آثار السكريات على السلوك البيولوجي لخلية سرطان الرئة A549

الملخص: الهدف هو التحقيق في تأثيرCistanche عديد السكاريدعلى السلوك البيولوجي لخلية سرطان الرئة A549. الطريقة: تم تقسيم خلايا سرطان الرئة A549 إلى مجموعة تحكم.Cistanche عديد السكاريدمجموعة 100 ، 200 ، 400 نانوغرام / مل ، مجموعة si-NC ، مجموعة si-LINC01410 ،Cistanche عديد السكاريد400 نانوغرام / مل بالإضافة إلى PCDNA ،Cistanche عديد السكاريد400 نانوغرام / مل بالإضافة إلى مجموعة pcDNA- LINC01410. تم الكشف عن معدل تكاثر خلايا A549 بطريقة MTT ، وتم الكشف عن قدرة استنساخ خلايا A549 عن طريق مقايسة تكوين المستعمرة ، وتم اكتشاف 549 خلية عن طريق قياس التدفق الخلوي.

معدل موت الخلايا المبرمج ، تم استخدام طريقة Transwell لاكتشاف قدرة الهجرة والغزو لخلايا A549 ، واستخدمت طريقة RT-qPCR لاكتشاف التعبير عن LINC01410 mRNA في خلايا A549.

نتائج:Cistanche عديد السكاريديمكن أن يمنع تكاثر الخلايا A549 ، وتشكيل المستعمرة ، والهجرة ، والقدرة على الغزو ، تعبير LINC01410 mRNA (P<0.05), and="" promote="" cell="" apoptosis="" in="" a="" dose-dependent="" manner.="" after="" inhibiting="" the="" expression="" of="" linc01410,="" the="" growth,="" migration="" and="" invasion="" abilities="" of="" a549="" cells="" were="" inhibited=""><0.05). overexpression="" of="" linc01410="" could="" reverse="" the="" effects="" of="">Cistanche عديد السكاريدعلى تكاثر الخلايا A549 وموتها وهجرتها وغزوها. استنتاج:Cistanche عديد السكاريدقد يثبط نشاط خلايا سرطان الرئة وتشكيلها وهجرتها وقدرتها على الغزو وتعزيز موت الخلايا المبرمج عن طريق تقليل التعبير عن LINC01410.

الكلمات الدالة:Cistanche عديد السكاريد; خلية سرطان الرئة A549؛ LINC01410 ؛ الانتشار؛ موت الخلايا المبرمج

انقر هنا للحصول على عينة مجانية من Cistanche لـ

تقليل تلف الكبد

سرطان الرئة هو الورم الخبيث المصحوب بأول معدل مراضة ووفيات في بلدي. تشمل طرق علاج سرطان الرئة التحصين والجراحة والعلاج الكيميائي [1].

أظهرت الدراسات أن للطب الصيني التقليدي ومكوناته مزايا عظيمة في علاج سرطان الرئة ويمكن أن تحسن فعالية سرطان الرئة [2-3].سيستانشهي مادة طبية ثمينة في بلدي ، وتشمل مكوناتها الرئيسية جليكوسيدات كحول الفينيثيل الكلي ، والسكريات المتعددة ، والأيريويد ، والقلويدات ، والقشور. لقد وجدت الدراسات هذا المجموعغلوكوزيدات فينيلثيل من سيستانشيستطيعيقلل من تلف الكبد في الفئران الحاملة للورم H22 ويمنع نمو الورم[4]. Ergosteroside ، المكون النشط لـ Cistanche ، يمكن أن يمنع نمو الورم وتكاثر خلايا سرطان القولون والمستقيم في نموذج xenograft الفئران العارية ، والحث على موت الخلايا المبرمج [5].

Cistanche السكرياتقد يثبط سرطان الرئة لويس وخلايا ساركوما S180 عن طريق زيادة نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية والإنترلوكين 2 (IL -2).

ومع ذلك ، فإن الوظائف المحتملة وعمليات التكوُّن الحيوي والآليات الأساسية لـCistanche السكرياتفي سرطان الرئة يبقى غير واضح. أظهرت الدراسات أن lncRNAs غالبًا ما يتم تحريرها في سرطان الرئة وتلعب دورًا مهمًا في حدوث وتطور وعلاج سرطان الرئة [7]. يتم التعبير عن LINC01410 بشكل كبير في سرطان بطانة الرحم ويؤثر على تشخيص مرضى سرطان بطانة الرحم [8] ؛ يعزز LINC01410 الإفراط في التعبير تكوين الأوعية الدموية لسرطان المعدة والنقائل عن طريق تثبيط miR -532-5 p [9] ؛ تتكاثر خلايا سرطان الغدة الدرقية الحليمي وتهاجر وتغزو [10-11] ، في حين أن دور LINC01410 في سرطان الرئة غير واضح. كان الغرض من هذه التجربة هو دراسة آثارCistanche السكرياتو LINC01410 على النمط الظاهري الخبيث لخلايا سرطان الرئة ، وما إذا كان LINC01410 متورطًا في تنظيمCistanche السكرياتعلى السلوك البيولوجي الخبيث لخلايا سرطان الرئة ، من أجل توفير أساس لمزيد من البحث حولCistanche السكريات.

Cistanche السكريات

مادة عديد السكاريد Cistanche في دراسة علاج السرطان

تم شراء خلايا سرطان الرئة A549 من مجموعة الثقافة الأمريكية (ATCC).Cistanche عديد السكاريد(نقاء أكبر من أو يساوي 98 في المائة ، رقم المنتج D3281) تم شراؤه منWecistanche Bio-Tech Biotechnology Co.، Ltd.. تم شراء مصل الأبقار الجنينية من شركة Guangzhou Shuoheng Biotechnology Co.، Ltd.

تم شراء وسيط RPMI -1640 من Hangzhou Qiannuo Biotechnology Co.، Ltd .؛ تم شراء مجموعة MTT من Shanghai Meixuan Biotechnology Co.، Ltd. تم شراء غرفة Transwell و Matrigel من شركة Beijing Unicon Biotechnology Co.، Ltd. تم شراء مجموعة Apoptosis من شركة PromoCell الألمانية ؛ تم شراء مجموعة SYBRremix ExTaqTM من Shanghai Shanran Biotechnology Co.، Ltd.

طريقتان من السكريات Cistanche في دراسة علاج السرطان

2.1 ثقافة الخلية وتجميعها

تمت زراعة خلايا A549 في وسط RPMI -1640 يحتوي على 10 بالمائة من مصل بقري جنيني في حاضنة 37 درجة و 5 بالمائة CO2. تمت معالجة الخلايا في مرحلة النمو اللوغاريتميCistanche عديد السكاريدبتركيزات كتلة 100 و 200 و 400 نانوغرام / مل ، على التوالي ، ومسجلة على أنهاCistanche عديد السكاريدمجموعات 100 و 200 و 400 نانوغرام / مل ؛ كانت خلايا A549 التي لم يتم علاجها باستخدام عديد السكاريد Cistanche هي المجموعة الضابطة. تم نقل خلايا A549 باستخدام si-NC أو si-LINC0141 ، على التوالي ، يشار إليها على أنها مجموعة si-NC ، مجموعة si-LINC01410 ؛ تم نقل si-NC و si-LINC01410 إلى خلايا A549 وعولجت بـ 400 نانوغرام / ملCistanche عديد السكاريد، كما تدلسيستانش عديد السكاريد400 نانوغرام / مل بالإضافة إلى مجموعة PCDNA ،Cistanche عديد السكاريد400 نانوغرام / مل بالإضافة إلى مجموعة pcDNA-LINC01410.

2.2 الكشف عن طريقة MTT

معدل تكاثر الخلايا A549 تم علاج خلايا A549 باستخدامCistanche عديد السكاريدبتركيزات كتلة 50 ، 100 ، 150 ، 200 ، 250 ، 300 ، 350 ، و 400 نانوغرام / مل ، على التوالي. اجمع خلايا A549 في كل مجموعة وضعها في لوحة بئر 96- ، أضف 20 ميكرولتر من MTT لكل بئر ، واستمر في الثقافة في الحاضنة لمدة 4 ساعات ، وتجاهل المادة الطافية ، وأضف 150 ميكرولتر من DMSO لكل بئر ، ويكشف ضوء كل مجموعة من الخلايا بطول موجة 490 نانومتر. تم استخدام قيم الكثافة (OD) لحساب معدل تكاثر الخلايا.

زراعة Cistanche

2.3 فحص تكوين المستعمرة

A549 cell cloning ability Collect A549 cells in each group, adjust the density to 1 × 105 /mL, and inoculate 100 μL per well in a 6-well plate, incubate in an incubator until visible cell clones appear, wash 2 times with PBS, 4 % paraformaldehyde was fixed for 20 min, stained with 1% crystal violet solution for 15 min, observed under a light microscope, and the number of colonies (>تم تسجيل 50 خلية).

2.4 كشف التدفق الخلوي

تم جمع خلايا A549 معدل موت الخلايا المبرمج للخلايا A549 في كل مجموعة وتعليقها في 100 ميكرولتر من محلول ملحي مخزّن من الفوسفات (1 × 106 / مل) ، و 1 مل من تعليق الخلية ، وأضيف 10 ميكرولتر من الملحق V-FITC و 5 ميكرولتر في أنبوب الاختبار محمي من الضوء. بعد الحضانة لمدة 30 دقيقة ، تم جمع الخلايا وتحليلها عن طريق قياس التدفق الخلوي.

موت الخلايا المبرمج.

2.5 الكشف عن طريق طريقة Transwell

ترحيل الخلية A549 والقدرة على الغزو تم نشر معلقات الخلية A549 (2 × 1 0 4/200 ميكرولتر ، وسط خالٍ من المصل) لكل مجموعة بالتساوي في الغرفة العلوية لغرفة Transwell ، و 500 ميكرولتر RPMI {{ تمت إضافة 7}} وسط يحتوي على 10 بالمائة من FBS إلى الغرفة السفلية. تمت إزالة الخلايا الموجودة في الغرفة العلوية ، وتم إصلاح الخلايا الموجودة في الغرفة السفلية بنسبة 4 في المائة من بارافورمالدهيد وملطخة بنسبة 0.1 في المائة من الكريستال البنفسجي. لوحظت الخلايا تحت المجهر الضوئي ، وتم اختيار 5 مجالات رؤية بشكل عشوائي للعد. في تجربة غزو الخلية ، تم طلاء Matrigel مسبقًا في الغرفة العلوية لغرفة Transwell ، وكانت بقية الخطوات كما هي في تجربة الترحيل.

2.6 الكشف عن RT-qPCR

التعبير عن LINC 0 1410 mRNA في خلايا A549 تم استخراج Total RNA من الخلايا باستخدام كاشف TRIzol ، وتم تصنيع cDNA وفقًا لتعليمات مجموعة النسخ العكسي. كان نظام التفاعل 2 ميكرولتر من منتج النسخ العكسي ، و 10 ميكرولتر SYBR Green Mix ، و 0.5 ميكرولتر من البادئات الأمامية والخلفية ، و 7 ميكرولتر من الماء المعقم. كانت ظروف التفاعل 95 درجة لمدة 30 ثانية ، و 60 درجة لمدة 30 ثانية ، و 72 درجة لمدة 30 ثانية ، بإجمالي 40 دورة ؛ تم حساب التعبير النسبي لـ LINC01410mRNA بواسطة طريقة CT 2- مع GAPDH كمرجع داخلي. تسلسل التمهيدي هو LINC01410 forward 5'-TGACAAGAATGGCCCAAGC -3 '، عكس 5'-ACTGTGCACCTGTTACACCA -3' ؛ المرجع الداخلي GAPDH forward 5'-TGTTGCCATCAATCACCCCTT -3 '، reverse 5'-CTCCACGACGTACTC AGCG -3'.

2.7 التحليل الإحصائي

SPSS 2 0. تم ​​استخدام 0 برنامج للمعالجة ، وتم التعبير عن بيانات القياس كـ (x ± s) ، وتم استخدام اختبار t للعينات المستقلة للمقارنة بين مجموعتين ، وتم استخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه للمقارنة بين عدة المجموعات ، وتم استخدام اختبار LSD-t للمقارنة الزوجية بين المجموعات. ص<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">

مسحوق استخراج سيستانش

3 نتائج Cistanche السكريات في دراسة علاج السرطان

3.1 تأثيرCistanche عديد السكاريدحول تكاثر الخلايا A549 واستماتتها مقارنةً بمجموعة التحكم ، فإن معدل تكاثر خلايا A549 في كل مجموعة جرعة منCistanche عديد السكاريدزاد (ص<0.05), ic50="" was="" 319.8="" ng/ml,="" see="" table="" 1="" .="" compared="" with="" the="" control="" group,="" the="" proliferation="" rate="" of="" a549="" cells="" in="" the="" polysaccharide="" 100,="" 200,="" and="" 400="" ng/ml="" groups="" of="" cistanche="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05="" )="" ,="" the="" number="" of="" clones="" was="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05)="" ,="" and="" the="" apoptosis="" rate="" was="" increased="" (="" p="" <="" 0="" ).="" .05)="" ,="" in="" a="" dose-dependent="">

3.2 تأثيرCistanche عديد السكاريدعلى قدرة الهجرة والغزو لخلايا A549 مقارنة بمجموعة التحكم ، فإن عدد خلايا A549 في كل مجموعة جرعة منCistanche عديد السكاريدانخفض (ص<0.05) in="" a="" dose-dependent="" manner,="" as="" shown="" in="" figure="" 2,="" table="">

3.3 تأثيرCistanche عديد السكاريدعلى التعبير عن LINC01410 mRNA في خلايا A549 مقارنة بمجموعة التحكم ، فإن التعبير عن LINC01410 mRNA في خلايا A549 في كل مجموعة جرعة منCistanche عديد السكاريدانخفض (P ＜ 0. 05) بطريقة تعتمد على الجرعة.