يحسن Echinacoside وظيفة المكونة للدم في 5- الفئران التي يسببها FU لكبت النخاع

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

سايساي وانغ وآخرون

الملخص

الأهداف:نحن نهدف إلى التحقيق في آثارإشنكوسايد(ECH) فيمكونات الدمتعمل في 5- فئران اكتئاب نخاع العظم الناجم عن FU.

الطرق الرئيسية:في المختبر ، بعد التحفيز باستخدام ECH ، تم الحصول على قدرة تكاثر خلايا نخاع العظام (BM) وخلايا انسداد نخاع العظم (BMSCs) منكبت نقي العظمتم تقييم الفئران بمقايسة CCK8 والتشكل ، على التوالي. في الجسم الحي ، 5- تم إجراء كبت نقي أو تحكم بالفئران داخل المعدة باستخدام إما ECH(إشنكوسايد)عند 15 مجم / كجم أو الحجم المتساوي من المحلول الملحي العادي يوميًا لمدة 12 يومًا قبل عزل خلايا BM لفحص الخلية المكونة للمستعمرة. في هذه الأثناء ، تمت تربية BMSCs لمدة 4 أسابيع قبل ملاحظة الخلايا لنمط النمو ، وتم جمع طاف ثقافة الخلية لإفراز GM-CSF بواسطة ELISA ، وتم استخراج الحمض النووي الريبي للخلايا من أجل EPO و GM-CSF RT-PCR. تم جمع خلايا BM أو BMSCs التي تم تحفيزها باستخدام ECH لمدة 24 ساعة أو 48 ساعة لاستخراج البروتين والنشاف الغربي.

النتائج الرئيسية:إيك(إشنكوسايد)حفز نمو خلايا BM ولكن ليس BMSCs المستمدة من 5- فئران مُعالجة بالمزرعة. إدارة داخل المعدة من ECH(إشنكوسايد)في 5- الفئران المعالجة FU يمكن أن تزيد من العدد الإجماليمكونات الدمالخلايا السلفية والخلايا السلفية المعدلة وراثيًا إلى مستوى الفئران السليمة ، ولكن ليس الخلايا السلفية BFU. BMSCs من علاج ECHكبت نقي العظمنمت الفئران بقوة أكبر وأظهرت المزيد من GM-CSF ، ولكن ليس EPO. قامت ECH بتنشيط مسار إشارات PI3K في خلايا BM المكبوتة 5- FU.

الدلالة:إيك(إشنكوسايد)يمكن أن تحسنمكونات الدموظيفة نخاع العظام 5- التي يسببها FUكبت نقي العظمالفئران. إيك(إشنكوسايد)يمكن اعتباره علاجًا بديلًا فعالًا للمرضى أثناء العلاج الكيميائي أو زرع HSC.

الكلمات الدالة:Echinacoside ، المكونة للدم ، قمع النخاع ، GM-CSF ، مسار إشارات PI3K

اشيناكوسايد فيسيستانش

مقدمة

فلورويوراسيل أو 5- FU هو أحد عوامل العلاج الكيميائي الأكثر وصفًا للعلاج المساعد والمسكن للسرطانات [2،9،28]. إنه نظير لليوراسيل مع ذرة فلور في الموضع C -5 بدلاً من الهيدروجين ويعمل من خلال تثبيط لا رجعة فيه لنشاط سينثيز ثيميديلات وبالتالي منع تكاثر الحمض النووي [20]. قلة الكريات البيض وضمورمكونات الدمالأعضاء هما السمتان السائدتان المرتبطتان 5- بتطبيقات FU في البشر والفئران والخنازير [15،17،22].كبت نقي العظم، نتيجة للتأثيرات المثبطة والسمية للخلايا علىمكونات الدمالخلايا السلفية [10] والضغط التأكسدي على نخاع العظام [25] ، يحدان من التطبيق السريري 5- للعلاجات الكيميائية القائمة على FU.

يؤدي كبت نخاع العظم الناجم عن 5- FU إلى انخفاض تعداد خلايا الدم بالكامل. تشمل الأعراض السريرية اللاحقة الحمى وفقر الدم والنزيف ، وتعتمد العلاجات بشكل أساسي على عمليات نقل الدم ومكملات عامل النمو [4]. يمكن أن يكون نقل الدم فعالاً في تجديد خلايا الدم الحمراء والصفائح الدموية ، لكن الراحة قصيرة الأمد وتحتاج إلى علاجات متكررة. تشمل عوامل النمو الإريثروبويتين ، وعامل تحفيز مستعمرة الخلايا المحببة (G-CSF) ، وعامل تحفيز مستعمرة الخلايا الضامة المحببة (GM-CSF). هذه العوامل هي مواد كيميائية طبيعية وقد تعزز أداء نخاع العظام [7،21] ، ولكنها تستهلك المال وليست مفيدة لتحفيز نمو خلايا الدم البيضاء. العلاجات الفعالة البديلة مطلوبة. الطب الصيني التقليدي هو خيار متاح يكتسب شعبية [5]. في السنوات العديدة الماضية ، ركزت العديد من الدراسات على آثار الأدوية العشبية الصينية للوقاية والعلاج المتعلق بالعلاج الكيميائيكبت نقي العظم[33,35].

إشيناكوسايد(ECH) (الشكل 1) هو مركب فينيلثانيويد مستخلص من الطب الصيني التقليدي Herba Cistanches والذي يستخدم على نطاق واسع كعامل تعزيز للدورة الدموية ، وأدوية لعجز الكلى وكذلك الأمراض التنكسية العصبية [24]. إيك(إشنكوسايد)له أنشطة دوائية متعددة لتجديد العظام [18] ، ومضادات الأكسدة [8،14،27] ، وتنظيم المناعة ، وحماية الأعصاب ، وتحسين السلوك [11،16]. كما تم الكشف عنه كعامل وقائي ضد السمية الكبدية [32] وإصابة الرئة الحادة [34]. قد تشارك مستقبلات Trk ومسار Trk-ERK المصب في نشاط حماية الخلايا العصبية ضد إصابة الروتينون [36]. دور وآليات جديدة من ECH في التعزيزكبت نقي العظمنمو خلايا نخاع العظام غير مفهومة تمامًا. في هذه الدراسة ، قمنا بتقييم آثار ECH(إشنكوسايد)علىمكونات الدمتعمل في 5- الفئران الناتجة عن اكتئاب نخاع العظم الناجم عن FU في المختبر وفي الجسم الحي والآليات ذات الصلة.

المواد والأساليب

الكيماويات والكيماويات الحيوية

إشيناكوسايدتم شراؤها من شركة Ronghe Medical Technology and Development Corporation (شنغهاي ، الصين) (نقاء أكبر من أو يساوي 98 بالمائة ، تم تحديده بواسطة HPLC) وتم حله في DMSO. 5- تم الحصول على FU من شركة HaoRan Biotechnology Corporation (شنغهاي ، الصين). تم شراء وسيط ميثيل سلولوز مع السيتوكينات المؤتلفة (وسط ميثوكولت) لخلايا الفئران من تقنيات الخلايا الجذعية (فانكوفر ، كندا).

cistanche كمال الاجسام

الحيوانات والتصميم التجريبي

تم شراء فئران محددة خالية من مسببات الأمراض من 5- إلى 6- أسبوع من الفئران الإناث Balb / c ، تزن ما بين 15-18 غرام من Shanghai Laboratory Animal Company (SLAC ، شنغهاي ، الصين). تمت المحافظة على الفئران في منشأة حيوانية في جامعة تشجيانغ ، الصين. تمت الموافقة على التجارب على الحيوانات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان بجامعة تشجيانغ وكانت تتبع دليل رعاية واستخدام حيوانات المختبر [1،31].

تم حقن الفئران داخل الصفاق بجرعة واحدة 200 مجم / كجم 5- FU لإثبات تثبيط نخاع العظم كما وصفه Choi EH وآخرون. [6]. بالنسبة للدراسة في المختبر ، تم عزل خلايا نخاع العظم (BM) وخلايا انسداد نخاع العظم (BMSCs) بعد يومين من حقن 5- FU. في الجسم الحي ، تم تقسيم الفئران بشكل عشوائي إلى 4 مجموعات ، 5-6 فئران في كل مجموعة (ن=5 - 6): 5- مجموعة FU / ECH ، 5- FU / مجموعة التحكم ، ECH(إشنكوسايد)المجموعة والمجموعة الضابطة. في مجموعة 5- FU / ECH ، بعد 5- حقن FU ، تم تغذية الفئران داخل المعدة يوميًا باستخدام ECH بمعدل 15 مجم / كجم يوميًا لمدة 12 يومًا. في 5- FU / مجموعة التحكم ، بدلاً من ECH(إشنكوسايد)، تمت إضافة كمية متساوية من المحلول الملحي العادي إلى 5- الفئران المحقونة FU. بالنسبة لمجموعة ECH ومجموعة التحكم ، تمت إدارة ECH أو محلول ملحي عادي بنفس الطريقة 5- FU الفئران غير المعالجة. في اليوم الثاني عشر ، تم قتل الفئران بطريقة رحمة واستُخرجت خلايا نخاع العظم لإجراء مزيد من الدراسات. بالتفصيل ، تم تحضير خلايا BM لفحص الخلية المكونة للمستعمرة (CFC) ، وكانت BMSCs لفحص الانتشار ، وتم جمع طاف ثقافة الخلية من BMSCs من أجل GM-CSF ELISA و RNA من BMSCs وتم استخراجها من أجل EPO و GM-CSF RT -PCR. تكررت التجارب 3 مرات.

تحضير خلايا BM و BMSCs

تم تحضير خلايا BM من معلقات وحيدة الخلية مستخلصة من نخاع عظم الفأر. باختصار ، تم التخلص من الفئران ونقعها في الإيثانول لمدة 5 دقائق. تم إخراج الخلايا من القناة النخاعية للظنبوب وعظم الفخذ عن طريق الغسل المتكرر بإبرة قياس 23- ونخلها من خلال مصفاة خلية 100 ميكرومتر للحصول على معلقات أحادية الخلية. تم تفكيك خلايا نخاع العظم الكريات الحمر عن طريق الحضانة قصيرة الأجل (30 ثانية) مع محلول كلوريد الأمونيوم متبوعًا بخطوات غسل متكررة بوسط مزرعة. تم تحديد الجدوى وعدد الخلايا من خلال طريقة استبعاد المثقبيات الزرقاء باستخدام مقياس الهيموسيتومتر.

لتوليد BMSCs ، تم السماح لخلايا BM بالنمو في آبار لوحات TC لمدة 24 ساعة ، بعد إزالة الخلايا غير الملتصقة والغسيل المتكرر بوسط الثقافة ، تم أخذ الخلايا الملتصقة على أنها BMSCs.

تمت زراعة الخلايا عند 37 درجة مع 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون في حاضنة رطبة في Modi ed Eagle Medium (DMEM) من Dulbecco مع 10 بالمائة من مصل الأبقار الجنيني المعطل بالحرارة (FBS) ، والبنسلين / الستربتومايسين (100 وحدة / مل) ، و L- الجلوتامين (2 نانومتر). تم شراء جميع كواشف زراعة الخلايا من Invitrogen (شنغهاي ، الصين).

تكاثر خلايا BM في المختبر بمقايسة CCK8

تم طلاء خلايا BM من 5- الفئران المعالجة بـ FU بكثافة 1 × 103 خلية / بئر في 96- لوحة بئر (Costar) وتم تربيتها في وسط مكمل بتركيزات مختلفة من ECH(إشنكوسايد)({0} ميكرومتر ، 0.1 ميكرومتر ، 1 ميكرومتر ، 10 ميكرومتر ، 25 ميكرومتر ، 50 ميكرومتر ، على التوالي). في اليوم الثالث أو اليوم السادس ، تم "نبض" الخلايا باستخدام 20 مايكرولتر من كاشف محلول CCK -8 (بيوتايم ، جيانغسو) وتم تربيتها لمدة 4 ساعات إضافية. تم تقييم تكاثر الخلايا عن طريق قياس CCK8 اللوني على قارئ صفيحة ميكروسكوبية فائقة (الأجهزة الجزيئية) عند 450 نانومتر.

اشيناكوسايد فيسيستانش

انتشار وتشكل BMSC في المختبر

تم تحضير BMSCs في آبار 6- لوحة بئر بكثافة أولية لخلايا BM (أيضًا من 5- الفئران المعالجة بـ FU) وهي 3.5 × 106 خلية / بئر. بعد 24 ساعة ، تم استبدال وسط المزرعة بوسط يحتوي على ECH (50 ميكروغرام / مل). كل أسبوع ، تمت إزالة نصف المواد الطافية واستبدالها بوسيط استزراع جديد (مع أو بدون ECH(إشنكوسايد)كما هو مبين). بعد 4 أسابيع من الثقافة ، لوحظ مورفولوجيا BMSCs تحت مجهر مقلوب.

فحص الخلية المكونة للمستعمرات (CFC)

تم إجراء اختبار CFC في وسائط MethoCult باتباع إرشادات الشركة المصنعة. باختصار ، تم تحضير خلايا BM من مجموعات مختلفة من الفئران بمعدل 2 × 1 0 5 لكل مل. بعد ذلك ، تمت إضافة 0.4 مل من الخلايا إلى 4 مل من وسط MethoCult لعمل خليط الخلية. بعد الخلط تمامًا مع 16- إبرة ذات طرف غير حاد ، تم توزيع 1.1 مل من خليط الخلايا في طبق استزراع 35 مم (تقنيات الخلايا الجذعية) ، وثلاث نسخ ، واحتضانها عند 37 درجة في جو رطب بنسبة 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون لمدة 7 أيام. بعد 7 أيام من الاستنبات ، تم تحديد وإحصاء المستعمرات المكونة من 30 خلية على الأقل.

تفاعل سلسلة البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) و GM-CSF ELISA

تمت تربية BMSCs المستمدة من مجموعات مختلفة من الفئران لمدة 4 أسابيع كما هو موضح أعلاه. بعد ثقافة الأسبوع 4- ، تم جمع BMSCs للحصول على إجمالي استخراج الحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة RNAsimple Total RNA (TianGen ، بكين). تم تصنيع First-strand (كدنا) باستخدام 1 ميكروغرام من إجمالي الحمض النووي الريبي (معالجة DNase) باستخدام مجموعة توليف iScript (كدنا) (Bio-Rad ، ريتشموند ، كاليفورنيا). تم تحديد تعبيرات عامل محفز مستعمرة الخلايا الضامة المحببة (GM-CSF) و Erythropoietin (EPO) بواسطة RT-PCR شبه الكمي. كانت تسلسل PCR التمهيدي كما يلي: GM-CSF: 5′-GGCCTTGGAA GCATGTAGAG -3 ′ (للأمام) و 5′-GGAGAACTCGTTAGAGACGA CTT -3 ′ (عكسي) ؛ المكتب الأوروبي للبراءات: 5′-CCTCATCTGCGACAGTCG AG -3 ′ (للأمام) و 5′-ACAACCCAT CGTGACATTTTCT -3 ′ (عكسي) ؛ جين بيتا أكتين التدبير المنزلي: 5′-GTATCCTGACCCT GAAGTACC -3 ′ (للأمام) و 5′-TGAA GGTCTCAAACATGATCT -3 ′ (عكسي). تم إجراء تضخيم PCR على 2720 Cycler الحرارية (النظم البيولوجية التطبيقية) وتم تحليل المنتجات باستخدام الاغاروز الكهربائي للهلام. تم تطبيع مستويات التعبير mRNA للأهداف إلى مستوى بيتا أكتين. تم جمع المواد الطافية لـ BMSCs لفحص GM-CSF ELISA باستخدام مجموعة GM-CSF ELISA (JinSui ، شنغهاي) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة.

النشاف الغربي

خلايا BM و BMSCs من 5- مستحثة في FUكبت نقي العظمتم طلاء الفئران أو الفئران الضابطة بكثافة أولية تبلغ 5 × 106 لكل بئر في 6- ألواح آبار. بعد 24 ساعة ، تمت إضافة ECH إلى وسط الاستزراع عند 50 ميكروغرام / مل وتم السماح للخلايا بالنمو لمدة 24 ساعة إضافية أو 48 ساعة قبل تحلل الخلايا في محلول RIPA 1 × (CST ، Danvers ، MA) يحتوي على 1 ملي مولار من فينيل ميثيل سلفونيل يووريد (بمسف). تم تحديد تركيز البروتين بمقايسة بروتين BCA. تم فصل 30 ميكروغرام من البروتينات الكلية على 10 بالمائة من المواد الهلامية لكبريتات الصوديوم دوديسيل بولي أكريلاميد ونقلها إلى أغشية PVDF (ميليبور ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم حظر الأغشية بمخزن مانع للحظر ((Beyotime ، Haimen ، الصين) لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة ، ثم تم تحضينها طوال الليل عند 4 درجات بأجسام مضادة ضد -actin (# 4967 ، CST) ، phospho-PI3 كيناز p85 (Tyr458) / p55 (Tyr199) (# 4228 ، CST) ، phospho-Akt (Ser473) (# 4060 ، CST) ، Akt (pan) (C67E7) (# 4691 ، CST) ، phosphor-Stat1 (Tyr701) (# 9167 ، CST) ، Phospho-Stat3 (Tyr705) (# 9415 ، CST) ، Phospho-p38 MAPK (Thr180 / Tyr182) (# 9215 ، CST) ، Phospho-p44 / 42 MAPK (Erk1 / 2) (Thr202 / Tyr204) (# 4377 ، CST ) ، p38 MAPK (# 9212 ، CST) ، p44 / 42 MAPK (Erk1 / 2) (# 4695 ، CST) ، Phospho- SAPK / JNK (Thr183 / Tyr185) (# 4668 ، CST) ، و SAPK / JNK (# 9258، CST) على التوالي بعد الغسيل ، تم فحص الأغشية باستخدام جسم مضاد ثانوي مضاد للأرنب مترافق مع الفجل والبيروكسيديز (Lianke ، Hangzhou ، الصين) متبوعًا باكتشاف الإشارة باستخدام نظام FluorChem E (بروتين بسيط ، سانتا كلارا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية).

تحليل احصائي

تم تقديم البيانات على أنها تعني ± تم تحديد إشارة SEM للاختلافات بين كل مجموعة من خلال اختبار الطالب. القيمة الاحتمالية ب 0. 05 اعتبرت ذات دلالة إحصائية.

cistanche كمال الاجسام

نتائج

في المختبر زودت ECH(إشنكوسايد)يحفز 5- FU على تكاثر خلايا BM

تم إحداث خلايا BM من 5- FUكبت نقي العظمتم علاج الفئران بـ ECH(إشنكوسايد)بتركيزات مختلفة تتراوح من 0. 01 إلى 50 ميكرومتر لمدة 3 أيام أو 6 أيام وتم تقييم تكاثر الخلايا بمقايسة CCK8. كما هو مبين في الشكل 2 ، كان مستوى تكاثر خلايا BM المعالجة بـ ECH أعلى من الخلايا غير المعالجة بـ ECH بعد 3 أو 6 أيام من الثقافة. أظهر تأثير التحفيز طريقة تعتمد على الجرعة.

في المختبر زودت ECH(إشنكوسايد)ليس له أي تأثير على 5- FU المكبوتة لـ BMSC

تم إحداث BMSCs من 5- FUكبت نقي العظمتم علاج الفئران بـ ECH(إشنكوسايد)بتركيز 50 ميكروغرام / مل لمدة 4 أسابيع وتم تقييم تكاثر الخلايا بملاحظة شكل الخلية تحت مجهر ضوئي مقلوب. كما هو مبين في الشكل 3 ، كان نمط النمو ومورفولوجيا الخلايا متشابهين مع أو بدون علاج ECH.

تدار داخل المعدة ECH(إشنكوسايد)يحفز الوظيفة المكونة للدم للخلايا السلفية {{0} التي يسببها FU للخلايا البلعمية المثبطة للنخاع (CFU-GM) ، ولكن ليس الخلايا السلفية (BFU-E)

أنماط الانتشار والتمايز لخلايا BM من 5- FU / ECH ، 5- FU / control ، ECH(إشنكوسايد)، ومجموعة المراقبة تم تقييمها بواسطة مقايسة CFC. بعد 7 أيام من زراعة خلايا BM في وسط MethoCult ، تم تصنيف مركبات الكربون الكلورية فلورية وعددها في الموقع تحت المجهر الضوئي. كما هو مبين في الشكل 4 ، أظهر تحليل مستويات السلف وجود دلالة (pb 0. 0 0 01) زيادة عدد CFU-GM في 5- مجموعة FU / ECH بالمقارنة مع 5- FU / مجموعة التحكم (169.3 ± 11.1 مقابل 54.5 ± 3.1) ، بالإضافة إلى مجموعة التحكم (169.3 ± 11.1 مقابل 129.3 ± 5.6) (pb 0.05 ، على التوالي). عدد BFU-E في كل مجموعة لا فرق (73.0 ± 11.1 مقابل 74.7 ± 8.6 مقابل 91.2 ± 5.5). كان عدد CFU-GM و BFU-E في مجموعة ECH هو نفسه تقريبًا كما في المجموعة الضابطة (البيانات غير معروضة).

التين. 4. داخل المعدة تدار ECH(إشنكوسايد)يحفزمكونات الدموظيفة 5- المستحثةكبت نقي العظمالخلايا الضامة المحببة (CFU-GM) ، ولكن ليس الخلايا السلفية الكريات الحمر (BFU-E). (أ) صورة تمثيلية للوحدات المكونة للمستعمرة. CFU-GM: الوحدات المكونة للمستعمرة - الضامة المحببة. BFU-E: وحدة تشكيل انفجر - كرات الدم الحمراء. (ب) الصور التمثيلية للوحدات المكونة للمستعمرة لكل مجموعة. (ج) أعداد الوحدات المكونة للمستعمرات لكل مجموعة. تم عزل خلايا BM من كل مجموعة وبذرها من أجل CFU-GM و BFU-E مقايسة تشكيل مستعمرة الخلية السلفية كما هو موضح في المواد والطرق. تم الحصول على النتائج من 3 تجارب مستقلة وتم التعبير عنها كوسائل ± SEM ، n=5 - 6. * pb 0. 0 5 مقارنة بمجموعة التحكم ، ## pb 0.0001 مقارنة بمجموعة FU 5-.

تدار داخل المعدة ECH(إشنكوسايد)يحفز 5- انتشار BMSC الناجم عن كبت نقي العظم.

بعد 4 أسابيع من الثقافة ، تم تقييم انتشار BMSCs من خلال مراقبة مورفولوجيا الخلية تحت مجهر ضوئي مقلوب. كما هو موضح في الشكل 5 ، BMSCs في 5- FU / ECH(إشنكوسايد)نمت المجموعة بقوة أكبر من المجموعة الضابطة.

تدار داخل المعدة ECH(إشنكوسايد)يحفز إنتاج GM-CSF 5- لـ BMSCs التي يسببها FU

بعد 4 أسابيع من ثقافة BMSCs ، تم تحديد تعبيرات mRNA لـ GM-CSF و EPO للخلايا بواسطة RT-PCR. كما هو مبين في الشكل 6 أ ، تم زيادة تعبير GM-CSF في BMSCs من فئران قمع نخاع العظم المعالجة بـ ECH بشكل ملحوظ مقارنة مع 5- مجموعة FU / مجموعة التحكم. تم تحديد إنتاج GM-CSF في طاف ثقافة الخلية بواسطة ELISA. كما هو مبين في الشكل 6 ب ، بالمقارنة مع 5- FU / مجموعة التحكم ، فإن 5- FU / ECH(إشنكوسايد)عرضت المجموعة تعبيرًا أعلى لـ GM-CSF (pb 0. 05) وكانت تقريبًا مثل مجموعة التحكم.

إيك(إشنكوسايد)ينشط مسار إشارات PI3K في خلايا BM المكبوتة 5-

خلايا BM و BMSCs من 5- مستحثة في FUكبت نقي العظمأو تم تحفيز الفئران الضابطة باستخدام ECH(إشنكوسايد)بتركيز 50 ميكروغرام / مل لمدة 24 ساعة أو 48 ساعة قبل جمع الخلايا لاستخلاص البروتين والنشاف الغربي. منذ آليات ECH(إشنكوسايد)لم يتم دراستها كثيرًا ، لقد فحصنا لوحة من مسارات الإشارة ذات الصلة ، بما في ذلك مسارات إشارات JAK / STAT1 و JAK / STAT3 و SAPK / JNK و p -38 MAPK و p44 / 42 MAPK و PI3K / Akt. كما هو مبين في الشكل 7 ، يمكن أن تحفز ECH تعبيرًا عاليًا عن p-PI3K p85 / p55 في خلايا BM المشتقة من 5- الفئران FU التي لم يكن التحريض واضحًا لها في BMSCs أو في مجموعات التحكم. بالنسبة لجميع المسارات الأخرى ، لم نشاهد اختلافات كبيرة (البيانات غير معروضة).

مناقشة

بدا صحيحًا أن ECH(إشنكوسايد)لم يكن له أي تأثير على الفئران ذات الدم الطبيعي منذ الفئران التي لا تحتوي على 5- علاج FU ، فإن عدد الخلايا السلفية المكونة للدم في ECH(إشنكوسايد)كانت المجموعة تقريبًا هي نفس المجموعة الضابطة ، وكذلك تكاثر وتفعيل BMSCs كما يتضح من مورفولوجيا وإفرازات GM-CSF و EPO. وهكذا ، في جلسة نتيجة البيانات من ECH(إشنكوسايد)تم دمج المجموعة مع مجموعة تحكم ووصفت بأنها عنصر تحكم.

5- FU كدواء للعلاج الكيميائي في علاج السرطان له تأثيرات على وظيفة النخاع العظمي. يمكن أن يؤدي استخدام جرعة عالية من 5- FU إلى تثبيط شديد لنخاع العظام [19]. في دراستنا ، تم إنشاء نموذج كبت نقي العظم بنجاح في الفئران عن طريق 5- علاج FU ، على النحو المدعوم بوحدات تشكيل مستعمرة منخفضة ومورفولوجيا BMSCs.

نخاع العظام رئيسيمكونات الدمعضو يتكون من الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) وخلايا انسجة نخاع العظم (BMSCs) [13]. يمكن للخلايا السابقة إنتاج خلايا الدم بما في ذلك الخلايا الحمراء والصفائح الدموية والخلايا الوحيدة والخلايا الحبيبية والخلايا الليمفاوية. ويمكن للخلايا الأخيرة إنتاج الدهون والغضاريف والعظام التي تُعرف بالخلايا اللحمية أو الخلايا اللحمية [26]. من المقبول جيدًا أن BMSCs هي مكونات أساسية في مكانة HSC حيث يرتب هذان النوعان من الخلايا الجذعية عن كثبمكونات الدموالتوازن الهيكلي [29]. يمكن أن تحفز BMSCs وتعزز انتشار HSCs عن طريق إفراز الجزيئات التنظيمية والسيتوكينات ، مثل FL [23] ، GM-CSF [12] ، و SCF [12 ، 3].

أظهرت البيانات المختبرية أن ECH(إشنكوسايد)يمكن أن تحفز تكاثر خلايا BM منكبت نقي العظمالفئران بطريقة تعتمد على الجرعة ، على الرغم من أن الخلايا ، بشكل عام ، نمت بقوة أكبر في اليوم الثالث من ذلك في اليوم السادس ، ربما نتيجة بيئة الاستزراع في المختبر. على العكس من ذلك ، ECH(إشنكوسايد)لم يكن له أي تأثير على انتشار BMSCs من 5- فئران مُعالجة بـ FU. لاستبعاد احتمال أن التأثير السلبي لم يكن بسبب حالة نمو الخلية ، في الإعداد التجريبي ، قمنا أيضًا بتضمين Rg1 ، وهو مكون عشبي ثبت أنه يحفز BMSCs منكبت نقي العظمنمو الفئران كعنصر تحكم إيجابي [33].

أثبتت البيانات في الجسم الحي أن ECH(إشنكوسايد)يمكن أن يعيد بشكل فعال بناء الدم ، وعلى الأرجح تكون المحببات وتكوين خلايا النواء الضخم ولكن ليس الكريات الحمر ، فيكبت نقي العظمالفئران. إدارة داخل المعدة من ECH(إشنكوسايد)إلى 5- من الفئران المعالجة بـ FU لمدة 12 يومًا أدت إلى زيادة العدد الإجمالي لكل منهمامكونات الدمالخلايا السلفية والخلايا السلفية للخلايا المحببة - البلاعم ، ولكن ليس من الخلايا السلفية للكريات الحمر كما يتضح من عدد CFU-GM و BFU-E من فحوصات CFC. ومن المثير للاهتمام أننا لاحظنا أن عدد CFU-GM في 5- FU / ECH(إشنكوسايد)كانت المجموعة أعلى من تلك الموجودة في مجموعات التحكم. لقد توقعنا حدوث توسع سريع في CFU-GM حدث كتعويض عنكبت نقي العظمالحالة بقيادة 5- FU. كشفت بياناتنا أيضًا أن ECH يمكن أن يحفز انتشار BMSC و GM-CSF ولكن ليس إنتاج EPO فيكبت نقي العظمالفئران ، والتي كانت متسقة مع نتائج CFC.

أشارت النتائج حتى الآن إلى طريقة جديدة من ECH(إشنكوسايد)التي يمكن استخدامها لتحسينمكونات الدمتعمل فيهاكبت نقي العظمالفئران (كما هو موضح في الشكل 8): في بيئة متخصصة HSC ، إما عن طريق زراعة BMs مختلطة في المختبر أو في نخاع العظام في الموقع ، تحفز ECH تكاثر BMSC وإنتاج GM-CSF ، وبالتالي يحفز ويعزز الانتشار والتمايز من HSCs. بدون وجود HSCs ، فإن ECH غير قادرة على تحفيز انتشار BMSC.

يتكون مستقبل GM-CSF من (ربط يجند) ووحدات فرعية (تشوير). يرتبط GM-CSF أولاً بالوحدة الفرعية ، ثم يستحث شلالات الإشارات النهائية من خلال تفاعل بروتينات المستجيب مع الوحدة الفرعية [30]. قامت الوحدة الفرعية بمعاملات JAK2 ، والتي تبدأ إشارات المصب. تشتمل وحدات الإشارة التي تم تنشيطها على محول الطاقة Janus kinase / الإشارة ومسار النسخ (JAK / STAT) ، ومسار البروتين كيناز المنشط بالميتوجين (MAPK) ، ومسار الفوسفاتيديلينوسيتول 3- كيناز (PI3K) [30]. ومن المثير للاهتمام ، أن نتيجة الفحص التي أجريناها أظهرت أن مسار PI3K قد تم تنشيطه في خلايا BM المشتقة من 5- الفئران المعالجة بالـ FU ، ولكنها لم تكن واضحة في 5- FU المكبوتة BMSCS وخلايا BM أو BMSCs الطبيعية. من المحتمل أنه من خلال تنشيط مسار GM-CSF / PI3K ، ECH(إشنكوسايد)بشكل انتقائي يحفز نمو خلايا BM.

إشنكوسايد في cistanche

الاستنتاجات

باختصار ، لقد أظهرنا أن ECH(إشنكوسايد)له تأثير ترويجي واعد علىمكونات الدمتعمل في {{0} فئران قمع نخاع العظم التي يسببها FU ، خاصة على الخلايا المحببة وخلايا البلعمة ، مما يشير إلى أن ECH(إشنكوسايد)قد يكون لها إمكانية التطبيق السريري في تثبيط نقي العظم أثناء العلاج الكيميائي أو زرع HSC بعد العلاج بالمواد الكيميائية.

بيان تضارب المصالح

لا توجد تضاربات في المصالح.

مراجع

[1] ESD Alleva ، دليل لرعاية واستخدام حيوانات المختبر ، Ethology 103 (1997) 1072-1073.

[2] J. Bergh ، T. Wiklund ، B. Eriksen ، E. Lidbrink ، H. Lindman ، P. Malmstrom ، et al. لسرطان الثدي عالي الخطورة: تجربة عشوائية. دراسة مجموعة الثدي الاسكندنافية 9401 ، لانسيت 356 (2000) 1384-1391.

[3] أ. برنشتاين ، إل فورستر ، إيه دي ريث ، بي دوبرويل ، آر روتابيل ، مجموعة الفئران W / c والمواقع الفولاذية والتحكم في تكون الدم ، سيمين. الهيماتول. 28 (1991) 138-142.

[4] PJ Carey ، الأدوية التي يسببهاكبت نقي العظم: التشخيص والإدارة، سلامة الدواء. 26 (2003) 691-706.

[5] F. Cheung، TCM: صنع في الصين، Nature 480 (2011) S82-S83.

[6] Eh Choi ، He Ok ، Y. Yoon ، Ba Magnuson ، Mk Kim ، HS Chun ، التأثير الوقائي للمستخلص الغني بالأنثوسيانين من bilberry (Vaccinium myrtillus L.) ضد السمية النخاعية الناجم عن {2}} أوكسف إنكلترا) 29 (2007) 55-65.

[7] J. كروفورد ، H.Ozer ، R. Stoller ، D.Johnson ، G.Lymman ، I. Tabbara ، وآخرون ، التخفيض بواسطة عامل تحفيز مستعمرة المحببات من الحمى وقلة العدلات التي يسببها العلاج الكيميائي في المرضى الذين يعانون من صغيرة- سرطان الرئة الخلوي ، N. Engl. جيه ميد. 325 (1991) 164-170.

[8] L. Dalby-Brown ، H. Barrett ، AK Landbo ، AS Meyer ، P. Molgaard ، التأثيرات المضادة للأكسدة التآزرية للكاميدات ، ومشتقات حمض الكافيين ، وجزيئات السكاريد من إشنسا بوربوريا على أكسدة البروتينات الدهنية البشرية منخفضة الكثافة في المختبر ، J. أجريك. الغذاء تشيم. 53 (2005) 9413-9423.

[9] WH de Vos tot Nederveen Cappel ، HJ Meulenbeld ، JH Kleibeuker ، FM Nagengast ،

FH MENKO ، G. Grif -en ، et al. J. السرطان 109 (2004) 468-471.

[10] LE Friberg ، MO Karlsson ، النماذج الميكانيكية لـكبت نقي العظم، التحقيق. أدوية جديدة 21 (2003) 183–194.

[11] X. Geng، X. Tian، P. Tu، X. Pu، Neuroprotective effects ofإشنكوسايدفي نموذج MPTP الفأري لمرض باركنسون ، Eur. فارماكول. 564 (2007) 66-74.

[12] JY Han و RY Goh و SY Seo و TH Hwang و HC Kwon و SH Kim وآخرون ، Cotransplantation لدم الحبل السريمكونات الدمالخلايا الجذعية والخلايا الجذعية الموسعة المزروعة والخلايا الجذعية الوسيطة المنقولة GM-CSF− / SCF في فئران SCID ، J. علوم. 22 (2007) 242 - 247.

[13] EL Herzog، L. Chai، DS Krause، مرونة الخلايا الجذعية المشتقة من النخاع، Blood 102 (2003) 3483–3493.

[14] C. Jia، H. Shi، W. Jin، K. Zhang، Y. Jiang، M. Zhao، et al.، Metabolism ofإشنكوسايد، مضاد جيد للأكسدة ، في الفئران: عزل وتحديد مستقلباته الصفراوية ، دواء ميتاب. التخلص. 37 (2009) 431-438.

[15] S. Kojima ، K. Takaba ، N. Kimoto ، T. Takeda ، M. Kakuni ، M. Mizutani ، et al.كبت نقي العظمفي الفئران ، القوس. توكسيكول. 77 (2003) 285 - 290.

[16] R. Kuang، Y. Sun، W. Yuan، L. Lei، X. Zheng، Protection effects ofإشنكوسايد، أحد مركبات جليكوسيدات الفينيثانويد ، على H (2) O (2) التي يسببها السمية الخلوية في خلايا PC12 ، بلانتا ميد. 75 (2009) 1499-1504.

[17] جي سي لورينز ، إم. هادجيسافاس ، جي دبليو تشوفانيك ، إف دبليو بايزر ،كبت نقي العظمفي الخنزير (sus scrofa): يقلل الرحم من تأثيرات myelosupressed من 5- uorouracil في الخنازير الصغيرة ، شركات. بيوتشيم. فيسيول. أ فيزيول. 116 (1997) 369-377.

[18]
F. Li ، Y. Yang ، P. Zhu ، W. Chen ، D. Qi ، X. Shi ، وآخرون ،إشيناكوسايديعزز تجديد العظام عن طريق زيادة نسبة OPG / RANKL في خلايا MC3T {{1} E1، Fitoterapia 83 (2012) 1443-1450.

[19] A. Lindner ، D. Santilli ، J. Hodgett ، C. Nerlinger ، تأثيرات 5-مكونات الدمنظام الماوس ، Cancer Res. 20 (1960) 497-502.

[20] DB Longley ، DP Harkin ، PG Johnston ، 5- uorouracil: آليات العمل والاستراتيجيات السريرية ، NAT. القس السرطان 3 (2003) 330-338.

[21] BR Luce ، و JW Singer ، و JM Weschler ، و CD Buckner ، و SH Sheingold ، و K. Shannon-Dorcy ، وآخرون ، عامل تحفيز مستعمرة الخلايا المحببة البشرية المؤتلف بعد زرع نخاع العظم الذاتي للسرطان اللمفاوي: تحليل اقتصادي لـ تجربة عشوائية مزدوجة التعمية مضبوطة بالغفل ، PharmacoEconomics 6 (1994) 42-48.

[22] M. Malet-Martino ، R. Martino ، الدراسات السريرية لثلاثة من الأوصاء عن طريق الفم من 5- .

[23] S. Mishima، A. Nagai، S. Abdullah، C.Matsuda، T. Taketani، S. Kumakura، et al.، Effective ex vivo extension ofمكونات الدمالخلايا الجذعية التي تستخدم الخلايا الجذعية الوسيطة للعظم المتمايزة تعتمد على CXCL12 ، Eur. J. Haematol. 84 (2010) 538-546.

[24] M. مصطفى، N. Nahar، M. Mosihuzzaman، T. Makhmoor، MI Choudhary، AU Rahman، Free Radical scavising phenylethanoid glycosides from Leucas indica Linn، Nat. همز. الدقة. 21 (2007) 354-361.

[25] S. Numazawa ، K. Sugihara ، S. Miyake ، H. Tomiyama ، A. Hida ، M. Hatsuno ، et al.كبت نقي العظمفي الفئران ، Basic Clin. فارماكول. توكسيكول. 108 (2011) 40-45.

[26] دي جي بروكوب ، الخلايا اللحمية النخاعية كخلايا جذعية للتجديد المستمرغير المكونة للدمالأنسجة وكناقلات محتملة للعلاج الجيني ، J. Cell. بيوتشيم. (1998) 284-285.

[27] BD Sloley ، LJ Urichuk ، C. Tywin ، RT Coutts ، PK Pang ، JJ Shan ، مقارنة المكونات الكيميائية وقدرة مضادات الأكسدة لأنواع مختلفة من إشنسا ، J. Pharm. فارماكول. 53 (2001) 849-857.

[28] C. Twelves، A. Wong، MP Nowacki، M. Abt، H. Burris III، A. Carrato، et al.، Capecitabine كعلاج مساعد للمرحلة الثالثة من سرطان القولون ، N. Engl. جيه ميد. 352 (2005) 2696-2704.

[29] M. Valtteri ، A. Sorrentino ، مساهمة الخلايا اللحمية اللحمية المتوسطة في الاستتباب ، J. Cell. فيسيول. 217 (2008) 296 - 300.

[30] L. van de Laar ، PJ Coffer ، AM Woltman ، تنظيم نمو الخلايا التغصنية بواسطة GM-CSF: التحكم الجزيئي والآثار المترتبة على التوازن المناعي والعلاج ، Blood 119 (2012) 3383-33393.

[31] JMBK Worley، M. Bloomsmith، K. Coleman، TL Koban، الطبعة الثامنة من دليل رعاية واستخدام حيوانات المختبر (2011)؛ الآثار المترتبة على الإدارة السلوكية ، صباحا. J. بريماتول. 73 (2011) 98.

[32] Y. Wu، L. Li، T. Wen، YQ Li، تأثيرات الحمايةإشنكوسايدعلى السمية الكبدية التي يسببها رابع كلوريد الكربون في الفئران ، علم السموم 232 (2007) 50-56.

[33] SF Xu ، LM Yu ، ZH Fan ، Q. Wu ، Y. Yuan ، Y. Wei ، وآخرون ، تحسين الجينسنوسيد Rg1 علىمكونات الدموظيفة في التي يسببها سيكلوفوسفاميدكبت نقي العظمالفئران يورو. فارماكول. 695 (2012) 7-12.

[34] Y. Zhang، J. Xing، T. Ai، T. Wen، L. Guan، J. Zhao، Protection ofإشنكوسايدضد إصابات الرئة الحادة الناتجة عن حمض الأوليك في الجرذان ، Free Radic. الدقة. 41 (2007) 798-805.

[35] AB Zhao ، B. Yu ، XL Wu ، KJ Cao ، EQ Li ، QM Li ، وآخرون ، التأثيرات الوقائية علىكبت نقي العظمعولجت الفئران بثلاث صيغ مختلفة للطب الصيني الكلاسيكي ، فارماكوجن. ماج. 7 (2011) 133-140.

[36] M. Zhu ، C. Lu ، W. Li ، التعرض العابر لـإشنكوسايدكافٍ لتنشيط إشارات Trk وحماية الخلايا العصبية من rotenone، J. Neurochem. 124 (2013) 571-580.