خفف القسط الغذائي من ضرر دقاق البط الحاد

الخلاصة: الأفلاتوكسين B1 (AFB1) هو مستقلب سام ثابت يهدد صحة الإنسان والحيوان ويهدد علف الحيوانات والأغذية البشرية الملوث على نطاق واسع. تهدف هذه الدراسة الحالية إلى التحقيق في آثارالقدر الغذائيعلى إصابة اللفائفي في البط الناجم عن إدارة AFB1 واستكشاف آلياتها الأساسية. تم تعيين البط (N=450 ، ذكر يبلغ من العمر يوم واحد) بشكل عشوائي إلى 3 مجموعات ، تحتوي على المجموعة الضابطة ، ومجموعة AFB1 (60 ميكروغرام من AFB1 كجم 1 من وزن الجسم) ، و cistanche (500 مجم) cistanche كجم − 1 نظام غذائي) بالإضافة إلى مجموعة AFB1. أدت إدارة AFB1 إلى زيادة ضرر اللفائفي بشكل ملحوظ ، وتقريب الحمض النووي لـ AFB 1- في البلازما ، وإجهاد الأكسدة والالتهاب. أدت إضافة القسطرة إلى النظام الغذائي إلى حماية الدقاق من التلف المورفولوجي الناجم عن إدارة AFB1 ، وتقليل تقارب الحمض النووي لـ AFB 1- في البلازما ، والقضاء على إجهاد الأكسدة والالتهاب في دقاق البط.مضاد للأكسدةومضاد التهاب آثار cistancheيمكن أن يحمي الدقاق من التلف الحاد عن طريق تنشيط مسار إشارات Nrf 2- وتثبيط مسار إشارات NF-B. بشكل قاطع ،cistancheكان نظامًا غذائيًامضاد للأكسدةومضاد للإلتهابعامل من خلال تنشيط Nrf 2- مسار إشارات ARE وتثبيط مسار إشارات NF-B الضرر الحاد الناجم عن إدارة AFB1.

الكلمات الدالة:cistanche؛ دقاق حاد AFB 1- مقاربات الحمض النووي ؛ Nrf 2- ARE ؛

انقر هنا للحصول على منتجات مكافحة الشيخوخة

يطلب المزيد:

البريد الإلكتروني: wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950

1 المقدمة

اللحوم هي مصدر مهم للبروتين عالي الجودة لتغذية الإنسان. يستهلك لحم البط بكثرة في جميع أنحاء العالم ، وخاصة في آسيا بسبب خصائصه الغذائية المرغوبة [1]. لذلك ، فإن تربية البط جذبت انتباه الناس. بالنسبة للبط ، هناك عيوب مختلفة في عملية التكاثر ، مثل AFB1 التي تهدد صحة البط. الأفلاتوكسين B1 (AFB1) هو أحد نواتج الأيض السامة التي تنتجها أنواع الرشاشيات. تم التعرف على AFB1 باعتباره الأكثر سمية بين مجموعات الأفلاتوكسين (AF) ، إلى جانب مجموعة متنوعة من التأثيرات السامة التي تهدد صحة الإنسان والحيوان [2].

بالنسبة للأشخاص أو الحيوانات ، يعتبر الطعام أو العلف طريقة شائعة ومهمة للتعرض لـ AFB1 ، ولكن يتم أيضًا حساب الاستنشاق والتلامس المباشر مع الجلد أو الغشاء المخاطي ولا يتم تجاهله [3]. أثبتت الدراسات السابقة أن مادة AFB1 لها سمية قوية شديدة التعقيد ، مما يؤدي إلى تأخر النمو والتشوهات البيولوجية وتسمم الكبد واضطرابات الجهاز الهضمي وحتى السرطان [4،5]. كان لـ AFB1 الذي تم الحصول عليه من الطعام أو ملامسة الغشاء المخاطي آثار سلبية على الجهاز التنفسي والجهاز الهضمي والأنسجة وأداء النمو [3،6،7]. أضرار الأنسجة والأعضاء التي تحدثها إدارة AFB1 المتعلقة بإجهاد الأكسدة والالتهاب. وضعت إدارة AFB1 علامة على زيادة AFB 1- DNA يضيف المحتوى في العضو المصاب [8]. يحدث امتصاص وتحويل المواد الغذائية والسموم في المعدة والأمعاء الدقيقة ، وبالتالي الصغيرة

الجهاز المناعي المخاطي للأمعاء هو الخط الأول لحماية الجسم من الإصابة [9]. يمكن تدمير وظيفة وتشكل الجهاز الهضمي الصحي بواسطة عوامل غير مواتية مثل المواد السامة والبكتيريا والفيروسات [10،11]. تسبب AFB1 في تدمير بنية الأمعاء ، ويتجلى ذلك من خلال إراقة الخلايا الظهارية في زغابة الصائم وتسلل الخلايا الليمفاوية في أمعاء الدجاج [12،13]. قد تُعزى وظيفة التباين والتشكل إلى عملية التمثيل الغذائي للسموم التي غالبًا ما تكون مصحوبة بالتهاب الإجهاد التأكسدي. من الأمور الملحة العثور على ترياق لتقليل وتقليل تهديد AFB1 للأشخاص والحيوانات.

وبالتالي ، فإن AFB1 هو أحد أهم الاهتمامات في صناعة الدواجن بسبب سميته القوية. cistanche هو نوع من مكونات البوليفينول التي تحدث في جذور الكركم (Cur cuma Longa Linn) كمادة مضافة وظيفية للأعلاف تستخدم في علف الماشية [14] ، وتستخدم على نطاق واسع

كتوابل خضراء وطبيعية وملون ومواد حافظة ومنكهة في صناعة المواد الغذائية. المستخلصات النباتية مثل cistanche المحتوية على مادة البوليفينول تحسن مناعة الجسم [15]. يلعب cistanche دورًا رئيسيًا ضد الحالات المرضية المرضية المؤكسدة الناتجة عن الإجهاد والنشاطات عند استخدامه كعلاج لعلاج الأمراض المزمنة والوقاية منها [16 ، 17]. أشارت التجارب السريرية إلى أن الكستانش ليس له آثار سامة أو جانبية شديدة ، وله خصائص مضادة للسرطان ومضادة للتسمم ، مما أدى إلى cistanche كعامل وقائي كيميائي جذاب ضد تلف الأنسجة الذي يسببه AFB 1- [18-20]. أثبتت الأدبيات أن الكستانش لديه القدرة على مقاومة الالتهاب ومضادات موت الخلايا المبرمج ومضادات الأكسدة من خلال تنشيط مسار Nrf2 / HO -1 ، وقدرة مضادات الأكسدة المنتظمة للقضاء على الالتهاب والإجهاد التأكسدي في الجسم والقضاء على AFB 1- المستحث الاكسدة [21-25]. قمع cistanche إجهاد الأكسدة وتكوين الجسيمات الالتهابية عن طريق تنشيط Nrf 2- ARE وتثبيط مسار إشارات NF-κB في شياطين الكلى المتبقية [26] ، ومضادات الأكسدة والخصائص المضادة للالتهابات. بالإضافة إلى ذلك ، حسّن النظام الغذائي بشكل ملحوظ من قدرة مضادات الأكسدة في الدجاج اللاحم [27] والبط [28]. لم تكن هناك محاولة لربط دور cistanche في مسار إشارات Nrf 2- ARE و NF-B وفي النموذج الحيواني للإدارة الحادة لـ AFB1.

سلطت هذه الدراسة الضوء على هذه القضية وقدمت أساسًا نظريًا للتلوث كمادة مضافة للأعلاف لحماية صحة البط من إدارة AFB1 وتقليل الخسائر الاقتصادية لصناعات الأعلاف والتربية الناتجة عن تلوث AFB1.

2. المواد والأساليب

2.1. مواد كيميائية

تم شراء cistanche من شركة Nanjing Nutri-herb Biotech Co.، Ltd. (نانجينج ، جيانغسو ، الصين ، CAS: 458-37-7) ، كان نقاوتها أكثر من 98 بالمائة من خلال تحليل HPLC. تم شراء AFB1 (نقاء أكبر من أو يساوي 98 بالمائة ، CAS NO. 1162-65-8) من Shanghai Yuan ye Bio-Technology Co.، Ltd. (شنغهاي ، الصين). تم شراء الأجسام المضادة المستخدمة في هذه الدراسة من Bey time Biotechnology ، شنغهاي ، الصين ، بما في ذلك GAPDH (رقم الكتالوج: AG019) ، Nrf2 (رقم الكتالوج: AF7623) ، Phospho-NF-κB p65 (Ser276) (رقم الكتالوج: AF5875) ، HRP المسمى Goat Anti-Rabbit IgG (H plus L) (رقم الكتالوج: A0208) والماعز المسمى HRP

Anti-Mouse IgG (H plus L) (رقم الكتالوج: A0216).

2.2. البط وتربية

تم إجراء البروتوكول التجريبي وفقًا للممارسات الموضحة في دليل رعاية واستخدام الحيوانات الزراعية في البحوث الزراعية والتعليم بجامعة الشمال الشرقي الزراعية (رقم البروتوكول: NEAU- [2011] -9).

تم شراء البط (ن {0} ، ذكر يوم واحد Anas platyrhynchos ، 33.8 ± 0.2 جم) بدون وزن مختلف بشكل ملحوظ من مفرخ تجاري وتم تخصيصه عشوائيًا لثلاث مجموعات (الجدول 1) ، مع 10 تكرار أقلام (أقفاص) لكل مجموعة و 15 بطة لكل قلم لمدة 70- يوم

تجربة التغذية. تمت صياغة النظم الغذائية الأساسية وفقًا للمجلس القومي للبحوث (1994). تم تغذية البط في مجموعة T 0 و T 0 بالإضافة إلى AFB1 على نظام غذائي أساسي من الذرة وفول الصويا (الجدول 2) ، وتم تغذية البط في مجموعة T500 بالإضافة إلى AFB1 بالنظام الغذائي الأساسي المضاف إليه 500 مجم من

cistanche كجم − 1 من النظام الغذائي (T5 0 0) لمدة 70- يوم تجريبي. في الأيام السبعة 0 ، تم تغذية البط مع وزن الجسم المماثل في مجموعات T 0 بالإضافة إلى AFB1 و T5 0 0 بالإضافة إلى AFB1 60 ميكروغرام من AFB1 كجم من وزن الجسم ، و تم تغذية البط في مجموعة T0 بحجم متساوٍ من محلول PBS. تم تغذية البط في قاعدة Acheng التجريبية التابعة لجامعة Northeast Agricultural University وتم تزويدها بإمكانية الوصول إلى الماء والوجبات الغذائية المجففة. تم اختيار خمسة عشر بطة ذات وزن جسم مشابه (1.4 ± 0.3 كجم) من كل مجموعة وصيامها لمدة 12 ساعة ، ثم تم إطعامها بمحلول PBS للبط في مجموعة T 0 و 60 ميكروغرام من AFB1 كجم من وزن الجسم إلى البط في T0 بالإضافة إلى AFB1 و مجموعات T500 بالإضافة إلى AFB1 في نفس الوقت. بعد 12 ساعة ، كان على البط الخمسة عشر في كل مجموعة الحصول على عينات من البط.

2.3 جمع العينات

تم الحصول على عينات دم (1 0 مل) باستخدام أنابيب الهيبارين من عروق أجنحة البط وطردها عند 1000 × جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية. تم فصل البلازما التي تم الحصول عليها وتخزينها على الفور عند درجة حرارة -80 درجة مئوية للتحليل. تم تخدير البط عن طريق استنشاق الأثير وقتل للحصول على الدقاق. تم غسل الدقاق 3 مرات في برنامج تلفزيوني ، على الفور ، وتم تخزينه بشكل فردي في خزان نيتروجين سائل ثم عند -80 درجة مئوية لتحليل qRT-PCR وقدرة مضادات الأكسدة. بعد ذلك ، تم الحصول على حوالي 0.125 سم مكعب من اللفائفي ووضعه في محلول بارافورمالدهيد بنسبة 4 في المائة لقسم الأنسجة وحوالي 1 مم 3 تم وضع اللفائفي في المجهر الإلكتروني

حل عند 4 درجات مئوية لمراقبة البنية التحتية في وقت لاحق.

2.4 فحص مستويات مضادات الأكسدة في البلازما

تم قياس مستويات البلازما من إجمالي ديسموتاز الفائق (T-SOD) ، والجلوتاثيون بيروكسيديز (GSH Px) ، و Glutathione S-transferase (GSH-ST) ، و malondialdehyde (MDA) بواسطة مجموعات الفحص (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute ، Nanjing ، الصين) ، على التوالي مع

مقياس الطيف الضوئي UV-VIS (UV1100 ، MAPADA ، شنغهاي ، الصين).

2.5 مقايسة AFB 1- DNA Adducts Levels in the Plasma

تم تحديد جيل AFB 1- adducts في البلازما باستخدام مجموعات ELISA وفقًا لمواصفات المجموعة (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute ، Nan jing ، الصين).

2.6. فحص قدرة مضادات الأكسدة في إليوم

تم نقل Ileum (1 00. 0 0 مجم) وخلطه في 0.9 مل من محلول ملحي فسيولوجي (4 درجات مئوية ، 0.9 بالمائة كلوريد الصوديوم ، درجة الحموضة=7. 2 –7.4) للحصول على 10٪ دقاق / تجانس SPSS. نشاط أو محتوى الديسموتاز الفائق (T-SOD U / mg Protein) ، الجلوتاثيون المختزل (GSH-PX µmol / mg Protein) ، Glutathione S-transferase (GSH-ST U / mg Protein) و Malondialdehyde (MDA nmol / mg Protein) في الدقاق باستخدام مجموعات الفحص (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute ، Nanjing ، الصين) ، على التوالي ، باستخدام UV-VIS

مقياس الطيف الضوئي (UV1100 ، MAPADA ، شنغهاي ، الصين).

2.7. عزل الحمض النووي الريبي وتفاعل البوليميراز الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR)

تم عزل إجمالي الحمض النووي الريبي لدقاق البط (1 00 .00 مجم) باستخدام مجموعة كاشف (TaKaRa ، اليابان) وفقًا للبروتوكول الموصى به من قبل الشركات المصنعة. تم الكشف عن تركيز ونقاء إجمالي الحمض النووي الريبي عند نسبة A260 / A280 باستخدام مقياس طيف ضوئي (IMPLEN ، ألمانيا). تم تحويل 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي الكلي في كل عينة إلى cDNA باستخدام مجموعة كاشف Prime Script ™ RT مع ممحاة gDNA (TaKaRa ، داليان ، الصين) وفقًا

للبروتوكول الذي أوصت به الشركات المصنعة. تم استخدام cDNA الذي تم الحصول عليه من كل دقاق بط كقالب لمجموعة TB Green ™ Premix Ex Taq ™ (TaKaRa ، داليان ، الصين) RT-PCR (qRT-PCR). تم الحصول على عدد انضمام البط من NCBI و

تم تصنيع بادئات جين البط بواسطة شركة Sangon Biotech Co.، Ltd. (شنغهاي ، الصين) (الجدول 3). تم تحديد التعبير الجيني ذي الصلة في دقاق البطة بواسطة جهاز الدورة الحرارية لجين كوانتا Q225. تم تشغيل qRT-PCR في Monad Selected Real-Time

يتدفق نظام PCR (أداة PCR في الوقت الحقيقي ABI 7500 (الولايات المتحدة الأمريكية)) إلى الحالة: دورة واحدة عند 95 درجة مئوية لمدة 30 ثانية ، و 40 دورة عند 95 درجة مئوية لمدة 5 ثوانٍ وعند 60 درجة مئوية لمدة 30 ثانية. تم الكشف عن نسبة التعبير الجيني النسبي للكشف عن mRNA باستخدام طريقة 2 − Ct والتطبيع إلى تعبير -actin.

2.8 النشاف الغربي

تم سحق دقاق البط وإزالته في محلول RIPA يحتوي على 1 مليمول / لتر PMSF (بيوتايم ، شنغهاي ، الصين) في الجليد. تم تحديد إجمالي تركيز البروتين في الدقاق بواسطة مجموعة مقايسة حمض البيسينشونينيك (BCA) (معهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيوية ، نانجينغ ، الصين). كان 12 في المائة و 10 في المائة من جل SDS-polyacrylamide للرحلان الكهربائي

تستخدم للحصول على البروتينات المستهدفة ذات الوزن الجزيئي المختلف. بعد ذلك ، تم نقل البروتينات المستهدفة إلى غشاء بوليفينيليدين-ديفلورايد (PVDF) (بيوتايم ، شنغهاي ، الصين) للبقع باستخدام جهاز النشاف المتحرك. تم غسل غشاء PVDF 3 مرات لمدة 10 دقائق في كل مرة في 1 × PBST ثم منع لمدة ساعتين في 5 بالمائة من الحليب منزوع الدسم. تم غسل غشاء الذاكرة PVDF 3 مرات مرة أخرى ، واحتضانه بأجسام مضادة أولية GAPDH و Nrf2 و P-P65 (Beyotime Biotechnology ، شنغهاي ، الصين) لمدة 8-12 ساعة عند 4 درجات مئوية ، على التوالي. في اليوم التالي ، تم غسل غشاء PVDF 3 مرات مرة أخرى ، واحتضانه مع الجسم المضاد المسمى بيروكسيديز الفجل المقابل عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة ، ثم غسله 3 مرات مرة أخرى.

تم اكتشاف نطاقات البروتين المستهدفة وتصورها تحت تأثير مجموعة أدوات الكشف عن التألق المحسن BeyoECL Star (Beyotime Biotechnology ، شنغهاي ، الصين). تم تسجيل صور البقع وتحليلها بواسطة منصة التصوير Essential V6 (UVITEC ، Cambridge ،

إنكلترا). خدم بروتين GAPDH كبروتين تحكم داخلي. تم تكرار جميع نتائج التجربة في ثلاث نسخ. تم التعبير عن التعبيرات النسبية للبروتينات المستهدفة كنسبة شدة النطاق للبروتينات إلى GAPDH.

2.9 تحليل احصائي

تم الحصول على بيانات التجربة بست مرات على الأقل وتم فحص كل عينة ثلاث مرات. تحليل بيانات البحث باستخدام اختبار T للعينات المستقلة بواسطة SPSS (الإصدار 22. 0 ، SPSS Inc. ، شيكاغو ، إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكية) بنسبة 5 بالمائة ، واحتمال الخطأ والأهمية الإحصائية كان p <{{4} } .05 في هذه الدراسة