arلغة
الصفحة الرئيسية / معرفة / المحتوى

معرفة

تأثير العلاج بالبروتون على قتل الخلايا السرطانية والبيئة المكروية المناعية لسرطان الخلايا الكبدية

Dec 08, 2023

خلاصة: يتميز العلاج الإشعاعي بالعلاج بالبروتون (PT) بمزايا قياس الجرعات مقارنةً بالعلاج بالفوتون، مما يساعد على توسيع النافذة العلاجية للعلاج الإشعاعي لسرطان الخلايا الكبدية (HCC). قمنا بتقييم استجابة سرطان الكبد إلى PT وفحصنا الآليات الأساسية. تم اختيار خطوط خلايا سرطان الكبد البشرية HepG2 وHuH7 وخط خلايا سرطان الكبد الفأري Hepa1–6 لإجراء تجارب على الخلايا والحيوانات لفحص الاستجابة الناجمة عن تشعيع PT. تم فحص التغيرات البيولوجية والاستجابة المناعية بعد تشعيع PT. أظهرت التجارب المختبرية عدم وجود فرق كبير في بقاء الخلية بعد PT مقارنة بالعلاج الإشعاعي بالفوتون. في نموذج ورم الفئران، كانت الأورام أصغر حجمًا بعد 12 يومًا من تشعيع PT. تضمنت التغييرات الأساسية زيادة تلف الحمض النووي، ومستويات IL-6 المنتظمة، والبيئة الدقيقة للورم المناعي المنظم. أظهر تحليل البروتين في المختبر وفي الجسم الحي أن PT زاد من مستوى يجند موت الخلية المبرمج 1 (PD-L1) المعبر عنه في الخلايا السرطانية وقام بتجنيد الخلايا الكابتة المشتقة من النخاع الشوكي (MDSCs). وارتبطت الزيادة في PD-L1 بشكل إيجابي مع جرعة التشعيع. في نماذج الفأرة الجينية Hepa1–6، أدى الجمع بين PT ومضاد PD-L1 إلى زيادة تأخير نمو الورم مقارنةً بـ PT وحده، والذي ارتبط بزيادة الخلايا التائية المتسللة للورم وتجنيد MDSC المخفف في البيئة الدقيقة. علاوة على ذلك، عندما تم تطبيق PT على ورم سرطان الكبد الأولي، أظهرت الفئران المعالجة بالأجسام المضادة لـ PD-L1 أورامًا أصغر متزامنة غير مشععة. في الختام، تم تحديد استجابة سرطان الكبد لPT عن طريق قتل الخلايا السرطانية والاستجابة المناعية في البيئة الدقيقة للورم. كان الجمع مع الجسم المضاد لـ PD-L1 لتعزيز المناعة المضادة للأورام مسؤولاً عن التآزر العلاجي لسرطان الخلايا الكبدية المعالج بـ PT. بناءً على النتائج التي توصلنا إليها، نقترح أن PT مع مضادات PD-L1 قد تكون سياسة علاجية واعدة لسرطان الكبد.

effects of cistance-antitumor (2)

فوائد cistanche tubulosa-Antitumor

الكلمات المفتاحية: سرطان الكبد؛ العلاج بالبروتون؛ PD-L1؛ منيع

1 المقدمة

سرطان الخلايا الكبدية (HCC) هو سرطان يحدث عالميًا مع حدوث نسبة عالية نسبيًا في جنوب شرق آسيا [1]. يعاني غالبية المرضى من سوء التشخيص بسبب الأورام المتقدمة و/أو ضعف وظائف الكبد. تقليديا، ارتبط العلاج الإشعاعي (RT) بجرعة محددة لعلاج سرطان الكبد بارتفاع خطر الإصابة بالتهاب الكبد الناجم عن الإشعاع. ساعدت التحسينات في تقنيات تقديم العلاج الإشعاعي على توسيع النافذة العلاجية لمرض سرطان الكبد. لقد أدى تطوير RT مع العلاج بالبروتون (PT) إلى تسليط الضوء على استخدام RT لعلاج سرطان الكبد [2،3]. يتمتع PT بمزايا قياس الجرعات مقارنة بالعلاج بالفوتون التقليدي لعلاج السرطان، خاصة بالنسبة لسرطان الكبد وسرطان الرأس والرقبة وسرطان الثدي. أشارت الدراسات الحديثة إلى أنه قد تكون هناك اختلافات في التغيرات البيولوجية الناجمة عن RT، بما في ذلك في تحريض تلف الحمض النووي، والإجهاد التأكسدي، وتنظيم الخلايا المناعية، بين PT والفوتونات عند جرعات الفعالية البيولوجية النسبية المكافئة [4-7]. إن إجراء المزيد من التحقيقات حول التأثير الإشعاعي البيولوجي لـ PT سيسهل الفرصة لتوفير تطوير استراتيجيات PT الواعدة لعلاج السرطان. يعد الجمع بين RT والعلاج المناعي في البيئات السريرية واعدًا للعديد من المؤشرات [8،9]. نظرًا لأن الالتهاب المزمن يؤدي إلى الاستعداد لتطور سرطان الكبد، فإن سرطان الكبد يعد هدفًا محتملاً للعلاج المناعي [10]. RT له تأثيرات مناعية ومثبطة للمناعة على البيئة الدقيقة للورم [9]. على الرغم من أنه قد ثبت أن RT يؤدي إلى موت الخلايا المناعية ويعزز تسلل الخلايا المناعية المضادة للأورام [11،12]، فقد أظهرت العديد من الدراسات أن RT يمكن أن يحفز السيتوكينات والخلايا التنظيمية المناعية، مما يؤدي إلى بيئة ميكروية للورم أكثر تثبيطًا للمناعة. وقد تبين أن الجمع بين العلاج المناعي وRT يعزز استجابة الورم مقارنة بأي من الوسيلة وحدها ويلغي التأثيرات المثبطة للمناعة الناجمة عن RT [13،14]. أظهرت العديد من الدراسات قبل السريرية والسريرية أن العلاج بالفوتون RT والعلاج المناعي له تأثير إيجابي على السيطرة على الورم في سرطان الكبد [15،16]. على حد علمنا، تم الحصول على جميع التقارير تقريبًا المتعلقة بالاستجابات المناعية المستحثة بالراديو باستخدام الإشعاع استنادًا إلى الفوتونات. إن الفهم الأفضل للآليات المسؤولة عن الاستجابة لمرض PT يمكن أن يؤدي إلى طرق علاجية أكثر فعالية لسرطان الكبد. تحتاج التأثيرات البيولوجية لـ PT المسؤولة عن السيطرة على الورم والاستجابة المناعية إلى مزيد من البحث. لذلك، نحن نهدف إلى تقييم تأثير الإشعاع باستخدام PT والاستجابة المناعية في البيئة الدقيقة للورم. لقد بحثنا أيضًا فيما إذا كان الجمع بين PT والحصار المفروض على PD-L1 له تأثير تآزري على التحكم في ورم سرطان الكبد.

2. المواد والأساليب

2.1. زراعة الخلايا 

تم الحصول على خط خلايا سرطان الكبد البشري HepG2 وخط خلايا سرطان الكبد الفأري Hepa1–6 من مركز جمع وأبحاث Bioresource. بالإضافة إلى ذلك، تم توفير خلايا HuH7، وهي خط خلايا سرطان الكبد البشري، من قبل الدكتور ين هاو، تشين (مستشفى كاوشيونغ تشانغ غونغ التذكاري، تايوان). تمت الموافقة على استخدام خطوط الخلايا من قبل لجنة أخلاقيات البحث المؤسسي (رقم 00464-2021120952922). تمت زراعة خطوط الخلايا في وسط نسر Dulbecco المعدّل (DMEM) المضاف إلى 10٪ من مصل الأبقار الجنيني (FBS). بالإضافة إلى ذلك، تم الحفاظ على خلايا THP -1 البشرية أحادية الخلية في وسط استزراع RPMI 1640. يمكن تمييز وحيدات THP -1 إلى بلاعم M1 أو M2 عند احتضانها في وسط مكيف [17،18]. لتحديد تأثيرات PT على قدرة الخلايا السرطانية على تحفيز تمايز البلاعم M2، تم زرع خلايا HuH7 مع أو بدون تشعيع PT في 6- صفائح جيدة قبل 24 ساعة من نهاية استقطاب البلاعم M2. بعد 24 ساعة من الاستزراع النباتي، تم تحليل التعبير عن CD163، علامة البلاعم M2، باستخدام البلاعم. تم إجراء تحليل الخلايا المنشط متعدد الألوان (FACS) باستخدام مقياس التدفق الخلوي من عيار FACS (BD Biosciences) على معلقات خلية واحدة محضرة من البلاعم المتمايزة، وتم إجراء المناعية لـ CD163 باستخدام جسم مضاد أحادي النسيلة يحمل علامة مضان. تم إجراء التجارب في المختبر في المختبر الموحد بمستشفى تشانغ غونغ التذكاري، والذي قدم منصات الخدمة بما في ذلك فارز الخلايا، ومحلل الخلايا متعدد الألوان، والمجهر متحد البؤر.

effects of cistance-antitumor

فوائد cistanche tubulosa-Antitumor

2.2. التشعيع

تم تحديد الفعالية البيولوجية النسبية للبروتونات عند 1.1، وتم حساب جرعة الفعالية البيولوجية النسبية (RBE) عن طريق ضرب جرعة البروتون بهذه القيمة [19]. في هذه الدراسة، استخدمنا جرعة RBE لتقييم التأثير الناجم عن RT. توصف الجرعة في العلاج الإشعاعي بالبروتون بـ Gy (RBE) عن طريق زيادة الجرعة الفيزيائية بنسبة 10%، أي جرعة البروتون RBE=جرعة البروتون الفيزيائية × 1.1. تلقت الخلايا والفئران RT محليًا إما عن طريق تشعيع الفوتون أو PT بجرعة RBE. تم إجراء تشعيع الفوتون باستخدام تخطيط العلاج Varian 21EX وEclipse. في المختبر، تم تشعيع الخلايا المتنامية بشكل كبير بجرعات واحدة من 0 و3 و6 و9 غراي باستخدام شعاع 6 ميجا فولت لتحليل إشعاع الفوتون. بالنسبة إلى PT، تم إجراء التشعيع عن طريق مسح شعاع القلم الرصاص (PBS) بجرعات بروتونية مختلفة (0، 3، 6، 9، و12 غراي (RBE)))، مع طاقة تقابل 93.6-109.2 MeV و72-143.2 MeV للخلايا. والفئران على التوالي. تم إجراء تشعيع الخلايا والماوس عن طريق وضع الخلايا في منتصف قمة Bragg المنتشرة (SOBP؛ عرض 1 سم للخلية PT، وعرض 6 سم لتشعيع الماوس PT) لمحاكاة الحالات السريرية (الشكل 1 أ، ب). تم تشعيع البروتون بواسطة السيكلوترون المستخدم في المستشفى (Sumitomo Heavy Industries, Ltd.، طوكيو، اليابان)، والذي يولد شعاع بروتون مستمر وعالي الكثافة. كان حجم حقل RT 20 × 10 سم لفحص التأثير الأبسكوبي، أو 20 × 15 سم لفحص تأثير مبيد الأورام لـ PT في الجسم الحي، أو 20 × 20 سم لفحص تأثير PT في المختبر. كانت محطة Ray هي نظام تخطيط العلاج المستخدم لحساب جرعة RT (الإصدار 8.1، Ray Search Laboratories، ستوكهولم، السويد).

Figure 1. Preclinical model for PT. The experimental proton beam designs for in vitro (a) and animal tumor models (RT field for liver tumor irradiation, blue line; RT field to examine the abscopal effect, red line) (b).


الشكل 1. نموذج ما قبل السريرية لPT. تصميمات شعاع البروتون التجريبية لنماذج الأورام المختبرية (أ) والحيوانية (مجال RT لتشعيع أورام الكبد، الخط الأزرق؛ حقل RT لفحص التأثير الأبسكوبي، الخط الأحمر) (ب).

2.3. فحص انتشار الخلايا التائية

لفحص ما إذا كان PT قادرًا على تنظيم تأثير الخلايا السرطانية والخلايا الكابتة المشتقة من النخاع الشوكي (MDSCs) على تكاثر الخلايا التائية CD8+، قمنا بقياس تكاثر الخلايا التائية CD8+ بعد التحفيز. تمت تسمية الخلايا التائية CD8+ المعزولة باستخدام الخرزات الدقيقة المضادة لـ CD8 بإستر كربوكسي فلوريسئين succinimidyl (CFSE) وتم زرعها في 96- لوحات جيدة تحتوي على خلايا CD11b + في وجود أو عدم وجود خلايا سرطانية بعد 48 ساعة من PT. تم تحفيز تكاثر خلايا CD 8+ T بواسطة خرزات مضادة لـ CD3 / CD28 (Invitrogen، Waltham، MA، USA). تم تحليل تلطيخ الفلورسنت CFSE باستخدام قياس التدفق الخلوي بعد 3 أيام من التحفيز.

2.4. تحريض CD14+HLA-DR- من خلايا الدم وحيدة النواة (PBMCs)

تم التعرف على مجموعة فرعية جديدة من MDSCs بناءً على وجود تعبير CD14 ولكن غياب مستضد الكريات البيض البشري (HLA) - تعبير DR (CD 14+ HLA-DR−) في الدم المحيطي لمرضى السرطان. يقال إن التراكم غير الطبيعي لخلايا CD 14+ HLA-DR− في PBMC يساهم في التهرب المناعي للورم ويرتبط بتشخيص السرطان [20-22]. لتقييم دور تشعيع PT في تحريض MDSCs، تم تقييم النسبة المئوية للخلايا النخاعية CD 14+ HLA-DR− من PBMCs المحتضنة بخلايا سرطانية مشععة PT لمدة 24 ساعة. تم تحليل نسبة الخلايا النخاعية CD 14+ HLA-DR− ومستوى التعبير لـ PD-L1 باستخدام FACS (BD Biosciences، San Jose، CA، USA).

2.5. مقايسة استنساخية

واستخدمت فحوصات استنساخية لدراسة تأثير RT (PT مقابل الفوتون RT) على فقدان بقاء الخلايا التناسلية. تم تشعيع مزارع الخلايا ثم حضنتها عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لتكوين المستعمرة. بعد 10 أيام، تم تثبيت المستعمرات وصبغها باللون البنفسجي البلوري لحساب المستعمرات. تم تسجيل المستعمرات لتحديد كفاءة الطلاء والكسور الباقية عند جرعة RBE معينة. جزء البقاء على قيد الحياة هو عدد المستعمرات بعد التعرض لـ RT، مع تصحيح لكفاءة الطلاء.

2.6. نماذج الورم المسانجي (خارج الرحم وتقويم العظام).

امتثلت جميع الدراسات على الحيوانات لجميع اللوائح الأخلاقية ذات الصلة بالبحوث الحيوانية وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة الحيوانات التجريبية في المستشفى. تم إجراء التجارب على الحيوانات في مركز حيوانات المختبر بمستشفى تشانغ جونج التذكاري، والذي حصل على الاعتماد الكامل من جمعية تقييم واعتماد الرعاية الدولية لحيوانات المختبر (AAALAC). استخدمنا الفئران C57BL/6J كنموذج لزرع ورم الكبد. في نموذج الورم خارج الرحم والمثالي، تم زرع الخلايا السرطانية (Hepa 1–6 1 × 106 خلية) تحت الجلد في منطقة الفخذ اليمنى و/أو زرعها أثناء العملية الجراحية في منطقة قبة الكبد. لفحص استجابة أورام الكبد لـ PT في الجسم الحي، تم إعطاء تشعيع PT المحلي لمدة 12 غراي (RBE) للأورام بعد 14 يومًا من زرع الخلايا السرطانية Hepa1-6 (الشكل 1 ب). تعرضت فئران التحكم للإشعاع الزائف. لمعالجة التأثير abscopal لـ PT على المضيفين ذوي الكفاءة المناعية الحاملة للورم، قمنا في نفس الوقت بزراعة خلايا سرطان Hepa1-6 في الفخذ الأيمن (الورم الأساسي) وأعلى الظهر (الورم المتزامن الثانوي). بعد أربعة عشر يومًا من زرع الورم، تم إعطاء PT مع 12 غراي (RBE) للورم الرئيسي ولكن ليس للورم المتزامن الثانوي. لاحظنا بعد ذلك نمو الورم (بما في ذلك الأورام الأولية المشععة والمتزامنة غير المشععة) في النقاط الزمنية المحددة. للتحقيق في آثار مضاد PD-L1 على السيطرة على الورم المحلي بوساطة PT والتأثير الأبلقي، أعطيت الفئران الحاملة للورم جرعة داخل الصفاق من 250 ميكروغرام من الجسم المضاد PD-L1 مباشرة بعد تشعيع PT وكل يومين حتى نهاية العلاج. التجارب. تم الحصول على الجسم المضاد PD-L1 (B 7- H1، 10F.9G2) المضاد للفأر من Bio X Cell (لبنان، NH، الولايات المتحدة الأمريكية).

Desert ginseng-Improve immunity (21)

فوائد سيستانش للرجال - تقوية جهاز المناعة

انقر هنا لعرض منتجات Cistanche Enhance Immunity

【اطلب المزيد】 البريد الإلكتروني: cindy.xue@wecistanche.com / تطبيق Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.7. تحليلات التدفق الخلوي لـ MDSC في الجسم الحي

تتميز MDSC بالتعبير المشترك عن مستضدات تمايز نسب الخلايا النقوية Gr1 وCD11b. ولذلك، استخدمنا جسمًا مضادًا محددًا مضادًا لـ Gr1، والذي يتفاعل مع حلقة مشتركة على Ly-6G وLy-6C، وجسم مضاد خاص بـ CD11b (BD Pharmingen) لتعريف الفأرة MDSCs على أنها CD11b + غ1+ [23]. علاوة على ذلك، يتكون مستضد التمايز النخاعي Gr-1 من حلقتين معترف بهما بواسطة الأجسام المضادة لـLy-6G والأجسام المضادة لـLy6C. يتكون مجتمع CD11b + Gr -1+ MDSCs من مجموعتين فرعيتين رئيسيتين: الخلايا ذات النمط الظاهري المحبب الذي يعبر عن Ly -6 G، والخلايا ذات النمط الظاهري الأحادي الذي يعبر عن Ly6C. تم التعرف على مجموعة فرعية جديدة من MDSCs على أنها MDSCs أحادية الخلية، والتي تم تعريفها على أنها CD11b + Ly6G- في الفئران. أجرينا تحليل FACS والتألق المناعي لفحص تأثير التشعيع على توظيف MDSC بعد تلقي الفئران للإشعاع. تم تنفيذ FACS على معلقات خلية واحدة محضرة من أورام كاملة وطحال بعد الهضم والتلطيخ المناعي لـ CD11b وGr1 وLY6G مع أجسام مضادة وحيدة النسيلة تحمل علامة التألق (BD PharMingen). تم قياس النسبة المئوية لـ MDSC عبر قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المذكورة أعلاه. واستخدمت الأجسام المضادة الخاصة بالنظير كعناصر تحكم سلبية في نظام مراقبة الأصول الميدانية.

2.8. تحليل احصائي

تم تحليل العينات باستخدام اختبار الطالب. يتم تقديم البيانات كخطأ متوسط ​​± قياسي للوسط (SD). تضمنت جميع التجارب الخلوية ثلاث مكررات بيولوجية لكل حالة [24] وتم إجراؤها ثلاث مرات على الأقل بشكل مستقل. بالنسبة للتجارب التي أجريت على الجسم الحي، تم استخدام ستة حيوانات لكل مجموعة، وتم إجراء تجربتين مستقلتين على الأقل. تم أخذ مستوى احتمال p <0.05 للإشارة إلى الأهمية الإحصائية ما لم ينص على خلاف ذلك.

3. النتائج:

3.1. استجابة سرطان الكبد لاستجابة PT لسرطان الكبد

تم تعريض الخلايا السرطانية البشرية والفأرية لجرعة PT واحدة تبلغ 0 أو 3 أو 6 أو 9 غراي (RBE)، وتم فحص ومقارنة موت الخلايا عند 48 ساعة ونسبة البقاء على قيد الحياة للخلايا المكونة للمستعمرة. مع الفوتون-RT. لم يكن هناك فرق كبير في بقاء الخلية عند RBE المكافئ بين PT والفوتون-RT (الشكل 2 أ، ب). تشكيل p-H2AX هو استجابة خلوية لانكسار الحمض النووي المزدوج، ووجود التعرض للكاريتيكولين ومجموعة الحركة العالية Box 1 (HMGB1) بمثابة السمات المميزة لموت الخلايا المناعية الناجم عن RT [25-27]. كما هو مبين في الشكل 2 ج، عزز PT تعبير الكالريتيكولين وHMGB1 المرتبط بزيادة تلف الحمض النووي بعد 24 ساعة من RT. ذكرت دراسة سابقة [28] أن الفوتون-RT ينظم IL-6، والذي كان مرتبطًا بمقاومة سرطان الكبد لـ RT. تكشف البيانات (الشكل 2 ج، د) أن PT ينظم مستوى IL -6 في خلايا سرطان الكبد التي تم تحليلها باستخدام IF وRT PCR في الوقت الحقيقي عند 24 و48 ساعة بعد PT. لتوصيف ما إذا كانت الزيادة في IL -6 بواسطة PT مرتبطة بنشاط المروج IL6، أجرينا فحوصات نشاط luciferase باستخدام خلايا HepG2 وHuH7 المنقولة بثبات باستخدام ناقل يعبر عن بنيات المروج IL-6 (الشكل 2 هـ). . تشير البيانات الكمية إلى أن PT زاد نشاط المروج IL-6 عند 48 ساعة بعد 6 غراي (RBE) مقارنة بخلايا التحكم.

3.2. الاستجابة لعلاج PT في المضيف ذو الكفاءة المناعية

في الجسم الحي، تعد نماذج الأورام الحيوانية أدوات أساسية في التنبؤ بفعالية الاستراتيجيات الجديدة المضادة للسرطان. استخدمنا نماذج ورم الفأر المسانجي لدراسة آثار PT على السيطرة على ورم سرطان الكبد. استنادًا إلى ملاحظة نشاط الورم عن طريق فحص التصوير المقطعي الجزيئي الفلوري (FMT) في الموقع وقياس حجم الورم، وجدنا أن هناك انخفاضًا ملحوظًا في نشاط امتصاص الجلوكوز في الورم وأورامًا أصغر بعد 12 يومًا من PT مقارنةً بـ sham-RT (الشكل 3 أ، ب). لمزيد من دراسة الآلية المسؤولة عن الاستجابة لـ PT، أجرينا تحليلات FACS والتألق المناعي باستخدام الأورام بعد 3 أيام من PT أو التشعيع الوهمي. تم الإبلاغ عن أن التعرض للكاريتيكولين هو مؤشر مناعي لموت الخلايا المبرمج الناجم عن جرعة منخفضة من RT، ويرتبط HMGB1 بموت الخلايا الناجم عن جرعة أعلى من RT [29]. علاوة على ذلك، تم الإبلاغ عن أن IL-6 يلعب دورًا في التعديل المناعي الناجم عن RT [30]. لقد أبلغنا سابقًا أن تعبير IL-6 قد تم تنظيمه بواسطة الفوتون RT وأن زيادة IL6 مرتبطة بالاستجابة الإشعاعية لأورام الكبد [28]. كما هو مبين في الشكل 3 ج، د، زاد PT موت الخلايا السرطانية المرتبطة بزيادة تلف الحمض النووي، وتعبير IL6 وHMGB1 مقارنة بالتشعيع الزائف.

3.3. التأثيرات المناعية الناجمة عن PT

تم الإبلاغ عن أن تحفيز استقطاب البلاعم M2 هو العنصر المثبط الرئيسي للمناعة في البيئة الدقيقة للورم المشعع [17،18]. لاختبار ما إذا كان PT قد عزز تمايز الخلايا الوحيدة في خلايا M2، قمنا باحتضان وحيدات THP -1 في مرحلة الراحة (M 0) في الوسط المكيف لمدة 72 ساعة لاستقطاب M2. قمنا بعد ذلك بتحليل مستويات علامة M2 في الخلايا الضامة من الخلايا الوحيدة عن طريق الزراعة في طاف الثقافة مع أو بدون خلايا HuH7 المشععة بـ PT قبل 24 ساعة من نهاية استقطاب البلاعم M2. كما هو مبين في الشكل 4 أ، أدت إضافة الخلايا السرطانية المشععة بـ PT إلى ثقافة البلاعم إلى زيادة التعبير عن علامة M2 CD163 في البلاعم في المختبر. لقد بحثنا أيضًا في دور PT في قدرة الخلايا السرطانية على حث MDSCs من حيدات في الدم المحيطي للمانحين عن طريق الزراعة مع الخلايا السرطانية مع أو بدون PT لمدة 48 ساعة. تم التعرف على مجموعة فرعية جديدة من MDSCs بواسطة خلايا CD 14+ HLA-DR− في PBMC. يكشف الشكل 4 ب أن تشعيع PT كان مرتبطًا بتردد أعلى للخلايا النخاعية CD 14+ HLA-DR مقارنةً بالتحكم. علاوة على ذلك، كان هناك تعبير أعلى عن iNOS، وهو علامة وظيفية لكبت المناعة بوساطة MDSC، في مجموعة فرعية من الخلايا التي تم زراعتها مع الخلايا السرطانية المشععة بـ PT (الشكل 4 ج). علاوة على ذلك، تم التأكد من أن CD163 هو علامة المظهرية للبلاعم M2 التي يمكن استخدامها للتمييز بين البلاعم M2 وM1. كما هو مبين في الشكل 4 د، هـ، أدى PT إلى زيادة خلايا CD 163+ في الأورام المشععة PT المرتبطة بتحريض MDSCs أحادية الخلية في الفئران الحاملة للورم. تم الإبلاغ عن أن RT يؤدي إلى موت الخلايا المناعية ويعزز تسلل الخلايا المناعية. لمزيد من اختبار دور PT في العواقب الوظيفية للخلايا السرطانية على قمع الخلايا التائية بوساطة MDSC، تم تقييم تكاثر الخلايا التائية CD 8+ المصنفة في وجود الخلايا السرطانية مع أو بدون 6 غراي (RBE ) تشعيع PT. تكشف البيانات أن خلايا MDSC-CD11b + قللت من تكاثر الخلايا التائية، وأن حضانة الخلايا السرطانية المشععة بـ PT عكست تكاثر الخلايا التائية CD8+ بعد التحفيز (الشكل 4f).

Figure 2. Response of HCC to PT in vitro. Effects of PT treatment on the cell death of HuH7 cells. (a) Fluorescence-activated cell sorting with propidium iodide and Annexin V staining 48 h after PT for the indicated dose (RBE), and (b) cell survival fractions by clonogenic assays presented with the ratio normalized by the survival fraction under control conditions. The plating cell numbers for 0, 3, 6, and 9 Gy (RBE) were 500, 1000, 1500, and 3000 per well, respectively. (c) Immunofluorescence for PT-induced DNA damage and markers for immunogenicity cell death is shown by representative slides and quantitative data (DAPI, blue; pH 2AX and calreticulin, green; HMGB1 and IL6, red). The y-axis represents the relative fold changes in the target protein expressions. (d) The levels of IL-6 were examined via real-time RT–PCR 48 h after PT. (e) Stable transfection of HepG2 and HuH7 cells with plasmids containing IL-6 promoter–reporter constructs. Values are represented as fold activation of luciferase activity of the reporter plasmid in the indicated condition. Data are presented as means ± standard errors of the mean. * p < 0.05

الشكل 2. استجابة سرطان الكبد لPT في المختبر. آثار علاج PT على موت خلايا خلايا HuH7. ( أ ) فرز الخلايا المنشط بالتألق باستخدام يوديد البروبيديوم وتلطيخ Annexin V لمدة 48 ساعة بعد PT للجرعة المشار إليها (RBE)، و (ب) كسور بقاء الخلية عن طريق فحوصات استنساخية مقدمة مع النسبة الطبيعية بواسطة جزء البقاء تحت ظروف التحكم. كانت أرقام خلايا الطلاء لـ 0 و3 و6 و9 غراي (RBE) هي 500 و1000 و1500 و3000 لكل بئر على التوالي. (ج) يظهر التألق المناعي لتلف الحمض النووي الناجم عن PT وعلامات موت الخلايا المناعية من خلال شرائح تمثيلية وبيانات كمية (DAPI، أزرق؛ pH 2AX وcalreticulin، أخضر؛ HMGB1 وIL6، أحمر). يمثل المحور y التغيرات النسبية في تعبيرات البروتين المستهدف. ( د ) تم فحص مستويات IL -6 عبر RT – PCR في الوقت الفعلي لمدة 48 ساعة بعد PT. ( هـ ) ترنسفكأيشن مستقر لخلايا HepG2 و HuH7 مع البلازميدات التي تحتوي على بنيات المروج والمراسل IL -6. يتم تمثيل القيم كتنشيط أضعاف لنشاط لوسيفيراز للبلازميد المراسل في الحالة المشار إليها. يتم تقديم البيانات كوسيلة ± الأخطاء المعيارية للوسط. * ع <0.05

Figure 3. Response to PT treatment in immunocompetent mice. Representative images and quantitative data were determined via FMT analysis of glucose uptake at 0, 3, or 12 days with or without PT irradiation (a). The y-axis represents the ratio normalized by the value of the tumor at 0 days with sham irradiation. Representative images and quantitative data of tumor pictures (b) from mice bearing s.c. tumors 12 days after 12 Gy (RBE) PT or sham irradiation are shown. The y-axis represents the relative fold change in tumor size at the indicated time after PT. DNA damage by IF (c) and cell death by FACS (d) were evaluated at 3 days after PT. The y-axis is the relative fold change in target protein expressions and the cell death rate at 3 days after PT. Data are presented as means ± standard errors of the mean. * p < 0.05


الشكل 3. الاستجابة لعلاج PT في الفئران ذات الكفاءة المناعية. تم تحديد الصور التمثيلية والبيانات الكمية من خلال تحليل FMT لامتصاص الجلوكوز عند 0 أو 3 أو 12 يومًا مع أو بدون تشعيع PT (أ). يمثل المحور y النسبة التي تم تطبيعها بقيمة الورم عند 0 يومًا مع تشعيع زائف. يتم عرض الصور التمثيلية والبيانات الكمية لصور الورم (ب) من الفئران التي تحمل أورام الشوري بعد 12 يومًا من 12 غراي (RBE) PT أو التشعيع الوهمي. يمثل المحور y التغير النسبي في حجم الورم في الوقت المحدد بعد PT. تم تقييم تلف الحمض النووي بواسطة IF (ج) وموت الخلايا بواسطة FACS (د) في 3 أيام بعد PT. المحور y هو التغير النسبي في تعبيرات البروتين المستهدف ومعدل موت الخلايا بعد 3 أيام من PT. يتم تقديم البيانات كوسيلة ± الأخطاء المعيارية للوسط. * ع < 0.05

3.4. دور PT في التعبير عن بروتين موت الخلايا المبرمج 1 (PD-L1)

PD-L1 هو أحد المحددات الحاسمة للتوازن في البيئة الدقيقة للورم المناعي [31]. زاد PT من التعبير عن PD-L1 في خلايا ورم الكبد، وارتبط مستوى التعبير بشكل إيجابي مع جرعة RBE من PT في المختبر (الشكل 5 أ، ب). لمزيد من التحقق من صحة آثار PT على PD-L1 في الجسم الحي، قمنا بفحص مستوى التعبير عن PD-L1 في أورام سرطان الكبد HCC الفئران باستخدام IF وFACS. تكشف البيانات الواردة في الشكل 5 ج، د عن زيادة كبيرة في تعبير PD-L1 في الأورام بعد 3 أيام من الإصابة بـ PT. درسنا أيضًا ما إذا كان PT ينظم التعبير عن PD-L1 في MDSCs باستخدام خلايا CD11b + النخاعية المصنفة من الأورام. أشارت النتائج إلى أن PT زاد تعبير PD-L1 في خلايا CD11b + المصنفة (الشكل 5 هـ، و).

3.5. تأثير PD-L1 على استجابة سرطان الكبد لـ PT في الجسم الحي

لتحديد ما إذا كان PD-L1 يلعب دورًا في الحساسية الإشعاعية لأورام الكبد تجاه PT في المضيفين ذوي الكفاءة المناعية، تم إعطاء RT المحلي مع PT 12 Gy (RBE) للأورام المزروعة تحت الجلد في الفئران مع أو بدون علاج مضاد لـ PD-L1. كما هو مبين في الشكل 6 أ-ج، زاد مضاد PD-L1 من تأثير تثبيط الورم الناجم عن PT المرتبط بانخفاض تكاثر الخلايا وزيادة موت الخلايا بعد التشعيع. علاوة على ذلك، للتحقق من صحة التأثيرات التنظيمية لمضاد PD-L1 على البيئة الدقيقة للورم المناعي بعد PT، قمنا بفحص الاستجابة المناعية باستخدام نموذج الورم المثلي لسرطان الكبد HCC. تشير البيانات إلى أن مضادات PD-L1 خففت من تجنيد MDSC وزيادة CD 3+ TILs المرتبطة بأورام أصغر مقارنةً بـ PT وحده (الشكل 6d – f)

3.6. الحصار المفروض على PD-L1 يعزز تأثير Abscopal على سرطان الكبد بعد PT

تم الإبلاغ عن أن الإشعاع يسبب تأثيرات أبسكوبية على مواقع السرطان البعيدة غير المعالجة والتي يتم تضخيمها عن طريق استخدام الأدوية المعدلة للمناعة [32-34]. وبناءً على ذلك، قمنا بفحص التأثير الأبسكوبال الناجم عن PT على أورام الكبد وتأثير العلاج المشترك مع الجسم المضاد لـ PD-L1. كما هو مبين في الشكل 7 أ، ب والشكل التكميلي S1، تسبب تطبيق PT المحلي على الورم وحده في حدوث أورام أصغر مع انخفاض استقلاب الجلوكوز في الأورام المشععة فوق الفخذ الأيمن، لكنه لم يظهر أي تثبيط كبير للورم على الأورام الثانوية غير المشععة في الجزء العلوي من الظهر. ، مقارنة مع مجموعة الشام-RT. أدى العلاج المشترك مع الجسم المضاد لـ PD-L1 مباشرة بعد PT إلى تعزيز تأثير مبيد الأورام في المجال المشعع PT وأدى إلى تراجع الأورام الثانوية خارج المجال المشعع. أظهر تحليل الخلايا المناعية المتسللة للورم أن مضادات PD-L1 تضعف توظيف MDSC، وتزيد من CD3+ TILs، وتقلل من تكاثر الخلايا في الأورام غير المشععة (الشكل 7 ج، د) من الفئران التي تلقت PT محليًا للأورام الأولية. تشير هذه النتائج إلى أن مضادات PD-L1 عززت الاستجابة المناعية المضادة للأورام وزادت من التأثير الأبسكوبي في المضيفين ذوي الكفاءة المناعية بعد تشعيع PT المحلي.

Figure 4. Immune response associated with PT. The expression of the CD163 marker in the cells at the end of M2 macrophage polarization was analyzed via FACS (a) (I: control; II: + cancer cell culture supernatant; III: + cancer cells; IV: +6 Gy (RBE) PT-irradiated cancer cell culture supernatant; V: +6 Gy (RBE) PT-irradiated cancer cells). The percentage of CD14+HLA-DR− cells from PBMCs incubated with or without HuH7 cells irradiated with 0, 3, or 6 Gy (RBE) for 48 h was analyzed (b), and the expression of iNOS in the sorted CD14+HLA-DR− cells was analyzed via IF (DAPI, blue; iNOS, red) (c). The extent of CD163+ cells in irradiated tumors 12 days after PT was examined via IF (DAPI, blue; CD163, red) (d), and the effect of PT irradiation on monocytic-MDSC recruitment was evaluated via FACS (e). Furthermore, the rate of T-cell proliferation was examined via FACS with or without incubation with PT-irradiated cancer cells. Representative images and quantitative data are shown (f). Treatment indicated CD8+ T cells with anti-CD3/CD28 stimulation beads in the presence of MDSC combined with cancer cells with or without PT irradiation. Data are presented as means ± standard errors of the mean. * p < 0.05.

الشكل 4. الاستجابة المناعية المرتبطة PT. تم تحليل التعبير عن علامة CD163 في الخلايا في نهاية استقطاب البلاعم M2 عبر FACS (أ) (I: التحكم؛ II: + طاف ثقافة الخلايا السرطانية؛ III: + الخلايا السرطانية؛ IV: +6 Gy (RBE) طاف ثقافة الخلايا السرطانية المشععة PT؛ V: +6 غراي (RBE) الخلايا السرطانية المشععة PT). تم تحليل النسبة المئوية لخلايا CD 14+ HLA-DR− من PBMCs المحتضنة مع أو بدون خلايا HuH7 المشععة بـ 0 أو 3 أو 6 Gy (RBE) لمدة 48 ساعة ( ب ) ، وتم تحليل التعبير تم تحليل iNOS في خلايا HLA-DR− المضغوطة 14+ المصنفة عبر IF (DAPI، أزرق؛ iNOS، أحمر) (ج). مدى خلايا CD 163+ في الأورام المشععة بعد 12 يومًا من فحص PT عبر IF (DAPI، أزرق؛ CD163، أحمر) (د)، وتم تقييم تأثير تشعيع PT على تجنيد monocytic-MDSC عبر FACS ( ه). وعلاوة على ذلك، تم فحص معدل تكاثر الخلايا التائية عن طريق FACS مع أو بدون الحضانة مع الخلايا السرطانية المشععة PT. وتظهر الصور التمثيلية والبيانات الكمية (و). أشار العلاج إلى خلايا CD 8+ T مع حبات تحفيز مضادة لـ CD3 / CD28 في وجود MDSC مع الخلايا السرطانية مع أو بدون تشعيع PT. يتم تقديم البيانات كوسيلة ± الأخطاء المعيارية للوسط. * ع < 0.05.

Figure 5. Effect of PT on PD-L1 expression. The levels of PD-L1 were evaluated using (a) IF (DAPI, blue; PD-L1, green), (b) FACS staining for human and murine liver cancer cells at 48 h after PT in vitro and (c) FACS, and (d) IF for murine liver tumors at the indicated times after PT for 12 Gy (RBE) in vivo. The y-axis is the relative fold change in PD-L1 expression at the indicated conditions after PT. Data are presented as means ± standard errors of the mean. * p < 0.05. Furthermore, the expression of PD-L1 in murine CD11b+ cells following PT irradiation was evaluated via (e) IF and (f) FACS analysis (CD11b+ cells, blue spots)

الشكل 5. تأثير PT على التعبير PD-L1. تم تقييم مستويات PD-L1 باستخدام (أ) IF (DAPI، الأزرق؛ PD-L1، الأخضر)، (ب) تلطيخ FACS لخلايا سرطان الكبد البشرية والفأرية عند 48 ساعة بعد PT في المختبر و (ج) FACS، و ( د ) إذا كانت أورام الكبد الفئران في الأوقات المحددة بعد PT لمدة 12 غراي (RBE) في الجسم الحي . المحور y هو التغير النسبي في تعبير PD-L1 في الظروف المشار إليها بعد PT. يتم تقديم البيانات كوسيلة ± الأخطاء المعيارية للوسط. * ع < 0.05. علاوة على ذلك، تم تقييم التعبير عن PD-L1 في خلايا CD11b + الفأرية بعد تشعيع PT عبر تحليل (e) IF و(f) FACS (خلايا CD11b+، بقع زرقاء)

Figure 6. Effect of PD-L1 on the response of HCC to PT in vivo. (a) The effect of anti-PD-L1 therapy on the tumor growth delay. The y-axis is the relative fold change in subcutaneous tumor size induced by anti-PD-L1 after PT. Data represent the means of experiments, * p < 0.05. (b) The in vivo effects of treatment-induced apoptosis as evaluated using FACS with Annexin V-PI staining. The y-axis is the relative fold change in the cell death rate after PT. Data are presented as means ± standard errors of the mean. * p < 0.05. (c) Immunohistochemistry for RT-induced DNA damage and Ki-67 in tumors at the indicated times after PT for 12 Gy (RBE). (d) The effect of anti-PD-L1 therapy on tumor inhibition was evaluated in an orthotopic tumor model. Representative images and quantitative data are shown 12 days after local PT irradiation or sham irradiation. The y-axis is the relative fold change in liver tumor size. Data represent the means of experiments, * p < 0.05. (e) The extent of ki67+, CD3+TIL, and CD11b+ cells in irradiated tumors 12 days after PT were examined using IF (DAPI, blue; ki-67 and CD3, green; CD11b, red). (f) The effect of anti-PD-L1 combined with PT irradiation on MDSC recruitment was evaluated using FACS

الشكل 6. تأثير PD-L1 على استجابة سرطان الكبد لPT في الجسم الحي. ( أ ) تأثير العلاج المضاد لـ PD-L1 على تأخير نمو الورم. المحور y هو التغير النسبي في حجم الورم تحت الجلد الناجم عن مضاد PD-L1 بعد PT. تمثل البيانات وسائل التجارب، * p < {{10}}.05. ( ب ) التأثيرات في الجسم الحي لموت الخلايا المبرمج الناجم عن العلاج كما تم تقييمها باستخدام FACS مع تلطيخ Annexin V-PI. المحور y هو التغير النسبي في معدل موت الخلايا بعد PT. يتم تقديم البيانات كوسيلة ± الأخطاء المعيارية للوسط. * ع <0.05. ( ج ) الكيمياء المناعية لتلف الحمض النووي الناجم عن RT و Ki -67 في الأورام في الأوقات المحددة بعد PT لمدة 12 غراي (RBE). ( د ) تم تقييم تأثير العلاج المضاد لـ PD-L1 على تثبيط الورم في نموذج الورم المثلي. يتم عرض الصور التمثيلية والبيانات الكمية بعد 12 يومًا من تشعيع PT المحلي أو التشعيع الوهمي. المحور y هو التغير النسبي في حجم ورم الكبد. تمثل البيانات وسائل التجارب، * ف < 0.05. (هـ) مدى خلايا ki67+ وCD3+TIL وCD11b+ في الأورام المشععة بعد 12 يومًا من فحص PT باستخدام IF (DAPI، أزرق؛ ki-67 وCD3، أخضر ؛ CD11b، أحمر). ( و ) تم تقييم تأثير مضاد PD-L1 مع تشعيع PT على توظيف MDSC باستخدام FACS

Figure 7. The abscopal effect on liver cancer following PT. The growth of unirradiated tumors over the upper back was determined via FMT analysis of glucose uptake (a) and tumor pictures (b) at indicated times from mice that received PT for 12 Gy (RBE) to the primary tumor over the right thigh only (PT (+): the mice received 12 Gy (RBE) to the primary tumor over the right thigh, but not to the secondary tumor over the upper back). Representative images and quantitative data of unirradiated tumors are shown at 0, 3, and 12 days after PT irradiation with or without anti-PD-L1 therapy. The y-axis represents the relative fold change in the value of FMT and tumor size at the indicated time after PT. Furthermore, representative images of the level of ki-67 and the infiltration of CD11b+ cells and CD3+ cells in secondary unirradiated tumors 12 days after local PT using IF are shown (DAPI, blue; ki-67 and CD3, green; CD11b, red) (c). The accumulation of MDSCs (d) in the secondary unirradiated tumor was analyzed using flow cytometry. The y-axis is the relative fold change. Data represent the means of experiments, * p < 0.05


الشكل 7. تأثير abscopal على سرطان الكبد بعد PT. تم تحديد نمو الأورام غير المشععة فوق الجزء العلوي من الظهر من خلال تحليل FMT لامتصاص الجلوكوز (أ) وصور الورم (ب) في الأوقات المحددة من الفئران التي تلقت PT لمدة 12 غراي (RBE) إلى الورم الرئيسي فوق الفخذ الأيمن فقط ( PT (+): تلقت الفئران 12 غراي (RBE) للورم الرئيسي فوق الفخذ الأيمن، ولكن ليس للورم الثانوي فوق الجزء العلوي من الظهر). يتم عرض الصور التمثيلية والبيانات الكمية للأورام غير المشععة عند 0 و3 و12 يومًا بعد تشعيع PT مع أو بدون العلاج المضاد لـ PD-L1. يمثل المحور y التغير النسبي في قيمة FMT وحجم الورم في الوقت المحدد بعد PT. علاوة على ذلك، يتم عرض صور تمثيلية لمستوى ki-67 وتسلل خلايا CD11b+ وخلايا CD3+ في الأورام الثانوية غير المشععة بعد 12 يومًا من ظهور PT المحلي باستخدام IF (DAPI، أزرق؛ ki{{16) }} وCD3 باللون الأخضر، CD11b باللون الأحمر) (ج). تم تحليل تراكم MDSCs (د) في الورم الثانوي غير المشعع باستخدام قياس التدفق الخلوي. المحور y هو التغير النسبي في الطية. تمثل البيانات وسائل التجارب، * p < 0.05

4. مناقشة

تظهر نتائج هذه الدراسة أن فقدان الخلايا المكونة للمستعمرة الناجم عن PT يعتمد على الجرعة ويشبه ذلك الناتج عن تشعيع الفوتون. يعد مستوى تلف الحمض النووي غير المُصلح الناجم عن الإشعاع هو المحدد الرئيسي للاستجابة الإشعاعية الخاصة بالأنسجة. تكشف بياناتنا أن موت الخلايا الناجم عن PT يرتبط بزيادة مستويات علامات تلف الحمض النووي. تم الإبلاغ عن أن العديد من السيتوكينات المرتبطة بالورم يتم تنظيمها عن طريق التشعيع وتكون قادرة على تجنيد واستقطاب مجموعات فرعية مناعية في البيئة الدقيقة للورم [35،36]. لقد أبلغنا سابقًا أن تعبير IL-6 قد تم تنظيمه بواسطة الفوتون RT وأن زيادة IL6 مرتبطة بالاستجابة الإشعاعية لأورام الكبد [28]. أظهرت الدراسات قبل السريرية أن هناك تنظيمًا تفاضليًا للعوامل الالتهابية بعد PT مقابل إشعاع الفوتون، بما في ذلك IL-6 [6,7,37]. نظهر باستخدام التجارب الخلوية أن تشعيع PT أيضًا ينظم مستوى التعبير عن IL-6 بطريقة تعتمد على الجرعة. تتأثر استجابة الورم للعلاج بتكاثر خلايا الورم والبيئة الدقيقة للورم. يعد استخدام نماذج الماوس استراتيجية مثالية لتقييم الاستجابة للعلاج. على حد علمنا، قدمت بعض السلاسل قبل السريرية استجابة أورام الكبد لمرض PT حتى الآن. تم توضيح البيانات الموجودة في الجسم الحي لموت الخلايا السرطانية وتأخر نمو الورم الناجم عن PT في الفئران الحاملة للورم في هذه الدراسة. بالإضافة إلى الحساسية الإشعاعية الخلوية الجوهرية، قد يتأثر إعادة نمو الورم بعد العلاج الإشعاعي في الجسم الحي بشكل كبير بعدة عوامل التهابية ولحمية [38،39]. يتم إحداث مجموعة متنوعة من التأثيرات النهائية المرتبطة بالمناعة بواسطة RT، بما في ذلك التأثيرات المناعية والمثبطة للمناعة. يحفز RT المناعة المضادة للسرطان من خلال تحريض موت الخلايا المناعية، وإطلاق مستضدات جديدة لمكونات الجهاز المناعي، مما يؤدي لاحقًا إلى تحسين تحضير وتنشيط الخلايا التائية الفعالة. من ناحية أخرى، يؤدي RT إلى تأثيرات مثبطة للمناعة، مثل تجنيد MDSCs في البيئة الدقيقة المشععة [39،40]. يعد توظيف MDSCs أحد العوامل المحددة للبيئة الدقيقة للورم المثبط للمناعة بعد RT. برزت MDSCs كمنظمين رئيسيين للاستجابات المناعية في السرطان والحالات المرضية الأخرى. تدعم الأدلة المساهمات الرئيسية لـ MDSC في تطور الورم. لقد أبلغنا سابقًا أن زيادة MDSC يمكن أن تحدث بواسطة RT وأن الزيادة كانت مرتبطة بمقاومة RT في نموذج حيواني لسرطان الكبد [28]. أظهرت الدراسة المقدمة أن PT يؤدي إلى تنشيط تجنيد MDSC المرتبط بتحريض MDSCs أحادية الخلية في الفئران الحاملة للورم. يتم تعريف مجموعة فرعية جديدة من MDSCs التي تم تحديدها على أنها MDSCs أحادية الخلية على أنها CD 14+ HLA-DR− وحيدات من الدم المحيطي للمرضى وCD11b + Ly6G- في الفئران [20،23،41]. يعد التعبير عن iNOS كعلامة وظيفية لتثبيط الخلايا التائية هو المعيار الذهبي لتقييم وظيفة MDSC [42]. أظهرت التجارب التي أجريت باستخدام حضانة PBMC مع الخلايا السرطانية أن PT عزز قدرة الخلايا السرطانية على حث MDSCs في حيدات وزيادة التعبير عن iNOS في المجموعة الفرعية من الخلايا. علاوة على ذلك، تكشف بياناتنا أن زراعة النباتات باستخدام خلايا CD11b + قللت من تكاثر الخلايا التائية، وأن السرطان المشعع بـ PT خفف من القدرة القمعية لخلايا CD11b + على تكاثر الخلايا التائية في تجارب زراعة النباتات.

تم الإبلاغ عن أن سلالة الخلايا النخاعية تشكل شبكة من الخلايا المثبطة للمناعة الموجودة في معظم مرضى السرطان والتي تمنع بشكل كبير توليد مناعة مضادة للأورام. تُعد البلاعم، وهي الخلايا المناعية الوفيرة في البيئة المكروية للورم، منظمات مهمة للالتهابات المزمنة. لقد تم اقتراح أنه يمكن استقطاب البلاعم نحو النمط الظاهري M2، مما يساهم في البيئة الدقيقة المثبطة للمناعة [43]. من المحتمل أن توجد خلايا أحادية النواة في الأورام في مراحل تمايز مختلفة من الخلايا الوحيدة / الخلايا الأحادية MDSCs إلى البلاعم M2 المرتبطة بالورم. تكشف هذه الشبكة بين MDSCs والبلاعم M2 المرتبطة بالورم أنه يمكن تمييز M2 عن MDSCs أحادية الخلية. تشير الدلائل إلى أن RT يلعب دورًا تنظيميًا في البلاعم مع استقطاب M1/M2 لتعديل الاستجابة المناعية [44،45]. لقد أظهرنا أن زراعة النباتات مع الخلايا المشععة بـ PT أدت إلى زيادة التعبير عن علامات M2 في الأورام المختبرية والأورام المشععة بـ PT في الجسم الحي. يعد تنشيط الاستجابات المناعية المضادة للسرطان أمرًا بالغ الأهمية لفعالية RT.

Cistanche deserticola-improve immunity

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

تعتبر الآليات المناعية المتعددة مهمة في تطور وتطور سرطان الكبد وترتبط بالتشخيص. مثبطات نقاط التفتيش التي تستهدف PD1 وPDL1 نشطة ومقبولة ومفيدة سريريًا ضد سرطان الكبد المتقدم [46]. يلعب PD-L1، وهو علامة حيوية خلوية رئيسية، دورًا في التهرب المناعي، بما في ذلك تثبيط المراقبة المناعية بوساطة الخلايا التائية وتنظيم استقطاب البلاعم M2 [13،31،47]. لوحظ انتفاخ محور PD-1/PD-L1 لقمع العمل السام للخلايا للخلايا التائية، والذي قد يكون سببًا للاستجابات المناعية للمضيف المتهرب من الورم وقتل الخلايا السرطانية غير المكتمل بعد التشعيع. كان PD-L1 موجودًا على نطاق واسع في الخلايا المكونة للدم، بما في ذلك الخلايا التائية والبلاعم والخلايا السرطانية. يعد PD-1/PD-L1 نقطة تفتيش مناعية ملحوظة تؤدي إلى حساسية الخلايا التائية. تمت الموافقة على الأجسام المضادة لـ PD-L1، وهو حاجز نقطة تفتيش مناعية، كعلاج مساعد لبعض أنواع السرطان وكعلاج مناعي واعد لمرضى سرطان الكبد في المراحل المتقدمة [48،49]. تعد مثبطات PDL1 أحد الركائز الأساسية للعلاجات الجهازية في الممارسة السريرية أو قيد التطوير لسرطان الكبد. علاوة على ذلك، فإن التأثيرات المثبطة للمناعة الناجمة عن RT تكشف عن إمكانية الجمع بنجاح بين الإشعاع وأشكال مختلفة من العلاج المناعي لإلغاء هذه التأثيرات المثبطة للمناعة. يمكن أن تساهم MDSCs في مقاومة المريض لتثبيط نقاط التفتيش المناعية. لقد أثبتنا أن PT ينظم التعبير عن PD-L1 في الأورام وMDSCs بطريقة تعتمد على الجرعة في المختبر وفي الجسم الحي. تكشف التأثيرات المثبطة للمناعة الناجمة عن RT إمكانية الجمع بنجاح بين الإشعاع وأشكال مختلفة من العلاج المناعي لإلغاء هذه التأثيرات المثبطة للمناعة. أظهرت الأبحاث قبل السريرية أن الجمع بين الفوتون RT والعلاج المناعي يُظهر تآزرًا علاجيًا لتحسين السيطرة على الورم [15]. كما نعلم، فإن الجمع بين RT والعلاج المناعي لا يزال في مراحله الأولية، ولا توجد مواصفات مثالية لجرعة RT، أو أنواع RT، أو تسلسل RT والعلاج المناعي. لتوضيح هذه المشكلة المتعلقة بتشعيع PT مع العلاج المناعي، قمنا بدمج العلاج المضاد لـ PD-L1 مع تشعيع PT لأورام الكبد في نماذج الورم المسانجي. لقد وجدنا أن الجمع مع الأجسام المضادة لـ PD-L1 أدى إلى توعية سرطان الكبد بتشعيع PT، كما يتضح من الورم الأصغر المرتبط بزيادة موت الخلايا السرطانية. علاوة على ذلك، أدى العلاج المضاد لـ PD-L1 إلى تثبيط توظيف MDSC وزيادة ترشيح الخلايا التائية CD3+ في الأورام المشععة بـ PT.

يُنظر إلى العلاج الإشعاعي تقليديًا على أنه علاج موضعي، حيث يقتل الخلايا السرطانية عن طريق تلف الحمض النووي الداخلي في مجال الإشعاع. بالإضافة إلى ذلك، تعد الاستجابة الأسقفية للإشعاع ظاهرة راسخة حيث تستجيب الأورام خارج مجال الإشعاع أيضًا للعلاج. ويعتقد أن التأثير abscopal يكون بوساطة مناعية. سيموت جزء من الخلايا السرطانية داخل الورم عن طريق موت الخلايا المناعية عند استخدام الإشعاع بجرعات علاجية. يرتبط موت الخلايا السرطانية الناجم عن RT بتوليد إشارات جزيئية محددة ويتم تقديم المزيد من المستضدات إلى مكونات الجهاز المناعي. تم الإبلاغ عن أن RT قد يؤدي إلى تأثير abscopal متعلق بالمناعة، مما يعني أن RT ليس له تأثير قاتل للورم على الورم المستهدف فحسب، بل له أيضًا تأثير مضاد للورم على مواقع السرطان البعيدة غير المعالجة [32،50،51]. من بين العوامل التي يسببها RT، من المحتمل أن تكون قدرة الإشعاع على تعزيز التعرف على الخلايا السرطانية بواسطة الخلايا التائية ذات أهمية خاصة للتأثير الأبسكوبال. يرتبط هذا التأثير بموت الخلايا السرطانية لتحفيز المناعة المضادة للأورام والتي يمكن تضخيمها عن طريق استخدام عوامل تعديل المناعة. علاوة على ذلك، ينتج البيمبروليزوماب معدل 15-20% من الهدأة الموضوعية المرتبطة بالبقاء لفترة طويلة في سرطان الكبد [46]. إحدى النقاط الحاسمة فيما يتعلق بمثبطات نقطة التفتيش هي فعاليتها وسلامتها. ومن الواضح أن العلاج المناعي لا يقدم فوائد لجميع المرضى. تعد كيفية التغلب على مقاومة الورم للعلاج المناعي قضية مهمة. تشمل الأسباب المحتملة لمقاومة الورم المقاومة الذاتية وتطوير الأجسام المضادة المضادة للأدوية التي تعمل على تحييد نشاط العلاج المناعي. للحصول على تحفيز مناعي قوي، يمكن الجمع بين العلاجات المحلية المختلفة بالتتابع أو في وقت واحد مع العلاج المناعي الجهازي. من المرجح أن يتآزر العلاج المناعي مع التدخلات المحلية في سرطان الكبد. غالبًا ما يكون سرطان الكبد متعدد البؤر مع ظهور مناطق محتملة التسرطن على أنها متقلبة طوال الوقت. هنا، قمنا أيضًا بفحص ما إذا كان الجمع بين PT ومضاد PD-L1 يعزز التأثير الأبعدي لـ PT لزيادة السيطرة على أورام الكبد غير المتزامنة. تكشف بياناتنا أن الجمع بين PT ومضاد PD-L1 تسبب في حدوث أحجام أصغر للورم في الأورام الثانوية غير المشععة مقارنةً بتلك الناجمة عن PT أو مضاد PD-L1 وحده. تظهر بياناتنا أيضًا أن الجمع بين مضادات PD-L1 كان مرتبطًا بزيادة TILs وتجنيد MDSC الموهن في أورام الفئران البعيدة غير المشععة التي تلقت PT المحلي. تشير هذه النتائج إلى أن مضادات PD-L1 عززت المناعة المضادة للأورام، والتي توسطت في زيادة أنشطة قتل الورم الأولية والتأثير الأسقفي في الفئران الحاملة للورم التي تلقت تشعيع PT المحلي.

Desert ginseng-Improve immunity (16)

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

5. الاستنتاجات

الأساس المنطقي للجمع بين العلاج الإشعاعي والعلاج المناعي هو أن الإشعاع يمكن أن ينتج مناعة تآزرية مضادة للأورام وأن العلاج المناعي يتغلب على استجابات قمع المناعة في البيئة الدقيقة للورم المشعع. باختصار، نقترح أنه بالإضافة إلى التأثير البيولوجي على الخلايا السرطانية، فإن PT له أيضًا تأثير تعديل مناعي على البيئة الدقيقة للورم. تكشف بياناتنا أن مضادات PD-L1 أثارت مناعة مضادة للسرطان وبالتالي زادت استجابة الأورام الأولية والبعيدة لتشعيع PT. يمكن أن يكون تطبيق مضاد PD-L1 مع PT بمثابة استراتيجية واعدة لعلاج سرطان الكبد.

مراجع

1. براي، ف.؛ فيرلي، J .؛ سورجوماتارام، أنا؛ سيجل، R.-L.؛ توري، لوس أنجلوس؛ جمال، أ. إحصائيات السرطان العالمية 2018: تقديرات GLOBOCAN لمعدلات الإصابة والوفيات في جميع أنحاء العالم لـ 36 حالة سرطان في 185 دولة. كاليفورنيا السرطان J. كلين. 2018، 68، 394-424. [المرجع المتقاطع]

2. تشونغ، م.؛ كايزر، أ. موليتوريس، J.؛ منديز روميرو، أ؛ Apisarnthanarax، S. العلاج الإشعاعي بالبروتون لسرطانات الكبد. J. الجهاز الهضمي. أونكول. 2020، 11، 157-165. [المرجع المتقاطع]

3. يو، جي-س؛ يو، J.-I.؛ بارك، إتش.-سي. العلاج بالبروتون لسرطان الكبد: المعرفة الحالية ووجهات النظر المستقبلية. العالم J. غاسترونتيرول. 2018، 24، 3090-3100. [المرجع المتقاطع]

4. يوان، T.-Z.؛ زان، Z.-J؛ تشيان، سي.-ن. حدود جديدة في العلاج بالبروتون: تطبيقات في السرطان. مجتمع السرطان. 2019، 39، 61. [CrossRef] [PubMed]

5. ديكمار، س.؛ فاسين، إي. كازيموفا، ت.؛ نوبل، P.-A.؛ تيلاروفيك، أنا. تشانز، ف.؛ والر، V.؛ وينكلر، ر. يونغ، C.؛ Zingariello، D. الفعالية البيولوجية النسبية لتشعيع البروتون في الاعتماد على إصلاح تلف الحمض النووي. ر. جيه راديول. 2020، 93، 20190494. [CrossRef] [PubMed]

6. لوهر، أ. فون نيوبيك، C .؛ كراوس، م.؛ تروست، EGC الفعالية البيولوجية النسبية في العلاج بحزمة البروتونات – المعرفة الحالية والتحديات المستقبلية. كلين. ترجمة. إشعاع. أونكول. 2018, 9, 35-41. [المرجع المتقاطع]

7. جيرداني، س.؛ ساكس، ر. هلاتكي، إل. التأثيرات البيولوجية لإشعاع البروتون: ما نعرفه وما لا نعرفه. إشعاع. الدقة. 2013، 179، 257-272. [المرجع المتقاطع]

8. فان ليمبرجن، إي.-ج.؛ دي رويشر، د.-ك.؛ أوليفو بيمنتل، ف؛ ماركوس، د.؛ بيربي، م. هوبين، أ.؛ ريكرز، ن.؛ ثيس، J.؛ يارومينا، أ.؛ دوبوا، L.-J؛ وآخرون. الجمع بين العلاج الإشعاعي والعلاج المناعي: الماضي والحاضر والمستقبل. ر. جيه راديول. 2017، 90، 20170157. [المرجع المتقاطع]

9. شابسون، ج.-ي.؛ مين، أ.-ج. الإشعاع وحصار نقطة التفتيش المناعية: من مقاعد البدلاء إلى العيادة. سيمين. إشعاع. أونكول. 2017، 27، 289-298. [CrossRef] [مجلات]

10. لو، سي؛ رونغ، د.؛ تشانغ، ب. تشنغ، دبليو؛ وانغ، العاشر. تشن، Z .؛ Tang، W. وجهات النظر الحالية حول البيئة الدقيقة للورم المثبط للمناعة في سرطان الخلايا الكبدية: التحديات والفرص. مول. السرطان 2019، 18، 130. [المرجع المتقاطع]

11. بيرد، ج.-ر.؛ منجزب، أ.م.؛ شاه، أو. ماكجي، ه.؛ ميرفي، W.-J؛ كريتندن، م.-ر.؛ غوف، م.-ج. تحفيز المناعة الفطرية لتعزيز السيطرة على الأورام الناتجة عن العلاج الإشعاعي. كثافة العمليات. جي شعاع. أونكول. بيول. فيز. 2017، 99، 362-373. [المرجع المتقاطع]

12. بيرنشتاين، م.-ب.؛ كريشنان، S .؛ هودج، J.-W. تشانغ، J.-Y. العلاج المناعي والعلاج الإشعاعي التجسيمي (ISABR): نهج علاجي؟ نات. القس كلين. أونكول. 2016، 13، 516-524. [CrossRef] [مجلات]

13. بيلونيس، ك.-أ؛ فانبويل-بوكس، سي؛ Demaria، S. مزيج من العلاج الإشعاعي ومثبطات نقاط التفتيش المناعية. سيمين. إشعاع. أونكول. 2015، 25، 28-33. [CrossRef] [مجلات]

14. إيشيهارا، د.؛ بوب، ل.؛ تاكيشيما، ت.؛ ينجار، P.؛ حنان، ر. الأساس المنطقي والأدلة للجمع بين العلاج الإشعاعي والعلاج المناعي لعلاج السرطان. مناعي للسرطان. مناعة أخرى. 2017، 66، 281-298. [المرجع المتقاطع]

15. لي، Y.-H .؛ تاي، د.؛ ييب، سي. تشو، S.-P.؛ Chew, V. العلاج المناعي التوليفي لسرطان الكبد: العلاج الإشعاعي، وحصار نقاط التفتيش المناعية وما بعدها. أمام. إيمونول. 2020، 11، 568759. [CrossRef] [PubMed]

16. تشوي، سي. يو، جي-س؛ تشو، W.-K.؛ بارك، إتش.-سي. تحسين العلاج الإشعاعي من خلال حصار نقطة التفتيش المناعية في سرطان الخلايا الكبدية. العالم J. غاسترونتيرول. 2019، 25، 2416-2429. [المرجع المتقاطع]

17. جينين، م. كليمنت، ف؛ فتاتشيولي، أ. رايس، م.؛ تقوم الخلايا البلعمية Michiels وC. M1 وM2 المشتقة من خلايا THP -1 بتعديل استجابة الخلايا السرطانية للإيتوبوسيد بشكل تفاضلي. BMC السرطان 2015، 15، 577. [CrossRef] [PubMed]

18. قوه، ف.؛ فنغ، Y.-C.؛ تشاو، G.؛ تشانغ، ر. تشنغ، Z.-Z.؛ كونغ، W.-N.؛ وو، H.-L.؛ شو، ب. الوقف، العاشر؛ Ma، XM المرتبط بالورم CD163(+) M2 يرتبط تسلل البلاعم بشكل كبير بتعبير PD-L1 في سرطان عنق الرحم. إدارة السرطان. الدقة. 2020، 12، 5831-5843. [المرجع المتقاطع]

19. كاسيتا، ل.؛ نوي، ر. سويركزاك، أ؛ سوجانو، ج.؛ سميث، ه.؛ ويتشمان، L.؛ بولارد، J.-W. عزل الفأر والضامة البشرية المرتبطة بالورم. حال. إكسب. ميد. بيول. 2016، 899، 211-229.

20. تشيكاماتسو، ك.؛ ساكاكورا، ك؛ تويودا، م.؛ تاكاهاشي، ك. ياماموتو، T.؛ Masuyama، K. النشاط المثبط للمناعة لخلايا CD 14+ HLA-DR- في سرطان الخلايا الحرشفية في الرأس والرقبة. علوم السرطان. 2012، 103، 976-983. [المرجع المتقاطع]

21. تشين، م.-ف.؛ كوان، إف سي؛ الين، T.-C. لو، م.-س.؛ لين، P.-Y؛ تشونغ، Y.-H؛ تشن، دبليو سي؛ لي، ك.-د. IL-6- تحفيز CD11b + CD 14+ ترتبط الخلايا الكابتة المشتقة من النخاع الشوكي HLA-DR بالتقدم وسوء التشخيص في سرطان الخلايا الحرشفية في المريء. أونكوتارجيت 2014، 5، 8716–8728. [المرجع المتقاطع]

22. Paganetti، H. قيم الفعالية البيولوجية النسبية (RBE) للعلاج بحزمة البروتون. الاختلافات كدالة لنقطة النهاية البيولوجية، والجرعة، ونقل الطاقة الخطية. فيز. ميد. بيول. 2014, 59, R419 – R472. [CrossRef] [مجلات]

23. برونتي، ف.؛ برانداو، س. تشن، S.-H.؛ كولومبو، إم بي؛ فراي، AB. جريتن، T.-F.؛ ماندروزاتو، س. موراي، P.-J؛ أوتشوا، أ.؛ أوستراند روزنبرغ، إس؛ وآخرون. توصيات بشأن تسميات الخلايا الكابتة المشتقة من النخاع ومعايير التوصيف. نات. مشترك. 2016، 7، 12150. [المرجع المتقاطع]

24. كورتيس، م.-ج.؛ بوند، R.-A.؛ سبينا، د.؛ أهلواليا، أ.؛ ألكسندر، واس؛ جيمبيتش، M.-A.؛ جيلكريست، أ. هوير، د.؛ إنسل، P.-A.؛ عزو، أ.-أ. التصميم التجريبي والتحليل وإعداد التقارير الخاصة بهم: إرشادات جديدة للنشر في حزب بهاراتيا جاناتا. ر. جي فارماكول. 2015، 172، 3461-3471. [المرجع المتقاطع]

25. هايكروال، S.-J.؛ هاجيكيرياكو، J .؛ ماكمانوس، م. مارتن، O.-A.؛ هاينز، ن.-م. بناء مناعة ضد السرطان عن طريق العلاج الإشعاعي. السرطان ليت. 2015، 368، 198-208. [CrossRef] [مجلات]

26. يوان، س.؛ ليو، Z .؛ شو، Z.؛ ليو، J.؛ Zhang، J. صندوق المجموعة عالي الحركة 1 (HMGB1): منظم محوري للأورام الخبيثة المكونة للدم. جي هيماتول. أونكول. 2020، 13، 91. [CrossRef] [PubMed]

27. سوزوكي، ي.؛ ميمورا، ك. يوشيموتو، Y.؛ واتانابي، م.؛ أوكوبو، Y.؛ إيزاوا، س.؛ موراتا، ك.؛ فوجي، ه.؛ ناكانو، T.؛ كونو، K. موت الخلايا السرطانية المناعية الناجم عن العلاج الكيميائي في المرضى الذين يعانون من سرطان الخلايا الحرشفية المريئي. سرطان. الدقة. 2012، 72، 3967-3976. [المرجع المتقاطع]

28. تشين، م.-ف.؛ هسيه، سي-سي؛ تشن، دبليو سي؛ لاي، C.-H. دور الإنترلوكين-6 في الاستجابة الإشعاعية لأورام الكبد. كثافة العمليات. جي شعاع. أونكول. بيول. فيز. 2012, 84, e621 – e630. [CrossRef] [مجلات]

29. لياو، ي.؛ ليو، س. فو، س. وو، ج. HMGB1 في العلاج الإشعاعي: إشارة ذات رأسين تنظم الحساسية الإشعاعية للورم والمناعة. أونكول. الأهداف هناك. 2020, 13, 6859–6871. [المرجع المتقاطع]

30. قوه، Y.؛ شو، ف؛ لو، T.؛ دوان، Z .؛ Zhang, Z. Interleukin-6 مسار الإشارة في العلاج الموجه للسرطان. علاج السرطان. القس 2012، 38، 904-910. [المرجع المتقاطع]

31. أفرين، س.؛ Dermime، S. جزيء B7-H1 المثبط للمناعة كهدف محتمل في السرطان: قتل العديد من الطيور بحجر واحد. الهيماتول. أونكول. ينبع. خلية. هناك. 2014، 7، 1-17. [المرجع المتقاطع]

32. فورمينتي، S.-C.؛ Demaria، S. العلاج الإشعاعي لتحويل الورم إلى لقاح في الموقع. كثافة العمليات. جي شعاع. أونكول. بيول. فيز. 2012، 84، 879-880. [المرجع المتقاطع]

33. رودريجيز رويز، م.-إي؛ فيتالي، أنا. هارينجتون، K.-J؛ ميليرو، أنا. Galluzzi، L. التأثير المناعي لإشارات موت الخلايا المدفوعة بالإشعاع على البيئة الدقيقة للورم. نات. إيمونول. 2020, 21, 120-134. [المرجع المتقاطع]

34. ليو، ي.؛ دونغ ذ.؛ كونغ، ل.؛ شي، ف. تشو، ه.؛ تأثير Yu، J. Abscopal للعلاج الإشعاعي مع مثبطات نقاط التفتيش المناعية. جي هيماتول. أونكول. 2018، 11، 104. [CrossRef] [PubMed] 35. Hill, R.-P. النموذج المتغير لاستجابة الورم للإشعاع. ر. جيه راديول. 2017، 90، 20160474. [المرجع المتقاطع]

36. موخرجي، س.؛ تشاكرابورتي، أ. ظاهرة المارة الناجمة عن الإشعاع: البصيرة والآثار المترتبة على العلاج الإشعاعي. كثافة العمليات. جي شعاع. بيول. 2019، 95، 243-263. [CrossRef] [مجلات]

37. غاميرو، S.-R. مالاماس، A.-S؛ برنشتاين، M.-B.؛ تسانغ، K.-Y.؛ فاسانتشارت، أ.؛ ساهو، ن.؛ خياط ر. بيديكيتي، ر. جوها، C.-P. هان، S.-M.؛ وآخرون. تشترك الخلايا السرطانية التي نجت من التعرض لإشعاع البروتون أو الفوتون في بصمة تعديل مناعية مشتركة، مما يجعلها أكثر حساسية للقتل بوساطة الخلايا التائية. كثافة العمليات. جي شعاع. أونكول. بيول. فيز. 2016، 95، 120-130. [المرجع المتقاطع]

38. صن، ي.؛ نيلسون، P.-S. المسارات الجزيئية: إشراك استجابات الأضرار البيئية الدقيقة في مقاومة علاج السرطان. كلين. الدقة السرطان. 2012، 18، 4019-4025. [CrossRef] [مجلات]

39. كوزين، S.-V.؛ كمون، و.-س.؛ هوانغ، Y.؛ داوسون، م.-ر.؛ جاين، ر.-ك.؛ دودا، D.-G. إن توظيف الخلايا السليفة النخاعية وليس الخلايا البطانية يسهل إعادة نمو الورم بعد التشعيع الموضعي. الدقة السرطان. 2010، 70، 5679-5685. [CrossRef] [مجلات]

40. كاو، ج.؛ كو، EC. آيزنشتاين، س. سيكورا، أ.ج.؛ فو، س. تشن، S.-H. استهداف الخلايا الكابتة المشتقة من النخاع الشوكي المناعي في علم الأورام. الحرجة. القس أونكول. الهيماتول. 2011، 77، 12-19. [المرجع المتقاطع]

41. هويشت، ب. أورماندي، لوس أنجلوس؛ بالمير، م.؛ لينر، ف. كروجر، C.؛ مان، النائب. جريتن، تي اف؛ Korangy، F. مجموعة جديدة من الخلايا الكابتة المشتقة من النخاع الشوكي في مرضى سرطان الخلايا الكبدية تحفز خلايا CD4 (+) CD25 (+) Foxp3 (+) T. أمراض الجهاز الهضمي 2008، 135، 234-243. [CrossRef] [مجلات]

42. هسو، C.-Y.؛ لين، Y.-C؛ تشانغ، L.-Y.؛ هوانغ، S.-K. هوانغ، C.-H؛ يانغ، C.-K. هوانغ، C.-T.؛ لين، C.-Y. الدور العلاجي لسينثاز أكسيد النيتريك المحفز الذي يعبر عن الخلايا الكابتة المشتقة من النخاع الشوكي في فشل الكبد الفأري الناجم عن الأسيتامينوفين. أمام. إيمونول. 2020، 11، 574839. [المرجع المتقاطع]

43. بولارد، ج.-دبليو. تعمل البلاعم المتعلمة بالورم على تعزيز تطور الورم وانتشاره. نات. القس السرطان 2004، 4، 71-78. [CrossRef] [مجلات]

44. وانغ، L.-X .؛ تشانغ، S.-X.؛ وو، H.-J؛ رونغ، X.-L.؛ Guo، J. M2b استقطاب البلاعم وأدواره في الأمراض. جيه ليوكوك. بيول. 2019، 106، 345-358. [CrossRef] [مجلات]

45. تشيانج، سي.-إس. فو، S.-Y.؛ وانغ، S.-C.؛ يو، C.-F.؛ تشن، F.-H؛ لين، C.-M؛ هونغ، J.-H. يعزز التشعيع النمط الظاهري للبلاعم m2 في نقص الأكسجة في الورم. أمام. أونكول. 2012، 2، 89. [المرجع المتقاطع] [مجلات]

46. ​​سانجرو، ب. ساروبي، ب. هيرفاس ستابس، S .؛ ميليرو، I. التقدم في العلاج المناعي لسرطان الكبد. نات. القس غاسترونتيرول. هيباتول. 2021، 18، 525-543. [المرجع المتقاطع]

47. لو، د.؛ ني، Z .؛ ليو، X.؛ فنغ، S.؛ دونغ، X.؛ شي، العاشر. تشاي، J.؛ ماي، س. جيانغ، J.؛ وانغ، Z .؛ وآخرون. ما وراء الخلايا التائية: فهم دور PD-1/PD-L1 في البلاعم المرتبطة بالورم. جي إمونول. الدقة. 2019، 2019، 1919082. [CrossRef]

48. تشنغ، أ.-ل.؛ هسو، C.؛ تشان، S.-L.؛ تشو، S.-P.؛ Kudo، M. تحديات العلاج المركب مع مثبطات نقاط التفتيش المناعية لسرطان الكبد. جي هيباتول. 2020، 72، 307-319. [المرجع المتقاطع]

49. هاك، S.-P.؛ سبان، J.؛ تشن، م. تشنغ، A.-L.؛ كاسب، أ.؛ كودو، م.؛ لي ، HC . يوب، أ.؛ تشاو، P.؛ Qin، S. IMbrave 050: تجربة المرحلة الثالثة لـ atezoli zumab بالإضافة إلى bevacizumab في سرطان الكبد عالي الخطورة بعد الاستئصال العلاجي أو الاجتثاث. المستقبل أونكول. 2020، 16، 975-989. [المرجع المتقاطع]

50. بارك، س.-س.؛ دونغ، ه.؛ ليو، X.؛ هارينجتون، S.-M.؛ كركو، C.-J؛ غرام، M.-P.؛ مانسفيلد، A.-S؛ فوروتاني، K.-M.؛ أوليفييه، K.-R. كوون، إي.-د. PD -1 يقيد تأثير Abscopal الناجم عن العلاج الإشعاعي. مناعي للسرطان. الدقة. 2015، 3، 610-619. [المرجع المتقاطع]

51. ديماريا، س. نانوغرام، ب. ديفيت، M.-L.؛ باب، J.-S.؛ كاواشيما، ن.؛ ليبيس، ل.؛ فورمينتي، S.-C. تثبيط الإشعاعات المؤينة للأورام البعيدة غير المعالجة (التأثير الأسطواني) يتم بوساطة مناعية. كثافة العمليات. جي شعاع. أونكول. بيول. فيز. 2004، 58، 862–870. [CrossRef] [مجلات]

قد يعجبك ايضا