فعالية وآليات مركب ألياف أنجليكا سينينسيس سيستانش لتخفيف الإمساك

خلاصة:إمساكهو مرض منتشر قد يؤثر بشكل كبير على نوعية حياة الناس ويزيد من مخاطر الأمراض المرتبطة به. في هذه الدراسة، تم إنشاء نموذج للإمساك المزمن للفئران باستخدام لوبراميد هيدروكلوريد. تم تعقيم الفئران بمركب ألياف أنجليكا سينينسيس سيستانش، المكون من دانغ غوي [أنجليكا سينينسيس (أوليف) ديلز]،رو كونغ رونغ (Cistanche deserticolaY.C.Ma)، وألياف القمح، والزيلان منخفض الوزن الجزيئي بجرعة عالية (3.6 جم · كجم -1، 3 0 أضعاف الجرعة البشرية الموصى بها) وجرعة منخفضة (0.6 جم · كجم {{8} }، 5 مرات الجرعة البشرية الموصى بها) لمدة 14 يومًا. قامت الدراسة بتقييم الفعالية العلاجية للمركب من خلال مراقبة شكل البراز، وقياس محتوى الماء، وإجراء تجارب حركية الأمعاء الدقيقة. علاوة على ذلك، تم إجراء مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لتقييم مستويات مصل الهرمونات المعدية المعوية بما في ذلك الموتيلين (MTL)، الجاسترين (GAS)، وعوامل الالتهاب إنترلوكين -1 (IL-1)، وعامل نخر الورم. - (تنف-). تم استخدام الفحص النسيجي المرضي مع تلطيخ H&E لتقييم تلف أنسجة القولون. بالإضافة إلى ذلك، تم إجراء تجارب اللطخة الغربية والكيمياء المناعية لفحص مستويات التعبير عن aquaporin -3 (AQP3) وc-Kit في القولون. أشارت النتائج إلى أن مركب ألياف السيستانش Angelica sinensis يمكنه تحسين شكل البراز، وزيادة محتوى الماء في البراز، وتعزيز معدلات العبور المعوي الصغير في الفئران. بالإضافة إلى ذلك، كان هناك ارتفاع كبير في مستويات مصل الهرمونات الهضمية وانخفاض ملحوظ في مستويات عوامل الالتهاب. كان التحسن في الضرر النسيجي المرضي القولوني مصحوبًا بانخفاض ملحوظ في التعبير عن بروتين قناة الماء القولوني AQP3 وزيادة كبيرة في تعبير c-Kit. تشير هذه النتائج بشكل جماعي إلى وجود علاقة بين الجرعة والاستجابة. تشير هذه النتائج إلى أن مركب ألياف Angelicasinensis Cistanche يخفف بشكل فعال من الإمساك لدى الفئران. يرتبط تأثيره بتنظيم تعبير بروتين قناة الماء القولوني AQP3 وc-Kit، إلى جانب تعديل عوامل الالتهاب في المصل وهرمونات الجهاز الهضمي. تمت الموافقة على هذه التجربة من قبل لجنة أخلاقيات التجارب على الحيوانات بجامعة جينان.

الكلمات الدالة:إمساك; تزييت الأمعاء وتخفيف الإمساك. الأغذية الوظيفية؛ القولون. الطب الصيني التقليدي

ما هي المدة التي يستغرقها عمل سيستانشي؟

إمساكهوأمراض الجهاز الهضمي الشائعة. The global prevalence of constipation in the elderly (>60 عامًا) تبلغ 18.9%[1]، وغالبًا ما يكون معدل الانتشار أعلى عند النساء[2]. ويتميز بصعوبة التبرز والإمساك المتكرر. تقليل وتصلب البراز، وما إلى ذلك، مما يؤدي إلى عدم الراحة الجسدية واختلال وظائف الجهاز الهضمي، وحتى إحداث أو تفاقم أمراض الجهاز الهضمي، وأمراض القلب والأوعية الدموية [3]، وما إلى ذلك، مما يؤثر بشكل خطير على نوعية الحياة. تُستخدم وصفات الطب الصيني التقليدي على نطاق واسع لتحسين الإمساك ولها تأثيرات سريرية جيدة ومحددة [4،5]. يتم تحضير مركب ألياف Angelica وCistanche deserticola المستخدم في هذه الدراسة من Cistanche deserticola، وAngelica sinensis، وألياف القمح، وxylooligosaccharides. Cistanche deserticola و Angelica sinensis هما من الأدوية الصينية التقليدية شائعة الاستخدام في المسهلات، والتي لها تأثير على تنظيم وظيفة الأمعاء وتحسين الإمساك. [6-9]، دواءان صينيان تقليديان لهما نفس أصل الدواء والغذاء في بلدي. استخدامها المشترك يمكن أن يحقق تأثير تجديد تشي والدم وتنسيق الين واليانغ. ألياف القمح غنية بالألياف الغذائية غير القابلة للذوبان والقابلة للذوبان، والتي يمكن أن تعزز التمعج المعوي والتغوط، وغالبًا ما تستخدم كدواء مساعد لعلاج الإمساك؛ xylo-oligosaccharide هو قليل السكاريد الوظيفي الذي يمكنه تنظيم الفلورا المعوية، وبالتالي تحفيز التمعج المعوي. ، وزيادة رطوبة البراز[١٠]، ودمج النكهات الأربع، ومعالجة السبب الجذري للمرض. تهدف هذه الدراسة إلى تقييم فعالية مركب ألياف حشيشة الملاك والسيستانش ديزيرتيكولا على الفئران المصابة بالإمساك واستكشاف آلية عمله المحتملة.

المواد والأساليب

الحيوانات التجريبية: تم شراء 40 فأرًا من ذكور كونمينغ خالية من مسببات الأمراض (SPF)، يتراوح عمرها من 4 إلى 5 أسابيع، من شركة Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd.، رقم الترخيص SCXK (Guangdong) 2021-0011، درجة الحرارة المحيطة هي 22 ± 2 درجة، والرطوبة 50٪ ± 10٪، ودورة النهار والليل هي 12 ساعة / 12 ساعة. امتثلت البروتوكولات والإجراءات التجريبية للمبادئ الأخلاقية لاستخدام ورعاية الحيوانات وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات التجارب على الحيوانات بجامعة جينان.

مادة الاختبار: يتم تحضير مركب ألياف Angelica Sinensis وCistanche deserticola من Angelica Sinensis وCistanche deserticola، والتي يتم استخلاصها بالماء وتركيزها وتجفيفها وسحقها للحصول على مسحوق معجون جاف (إنتاجية المعجون 52.95٪). يتم خلط مسحوق المعجون الجاف مع ألياف القمح وxylo-oligosaccharide لاستخدامه لاحقًا. تم شراء Angelica sinensis (رقم الدفعة 230404CP108) وCistanche deserticola (رقم الدفعة 230303CP109) من شركة Hebei Wanxiu Pharmaceutical Co., Ltd.، وتم اختبارهما للتوافق مع إصدار 2020 من دستور الأدوية الصيني. تم شراء Xylo-oligosaccharides من شركة Shandong Bailong Chuangyuan Biotechnology Co., Ltd. رقم الدُفعة هو 20210829026، ويتوافق الفحص مع GB/T35545؛ تأتي ألياف القمح من شركة J. Rettenmaier & Söhne GmbH + Co KG، ورقم الدفعة هو 07501230126. استنادًا إلى شخص بالغ يبلغ وزنه 60 كجم، فإن الجرعة الموصى بها من مركب ألياف حشيشة الملاك وألياف السيستانش للبشر هي 7.118 جم · د-1 والتي تبلغ جرعة ألياف القمح منها 3.5 جم·د-1. توافق هذا المركب هو حشيشة الملاك: cistanche: ألياف القمح: xylooligosaccharides=2:2:3:2 (تعتمد جرعة قطع المغلي على الدواء الخام). خذ 30 ضعف الجرعة البشرية الموصى بها كمجموعة الجرعة العالية و5 أضعاف الجرعة البشرية الموصى بها كمجموعة الجرعة المنخفضة، على التوالي 3.6 و0.6 جم · كجم -1·د -1. تحضير معلقة من الماء النقي، وتخلط جيدا، وتترك جانبا.

الأدوية والكواشف لوبيراميد هيدروكلوريد (لوبيراميد، LOP)، المواصفات: يحتوي كل قرص على هيدروكلوريد لوبراميد

أمين 2 ملغ، 12 كبسولة/صندوق، رقم دفعة المنتج: MIJ3102، تم شراؤه من شركة Xi'an Janssen Pharmaceutical Co., Ltd.؛ أقراص Mosapride Citrate (Quali)، المواصفات: يحتوي كل قرص على 5 ملغ من Mosapride Citrate، 24 قرصًا / صندوق، رقم دفعة المنتج: 25220603، تم شراؤها من شركة Lunan Beite Pharmaceutical Co., Ltd.؛ مسحوق الكربون المنشط، المواصفات: مسحوق بني 200 شبكة، رقم الدفعة A805337، تم شراؤه من شركة Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd.؛ الصمغ العربي، المواصفات: مسحوق، رقم الدفعة A108975، تم شراؤه من شركة Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.

الإيثانول المطلق (مصنع الكواشف الكيميائية Tianjin Damao، 64-17-5)؛ كبريتات الأمونيوم (Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd., A6295-500g); Tris-Base (FD2010)، 5 × مخزن تحميل مؤقت (FD002)، جسم مضاد للأكتين (FD0060)، جسم مضاد ثانوي مضاد للأرنب (FDR007)، جسم مضاد ثانوي مضاد للفأر (FDM007)، ومجموعة تطوير ألوان ECL (FD8020) تم شراؤها جميعًا من شركة Hangzhou Fude Biotechnology Co., Ltd.؛ RIPA تحلل المخزن المؤقت (Shanghai Biyuntian Biotechnology Co., Ltd., P0013B); 4% بارافورمالدهيد (شركة Biosharp، BL539A)؛ مجموعة الكيمياء المناعية (Jiangsu KGI Biotechnology Co., Ltd., KGOS60); مجموعة قياس كمية البروتين لحمض البيكينكونيك (BCA) (Thermo Fisher Scientific، SLZ60212)؛ موتيلين (MTL)، غاسترين (GAS)، وعوامل الالتهاب إنترلوكين -1 (IL-1)، عامل نخر الورم (عامل نخر الورم-، TNF-) مجموعة ELISA (Shanghai Enzyme Biotechnology Co., Ltd .، YJ201829، YJ037432، YJ002095، YJ301814)؛ الجسم المضاد aquaporin 3 (aquaporin 3، AQP3) (شركة Affinity، AF5222)؛ ج-الجسم المضاد (Cell Signaling Technology, 3074S).

الأداة: عداد مياه فائق النقاء (شركة ميليبور، الولايات المتحدة الأمريكية، ميلي كيو)؛ ميزان إلكتروني (سارتوريوس، ألمانيا)

الشركة، BS224S)؛ الميزان التحليلي الإلكتروني (Shanghai Benpu Instrument Technology Co., Ltd., FA2204N)؛ أجهزة الطرد المركزي المبردة عالية السرعة (شركة سيجما، ألمانيا، 3K15)؛ قارئ صفيحة ميكروية (Thermo Company، الولايات المتحدة الأمريكية، Multiskan Mk 3)؛ مشراح البارافين (لايكا، ألمانيا)، شركة RM2255)؛ حمام معدني بدرجة حرارة ثابتة (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd., TU-100C)؛ مطحنة العينات السريعة الأوتوماتيكية بالكامل (Shanghai Jingxin Technology Co., Ltd., JXFSTPRP-24); أداة الرحلان الكهربائي (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd., DYY-6C); المجهر الماسح (شركة Precipoint، Precipoint M8)؛ نظام التصوير بالتألق الكيميائي (Shanghai Tianneng Technology Co., Ltd., Tanon 5200).

التجميع وإنشاء النموذج: تم تربية 40 فأرًا بشكل تكيفي لمدة 5 أيام ثم تم تقسيمها عشوائيًا إلى مجموعات مراقبة سلبية.

(التحكم)، المجموعة النموذجية (LOP)، مجموعات الجرعات العالية والمنخفضة المركبة (LOP+PF-H، OP+PF-L)، مجموعة التحكم الإيجابية (سيترات الموزابرايد، LOP+MOS). في الساعة 9 إلى 10 صباحًا كل يوم، تم إعطاء جميع المجموعات باستثناء مجموعة المراقبة السلبية 10 ملجم·كجم-1 هيدروكلوريد لوبراميد بالتزقيم لإنشاء نموذج إمساك الفأر، وتم إعطاء مجموعة المراقبة السلبية اختبارًا كمية متساوية من الماء النقي بواسطة تزقيمية. من 14 إلى 15 ساعة، تم إعطاء المركب ذو الجرعات العالية والجرعات المنخفضة المركب 3.6 و0.6 جم · كجم -1 على التوالي، وتم إعطاء مجموعة التحكم الإيجابية سيترات موزابريد (MOS) 5 مجم · كجم {{ 19 }}.

تم إعطاء مجموعة التحكم السلبية ومجموعة التحكم النموذجية كميات متساوية من الماء النقي عن طريق التزقيم لمدة 14 يومًا متتاليًا.

تمت ملاحظة حالة الفئران وخصائصها وتسجيلها خلال فترة التدخل الدوائي. تم تسجيل الحالة الأساسية وبراز الفئران في كل مجموعة.

الشخصيات، تزن 3 مرات في الأسبوع وضبط الجرعة. في الأيام 3 و7 و10 و14 بعد تناول الدواء، تم جمع 3 إلى 4 كريات من البراز الطازج من كل فأر، ووزنها على الفور، وتسجيلها كوزن رطب، وتجفيفها في الفرن، وتسجيلها كوزن جاف، ورطوبة البراز. تم حساب المحتوى. حساب محتوى رطوبة البراز (%)=(الوزن الرطب - الوزن الجاف)/الوزن الرطب × 100%.

تم تحديد وظيفة الدفع المعوي الصغير وفقًا للطرق التجريبية التي تتطلبها الأدبيات المرجعية [11] و"طرق اختبار وتقييم الوظائف الوظيفية للأغذية الصحية (20}الإصدار 23)". وبعد الجرعة الأخيرة، تم صيام الفئران في كل مجموعة دون شرب الماء لمدة 16 ساعة. المجموعة النموذجية، الصيغة المركبة تم إعطاء المجموعات ذات الجرعات العالية والمنخفضة ومجموعة المراقبة الإيجابية معلق لوبيراميد هيدروكلوريد (10 ملغ · كجم -1) عن طريق التغذية بالتزقيمية، وتم إعطاء مجموعة المراقبة السلبية كمية متساوية من الماء النقي بواسطة تزقيمية. 0. بعد 5 ساعات، تم إعطاء مجموعات الجرعات العالية والجرعات المنخفضة المركبة ومجموعة التحكم الإيجابية حبرًا (يحتوي على 5٪) يحتوي على جرعات عينة الاختبار المقابلة (3.6 جم·كجم-1، 0.6 جم·كجم-1، 5 مجم·كجم-1) على التوالي. (مسحوق الفحم المنشط، 10٪ صمغ عربي)، وتم إعطاء كميات متساوية من الحبر للمجموعتين السلبية والنموذجية. قُتلت الحيوانات مباشرة بعد 0.5 ساعة بسبب خلع عنق الرحم، وتم قياس "الطول الإجمالي للأمعاء الدقيقة" و"طول تقدم الحبر". حساب معدل تقدم الحبر=طول تقدم الحبر (سم)/الطول الإجمالي للأمعاء الدقيقة (سم) × 100%.

للكشف عن مستويات MTL وGAS وTNF- وIL-1 في المصل، تم أخذ الدم من مقل عيون الفأر، وطرده عند 4 درجة، 3 500 r·min-1 من أجل بعد 10 دقائق، تم أخذ المصل العلوي، وتم تحديد MTL وGAS في مصل الفأر وفقًا لمجموعة ELISA. ومستويات TNF- , IL-1.

يكتشف H&E التغيرات المرضية في أنسجة القولون. يتم غسل القولون من الفئران بمحلول ملحي طبيعي وحضنت في بارافورمالدهيد 4٪.

تم تثبيتها في الألدهيد، ودمجها بشكل روتيني بعد 24 ساعة، وتقسيمها، وخبزها، وصبغها بـ H&E، وتم ملاحظة التغيرات المرضية في أنسجة القولون تحت المجهر الضوئي.

تم استخدام الطريقة الكيميائية المناعية للكشف عن تعبير AQP3 وc-Kit في أنسجة القولون. تم جمع أنسجة القولون من الفئران من كل مجموعة.

أقسام البارافين، إزالة الشمع، الترطيب، استرجاع المستضد، حجب الكاتلاز الداخلي، الحجب بنسبة 2٪ من مصل الماعز، إضافة الأجسام المضادة AQP3 وc-Kit على التوالي، والحضانة طوال الليل عند 4 درجات، محلول ملحي بالفوسفات، PBS) لمدة 5 دقائق مضادة للهيماتوكسيلين، متدرجة تجفيف الإيثانول، وشفافية الزيلين، وختم اللثة المحايد، والمسح تحت مجهر المسح، واستخدام برنامج Image J لتحليل النتائج.

تم استخدام طريقة اللطخة الغربية للكشف عن تعبير AQP3 وc-Kit في أنسجة القولون. خذ 10 ملغ من أنسجة القولون الماوس المجمدة ووضعها في أنبوب الطرد المركزي مع 150 ميكرولتر من المخزن المؤقت لتحلل RIPA الذي يحتوي على مثبط الأنزيم البروتيني 1٪. استخدام طاحونة سريعة لمجانسة الأنسجة. ، قم بالطرد المركزي للمتجانس باستخدام جهاز طرد مركزي منخفض الحرارة عند 10 000 r·min-1 لمدة 10 دقائق، خذ المادة الطافية، وحدد تركيز البروتين بواسطة طريقة تقدير البروتين BCA، واخلطه مع مخزن التحميل المؤقت، وأفسد طبيعة البروتين وتحليل النتائج حسب كل عينة. تم تحميل 30 ميكروغرام من البروتين، وإخضاعه للرحلان الكهربي SDS-PAGE، ونقله رطبًا إلى الغشاء، ثم حجبه بمسحوق حليب منزوع الدسم بنسبة 5٪ في درجة حرارة الغرفة لمدة 1.5 ساعة، وغسله ثلاث مرات باستخدام TBST، ووضع الجسم المضاد الأولي على شاكر واحتضانه طوال الليل. 4 درجة، ثم يتم إزالته وغسله باستخدام محلول TBST يغسل 3 مرات بالمحلول، ويحضن مع الجسم المضاد الثانوي لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة ثم يغسل 3 مرات باستخدام TBST. يتم استخدام حل عمل اللمعان الكيميائي ECL لتطوير الألوان، ويتم استخدام نظام تصوير اللمعان الكيميائي التلقائي بالكامل للتطوير. يتم استخدام برنامج Image J لتحليل النتائج.

الطرق الإحصائية يتم التعبير عن جميع البيانات المشاركة في هذه التجربة في شكل متوسط ​​الانحراف المعياري. تم استخدام GraphPad Prism لرسم البيانات التجريبية، وتم إجراء المقارنة بين المجموعات باستخدام ANOVA أحادي الاتجاه أو ANOVA ثنائي الاتجاه؛ عندما كانت الاختلافات بين المجموعات ذات دلالة إحصائية، تم استخدام طريقة الفرق الأقل أهمية (LSD). ) قم بإجراء مقارنات زوجية بين المجموعات، ويعتبر P < 0.05 فرقًا ذا دلالة إحصائية.