تأثير إجمالي جليكوسيدات Cistanche Deserticola على استقلاب الطاقة لخلايا HepG2 البشرية

لدراسة التأثير المضاد للورم لـ Cistanche deserticola Y. Ma ، تمت معالجة خلايا HepG2 بـ 0 و 3.5 و 10.5 و 21 و 31.5 و 42 ميكروغرام / مل من إجمالي الجليكوسيدات (TG) من Cistanche deserticola. تم اكتشاف معدل بقاء خلية HepG2 وتركيز تثبيط 50٪ (IC50) باستخدام طريقة CCK -8 ، وتم اكتشاف مستوى أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) باستخدام مسبار مضان DCFH-DA. أخيرًا ، تم استخدام محلل الطاقة Seahorse XFe24 (Agilent ، الولايات المتحدة) لاكتشاف ضغط الميتوكوندريا الخلوي وضغط تحلل السكر. أظهرت النتائج أن TG يمكن أن يقلل من معدل بقاء خلايا HepG2 وأن مستوى IC50 كان 35.28 ميكروغرام / مل. مع زيادة تركيز TG ، أظهر مستوى ROS اتجاهًا تصاعديًا يعتمد على التركيز. أظهر التمثيل الغذائي للطاقة أن كل مجموعة جرعة من TG يمكن أن تقلل بشكل كبير من وظائف الجهاز التنفسي والمحلل للجلوكوز في خلايا HepG2. في الختام ، يمكن أن يثبط TG بشكل كبير وظائف التنفس الميتوكوندريا وتحلل الجلوكوز في خلايا HepG2 ، ويزيد من مستوى ROS ، ويمنع تكاثر الخلايا. وبالتالي ، أشارت هذه التجربة إلى أنه يمكن استخدام Cistanche deserticola كمصدر للأطعمة أو الأدوية المضادة للسرطان في المستقبل. ومع ذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات حول آلياتها والتطبيقات السريرية.

انقر فوق ملحق Cistanche لتعزيز جهاز المناعة

1 المقدمة

على Cistanche deserticola Y. Ma هو دواء متماثل ومادة غذائية. إنه نبات طفيلي معمر من عائلة Orobanchaceae ويسمى "الجينسنغ الصحراوي" (1). الأهم من ذلك ، أن العناصر الغذائية مثل الدهون والبروتينات التي يوفرها Cistanche يمكن أن تلبي احتياجات التمثيل الغذائي للطاقة الأساسية للأنسجة البشرية الطبيعية وتقليل إمداد الطاقة للخلايا السرطانية وبالتالي تحقيق الغرض من تثبيط نمو الخلايا السرطانية. علاوة على ذلك ، يحتوي Cistanche على وظائف مضادات الأكسدة وقمع الاستجابة الالتهابية وتقوية المناعة (1 ، 2). منذ أن أعلنت لجنة الصحة الوطنية لجمهورية الصين الشعبية وإدارة الدولة لتنظيم السوق رسميًا عن إنتاج وتشغيل Cistanche deserticola. تم تجريب Y. Ma باعتباره مادة متجانسة من الطب والغذاء في عام 2021 ، وكان هناك المزيد من البحوث المتعمقة حول تطويره

سرطان الكبد هو ورم خبيث شائع في الجهاز الهضمي ، ويحتل معدل الوفيات فيه مرتبة الصدارة من الأورام الخبيثة (3 ، 4) ، والتي يمكن تقسيمها إلى أولية وثانوية. في الوقت الحاضر ، لا يزال هناك نقص في العقاقير العلاجية الآمنة والفعالة في العيادة. إذا تم تناول سورافينيب وأدوية علاجية أخرى لفترة طويلة ، فستكون عرضة لمقاومة الأدوية وردود الفعل السلبية (5). لأن أعراض سرطان الكبد في وقت مبكر غير محددة ومعظم الأعراض في المرحلتين المتوسطة والمتأخرة ، يكون الناس أكثر نشاطا في علاج سرطان الكبد بالطب الصيني التقليدي. بين المرضى الذين يعانون من الأورام والمرضى الذين يعانون من آثار علاجية غير مرضية ، مثل العلاج الكيميائي الإشعاعي ، يعكس الطب الصيني التقليدي مزاياه ، مثل أنه يمكن أن يعزز المناعة ويكون مساعدًا في علاج الورم المبكر والمتوسط ​​المدى.

في السنوات الأخيرة ، تم الإبلاغ عن أن Cistanche له تأثيرات مضادة للسرطان (6-11). يي وآخرون. وجد (6) أن إشنكوسايد المستخرج من Cistanches herba (Cistanche salsa) يمكن أن يمنع تكاثر خلايا HepG2 عن طريق تقليل التعبير عن TREM2 ومنع مسار إشارة PI3K / Akt. لي وآخرون. وجد (7) أيضًا أن إشنكوسايد مارس نشاطًا مضادًا للأورام عبر محور miR -503-3 p / TGF - 1 / Smad ضد سرطان الكبد. وفي الوقت نفسه ، يمكن أن ينظم Verbascoside الإجهاد التأكسدي وموت الخلايا المبرمج لخلايا HepG2 من خلال STAT -3 ولديه القدرة على تطويره كعامل وقائي كيميائي (8-10). إلى جانب ذلك ، وجد الباحثون أن جليكوسيد الفينيثانويد يمكن أن يمنع أيضًا تأثير انتشار خلايا HepG2 (11). بالإضافة إلى ذلك ، منع إكينكوسايد تكاثر سرطان الكلى 786- الخلايا O وخلايا سرطان القولون SW480 (12 ، 13). في دراسة أخرى ، ثبت أيضًا أن جليكوسيدات الفينيثانويد من Cistanche تقلل من إصابة الكبد في الفئران الحاملة للورم H22 (14 ، 15) وتحسن وظيفة المناعة عن طريق تقليل مستويات AFP ، مما يؤثر سلبًا على نمو الورم (16). وتجدر الإشارة إلى أن استقلاب الطاقة المتغير هو إحدى خصائص الخلايا السرطانية ، والتي تتجلى في حقيقة أن الخلايا السرطانية تستخدم تحلل الجلوكوز كوسيلة لإمداد الطاقة بغض النظر عن البيئة الهوائية أو اللاهوائية ، وتعرف هذه الظاهرة باسم "تأثير واربورغ". لذلك ، من الممكن نظريًا تجويع الخلايا السرطانية بشكل انتقائي للحد من نمو الخلايا السرطانية عن طريق الحد من امتصاص الجلوكوز (17).

على الرغم من أن العديد من الدراسات قد درست التأثير المضاد للورم من جليكوسيدات فينيل إيثانويد ، مثل Echinacoside و Verbascoside ، فإن النشاط المضاد للورم لـ TG (جليكوسيدات فينيل إيثانويد ، وجليكوسيدات أخرى) ليس شائعًا. لا يوجد سوى عدد قليل من الدراسات حول ما إذا كان TG يؤثر على استقلاب الطاقة في الخلايا السرطانية. وهكذا ، قامت هذه التجربة بتحليل العلاقة بين استقلاب الطاقة ، والأضرار التأكسدية ، وبقاء الخلية من خلال القدرة على التحلل وضغط الميتوكوندريا لاستكشاف النشاط التثبيطي لـ TG على خلايا HepG2.

2. المواد والأساليب

2.1. زراعة الخلايا وعلاجها

تم شراء خلايا HepG2 من مركز الخلايا التابع لمعهد الطب الأساسي ، وجامعة بكين يونيون الطبية (بكين ، الصين) ، ووسط DMEM الكامل الذي يحتوي على 1 0 بالمائة من مصل بقري جنيني و 1 بالمائة من الأجسام المضادة (البنسلين ، الستربتومايسين ، و جنتاميسين). تمت زراعة الخلايا في حاضنة رطوبة مشبعة بـ 37 درجة مئوية و 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون (19). بعد أن نمت الخلايا إلى نقطة التقاء 80-90 في المائة ، تم هضمها مع 0.25 في المائة من التربسين بدون EDTA وزُرعت في 1: 3. بعد 2-3 أيام من نمو الخلية ، تم أخذ الخلايا في مرحلة النمو اللوغاريتمي لثقافة فرعية أو تجارب لاحقة. في كل تجربة ، تعرضت خلايا HepG2 لتركيزات مختلفة من TG.

تم توفير إجمالي جليكوسيدات Cistanche deserticola بواسطة Inner Mongolia Sankou Technology Co.، Ltd (Ordos، Inner Mongolia، China) (2 0). تم إذابة TG في وسط مزرعة DMEM حتى كانت التركيزات النهائية 0 ، 3.5 ، 10.5 ، 21 ، 31.5 ، و 42 ميكروغرام / مل.

2.2. Eect of TG على مورفولوجيا خلية HepG2

تم تلقيح خلايا HepG2 في مرحلة النمو اللوغاريتمي في 24- أطباق جيدة بتركيز 5 × 1 0 4 / بئر. بعد التصاق الخلايا بالجدار ، تمت إضافة TG حتى كانت التركيزات النهائية 0 ، 21 ، و 42 ميكروجرام / مل وتم تربيتها لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، لوحظ مورفولوجيا الخلية لكل مجموعة تحت مجهر التألق

2.3 Eect of TG على تكاثر HepG2 cel

تم أخذ لوغاريتم طور نمو الخلايا لخلايا HepG2 على أنه 1 × 1 0 4 / بئر ، تم تلقيحها في 96- ألواح بئر ، وتم تلقيح كل بئر بـ 100 ميكرولتر. بعد التصاق الخلايا بالجدار ، تذوب في وسط DMEM خالٍ من المصل بحيث كانت تركيزات الدواء النهائية 0 ، 3.5 ، 10.5 ، 21 ، 31.5 ، و 42 ميكروجرام / مل. تم تخصيص ستة آبار لكل تركيز ثم حضنت عند 37 درجة مئوية تحت 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون في حاضنة لمدة 24 ساعة. أخيرًا ، لكل بئر ، تمت إضافة 100 ميكرولتر من وسط استزراع DMEM يحتوي على 10 بالمائة من محلول CCK8 ، ثم تم تحضين الآبار في حاضنة لمدة 30 دقيقة لاكتشاف قيمة الامتصاص (A) عند 450 نانومتر.

2.4 قياس مستوى ROS داخل الخلايا

تم وضع نظام سعة 2 مل لكل بئر يحتوي على 4 × 105 خلايا في 6- صفيحة جيدة ووضعها في حاضنة عند 37 درجة مئوية تحت 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون. بعد 24 ساعة من العلاج ، تم قياس مستوى ROS داخل الخلايا. بعد ذلك ، تمت إضافة 1 مل من DCFH-DA (10 ميكرومتر) واحتضانها في الظلام عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، قمنا بغسلها باستخدام برنامج تلفزيوني ثلاث مرات ، وأخيراً ، تم اكتشاف نشاط ROS عن طريق قياس التدفق الخلوي

2.5 Eect of TG على استقلاب الطاقة لـ HepG2 ce

s (A) تحسين ظروف الاختبار: تم اختيار خلايا HepG2 في فترة النمو اللوغاريتمي وتلقيحها على لوحة مزرعة الخلية لمحلل الطاقة الحيوية Seahorse XFe 24 بمعدل 5 0 0 ميكرولتر لكل بئر بحيث كان عدد الخلايا 1 و 2 و 4 و 8 (× 104). تم عمل خمس مكررات من كل مجموعة ، تمت إضافة A1 و B3 و C4 و D6 فقط مع وسط الثقافة. (ب) اكتشاف ضغط الميتوكوندريا: تم إخراج مجموعة ضغط الميتوكوندريا مسبقًا ، والتي تضمنت أوليغوميسين ، وسيانيديتريفلوروميثوكسي فينيل هيدرازون (FCCP) ، وروتينون / أنتيميسين أ (روت / AA). تم تخفيفها بوسط الكشف لجعل تركيزاتها 1 ميكرومتر ، 0.5 ميكرومتر ، 0.5 ميكرومتر ، بشكل منفصل.

بعد ذلك ، تمت إزالة لوحة المجس المائي وإضافتها إلى المنافذ A و B و C على التوالي بحجم 56 ميكرولتر و 62 ميكرولتر و 69 ميكرولتر. تم قياس قيم معدل استهلاك الأكسجين (OCR) في فترات زمنية مختلفة لتعكس مستوى الفسفرة المؤكسدة. (ج) كشف ضغط تحلل السكر: تم تخفيف الجلوكوز ، والأليغوميسين ، و 2- deoxyglucose (2- DG) مع وسط الكشف لجعل التركيزات 10 ملي مولار ، 1 ميكرومتر ، و 50 ملي مولار ، على التوالي. بعد ذلك ، تمت إزالة لوحة المجس المائي وإضافتها إلى المنافذ A و B و C على التوالي مع الأحجام المذكورة أعلاه. تم قياس قيم معدل التحميض خارج الخلية (ECAR) في فترات زمنية مختلفة لتعكس وظيفة حال السكر في الخلايا (21).

2.6. لطخة غربية

تم طلاء الخلايا المعالجة بـ 80 ميكرولتر من محلول التحلل (RIPA: PMSF=100: 1) الذي تم استخدامه لبروتينات الليز ، وبعد ذلك ، تم إجراء التحليل الكهربائي للهلام دوديسيل كبريتات-بولي أكريلاميد (SDS-PAGE) لفصل عينات البروتين (حجم تحميل 50 ميكروغرام لكل بئر). في وقت لاحق ، تم نقل البروتين إلى غشاء PVDF باستخدام حمام جليدي ، وتم حظر البروتينات بواسطة BSA لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة ، والأجسام المضادة الأولية (Bcl -2 ، Bax ، caspase -3) تمت إضافته بشكل متناسب واحتضانه طوال الليل عند 4 درجات مئوية. بعد ذلك ، تم تحضين أغشية PVDF بأجسام مضادة ثانوية مخففة لمدة 1-2 ساعة عند درجة حرارة الغرفة. - تم استخدام الأكتين كبروتين مرجعي داخلي ، وتم تطوير أغشية PVDF وتثبيتها لمراقبة التغيرات المستهدفة في تعبير البروتين (22 ، 23).

2.7. المعالجة الإحصائية

تم التعبير عن بيانات الاختبار كـ χ ± SD (الانحراف المعياري) وتم تحليلها عن طريق تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) باستخدام SPSS 25. 0 (SPSS ، الولايات المتحدة). Flowjo1 0 و Graphpad prism 8. 0. 2 هما البرنامجان المستخدمان في رسم الأشكال. ∗ P <0. 05 و ∗∗ P <0.01.

3. النتائج

3.1. Eect of TG على مورفولوجيا خلية HepG2

في عملية موت الخلايا المبرمج ، أولاً ، سينخفض ​​حجم الخلية ببطء ويتشوه ، ثم تتقلص الخلايا التي تنمو بالقرب من الجدار ببطء ، وتصبح مستديرة ، وتسقط ، مما يؤدي إلى الإصابة بتضخم الكروموسوم. بعض النوى سوف تنكسر وتهمش وتشكل حويصلات موت الخلايا المبرمج. لوحظ من الشكل 1 أنه عندما عولجت خلايا HepG2 بـ TG ، انخفض حجم الخلية تدريجياً. لوحظ بشكل بديهي أن نوى الخلايا المعالجة بـ 21 ميكروغرام / مل من TG بدأت في الانكماش وأصبح الحجم أصغر. مع 42 ميكروغرام / مل من TG ، كانت الخلايا مصحوبة بتفتت خلوي عائم. كان غشاء الخلية مكسورًا تمامًا ، متشققًا ، نخرًا ، مع حدود غير واضحة ، وفي حالة انهيار وشيك وموت

3.2 Eect of TG على تكاثر HepG2 cel

لتأكيد التأثير المضاد للورم لـ TG في المختبر ، عولجت خلايا HepG2 بسلسلة من تركيزات TG (0 ، 3.5 ، 10.5 ، 21 ، 31.5 ، و 42 ميكروغرام / مل) لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، تم استخدام طريقة الفحص CCK8 لاستكشاف تأثير TG على تكاثر خلايا HepG2

استكشاف تأثير TG على تكاثر خلايا HepG2. يوضح الشكل 2 أن انتشار HepG2 قد تأثر بدرجات متفاوتة بعد العلاج بتركيزات مختلفة من TG لمدة 24 ساعة. بالمقارنة مع معدل بقاء الخلية للمجموعة الضابطة ، كانت معدلات بقاء الخلية لمجموعة العلاج 96.95 بالمائة و 92.59 بالمائة و 92.78 بالمائة و 77.28 بالمائة و 31. {14}} 4 بالمائة على التوالي. مع زيادة التركيز ، أظهر معدل بقاء الخلية اتجاهًا هبوطيًا ، ولكن لم يكن هناك فرق كبير (P> 0. 05) في التراكيز 3.5 و 10.5 و 21 ميكروغرام / مل ، وكان نطاق التثبيط صغير. كانت هناك فروق معنوية بين التراكيز 31.5 و 42 ميكروغرام / مل (P <0.01) ، وكان معدل التثبيط مرتفعاً مثل 68.96٪ عند 42 ميكروغرام / مل. لذلك ، أظهرت هذه التجربة أن TG يمكن أن يمنع بشكل كبير بقاء خلايا HepG2 بطريقة تعتمد على التركيز ، وقد تكون هناك حاجة إلى مزيد من التجارب لتأكيد السمية الخلوية لـ TG.

3.3 قياس مستويات ROS داخل الخلايا

كما هو مبين في الشكل 3 ، مع زيادة تركيز TG ، تم اكتشاف محتويات نسبية أعلى لـ ROS بواسطة طريقة مسبار مضان DCFH-DA ، مما يدل على اتجاه تدرج الجرعة. بعد معالجة TG لمدة 24 ساعة ، زادت شدة التألق النسبية لـ DCF بنسبة 0. 91 بالمائة و 13.64 بالمائة و 24.61 بالمائة و 45.91 بالمائة و 1 0 5.33 بالمائة ، وكانت هناك اختلافات كبيرة جدًا عند 10.5 و 21 و 31.5 و 42 ميكروغرام / مل (P <0.01). عندما كان تركيز TG 42 ميكروغرام / مل ، لوحظ أن الحد الأقصى لمستوى تراكم ROS أعلى بحوالي مرتين من ذلك في المجموعة الضابطة. لذلك ، توقعنا أن تكون الطاقة الإنتاجية المستقرة والعالية لـ ROS هي السبب في السمية الخلوية الأفضل لـ TG. قد تشير هذه النتائج أيضًا إلى وجود علاقة وثيقة بين قدرة إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية وسمية الخلايا

3.4. Eect of TG على التنفس الهوائي للميتوكوندريا من Hep2 م

3.4.1. تحديد رقم الخلية

في الكشف عن ضغط الميتوكوندريا وضغط حال السكر ، كان من الضروري أولاً تحديد الكثافة المثلى لبذر الخلية (21). في هذه التجربة ، يوصى باستخدام قيمة معدل استهلاك الأكسجين الأساسي (OCR) ومعدل التحميض خارج الخلية (ECAR) لتوصيف كثافة الخلية. أولاً ، تم استخدام التقييم البصري لتقريب كثافة الخلية المثلى: يجب توزيع الخلايا بالتساوي في كل بئر بدرجة اندماج 50-90 بالمائة. من ناحية ، عند استخدام 24- محلل الطاقة الحيوية للبئر لتحديد قيم OCR أو ECAR للخلية ، يجب أن تكون كثافة تلقيح الخلية 1 × 104 -8 × 104 خلية / بئر. من ناحية أخرى ، يمكن استخدام قيم OCR و ECAR الأساسية لتحديد أفضل كثافة بذر وضمان دقة البيانات. وفقًا لوصف منتج محلل Seahorse XFe24 ، يجب أن يكون التعرف الضوئي على الحروف للخلية في حالة النمو الطبيعي في. نطاق من 50 إلى 400 ميل / دقيقة ويجب أن يتراوح نطاق ECAR الأساسي العادي بين 20-120 ميل / ساعة / دقيقة. لذلك ، فإن الجمع بين الجانبين ، والحفاظ على الخلايا عند 8 × 104 / بئر سيكون أكثر ملاءمة (الشكل 4)

3.4.2. Eect of TG على الفسفرة المؤكسدة لخلايا HepG2

ls ، يعد تقييم وظيفة الميتوكوندريا ضروريًا لفهم الأمراض المتعلقة باستقلاب طاقة الخلية وتطوير الأدوية المقابلة ، ويعد التعرف الضوئي على الحروف أحد أهم مؤشرات التقييم. لدراسة تأثير TG على عملية الفسفرة المؤكسدة لخلايا HepG2 ، استخدمنا محلل Seahorse XFe24 لاكتشاف مستويات التعرف الضوئي على الحروف للخلايا المعالجة بـ TG وقمنا بتحليل المؤشرات ذات الصلة. مع زيادة تركيز TG ، انخفض مستوى OCR تدريجيًا (الأشكال 5 أ ، ب) ، وبشكل خاص ، بعد إضافة FCCP ، أصبح الفرق في قيم OCR بين مجموعة الجرعات ومجموعة التحكم أكبر. في الوقت نفسه ، يوضح الشكلان 5C-F والجدول 1 أن التنفس القاعدي انخفض تدريجياً ؛ مقارنةً بـ 0 ميكروغرام / مل ، فقد انخفض بنسبة 39.24 بالمائة و 41.43 بالمائة و 47.10 بالمائة و 78.22 بالمائة و 95.26 بالمائة على التوالي لكل مجموعة جرعات. انخفض معدل التنفس الأقصى بنسبة 52.95 في المائة و 65.06 في المائة و 77.76 في المائة و 94.48 في المائة و 98.61 في المائة على التوالي ؛ انخفض استهلاك الأكسجين غير المتقدري بنسبة 37.34 بالمائة و 37.45 بالمائة و 47.27 بالمائة و 76.10 بالمائة و 79.79 بالمائة على التوالي. انخفض إنتاج ATP بنسبة 42.49 بالمائة و 47.91 بالمائة و 57.83 بالمائة و 87.28 بالمائة و 98.16 بالمائة على التوالي.

قد تكون أسباب الانخفاض أن الخلايا المعالجة بـ TG كانت في حالة موت الخلايا المبرمج وزيادة مستوى ROS ، مما قد يزيد من الضرر التأكسدي للخلايا ، ويقلل من نشاط معقد سلسلة الجهاز التنفسي للميتوكوندريا ، ويؤثر على القدرة. من تخليق ATP في الميتوكوندريا. أظهرت النتائج أن TG يمكن أن يثبط بشكل كبير المستوى العام للتنفس الهوائي للميتوكوندريا الخلوية ، وأن معدل بقاء الخلية بعد علاج TG قد انخفض بشكل كبير ، والذي قد يكون مرتبطًا بشكل مباشر باضطراب استقلاب طاقة الميتوكوندريا. ومع ذلك ، هناك حاجة لمزيد من الدراسات المتعمقة للآليات

3.4.3. Eect of TG على قدرة HepG2 حال السكر

يتم تنفيذ عملية تحلل السكر في مصفوفة الخلية ، ويطلق حمض اللاكتيك المنتج H زائد إلى خارج الخلية. علاوة على ذلك ، تم استخدام محلل Seahorse XFe24 لتحليل وظيفة حال السكر عن طريق الكشف عن قيم ECAR بعد علاج TG ومعلمات الفحص ذات الصلة لتحديد الطريقة المحددة التي يؤثر بها TG على عملية تحلل خلايا HepG2. بمرور الوقت ، مع إضافة الجلوكوز والأليغوميسين ، زادت قيمة ECAR تدريجيًا وأظهرت اتجاهًا هبوطيًا عند إضافة 2- DG (الشكل 6 أ). مع الزيادة في تركيز TG ، انخفض المستوى الإجمالي لـ ECAR تدريجيًا (الشكل 6B) ، وهو ما انعكس في الانخفاض التدريجي في قدرة التحلل وقيمة احتياطي حال السكر (الأشكال 6D ، E ؛ الجدول 2). كان مستوى عدم الارتباط بالجليكوزيل في الغالب أقل من مستوى المجموعة الضابطة ولكن لم يكن هناك اعتماد على التركيز (الشكل 6 ج). بالمقارنة مع مجموعة التحكم ، انخفضت قدرة التحلل السكري لمجموعة معالجة TG بنسبة 1.12 في المائة و 9.29 في المائة و 34.46 في المائة و 92.15 في المائة و 1 00 .00 في المائة على التوالي ؛ انخفضت قيمة احتياطي حال السكر بنسبة 4.78٪ و 34.17٪ و 79.50٪ و 93.39٪ و 98.63٪ على التوالي.

أظهرت النتائج أن TG يمكن أن يمنع تكاثر ونمو خلايا HepG2 عن طريق تقليل وظيفة حال السكر في HepG2 وإنتاج السمية الخلوية. وتجدر الإشارة إلى أن درجة الضرر لوظيفة حال السكر عند الجرعات المنخفضة كانت أقل من درجة التدهور لمختلف عوامل الفسفرة المؤكسدة للخلايا ، بينما تم تقليل وظيفة التحلل السكري والفسفرة التأكسدية للخلايا بشكل كبير عند الجرعات العالية. لذلك ، تم اقتراح أن TG قد أضر بشكل أساسي بوظيفة الميتوكوندريا بجرعات منخفضة ، بينما في الجرعات العالية تضررت كل من وظيفة الميتوكوندريا ووظيفة تحلل السكر في نفس الوقت ، لتسريع درجة موت الخلايا المبرمج ونخر الخلايا السرطانية وتمنع تكاثر الخلايا

3.5 التعبير عن بروتينات الخلايا HepG2 بعد علاج TG

يوضح الشكل 7 أنه بعد العلاج بتركيزات مختلفة من TG لمدة 24 ساعة ، كانت مستويات التعبير البروتيني لـ HepG2 0. 0 1. التغيير في نفس الوقت. مع زيادة تركيز TG ، زادت مستويات التعبير عن العوامل proapoptotic Bax و Caspase -3 ، وكان التعبير النسبي للبروتين أعلى عندما كانت التركيزات 31.5 ميكروغرام / مل و 10.5 ميكروجرام / مل على التوالي. بالإضافة إلى ذلك ، عندما كان التركيز منخفضًا (0 ، 3.5 ، 10.5 ، 21 ميكروغرام / مل TG) ، زاد التعبير النسبي للعامل المضاد للخلايا Bcl -2. عندما كان تركيز TG 31.5 ميكروغرام / مل و 42 ميكروغرام / مل ، أظهر اتجاهًا هبوطيًا ملحوظًا. لذلك ، استنتجنا أن TG قد يعزز موت الخلايا المبرمج لـ HepG2

4. المناقشة والاستنتاج

أثبتت الدراسات أن Cistanche deserticola ومكوناته الفعالة لها خصائص مضادة للأكسدة ، ومضادة للتعب ، ومضادة للشيخوخة ، ومضادة للأورام ، وخصائص تحسين الذاكرة وتعزز تكوين العظام (11 ، 12). في الوقت الحاضر ، لا يزال علاج سرطان الكبد يفتقر إلى الوسائل الفعالة. غالبًا ما يعتمد على العلاج الشامل مثل الجراحة والعلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي. العلاج الكيميائي له آثار جانبية سامة كبيرة ويسهل تطوير مقاومة الأدوية. الطب الصيني التقليدي له تأثيرات جانبية أقل فعالية في السمية المضادة للأورام. في الوقت نفسه ، يمكن أن يعزز المناعة العضوية ويمنع السرطان (24)

.01. من خلايا HepG2 بطريقة تعتمد على الجرعة مع زيادة التركيز ، يلبي السرطان احتياجات التخليق الحيوي والاختزال لخلايا الورم عن طريق تغيير التمثيل الغذائي ، وإعادة برمجة الخلايا السرطانية ، واكتساب العناصر الغذائية ، والمسارات الأيضية ، مما يجعل من الممكن تكاثر الخلايا السرطانية دون قيود (25) ). لذلك ، كان تقييد تكاثر الخلايا السرطانية بالطرق المذكورة أعلاه هو محور تجاربنا اللاحقة. تم العثور على تركيز معين من TG لمنع النمو والانتشار .01 بشكل ملحوظ. من خلايا HepG2 بطريقة تعتمد على الجرعة مع زيادة التركيز

أيون. في ظل الظروف العادية ، يمكن أن تؤدي الزيادة الطفيفة في مستوى أنواع الأكسجين التفاعلية إلى تعزيز تكاثر الخلايا الطبيعية. ومع ذلك ، فإن الزيادة الكبيرة في مستوى أنواع الأكسجين التفاعلية في الخلايا السرطانية يمكن أن تؤدي إلى موت الخلايا (26). الجرعات العالية من ROS يمكن أن تسبب تثبيط نمو الخلايا ، الإصابة ، موت الخلايا المبرمج ، وحتى الموت ، وهو ما يتوافق مع التأثير المثبط لـ TG على تكاثر خلايا HepG2. هناك أيضًا دليل على أن إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية عادة ما يثبط تكاثر الخلايا السرطانية (27). يعتمد بقاء الخلايا أو موتها إلى حد كبير على الحالة الوظيفية للميتوكوندريا (28). يعتبر ROS منتجًا لا مفر منه في عملية التمثيل الغذائي للخلايا لأنه يعمل على الميتوكوندريا وهو أحد الطرق الرئيسية للتسبب في تلف الميتوكوندريا. تتمثل الوظيفة الرئيسية للميتوكوندريا في الخلايا في توفير الطاقة لعملية التمثيل الغذائي للخلايا والتخليق الحيوي عن طريق إنتاجATP ، وهو مهم جدًا لبقاء الخلايا الطبيعية والخلايا السرطانية (29). إذا زاد مستوى ROS في الجسم ولم تتحلل بواسطة الخلايا ، فإن ROS سيؤثر على نشاط معقد سلسلة الجهاز التنفسي للميتوكوندريا (30) ، وبالتالي يؤثر على الفسفرة المؤكسدة للميتوكوندريا ويقلل تخليق ATP في الخلايا (31) ، مما يؤدي إلى في اختلال نظام الأكسدة داخل الخلايا وتثبيط تكاثر الخلايا السرطانية (32). في الواقع ، يمكن للعوامل الوقائية الكيميائية أن تعزز مستوى أنواع الأكسجين التفاعلية للوصول إلى عتبة السمية وتعزز موت الخلايا المبرمج للخلايا السرطانية بأقل سمية للخلايا الطبيعية (33). أكدت النتائج أيضًا أن الزيادة في المحتوى النسبي لـ ROS يمكن أن تقلل بشكل كبير من معدل بقاء خلايا HepG2.

للتكيف مع البيئات الخارجية المتغيرة ، يجب على الكائن الحي تعديل الأنشطة البيولوجية للخلايا في أي وقت. في المقابل ، فإن تنظيم الأنشطة البيولوجية للخلية من قبل الكائن الحي يعتمد على تنظيمه لشبكات التمثيل الغذائي الخلوية. لذلك ، يتم دائمًا تنظيم حالة طاقة الخلايا والحفاظ عليها في نطاق معين من التوازن الديناميكي في ظل الظروف الفسيولوجية العادية ، وهي الحالة الثابتة لاستقلاب طاقة الخلية (34). بالإضافة إلى ذلك ، تعتبر الميتوكوندريا واحدة من الأهداف الرئيسية لإصابة خلايا الكبد التي يسببها الدواء (35). في الوقت نفسه ، يعتقد الباحثون أنه يمكن تلبية احتياجات الخلايا من الطاقة من خلال تحلل السكر والفسفرة المؤكسدة (OXPHOS). عندما لم يعد OXPHOS متاحًا ، على سبيل المثال ، بسبب تأثيرات نقص الأكسجين أو تلف الميتوكوندريا ، يمكن أن تتحول خطوط الخلايا هذه إلى تحلل السكر لإنتاج ATP كافٍ للبقاء على قيد الحياة (36)

لاحظ أوتو واربورغ (37 ، 38) أنه في وجود الأكسجين ، أظهرت الخلايا السرطانية خصائص غير عادية لامتصاص الجلوكوز وتخميره في حمض اللاكتيك. تشير هذه الخاصية المميزة ، تحلل السكر الهوائي إلى أنه مع وجود كمية كافية من الأكسجين ، فضلت الخلايا السرطانية استخدام تحلل الجلوكوز لاستقلاب الجلوكوز بدلاً من الفسفرة المؤكسدة في الميتوكوندريا لإنتاج المزيد من ATP. سيساعد هذا الخلايا السرطانية على إنتاج طاقة كافية بسرعة لنموها السريع ، وإطلاق المزيد من حمض اللاكتيك ، والحفاظ على بيئتها المكروية الحمضية ، والهروب من المراقبة المناعية ، والانتشار بسهولة (39 ، 40). لذلك ، اقترح واربورغ أن عيوب الجهاز التنفسي في الميتوكوندريا هي أساس محتمل لتحلل السكر الهوائي والسرطان (37 ، 38). في هذه الدراسة ، أدت جميع تركيزات TG إلى تثبيط المستوى العام للتنفس الهوائي للميتوكوندريا وحدت من وظيفة حال السكر ، والتي قد تكون مرتبطة ارتباطًا مباشرًا باضطراب استقلاب طاقة الميتوكوندريا. ومع ذلك ، هناك حاجة لمزيد من الدراسات المتعمقة للآليات

Bax هو المنظم الرئيسي لنشاط Bcl -2 وترتبط مستويات تعبيره ارتباطًا مباشرًا بتنظيم موت الخلايا المبرمج ، مع زيادة تعبير Bax الذي يشير إلى تعزيز موت الخلايا المبرمج عن طريق الأدوية وزيادة Bcl -2 مما يشير إلى تثبيط موت الخلايا المبرمج (41 ). بالإضافة إلى ذلك ، يؤثر بروتياز الكاسباس بشكل كبير على موت الخلايا المبرمج ويمثل تنشيطه تقدم الخلايا في مرحلة الاستماتة غير القابلة للعكس (42). وهكذا ، في خلايا HepG2 المعالجة بـ TG ، تمت زيادة مدى تنشيط كاسباس -3 ، مما يشير إلى أن TG يمكن أن يسبب موت الخلايا المبرمج الذي لا رجعة فيه ويمنع تكاثر الخلايا

في الختام ، تحتوي هذه الدراسة على مرجع كبير للبحث المتعمق حول آلية مكافحة الورم في Cistanche deserticola. لديه القدرة على أن يكون مادة خام للأدوية للعلاج السريري لسرطان الكبد والوقاية الفعالة من الأورام مع الاستهلاك في النظام الغذائي اليومي.

بيان توافر البيانات

يمكن العثور على مجموعات البيانات المقدمة في هذه الدراسة في مستودعات على الإنترنت. يمكن العثور على أسماء المستودعات / المستودعات ورقم (أرقام) الانضمام في المقالة / المواد التكميلية

مساهمة المؤلف

DF: تحقيق وكتابة المسودة الأصلية وتحليل المؤامرة. S-qZ و Y-xZ: التحليل الرسمي والتصور. Y-JJ: تحقيق. Q-dS و WS و Q-qC: الموارد والدعم المادي. W-jY: كتابة المراجعة والتحرير والإشراف على المشروع والحصول على التمويل. JW: كتابة المراجعة والتحرير والتحقق من الصحة. وافقت جميع المؤلفين النسخة النهائية من المخطوط

التمويل

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (32172244) ومشاريع البحث الأكاديمي لجامعة اتحاد بكين (JB202101)

تضارب المصالح

تم توظيف Y-jJ من قبل شركة Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co.، Ltd.

يصرح المؤلفون المتبقون أن البحث تم إجراؤه في غياب أي علاقات تجارية أو مالية يمكن تفسيرها على أنها تضارب محتمل في المصالح.

ملاحظة الناشر

جميع الادعاءات الواردة في هذه المقالة تخص المؤلفين فقط ولا تمثل بالضرورة تلك الخاصة بالمنظمات التابعة لهم أو تلك الخاصة بالناشر والمحررين والمراجعين.

أي منتج قد يتم تقييمه في هذه المقالة ، أو المطالبة التي قد تقدمها الشركة المصنعة لها ، غير مضمون أو معتمد من قبل الناشر.

مراجع

1. Feng D، He Y، Jiang YJ، Wang YJ، Yan WJ. تقدم البحث في وظيفة مكافحة شيخوخة Cistanches. J Food Saf Qual. (2021) 12: 4429–37. دوى: 10.19812 / j.cnki.jfsq 11- 5956 / ts.2021.11.018

2. Feng D، Duan H، Lv YN، Jiang YJ، Wang YJ، Yan WJ. تطبيق Cistanche deserticola Ma في الغذاء الوظيفي في الصين. تكنولوجيا علوم الغذاء. (2021) 46: 76 - 81. دوى: 10.13684 / j.cnki.spkj.2021.12.012

3. Ma GZ، Chen JR، Wei TT، Wang J، Chen WS. تثبيط أدوار FOXA2 في هجرة خلايا سرطان الكبد وغزوها عن طريق قمع نسخ microRNA103a3p وتفعيل محور GREM2 / LATS2 / YAP. تكنولوجيا الخلايا. (2021) 73: 523–37. doi: 10.1007 / s 10616-021-00475-2

4. Zheng RS ، و Zhang SW ، و Zeng HM ، و Wang SM ، و Sun KX ، و Chen R ، وآخرون. معدل الإصابة بالسرطان والوفيات في الصين ، 2016. J Natl Cancer Center. (2022) 2: 1–9. دوى: 10.1016 / j.jncc.2022.02.002

5. Sun Y ، Song YY ، Zhang C ، Lu YZ ، Zheng GH ، Tian XX ، et al. آثار وآلية السيلاسترول على انتشار خلايا سرطان الكبد HepG2 عن طريق تنشيط مسار إشارة AMPK. صيدلي الصين. (2021). 24: 1961-6. doi: 10.19962 / j.cnki.issn 1008-049 X.2021.11.001

6. Ye Y ، Song Y ، Zhuang J ، Wang G ، Ni J ، Xia W. التأثيرات المضادة للسرطان من echinacoside في نموذج فأر سرطان الخلايا الكبدية وخلايا HepG2. J خلية فيزيول. (2019) 234: 1880-8. doi: 10.1002 / jcp.27063

7. Li W و Zhou J و Zhang Y و Zhang J و Li X و Yan Q وآخرون. يمارس Echinacoside نشاطًا مضادًا للورم عبر محور miR -503-3 p / TGF - 1 / Smad في سرطان الكبد. كثافة الخلايا السرطانية. (2021) 21: 304. دوى: 10.1186 / ثانية 12935-021-01890-3

8. Zhang Y، Zhu BL، Yang XJ، Hui J، Ma Q، Yu XH. تقدم البحث في تثبيط الأورام الخبيثة من فيرباسكوزيد. الدقة ممارسة تشين ميد. (2019) 33: 78 - 82. doi: 10.13728 / j. 1673-6427. 2019.06.018

9. Alipieva K، Korkina L، Orhan IE، Georgiev MI. Verbascoside - مراجعة لحدوثه ، والتركيب (الحيوي) ، وأهميته الدوائية. Biotechnol Adv. (2014) 32: 1065–76. دوى: 10.1016 / j.biotechadv.2014.07.001

10. Peerzada KJ ، Faridi AH ، Sharma L ، Bhardwaj SC ، Satti NK ، Shashi B ، وآخرون. يتوسط Acteoside- الوقاية الكيميائية من التسرطن التجريبي للكبد من خلال الإجهاد التأكسدي المنظم وموت الخلايا المبرمج STAT -3. إنفيرون توكسيكول. (2016) 31: 782–98. doi: 10.1002 /ox.22089

11. Qi XX ، You SP ، He ZX ، Zhao J ، Liu T. تأثير Cistanche deserticola phenylethanoid glycoside على تكاثر واستماتة خلايا HepG2 في المختبر. جامعة شينجيانغ ميد J. (2021) 44: 1041-7.

12. Xie YT. آثار Echinacoside على 786- موت الخلايا المبرمج وآليات الاستقراء في المختبر. نيويورك: كلية باوتو للمعلمين (2020).

13. هان واي إم ، جين دبليو إم ، تسينج إتش ، وانج سي ، زانج هـ. تأثيرات إشنكوسايد على انتشار وغزو ورم خبيث لخلايا سرطان القولون SW480 في المختبر وفي الجسم الحي. J Guangzhou Univ Trad Chin Med. (2020) 37: 1542-9. دوى: 10.13359 / j.cnki.gzxbtcm.2020.08.024
14. Hou XT، Liu T، Su DQ. التأثير المضاد للورم من جليكوسيدات الفينيثانويد من Cistanche deserticola على الفئران الحاملة للورم H22. J توكسيكول. (2021) 35: 231 - 40. doi: 10.16421 / j.cnki. 1002-3127. 2021.03.010

15. Hou XT ، Su DQ ، Qi XX ، Liu T. تأثير جليكوسيدات الفينيثانويد من Cistanche deserticola على الالتهام الذاتي للخلايا السرطانية في الفئران الحاملة للورم H22. J توكسيكول. (2022) 36: 137–41. دوى: 10.1155/2022/3993445

16. Hu Q، You SP، Liu T، Wang B، Liu X، Jiang YD. تحقيق في التأثير المضاد لسرطان الكبد لـ Cistanche. مسرطن Teratog Mutag. (2018) 30: 194-9.

17. Kamalian L و Douglas O و Jolly CE و Snoeys J و Simic D و Monshouwer M وآخرون. فائدة خلايا HepaRG للتحقيق في الطاقة الحيوية والكشف عن سمية الميتوكوندريا التي يسببها الدواء. توكسيكول في المختبر. (2018) 53: 136-47. دوى: 10.1016 / j.tiv.2018. 08.001

18. Wang FJ ، Li RY ، Tu PF ، Chen JP ، Zeng KW ، Jiang Y. يعمل إجمالي الجليكوسيدات في Cistanche deserticola على تعزيز استعادة الوظيفة العصبية عن طريق تحفيز تجديد الأوعية الدموية عبر مسار Nrf -2 / Keap -1 في MCAO / الجرذان. (2020) 11:36. دوى: 10.3389 / fphar.2020.00236

19. Wang J ، Zhang XX ، Ni ZJ ، Elam E. Thakur Kiran ، Li KX ، et al. آلية Licochalcone A المضادة للسرطان على خلية الورم الكبدي البشري HepG2 بناءً على omics miRNA. الغذاء Sci Hum بشكل جيد. (2023) 12: 1136–48. دوى: 10.1016 / j.fshw.2022.10.039

20. Feng D و Chang X و Jiang YJ و Guo Y و Zhao J و Zhao JY وآخرون. تعظيم الاستفادة من تقنية تحضير الاستخلاص المائي لـ Cistanche deserticola من خلال منهجية سطح الاستجابة وأبحاث نشاطها. Sci Technol Food Ind. (2023) 5: 1–16. doi: 10.13386 / j.issn 1002-0306. 2022050033

21. جي إكس جي ، وانج جي ، ما إيه جيه ، فينج دي ، هي واي ، يان ويج. تأثيرات بروتين خادرة دودة القز على موت الخلايا المبرمج واستقلاب الطاقة في خلايا DLD لسرطان القولون البشري -1. الغذاء Sci Hum بشكل جيد. (2022). 2022: 1171-6. دوى: 10.1016 / j.fshw.2022.04.011

22. Zhang ZG ، وانغ ML ، Xing S ، تشانغ C. الفلافونويد من Rosa rugosa Thunbinhibit انتشار الورم والورم الخبيث في سرطان الخلايا الكبدية البشرية HepG2 الخلايا Food Sci Hum Well. (2022) 11: 374-82. دوى: 10.1016 / j.fshw.2021.11.016

23. Liu X، Jiang N، Xu X، Liu C، Liu Z، Zhang Y، et al. تحديد مركب مضاد للورم الكبدي من خلال طريقة علاقة تأثير الطيف ، خروج المغلوب للمكون ، و UPLC-MS2 في Scheflera heptaphylla (L) من الأضرار وآليتها. فارماكول الجبهة. (2020) 11:1342. دوى: 10.3389 / fphar.2020.01342

24. Liu XQ و Wang SY و Cui LL و Zhou HH و Liu YH و Meng LJ et al. الزهور: الموارد الغذائية والأدوية الثمينة. الغذاء Sci Hum بشكل جيد. (2023) 12: 1020-52. دوى: 10.1016 / j.fshw.2022.10.022

25. Yin XZ ، Liu ZJ ، Guo Y. تقييم التأثيرات على خلايا سرطان الكبد البشري عن طريق تحليل استقلاب الطاقة الخلوية. تشين ي إمونول. (2021) 37: 426-30.

26. Liu GY، Sun YZ، Zhou N، Du XM، Yang J، Guo SJ. يتسبب الكركمين 3،3'-OH في موت الخلايا المبرمج في خلايا HepG2 من خلال مسارات ROS بوساطة. Eur J Med Chem. (2016) 112: 157-63. دوى: 10.1016 / j.ejmech.2016.02.019

27. Pal LC، Prateeksha، Singh BN، Pande V، Rao CV. الجزء المخصب بالفينول من Pterospermum lanceifolium Roxb. يعكس بكفاءة سرطان الخلايا الكبدية في فئران HCC التي يسببها NDEA. سرطان التغذية. (2022) 74: 1106–21. دوى: 10.1080 / 01635581.2021.1922716

28. Bras M، Queenan B، Susin SA. موت الخلية المبرمج عن طريق الميتوكوندريا: أنماط مختلفة من الموت. الكيمياء الحيوية (موسك). (2005). 70: 231-9. دوى: 10.1007 / ث 10541-005-0105-4

29. جالبر سي ، أكوستا إم جي ، مينيرفيني جي ، جورجيو ف. دور سينسيز ATP للميتوكوندريا في السرطان. بيول كيم. (2020) 401: 1199–214. دوى: 10.1515 / هسز -2020-0157

30. Piantadosi CA ، Zhang J. جيل الميتوكوندريا من أنواع الأكسجين التفاعلية بعد نقص تروية الدماغ في الفئران. سكتة دماغية. (1996) 27: 327-31. دوى: 10.1161 / 01.STR.27.2.327

31. Avery SV. الأهداف الجزيئية للإجهاد التأكسدي. Biochem J. (2011) 434: 201-10. doi: 10.1042 / BJ20101695

32. Cui Z ، Li S ، Wang HJ ، Ma J ، Qin TT ، Shi H ، et al. تأثير ثنائي هيدروأرتيميسينين على الضرر التأكسدي واستقلاب الطاقة لخلايا HepG2 وتأثيره التآزري مع سورافينيب. Chin J Exp Trad Med Formul. (2021) 27: 24-32. دوى: 10.13422 / j.cnki.syfjx.20211202

33. Hail N Jr، Cortes M، Drake EN، Spallholz JE. الوقاية الكيميائية من السرطان: منظور جذري. مجانا راديك بيول ميد. (2008) 45: 97-110. دوى: 10.1016 / j.freeradbiomed.2008.04.004

34. Jiang B، Zhao WT، Ouyang C، Wang HH، Zhang FQ، Zhao GH، et al. شبكة تنظيم التمثيل الغذائي الخلوي. J Xiamen Univ (Nat Sci). (2022) 61: 346–64.

35. Dragovic S ، Vermeulen NP ، Gerets HH ، Hewitt PG ، Ingelman-Sundberg M ، Park BK ، et al. الاختيار القائم على الأدلة لمركبات التدريب لاستخدامها في التنبؤ المتكامل القائم على الآلية لإصابة الكبد التي يسببها الدواء في الإنسان. قوس توكسيكول. (2016) 90: 2979-3003. دوى: 10.1007 / ث 00204-016-1845-1

36. دياز رويز آر ، ريجوليت إم ، ديفين أ. تأثيرات واربورغ وكرابتري: على أصل التمثيل الغذائي لطاقة الخلايا السرطانية وقمع الخميرة للجلوكوز. Biochim Biophys Acta. (2011) 1807: 568–76. دوى: 10.1016 / j.bbabio.2010.08.010

37. Warburg O. عن ضعف الجهاز التنفسي في الخلايا السرطانية. علوم. (1956) 124: 269 - 70. دوى: 10.1126 / العلوم .124.3215.269

38. Warburg O. حول أصل الخلايا السرطانية. علوم. (1956) 123: 309–14. دوى: 10.1126 / العلوم 123.3191.309

39. Zhang X ، Fryknäs M ، Hernlund E ، Fayad W ، De Milito A ، Olofsson MH ، et al. تحريض الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا كإستراتيجية لاستهداف الخلايا السرطانية في البيئات الميكروية المعرضة للأيض. نات كومون. (2014) 5:3295. دوى: 10.1038 / كومس 4295

40. Rios Garcia M ، Steinbauer B ، Srivastava K ، Singhal M ، Mattijssen F ، Maida A ، et al. تتحكم أستلة البروتين المعتمد على أسيتيل CoA 1- في ورم خبيث لسرطان الثدي وتكرار حدوثه. ميتاب الخلية. (2017) 26: 842-55. دوى: 10.1016 / j.cmet.2017.09.018

41. Yang E، Zha J، Jocker J، Boise LH، Thompson CB، Korsmeyer SJ. Bad ، وهو papartneror مغاير الشكل Bcl-XL و Bcl -2 ، يزيح Bax ويعزز موت الخلايا. خلية. (1995) 80: 285-91. دوى: 10.1016 / 0092-8674 (95) 90411-5

42. Liang K، Cao BZ. التقدم في موت الخلايا المبرمج لتنظيم الميتوكوندريا. بيوميد المهندس نوتر ميد. (2014) 18: 501-5. دوى: 10.13339 / j.cnki.002. sc.2014.05.049

For more information:1950477648nn@gmail.com