNF بواسطة ELISA. ولوحظ ارتفاع كبير في مستويات الأجسام المضادة IgG المضادة لـ RBD بعد 14 يومًا من جرعة اللقاح الأولى (ص< 0.0001) in serum and milk. The expression of CD28 on CD4+ T cells was significantly higher compared to baseline (p< 0.05). There was a significant increase (p≤ 0.05) in the B cell lymphocyte subset after revaccination and an increased percentage of CD80+ B cells. The expression of IFN-γ in peripheral blood lymphocytes, CD3+ T cells, and serum was significantly increased (p< 0.05). No significant difference in immune response was observed between breastfeeding women and other study participants. The anti-SARS CoV-2 BNT162b2 mRNA vaccine induced measurable and durable immune response in breastfeeding women and naïve and previously infected individuals. 

فوائد سيستانش للرجال - تقوية جهاز المناعة

انقر هنا لعرض منتجات Cistanche Enhance Immunity

【اطلب المزيد】 البريد الإلكتروني: cindy.xue@wecistanche.com / تطبيق Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1 المقدمة 

أدى الانتشار العالمي لفيروس SARS-CoV-2 بعد تسجيل أول حالة خاصة في 31 ديسمبر 2019 في ووهان، الصين، إلى انتشار جائحة عالمي لمرض فيروس كورونا-19 (COVID{{ 5}})، مع حوالي 648 مليون حالة و6.6 مليون حالة وفاة حتى 18 ديسمبر 20221. ارتبطت الوفيات في مرض كوفيد-19 بالإفراط في إنتاج السيتوكينات المسببة للالتهابات مثل IL-6 وTNF- و IL-1، ما يسمى "عاصفة السيتوكين"، والتي قد تؤدي إلى متلازمة الضائقة التنفسية الحادة وتلف الأنسجة بشكل واسع مما يؤدي إلى فشل العديد من الأعضاء2. ومع ذلك، كان من المتوقع أن تساهم التحسينات السريعة في التشخيص والعلاج وإدخال التطعيم في انخفاض مطرد في عدد الأفراد المصابين، والحاجة إلى دخول المستشفى، وفي نهاية المطاف خفض معدل الوفيات. في صربيا، حدثت أول حالة مسجلة رسميًا في 6 مارس 2020، وبدأ التطعيم في 24 ديسمبر 2020. حاليًا، هناك أربعة لقاحات متاحة لعامة السكان، Vero Cell-Inactivated (Sinopharm)، Vaxzevria (ChAdOx{{ 22}}S [مؤتلف]، وAstraZeneca)، وSputnik V (Gam-COVID-Vac، وGamaleya)، وComirnaty (BNT162b2، وBioNTech-Pfizer). بالإضافة إلى إنتاج أجسام مضادة محددة، فإن الاستجابة المناعية الفعالة ضد السارس-CoV-2 تتطلب تنشيط المناعة الخلوية. من المتوقع أن مكونات المناعة الخلوية، بما في ذلك CD{29}} المساعدة والخلايا CD{30}} T السامة للخلايا، والخلايا القاتلة الطبيعية (NK)، والخلايا B، خلال الساعات والأيام الأولى بعد التعرض لهذا الفيروس تقليل أعراض المرض، ومنع تطور المرض، والاستشفاء، والوفاة. يمكن للخلايا التائية المساعدة (T) المنشطة أن تقتل الخلايا المصابة بشكل غير مباشر، وتدعم وظيفة الخلايا البائية واستجابة الأجسام المضادة، عن طريق إنتاج الإنترفيرون (IFN-)3،4. لقد ثبت أن النمط الظاهري T1 يرتبط بانخفاض خطورة مرض كوفيد-19، وبالتالي فإن استراتيجيات تطوير لقاحات كوفيد-19 يجب أن تأخذ في الاعتبار أيضًا إمكانية تنشيط الخلايا التائية لإنتاج الإنترفيرون. تم الإبلاغ عن أن المناعة الخلوية لـ SARS-CoV-2 يمكن اكتشافها لمدة تصل إلى 6 أشهر بعد الإصابة لدى أكثر من 90% من الأفراد6. وبالتالي، كان من المتوقع أن يؤدي التطعيم إلى ظهور مناعة خلوية قابلة للقياس من شأنها أن تساهم في المعركة ضد الوباء. أظهرت النتائج الجديدة أنه إلى جانب تنشيط الخلايا البائية في المراكز الجرثومية7، فإن اللقاحات المضادة لـ SARS-CoV-2 mRNA يجب أن تولد استجابات الخلايا التائية CD4+ وCD8+ الخاصة بالبروتين الشوكي8. على الرغم من أن عيار الأجسام المضادة يرتبط عادة بفعالية اللقاح، إلا أن الخلايا البائية والتائية مهمة في الحماية عند إعادة التعرض لمستضدات الفيروس. من المتوقع أن يتم إنشاء خلايا الذاكرة B وT هذه بواسطة لقاحات الحمض النووي الريبي المرسال (SARS-CoV-2) ويجب أن يكون لها دور في التحكم في تكاثر الفيروس، مما يحد من انتشار الفيروس9. على الرغم من عدم الإبلاغ عن أي أحداث سلبية شديدة، فإن الاستجابة المحددة للتطعيم ضد السارس-CoV-2 لدى النساء الحوامل والمرضعات والرضع الذين تلقت أمهاتهم اللقاح أثناء الرضاعة لا تزال قيد التقييم وتظل موضوعًا مثيرًا للجدل. يهدف هذا البحث إلى استكشاف لأول مرة الاستجابات الخلطية والخلوية الشهرية للقاح مضاد لـ SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA لدى النساء المرضعات والأفراد الساذجين والمصابين بالمصل، في الأشهر الستة الأولى بعد التطعيم في صربيا، و متابعة ذاتية لمدة عامين للسلامة على المدى الطويل.

المواد والطرق

تصميم الدراسة وجمع العينات ومعالجتها.

تم تسجيل إجمالي 61 متطوعًا (45 SARS-CoV-2 ساذج، و16 SARS-CoV-2 تم شفاؤهم وفقًا لتقارير مؤكدة بواسطة PCR) في الدراسة وتمت مراقبتهم في الفترة من يناير إلى 2 نوفمبر{ {11}}21. كان متوسط ​​الوقت بين الإصابة الطبيعية والتطعيم لدى الأفراد المصابين سابقًا 3.18 ± 0.98 شهرًا، بمدى يتراوح بين 2-5 أشهر. كان عمر جميع المشاركين أكبر من 18 عامًا ولم تظهر عليهم أي علامات لالتهابات الجهاز التنفسي في وقت التطعيم. وكان معظم المشاركين من العاملين في مجال الرعاية الصحية من معهد الأورام والأشعة في صربيا (44؛ 72٪). تم تطعيم المشاركين بجرعتين من لقاح BNT162b2 mRNA (بفارق 3 أسابيع). تم إجراء جميع عمليات سحب الدم في المراكز الطبية المعتمدة بموجب بروتوكولات ومراقبة صارمة. كان أربعة مشاركين من الأمهات المرضعات اللاتي تطوعن لمطابقة عينات الدم والحليب. تم جمع العينات في 6-نقاط زمنية: النقطة 1 - التطعيم (خط الأساس)، النقطة 2-14 يومًا للتحصين بعد المرحلة الأولية، النقطة 3-1 شهر للتحصين بعد المرحلة الأولية، النقطة 4-2 أشهر للتحصين بعد المرحلة الأولية، نقطة 5-3 أشهر من التحصين بعد الابتدائي، ونقطة 6-6 أشهر بعد التحصين الأولي. تم أخذ عينات من 10-20 مل من الدم المحيطي لكل نقطة زمنية، بالإضافة إلى 1 مل من الحليب لأربع نساء مرضعات مشاركات. تم الحصول على المصل من الدم المحيطي عن طريق الطرد المركزي مباشرة بعد سحب الدم وتخزينه عند درجة -20 درجة. تم عزل خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMC) من الدم المصاب بالهيبارين باستخدام تدرج كثافة Lymphoprep (Nypacon، أوسلو، النرويج)، وطردها عند 500 جم لمدة 40 دقيقة، وغسلها ثلاث مرات في وسط ثقافة RPMI 1640 (CM) (Sigma، St. Louis). ، MO) مكمل بـ 10٪ من مصل العجل الجنيني (FCS) (Sigma، St. Louis، MO). بعد الغسيل، تم استخدام PBMC على الفور لتحليل النمط المناعي. تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات التابعة لمعهد الأورام والأشعة في صربيا (رقم 899-01 بتاريخ 01.04.2021)، ووقع جميع المشاركين على موافقة مستنيرة. وأجريت مقابلات مع جميع المشاركين من قبل الطاقم الطبي من ذوي الخبرة. تم إجراء متابعة ذاتية طويلة المدى للآثار الضارة بعد التطعيم خلال عامين بعد جرعة اللقاح الأولى.

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

الكشف عن الأجسام المضادة الخاصة بـ SARS-CoV-2 RBD وتقديرها.

تم تنفيذ التعبير عن RBD لبروتين ارتفاع SARS-CoV-2 (NCBI: YP_009724390، AA319-541) في خط الخلايا التائية HEK-293 باتباع إجراء منشور مسبقًا 12 . تمت تنقية البروتين المؤتلف حتى التجانس، وكان العائد الذي تم الحصول عليه 5 {{2 0}} 0 ملغ لكل لتر من ثقافة الخلية. باختصار، تم استخدام بروتين RBD المؤتلف لتغليف صفائح البئر ذات القاع الدهني (Thermo Scientific NUNC-MaxiSorp، الولايات المتحدة الأمريكية) بتركيز نهائي قدره 10 ميكروغرام / مل (50 ميكرولتر / بئر) في محلول الطلاء (15 مم) Na2CO3/35 ملي NaHCO3، درجة الحموضة 9.5) عند 4 درجات خلال الليل. تم غسل الألواح باستخدام TBS الذي يحتوي على 0.05٪ Tween 20 (TBST) وتم حظرها بـ 1٪ BSA في TBST لمدة ساعتين عند 37 درجة. تم تحضين الأمصال المخففة عند 37 درجة لمدة ساعة واحدة في TBST تحتوي على 0.1% من BSA، ثم تم غسل الأطباق باستخدام TBST. لتحديد إجمالي IgG المحدد، تم تخفيف الجسم المضاد المصاحب لـ IgG-AP من الماعز (Novus Biologicals، الولايات المتحدة الأمريكية) بنسبة 1/1000 في محلول مانع وإضافته إلى الآبار. بعد الحضانة لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة، تم غسل الأطباق 5 مرات باستخدام TBST وتم تطويرها باستخدام 4- فوسفات نيتروفينيل لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة. تم قياس الامتصاصية عند 450 نانومتر (A450).

تحليل التدفق الخلوي.

تم التعرف على النمط المناعي لسطح الخلية للخلايا أحادية النواة للدم المحيطي (PBMCs) باستخدام المجموعات التالية من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ذات العلامات المباشرة (mAbs): CD3FITC/CD28PE/CD4PerCP، CD80PE/CD19PerCP، CD80PE/CD14PerCP (Becton Dickinson، San Jose، USA). تم تحضير العينات كما هو موضح سابقًا باستخدام 1 × 105 PBMCs معزولة حديثًا في 100 ميكرولتر RPMI 1640 مكملة بـ 10٪ من مصل العجل الجنيني (FCS، Sigma)، المحتضنة لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مع 20 ميكرولتر من تركيبة mAb المناسبة، وغسلها مرتين باستخدام الجليد البارد الفوسفات مخزنة المالحة (PBS)، وثابتة مع بارافورمالدهيد 1٪ قبل تحليل FACS. تم قياس كمية تعبير علامة السطح على مقياس التدفق الخلوي FACSCalibur (Becton – Dickinson، San Jose، USA). تم التحقق من إجمالي 10،000–50،000 حدثًا مسورًا على أنها خلايا لمفاوية دموية محيطية (PBLs) وخلايا وحيدة، وفقًا لخصائصها الفيزيائية، وخصائص التشتت الأمامي (FSC)، وخصائص التشتت الجانبي (SSC) ) ، تم جمعها لكل عينة وتحليلها باستخدام برنامج CellQUEST. تم التعبير عن مجموعات فرعية من الخلايا كنسبة مئوية في الدم المحيطي.

تحليل IFN داخل الخلايا.

للتلوين داخل الخلايا لـ IFN 1 ×، تم تحضين 106 PBMCs باستخدام أسيتات Phorbol 12- ميريستات 13- (PMA) (50 نانوغرام / مل) بالإضافة إلى الأيونوميسين (500 نانوغرام / مل) لمدة 4 ساعات عند 37 درجة و مع Brefeldin A (10 ميكروغرام/مل) لآخر 3 ساعات، كما هو موضح سابقًا. تم تلوين الخلايا أولاً للمستضد السطحي باستخدام الجسم المضاد CD3 PerCP، الثابت وبعد النفاذية باستخدام محلول نفاذية BD FACS 2 (BD Biosciences) الملون لمضاد IFN-PE (Becton Dickinson). يتم التعبير عن IFN داخل الخلايا كنسبة مئوية في PBLs، وكذلك في الخلايا الليمفاوية CD3 T.

إليسا.

تم تحديد تركيزات IFN- وIL-6 وTNF في أمصال المشاركين الذين تم فحصهم بواسطة مجموعات ELISA التجارية غير المطلية، وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة (Invitrogen). تم تحديد تركيزات السيتوكينات عند النقطة 1 (قبل التطعيم)، والنقطة 3 (شهر واحد بعد التحصين الأولي)، والنقطة 4 (شهرين بعد التحصين الأولي). باختصار، كانت لوحات ELISA مغلفة بأجسام مضادة مناسبة في محلول الطلاء وحضنت طوال الليل عند 4 درجات. أولاً، تم غسل الأطباق وسدها باستخدام مخفف ELISA/ELISAASPOT. بعد ساعة واحدة من الحضانة، تم غسل الأطباق وإضافة عينات ومعايير المصل إلى الآبار. بعد الحضانة، والغسيل، والطموح، وفقا لتعليمات الشركة المصنعة، تمت إضافة محلول الكشف عن الأجسام المضادة إلى كل بئر. وبعد ذلك، تم غسل اللوحات واستنشاقها؛ تمت إضافة محلول avidin-HRP إلى الآبار واحتضانه لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك، تم غسل الأطباق، وتم إضافة محلول TMB (3،3′،5،5′-Tetramethylbenzidine) إلى كل بئر. تم تحضين الأطباق لمدة 15 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة، وتم إنهاء التفاعل الأنزيمي بإضافة محلول توقف. تم قياس الامتصاصية عند 450/520 نانومتر باستخدام قارئ لوحة Multiskan EX Termo Labsystems. تحليل احصائي. يتم عرض النتائج كقيم فردية مع الخطأ المعياري للوسط (SEM). تمت مقارنة الاختلافات بين القيم باستخدام اختبار t غير متزاوج واختبار رتبة موقعة ويلكوكسون واعتبرت النتائج ذات دلالة إحصائية إذا كانت p<0.05. The analysis was performed using GraphPad Prism 9.0 (GraphPad, La Jolla, CA, USA).

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

نتائج

3.1 المشاركين في الدراسة ومعالجة المصل/الحليب.

يتم عرض خصائص المشاركين في الدراسة في الجدول 1. من بين 61 متطوعًا تلقوا اللقاح المضاد لـ SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA، تم جمع إجمالي 344 عينة مصل في 6 نقاط زمنية، بدءًا من خط الأساس قبل التطعيم إلى 6 أشهر بعد نقطة التطعيم الأولى. أبلغ معظم المشاركين في الدراسة (97٪) عن ردود فعل سلبية محلية للتطعيم في شكل ألم خفيف في الذراع/الكتف والتعب، والذي استمر لمدة 1-2 أيام. تلقى ثلاثة مشاركين فقط جرعة اللقاح الثانية مع تأخير، اثنان بسبب آثار ضارة على التطعيم الأولي (طفح جلدي، حساسية)، وواحد بسبب اكتشاف الحمل بعد الجرعة الأولى. ولم يتم الإبلاغ عن أي إصابة بين جرعتي اللقاح. بعد ستة أشهر من المراقبة، أصيب 3 (5%) فقط من المشاركين بفيروس SARS-CoV-2، ولم يتم اكتشاف أي شكل خطير من المرض يتطلب دخول المستشفى. حملت سبع مشاركات بعد التطعيم، واحدة بعد أسبوعين من الجرعة الأولى، وواحدة بعد 4 أشهر من الجرعة الأولى، و5 على مدى 12 شهرًا بعد الجرعة الأولى. كشفت المتابعة الذاتية طويلة المدى عن عدم وجود آثار ضارة مرتبطة بالتطعيم لمدة تصل إلى عامين بعد الجرعة الأولى، لدى النساء المرضعات أو أي مشارك آخر في الدراسة.

القياس الكمي للأجسام المضادة الخاصة بـ SARS-CoV-2 RBD في مصل وحليب المشاركين في الدراسة.

عند تحليل مستويات الأجسام المضادة لـ RBD IgG بعد التطعيم في المصل، لوحظ ارتفاع كبير في مستويات الأجسام المضادة لـ RBD IgG حتى بعد 14 يومًا من جرعة اللقاح الأولى في المجموعة التي تم تحليلها بالكامل مقارنة بمستويات IgG قبل التطعيم (17.47 ± 51.49 AU) / مل مقابل 7828.28 ± 24,157.29 الاتحاد الأفريقي / مل، ص<0.0001) (Fig. 1a). Te serum levels of anti-RBD IgG continued to rise to 2 months post-vaccination, when a decrease was detected, which lasted up to 6 months, steadily. The levels of anti-RBD IgG antibodies were compared at each time point between naïve and previously infected individuals (Fig. 1b-c), and it was determined that the difference was statistically significant at baseline (point 1), as previously infected individuals had a higher level of antibodies before vaccination (7.23±0.77 AU/mL vs. 54.47±101.40 AU/mL, p<0.01). The difference was statistically significant also in points 2 (3979.48±3277.27 AU/mL vs. 22,581.99±49,570.63 AU/mL, p<0.05), 5 (2369.16±1934.31 AU/ mL vs. 6366.83±6875.85 AU/mL, p<0.01), and 6 (461.96±375.41 AU/mL vs. 766.04±317.35 AU/mL, p<0.05). The decline in antibody levels had the same dynamics in both groups but remained at higher levels in previously infected individuals for up to 6 months. No other analyzed parameters were correlated with a significantly different level of antibodies in serum (age, gender, smoking status). When comparing levels of anti-RBD IgG antibodies in other participants and breastfeeding women (Fig. 1d-e), no significant differences in serum antibody levels were observed in any of the comparisons. Anti-RBD IgG antibodies were also detected in the milk of 4 breastfeeding women (Fig. 1f). In lower levels, they presented with the same dynamics of rising and decline as detected in the serum. Comparing the levels of anti-RBD IgG antibodies in milk at each time point to baseline, (Fig. 1f), it was determined that the difference was statistically significant at points 2 (6.57±0.77 AU/mL vs. 152.13±35.83 AU/ mL, p<0.01) and 6 (6.57±0.77 AU/mL vs. 117.31±25.64 AU/mL, p<0.01).

الجدول 1. خصائص المشاركين في الدراسة.

الشكل 1. مستويات الأجسام المضادة IgG في الدم لـ RBD في (أ) المجموعة التي تم تحليلها بالكامل، (ب الساذج، ج) الأفراد المصابين سابقًا، (د) المجموعة بأكملها دون النساء المرضعات، (هـ) النساء المرضعات، و (و) في حليب المرأة المرضعة. يتم عرض النتائج كقيم فردية مع الخطأ المعياري للمتوسط ​​(SEM) لثلاث مكررات مستقلة. وتمت مقارنة الاختلافات بين القيم باستخدام اختبار t غير المقترن واعتبرت النتائج ذات دلالة إحصائية إذا كانت p<0.05. * p<0.05; **p<0.01; *** p<0.0001.

تحليلات التدفق الخلوي وداخل الخلايا IFN.

أظهرت البيانات التي تم الحصول عليها عن طريق التحليل الخلوي أن تعبير CD28 على الخلايا التائية CD4+ في الدم المحيطي بعد شهرين من جرعة اللقاح الثانية كان أعلى بشكل ملحوظ مقارنة بالقيم قبل التطعيم (42.84±5.37% مقابل 37.75) ±5.96%، ص<0.05, Wilcoxon signed-rank test) (Fig. 2a). Tere was a signifcant increase (p≤0.05, Wilcoxon signed rank test) in the prevalence of B cell lymphocyte subset (CD19+) from 6.87±1.17% to 8.73±1.54%, two months afer revaccination, as well as an increased percentage of CD80+ B cells from 1.72±0.28% to 1.99±0.28% (Fig. 2b). Furthermore, fve weeks afer revaccination, a signifcant (p≤0.05, Wilcoxon signed rank test) increase in the percentage of CD14+CD80+ cells from 1.15±0.38% to 5.87±0.95% was detected in the monocyte gate (Fig. 2c). Te expression of IFN-γ in PBLs, as well as in CD3+ T cells was signifcantly (p < 0.05, Wilcoxon signed rank test) increased at 1 week afer the second vaccine dose (1.84 ± 0.13% in PBL and 1.32 ± 0.10% in CD3+ T cells) compared to pre-vaccination baseline values (0.88 ± 0.13% in PBL and 0.72 ± 0.12% in CD3+ T cells) (Fig. 3a). Furthermore, serum levels of IFN-γ were signifcantly increased in all participants from the initial value of 16.69±0.29 pg/mL to 17.72±0.41 pg/mL (p<0.05, Wilcoxon signed rank test) (Fig. 3b), as well as in naive from 16.55±1.77 pg/mL to 17.26±2.53 pg/mL and in a group and previously infected individuals, from 15.93±2.01 pg/mL to 19.90±4.32 pg/mL at 1 week afer revaccination (Fig. 3c). Tere was no signifcant (p>0.05، اختبار رتبة موقع ويلكوكسون) الفرق في مستويات مصل IL-6 وTNF- 1 بعد أسبوع وخمسة أسابيع من جرعة اللقاح الثانية مقارنة بقيم ما قبل التطعيم في المجموع المجموعة ، وكذلك في الأفراد الساذجين أو المصابين سابقًا (الشكل التكميلي 1 أ-د).

مناقشة

كان لتفشي عدوى الجهاز التنفسي SARS-CoV-2 تأثير سلبي عميق على جوانب مختلفة من الحياة اليومية، بما في ذلك القضايا المجتمعية والتعليمية والمتعلقة بالصحة التي لا ترتبط بشكل مباشر بمرض COVID-19 نفسه16-18 . كان اتباع نهج التطعيم العالمي ضروريًا لاستكمال تدابير التباعد الاجتماعي في مكافحة المرض، واستكشفت العديد من الدراسات كفاءة وفعالية أنواع مختلفة من اللقاحات الموزعة في جميع أنحاء العالم خلال عام 2021. وفي صربيا، لا تتوفر حاليًا سوى التقارير المؤقتة عن المناعة الخلطية بعد شهرين وثلاثة أشهر من التطعيم. ، 20 وتتوافق مع البيانات الواردة في هذه الدراسة. في المجموعة التي تم تحليلها لمدة تصل إلى 6 أشهر بعد التطعيم، تم الكشف عن معدل الانقلاب المصلي بنسبة 100٪ بعد جرعة اللقاح الأولى. واضطر 5% فقط من المشاركين إلى تلقي جرعة اللقاح الثانية مع التأخير. لم تكن هناك تقارير عن الإصابة بفيروس SARS-CoV-2 بين جرعتين من اللقاح. وحتى ستة أشهر من المراقبة، أصيب 5% فقط من المشاركين، دون الحاجة إلى دخول المستشفى. كانت عيارات الأجسام المضادة لـ RBD SARS-CoV-2 IgG أعلى بكثير مقارنة بخط الأساس حتى بعد جرعة اللقاح الأولى، مما يساهم في فكرة أن استخدام لقاح BNT162b2 mRNA هو أسلوب فعال للاستجابات الخلطية السريعة ضد اللقاح الأصلي. سلالات الفيروس. استمرت مستويات مصل IgG في الارتفاع لمدة تصل إلى شهرين بعد التطعيم عندما تم اكتشاف انخفاض مطرد حتى فترة التحليل البالغة 6 أشهر. وُجد أن الأفراد المصابين سابقًا لديهم عيار IgG أعلى مقارنةً بالأفراد الساذجين لمدة تصل إلى 6 أشهر، وهو العامل الوحيد الذي ساهم في اختلاف مستويات الأجسام المضادة. تم أيضًا اكتشاف الأجسام المضادة لـ RBD IgG في حليب النساء المرضعات في دراساتنا وبعض الدراسات السابقة، مع ديناميكيات العيار المتطابقة كما في المصل. تم نشر تقارير مماثلة للأجسام المضادة IgA بعد العدوى الطبيعية . نظرًا لأن البيانات المتوفرة حاليًا محدودة حول مخاطر وفوائد تطعيم النساء المرضعات، فإن هذه النتائج واعدة في ضوء التحصين السلبي المحتمل للرضع الذين يتغذون على لبن الأم، حتى بعد 6 أشهر من تطعيم الأمهات. لم تتم ملاحظة فروق ذات دلالة إحصائية في مستويات الأجسام المضادة في المصل بين الأفراد الساذجين أو المصابين سابقًا والنساء المرضعات، مما يعزز الملاحظات القائلة بأن الاستجابة للقاحات المضادة لـ SARS-CoV-2 لا تتأثر بالرضاعة. تنص التوصيات الحالية على ضرورة أخذ التطعيم في الاعتبار لجميع الأفراد الذين تبلغ أعمارهم 6 أشهر فما فوق، بما في ذلك النساء الحوامل أو اللاتي يحاولن الحمل الآن أو في المستقبل والمرضعات، بغض النظر عن حالة إصابتهم السابقة بفيروس كورونا-1923. تساهم دراستنا في عبء الأدلة 24 التي تشير إلى عدم وجود ضرر مباشر على النساء المرضعات اللاتي يتلقين اللقاح المضاد لـ SARS-CoV-2 أو أطفالهن الذين يرضعون رضاعة طبيعية. أيضًا، سبعة من المشاركات في الدراسة حملن بعد التطعيم، وواحدة بعد أسبوعين من الجرعة الأولى، وواحدة بعد 4 أشهر من الجرعة الأولى، و5 على مدى 12 شهرًا بعد الجرعة الأولى. أكدت مقابلات المتابعة طويلة الأمد التي أجريت مؤخرًا مع المشاركين في الدراسة أنه لم تكن هناك أيضًا أي أضرار غير متوقعة للنساء المرضعات أو أطفالهن الذين يرضعون رضاعة طبيعية، أو أي مشارك آخر، بعد عامين من تلقي اللقاح المضاد لـ SARS-CoV-2.

الشكل 2. النسبة المئوية لـ (أ) CD3+CD28+ وCD4+CD28+ الخلايا الليمفاوية التائية، (ب) CD19+ وCD{{6} }}CD80+ الخلايا الليمفاوية B، (ج) CD14+CD80+ وحيدات الخلية في الدم المحيطي. يتم عرض نتائج Te كقيم فردية مع متوسط ​​خطأ قياسي للوسط (SEM). وتمت مقارنة الاختلافات بين القيم باستخدام اختبار رتبة موقعة ويلكوكسون واعتبرت النتائج ذات دلالة إحصائية إذا كانت p<0.05. * p<0.05.

أدى ظهور متغيرات جديدة مثيرة للقلق بالإضافة إلى وجود تقارير عن انخفاض سريع في مستويات الأجسام المضادة لفيروس السارس-2 بعد العدوى الطبيعية والتطعيم25 إلى زيادة عدم اليقين بشأن دور مكونات المناعة الخلوية. أفادت بعض الدراسات التي تستكشف الاستجابة المناعية للأفراد الذين تم تطعيمهم في صربيا عن مناعة خلطية فقط . في هذه الدراسة، تم اكتشاف زيادة في التعبير عن المستقبلات التقديرية CD28 على الخلايا التائية CD4+ وCD80 على الخلايا البائية بعد شهرين من إعطاء جرعة اللقاح الثانية. علاوة على ذلك، زاد تعبير CD80 على الخلايا الوحيدة 1-شهرًا بعد اكتمال التطعيم.

يتطلب تكاثر الخلايا التائية وتمايزها إلى خلايا فاعلة أو خلايا ذاكرة عرض المستضد والتحفيز المشترك والسيتوكينات. أفضل المحفزات المشتركة للخلايا التائية هي أزواج من الجزيئات، B7-1 (CD80) وB7-2 (CD86). يتم التعبير عن Tey عادةً على الخلايا المقدمة للمستضد (APCs) مثل الخلايا الجذعية، والخلايا البائية، والبلاعم، والخلايا الوحيدة، والخلايا التائية. يعد تعبيرهم على الوحيدات مهمًا أيضًا لتنشيط الخلايا الليمفاوية والمناعة التكيفية . يوجد مستقبلان رئيسيان على سطح الخلايا الليمفاوية التائية التي تربط CD80 وCD86 هما CD28، والبروتين المرتبط بالخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا 4 (CTLA-4). يؤدي الارتباط بـ CD28 إلى تنشيط الخلايا الليمفاوية وبالتالي تعزيز الاستجابة المناعية . تظهر النتائج التي تم الحصول عليها في هذه الدراسة أن الخلايا التائية CD4+ يتم تنشيطها بواسطة الحواتم المشتقة من المستضد S الموجودة على الخلايا البائية المنشطة والخلايا الوحيدة بعد شهرين من الجرعة الثانية من اللقاح. تشير بيانات مختلفة إلى أن خلايا CD4 T تم تنشيطها في الغالب بعد لقاح mRNA28،29، بينما في بعض الدراسات تم الإبلاغ عن ظهور وتنشيط كل من خلايا CD4 وCD8 T بشكل متساوٍ. تان وآخرون. لاحظت مؤخرًا أنه بعد 3 أشهر من التطعيم، كان متوسط ​​كمية الخلايا التائية الخاصة بـ Spike مكافئًا لما تم اكتشافه لدى مرضى النقاهة في وقت مماثل بعد الإصابة بـ SARS-CoV-2 31. علاوة على ذلك، يبدو أن مكونات المناعة التكيفية (سواء في المصابين سابقًا أو الذين تم تطعيمهم) يتم تنظيمها بشكل مستقل، وهناك نقص في الارتباط بين إنتاج الأجسام المضادة المضادة للفيروسات وتكرار الخلايا التائية. بالإضافة إلى ذلك، تثير لقاحات mRNA الحالية استجابات مناعية تقتصر على بروتين سبايك. ومع ذلك، فإن الدور الوقائي المحتمل للخلايا التائية الخاصة بالبروتينات الهيكلية وغير الهيكلية الأخرى سيتعين أيضًا تقييمه. إن فكرة أن اللقاحات متعددة المستضدات قد تمارس سيطرة أكبر على المتغيرات الفيروسية مقارنة بالقاحات أحادية المستضد، مثل اللقاحات القائمة على بروتين سبايك، قد يكون لها مبرر سليم 35،36.

الشكل 3. (أ) التعبير عن IFN- في جميع الخلايا الليمفاوية في الدم المحيطية وCD3+ T. مستوى مصل الإنترفيرون- في المجموعة (ب) التي تم تحليلها بالكامل، (ج) الأفراد الساذجون والمصابون سابقًا. يتم عرض النتائج كقيم فردية مع الخطأ المعياري للوسط (SEM). وتمت مقارنة الاختلافات بين القيم باستخدام اختبار رتبة موقعة ويلكوكسون واعتبرت النتائج ذات دلالة إحصائية إذا كانت p<0.05. * p<0.05.

في هذه الدراسة تم اكتشاف زيادة في مستويات الإنترفيرون- في جميع الخلايا الليمفاوية وفي الخلايا التائية CD3+ بعد 7 أيام من التطعيم الكامل. أيضًا، لوحظ زيادة مستوى الإنترفيرون- في مصل جميع الأفراد الذين تم تطعيمهم، سواء في SARS-CoV-2 الأفراد الساذجين أو المصابين سابقًا بعد 7 أيام من التطعيم الكامل. وهكذا، فإن الخلايا التائية الخاصة بالسبيكة والتي يسببها اللقاح والتي تعتمد على mRNA والتي تنتج الإنترفيرون بكثرة. الإنترفيرون- هو سيتوكين رئيسي له خصائص مضادة للفيروسات وقد ثبت أنه يمنع تكاثر SARS-CoV-28. يشير الاستنباط السريع لـ IFN- بواسطة لقاح BNT162b2 الموضح في هذه الدراسة إلى استجابة مناعية مواتية للخلايا التائية ضد فيروس SARS-CoV-2. يتضمن التفاعل المناعي الناجم عن فيروس SARS-CoV-2 أيضًا إنتاج العديد من السيتوكينات المسببة للالتهابات، في المقام الأول IL-6 وTNF- وقد ترتبط التغيرات في مستوياتها بتشخيص المرض. تم الإبلاغ عن حالات خطيرة ومميتة لـCOVID-19 لدى الأفراد الذين يعانون من زيادة في مستويات السيتوكينات37. ومع ذلك، في هذه الدراسة، لم يتم اكتشاف اختلاف كبير في مستويات المصل لـ IL-6 وTNF- بعد 7 أيام وحتى شهر واحد بعد التطعيم الكامل، وهو ما قد ينجم عن خصائص أترابية محددة وتوقيت أخذ العينات.

تمثل هذه البيانات التقارير الأولى المنشورة حول المناعة الدائمة مع الأخذ بعين الاعتبار المكون الخلطي والخلوي، والتي تركز على النساء المرضعات. قد يكون هذا مفيدًا بشكل خاص للتحليلات الوصفية المستقبلية لهذه المجموعات السكانية الفرعية الحساسة الأخرى، حيث أن البيانات من منطقة البلقان حول السكان السلافيين عادة ما تكون مفقودة من الجهود المتعددة الجنسيات الأكبر.

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

الاستنتاجات

أحدث اللقاح المضاد لـ SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA استجابات خلطية وخلوية قابلة للقياس ودائمة لدى النساء المرضعات وكل من الأفراد الساذجين والمصابين سابقًا في الأشهر الستة الأولى بعد التطعيم في صربيا. لم يتم الإبلاغ عن أي آثار عكسية خطيرة للتطعيم، وأصيب 5% فقط من المشاركين بفيروس SARS-CoV-2 في الأشهر الستة الأولى بعد التطعيم، دون الحاجة إلى دخول المستشفى. لم يتم الإبلاغ عن أي أضرار غير متوقعة للنساء المرضعات أو أطفالهن الذين يرضعون رضاعة طبيعية بعد عامين من تلقي اللقاح المضاد لـ SARS-CoV-2. يجب أن تركز الدراسات القادمة في هذا المجال على استراتيجيات البحث والتطوير في مجال اللقاحات التي قد تبقي فيروس كورونا-19 والأوبئة المماثلة المحتملة تحت سيطرة أسرع وطويلة الأمد. ويجب أيضًا استثمار الجهود لتوفير مبادئ توجيهية قائمة على المعرفة، ومعالجة المعلومات الخاطئة بشكل صحيح خاصة المحيطة بالمجموعات السكانية الفرعية الحساسة مثل النساء المرضعات، وتسهيل الوصول إلى اللقاحات في أوقات الحاجة الشديدة، وتعزيز الثقة العامة في العلوم.

فوائد cistanche-تقوية جهاز المناعة

مراجع

1. منظمة الصحة العالمية، لوحة التحكم الخاصة بفيروس كورونا التابع لمنظمة الصحة العالمية (COVID-19). https://covid19.who.int/ (2022).

2. هوجيو، س. وآخرون. كيف يتسبب فيروس كورونا-19 في إحداث عاصفة السيتوكين مع ارتفاع معدل الوفيات. إنفام. ريجين. 40، (2020).

3. van Eeden, C., Khan, L., Osman, MS & Tervaert, JWC خلل الخلايا القاتلة الطبيعية ودورها في مرض كوفيد-19. كثافة العمليات. جيه مول. الخيال العلمي. 21، 6351 (2020).

4. Sette, A. & Crotty, S. المناعة التكيفية لـ SARS-CoV-2 وCOVID-19. الخلية 184، 861–880 (2021).

5. تشن، G. وآخرون. المظاهر السريرية والمناعية لمرض فيروس كورونا الحاد والمعتدل 2019. J. Clin. يستثمر. 130، 2620–2629 (2020).

6. دان، JM وآخرون. تم تقييم الذاكرة المناعية لـ SARS-CoV-2 لمدة تصل إلى 8 أشهر بعد الإصابة. العلوم 80، 371 (2021).

7. تيرنر، شبيبة وآخرون. تحفز لقاحات SARS-CoV-2 mRNA استجابات مستمرة للمركز الجرثومي البشري. نات. 596، 109-113 (2021).

8. الرسام، مم وآخرون. يرتبط الحث السريع للخلايا التائية CD4+ الخاصة بمستضد محدد بالمناعة الخلطية والخلوية المنسقة لتطعيم SARS-CoV-2 mRNA. الحصانة 54، 2133-2142.e3 (2021).

9. جويل، ر.ر وآخرون. يحفز لقاح mRNA ذاكرة مناعية متينة لـ SARS-CoV-2 مع التطور المستمر للمتغيرات المثيرة للقلق. BioRxiv الإعدادية. سيرف. بيول. https://doi.org/10.1101/2021.08.23.457229, (2021)

10. Muyldermans، J.، De Weerdt، L.، De Brabandere، L.، Maertens، K. & Tommelein، E. Te تأثيرات التطعيم ضد فيروس كورونا -19 على النساء المرضعات: مراجعة منهجية للأدبيات. أمام. إيمونول. 13، 1498 (2022).

11. جولان، ي. وآخرون. تطعيم Covid-19 mRNA في الرضاعة: تقييم الأحداث الضائرة والأجسام المضادة المرتبطة باللقاح في ثنائيات الأم والرضيع. أمام. إيمونول. 12، 777103 (2021).

12. أربيتمان، سي آر وآخرون. المقارنة الهيكلية والوظيفية لمجال ربط مستقبلات SARS-CoV-2- المنتجة في Pichia Pastoris وخلايا الثدييات. الخيال العلمي. النائب 10، 21779 (2020).

13. كونييفيتش، ج. وآخرون. تقييم القدرة الوظيفية للخلايا القاتلة الطبيعية لمرضى سرطان الجلد في نموذج مختبري لتلامس الخلايا القاتلة الطبيعية مع خطوط الخلايا السرطانية K562 وfemx. عضو J. بيول. 250، 507-516 (2017).

14. كونييفيتش، ج. وآخرون. انخفاض تنشيط CD161 وزيادة التعبير المثبط لمستقبل CD158a على خلايا NK يكمن وراء ضعف السمية الخلوية لخلايا NK في المرضى الذين يعانون من المايلوما المتعددة. جيه كلين. باثول. https://doi.org/10.1136/jclinpath-2016-203614 (2016).

15. ستانويكوفيتش، TP وآخرون. تقييم تعبير السيتوكينات ومجموعات فرعية من الخلايا المناعية المنتشرة كمعلمات محتملة للتسمم الإشعاعي الحاد لدى مرضى سرطان البروستاتا. الخيال العلمي. النائب 10، 19002 (2020).

16. كافيك، م. وآخرون. استكشاف التأثير الواقعي لوباء SARS-CoV-2 على التشخيص الجزيئي لمرضى السرطان والأفراد المعرضين لمخاطر عالية. الخبير القس مول. تشخيص. 21، 101-107 (2021).

17. حسن، I.، Mukaigawara، M.، King، L.، Fernandes، G. & Sridhar، D. Hindsight هو عام 2020؟ دروس في إدارة الصحة العالمية بعد مرور عام على انتشار الوباء. نات. ميد. 27، 396–400 (2021).

18. Cavic, M., Grahovac, J., Zec, R., Stefanovic, M. & Aleksic, E. نظرة عامة على السنة الأولى لوباء SARS-CoV-2 في صربيا ومقاطعة Pirot. بايروت. زي بي. 46، 1–23 (2021).

19. لييسكيتش، O. وآخرون. دراسة أترابية مستقبلية لحركية أجسام مضادة محددة لعدوى سارس-كوف-2 وأربعة لقاحات لفيروس سارس-كوف-2 متوفرة في صربيا، وفعالية اللقاح: تقرير مؤقت لمدة 3-شهر. اللقاحات 9، (2021).

20. بيتروفيتش، ف.، فوكوفيتش، ف.، باتيتش، أ.، ماركوفيتش، م. وريستيتش، م. مناعة لقاحات BNT162b2 وBBIBP-CorV وGam-COVID-Vac والمناعة بعد لقاحات SARS-CoV الطبيعية{{7 }} العدوى-دراسة مقارنة من نوفي ساد. صربيا. بلوس وان 17، e0263468 (2022).

21. يو، KT وآخرون. تحييد النشاط ولقاح SARS-CoV-2 mRNA استمرار وجوده في المصل وحليب الثدي بعد التطعيم BNT162b2 في النساء المرضعات. أمام. إيمونول. 12، (2022).

22. بيس، آر إم وآخرون. لا يحتوي حليب النساء المصابات بفيروس كورونا-19 على RNA لـ SARS-CoV-2 ولكن يحتوي على مستويات ثابتة من الأجسام المضادة IgA الخاصة بـ SARS-CoV-2-. أمام. إيمونول. 12، 5566 (2021).

23. لقاحات CDC وC. لـ DC وP.COVID-19 أثناء الحمل أو الرضاعة الطبيعية. https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/vacci nes/recommendations/pregnancy.html (2022).

24. بيثيسدا (MD)، NI of CH وHD قاعدة بيانات الأدوية والرضاعة (LactMed). لقاحات كوفيد-19. (2022).

25. جو، DH وآخرون. انخفاض سريع في عيار الأجسام المضادة لـ SARS-CoV-2 خلال 4 أشهر بعد التطعيم BNT162b2. اللقاحات 9، (2021).

26. عائلة Carreno، BM & Collins، M. Te B7 من الروابط ومستقبلاتها: مسارات جديدة لتقدير التكاليف وتثبيط الاستجابات المناعية. آنو. القس إيمونول. 20، 29-53 (2002).

27. Esensten، JH، Helou، YA، Chopra، G.، Weiss، A. & Bluestone، JA CD28 تقدير التكلفة: من الآلية إلى العلاج. الحصانة 44، 973-988 (2016).

28. جيرز، د. وآخرون. تتجنب متغيرات SARS-CoV-2 المثيرة للقلق جزئيًا استجابات الخلايا التائية الخلطية ولكن لا تفلت من استجابات الخلايا التائية لدى المتبرعين المتعافين والملقحين من فيروس كورونا-19. الخيال العلمي. إيمونول. 6، (2021).

29. تارك، أ. وآخرون. تأثير متغيرات SARS-CoV-2 على إجمالي تفاعل الخلايا التائية CD4 + وCD8 + في الأفراد المصابين أو الملقحين. تقارير الخلية. ميد. 2، (2021).

30. شاهين، يو وآخرون. يستحث لقاح BNT162b2 الأجسام المضادة المعادلة والخلايا التائية المتعددة النوعية في البشر. نات. 2021 5957868 595، 572-577 (2021).

31. تان، في وآخرون. القياس السريع لخلايا T الشوكية لـ SARS-CoV-2 في الدم الكامل من الأفراد الملقحين والمصابين بشكل طبيعي. جيه كلين. يستثمر. 131، (2021).

32. شيا، WN وآخرون. ديناميكيات SARS-CoV-2 تحيد استجابات الأجسام المضادة ومدة المناعة: دراسة طولية. تي لانسيت ميكروب 2، e240 – e249 (2021).

33. رينولدز، سي جيه وآخرون. تحييد الأجسام المضادة المتنافرة واستجابات الخلايا التائية في عدوى SARS-CoV-2 عديمة الأعراض والخفيفة. الخيال العلمي. إيمونول. 5، (2020).

34. لوبانديتش، Z. وآخرون. IgM وIgG مناعة بروتين SARS-CoV-2 المؤتلف m. كثافة العمليات. جيه مول. الخيال العلمي. 22، (2021).

35. Altmann, DM, Boyton, RJ & Beale, R. المناعة ضد السارس-CoV-2 المتغيرات المثيرة للقلق. العلوم 371، 1103-1104 (2021).

36. ماتشيت، نحن وآخرون. أحدث التطورات: يؤدي لقاح Nucleocapsid إلى مناعة وقائية مستقلة عن السارس-CoV-2. جي إمونول. 207، 376–379 (2021).

37. Costela-Ruiz, VJ, Illescas-Montes, R., Puerta-Puerta, JM, Ruiz, C. & Melguizo-Rodríguez, L. SARS-CoV-2 العدوى: دور السيتوكينات في كوفيد{{ 7}} المرض. عامل نمو السيتوكين القس 54، 62 (2020).