آثار توقيت استئصال الكلية المقابل والحالات الإقفارية على تليف الكلى بعد إصابة إعادة ضخ الدم بنقص تروية الكلى من جانب واحد Ⅱ

نتائج

البروتوكول 1: آثار الفاصل الزمني بين استئصال الكلية المقابل وUIRI على انتقال AKI CKD انخفض معدل البقاء على قيد الحياة مع تمديد الفاصل الزمني بين استئصال الكلية المقابل وIRI

كما هو مذكور في التجربة 1، تم تحديد المدة الإقفارية عند 24 دقيقة مع درجة حرارة الجسم الأساسية البالغة 37 درجة مئوية في uIRI. نلاحظ تأثير توقيت استئصال الكلية المقابل بعد uIRI على بقاء الفئران. أظهرت البيانات أنه في مجموعة اليوم السابع (تم استئصال الكلى السليمة المقابلة بعد 7 أيام من uIRI)، نجت جميع الفئران الثمانية. بالنسبة لمجموعة اليوم العاشر، توفي فأر واحد في اليوم التالي لاستئصال الكلية المقابل، بمعدل البقاء على قيد الحياة 87.5%. بالنسبة لمجموعة اليوم 14، مات فأر واحد في اليوم الأول بعد استئصال الكلية المقابل، وتوفي فأران بعد يومين من استئصال الكلية المقابل، بمعدل البقاء على قيد الحياة 62.5%. أشارت هذه النتائج إلى أن معدل البقاء على قيد الحياة لدى الفئران انخفض تدريجياً مع تمديد استئصال الكلية المقابل عندما تم إصلاح العوامل المؤثرة الأخرى (الشكل 2 (أ)).

انقر هنا للحصول على التركيبة العشبية سيستانش للكلى

انخفضت وظائف الكلى مع تمديد الفترة الفاصلة بين استئصال الكلية المقابل وUIRI

بالمقارنة مع التحكم الوهمي، كان SCr وBUN أعلى بكثير في جميع الفئران بعد استئصال الكلية المقابل (p < {{0}}.05)، مما يشير إلى أنهم جميعًا عانوا من تلف الكلى. وعلاوة على ذلك، زادت مستويات SCr وBUN مع تمديد الفاصل الزمني بين استئصال الكلية المقابل وuIRI (P <0.05) (الشكل 2 (ب، ج))

تفاقمت الإصابة النسيجية في الكلى مع تمديد الفترة الفاصلة بين استئصال الكلية المقابل وUIRI

أظهر تلطيخ HE أن أنسجة الكلى في المجموعة الوهمية كانت طبيعية من الناحية الهيكلية بعد 8 أسابيع من uIRI. في جميع مجموعات uIRI، تم اكتشاف العديد من التغيرات المرضية بعد AKI في الكلى (الشكل 3 (أ))، بما في ذلك درجات مختلفة من تنكس الخلايا الظهارية الأنبوبية، وانفصال حدود الفرشاة، ونخر التفكك البؤري، وتوسع بعض التجويف الأنبوبي، والكلى. وذمة الخلايا الظهارية الأنبوبية مع شكل متغير. علاوة على ذلك، كانت بعض الكبيبات مجعدة ومتصلبة، مع تضخم خلايا مسراق الكبيبة وتوسع محفظة بومان. كما شوهد تسلل الخلايا الالتهابية في الخلالي الكلوي. كانت درجات الإصابة المرضية الأنبوبية والكبيبية للكلية المصابة أعلى من الشامة (p < 0.05)، مما يشير إلى أن uIRI مع استئصال الكلية المقابل ألحق أضرارًا كبيرة بالكلى. زادت درجات الإصابة المرضية في الكلى مع تمديد استئصال الكلية المقابل (P <0.05) (الشكل 3 (ب، ج)). تشير هذه النتائج إلى أن عمر السد المرضي للكلى زاد تدريجياً مع تمديد استئصال الكلية المقابل بعد uIRI.

الشكل 2. آثار الفترات الزمنية بين استئصال الكلية المقابل وإصابة ضخه بنقص التروية من جانب واحد (uIRI) على معدل البقاء على قيد الحياة ووظائف الكلى. تم إخضاع الكلية اليسرى لـ IRI في اليوم 0، وتم إجراء استئصال الكلية اليمنى في نقاط زمنية مختلفة (اليوم 7، اليوم 10، واليوم 14) مع تحديد المدة الإقفارية عند 24 دقيقة مع درجة حرارة الجسم الأساسية ثابتة عند 37 درجة مئوية خلال نقص تروية الكلى. (أ): تم تسجيل بقاء الفئران في كل مجموعة وعرضها كنسبة مئوية. (B وC): تم تقدير وظائف الكلى عن طريق الكرياتينين في الدم (SCr)، ونيتروجين اليوريا في الدم (BUN). ن ¼ 5–8/مجموعة. ف <0.05.

الشكل 3. آثار الفترات الزمنية بين استئصال الكلية المقابل وإصابة ضخه بنقص التروية من جانب واحد (uIRI) على الإصابة النسيجية في الكلى. تم إخضاع الكلية اليسرى إلى IRI في اليوم 0، وتم إجراء استئصال الكلية اليمنى في نقاط زمنية مختلفة (اليوم 7، اليوم 10، واليوم 14) مع تحديد المدة الإقفارية عند 24 دقيقة مع درجة حرارة الجسم الأساسية ثابتة عند 37 درجة مئوية خلال نقص تروية الكلى. تم تحديد الإصابة النسيجية في الكلى عن طريق تلطيخ الهيماتوكسيلين يوزين (HE). (أ): تلطيخ تمثيلي للكلية المصابة، والذي أظهر السمات النسيجية المرضية النموذجية للتغيرات المرضية بعد التهاب المفاصل الروماتويدي، بما في ذلك درجات مختلفة من تنكس الخلايا الظهارية الأنبوبية، وانفصال حدود الفرشاة، ونخر التفكك البؤري، وتوسع بعض التجويف الأنبوبي (# )، وذمة الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية مع شكل متغير، وتسلل الخلايا الالتهابية (٪). كانت بعض الكبيبات مجعدة ومتصلبة، مع تضخم في خلايا مسراق الكبيبات (&) ومحفظة بومان متوسعة (التكبير 400). (ب): شبه الكمي للإصابة الأنبوبية. (ج): شبه الكمي للإصابة الكبيبي. ن ¼ 5–8/مجموعة. ف <0.05.

تفاقم تليف الكلى مع تمديد الفترة الفاصلة بين استئصال الكلية المقابل ووزن الكلى uIRI.

عادة ما يتميز التحول من AKI إلى CKD بتليف الكلى [19] وانخفاض وزن الكلى هو مؤشر عيانية لتليف الكلى [2]. لذلك قمنا بقياس وزن الكلى (وزن الكلى عند الأطفال معايرته بوزن الجسم) للتحقيق الأولي في تأثير الفترات الزمنية بين uIRI واستئصال الكلية المقابل المتأخر على انتقال AKI-CKD. بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، أظهرت جميع مجموعات uIRI انخفاضًا كبيرًا في وزن الكلى (p <0.05)، مما يشير إلى أن جميع الفئران في مجموعات uIRI مصابة بتليف الكلى. تغير الفرق في وزن الكلى بشكل ملحوظ عندما كان الفارق في الفاصل الزمني بين استئصال الكلية المقابل وUIRI 3 أيام، وانخفض وزن الكلى تدريجيا مع زيادة الفاصل الزمني (الشكل 4 (أ)).

صبغة ماسون ثلاثية الألوان.

تم إجراء تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان لمزيد من مراقبة تأثير الفواصل الزمنية بين استئصال الكلية المقابل وuIRI على تليف الكلى. لم يُلاحظ أي تليف خلالي كبير في الكلى في المجموعة الوهمية بينما لوحظت درجات متفاوتة من التغيرات الليفية في الكلى لجميع مجموعات uIRI في 8 أسابيع بعد uIRI (الشكل 4 (ب)). أظهر التحليل شبه الكمي للمنطقة الليفية أن المنطقة الليفية في الكلى في مجموعات uIRI زادت بشكل ملحوظ مقارنة بتلك الموجودة في المجموعة الوهمية (p < 0.05)، مما يشير إلى أن تم تنفيذ نموذج الانتقال AKI CKD بنجاح. علاوة على ذلك، مع تأخير استئصال الكلية المقابل، أصبح تليف الكلى شديدًا بشكل متزايد (P <0.05)، مما يشير إلى أن درجة تليف الكلى تغيرت بشكل ملحوظ عندما كان الفاصل الزمني بين استئصال الكلية المقابل وUIRI 3 أيام. مع الفاصل الزمني الطويل بين استئصال الكلية المقابل وUIRI، أصبحت درجة تليف الكلى أكثر تفاقما (الشكل 4 (C)).

الشكل 4. آثار الفترات الزمنية بين استئصال الكلية المقابل وإصابة ضخه نقص التروية من جانب واحد (uIRI) على تليف الكلى. تم إخضاع الكلية اليسرى لـ IRI في اليوم 0، وتم إجراء استئصال الكلية اليمنى في نقاط زمنية مختلفة (اليوم 7، اليوم 10، واليوم 14) مع تحديد المدة الإقفارية عند 24 دقيقة مع درجة حرارة الجسم الأساسية ثابتة عند 37 درجة مئوية خلال نقص تروية الكلى. تم تقييم تليف الكلى عن طريق وزن الكلى، وتلطيخ ماسون ثلاثي الألوان، وفيبرونكتين (FN)، والكولاجين I (COL-I)، وتعبيرات أكتين العضلات الملساء (a-SMA). (أ): وزن الكلى إلى وزن الجسم. (ب): تلطيخ الممثل ماسون ثلاثي الألوان للكلية المصابة، والذي أظهر نموذجية للتغيرات الليفية (٪) (التكبير، 200). (ج): القياس شبه الكمي للمنطقة الليفية التي اكتشفها تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان. (د): تحليلات RT-PCR الكمية للتعبير FN في الكلى. (E): تحليلات RT-PCR الكمية للتعبير COL-I في الكلى. (F): صور لطخة غربية تمثيلية لـ FN وCOL-I وa-SMA. (G): مخطط شريطي يوضح تعبير بروتين FN الذي تم تطبيعه بواسطة b-actin. (H): مخطط شريطي يوضح تعبير البروتين COL-I الذي تم تطبيعه بواسطة b-actin. I: مخطط شريطي يوضح تعبير بروتين a-SMA الذي تم تطبيعه بواسطة b-actin. ن ¼ 5–8/مجموعة. ف <0.05.

تراكم المصفوفة خارج الخلية (ECM).

يتميز التليف الخلالي الكلوي بترسب ECM [2]، مثل FN وCOL-I، في المنطقة الخلالية للكلية. أظهر تحليل اللطخة الغربية وRT-PCR أن تعبيرات FN وCOL-I في الكلى زادت بشكل ملحوظ في جميع مجموعات uIRI مقارنة بالمجموعة الوهمية (p < 0.05)، مما يشير إلى أن جميع الأطفال خضعوا لتغيرات تليفية. كانت مستويات التعبير عن FN وCOL-I في الكلى أعلى مع تأخير استئصال الكلية المقابل (P <0.05) (الشكل 4 (D – H)).

الخلايا الليفية العضلية في الكلى.

يتميز تليف الكلى بتراكم الخلايا الليفية العضلية وإنتاج ECM اللاحق [20}. تم استخدام a-SMA للكشف عن كمية الخلايا الليفية العضلية بعد 8 أسابيع من IRI. أظهر تحليل اللطخة الغربية أن التعبير عن α-SMA في أنسجة الكلى زاد بشكل ملحوظ في جميع مجموعات uIRI مقارنة بالمجموعة الوهمية (p <0.05)، مما يشير إلى أن الخلايا الليفية العضلية كانت أكثر وضوحًا في الكلى لجميع المصابين. الفئران. كان التعبير عن α-SMA أعلى مع تأخير استئصال الكلى المقابل (P <0.05) (الشكل 4 (F، I)). أظهرت هذه النتائج أن الخلايا الليفية العضلية في أنسجة الكلى uIRI تغيرت بشكل ملحوظ في الأيام الثلاثة بين uIRI واستئصال الكلية الجانبي المقابل وأن الخلايا الليفية العضلية زادت تدريجياً مع فترات زمنية أطول.

البروتوكول 2: آثار درجات حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية على انتقال AKI-CKD

انخفض معدل البقاء على قيد الحياة مع زيادة درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية

كما هو مذكور في التجربة 2، من أجل دراسة تأثير درجات حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية على انتقال AKI-CKD، تم تحديد مدة نقص التروية عند 24 دقيقة وتمت إزالة الكلية السليمة المقابلة بعد 14 يومًا من uIRI. أظهرت البيانات أنه في المجموعة 36 درجة مئوية (تم التحكم في درجة حرارة الجسم الأساسية للفئران أثناء نقص التروية عند 36 درجة مئوية)، توفي فأر واحد في اليوم الأول بعد استئصال الكلية المقابل، وكان معدل البقاء على قيد الحياة 87.5٪. بالنسبة لمجموعة 36.5 درجة مئوية، مات اثنان من الفئران في أول يومين بعد استئصال الكلية المقابل، مع معدل البقاء على قيد الحياة بنسبة 75%. بالمقارنة مع المجموعة 36.5 درجة مئوية، توفي فأر آخر في اليوم الثاني بعد استئصال الكلية المقابل بمعدل بقاء 62.5% في المجموعة 37 درجة مئوية. في المجموعة 37.5 درجة مئوية، باستثناء الفئران الثلاثة التي ماتت في أول يومين بعد استئصال الكلية المقابل، مات فأر واحد بعد 3 أيام من استئصال الكلية المقابل، بمعدل البقاء على قيد الحياة 50٪. بالإضافة إلى ما حدث في مجموعة 37.5 درجة مئوية، توفي فأر واحد بعد 5 أيام من استئصال الكلية الجانبي المقابل في مجموعة 38 درجة مئوية، وكان معدل البقاء على قيد الحياة 37.5%. أشارت هذه النتائج إلى أن معدل البقاء على قيد الحياة لدى الفئران انخفض تدريجياً مع زيادة درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية (الشكل 5 (أ)).

انخفضت وظائف الكلى مع زيادة درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية

بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، أدى uIRI إلى زيادة كبيرة في SCr وBUN في جميع مجموعات uIRI (p < {{0}}.05)، مما يشير إلى أن جميع الفئران في مجموعات uIRI تتطور ضعف الكلى بعد استئصال الكلية المقابل. أظهرت المقارنات بين مجموعتين مع درجات حرارة متجاورة أن SCr وBUN لدى الفئران زاد مع زيادة قدرها 0.5 درجة مئوية في درجة حرارة الجسم الإقفارية، ولكن لم يكن هناك فرق إحصائي (p > 0.05) مما يشير إلى وجود تغييرات أقل وضوحًا في وظائف الكلى مع اختلاف في درجة الحرارة الأساسية بمقدار 0.5 درجة مئوية أثناء نقص التروية. ومع ذلك، زاد SCr وBUN بشكل ملحوظ عندما زادت درجة حرارة الجسم الأساسية بمقدار 1 درجة مئوية أو أعلى أثناء نقص التروية (P <0.05)، مما يشير إلى أن وظيفة الكلى تغيرت بشكل ملحوظ مع اختلاف 1 درجة مئوية في درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية. انخفضت وظائف الكلى بشكل ملحوظ مع زيادة درجة حرارة الجسم الإقفارية (الشكل 5 (ب، ج)).

تفاقمت إصابة أنسجة الكلى مع زيادة درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية

وفقا لتلطيخ سعادة، كان هيكل أنسجة الكلى للفئران في المجموعة الشامية طبيعيا. وقد لوحظت التغيرات المرضية الناجمة عن IRI في جميع مجموعات المستخدمين، مثل درجات مختلفة من انحطاط الخلايا الظهارية الأنبوبية، وانفصال حدود الفرشاة، ونخر تكامل القرص البؤري، وتوسع بعض التجويف الأنبوبي، وذمة الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية مع شكل متغير، أيضًا كما الكبيبات التجاعيد والمتصلبة، وتضخم خلايا مسراق الكبيبة وكبسولة بومان المتوسعة، تسلل الخلايا الالتهابية في الخلالي الكلى (الشكل 6 (أ)).

أظهرت نتائج الإصابة المرضية لأنابيب الكلى والكبيبات أنه بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، كانت الإصابة المرضية للكلى في جميع مجموعات uIRI أكثر خطورة (p < {{0}}.05 ) ، مما يشير إلى أن الإصابة المرضية الواضحة للكلية ظهرت في جميع مجموعات uIRI وأن نموذج AKI-CKD قد تم تطويره بنجاح. أظهرت المقارنة بين مجموعتين لهما درجات حرارة متجاورة أن هناك زيادة في درجات الإصابة المرضية في الكلى مع زيادة بمقدار 0.5 درجة مئوية في درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية، ولكن ليس لها دلالة إحصائية (p > 0.05)، في حين أن الكلى زادت الإصابة المرضية بشكل ملحوظ مع زيادة درجة حرارة الجسم الأساسية بمقدار 1 درجة مئوية وما فوق أثناء نقص التروية (P <0.05) (الشكل 6 (ب، ج)). أشارت هذه النتائج إلى أن الضرر النسيجي المرضي للكلية تغير بشكل ملحوظ مع اختلاف درجة حرارة الجسم الأساسية بمقدار 1 درجة مئوية أثناء نقص التروية وازداد تدريجيًا مع زيادة درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية.

يتفاقم تليف الكلى مع زيادة درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص تروية وزن الكلى.

بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، تسبب uIRI في انخفاض كبير في وزن الكلى في جميع مجموعات uIRI، كما طورت الفئران ذات درجات حرارة الجسم الإقفارية المختلفة درجات مختلفة من تليف الكلى. أظهرت المقارنات بين مجموعتين لهما درجات حرارة متجاورة أن الانخفاض في وزن الكلى لم يكن له فرق كبير عندما زادت درجة حرارة الجسم الأساسية بمقدار {{0}}.5 درجة مئوية أثناء نقص التروية (p > 0.{{ 7}}5)، مما يشير إلى أن الفرق بمقدار 0.5 درجة مئوية في درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية لم يكن له تأثير كبير على تغير وزن الكلى. عندما كانت درجة حرارة الجسم الأساسية خلال الفترة الإقفارية فرقًا بمقدار 1 درجة مئوية، تغير وزن الكلى بشكل ملحوظ (P <0.05)، وانخفض تدريجيًا مع زيادة درجة حرارة الجسم الإقفارية (الشكل 7 (أ)).

الشكل 7. آثار درجات حرارة الجسم الأساسية خلال نقص التروية على تليف الكلى في الفئران مع uIRI وتأخر استئصال الكلية المقابل. تم إخضاع الكلية اليسرى إلى IRI في اليوم 0، وتم إجراء استئصال الكلية اليمنى تحت درجات حرارة مختلفة للجسم (36 درجة مئوية، 36.5 درجة مئوية، 37 درجة مئوية، 37.5 درجة مئوية، و 38 درجة مئوية) مع الزمن الإقفاري لليسار تم تثبيت الكلية عند 24 دقيقة، وتمت إزالة الكلية اليمنى بعد 14 يومًا من إجراء IRI للكلية اليسرى. تم تقييم تليف الكلى عن طريق وزن الكلى، وتلطيخ ماسون ثلاثي الألوان، وفيبرونكتين (FN)، والكولاجين I (COL-I) وتعبيرات أكتين العضلات الملساء (a-SMA). (أ): وزن الكلى إلى وزن الجسم. (ب): تلطيخ الممثل ماسون ثلاثي الألوان للكلية المصابة، والذي أظهر نموذجية للتغيرات الليفية (٪) (التكبير، 200 ). (ج): القياس شبه الكمي للمنطقة الليفية التي اكتشفها تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان. (د): تحليلات RT-PCR الكمية للتعبير FN في الكلى. (E): تحليلات RT-PCR الكمية للتعبير COL-I في الكلى. (F): صور لطخة غربية تمثيلية لـ FN وCOL-I وa-SMA. (G): مخطط شريطي يوضح تعبير بروتين FN الذي تم تطبيعه بواسطة b-actin. (H): مخطط شريطي يوضح تعبير البروتين COL-I الذي تم تطبيعه بواسطة b-actin. (I): مخطط شريطي يوضح تعبير البروتين a-SMA الذي تم تطبيعه بواسطة b-actin. ن ¼ 3–7/مجموعة. ف <0.05. NS: غير مهم.

صبغة ماسون ثلاثية الألوان.

في 8 أسابيع بعد uIRI، أظهرت نتائج تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان أنه بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، زادت المنطقة الليفية لأنسجة الكلى في جميع مجموعات uIRI بشكل ملحوظ (p < 0.05)، مما يشير إلى أن حدثت نتائج متليفة في جميع مجموعات uIRI. أظهرت المقارنات بين مجموعتين لهما درجات حرارة متجاورة أن مساحة تليف الكلى زادت ولكن بدون دلالة إحصائية عندما زادت درجة حرارة الجسم الأساسية بمقدار 0.5 درجة مئوية أثناء نقص التروية (p > 0.{{10} }5)، مما يشير إلى أن الفرق بمقدار 0.5 درجة مئوية في درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية لم يكن له تأثير كبير على تليف الكلى. لكل زيادة بمقدار درجة مئوية واحدة في درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية، تزيد منطقة التليف الخلالي الكلوي بشكل ملحوظ (P <0.05)، مما يشير إلى أن الزيادة بمقدار درجة مئوية واحدة في درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية كان لها تأثير كبير على التليف الخلالي الكلوي وتليف الكلى. تفاقمت تدريجيا مع الزيادة في درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية (الشكل 7 (ب، ج)).

ECM في أنسجة الكلى. أظهرت البيانات أنه بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، زادت تعبيرات FN وCOL-I في أنسجة الكلى لجميع مجموعات uIRI بشكل ملحوظ (p < 0.05)، وهو ما كان متسقًا مع نتائج تلطيخ ماسون. أظهرت المقارنات بين مجموعتين لهما درجات حرارة متجاورة أن تعبيرات FN وCOL-I في أنسجة الكلى زادت بمقدار 0.5 درجة مئوية في درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية، ولكن لم يكن هناك فرق ذو دلالة إحصائية (p > {{8 }}.05)، مما يشير إلى أن الفرق بمقدار 0.5 درجة مئوية في درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية لم يكن له تأثير كبير على ترسب ECM، في حين زاد التعبير عن FN وCOL-I بشكل ملحوظ مع زيادة بمقدار 1 درجة مئوية في درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية (P <0.05)، وكانت لديهم زيادة أكثر وضوحًا مع زيادة درجة حرارة الجسم. في الختام، زاد ترسب ECM أو النتيجة الليفية في أنسجة الكلى مع ارتفاع درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية (الشكل 7 (D – H)).

الخلايا الليفية العضلية في أنسجة الكلى.

بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، زادت تعبيرات α-SMA في أنسجة الكلى لجميع مجموعات uIRI بشكل ملحوظ (p < 0.05)، مما يشير إلى أن الخلايا الليفية العضلية زادت بشكل ملحوظ في جميع مجموعات uIRI . أظهرت المقارنات بين مجموعتين لهما درجات حرارة متجاورة أن التعبير عن A-SMA في الكلى زاد عندما زادت درجة حرارة الجسم الأساسية بمقدار 0.5 درجة مئوية أثناء نقص التروية، ولكن لم يكن هناك فرق كبير (p > 0 .05)، مما يشير إلى أن الفرق بمقدار 0.5 درجة مئوية في درجة حرارة الجسم الإقفارية لم يكن له تأثير كبير على التغيرات في الخلايا الليفية العضلية في الكلى. علاوة على ذلك، زاد تعبير α-SMA في أنسجة الكلى بشكل ملحوظ مع زيادة درجة حرارة الجسم الإقفارية بمقدار 1 درجة مئوية، وكانت زيادة تعبير α-SMA أكثر أهمية مع زيادة درجة حرارة الجسم (P <0.05)، مما يشير إلى أن الخلايا الليفية العضلية تغيرت بشكل ملحوظ عندما كان الفرق في درجة حرارة الجسم الأساسية أثناء نقص التروية 1 درجة مئوية أو أكثر. جنبا إلى جنب مع الزيادة في درجة حرارة الجسم الأساسية خلال نقص التروية، تم زيادة الخلايا الليفية العضلية في أنسجة الكلى تدريجيا (الشكل 7 (F، I)).

البروتوكول 3: تأثيرات الفترات الإقفارية على انتقال AKI-CKD

انخفض معدل البقاء على قيد الحياة مع زيادة مدة نقص تروية الدم. كما هو مذكور في التجربة 3، من أجل دراسة تأثير فترات نقص تروية الدم على انتقال AKI-CKD، تم تثبيت درجة حرارة الجسم الإقفارية عند 37 درجة مئوية خلال uIRI، وتمت إزالة الكلية المقابلة 14 أيام بعد uIRI. أظهرت النتائج أنه في المجموعة التي مدتها 21 دقيقة (كانت المدة الإقفارية 21 دقيقة)، مات فأر واحد لمدة يوم واحد ويومين بعد إزالة الكلية المقابلة على التوالي، مع معدل بقاء على قيد الحياة قدره 75%، وتوفي فأر آخر بعد يومين من استئصال الكلية المقابلة. في مجموعة الـ 24 دقيقة، بمعدل البقاء على قيد الحياة 62.5%. في المجموعة الدقيقة 27-، مات أربعة فئران، وفأران، وفأر واحد، وفأر واحد في يوم واحد، و3 أيام، و5 أيام، و7 أيام، على التوالي، بعد استئصال الكلية المقابل، وكان معدل البقاء على قيد الحياة {{ 18}}%. وبالمثل، مات خمسة فئران وفأران وفأر واحد في يوم واحد ويومين و3 أيام بعد استئصال الكلية المقابل في المجموعة الدقيقة 30-، وكان معدل البقاء على قيد الحياة 0%. يشير هذا إلى أن معدل البقاء على قيد الحياة انخفض مع زيادة مدة نقص التروية، حيث ماتت جميع الفئران في مجموعة 27 دقيقة ومجموعة 30- دقيقة 7 أيام و3 أيام، على التوالي، بعد استئصال الكلية المقابل (الشكل 8 (أ)).

انخفضت وظائف الكلى مع مدة نقص التروية الأطول

أظهرت البيانات أنه بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، أظهرت كل من المجموعة 21 دقيقة والمجموعات 24 دقيقة زيادة كبيرة في SCr وBUN (p < 0.05)، مما يشير إلى انخفاض وظائف الكلى. بالمقارنة مع مجموعة 21 دقيقة، أظهرت مجموعة 24 دقيقة زيادة أكثر وضوحًا في SCr وBUN (P <0.05)، مما يشير إلى أن وظيفة الكلى تغيرت بشكل ملحوظ مع اختلاف 3 دقائق في مدة نقص التروية وانخفاض أكثر وضوحًا في وظائف الكلى. يمكن رؤيته مع المدة الإقفارية الأطول (الشكل 8 (ب، ج)).

الشكل 8. آثار فترات نقص التروية على معدل البقاء على قيد الحياة ووظائف الكلى في الفئران مع uIRI وتأخر استئصال الكلية المقابل. تم إخضاع الكلية اليسرى لـ IRI في اليوم 0، وتم إجراء استئصال الكلية اليمنى على فترات إقفارية مختلفة (21 دقيقة، 24 دقيقة، 27 دقيقة، و30 دقيقة) مع تثبيت درجة حرارة الجسم الأساسية عند 37 درجة مئوية أثناء نقص تروية الكلى، وتمت إزالة الكلية اليمنى بعد 14 يومًا من إجراء IRI للكلية اليسرى. (أ): تم تسجيل بقاء الفئران في كل مجموعة وعرضها كنسبة مئوية. (B وC): تم تقدير وظائف الكلى عن طريق الكرياتينين في الدم (SCr)، ونيتروجين اليوريا في الدم (BUN). ن ¼ 5–6/ مجموعة. ف <0.05.

تفاقم الضرر النسيجي في الكلى مع مدة نقص التروية الأطول

وفقا لتلطيخ سعادة، كان هيكل أنسجة الكلى للفئران في المجموعة الشامية طبيعيا. بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، كانت لدى مجموعة 21 دقيقة ومجموعة 24 دقيقة تغيرات مرضية بدرجات متفاوتة، بما في ذلك تنكس فراغ الخلايا الظهارية الأنبوبية، وانفصال حدود الفرشاة، ونخر التفكك البؤري، وتوسع بعض التجويف الأنبوبي، وذمة الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية مع شكل متغير. ، الكبيبات المتجعدة والمتصلبة، تضخم خلايا مسراق الكبيبة وكبسولة بومان المتوسعة، وتسلل الخلايا الالتهابية في الخلالي (الشكل 9 (أ)). كانت درجات الإصابة المرضية لأنابيب الكلى والكبيبات أعلى بكثير في كل من المجموعتين 21 دقيقة و 24 دقيقة مقارنة بالمجموعة الوهمية (p < 0.05)، مما يشير إلى أن إصابة مرضية كبيرة في الكلى تطورت في كلا مجموعتي المستخدمين. علاوة على ذلك، كان لدى مجموعة الـ 24 دقيقة درجات إصابة مرضية أعلى في الكلى وإصابة مرضية أكثر خطورة مقارنة بالمجموعة التي مدتها 21 دقيقة (P <0.05) (الشكل 9 (ب، ج))، مما يشير إلى أن إصابة الكلى المرضية كانت لها تغييرات كبيرة مع 3 فرق دقيق في المدة الإقفارية. كلما طالت مدة نقص التروية، كلما زاد الضرر المرضي للكلى

تفاقم تليف الكلى مع طول مدة نقص التروية. وزن الكلى.

بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، أظهرت كلا المجموعتين 21 دقيقة و24 دقيقة انخفاضًا ملحوظًا في وزن الكلى (p < 0.05)، وكان لدى المجموعة 24 دقيقة انخفاضًا أكثر وضوحًا في وزن الكلى مقارنة بالمجموعة 21 دقيقة (P <0.05). تشير هذه إلى أن اختلافًا دقيقًا 3- في المدة الإقفارية أدى إلى تغير كبير في وزن الكلى، ويمكن رؤية انخفاض أكثر وضوحًا في وزن الكلى مع مدة إقفارية أطول (الشكل 10 (أ)).

صبغة ماسون ثلاثية الألوان. أظهر تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان والقياس شبه الكمي لتحليل المنطقة الليفية أنه لم يكن هناك تغير ليفي خلالي كبير في المجموعة الوهمية، في حين شوهدت درجات مختلفة من التغيرات الليفية في الخلالي الكلوي في كل من المجموعتين 21 دقيقة و 24 دقيقة (p < { {3}}.05). بالمقارنة مع مجموعة 21 دقيقة، كان لدى مجموعة 24 دقيقة درجة تليف أعلى في أنسجة الكلى (P <0.05)، مما يشير إلى أن تليف الكلى تغير بشكل ملحوظ مع اختلاف 3 دقائق في المدة الإقفارية وأن تليف الكلى الأكثر شدة سيصبح مع إقفاري أطول المدة (الشكل 10 (ب، ج)).

ECM في أنسجة الكلى. أظهر تحليل اللطخة الغربية وRT-PCR أنه بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، زادت تعبيرات FN وCOL-I بشكل ملحوظ في كل من المجموعتين 21 دقيقة و24 دقيقة (p < 0.05) ، مما يشير إلى أن ECM الناجم عن IRI زاد بشكل ملحوظ في مجموعات uIRI، وخضعت الكلى لتقدم ليفي كبير. بالمقارنة مع مجموعة 21 دقيقة، كانت تعبيرات FN وCOL-I أكثر وضوحًا في أنسجة الكلى في مجموعة 24 دقيقة (P <0.05)، مما يشير إلى أن ترسب ECM في أنسجة الكلى تغير بشكل ملحوظ مع اختلاف 3 دقائق في زادت المدة الإقفارية، وترسب ECM مع المدة الإقفارية الطويلة (الشكل 10 (D – H)).

الخلايا الليفية العضلية في أنسجة الكلى. أظهر تحليل اللطخة الغربية أنه بالمقارنة مع المجموعة الوهمية، زاد التعبير عن α-SMA للكلية في المجموعتين 21 دقيقة و24 دقيقة بشكل ملحوظ (p < 0.05)، مما يشير إلى أن الخلايا الليفية العضلية كان هناك زيادة كبيرة في الكلى في مجموعات uIRI، وحدث تقدم ليفي كبير. زاد التعبير عن A-SMA بشكل ملحوظ مع زيادة 3 دقائق في المدة الإقفارية (P <0.05)، وتم العثور على المزيد من الخلايا الليفية العضلية مع مدة إقفارية طويلة (الشكل 10 (F، I)).

الشكل 9. آثار فترات نقص التروية على إصابة الكلى النسيجية في الفئران مع uIRI وتأخر استئصال الكلية المقابل. تم إخضاع الكلية اليسرى لـ IRI في اليوم 0، وتم إجراء استئصال الكلية اليمنى على فترات إقفارية مختلفة (21 دقيقة، 24 دقيقة، 27 دقيقة، و30 دقيقة) مع تثبيت درجة حرارة الجسم الأساسية عند 37 درجة مئوية أثناء نقص تروية الكلى، وتمت إزالة الكلية اليمنى بعد 14 يومًا من إجراء IRI للكلية اليسرى. تم تحديد الإصابة النسيجية في الكلى عن طريق تلطيخ الهيماتوكسيلين يوزين (HE). (أ): تلطيخ تمثيلي للكلية المصابة، والذي أظهر السمات النسيجية المرضية النموذجية للتغيرات المرضية بعد التهاب المفاصل الروماتويدي، بما في ذلك درجات مختلفة من تنكس الخلايا الظهارية الأنبوبية، وانفصال حدود الفرشاة، ونخر التفكك البؤري، وتوسع بعض التجويف الأنبوبي (# )، وذمة الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية مع شكل متغير، وتسلل الخلايا الالتهابية (٪). كانت بعض الكبيبات مجعدة ومتصلبة، مع تضخم في خلايا مسراق الكبيبات (&) ومحفظة بومان متوسعة (التكبير 400). (ب): شبه الكمي للإصابة tubulointerstitial. (ج): شبه الكمي للإصابة الكبيبي. ن ¼ 5–6/مجموعة. ف <0.05.

الخدمة الداعمة لشركة Wecistanche - أكبر مصدر للسيستانش في الصين:

البريد الإلكتروني:wallence.suen@wecistanche.com

واتساب/هاتف:+86 15292862950

تسوق لمزيد من تفاصيل المواصفات:

https٪3a٪2f٪2fwww.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop

انقر هنا للحصول على مستخلص سيستانش عضوي طبيعي يحتوي على 25% من الإكيناكوسيد و9% أكتيوسايد للكلى