تأثير أربعة مستخلصات عشبية صينية على خلايا سرطان الرئة الصغيرة الحساسة للأدوية والمقاومة للأدوية المتعددة

ديفيد سادافاجولي اهن مي زان مي لين بانغجين دينغسوزان إي كين

الغرض المجرد:قمنا بفحص علم الأدوية وبيولوجيا الخلية والبيولوجيا الجزيئية لخلايا سرطان الرئة صغيرة الخلايا التي تم علاجها بأربعة مقتطفات منالأدوية العشبية الصينية. يتناول العديد من مرضى السرطان هذه الأدوية ، لكن آثارها على المستوى الخلوي غير معروفة إلى حد كبير. لقد كنا مهتمين بشكل خاص بالتأثيرات على الخلايا المقاومة للأدوية ، حيث أن المقاومة مشكلة سريرية مهمة فييمكن أن الرئةص. الطريقة: تم تعريض الخلايا الحساسة للأدوية (H69) والمقاومة للأدوية المتعددة (H69VP) والخلايا الظهارية الرئوية الطبيعية (BEAS -2) لمستخلصات من نباتين مستخدمين في طب الأعشاب الصيني من أجلسرطان الرئة: Glycyrrhiza Glabra (Glyc) و Olenandria -dist usa (OLEN) ، ومستخلصات من مجموعتين متاحين تجاريا منالأدوية العشبية الصينية، SPES (15 نوعًا من الأعشاب) و PC-SPES (8 أعشاب). تم قياس السمية الخلوية من حيث تثبيط نمو الخلايا (IC50). تم قياس حركية تفتيت الحمض النووي بعد التعرض للمستخلصات العشبية عن طريق وضع العلامات على BudR متبوعًا بـ ELISA. تم قياس موت الخلايا المبرمج بواسطة اختبار TUNEL متبوعًا بقياس التدفق الخلوي. تم قياس التعبير عن الجينات المرتبطة بموت الخلايا المبرمج ودورة الخلية عن طريق النسخ العكسي لـ mRNA متبوعًا بتهجين lter إلى صفائف من المسابير والكشف عن طريق التلألؤ الكيميائي. النتائج: في كل حالة ، كانت المستخلصات العشبية الأربعة سامة للخلايا لـ H69 و H69VP وأقل سمية للخلايا لـ BEAS -2. جميع المقتطفات الأربعة تسببت في تفتيت الحمض النووي في خلايا سرطان الرئة. أظهرت الخواص الحركية شظايا الحمض النووي التي تم إطلاقها إلى الوسط (مؤشر على النخر) في الثقافات المعرضة لـ GLYC ، ولكن داخل الخلايا (مؤشر على موت الخلايا المبرمج) في الثقافات المعرضة لـ OLEN و SPES و PC-SPES. أكد تحليل TUNEL أن التعرض للمستخلصات الثلاثة الأخيرة ، ولكن ليس GLYC ، أدى إلى موت الخلايا المبرمج. مقارنة بالخلايا غير المعالجة والمعالجة بـ GLYC ، أظهرت خلايا H69 و H69VP المعالجة بـ OLEN و SPES و PC-SPES تعبيرًا مرتفعًا عن عدد من الجينات المشاركة في سلسلة موت الخلايا المبرمج ، على غرار الخلايا المعالجة بالإيتوبوسيد والفينكريستين.

استنتاج:الطب عشبي صينيمقتطفات OLEN و SPES و PC-SPES سامة للخلايا لكل من مقاومة الأدوية والحساسة للأدويةسرطان الرئةتُظهر بعض الخلايا السرطانية في المدينة مقارنةً بتأثيرها على الخلايا الطبيعية ، وهي proapoptotic كما تقاس بفواصل الحمض النووي والتعبير الجيني. كان تفاعل الخلايا السرطانية تجاه هذه المستخلصات مشابهًا لتفاعلها مع أدوية العلاج الكيميائي التقليدية.

سيستانش، ثمينطب عشبي صيني، له تأثير في تعزيز المناعة وسرطان الرئة. Cistanche له تاريخ طويل في الاستخدام الطبي. تم تسجيله لأول مرة في "Shen Nong's Materia Medica". تذوق Shennong جميع أنواع الأعشاب. إن فعالية ودور Cistanche مهمان في تنشيط الكلى وتغذية الجوهر ، وتخفيف التعب ، وترطيب الأمعاء والتغوط ، وتغذية اليانغ وتغذية الين ، وما إلى ذلك ، لذلك تم تسجيله في الكتاب. خلال فترة ما بعد عهد أسرة تانغ ، تم إدراج Cistanche كواحد من تسعة أنواع من العشب الخيالي الصيني. تم إجراء الأبحاث الحديثة حوله لأكثر من 60 عامًا. ، مضاد للشيخوخة ، يساعد على تقوية الذاكرة والمناعة ، إلخ.

الكلمات الدالة:سرطان الرئةمقاومة الأدويةالأدوية العشبية الصينية,cistanche

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com

مقدمة

خلية صغيرةسرطان الرئة(SCLC) يمثل حوالي 20 في المائة من الجميعسرطانات الرئةوهو عدواني ، حيث يقل معدل البقاء على قيد الحياة لمدة 5- سنة عند التشخيص عن 10 بالمائة [19]. يصاب المرضى عادةً بمرض منتشر ، ولذلك يتم العلاج عن طريق العلاج الكيميائي ، مع توليفات تشتمل عادةً على سيسبلاتين ، إيتوبوسيد ، دوكسوروبيسين ، 5- يورويوراسيل ، وتاكسول [12]. لسوء الحظ ، يصبح هذا العلاج غير فعال في النهاية لأن معظم أورام SCLC تطور مقاومة للأدوية المتعددة [18]. نظرًا لوجود العديد من آليات المقاومة [15] ، فإن التغلب على المقاومة يمثل تحديًا سريريًا كبيرًا.

في مواجهة الرعاية التلطيفية ، يستخدم العديد من مرضى السرطان الأدوية البديلة ، بما في ذلك العلاجات العشبية [6 ، 23]. من بين هذه العلاجات ، ربما يكون الطب الصيني التقليدي هو الأفضل والأكثر ترميزًا ، حيث يعود تاريخه إلى عدة آلاف من السنين. يتعلق الأساس النظري لهذا النظام الطبي بالقوى المتعارضة من الين واليانغ ، والدورات التوليدية والمدمرة ، وقوة الحياة ، أو qi [2]. تم ابتكار مستخلصات وتركيبات عشبية محددة لعلاج أمراض معينة بما في ذلك السرطانات [11 ، 27]. على الرغم من وجود بعض الأدلة التجريبية على أن الأعشاب فعالة في علاج السرطان ، إلا أن آليات عملها على المستوى الخلوي غير معروفة إلى حد كبير. يكتسب هذا أهمية إضافية إذا كان المرضى يجمعون بين استخدامهم والعلاج الكيميائي التقليدي. أيضًا ، لم يتم الإبلاغ عن تأثيرات المستخلصات العشبية على مقاومة الأدوية.

لقد بحثنا في آثار أربعةالأدوية العشبية الصينيةعلى ثلاثة خطوط خلوية: SCLC ، SCLC المقاوم للأدوية المتعددة ، وظهارة الرئة الطبيعية. كان اثنان من المستخلصات الأربعة من نباتات مفردة غالبًا ما توصف لسرطان الرئة ، Glycyrrhiza glabra (GLYC) و Olenandria Dif- fusa (OLEN). أما النوعان الآخران فكانا من مجموعات أعشاب متاحة تجارياً تسمى SPES و PC-SPES. OLEN (الاسم الصيني Bai Hua she cao) له أنشطة مضادة للأورام ومضادة للطفرات ومحفزات للمناعة [1 ، 25 ، 29]. GLYC (الاسم الصيني gan car) هو مضاد للأورام ومضاد للأورام ومضاد للطفرات [7 ، 11]. تم تطوير SPES بواسطة BotanicLabs (بريا ، كاليفورنيا) ، على شكل كبسولات تحتوي على مستخلصات مجففة بالتجميد من 15 عشبًا صينيًا وقد ثبت أنها تقلل الألم لدى مرضى السرطانات المتقدمة [14]. من بين الأعشاب الموجودة في SPES المنشطات المناعيةسيستانشDeserticola ، والعامل المضاد للورم Rabdosia rubescens ، والعامل المضاد للالتهابات Zanthoxylum iridium [1 ، 11]. يحتوي PC-SPES ، الذي أعدته BotanicLabs أيضًا ، على ثمانية أعشاب ، بما في ذلك Serenoa repens المضاد للأندروجين الذي يثبط تضخم البروستاتا [21] ، ومانع بروتين كيناز C Scutellaria baicalensis [13] ، والعامل المضاد للأورام Panax ginseng [30] ، و Glycyrrhiza glabra ( أنظر فوق). في حين أن الأدلة الصارمة على الفعالية السريرية المضادة للورم لـ GLYC و OLEN و SPES غير متوفرة ، إلا أن هناك بعض الأدلة على فعالية PC-SPES. في كل من خلايا سرطان البروستاتا والنماذج الحيوانية ، يعتبر PC-SPES مضادًا للخلايا وخطيرًا للخلايا [8 ، 9 ، 10 ، 28]. أشارت التجارب السريرية إلى أنها فعالة في خفض مستويات مستضد البروستاتا النوعي وفي وقف نمو الورم في كل من سرطان البروستاتا المعتمد على الأندروجين والمستقل عن الأندروجين [4 ، 5 ، 17 ، 20 ، 26].

على الرغم من أن مرضى السرطان يستخدمون بلا شك المستخلصات العشبية ، إلا أن هناك القليل من البيانات قبل السريرية أو السريرية حول تأثيرات هذه المستخلصات على SCLC. كان هدفنا أن نبدأ هذا التحليل بفحص علم العقاقير (السمية الخلوية) ، وبيولوجيا الخلية (طريقة موت الخلية) ، والبيولوجيا الجزيئية (التعبير الجيني) في خلايا SCLC الحساسة للأدوية والمقاومة للأدوية.

المواد والأساليب

المستخلصات والمواد الكيميائية

تم الحصول على GLYC و OLEN كنباتات مجففة من مجموعة جين أون الطبية (مونتيري بارك ، كاليفورنيا). لتحضير المستخلص ، 0. تم ​​طحن 5 جم إلى مسحوق واحد باستخدام ملاط ​​ومدقة وعلق في 3 0 مل من الماء المقطر. في الطب الصيني ، يتم استهلاك المستخلصات النباتية كشاي بعد التسخين. لذلك ، تم تحضين المعلق مع الرج عند 70 درجة لمدة 18 ساعة. بعد الطرد المركزي عند 1500 جم لمدة 10 دقائق ، تم تعقيم المادة الطافية بالترشيح من خلال 0. 45- متر مكعب باستخدام حقنة. تم تعديل المستخلص الناتج بالماء المقطر إلى 17 مجم / مل بناءً على المادة النباتية الأصلية. تم تخزين المستخلصات عند 4 درجات لمدة تصل إلى أسبوع واحد حتى الاستخدام.

تم الحصول على SPES و PC-SPES من BotanicLabs (بري ، كاليفورنيا) على شكل كبسولات. تم استخدام طريقة الاستخلاص المستخدمة في الدراسات السابقة لهذه المستحضرات [8 ، 9 ، 10]. تمت إذابة محتويات كبسولة واحدة (320 مجم) في 1 مل من الإيثانول بنسبة 95٪ وتم تحضين المعلق مع الرج عند 37 درجة لمدة ساعة واحدة. بعد الطرد المركزي عند 3000 جم لمدة 10 دقائق ، تم تعقيم المادة الطافية بالترشيح على النحو الوارد أعلاه. كان تركيز النيتروجين 300 مجم / مل بناءً على المادة النباتية الأصلية. تم تخزين المستخلصات في درجة حرارة -20 درجة لمدة تصل إلى أسبوع واحد حتى الاستخدام.

الثقافات الخلوية وقياس السمية الخلوية

نمت خلايا NCI-H69 SCLC عند 37 درجة في جو يحتوي على 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون كتعليق في وسط خالٍ من المصل AIM-V (Life Technologies ، Grand Island ، NY). تم أيضًا تطوير خط خلية مقاوم للأدوية المتعددة (H69VP) تم اختياره في إيتوبوسيد [16] في AIM-V وأظهر مقاومة متصالبة للإيتوبوسيد (9- طية) ودوكسوروبيسين (20- طية) وفينكريستين (10- أضعاف) (البيانات غير معروضة). تحتوي هذه الخلايا على آليات متعددة لمقاومة الأدوية ، بما في ذلك التعديلات في توبويزوميراز II والتعبير عن مضخات الغشاء ، MDR1 و MRP. تمت زراعة BEAS -2 من الخلايا الظهارية الرئوية الطبيعية [22] في DMEM-F12 مدعومًا بمصل بقري جنيني بنسبة 10 بالمائة.

لاختبار السمية الخلوية ، تمت إضافة المستخلصات كما هو محدد للخلايا النامية لوغاريتميًا في 1- مزارع تحتوي على 6000 خلية / مل. بعد 4 أيام من التعرض المستمر ، تم حساب الخلايا في عداد Coulter Z -1. تم التحقق من صحة التعدادات مجهريًا عن طريق مقياس الهيموسيتومتر بعد تلطيخها باستخدام أزرق تريبان. أجريت جميع التجارب في ثلاث نسخ وتكررت ثلاث مرات على الأقل. تم حساب قيم IC50 ، التي تم تحديدها على أنها تركيز المستخلص الذي قلل من عدد الخلايا في اليوم الرابع بنسبة 50 بالمائة ، مقارنةً بضوابط المذيبات. تم حساب القيم المتوسطة ومقارنتها بواسطة ANOVA لخطوط الخلايا الثلاثة لهذا المستخلص.

فحوصات موت الخلية

تم التحقيق في آلية السمية الخلوية بواسطة حركية تفتيت الحمض النووي الخلوي (مجموعة Boehringer-Mannheim ، إنديانابوليس ، إنديانا). تم تحضين بري ، 5 · 105 خلية / مل لمدة 16 ساعة عند 37 درجة في جو يحتوي على 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون في وسط AIM-V يحتوي على 10 ملي مولار برعم. تم غسل الخلايا وإعادة تعليقها عند 105 / مل في وسط خالٍ من بودر ، وتم تحضين 200 لتر من هذه المزرعة بمستخلص عشبي عند 2 درجة مئوية في الوقت المحدد ، وبعد ذلك تمت إزالة 100 لتر من وسط المزرعة لتقدير الحمض النووي. شظايا بواسطة ELISA. هذا مقياس لنخر الخلية. تم قياس شظايا الحمض النووي داخل الخلايا ، الناتجة عن موت الخلايا المبرمج ، بعد تحلل الخلايا في ألبومين مصل الأبقار (BSA) / توين 20 عند درجة 21 لمدة 30 دقيقة. بعد الطرد المركزي ، تم استخدام المحللة لـ ELISA.

تم إجراء ELISA في لوحة ميكروترية مستديرة القاع مغلفة بجسم مضاد للحمض النووي (DNA أحادي النسيلة مضاد للفأر ، استنساخ MCA -33) طوال الليل عند 4 درجات. بعد الحجب باستخدام BSA ، تمت إضافة 100 ليرة لبنانية من محلول جزء من الحمض النووي إلى الآبار المطلية متبوعة بالحضانة لمدة 90 دقيقة عند 21 درجة. تم تشديد الحمض النووي وتحريفه عن طريق تشعيع الميكروويف عند 500 واط لمدة 5 دقائق. تمت إضافة الفأر المضاد للبراعم (BMG 6HB أحادي النسيلة للفأر) المترافق مع البيروكسيداز ، وبعد الحضانة في الظلام لمدة 120 دقيقة عند 21 درجة ، تم إيقاف التفاعل بإضافة 500 لتر مركز H2SO4. تم تقدير اللون الناتج عن طريق الامتصاص عند 450 نانومتر. تمت مقارنة العينات المعالجة بالاستخراج بالضوابط غير المعالجة كخلفية.

تم تأكيد موت الخلايا المبرمج من خلال تحليل TUNEL. تم تعريض الخلايا التي تنمو لوغاريتميًا لمستخلص عشبي عند 1 · IC5 0 لمدة 3 ساعات. تم غسلها بعد ذلك مرتين في محلول ملحي بالفوسفات يحتوي على 1٪ من مساحة سطح الجسم وتم تعليقها في PBS / BSA عند 5 · 1 0 5 خلايا / مل. إلى 500 خلية ليرة لبنانية ، تمت إضافة 100 ليرة لبنانية 4 في المائة بارافورمالدهيد وتم تشديد الخلايا عند 21 درجة لمدة ساعة واحدة. بعد الغسيل في برنامج تلفزيوني ، تم تعليق الخلايا في 100 لتر نفاذية باردة (0.1 بالمائة تريتون X -100 ، 0.1 بالمائة سيترات الصوديوم) لمدة دقيقتين عند 4 درجات. تم غسل الخلايا مرتين في برنامج تلفزيوني ثم إعادة تعليقها في خليط تونيل 50 LL الذي يحتوي على ترانسفيز deoxyribonucleotide الطرفي (TDT) و uorescein-dutp (مجموعة Boehringer- Mannheim). بعد الحضانة في الظلام عند 37 درجة لمدة ساعة واحدة ، تمت مواجهة الخلايا باستخدام يوديد البروبيديوم وتحليلها بواسطة قياس التدفق الخلوي.

تحليل التعبير الجيني

تم تحضين الثقافات (6 مل) من الخلايا النامية لوغاريتميًا (5 · 1 0 5 خلايا / مل) في وسط يحتوي على مستخلص عشبي عند 1 درجة مئوية عند 37 درجة في جو يحتوي على 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون لمدة 3 ساعات. بعد الغسل مرتين في برنامج تلفزيوني ، تم تجميد كريات الخلايا عند درجة 70- تحت الليل. تم عزل الحمض النووي الريبي بواسطة بروتوكول RNeasy Mini (Qiagen ، فالنسيا ، كاليفورنيا). بشكل عام ، أنتجت هذه الطريقة 0.5 LG RNA. تم نسخ هذه الكمية من الحمض النووي الريبي إلى cDNA وتم تصنيفها باستخدام biotin-dUTP ، وتم تهجينها إلى تحقيقات مشوهة إلى الجينات المرتبطة بموت الخلايا المبرمج ودورة الخلية على المرشحات. تم الكشف عن التهجين عن طريق ربط الفوسفاتيز القلوي-ستيبتيدين إلى [كدنا] باستخدام الركيزة الكيميائية ، نجم CDP (Superar-Ray ، Bethesda ، MD.) ، تليها التعرض للأشعة السينية ، عمومًا لمدة 1-2 دقيقة.

تضمنت أهداف جينات التحكم في كل مرشح b-actin و GAP-DH كعناصر تحكم إيجابية ، و pUC18 كعنصر تحكم سلبي. كانت الجينات المرتبطة بدورة الخلية والاستماتة التالية أهدافًا للتهجين: bad، bcl -2، BCL-w، BCL-x، caspases 1–10، c-myc، E2F، fas، fas ligand، gadd45، iNOS و mdm2 و NFkB و p21Waf1 و p53 و pig7 و pig8 و Rb و DR5 و trail و Casper و CRADD و DAXX و IAP -1 و IAP -2 و NIK و TNFR2 و TRAF2 و TRAF3 و TRAF5 و DR5. الكثافةمن التهجين تم تسجيله بصريًا في مواضع مكررة ترادفية على المرشح فيما يتعلق بعناصر التحكم الإيجابية.

نتائج

اختبرت تجاربنا الأولية السمية الخلوية لمستخلصات الأعشاب الصينية على خلايا SCLC الحساسة للأدوية والمقاومة للأدوية ، وكذلك الخلايا الظهارية الرئوية الطبيعية. كما هو مبين في الجدول 1 ، كانت المستخلصات العشبية الأربعة سامة للخلايا بتركيزات منخفضة. هذه النتائج مشابهة لتلك الموجودة في SPES و PC-SPES في خطوط الخلايا السرطانية الأخرى [8]. في كل حالة ، لم تكن قيم IC للخلايا المقاومة للأدوية المتعددة (H69VP) مختلفة عن تلك الخاصة بالخلايا الحساسة للأدوية (H69). أيضًا ، كانت قيم IC للخلايا الطلائية الرئوية الطبيعية أعلى بشكل ملحوظ من تلك الخاصة بخطوط الخلايا السرطانية.

قمنا بعد ذلك بالتحقيق في آلية السمية الخلوية باستخدام حركية تفتيت الحمض النووي كمؤشر على موت الخلايا المبرمج (شظايا تتشكل ببطء داخل الخلايا) أو نخر (شظايا تتشكل بسرعة وتتحرر من الخلايا التالفة). تم تحضين الخلايا في مستخلص عشبي لمدة تتراوح بين 30 دقيقة و 8 ساعات ، ثم تم تقدير شظايا الحمض النووي بواسطة ELISA في كل من وسط الثقافة ومحلول الخلية. يوضح الشكل 1 البيانات التمثيلية لخلايا H69 المعرضة للمقتطفات الأربعة لمدة 90 دقيقة. مع ثلاثة من المقتطفات (SPES ، PC-SPES ، OLEN) ، جاءت معظم شظايا الحمض النووي من داخل الخلايا (lysates) ، مما يشير إلى موت الخلايا المبرمج. ومع ذلك ، مع GLYC ، تم إطلاق الشظايا إلى الوسط من الخلايا التالفة ، مما يشير إلى النخر. تم الحصول على نتائج مماثلة باستخدام خلايا H69VP (البيانات غير معروضة).

أعقب تجارب السمية الخلوية هذه فحوصات TUNEL لكسر الحمض النووي في الموقع. مقارنةً بالضوابط غير المعالجة (1-3 بالمائة من الخلايا المبرمج في أربع تجارب) ، أظهرت خلايا SCLC المعالجة بـ SPES (58-85 بالمائة) ، PC-SPES (63-77 بالمائة) و ​​OLEN (49-81 بالمائة) إيجابية TUNEL ، بينما الخلايا المعالجة بـ GLYC لم تكن (1-2 بالمائة) (الشكل 2). تم الحصول على نتائج مماثلة مع خلايا H69VP (البيانات غير معروضة).

قمنا بتحليل النسخ الجيني استجابةً للمستخلصات العشبية باستخدام GeneArrays. تحتوي هذه المصفوفات على جينات مرتبة بشكل مترادف مرتبطة بدورة الخلية وموت الخلايا المبرمج. أجرينا هذه التجارب مرتين بنتائج مماثلة. يوضح الشكل 3 مخططات أرايتورا التمثيلية لخلايا H69 المعرضة لإيتوبوسيد أو سبيس. تم تلخيص نتائجنا الخاصة بخلايا H69 في الجدول 2. بينما كان لدى عناصر التحكم غير المعالجة تعبير قابل للاكتشاف فقط لعدد قليل من الجينات التي تمت دراستها ، أظهرت الخلايا المعالجة بأدوية العلاج الكيميائي التقليدية (إيتوبوسيد وفينكريستين) إشارات قوية لعدد من الجينات المشاركة في دورة الخلية التنظيم والاستماتة. أظهرت الخلايا المعالجة بـ OLEN و SPES و PC-SPES نمطًا مشابهًا لتلك التي تم الحصول عليها بالعقارين. بشكل عام ، لا يبدو أن الخلايا المعالجة بـ GLYC تظهر نمط النسخ هذا ، وبدلاً من ذلك أظهرت تعبيرًا قويًا عن الجين المضاد للخلايا ، BCL -2.

مناقشة

لقد أجرينا هذه الدراسات لسببين. أولاً ، هناك تقليد قديم لطب الأعشاب الصيني يقوم على نظرياته وفلسفته الخاصة [2] ، وأردنا أن نبدأ في فهم آثار العلاجات العشبية بالمصطلحات الطبية الغربية. تُستخدم هذه الأعشاب كمخاليط ، وبينما كان هناك بعض التقدم في تقسيمها إلى مكونات كيميائية فردية [11] ، ركزت دراساتنا عليها لأنها تُستخدم في الممارسة التقليدية. كان الدافع الثاني هو أن العديد من مرضى السرطان يستخدمون هذه الأعشاب جنبًا إلى جنب مع العلاجات التقليدية [6 ، 23] ، ويمكن أن يوفر فهم التأثيرات الخلوية للأعشاب معلومات مهمة لاتخاذ القرارات السريرية.

أظهرت بيانات السمية الخلوية (الجدول 1) أن المستخلصات العشبية الأربعة كانت بالفعل سامة للخلايا للخلايا السرطانية ، على أساس الجرعات أكثر من الخلايا الظهارية الرئوية العادية ، مما يشير إلى بعض خصوصية الورم وربما مؤشر علاجي مفضل. تشير أوجه التشابه في IC50 بين الخلايا الحساسة للأدوية والخلايا المقاومة للأدوية المتعددة إلى أن هذه المستخلصات لا تتأثر بآليات مقاومة الأدوية المعروضة في خلايا H69VP ، ​​بما في ذلك الإفراط في التعبير عن اثنين من ناقلات الأدوية ، MDR1 و MRP.

أظهرت حركية تجزئة الحمض النووي أن المقتطفات SPES و PC-SPES و OLEN كانت بروبوبوتيك ، بينما كان GLYC مثيرًا للشهوة الجنسية (الشكل 1). تم تأكيد ذلك عن طريق تلطيخ TUNEL في الموقع (الشكل 2). معظم عقاقير العلاج الكيميائي التقليدية هي proapoptotic [3] ، ويتم تنظيم مجموعة من الجينات المنظمة لموت الخلايا المبرمج ودورة الخلية في الخلايا استجابة للعقاقير [24]. وجدنا أن نمط التعبير عن بعض الجينات المعبر عنها استجابةً للتطبيق المحترف الثلاثة للمستخلصات العشبية كان مشابهًا للنمط الذي لوحظ في هذه الخلايا بعد التعرض لأدوية العلاج الكيميائي التقليدية (الشكل 3 ، الجدول 2). بدت الاستجابة لـ GLYC وحدها مختلفة ، على الأقل في النقطة الزمنية التي تم تحليلها في هذه التجارب. ومن المثير للاهتمام ، أن GLYC هو جزء من PC SPES ، والذي كان proapoptotic ، في حين أن GLYC وحده لم يكن كذلك. ربما تكون المكونات الأخرى لـ PC-SPES مسؤولة عن نشاطها الاستباقي. في حين أن هذه النتائج لا تظهر كيف تسببت المستخلصات العشبية في تلف الخلايا ، إلا أنها تشير إلى أن خلايا H69 تستجيب للضرر في المستويات الجزيئية (النسخ) والخلوية (موت الخلايا المبرمج) بطريقة مشابهة لاستجابتها للعلاج الكيميائي.

تشير دراساتنا إلى الفائدة المحتملة لهذه المستخلصات العشبية الصينية في علاج SCLC ، وخاصة الأمراض المقاومة للأدوية.

شكر وتقديرنشكر L. Brown للمساعدة التي لا تقدر بثمن مع زميل القياس الخلوي و R. Lingeman للمساعدة في بروتوكولات البيولوجيا الجزيئية. تم توفير خلايا BEAS -2 بسخاء من قبل الدكتور I. Laird-Offringa ، جامعة SouthernCalifornia ، مركز نوريس للسرطان. كانت SPES و PC-SPES هدية من الدكتور S. Chen ، كلية الطب بنيويورك. تم دعم هذا البحث من قبل مؤسسة عائلة بريتزكر ومؤسسة WM Keck.

يمكن لـ Cistanche كدواء عشبي صيني تحسين المناعة ومحاربة السرطان ، انقر هنا لمعرفة المزيد

مراجع

1. Boik J (1996) السرطان والطب الطبيعي: كتاب مدرسي للعلوم الأساسية والبحوث السريرية. مطبعة أوريغون الطبية ، برينستون ، ص 221

2. Chan K (1995) التقدم في الطب الصيني التقليدي. اتجاهات علم فارماكول 16: 182-187

3. Chu E، DeVita V Jr (2001) مبادئ إدارة السرطان: العلاج الكيميائي. في: DeVita V Jr و Hellman S و Rosenberg SA (محرران) السرطان: مبادئ وممارسات علم الأورام. ليبينكوت ويليامز وويلكينز ، فيلادلفيا ، ص 289-306

4. De la Taille A ، Hayek OR ، Buttyan R ، Bagiella E ، Burchart M ، Katz AE (1999) تأثيرات عامل العلاج النباتي ، PC-SPES ، على سرطان البروستاتا. BJU Int 84: 845–850

5. DiPaola RS، Zhang H، Lambert G، Meeker R، Licitra E، Rafi M، Spaulding H، Goodin S، Toledano M، Gallo M (1998) النشاط السريري والبيولوجي لمزيج من الأعشاب الإستروجينية (PC-SPES) في البروستاتا سرطان. New Engl J Med 339: 785-791

6. Eisenberg DM ، Davis RB ، Ettner SL (1998) الاتجاهات في استخدام الطب البديل في الولايات المتحدة: 1990-1997: نتائج مسح وطني للمتابعة. جاما 280: 1569-1575

7. Fenwick GR ، Lutomski J ، Nieman C (1990) Glycyrrhiza glabra: التركيب والاستخدامات والتحليل. الغذاء كيم 38: 119-143

8. Halicka HD ، Ardelt B ، Juan G ، Mittleman A ، Chen S ، Traganos F ، Darzynkiewicz Z (1997) تأثيرات موت الخلايا المبرمج ودورة الخلية الناتجة عن مقتطفات من المستحضر العشبي الصيني PC-SPES. Int J Oncol 11: 437-448

9. Hsieh T، Chen SS، Wang X، Wu J (1997) تنظيم مستقبل الأندروجين وتعبير مستضد البروستاتا النوعي في خلايا LNCaP للبروستاتا المستجيبة للأندروجين عن طريق المستخلصات الإيثانولية من المستحضر العشبي الصيني PC-SPES. Biochem Mol Biol Int 42: 535-544

10. Hsieh T، Ng C، Chang، C، Chen SS، Mittleman، A، Wu J (1998) تحريض موت الخلايا المبرمج والتنظيم السفلي لـ BCL -6 في خلايا موتو المعالجة بالمستخلصات الإيثانولية للمكملات العشبية الصينية الكمبيوتر الشخصي SPES. Int J Oncol 13: 1199-1202

11. Huang KC (1999) علم الأدوية للأعشاب الصينية ، 2^{اختصار الثاني}إدن. مطبعة CRC ، بوكا راتون

12. Kalemkerian GP، Worden FP (2000) التطورات العلاجية في SCLC. Expert Opin Invest Drugs 9: 65-79

13. Kimura Y، Okuda H، Yokio K، Matsushita N (1997) تأثيرات البايكالين المعزولة من Scutellaria baicalensis على منشط بلازمينوجين الأنسجة الناجم عن interleukin 1b و TNF ومثبط منشط البلازمينوجين -1 في إنتاج الخلايا البطانية للوريد السري المستنبت . Phytother Res 11: 363–367

14. لين سي (1996) ملاحظة حول الاستخدام المشترك للعلاج الكيميائي والطب الصيني التقليدي لتخفيف آلام السرطان. جي تريدت تشين ميد 16: 267-269

15. Mattern J ، Volm M (1995) آليات المقاومة في سرطان الرئة البشري. غزو ​​ورم خبيث 15: 81-94

16. ميناتو ك ، كانزاوا ف ، نيشيو ك ، ناكاجاوا ك ، فوجيوارا واي ، سايجو إن (1990) توصيف خط سرطان الرئة ذو الخلايا الصغيرة البشرية المقاوم للإيتوبوسيد. فارماكول الكيميائي للسرطان 26: 313-327

17. Moyad MA ، Pienta KJ ، Montie JE (1999) استخدام PC-SPES ، وهو مكمل متوفر تجاريًا لسرطان البروستاتا ، في مريض مصاب بمرض الهرمون الساذج. طب المسالك البولية 54: 319-324

18. Nishio K ، Nakamura T ، Koh Y ، Suzuki H ، Fukumoto N ، Saijo N (1999) مقاومة الأدوية في سرطان الرئة. العملة المفتوحة Oncol 11: 109-115

19. Pass H ، Mitchell JB ، Johnson DH ، Turrisi AT ، Minna J (2000) سرطان الرئة: المبادئ والممارسات. ليبينكوت ، فيلادلفيا

20. Pfeifer BL ، Pirani JF ، Hamann SR ، Klippel KF (2000) PC SPES: مكمل غذائي لعلاج سرطان البروستاتا الهرموني. BJU Int 85: 481-485