تحديد مادة الإشيناكوسيد في المستخلص المائي لنبات السيستانش هيربا بواسطة HPLC

خلاصة: موضوعيتم إنشاء طريقة HPLC لتقدير مادة الإكيناكوسيد في المستخلص المائي لنباتسيستانش هيربا.طُرقتم تحديد Echinacoside بواسطة HPLC. تم إجراء الفصل على Inertsil ODS-إس بي سي18 عمود ذو طور متحرك يتكون من الأسيتونيتريل(A)و 0.4% محلول حمض الفوسفوريك(B), بالتدرجشطف. تم ضبط الطول الموجي للكشف عند 333 نانومتر, وكانت درجة حرارة العمود 30 درجة. وكان معدل التدفق 1.0مل·دقيقة-1 وكان حجم الحقن 10μL. نتائجالعلاقة الخطية لechinacosideضمن التركيزنطاق 44.939 7-539.276 4 ميكروغرام ·مل- 1 كان جيدا(r = 0.999 8). بلغت نسبة المبالغ المستردة 94.59%-105.31%(تحديد وضع اللاجئ=2.93%,n = 9). كان محتوى الإكيناكوسيد في المستخلصات المائية لعشبة Cistanche 15.527,7.347,12.267 مجم·جم-1. 

خاتمةتعتبر طريقة HPLC المعمول بها ذات التكرار الجيد دقيقة, بسيطة، وممكنة. انها مناسبةلتقدير إشيناكوسيد فيمستخلص مائي من عشبة Cistanche. 

الكلمات الرئيسية:[هبلك]؛مستخلص مائي من عشبة Cistanche; إكيناكوسيد. تحديد المحتوى

تركيبة عشبية جديدة لـتغذية الكلى يانغ

سيستانش ديزيرتيكولاهو دواء صيني تقليدي منشط يستخدم عادة في الممارسة السريرية ويعرف باسم "الجينسنغ الصحراوي" [1]. السيستانش ديزيرتيكولاالمسجلة في طبعة 2015 مندستور الأدوية الصينيهو ساق لحمي مجفف بأوراق متقشرةCistanche deserticola YC MaأوCistanche tubulosa (شينك) وايت. وهو دافئ وحلو ومالح، ويعود إلى خطوط الطول في الكلى والأمعاء الغليظة. له آثار تغذية يانغ الكلى، وتجديد الجوهر والدم، وترطيب الأمعاء والملينات [2]. تقول "مادة شين نونغ الطبية" إنها يمكنها "تنعيم الوسط وتغذية الأعضاء الداخلية الخمسة وتقوية الين وتغذية الجوهر". تحتوي Cistanche deserticola بشكل رئيسي على جليكوسيدات فينيلثانويد، وإيريدويدات، وجليكوسيداتها، والقشور وجليكوسيداتها، والسكريات، ومركبات الإستر، والقلويدات [3].

جليكوسيدات الفينيليثانويد هي المكونات النشطة الرئيسية لـ Cistanche deserticola، ومن بينها echinaceaside وverbascoside هي مكونات المؤشر لتحديد وتحديد محتوى Cistanche deserticola في دستور الأدوية الصيني. تظهر الدراسات الدوائية [4] أن نبات Cistanche deserticola له تأثيرات دوائية مختلفة مثل ملين، وحماية الكبد، ومضاد لهشاشة العظام، ومضاد للأكسدة، ومضاد للشيخوخة، ومضاد للتعب. يمكن للمستخلص المائي Cistanche deserticola أن يعزز جين البروتين التشكلي العظمي 2 في الخلايا العظمية للفئران، بالإضافة إلى الفوسفاتيز الحمضي المقاوم للطرطرات والكالسيوم العظمي في مصل الفئران المستأصلة المبيض.

إن التعبير عن جينات Smad1 وSmad5 وعامل النمو المحول- وما إلى ذلك في نخاع العظم ونخاع العظم له تأثير مضاد لهشاشة العظام [5-6].

يمكن أن يعزز إشنسا تكاثر الخلايا العظمية ويعزز تمايز الخلايا الجذعية الوسيطة لنخاع العظم المزروعة في المختبر إلى خلايا عظمية [7-9]. في السنوات الأخيرة، كان هناك العديد من التقارير البحثية حول تحديد محتوى الإكيناكوسيد والفيرباسكوسايد في مستخلص الإيثانول Cistanche deserticola ومستحضراته المركبة [10-12]، ولكن هناك تقارير قليلة حول تحديد محتوى مكونات الفهرس في Cistanche deserticola مستخلص مائي. في هذه الدراسة تم استخدام تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء (HPLC) لتحديدمحتوى إشنساسيدفيمستخلص مائي من Cistanche deserticola.

1 مادة

1.1 الأدوات

LC-20AT كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء، SPD-20كاشف، SIL-20وحدة أخذ عينات تلقائية، CTO-10فرن عمودي ASvp، محطة عمل تحليل كروماتوغرافي سائل بمحلول LC، شركة Shimadzu، اليابان؛ ميزان تحليلي إلكتروني MES125P-OCE-DU، سارتوريوس، ألمانيا؛ SHZ-D (III) مضخة فراغية متعددة الأغراض للمياه المتداولة، شركة Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.؛ نظام تدوير تبريد المبخر الدوار RC2B SO25، المبخر الدوار RV 10 D S96، IKA، ألمانيا؛ DK-S26 حمام مائي كهربائي بدرجة حرارة ثابتة، شركة Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.؛ آلة المياه فائقة النقاء من سلسلة UPR، شركة Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 المواد الطبية والكواشف

تم شراء المواد الطبية Cistanche deserticola من شركة قوانغتشو Lingnan Chinese Medicine Pieces Co., Ltd.، أرقام الدُفعات: 1801001، 1806001، و181001. تم التعرف عليها على أنها الجذع اللحمي المجفف بأوراق حرشفية من Cistanche deserticola YCMa من عائلة Orobanchaceae من قبل رؤساء الصينيين صيدلي الطب تو شينغ مينغ من المستشفى الثالث التابع لجامعة قوانغتشو للطب الصيني. يتم تخزين العينة في غرفة اختبار الأدوية بالمستشفى الثالث التابع لجامعة قوانغتشو للطب الصيني؛ المادة المرجعية للإكيناكوسيد، المحتوى 89.7%، رقم الدفعة هو: 111670-201706 من المعهد الصيني لفحص الأغذية والأدوية؛ الأسيتونيتريل نقي كروماتوغرافيًا (ميرك، ألمانيا)؛ الميثانول وحمض الفوسفوريك نقيان من الناحية التحليلية (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.)؛ الماء عالى النقاء.

2 الطرق والنتائج

2.1 تحضير المستخلص المائي لـ Cistanche deserticola

خذ المسحوق الخام لـ Cistanche deserticola، أضف 10 مرة من كمية الماء المقطر، وقم بتسخينه وإرجاعه للاستخلاص مرتين، في كل مرة لمدة ساعة واحدة، ثم قم بالتصفية، واجمع المرشح، وركز المرشح إلى 0.100 جم · مل -1 من الدواء الخام بواسطة المبخر الدوار، وتخزينه عند درجة 4 درجة لاستخدامه لاحقا.

2.2 الظروف الكروماتوغرافية وملاءمة النظام

العمود الكروماتوغرافي: عمود Inertsil ODS SP C18 (150 مم × 4.6 مم، 5 ميكرومتر)؛ الطور المتحرك: الاسيتو الانيتريل (A) -0.4% محلول حمض الفوسفوريك (B)، شطف التدرج: 0 ~ 5 دقيقة، 17%A؛ 5 ~ 25 دقيقة، 20% أ؛ 25 ~ 30 دقيقة، 17% أ؛ الطول الموجي للكشف: 333 نانومتر؛ درجة حرارة العمود: 30 درجة؛ معدل التدفق: 1.0 مل · دقيقة -1؛ حجم الحقن: 10 ميكرولتر. في ظل هذه الحالة الكروماتوغرافية، يكون الفصل بين قمم الإكيناكوسيد وقمة المكون المجاور أكبر من 1.5، ويجب ألا يقل رقم اللوحة النظري المستند إلى ذروة الإكيناكوسيد عن 4،000. يظهر اللوني في الشكل 1.

الشكل 1: الرسم اللوني HPLC للإكيناكوسيد (A) والمستخلص المائي لـ Cistancheherba (B)

2.3 إعداد الحل

2.3.1 الحل المرجعي

قم بوزن كمية مناسبة من مرجع إشيناكوسيد، وقم بوزنه بدقة، وضعه في دورق حجمي سعة 10 مل، وأضف الميثانول لإذابته، وقم بإعداد محلول مرجعي يحتوي على 898.794 ميكروغرام من إشيناكوسيد لكل مل، وقم بتخزينه عند درجة حرارة 4 درجات لاستخدامه لاحقًا.

2.3.2 حل الاختبار

قم بقياس 2.0 مل من مستخلص ماء Cistanche deserticola بدقة، وقم بتبخيره حتى يجف في حمام مائي، ثم أضف الميثانول لإذابته، ثم قم بتكوين الحجم في دورق حجمي سعة 10 مل، ثم رج جيدًا، وقم بتصفيته من خلال غشاء مرشح صغير الحجم بقطر 0.22 ميكرومتر للحصول على المحلول.

2.4 التحقيق في العلاقة الخطية

قم بقياس {{0}}.25 بدقة، 0.50، 1.00، 2.00، 2.50، 3.00 مل من المحلول المرجعي تحت 2.3.1 ووضعه في دورق حجمي سعة 5 مل، وأضف الميثانول لتعويض الحجم، ورج جيدًا، واحصل على محلول مرجعي بتركيز متدرج قدره 44.939 7، 89.879 4، 179.{ {21}}, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL-1,والتصفية من خلال 0.22 ميكرومتر غشاء صغير يسهل اختراقه. قياس وفقا للشروط الكروماتوغرافية تحت 2.2 وتسجيل منطقة الذروة.

إجراء الانحدار الخطي مع تركيز الكتلة المرجعية كمحور أفقي (X، ug·mL{{0}}) ومنطقة الذروة كمحور عمودي (Y)، والحصول على معادلة الانحدار: Y{{1 }).0X-32 273.0، ص=0.999 8. أظهرت النتائج أن الإكيناكوسيد له علاقة خطية جيدة في نطاق التركيز 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1.

2.5 اختبار الدقة

خذ 539.276 4 ug ·mL- 1 الحل المرجعي، وقم بالحقن والقياس بشكل مستمر 6 مرات وفقًا للظروف الكروماتوغرافية تحت 2.2، وسجل منطقة الذروة. وكان RSD لمنطقة الذروة للإكيناكوسيد 1.81٪، مما يشير إلى أن الأداة تتمتع بدقة جيدة.

2.6 اختبار الاستقرار

قم بقياس 2.0 مل من مستخلص ماء Cistanche deserticola بدقة، ثم يتبخر حتى يجف في حمام مائي، ثم يذوب في الميثانول، ويخفف إلى 10 مل في دورق حجمي، ويرج جيدًا، ثم يصفى باستخدام 0 .22 ميكرومتر غشاء مرشح صغير المسام، وحقن وقياس عند 0، 2، 4، 8، 12، و24 ساعة وفقا للظروف الكروماتوغرافية تحت 2.2، وسجل منطقة الذروة. النتائج كان RSD لمنطقة ذروة الإيتشيناكوسايد 1.16%، مما يشير إلى أن محلول الاختبار كان يتمتع بثبات جيد خلال 24 ساعة.

2.7 اختبار التكرار

قم بقياس 6 أجزاء من 2.0 مل من مستخلص ماء Cistanche deserticola بدقة، وقم بإعداد 6 أجزاء من محلول الاختبار بالتوازي وفقًا للطريقة الواردة في 2.3.2، وحقنها وقياسها وفقًا للشروط الكروماتوغرافية في 2.2، و سجل منطقة الذروة. النتائج كان RSD للتركيز الشامل للإكيناكوسيد 1.28٪، مما يشير إلى أن الطريقة كانت لها قابلية تكرار جيدة.

2.8 اختبار استرداد العينة

قم بقياس 9 أجزاء من 1.0 مل من مستخلص ماء Cistanche deserticola بدقة، وأضف 0.8، 1.0، و1.2 مل من المحلول المرجعي (1.552 مجم·مل{{11) }}) على التوالي، يتبخر حتى يجف في حمام مائي، ويذوب في الميثانول، ويخفف إلى دورق حجمي سعة 10 مل؛ رجّ جيدًا، ثم قم بالتصفية باستخدام غشاء مرشح صغير المسام بقطر 0.22 ميكرومتر للحصول على تركيزات عالية ومتوسطة ومنخفضة من محلول الاختبار، وقم بإعداد 3 أجزاء من كل تركيز بالتوازي، وقم بالقياس وفقًا للظروف الكروماتوغرافية تحت 2.2، وسجل منطقة الذروة وحساب استرداد العينة. وتظهر النتائج في الجدول 1.

2.9 تحديد محتوى العينة

قم بقياس 2.0 مل من مستخلص ماء Cistanche deserticola بدقة في 3 أجزاء، ثم يتبخر حتى يجف في حمام مائي، ثم يذوب في الميثانول، ويخفف إلى 10 مل في دورق حجمي، ويرج جيدًا، ثم يصفى باستخدام غشاء مرشح صغير المسام بقطر 0.22 ميكرومتر، وتحديده وفقًا للظروف الكروماتوغرافية تحت 2.2، وتسجيل منطقة الذروة، وحساب محتوى الإكيناكوسيد. وتظهر النتائج في الجدول 2.