الجزء Ⅱ: آلية تنظيم الالتهام الذاتي في الفئران PD المستحثة بواسطة MPTP عبر مسار إشارات MTOR بواسطة Echinacoside

جهة الاتصال: emily.li@wecistanche.com

انقر هنا للجزء Ⅰ

تحسين الأعراض السلوكية العصبية في الفئران PD التي يسببها MPTP بواسطة Echinacoside

قام Echinacoside بتقصير وقت التسلق في الفئران PD التي يسببها MPTP

كان T-turn و T-Total في المجموعة M أطول بشكل ملحوظ من تلك الموجودة في المجموعة N (P <0. 0="" 1).="" انخفض="" t-turn="" و="" t-total="" في="" مجموعة="" eh="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنةً="" بالمجموعة="" m="" (p=""><0. 0="" 1).="" بالمقارنة="" مع="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" m="" ،="" زاد="" المؤشران="" أعلاه="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="" بشكل="" ملحوظ="" (p=""><0.01 و="" p=""><0.05 ،="" على="" التوالي).="" أظهرت="" المقارنات="" بين="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" عدم="" وجود="" فرق="" كبير="" في="" t-turn="" و="" t-total="" (كما="" هو="" موضح="" في="" الشكل="" 1="">

Echinacoside مفيد للصحة

زاد Echinacoside من النشاط التلقائي في الفئران PD التي يسببها MPTP

انخفض عدد التربية في غضون خمس دقائق ، والمسافة الإجمالية في غضون 3 0 دقائق جميعها بشكل ملحوظ في المجموعة M مقارنة مع تلك الموجودة في المجموعة N (P <0. 0="" 1).="" زاد="" المؤشران="" أعلاه="" بشكل="" ملحوظ="" في="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" مقارنة="" مع="" تلك="" الموجودة="" في="" المجموعة="" m="" (p=""><0. 01).="" بالمقارنة="" مع="" مجموعة="" eh="" ،="" انخفض="" عدد="" التربية="" والمسافة="" الكلية="" بشكل="" ملحوظ="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="" (p=""><0.01). لم="" تكن="" هناك="" فروق="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" في="" الفهرين="" أعلاه="" بين="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" (p=""> 0.05) (كما هو موضح في الشكل 1 ب).

الشكل الأول السلوك العصبي في الفئران من كل مجموعة.

（A） اختبار القطب في الفئران لكل مجموعة وقت الدوران （T-Tumn） ؛ إجمالي وقت التعتيم （下 Totl）.

（B النشاط العفوي في الفئران لكل مجموعة: أوقات الانتصاب خلال خمس دقائق (عدد التربية) ؛ مسافة الحركة الأفقية خلال 30 دقيقة (إجمالي المسافة).

(ج) تحليل المشي في فئران كل مجموعة: طول خطوة forelimb ؛ طول خطوة الطرف الخلفي.

(د) الروتارود في الفئران لكل مجموعة: وقت البقاء على الروتارود (المعروف أيضًا باسم الكمون للسقوط）

ملاحظات: * ص<0.05,**p><0.0i, compared="" with="" the="" model=""><0.0l, compared="" with="" the="" high-dose="">إشنكوسايدمجموعة ، ن =6.

قام Echinacoside بإطالة خطى الأطراف الأمامية والخلفية في الفئران PD التي يسببها MPTP

تم تقليل خطوة الأطراف الأمامية والخلفية بشكل ملحوظ في المجموعة M مقارنة بتلك الموجودة في المجموعة N (P <{{0}}. 0="" 1).="" زادت="" خطوة="" الأطراف="" الأمامية="" والخلفية="" بشكل="" ملحوظ="" في="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" مقارنة="" بتلك="" الموجودة="" في="" المجموعة="" m="" (p=""><0. 01).="" بالمقارنة="" مع="" مجموعة="" eh="" والمجموعة="" m="" ،="" تم="" تقليل="" خطوات="" الأطراف="" الأمامية="" والخلفية="" بشكل="" ملحوظ="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="" (p=""><0.01 و="" p=""><0.05 ،="" على="" التوالي).="" لم="" تكن="" هناك="" فروق="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" في="" خطوات="" الأطراف="" الأمامية="" والخلفية="" بين="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" (كما="" هو="" موضح="" في="" الشكل="">

أدى Echinacoside إلى إطالة زمن الانتقال للوقوع في الفئران PD التي يسببها MPTP

تم تقليل وقت البقاء على rotarod ، المعروف أيضًا باسم الكمون للسقوط ، بشكل ملحوظ في المجموعة M مقارنة بالمجموعة N (P <{{0}}. 0="" 1).="" زاد="" وقت="" الاستجابة="" للانخفاض="" بشكل="" ملحوظ="" في="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" مقارنةً="" بالمجموعة="" m="" (p=""><0. 0="" 1).="" انخفض="" زمن="" الوصول="" إلى="" الانخفاض="" بشكل="" كبير="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="" (p=""><0.01 و="" p=""><0.05 ،="" على="" التوالي)="" مقارنة="" بمجموعة="" eh="" ومجموعة="" m.="" لم="" تكن="" هناك="" فروق="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" في="" زمن="" الوصول="" بين="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" (p=""> 0.05) (كما هو موضح في الشكل 1 د).

إشيناكوسايدمفيد للصحة

زاد Echinacoside من محتوى DA والمستقلبات في Striatum في الفئران PD المستحثة بـ MPTP

مقارنة بالمجموعة N ، انخفضت محتويات DA و DOPAC و HVA في المجموعة M بشكل ملحوظ (P <{{0}}. 0="" 1).="" زادت="" محتويات="" da="" و="" dopac="" و="" hva="" بشكل="" ملحوظ="" في="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" مقارنة="" مع="" تلك="" الموجودة="" في="" المجموعة="" m="" (p=""><0. 0="" 1).="" بالمقارنة="" مع="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" m="" ،="" انخفضت="" محتويات="" da="" و="" dopac="" و="" hva="" بشكل="" ملحوظ="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="" (p=""><0. 0="" 1="" و="" p=""><0.05 ،="" على="" التوالي)="" .="" لم="" تكن="" هناك="" فروق="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" في="" محتويات="" da="" ،="" dopac="" ،="" و="" hva="" بين="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" (p=""> 0.05) (كما هو موضح في الشكل 2A-C). مقارنة بالمجموعة N ، انخفض محتوى HT 5- بشكل ملحوظ في المجموعة M (P <0.01) ،="" وزاد="" محتوى="" ht="" 5-="" في="" مجموعة="" eh="" بشكل="" ملحوظ="" (p=""><0.01). مقارنة="" بمجموعة="" eh="" ،="" انخفض="" محتوى="" ht="" 5-="" بشكل="" ملحوظ="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="">< 0.01)="" (as="" demonstrated="" in="" figure="">

الشكل 2 الشكل 2 الكشف عن محتويات الناقل العصبي في المخطط بواسطة الطريقة الكهروكيميائية للمرحلة السائلة عالية الأداء (HPLC-ECD).

(أ) الدوبامين (DA):

(ب) حمض ثنائي هيدروكسيفينيباسيتيك (DOPAC) ؛

(ج) حمض الهوموفانليك (HVA) ؛

(د) 5- هيدروكسي تريبتامين (5- HT).

ملاحظات: * P <0. 05. * P.<00 i.="" compared="" with="" the="" model="" group;=""><><001.compared with="" the="" high-dose="">إشنكوسايدمجموعة

زاد Echinacoside من تعبير TH في Substantia Nigra وقلل من التعبير عن -Synuclein في PD الفئران

أولاً ، تم إجراء تلطيخ التألق المناعي المزدوج لـ TH و -Synuclein. مقارنة بالمجموعة N ، انخفض التعبير عن TH في المادة السوداء بشكل كبير في المجموعة M ، بينما زاد التعبير عن -Synuclein بشكل ملحوظ. ومع ذلك ، بالمقارنة مع مجموعة M ، انخفض التعبير عن - سينوكلين بشكل ملحوظ في مجموعة EH ومجموعة RA. زادت تعبيرات السينوكلين بشكل ملحوظ في مجموعة CQ ومجموعة WO ، والتي كانت أعلى من تلك الموجودة في المجموعة M (كما هو موضح في الشكل 3).

الشكل 3: التلوين المزدوج المناعي لـ TH و a-synuclein في الأسود الكبير في الفئران من كل مجموعة.

أظهر الشكل التلوين المناعي المزدوج للتيروزين هيدروكسيلاز (TH)

-سينوكلين في المادة السوداء في فئران كل مجموعة ن =6

تكبير المجهر الفلوري: 200 × تم نزيف TH مع مضان أخضر ،

كان الطالب الثاني ينزف مع التألق الأحمر ، ويمثل DAPI الأزرق العراة.

كان تداخل اللون الأخضر الثاني الأحمر هو الخلية الموجبة المزدوجة اللون (الأصفر).

بعد ذلك ، تم اعتماد لطخة غربية لقياس المؤشرين أعلاه. أظهرت النتائج أن التعبير البروتيني لـ TH في المجموعة M كان أقل بكثير من ذلك في المجموعة N (P <{{0}}. 0="" 1).="" زادت="" تعبيرات="" البروتين="" لـ="" th="" في="" المجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنةً="" بالمجموعة="" m="" (p=""><0. {{1="" 0}="" 1).="" تم="" تقليل="" تعبيرات="" البروتين="" لـ="" th="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنة="" مع="" تلك="" الموجودة="" في="" مجموعة="" eh="" (p=""><0.01). كما="" زاد="" التعبير="" البروتيني="" للسينوكلين="" في="" المجموعة="" m="" مقارنةً="" بالمجموعة="" n="" (p=""><0.01). ومع="" ذلك="" ،="" فإن="" تعبيرات="" البروتين="" لـ="" -="" سينوكلين="" في="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" انخفضت="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنة="" مع="" مجموعة="" m="" ،="" وكانت="" الفروق="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" (p=""><0.01). بالمقارنة="" مع="" مجموعة="" eh="" والمجموعة="" m="" ،="" زادت="" تعبيرات="" البروتين="" للسينوكلين="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="" بشكل="" ملحوظ="" ،="" وكانت="" الاختلافات="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" (p=""><0.01) (كما="" هو="" موضح="" في="" الشكل="">

الشكل 4 التغييرات في تعبيرات البروتين لـ TH و -Synuclein في أسود كبير في الفئران من كل مجموعة.

ملاحظات ص<><00i,compared with="" the="" model="" group;=""><><00i,compared with="" the="" high-dose="">إشنكوسايدالمجموعة ن =6.

قلل Echinacoside من تعبير P62 في Substantia Nigra في الفئران PD المستحثة بـ MPTP

أولاً ، تم اعتماد لطخة غربية للكشف عن التعبير البروتيني لـ P62. أظهرت النتائج أن التعبير البروتيني لـ P62 في المجموعة M زاد بشكل ملحوظ مقارنة بالمجموعة N (P <0. 0="" 1).="" انخفضت="" تعبيرات="" البروتين="" لـ="" p62="" في="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنة="" بالمجموعة="" m="" ،="" وكانت="" الفروق="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" (p=""><0. 01).="" بالمقارنة="" مع="" مجموعة="" eh="" ،="" زادت="" تعبيرات="" البروتين="" لـ="" p62="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="" بشكل="" ملحوظ="" (p=""><0.01) (كما="" هو="" موضح="" في="" الشكل="" 5c).="" بعد="" ذلك="" ،="" تم="" إجراء="" تلطيخ="" التألق="" المناعي="" لـ="" p62="" و="" dapi.="" وجد="" أنه="" بالمقارنة="" مع="" المجموعة="" n="" ،="" زاد="" p62="" في="" المادة="" السوداء="" بشكل="" أكثر="" وضوحًا="" في="" المجموعة="" m="" ،="" وانخفضت="" تعبيرات="" p62="" في="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" ،="" وزادت="" تعبيرات="" p62="" في="" مجموعة="" cq="" و="" wo="" المجموعة="" (كما="" هو="" موضح="" في="" الشكل="" 5="">

الشكل 5 التغييرات في تعبيرات البروتين لتلطيخ Becin I و LC3ll P62 و P62 المناعي في المادة السوداء في فئران كل مجموعة.

ملاحظات: * ص<><00l, compared="" with="" the="" model=""><>< 0.0i,="" compared="" with="" the="" high-dose="">إشنكوسايدمجموعة

تكبير المجهر الفلوري: 200 × .P62 تم تمييزه بالوميض الأحمر. يمثل DAPI الأزرق العاري ، n=6.

زاد Echinacoside من تعبير Beclin 1 و LC3II في Substantia Nigra في الفئران PD المستحثة بـ MPTP

أولاً ، تم اعتماد لطخة غربية لتحديد التعبير البروتيني لـ Beclin 1 في المادة السوداء في فئران كل مجموعة. وجد أن التعبير البروتيني لـ Beclin 1 في المجموعة M زاد بشكل ملحوظ مقارنة بالمجموعة N (P <0. 0="" 1).="" ومع="" ذلك="" ،="" كانت="" الزيادات="" في="" التعبير="" البروتيني="" لـ="" beclin="" 1="" في="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" أكثر="" وضوحًا="" (p=""><0. 01).="" بالمقارنة="" مع="" مجموعة="" eh="" والمجموعة="" m="" ،="" انخفضت="" تعبيرات="" البروتين="" لـ="" beclin="" 1="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="" بشكل="" ملحوظ="" ،="" وكانت="" الاختلافات="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" (p=""><0.01) (كما="" هو="" موضح="" في="" الشكل="">

نظرًا لأن LC3 هو مؤشر رئيسي على الالتهام الذاتي ، فقد تم إجراء تلطيخ مزدوج لـ TH و LC3. أظهرت النتائج أن عدد الخلايا الموجبة LC3 في المجموعة M زاد بشكل ملحوظ مقارنة مع المجموعة N. زاد عدد الخلايا الموجبة LC3 في مجموعة EH ومجموعة RA بشكل أكبر مما كانت عليه في المجموعة M. ومع ذلك ، عند استخدام مثبط الالتهام الذاتي ، كان عدد الخلايا الإيجابية LC3 في مجموعة WO أقل بكثير من تلك الموجودة في المجموعة M ، في حين أن عدد الخلايا الإيجابية LC3 لم ينخفض ​​بشكل ملحوظ في مجموعة CQ (كما هو موضح في الشكل 6) . بعد ذلك ، تم استخدام لطخة غربية لاكتشاف التعبير البروتيني لـ LC3 في المادة السوداء في فئران كل مجموعة. أشارت النتائج إلى أن التعبير البروتيني لـ LC3II في المجموعة M زاد بشكل ملحوظ مقارنة بالمجموعة N (P <0. 0="" 1).="" زادت="" التعبيرات="" البروتينية="" لـ="" lc3ii="" في="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" ومجموعة="" cq="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنةً="" بالمجموعة="" m="" (p=""><0. 0="" 1).="" في="" مجموعة="" wo="" ،="" انخفض="" التعبير="" البروتيني="" لـ="" lc3ii="" مقارنة="" بمجموعة="" eh="" والمجموعة="" m="" ،="" وكانت="" الاختلافات="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" (p=""><0.01 و="" p=""><0.05 ،="" على="" التوالي)="" (كما="" هو="" موضح="" في="" الشكل="" 5="">

إشيناكوسايدمفيد للشفاءالعاشر

التغييرات في البنية التحتية Substantia Nigra و Autophagosomes التي تمت ملاحظتها بواسطة مجهر الإلكترون النافذ

من خلال مراقبة البنية التحتية للمادة السوداء ، وجد أنه ، باستثناء المجموعة N ، أظهرت الفئران جميعًا درجات متفاوتة من إصابة البنية التحتية للمادة السوداء ، والتي تجلى في شكل تورم في الميتوكوندريا ، وتوسيع الشبكة الإندوبلازمية الخشنة ، وتوسيع جولجي ، وزيادة الجسيمات الحالة ، وتشكيل البلعمة الذاتية ذات البنية الغشائية المزدوجة. زاد عدد البلعوم الذاتي في مجموعة EH ومجموعة RA ومجموعة CQ بشكل ملحوظ مقارنة بالمجموعات الأخرى. كان عدد autophagosomes في مجموعة CQ أعلى من ذلك في المجموعة M ، والذي كان متسقًا مع نتائج زيادة التعبير البروتيني لـ LC3II في التلوين المزدوج الفلوري واللطخة الغربية. واقترح أيضًا أن عدد LC3II و autophagosomes كانا مرتبطين إلى حد ما. لم تكن هناك زيادة واضحة في البلعمة الذاتية في مجموعة WO ، مما يشير إلى أنه في هذه المجموعة ، زيادة الالتهام الذاتي الناتج عنإشنكوسايدتم منعه (كما هو موضح في الشكل 7).

الشكل 7 التغييرات في البنية التحتية وتشكيل البلعمة الذاتية في أسود كبير في الفئران من كل مجموعة.

(أ) مجموعة التحكم في المحلول الملحي الطبيعي ، مع التركيب الطبيعي للمادة السوداء ؛

(ب) المجموعة النموذجية ، مع مظاهر انتفاخ الميتوكوندريا ، وتوسع الشبكة الإندوبلازمية الخشنة ، وتشكيل الليزوزوم والجسيم الذاتي:

(ج ود)إشنكوسايدالشغل. مع تكوين أكثر نسبيًا للجسيم الجسيمي والجسيم الذاتي:

(هـ) مجموعة الراباميسين ، مع مظاهر انتفاخ الميتوكوندريا وتشكيل الجسيم الجسيمي والجسيم الذاتي ؛

(و) مجموعة الكلوروكين ، مع مظاهر تورم الميتوكوندريا وتشكيل الجسيم الجسيمي والجسيم الذاتي:

(G و H) مجموعة Wortmannin. مع الميتوكوندريا المنتفخة بشكل ملحوظ ، وشبكة ميكانيكية موسعة

(G) ، وتورم الميتوكوندري 2. توسع الشبكة الإندوبلازمية الخشنة ، والتوسع الواضح df في Gds وزيادة في الجسيمات.

تأثير Echinacoside على تعبير البروتين لـ AKT و mTOR في Substantia Nigra في الفئران PD المستحثة بـ MPTP

تم استخدام لطخة غربية للكشف عن تعبير البروتين عن AKT و mTOR في كل مجموعة. أظهرت النتائج أنه بالمقارنة مع المجموعة N ، انخفض التعبير البروتيني لـ p-AKT / AKT بشكل ملحوظ في المجموعة M (P <0. 0="" 1).="" زادت="" تعبيرات="" البروتين="" لـ="" p-akt="" akt="" في="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنةً="" بالمجموعة="" m="" (p=""><0. {{1="" 0}}="" 1)="" ،="" وتعبير="" البروتين="" عن="" كان="" p-akt="" akt="" في="" مجموعة="" eh="" أعلى="" منه="" في="" مجموعة="" ra="" (p=""><0. 0="" 1).="" بالمقارنة="" مع="" مجموعة="" eh="" ،="" انخفضت="" تعبيرات="" البروتين="" لـ="" p-akt="" akt="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="" بشكل="" ملحوظ="" (p=""><0.01) (كما="" هو="" موضح="" في="" الشكل="" 8).="" أيضًا="" ،="" وجد="" أن="" التعبير="" البروتيني="" لـ="" p-mtor="" mtor="" في="" المجموعة="" m="" كان="" أقل="" قليلاً="" من="" ذلك="" في="" المجموعة="" n="" (p=""><0.05) ،="" لكن="" الانخفاض="" في="" تعبير="" البروتين="" عن="" p-mtor="" mtor="" كان="" أكثر="" أهمية="" في="" مجموعة="" eh="" ومجموعة="" ra="" مقارنة="" بالمجموعة="" m="" (p=""><0.01). بالمقارنة="" مع="" مجموعة="" eh="" ،="" زاد="" تعبير="" البروتين="" عن="" p-mtor="" mtor="" في="" مجموعة="" cq="" ومجموعة="" wo="" (p=""><0.01) (كما="" هو="" موضح="" في="" الشكل="" 8="" ،="" الجزء="">

الشكل 8 التغييرات في تعبيرات البروتين لـ AKT و mTOR في الأسود الكبير في الفئران في كل مجموعة.

ملاحظات: * P <{0}}. 05،="" **="" p=""><0.01 ،="" مقارنة="" بمجموعة="" النماذج="" ؛="" ##="">< 0.01,="" compared="" with="" the="" high-dose="">إشنكوسايدمجموعة ، ن=6.

إشيناكوسايدمفيد للشفاءالعاشر

انقر هنا للجزء Ⅲ